CN107796684B - 一种叶绿素铜钠含量的检测方法 - Google Patents

一种叶绿素铜钠含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及质量控制技术领域，特别涉及一种叶绿素铜钠含量的检测方法。该检测方法包括：将样品与丙酮混合、离心，得到第一样品溶液；将第一样品溶液蒸干，得到残渣；残渣用碱溶液溶解，离心，得到第二样品溶液；将第二样品溶液与柠檬酸溶液混合，抽滤，得到沉淀；将沉淀溶解于溶解液中，得到第三样品溶液；溶解液为氨水和乙醇水溶液的混合物；检测叶绿素铜钠对照品溶液和第三样品溶液的吸光度，根据绘制的标准曲线，得到样品中叶绿素铜钠的含量。该检测方法可准确检测叶绿素铜钠含量，且专属性、线性、检出限、定量限、精密度、稳定性、回收率试验，均符合GB/T27404‑2008《实验室质量控制规范》的要求。

Description

一种叶绿素铜钠含量的检测方法
技术领域
本发明涉及质量控制技术领域，特别涉及一种叶绿素铜钠含量的检测方法。
背景技术
叶绿素为一种卟啉环结构的化合物，非常不稳定，极易受到热、光、pH、氧化剂等的影响而发生降解或结构转变。叶绿素铜钠是从蚕沙提取的叶绿素经过皂化和铜代后制得的叶绿素衍生物，稳定性比叶绿素高。叶绿素铜钠极易被人体吸收，对机体细胞有促进新陈代谢的功效，也可促进胃肠溃疡面的愈合，促进肝功能的恢复。因此，叶绿素铜钠被广泛用于保健品的生产中。另外，叶绿素铜钠为墨绿色粉末，因此其还可用于果味水、果味粉、果汁露、汽水、配制酒、糖果、罐头、糕点上彩。
作为食品添加剂和医药原料的叶绿素铜钠，稳定性受诸多因素影响。为了能有效地保证叶绿素铜钠片生产及成品贮存过程中各环节的质量控制，食品或保健食品中叶绿素铜钠含量的检测方法显得尤为重要。现阶段检测食品或保健食品中叶绿素铜钠含量的方法均使用聚酰胺粉来对叶绿素铜钠进行吸附和解吸附，例如：申请公布号CN 106198414A的发明专利公开了一种橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，包括以下步骤：一、取样，采用pH值为8的乙酸铵缓冲溶液提取样品中的叶绿素铜钠，得到含有叶绿素铜钠的提取液；二、在第一步得到的提取液中加入适量聚酰胺粉后混匀，然后用蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉转移至漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉；三、用解吸液充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠，得到的叶绿素铜钠溶液用解吸液转移至容量瓶并定容至刻度；四、定容后的叶绿素铜钠溶液经过滤后将滤液转入至比色皿中待测；五、采用分光光度计，在404nm波长下测定吸光度；六、采用外标法定量，得到叶绿素铜钠的含量。然而在此过程中由于洗脱不完全，吸附杂质色素等原因，可能会导致结果偏差/误差较大，专属性较差。同时该方法也不够便捷高效。
因此需要开发新的净化程度高、专属性强、杂质干扰少、检测结果的准确度高的方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种叶绿素铜钠含量的检测方法。该检测方法可准确检测叶绿素铜钠含量，且专属性、线性、检出限、定量限、精密度、稳定性、回收率试验，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明该方法科学有效。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种叶绿素铜钠含量的检测方法，包括如下步骤：
步骤1：将样品与丙酮混合、离心，得到第一样品溶液；
将第一样品溶液蒸干，得到残渣；
残渣用碱溶液溶解，离心，得到第二样品溶液；
将第二样品溶液与柠檬酸溶液混合，抽滤，得到沉淀；
将沉淀溶解于溶解液中，得到第三样品溶液；溶解液为氨水和乙醇水溶液的混合物；
步骤2：检测叶绿素铜钠对照品溶液和第三样品溶液的吸光度，根据绘制的标准曲线，得到样品中叶绿素铜钠的含量。
本发明检测原理为：用丙酮提取试样中的叶绿素铜钠，在酸性环境下析出，过滤，收集沉淀，溶解液溶解，分光光度法测定，标准曲线定量。
作为优选，碱溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；碱溶液的浓度为0.005～0.015mol/L。
优选的，碱溶液的浓度为0.01mol/L。
在本发明提供的一具体实施例中，碱溶液为氢氧化钠溶液。
作为优选，柠檬酸溶液的质量体积百分浓度为4.5％～5.5％。
在本发明提供的一具体实施例中，柠檬酸溶液的质量体积百分浓度为5％。
作为优选，溶解液中氨水与乙醇水溶液的体积比为(1.5～2.5)：98。
在本发明提供的一具体实施例中，溶解液中氨水与乙醇水溶液的体积比为2：98。
作为优选，溶解液中乙醇水溶液为65vt％～75vt％的乙醇水溶液。
在本发明提供的一具体实施例中，溶解液中乙醇水溶液为70vt％的乙醇水溶液。
作为优选，蒸干为减压蒸干，减压蒸干的温度为50～60℃。
在本发明提供的一具体实施例中，减压蒸干的温度为50℃。
作为优选，步骤1中将样品与丙酮混合、离心具体为：将样品与丙酮混合，离心，得到第一上清液和沉淀；将沉淀与丙酮水溶液混合，离心，得到第二上清液；将第一上清液和第二上清液混合。
作为优选，以g/mL或mL/mL计，样品与丙酮的用量比为1：(8.5～9.5)。
在本发明提供的一具体实施例中，以g/mL或mL/mL计，样品与丙酮的用量比为1：9。
作为优选，丙酮水为丙酮与水的混合物，丙酮与水的体积比为(85～90)：10。
在本发明提供的一具体实施例中，丙酮与水的体积比为90：10。
作为优选，以g/mL或mL/mL计，样品与丙酮水的用量比为1：(4.5～5.5)。
在本发明提供的一具体实施例中，以g/mL或mL/mL计，样品与丙酮水的用量比为1：5。
作为优选，将第二样品溶液与柠檬酸溶液混合具体为：将1倍体积的柠檬酸溶液与2倍体积的上清液混合，再加入1倍体积的柠檬酸溶液混匀。
作为优选，叶绿素铜钠对照品溶液的浓度为0～15μg/mL。
在本发明提供的一具体实施例中，叶绿素铜钠对照品溶液的浓度为0～12μg/mL。
作为优选，吸光度的检测波长为405nm。
作为优选，步骤1中离心均为在7000～9000r/min条件下离心4min～6min。
在本发明提供的一具体实施例中，步骤1中离心均为在8000r/min条件下离心5min。
作为优选，以g/mL或mL/mL计，样品与溶解液的用量比为1：2.5～3.5。
在本发明提供的一具体实施例中，以g/mL或mL/mL计，样品与溶解液的用量比为1：3。
本发明提供了一种叶绿素铜钠含量的检测方法。该检测方法包括：将样品与丙酮混合、离心，得到第一样品溶液；将第一样品溶液蒸干，得到残渣；残渣用碱溶液溶解，离心，得到第二样品溶液；将第二样品溶液与柠檬酸溶液混合，抽滤，得到沉淀；将沉淀溶解于溶解液中，得到第三样品溶液；溶解液为氨水和乙醇水溶液的混合物；检测叶绿素铜钠对照品溶液和第三样品溶液的吸光度，根据绘制的标准曲线，得到样品中叶绿素铜钠的含量。本发明具有的技术效果为：该检测方法可准确检测叶绿素铜钠含量，准确度高于现有检测方法，且专属性、线性、检出限、定量限、精密度、稳定性、回收率试验，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明该方法科学有效。
附图说明
图1示叶绿素铜钠对照溶液和试样待测溶液的光谱扫描图谱；
图2示标准工作曲线。
具体实施方式
本发明公开了一种叶绿素铜钠含量的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的叶绿素铜钠含量的检测方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
1仪器
1.1紫外-可见光分光光度计；
1.2真空旋转蒸发仪；
1.3离心机。
2试剂
2.1试剂：
2.1.1丙酮水(9+1)：量取丙酮90mL与10mL水混匀；
2.1.2 0.01mol/l氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.4g，加水溶解并定容至1000mL；
2.1.3 5％柠檬酸溶液：称取柠檬酸5g，加水溶解并定容至100mL；
2.1.4 70％乙醇：量取乙醇70mL，加水稀释至100mL；
2.1.5溶解液：量取氨水2mL，用70％乙醇稀释至100mL。
2.2对照：
2.2.1叶绿素铜钠，含量≥98％。
3分析方法
3.1对照溶液制备
3.1.1母液配制
称取叶绿素铜钠对照品约30mg于100mL容量瓶中，加适量水溶解，定容至100mL，得约300μg/mL浓度母液，需当天配制，避光存放。
3.1.2标准曲线制备
分别取母液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL母液于25mL容量瓶中，加入溶解液各3mL，用水定容，即得浓度为0μg/mL、1.2μg/mL、2.4μg/mL、4.8μg/mL、7.2μg/mL、9.6μg/mL、12.0μg/mL的标准系列，需临用稀释。以0μg/mL溶液为空白，于405nm处测定吸光度。以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3.2待测溶液制备
3.2.1精密吸取混合均匀的试样(含有叶绿素铜钠的饮料)1.0mL于50mL离心管中，加入丙酮9mL，摇匀，8000r/min离心5min。将上清转移至100mL烧瓶中，沉淀再加丙酮水(9+1)5mL洗涤，离心，上清一并转移至同一烧瓶中，在50℃下真空旋转蒸发干。
3.2.2精密吸取0.01mol/l氢氧化钠溶液10.0mL溶解残渣，将溶液转移至50mL离心管中，8000r/min离心5分钟，取上清液待用。
3.2.3预先向装有0.45μm滤头的5mL注射器中加入5％柠檬酸溶液1mL，然后精密加入上清液2.0mL于注射器中，再加5％柠檬酸溶液1mL，保证柠檬酸溶液与样品溶液充分混匀。减压抽滤，弃去滤液，用5％柠檬酸溶液2mL分2次洗涤滤头中的沉淀。
3.2.4用溶解液3mL分3次减压抽滤溶解滤头中的沉淀于25mL容量瓶中，加水定容，得待测溶液。
3.3测定
照上述3.1.2标准曲线制备方法测定待测溶液的吸光度，从标准曲线上读取叶绿素铜钠的浓度。
3.4结果计算
试样中叶绿素铜钠的含量按下式计算：
Figure BDA0001507527210000061
式中；
X—试样中叶绿素铜钠的含量，mg/100mL；
C—从标准曲线上读取叶绿素铜钠的浓度，μg/mL；
V—试样的稀释体积，mL；
m—试样的取样量，mL。
4方法学验证
4.1专属性试验
4.1.1试验方法
取叶绿素铜钠对照溶液和试样待测溶液，在550nm～250nm之间作光谱扫描，确认其最大吸收波长及杂质干扰情况。
4.1.2光谱扫描图谱(见图1)
4.1.3试验结论
叶绿素铜钠对照溶液和试样待测溶液的最大吸收波长均为405nm，且前后均无杂峰干扰，证明方法专属性良好。
4.2线性范围确认
4.2.1试验数据
表1线性关系检测结果
Figure BDA0001507527210000071
4.2.2标准工作曲线图
以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线，如图2所示。
4.2.3线性试验结论
线性评价：相关系数R为0.99998，所以用该方法测定叶绿素铜钠在浓度为1.2752μg/mL至12.7518μg/mL之间呈现良好的线性，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求相关系数R≥0.99】。
4.3检出限和定量限
4.3.1试验方法
于405nm处连续20次测定标准空白的吸光度，按下式计算方法的检出限：
CL＝3Sb/b
式中：CL-方法的检出限；
Sb-空白值标准偏差；
b-方法校准曲线的斜率。
按下式计算方法的定量限：
C＝10Sb/b
式中：C-方法的定量限；
Sb-空白值标准偏差；
b-方法校准曲线的斜率。
4.3.2试验数据
表2检出限和定量限试验数据表
Figure BDA0001507527210000083
表3检出限和定量限计算结果表
Figure BDA0001507527210000081
4.3.3试验结论
方法的检出限为0.2032mg/100mL，方法的定量限为0.6772mg/100mL。
4.4精密度试验
4.4.1试验方法
吸取6份样品，按3.2待测溶液制备处理样品，检测样品含量，计算其RSD(％)。
4.4.2试验数据
表4精密度试验数据表
Figure BDA0001507527210000082
Figure BDA0001507527210000091
4.4.3试验结论
6份样品叶绿素铜钠含量的RSD为1.9％，表明该方法有较好的精密度，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求RSD(％)≤3.8％】。
4.5稳定性试验
4.5.1试验方法
将叶绿素铜钠标准溶液分别在室温下放置0.00h、0.25h、0.50h、1.00h、1.50h、2.00h后，按3.1对照溶液制备测定其吸光度，计算其RSD(％)。
4.5.2试验数据
表5稳定性试验数据表
Figure BDA0001507527210000092
4.5.3试验结论
叶绿素铜钠标准溶液分别在室温下放置0.00h、0.25h、0.50h、1.00h、1.50h、2.00h后，RSD(％)为0.6％，表明叶绿素铜钠标准溶液在室温下2小时内的稳定性良好。
4.6回收率试验
4.6.1试验方法
加标：精密吸取1.0mL样品9份(已知样品中叶绿素铜钠含量：46.22mg/100mL)，分成3组，每组3份，各组分别精密加入叶绿素铜钠储备液(0.1223mg/mL)2.00mL、4.00mL、6.00mL。按3.2待测溶液制备处理样品，其中3.2.3项中，上清液的加入量为1.0mL。
4.6.2试验数据
表6回收率试验数据表
Figure BDA0001507527210000101
加标量＝叶绿素铜钠储备液浓度×加入体积
加标样品测得量＝测得浓度×稀释体积
本底值＝样品量×已知样品中叶绿素铜钠含量
回收率(％)＝(加标样品测得量-本底值)/加标量
4.6.3试验结论
平均回收率为：97.97％，相对标准偏差(RSD)为1.6％，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求回收率为95～105％】。
5结论
通过对叶绿素铜钠的含量测定方法进行专属性、线性、检出限、定量限、精密度、稳定性、回收率试验，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明一种饮料中叶绿素铜钠含量的测定方法科学有效。
实施例2本新方法与标准方法和文献方法准确度比对
1试验方法
根据不同方法的标准曲线浓度范围，取相应已知浓度的叶绿素铜钠对照溶液(318.7940μg/mL)的量，用各自方法处理，得待测溶液，计算各自待测液测定浓度与理论浓度的比值。
试验组1采用的是GB 5009.260-2016食品中叶绿素铜钠的测定方法；
试验组2采用的是申请公布号CN 106198414A橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法中的实施例1的检测方法；
试验组3采用的是本发明实施例1的检测方法。
2试验数据
表7三种方法准确度比对数据表
Figure BDA0001507527210000111
3试验结论
国标法、文献法、本法的准确度分别为94.93％、84.26％、99.88％，本法准确度最高，为最优方法，即本法误差小，损失少，准确度高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种叶绿素铜钠含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：将样品与丙酮混合、离心，得到第一样品溶液；
将所述第一样品溶液蒸干，得到残渣；
所述残渣用碱溶液溶解，离心，得到第二样品溶液；
将所述第二样品溶液与柠檬酸溶液混合，抽滤，得到沉淀；
将沉淀溶解于溶解液中，得到第三样品溶液；所述溶解液为氨水和乙醇水溶液的混合物；
步骤2：检测叶绿素铜钠对照品溶液和第三样品溶液的吸光度，根据绘制的标准曲线，得到样品中叶绿素铜钠的含量；
所述碱溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；所述碱溶液的浓度为0.005～0.015mol/L；
所述柠檬酸溶液的质量体积百分浓度为4.5％～5.5％；
所述溶解液中氨水与乙醇水溶液的体积比为(1.5～2.5)：98。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述溶解液中乙醇水溶液为65vt％～75vt％的乙醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蒸干为减压蒸干，减压蒸干的温度为50～60℃。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1中所述将样品与丙酮混合、离心具体为：将样品与丙酮混合，离心，得到第一上清液和沉淀；将沉淀与丙酮水溶液混合，离心，得到第二上清液；将所述第一上清液和所述第二上清液混合。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，以g/mL或mL/mL计，所述样品与丙酮的用量比为1：(8.5～9.5)。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述丙酮水为丙酮与水的混合物，丙酮与水的体积比为(85～90)：10；以g/mL或mL/mL计，所述样品与丙酮水的用量比为1：(4.5～5.5)。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述将第二样品溶液与柠檬酸溶液混合具体为：将1倍体积的柠檬酸溶液与2倍体积的上清液混合，再加入1倍体积的柠檬酸溶液混匀。
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