CN106198414A - 橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法 - Google Patents

橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，包括以下步骤：一、取样，采用pH值为8的乙酸铵缓冲溶液提取样品中的叶绿素铜钠，得到含有叶绿素铜钠的提取液；二、在第一步得到的提取液中加入适量聚酰胺粉后混匀，然后用蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉转移至漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉；三、用解吸液充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠，得到的叶绿素铜钠溶液用解吸液转移至容量瓶并定容至刻度；四、定容后的叶绿素铜钠溶液经过滤后将滤液转入至比色皿中待测；五、采用分光光度计，在404nm波长下测定吸光度；六、采用外标法定量，得到叶绿素铜钠的含量。本发明的优点在于：准确性好，检测成本低，检测效率高。

Description

橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法
技术领域
本发明涉及橄榄油中非法添加物检测技术领域，具体涉及橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法。
背景技术
叶绿素铜钠是叶绿素的衍生物，作为着色剂广泛运用于食品工业中。我国国家标准GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定叶绿素铜钠可用于冷冻饮品、蔬菜罐头、果蔬汁、配制酒等食品中，但应用范围不包含食用植物油。因此在橄榄油中添加叶绿素铜钠属违法行为。
目前，国内外尚无橄榄油中叶绿素铜钠的检测标准，相关文献报道也很少。目前橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法主要有液相色谱法和液质联用技术。然而，叶绿素铜钠并不是一种单一的化合物，而是一系列带卟啉环化合物的混合物，这在色谱上表现为出一组峰，而不是单一峰。与此同时，不同厂家、或者是同一厂家生产的不同批次的叶绿素铜钠标准品，其组成都可能不一样。因此，采用液相色谱法或液质联用技术对橄榄油中的叶绿素铜钠进行检测，不仅无法对叶绿素铜钠的含量进行准确定量，甚至还有可能得到假阴性的结果。
发明内容
本发明的目的是：提供一种易操作、准确性好的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，包括以下步骤：一、对需要检测的橄榄油取样，采用pH值为8的乙酸铵缓冲溶液提取需要检测的橄榄油样品中的叶绿素铜钠，得到含有叶绿素铜钠的提取液；乙酸铵缓冲溶液的量确保能充分提取需要检测的橄榄油样品中的叶绿素铜钠；二、在第一步得到的提取液中加入适量聚酰胺粉后充分混匀，使得聚酰胺粉充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，然后用蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉转移至漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉；三、用解吸液充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠，得到叶绿素铜钠溶液，然后用解吸液转移叶绿素铜钠溶液至容量瓶并定容至刻度，所述的解吸液由氢氧化钠溶液与无水甲醇混合而成；四、定容后的叶绿素铜钠溶液经有机相滤膜过滤得滤液，将滤液转入至比色皿中待测；五、采用分光光度计，在404nm波长下测定吸光度；六、采用外标法定量，得到叶绿素铜钠的含量。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第一步中对需要检测的橄榄油样品中叶绿素铜钠提取的步骤包括：先将需要检测的橄榄油样品加入至离心管中，然后在离心管中加入pH值为8的乙酸铵缓冲溶液，接着离心管涡旋提取1min，再接着离心管在4500rpm转速下离心5min，静置分层后转移油层得第一次提取液；将油层转移至另一个离心管内，重复上述提取步骤，得到第二次提取液；提取液由第一次提取液和第二次提取液合并而成。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，解吸液由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成，氢氧化钠水溶液与无水甲醇的体积比为1：10。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第一步中使用的乙酸铵缓冲溶液的摩尔浓度为0.2mol/L。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第二步中使用的聚酰胺粉的目数为100～200目。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第二步在提取液中加入适量聚酰胺粉后涡旋混匀2min。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第三步中采用解吸液对聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠进行解吸的次数为四次。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第四步中有机相滤膜的孔径为0.45μm。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，比色皿采用1cm宽的石英比色皿。
进一步地，前述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其中，第二步中对提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉抽滤使用的漏斗为G4砂芯漏斗。
本发明的优点是：无需借助大型仪器设备，操作简单，准确性好，检测成本低，检测效率高，易于推广应用。
具体实施方式
下面通过优选实施例对本发明作进一步的详细说明。
在检测前用解吸液配制叶绿素铜钠标准溶液，叶绿素铜钠标准溶液中叶绿素铜钠的浓度分别为0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL。配制叶绿素铜钠标准溶液使用的解吸液与检测步骤中使用的解吸液均是由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成的，0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇按照体积比为1:10进行混合。采用分光光度计，分别测定各叶绿素铜钠标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。测定各叶绿素铜钠标准溶液吸光度的仪器条件与检测步骤中使用的仪器条件相一致，仪器条件包括：采用1cm宽的石英比色皿，采用分光光度计在404nm波长下测定吸光度。
下面以三个实施例对本发明做进一步详细说明。分别取特级初榨橄榄油、以及该特级初榨橄榄油的两个加标样品作为三个需要检测的橄榄油样品。其中，特级初榨橄榄油中叶绿素铜钠的加入量为0 mg/kg,两个加标样品中叶绿素铜钠的加入量分别为100 mg/kg和300 mg/kg。
实施例1：
一、称取5.00 g混匀的特级初榨橄榄油样品，然后对特级初榨橄榄油样品中的叶绿素铜钠进行提取，提取步骤如下：先将需要检测的橄榄油样品加入至离心管中，然后在离心管内加入15 mL的乙酸铵缓冲溶液，乙酸铵缓冲溶液也即乙酸铵水溶液，乙酸铵缓冲溶液的浓度为0.2 mol/L、pH值为8，接着离心管涡旋提取1 min，再接着离心管在4500 rpm转速下离心5 min，静置分层，用滴管吸出油层后得到第一次提取液。将吸出的油层转移至另一个离心管内，重复上述提取步骤，得到第二次提取液。两次提取能有效确保油层中的叶绿素铜钠被充分提取。每次提取步骤中加入的乙酸铵缓冲溶液的量需要确保能充分提取油层中的叶绿素铜钠。提取液由第一次提取液和第二次提取液合并而成。离心管涡旋提取采用的仪器为涡旋混匀器，离心采用的仪器为离心机。二、在提取液中加入3.0 g聚酰胺粉，聚酰胺粉的目数选用100～200目，聚酰胺粉的加入量需要确保能充分吸附提取液中的叶绿素铜钠。将加入了聚酰胺粉的提取液涡旋混匀2 min，使得聚酰胺粉充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀采用的仪器为涡旋混匀器，涡旋混匀是为了使得聚酰胺粉能更好地充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀的时间可以根据实际情况具体设定。然后用20 mL蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉都转移至G4砂芯漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉。三、将45 mL解吸液分成四份，每份解吸液的量需要确保能充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。四份解吸液分别对吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉进行一次解吸，合并四次解吸得到的叶绿素铜钠溶液，进行四次解吸的目的在于：确保充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。用解吸液将合并后的叶绿素铜钠溶液转移至容量瓶定容至50 mL。上述的解吸液由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成，0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇的体积比为1:10。四、定容后的叶绿素铜钠溶液经孔径为0.45μm的有机相滤膜过滤后得滤液，将滤液转入至1cm宽的石英比色皿中待测。五、采用分光光度计，以标准曲线的叶绿素铜钠加入量为0 μg/mL的叶绿素铜钠标准样品溶液（即解吸液）为空白，在404nm波长下测定吸光度。六、用叶绿素铜钠标准溶液制得的标准曲线进行外标法定量，得到特级初榨橄榄油样品中的叶绿素铜钠的含量。具体含量见表1。
实施例2：
一、称取5.00 g混匀的特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为100 mg/kg），然后对特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为100 mg/kg）中的叶绿素铜钠进行提取，提取步骤如下：先将需要检测的橄榄油样品加入至离心管中，然后在离心管内加入15 mL的乙酸铵缓冲溶液，乙酸铵缓冲溶液也即乙酸铵水溶液，乙酸铵缓冲溶液的浓度为0.2 mol/L、pH值为8，接着离心管涡旋提取1 min，再接着离心管在4500 rpm转速下离心5min，静置分层，用滴管吸出油层后得到第一次提取液。将吸出的油层转移至另一个离心管内，重复上述提取步骤，得到第二次提取液。两次提取能有效确保油层中的叶绿素铜钠被充分提取。每次提取步骤中加入的乙酸铵缓冲溶液的量需要确保能充分提取油层中的叶绿素铜钠。提取液由第一次提取液和第二次提取液合并而成。离心管涡旋提取采用的仪器为涡旋混匀器，离心采用的仪器为离心机。二、在提取液中加入3.0 g聚酰胺粉，聚酰胺粉的目数选用100～200目，聚酰胺粉的加入量需要确保能充分吸附提取液中的叶绿素铜钠。将加入了聚酰胺粉的提取液涡旋混匀2 min，使得聚酰胺粉充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀采用的仪器为涡旋混匀器，涡旋混匀是为了使得聚酰胺粉能更好地充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀的时间可以根据实际情况具体设定。然后用20 mL蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉都转移至G4砂芯漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉。三、将45 mL解吸液分成四份，每份解吸液的量需要确保能充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。四份解吸液分别对吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉进行一次解吸，合并四次解吸得到的叶绿素铜钠溶液，进行四次解吸的目的在于：确保充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。用解吸液将合并后的叶绿素铜钠溶液转移至容量瓶定容至50 mL。上述的解吸液由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成，0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇的体积比为1:10。四、定容后的叶绿素铜钠溶液经孔径为0.45μm的有机相滤膜过滤后得滤液，将滤液转入至1cm宽的石英比色皿中待测。五、采用分光光度计，以标准曲线的叶绿素铜钠加入量为0 μg/mL的叶绿素铜钠标准样品溶液（即解吸液）为空白，在404nm波长下测定吸光度。六、用叶绿素铜钠标准溶液制得的标准曲线进行外标法定量，得到特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为100 mg/kg）中的叶绿素铜钠的含量。具体含量见表1。
实施例3：
一、称取5.00 g混匀的特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为300 mg/kg），然后对特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为300 mg/kg）中的叶绿素铜钠进行提取，提取步骤如下：先将需要检测的橄榄油样品加入至离心管中，然后在离心管内加入15 mL的乙酸铵缓冲溶液，乙酸铵缓冲溶液也即乙酸铵水溶液，乙酸铵缓冲溶液的浓度为0.2 mol/L、pH值为8，接着离心管涡旋提取1 min，再接着离心管在4500 rpm转速下离心5min，静置分层，用滴管吸出油层后得到第一次提取液。将吸出的油层转移至另一个离心管内，重复上述提取步骤，得到第二次提取液。两次提取能有效确保油层中的叶绿素铜钠被充分提取。每次提取步骤中加入的乙酸铵缓冲溶液的量需要确保能充分提取油层中的叶绿素铜钠。提取液由第一次提取液和第二次提取液合并而成。离心管涡旋提取采用的仪器为涡旋混匀器，离心采用的仪器为离心机。二、在提取液中加入3.0 g聚酰胺粉，聚酰胺粉的目数选用100～200目，聚酰胺粉的加入量需要确保能充分吸附提取液中的叶绿素铜钠。将加入了聚酰胺粉的提取液涡旋混匀2 min，使得聚酰胺粉充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀采用的仪器为涡旋混匀器，涡旋混匀是为了使得聚酰胺粉能更好地充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，涡旋混匀的时间可以根据实际情况具体设定。然后用20 mL蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉都转移至G4砂芯漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉。三、将45 mL解吸液分成四份，每份解吸液的量需要确保能充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。四份解吸液分别对吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉进行一次解吸，合并四次解吸得到的叶绿素铜钠溶液，进行四次解吸的目的在于：确保充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠。用解吸液将合并后的叶绿素铜钠溶液转移至容量瓶定容至50 mL。上述的解吸液由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成，0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇的体积比为1:10。四、定容后的叶绿素铜钠溶液经孔径为0.45μm的有机相滤膜过滤后得滤液，将滤液转入至1cm宽的石英比色皿中待测。五、采用分光光度计，以标准曲线的叶绿素铜钠加入量为0 μg/mL的叶绿素铜钠标准样品溶液（即解吸液）为空白，在404nm波长下测定吸光度。六、用叶绿素铜钠标准溶液制得的标准曲线进行外标法定量，得到特级初榨橄榄油的加标样品（叶绿素铜钠的加入量为300 mg/kg）中的叶绿素铜钠的含量。具体含量见表1。
上述检测结果显示：叶绿素铜钠的加标回收率在82.0%~87.3%之间，准确性好。
本发明所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，无需借助大型仪器设备，操作简单，准确性好，检测成本低，检测效率高，易于推广应用。
表1 三个实施例的实测结果
实施例 叶绿素铜钠加标量（mg/kg） 测得含量（mg/kg） 加标回收率（%）
1 0 未检出 --
2 100 82.0 82.0%
3 300 262.0 87.3%

Claims (10)

1.橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：一、对需要检测的橄榄油取样，采用pH值为8的乙酸铵缓冲溶液提取需要检测的橄榄油样品中的叶绿素铜钠，得到含有叶绿素铜钠的提取液；乙酸铵缓冲溶液的量确保能充分提取需要检测的橄榄油样品中的叶绿素铜钠；二、在第一步得到的提取液中加入适量聚酰胺粉后充分混匀，使得聚酰胺粉充分吸附提取液中的叶绿素铜钠，然后用蒸馏水将提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉转移至漏斗中抽滤，得到吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉；三、用解吸液充分解吸聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠，得到叶绿素铜钠溶液，然后用解吸液转移叶绿素铜钠溶液至容量瓶，并定容至刻度，所述的解吸液由氢氧化钠溶液与无水甲醇混合而成；四、定容后的叶绿素铜钠溶液经有机相滤膜过滤得滤液，将滤液转入至比色皿中待测；五、采用分光光度计，在404nm波长下测定吸光度；六、采用外标法定量，得到叶绿素铜钠的含量。
2.根据权利要求1所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第一步中对需要检测的橄榄油样品中叶绿素铜钠提取的步骤包括：先将需要检测的橄榄油样品加入至离心管中，然后在离心管中加入pH值为8的乙酸铵缓冲溶液，接着离心管涡旋提取1min，再接着离心管在4500rpm转速下离心5min，静置分层后转移油层得第一次提取液；将油层转移至另一个离心管内，重复上述提取步骤，得到第二次提取液；提取液由第一次提取液和第二次提取液合并而成。
3.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：解吸液由0.1 mol/L的氢氧化钠水溶液与无水甲醇混合而成，氢氧化钠水溶液与无水甲醇的体积比为1：10。
4.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第一步中使用的乙酸铵缓冲溶液的摩尔浓度为0.2 mol/L。
5.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第二步中使用的聚酰胺粉的目数为100～200目。
6.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第二步在提取液中加入适量聚酰胺粉后涡旋混匀2 min。
7.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第三步中采用解吸液对聚酰胺粉上吸附的叶绿素铜钠进行解吸的次数为四次。
8.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第四步中有机相滤膜的孔径为0.45μm。
9.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：比色皿采用1cm宽的石英比色皿。
10.根据权利要求1或2所述的橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法，其特征在于：第二步中对提取液以及吸附有叶绿素铜钠的聚酰胺粉抽滤使用的漏斗为G4砂芯漏斗。
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