CN107794286B - 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 - Google Patents
一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107794286B CN107794286B CN201710928251.XA CN201710928251A CN107794286B CN 107794286 B CN107794286 B CN 107794286B CN 201710928251 A CN201710928251 A CN 201710928251A CN 107794286 B CN107794286 B CN 107794286B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- nucleotide sequence
- gene cluster
- gene
- xiapi
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用。环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第2972‑101763位核苷酸序列所示。本发明的环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇相关的所有基因和蛋白信息,可以帮助人们理解环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成机制,为进一步遗传改造提高了材料和知识。另外本发明为通过操控调控基因激活沉默基因簇的表达提供了依据,并丰富了天然产物生物合成基因簇库,为药物先导化合物的发现提供了实体。
Description
技术领域:
本发明属于微生物基因工程领域,具体涉及一种环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇及其激活方法与应用。
背景技术:
近年来,随着基因组测序技术发展和广泛应用,发现几乎每一株放线菌都有大量的次级代谢产物生物合成基因簇,然而大部分处于沉默的状态,还没有发现其编码的产物。通过改变发酵条件、核糖体工程、启动子工程、操控调控基因和组合生物合成等方法,能够激活沉默基因簇的表达,从而产生新的次级代谢产物。
发明内容:
本发明的目的是提供一种环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇及其激活方法与应用。
本发明的环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇,是在分离自中国南海水深880米沉积物中的链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999中发现,是一个PKS/NRPS杂合的生物合成基因簇,该基因簇全长92kb(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第2972-101763位核苷酸序列所示)且处于沉默的状态;通过操控其生物合成中的调控基因,激活了该基因簇的表达,并产生了环脂肽类化合物Totopotensamide A和C。本发明为通过操控调控基因激活沉默基因簇的表达提供了依据,并丰富了天然产物生物合成基因簇库,为药物先导化合物的发现提供了实体。
本发明的第一个目的是提供环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇(图1),该基因簇是在分离自中国南海水深880米沉积物的链霉菌Streptomycessp.SCSIO 02999(于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址:中国武汉市武汉大学,其保藏编号为:CCTCC NO:M 2012145,该保藏信息公开于中国专利号:201210146664.X,发明名称:夏霉素A和氧夏霉素的生物合成基因簇及其应用)中发现,是一个PKS/NRPS杂合的生物合成基因簇,该基因簇全长92kb,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第2972-101763位核苷酸序列所示,包含了35个基因,具体为:
1)totU1位于基因簇核苷酸序列6305-7201个碱基处,长度为897bp,编码裂解酶,299个氨基酸;
2)totU2位于基因簇核苷酸序列7388-7963个碱基处,长度为576bp,编码胞外分泌中性蛋白酶,191个氨基酸;
3)totU3位于基因簇核苷酸序列8188-8475个碱基处,长度为288bp,编码未知功能蛋白,95个氨基酸;
4)totP1位于基因簇核苷酸序列8655-9692个碱基处,长度为1038bp,编码单加氧酶,345个氨基酸;
5)totF位于基因簇核苷酸序列9796-9993个碱基处,长度为198bp,编码铁氧化还原蛋白酶,66个氨基酸;
6)totP2位于基因簇核苷酸序列10023-11228个碱基处,长度为1206bp,编码细胞色素P450羟化酶,401个氨基酸;
7)totE1位于基因簇核苷酸序列11659-12810个碱基处,长度为1152bp,编码磷酸脒基转移酶,383个氨基酸;
8)totA1位于基因簇核苷酸序列13118-32683个碱基处,长度为19566bp,编码I型PKS合成模块,6521个氨基酸;
9)totA2位于基因簇核苷酸序列32769-43985个碱基处,长度为11217bp,编码I型PKS合成模块,3738个氨基酸;
10)totM位于基因簇核苷酸序列44046-45113个碱基处,长度为1068bp,编码甲基转移酶,355个氨基酸;
11)totB1位于基因簇核苷酸序列45416-64180个碱基处,长度为18765bp,编码NRPS酶,6254个氨基酸;
12)totP3位于基因簇核苷酸序列64226-65437个碱基处,长度为1212bp,编码细胞色素P450羟化酶,403个氨基酸;
13)totS位于基因簇核苷酸序列65536-66447个碱基处,长度为912bp,编码磺酸根转移酶,303个氨基酸;
14)totP4位于基因簇核苷酸序列66515-67426个碱基处,长度为912bp,编码牛磺酸双加氧酶,303个氨基酸;
15)totC1位于基因簇核苷酸序列67481-68602个碱基处,长度为1122bp,编码编码III型PKS合成酶,373个氨基酸;
16)totC2位于基因簇核苷酸序列68623-69339个碱基处,长度为717bp,编码烯酰辅酶A羟化酶,238个氨基酸;
17)totC3位于基因簇核苷酸序列69336-70715个碱基处,长度为1380bp,编码烯酰辅酶A羟化酶,459个氨基酸;
18)totC4位于基因簇核苷酸序列70712-72016个碱基处,长度为1305bp,编码氨基转移酶,434个氨基酸;
19)totE2位于基因簇核苷酸序列72075-73223个碱基处,长度为1149bp,编码磷酸脒基转移酶,382个氨基酸;
20)totB2位于基因簇核苷酸序列73273-76503个碱基处,长度为3231bp,编码NRPS合成酶,1076个氨基酸;
21)totB3位于基因簇核苷酸序列76500-78152个碱基处,长度为1653bp,编码NRPS合成酶,550个氨基酸;
22)totD1位于基因簇核苷酸序列78149-79630个碱基处,长度为1482bp,编码琥珀酸裂解酶,495个氨基酸;
23)totK位于基因簇核苷酸序列79627-80544个碱基处,长度为918bp,编码GHMP激酶,305个氨基酸;
24)totH位于基因簇核苷酸序列80563-82005个碱基处,长度为1443bp,编码卤化酶,
480个氨基酸;
25)totU4位于基因簇核苷酸序列82148-82519个碱基处,长度为372bp,编码甾酮异构酶,123个氨基酸;
26)totR1位于基因簇核苷酸序列82789-85455个碱基处,长度为2667bp,编码LuxR家族的转录调节蛋白,888个氨基酸;
27)totR2位于基因簇核苷酸序列85843-88584个碱基处,长度为2742bp,编码LuxR家族的转录调节蛋白,913个氨基酸;
28)totR3位于基因簇核苷酸序列88742-89341个碱基处,长度为600bp,编码TetR家族的转录调节蛋白,199个氨基酸;
29)totI位于基因簇核苷酸序列89624-89839个碱基处,长度为216bp,编码MbtH蛋白,71个氨基酸;
30)totD2位于基因簇核苷酸序列89865-92099个碱基处,长度为2235bp,编码Daba合成酶,744个氨基酸;
31)totR4位于基因簇核苷酸序列92621-95020个碱基处,长度为2400bp,编码LuxR家族的转录调节蛋白,799个氨基酸;
32)totG位于基因簇核苷酸序列95933-97129个碱基处,长度为1197bp,编码糖基转移酶,398个氨基酸;
33)totU5位于基因簇核苷酸序列97290-98015个碱基处,长度为726bp,编码未知功能蛋白,241个氨基酸;
34)totR5位于基因簇核苷酸序列98247-98861个碱基处,长度为615bp,编码TetR家族的转录调节蛋白,204个氨基酸;
35)totT位于基因簇核苷酸序列98886-100379个碱基处,长度为1494bp,编码分泌蛋白,497个氨基酸;
SEQ ID NO.1所示序列的第2972-101763位核苷酸序列的互补序列可根据DNA碱基互补原则得到,第2972-101763位的核苷酸序列或部分核苷酸序列可以通过聚合酶链式反应(PCR)、用适当的限制性内切酶酶切相应DNA或DNA重组技术获得。本发明提供了构建至少包含部分SEQ ID NO.1所示序列第2972-101763位中DNA片段的重组DNA载体途径。
本发明所提供的核苷酸序列或部分核苷酸序列,可使用PCR探针法等技术,从其他生物体筛选获得Totopotensamides生物合成基因簇同源基因。
本发明所提供的核苷酸序列或部分核苷酸序列,可用于在Streptomycessp.SCSIO 02999基因组文库中定位更多的文库质粒。这些文库质粒至少包含本发明中的部分序列,也包含Streptomyces sp.SCSIO 02999基因组中邻近区域未克隆的核苷酸序列。
包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的DNA片段,可以被体内外突变等修饰,包括插入、置换、缺失、易错聚合酶链式反应、位点特异性突变、不同序列重组、定向进化,进而获得其他基于生物合成途径的新结构化合物。
包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的克隆,可以通过适当的表达体系在外源宿主中表达,生产相应酶或者提高活性化合物产量。这些外源宿主包括大肠杆菌、链霉菌、假单胞菌、芽孢杆菌、酵母及动植物等。
包含本发明所提供的核苷酸序列或至少部分核苷酸序列的DNA片段,可以用于分离所需蛋白并可用于抗体制备。
包含本发明所提供的氨基酸序列或者至少部分序列的多肽,可能在去除或者替代某些氨基酸之后,仍有甚至产生新的生物活性、提高产量、优化蛋白动力学特征或其他致力于得到的性质。
包含本发明所提供的核苷酸序列或部分核苷酸序列的基因或基因簇,可以在异源宿主中表达及揭示它们在宿主中的功能。
本发明的第二个目的是提供环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇在制备环脂肽类化合物Totopotensamides中的应用,如Totopotensamide A和/或Totopotensamide C。如敲除环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因可以激活环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇,使其合成化合物Totopotensamide A;还有敲除链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999的基因组中的环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因和xiaP基因,以及超表达totR1基因可以使链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999产生化合物Totopotensamide A和化合物Totopotensamide C。
本发明的第三个目的是提供环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇的激活方法,其特征在于,敲除环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因,激活环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇,使其合成化合物Totopotensamide A。
优选,敲除链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999的基因组中的环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因,以及敲除xiaP基因和/或totR3基因,使链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999产生化合物Totopotensamide A。
再进一步优选,超表达totR1基因。
具体可以为:敲除链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999的基因组中的环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因和xiaP基因,以及超表达totR1基因使链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999产生化合物Totopotensamide A和化合物Totopotensamide C。
本发明的第四个目的是提供环脂肽类化合物Totopotensamides的制备方法,其具体步骤如下:
制备突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1的发酵培养物,将发酵培养物分成发酵液和菌丝体两部分,发酵液中的次级代谢产物用XAD-16大孔树脂吸附,再用丙酮洗脱,减压浓缩得到浓缩液A;菌丝体用甲醇浸提,浸提液减压浓缩得到浓缩液B,将浓缩液A和B混合,再用丁酮萃取,减压浓缩至干得到粗提物。
将粗提物经正相硅胶柱层析,用氯仿/甲醇从体积比100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32和0/100梯度洗脱,顺序得到8个馏分Fr.1-Fr.8,氯仿/甲醇体积比100/32洗脱的馏分Fr.7经凝胶Sephadex LH-20柱分离,用体积比1:1的氯仿/甲醇洗脱得到7个亚馏分Fr.7-1-Fr.7-7,馏分Fr.7-2经半制备HPLC纯化得到化合物1,馏分Fr.7-4经半制TLC纯化,用体积比3:1的氯仿/甲醇展开,乙酸乙酯洗脱得到化合物2;
所述的环脂肽类化合物Totopotensamides的结构式如下:
其中化合物1为Totopotensamide A,化合物2为Totopotensamide C。
所述的突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1是将totR5和xiaPi基因敲除,以及totR1基因超表达的链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999。
所述的制备突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1的发酵培养物具体步骤优选为:将活化的菌株接入种子培养基中,28℃,200rpm,培养48h制得种子液,将种子液以体积分数10%的接种量接入到发酵培养基中,28℃,200rpm,振荡培养7d,而制得发酵培养物,所述的种子培养基和发酵培养基Am6-1的配方为,按质量分数100%计,包括可溶性淀粉2%,甘油1%,甘氨酸0.01%,丙氨酸0.01%,苏氨酸0.01%,异亮氨酸0.01%,CaCO3 0.5%,海盐3%,余量为水,pH 7.0。
本发明的环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇相关的所有基因和蛋白信息,可以帮助人们理解环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成机制,为进一步遗传改造提高了材料和知识。另外本发明为通过操控调控基因激活沉默基因簇的表达提供了依据,并丰富了天然产物生物合成基因簇库,为药物先导化合物的发现提供了实体。
本发明的链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址:中国武汉市武汉大学,其保藏编号为:CCTCC NO:M2012145,该保藏信息公开于中国专利号:CN ZL201210146664.X,发明名称:夏霉素A和氧夏霉素的生物合成基因簇及其应用的专利中。
附图说明:
图1是Totopotensamides生物合成基因簇示意图;
图2是ΔtotR5i突变株的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i突变株的PCR验证,其中的1、2、3分别代表模板为ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO 02999野生型基因组;ΔtotR5i突变株的基因组;
图3是ΔtotR5i/ΔxiaPi的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i/ΔxiaPi突变株的PCR验证,其中的1、2、3、4、5、6分别代表模板为ΔtotR5i/ΔxiaPi;Streptomyces sp.SCSIO02999野生型基因组;ddH2O;ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO02999野生型基因组;ΔtotR5i/ΔxiaPi突变株基因组;
图4是ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1突变株的PCR验证,其中的1、2、3分别代表模板为ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO 02999野生型基因组;ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1突变株基因组;
图5是ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2突变株的PCR验证,其中的1、2、3分别代表模板为模板为ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO02999野生型基因组;ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2突变株基因组;
图6是ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3突变株的PCR验证,其中的1、2、3分别代表模板为模板为ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO02999野生型基因组;ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3突变株基因组;
图7是ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4的构建过程,其中a)为构建流程图,b)为ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4突变株的PCR验证,其中的1、2、3分别代表模板为模板为ddH2O;Streptomyces sp.SCSIO02999野生型基因组;ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4突变株基因组;
图8是野生型和七株突变株发酵液HPLC分析检测图,其中1代表化合物Totopotensamide A,2代表化合物Totopotensamide C;
图9是T3-20G和ΔtotR5i/T3-20G发酵检测图,其中TPM A代表化合物Totopotensamides A标品;
图10是环脂肽类化合物Totopotensamides的化学结构式;
图11是化合物Totopotensamides A的谱图;
图12是化合物Totopotensamides C的谱图。
具体实施方式:
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1:
包括在Totopotensamides生物合成基因簇中原位敲除负调控基因totR5,构建突变株ΔtotR5i;在突变株ΔtotR5i中原位敲除Totopotensamides生物合成基因簇所在菌株(Streptomyces sp.SCSIO 02999,保藏编号为:CCTCC NO:M 2012145)中主产物xiamycins的生物合成关键基因xiaP,构建双突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi;在双突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi中插入突变敲除负调控基因totR3,构建三突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3;在双突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi中分别插入突变敲除正调控基因totR1、totR2和totR4,构建三突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2和ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4;在双突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi中超量表达正调控基因totR1,构建突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1。该方法激活了Streptomyces sp.SCSIO 02999中沉默的Totopotensamides生物合成基因簇的表达,逐步提高了代谢产物的产量,并从中鉴定了化合物Totopotensamide A和C。其具体步骤如下:
(a)负调控基因totR5的同框缺失突变株的构建
其构建过程如图2所示。具体步骤如下:
(1)将cosmid质粒pCSG4807(含有totR5基因,如图1所示,其序列是从SEQ ID NO.1的第87835位开始)转入大肠杆菌E.coli BW25113/pIJ790中获得E.coli BW25113/pIJ790/pCSG4807重组菌株,用10mmol/L的L-阿拉伯糖诱导λ/red重组系统表达,并将其制备为电转感受态细胞待用。(2)用内切酶EcoRI和HindIII酶切质粒pIJ773,回收约1.4kb含有接合转移原点和阿泊拉霉素抗性基因的DNA片段,以此作为PCR模板,用引物totR5-TarF/R(表1)通过PCR扩增出1.4kb的PCR产物,片段纯化待用。(3)将回收后的1.4kb PCR产物电转入步骤(1)中制备的感受态细胞使其发生重组,涂布于LB筛选平板(含100μg/mL氨苄青霉素,50μg/mL卡那霉素,50μg/mL阿泊拉霉素)上,37℃过夜培养。从平板上挑出阳性单克隆,使用验证引物totR5-TestF/R(表1)验证,抽提经PCR验证的质粒,命名为pCSG4808,该质粒中的totR5基因的部分片段被接oriT和Apr抗性基因取代。(4)将质粒pCSG4808转化导入E.coli DH5α/BT340,划单克隆42℃培养,分别在含有Kan和Apr的LB固体平板上对点筛选,对在含有Kan的LB固体平板上生长,而在含有Apr的LB固体平板上不生长的单克隆,使用验证引物totR5-TestF/R(表1)验证,筛选出成功同框缺失的单克隆,抽取质粒,命名为pCSG4809。(5)将质粒pCSG4809再次转入大肠杆菌E.coli BW25113/pIJ790中获得E.coli BW25113/pIJ790/pCSG4809重组菌株,用10mmol/L的L-阿拉伯糖诱导λ/red重组系统表达,并将其制备为电转感受态细胞待用。(6)用内切酶EcoRI和HindIII酶切质粒pIJ773,回收约1.4kb含有oriT和Apr抗性基因的DNA片段,以此作为PCR模板,用Apr置换cosmid中Kan的通用引物Kan-tarF/R(表1)通过PCR扩增出1.4kb的PCR产物,片段纯化待用。(7)将回收后的1.4kb PCR产物电转入步骤(5)中制备的感受态细胞使其发生重组,涂布于LB筛选平板(含100μg/mL氨苄青霉素,50μg/mL阿泊拉霉素)上,37℃过夜培养。从平板上挑出阳性单克隆,使用验证引物Kan-testF/R(表1)验证,抽提经PCR验证的质粒,命名为pCSG4812。(8)将构建好的质粒pCSG4812转化到E.coli ET12567/pUZ8002中,构建成E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4812,作为接合转移的供体菌。
将接合转移的受体菌Streptomyces sp.SCSIO 02999(于2012年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址:中国武汉市武汉大学,保藏编号为:CCTCC NO:M2012145)划线于P4(可溶性淀粉10g,细菌学蛋白胨1g,酵母粉0.5g,K2HPO41g,MgSO4.7H2O1g,NaCl 1g,(NH4)2SO4 2g,CaCO3 2g,微量元素100uL,海洋30g,琼脂20g,pH7.0-7.4,加水定容至1L,灭菌备用)板中划线培养7天,长出的孢子用无菌棉签收集于含3%海盐的TSB培养基中(大豆蛋白胨5g,胰蛋白胨15g,蔗糖100g,葡萄糖2.5g,K2HPO4 2.5g,海盐30g,加水定容至1L,pH 7.0),涡旋振荡,分散孢子。过滤分离菌丝体和孢子,孢子悬浮于5mL含3%海盐的TSB培养基中,55℃热激10min,然后于28℃萌发1-2h,作为接合转移的受体菌。供体菌E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4812在50mL含50μg/mL卡那霉素,25μg/mL氯霉素和50μg/mL阿泊拉霉素的LB液体培养基中于37℃振荡培养4h至OD600值约为0.6时,4000rpm离心10min收集菌体,用LB清洗菌体2遍,悬浮于300μL LB培养基中,作为接合转移的供体菌。取上述受体菌400μL和供体菌100μL混合均匀,涂布于含有20mM MgSO4不含任何抗生素的ISP4固体培养基上,吹干后,于28℃培养18-20h,然后将平板取出,用含有抗生素的无菌水覆盖平板,其终浓度为20μg/mL阿泊拉霉素和30μg/mL甲氧苄氨嘧啶,吹干后,置于28℃培养箱中,培养5d后观察。
当接合转移平板上长出菌落后,用无菌牙签将其转接到含有35μg/mL阿泊拉霉素和50μg/mL甲氧苄氨嘧啶的P4平板中,28℃培养3d后,抽取各个突变株的基因组DNA,利用检测引物totR5-TestF/R(表1)通过PCR检测克隆,筛选单交换突变株,将单交换突变株划线于无抗P4平板,待其长出孢子后稀释涂布于无抗生素P4板,将长出来的单克隆对点于无抗生素和含Apr抗性的P4板,PCR验证那些在Apr上不生长在无抗板(无抗生素)上生长的克隆子,最终得到同框缺失菌株,将突变株命名为ΔtotR5i,该突变株ΔtotR5i中totR5基因被敲除失活。
(b)双同框缺失突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi的构建
ΔtotR5i/ΔxiaPi的构建过程如图3所示。同框缺失的单克隆pCSG2562质粒的构建方法与与步骤(a)以及图(2)中pCSG4809的构建方法一致,针对的是XiaP基因(其编码的氨基酸序列Genbank登录号是AFK78082.1,编码基因的核苷酸序列是Genbank登录号JQ812811.1所示核苷酸序列的19795-20802位核苷酸序列),使用的扩增引物是XiaP-1R/1F(XiaP-1F;5’-GCGAACTGGCAGCGATTGTG-3’,XiaP-1R:5’-GCGGATCTGGTAGGCGATGC-3’),由此得到pCSG2562质粒,再将pCSG2562质粒转化进去E.coli ET12567/pUZ8002/中,获得E.coliET12567/pUZ8002/pCSG2562,将其作为接合转移的供体菌,而以步骤(a)中获得的ΔtotR5i作为受体菌,其接合转移过程以及筛选同框突变株的过程同(a)中接合转移过程以及筛选同框的过程一致,将最终获得的突变株命名为ΔtotR5i/ΔxiaPi,该突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi中的totR5基因和xiaP基因被敲除失活。
(C)突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3和Δtot R5i/ΔxiaPi/ΔtotR4的构建。
ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3和ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4的构建过程分别如图4、5、6和7所示。
其中PCSG4554、PCSG4555、PCSG4556和PCSG4557质粒的构建方法与与步骤(a)以及图(2)中pCSG4809的构建方法一致,分别针对的是totR1、totR2、totR3、totR4基因的敲除,使用的扩增引物分别是:TotR1-tarF/R(表1)、TotR2-tarF/R(表1)、TotR3-tarF/R(表1)、TotR4-tarF/R(表1),测试引物分别是TotR1-testF/R(表1)、TotR2-testF/R(表1)、TotR3-testF/R(表1)、TotR4-testF/R(表1),由此分别得到PCSG4554、PCSG4555、PCSG4556和PCSG4557质粒,将这些质粒分别转化进入E.coli ET12567/pUZ8002/中,分别获得E.coliET12567/pUZ8002/pCSG4554、E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4555、E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4556和E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4557,分别以E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4554、E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4555、E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4556和E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4557作为接合转移的供体菌,而接合转移的受体菌为ΔtotR5i/ΔxiaPi。其接合转移的过程同步骤(a)中介绍的接合转移过程一致,最终在Apr抗性的筛选下,通过PCR验证,验证引物见表1,获得双交换突变株,将它们分别命名为ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1(totR5、xiaP、totR1三个基因被敲除失活)、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2(totR5、xiaP、totR2三个基因被敲除失活)、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3(totR5、xiaP、totR3三个基因被敲除失活)和ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4(totR5、xiaP、totR4三个基因被敲除失活)。
(d)totR1超表达菌株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1的构建
通过酶切连接的方法将totR1基因片段连接到pPWW50载体上,将测序正确的质粒命名为pCSG4811,然后将质粒pCSG4811导入E.coli ET12567/pUZ8002,最终获得接合转移的供体菌E.coli ET12567/pUZ8002/pCSG4811,接合转移的受体菌为双同框缺失突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi,接合转移的具体过程同步骤(a)中描述的过程一致,最终将PCR验证正确的接合子命名为ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1(totR5、xiaP二个基因被敲除失活,而totR1基因超表达),待发酵检测。
将野生型Streptomyces pactum SCSIO 02999、突变株ΔtotR5i、ΔtotR5i/ΔxiaPi、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4和ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1分别用Am6-1发酵培养基于28℃,200rpm下进行发酵培养,第4天开始取样(发酵液)检测,每次取样5mL,加5mL丁酮萃取,取上清旋干,甲醇溶解,HPLC进样分析。
HPLC分析条件:
柱子:Agilent ZORBAX SB-C18 5um 4.6×150mm
流动相:按体积分数计,A相为90%水+10%乙腈+0.08%甲酸;B相为90%乙腈+10%水
方法:0-25min:95%A-0%A;25-26min:0%A-0%A;26-28min:0%A-95%A;28-30min:95%A-95%A,流速1ml/min;最大检测波长236nm。
HPLC分析图如图8所示,图中的1代表化合物Totopotensamide A、2代表化合物Totopotensamide C。从图8可以看出,野生型链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999不产生化合物Totopotensamide A,环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇处于沉默状态,而敲除负调控基因totR5后的突变株ΔtotR5i能产生化合物Totopotensamide A,进一步敲除基因totR5和xiaP的突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi能产生化合物Totopotensamide A,并且产量高于突变株ΔtotR5i;敲除基因totR5、xiaP和totR3的突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR3其化合物Totopotensamide A高于突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi,由此可见,xiaP和totR3的敲除有助于提高化合物Totopotensamide A的产量。而敲除totR1、totR2、totR4的突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR1、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR2、ΔtotR5i/ΔxiaPi/ΔtotR4不能产生化合物Totopotensamide A。超表达totR1有助于提高化合物Totopotensamide A的产量(ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1),并且还产生了新的化合物Totopotensamide C。
实施例2:环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇的异源表达以及激活方法。
包括对包含Totopotensamides生物合成完整基因簇的BAC质粒3-20G在S.lividans中进行异源表达,构建菌株T3-20G,在菌株T3-20G中同框缺失负调控基因totR5,构建突变株ΔtotR5i/T3-20G。
其具体步骤如下:
一、BAC文库的异源表达过程
具体步骤如下:
(1)首先构建链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999的BAC文库,然后筛选包含Totopotensamides生物合成基因簇的BAC文库:用包含Totopotensamides基因簇的上下游引物totR5F/R和Tot-orf(-1)F/R对链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 02999的BAC文库进行筛选,筛到3个BAC质粒,将其分别命名为BAC质粒3-20G、BAC质粒4-3O和BAC质粒3-1E,其中BAC质粒3-20G的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,SEQ ID NO.1的第2972-101763位核苷酸序列是环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇,该基因簇全长92kb,是一个PKS/NRPS杂合的生物合成基因簇,包含了35个基因,具体如图1所示。
(2)BAC质粒3-20G的接合转移:(a)将包含穿梭质粒的菌株E.coli ET12567/pUB307在含有Kan和Chl的LB平板上划出单克隆,同时将包含有BAC质粒3-20G(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)的菌株E.coli DH10B/3-20G在含有Apr的LB平板上划出单克隆。(b)分别将E.coli ET12567/pUB307和E.coli DH10B/3-20G的单克隆接在含对应抗生素的10mLLB液体培养基中,在37℃培养,E.coli ET12567/pUB307培养3-4h左右,E.coli DH10B/3-20G培养2-3h左右。(c)分别离心收集菌体,用10mL LB洗菌体两次,然后分别用200uL LB将这两种菌体悬浮起来。(d)刮取1/4块平板的S.lividanc的孢子,用TSB洗孢子两次,最后用400μL TSB将其悬浮起来,50℃热击10min,28℃复苏2h左右。(e)将准备好的供体菌E.coliDH10B/3-20G、含穿梭质粒的菌株E.coli ET12567/pUB307和受体菌S.lividance混合起来,涂布于含Mg2+浓度为10mM的P4无盐平板上,待平板吹干后,28℃培养箱培养。(f)培养18-20h左右,用含有终浓度为50μg/mL Apr和50μg/mL的Tmp覆盖。(g)28℃培养4-5d左右,将接合子挑出,PCR验证,将验证正确的接合子命名为T3-20G(即含有BAC质粒3-20G的菌S.lividance)。
二、异源表达突变株ΔtotR5i/T3-20G的构建
具体步骤如下所示:(1)用Spc抗性替换实施例1中的pCSG4809上的Kan抗性:用内切酶EcoRI和HindIII酶切质粒pIJ778,回收约1.4kb含有接合转移原点和壮观霉素抗性基因的DNA片段,以此作为PCR模板,用引物Kan-tarF/R(表1)通过PCR扩增出1.4kb的PCR产物,片段纯化待用。将回收后的1.4kb PCR产物电转入E.coli BW25113/pIJ790/pCSG4809感受态细胞中,涂布于LB筛选平板(含100μg/mL壮观霉素)上,37℃过夜培养。从平板上挑出阳性单克隆,使用验证引物Kan-testF/R(表1)验证,抽提经PCR验证的质粒,将其命名为pCSG4813。(2)将pCSG4813转入E.coli ET12567/pUZ8002中,作为接合转移的供体菌,而将上述构建好的T3-20G的孢子为接合转移的受体菌,进行接合转移(方法同前),用100μg/mL的壮观霉素和50μg/mL Tmp进行覆盖,筛选单交换。(3)将PCR验证为单交换的接合子划线于无抗的SFM平板中,待其产孢后,对其稀释涂布于无抗平板,将无抗平板上长出的单克隆分别对iii点于壮观霉素和阿普拉平板,最后对在阿普拉平板上生长,而在壮观霉素平板上不生长的单克隆进行PCR验证,最终筛选到双交换突变株,将其命名为ΔtotR5i/T3-20G(含有BAC质粒3-20G,但BAC质粒3-20G中的totR5基因被敲除失活的菌S.lividance)。
(c)T3-20G和ΔtotR5i/T3-20G的小发酵检测
用Am6-1培养基对T3-20G和ΔtotR5i/T3-20G的接合子进行发酵检测,发酵条件是28℃,200rpm,在其发酵的第4、5、6天开始取样,每次取样5mL,加5mL丁酮萃取,取上清旋干,甲醇溶解,HPLC进样分析,其发酵检测第5天的结果如图9所示。
其中图9中的(i)代表TPM A(Totopotensamide A)标准品对照,(ii)代表ΔtotR5i/T3-20G,(iii)代表T3-20G,从图9中可以看出,ΔtotR5i/T3-20G产生了化合物Totopotensamide A,而T3-20G没有产生。
本发明所采用的工程菌,引物及质粒,如表(1)和(2)所示。
表(1)本发明所用到的引物
表(2)本发明所用到的引物和质粒
实施例3:环脂肽类化合物Totopotensamides的制备
(a)制备突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1的发酵培养物:将活化的突变株ΔtotR5i/ΔxiaPi/totR1接入种子培养基中,28℃,200rpm,培养48h制得种子液,将种子液以体积分数10%的接种量接入到发酵培养基中,28℃,200rpm,振荡培养7d,而制得发酵培养物,所述的种子培养基和发酵培养基的配方为,按质量分数100%计,包括可溶性淀粉2%,甘油1%,甘氨酸0.01%,丙氨酸0.01%,苏氨酸0.01%,异亮氨酸0.01%,CaCO3 0.5%,海盐3%,余量为水,pH 7.0,将上述成分混合均匀,灭菌备用。
(b)将发酵培养物通过4000rmp,10min离心分成发酵液和菌丝体两部分,发酵液中的次级代谢产物用XAD-16大孔树脂吸附,再用丙酮洗脱,减压浓缩到小体积得到浓缩液A;菌丝体用甲醇浸提,浸提液减压浓缩到小体积得到浓缩液B,将浓缩液A和B混合,再用丁酮萃取,减压浓缩至干得到粗提物。
将粗提物经正相硅胶柱层析,用氯仿/甲醇(100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32和0/100,v/v)梯度洗脱,顺序得到8个馏分(Fr.1-Fr.8);馏分Fr.7(氯仿/甲醇100/32洗脱的馏分)经凝胶Sephadex LH-20柱分离,用体积比1:1的氯仿/甲醇洗脱得到7个亚馏分(Fr.7-1-Fr.7-7);馏分Fr.7-2(根据液相判断有目标化合物)经半制备HPLC纯化(A相为水加0.1%的甲酸,B相为90%的乙腈/水,40%的B相等度洗脱,流速为2.5mL/min得到化合物1(Rt=25.0min);馏分Fr.7-4根据液相判断有目标化合物)经半制TLC纯化,体积比3:1的氯仿/甲醇展开,乙酸乙酯洗脱得到化合物2。
对化合物1和2进行结构鉴定,化合物1的谱图如图11所示,化合物2的谱图如图11所示,通过图11和12鉴定结构如下:
化合物1和2的结构式如式(1)(图10)所示:
其中化合物1为Totopotensamide A,化合物2为Totopotensamide C。
序列表
<110> 中国科学院南海海洋研究所
<120> 一种环脂态类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 104928
<212> DNA
<213> 密旋链霉菌SCSIO 02999(Streptomyces pactum SCSIO 02999)
<400> 1
cacaggtcct ggagcagcag tcgcagccgc cgggcggtca gctggtccag cgcgctgaac 60
ggttcgtcca ggagcacgag ttcgggctgc acggcgaagg cgcgggccac ggcggcgcgc 120
tggcgctgcc cgccggagag caccgacggg tagcggtcgg cgtactgcgc gaggcccacg 180
tcggccagcg cctgcgaggc tccggcgggg tcgagtcccg tgctggtcag ggccagttcg 240
acgttgcggc gcacggagag ccagtccagc agccgcggct gctggaacac cacaccgagc 300
cggggcccgg tgccgtccgt accgctcgtg ccggtgggcc cgggcgatcc gtcggcgagt 360
gtcccgtcgt ccagcgtgat ccggccggag tcggggtgtt cgaggcccgc gaccaggtgc 420
agcaaggtgg tcttgccggt gccggaggcg ccgacgacgg ccaccagttc gccgtggtgc 480
acggtgagcg agaagtcgtc gaagacggtc tcgcgctcgc cggtgcgggc gctggtgaac 540
tccttgccca cgccgtcgag gacggcgtac ggccgctgcc acgggcgctc ggccggagcg 600
ccggacgtcg tgccggtgtc ggtgccggtc atacggtggc cgccttccgc cagcgtccca 660
ggcgtcgttc caggctctgg aggacgccgt actccaggac cgccatgacg agtgcgaaga 720
gcagggtcca gctgaggaca ccggcgacgt tctgcgcggc gaactggttg ttgagctcgt 780
agccgactcc gctggacatg ccgaacatct ccaccagcac gatcaccttc caggacagcg 840
acaggccgag acgggcgccc gacagcagcg cgggcagcag cgacggcagc cacaggtagc 900
gcagcttggt ggtgagcgag aagcggtaga cgtacgccat ctcgtgcagt tcggagtcca 960
tggcgcgggt gccctggtag atgctcaggg tcagggctgg cgcggcggac agggcgacgg 1020
cgaccaccgg gttggtgagg gagacgccga accagatgac gcacagcagg gcccacacca 1080
ggccgggcac ggtcagtccg atcagcaccg ccggttcgaa gaagcgccgt acgaactcca 1140
cccggcccat cgcgatgccg atcacgaccg cggtgacgaa ggccagggcg aagccgaggc 1200
cgacgcgcag cagggtggcg ccgagggagt cgtagaacag gggctgggtg acggtgtccg 1260
acagtgcgga ccagacggtc ggcacgtccg ggaccagtac gttgtcgctg cgggacgcga 1320
cgagctgcca gccgccgacg agcaccgcga agaaggccgc ggcgggcagc accgcgcgaa 1380
cggcggccct gcccggggcg ggtcgtccgc gccggccgcg ggcggaggag gccgagccgg 1440
tcggaccggt cgccgccggg tcgggcggag agggggcggc cggcgcgggg gcggcgctca 1500
ccgtggtgtg tcgtggcacg gtgctcaccc caggtcccgg tagacggtct tctcgggcac 1560
ggctctgatc agtcccgtcc gggcggcgac cttcaactgc tcgcgcatgc tggtgaacga 1620
ggcctcgccc cactcgactg ggtagatccc ggcgaggcgc tcgggcagca gcgccacggc 1680
cttcttctcc gaggccggga tgccgtagga ctcgtgcagg tcggcgagga tctcggggtg 1740
gtcgtggatg tactcgtggg cccgcagccg gagtctggcg agaccggctg ccgcctttcc 1800
gttctgttcc acccaactgc gcttggcgcc ctgtccgttg aggaagagtc cggcttcgct 1860
gccggtgccc tgctgccaca ggccggtgac cgtgacgagt tgccgcgccc ccttggcgac 1920
cagccgggtg gcgttgggct cgatggtgac gatggcgtcc acgtcaccgc gctcgaagag 1980
ggagagtccg gcgagtacgg ctccgggatg gacctcgtag tcctcctcga agtcgatgtc 2040
gttgacagcg gtggcgagtt gggtggagcg gtaggcgtcg ctgttcttcg gcggcgtggc 2100
gaccttcttg ccgcgcaggt ccttgacggt ccggtagggg ctgttctccg gcaccagcca 2160
ccgcacgtgg ttcgccaggc tggtggagaa gatcagcacg tcggcgcccg cggcctggga 2220
gacggcggcg ccgacggggc ccatgctggc cacgtcgagg gccccggaga gcagcttgtt 2280
ctgcacgtcg cccggtccgg tccccgcgac gtaggcgagg tccaggtcgc ccaccagacg 2340
ctgctgttca ctgatcggcc tgatcaccgc gcccgccgtc ccggcctggg tgtcctccac 2400
gcgcgccgag ccgccgccgt ccttgccgcc gccggattct ccgcacgccg cgagcagcgg 2460
ggcgagaccg gccgcggcca gcagcccgcc tcccgagcgc aacagggtcc ggcggcccgg 2520
cccctgggcg gagggcgccg tggtccggcg gtcgggacgg aagaaggaag gactggtcat 2580
ggtgcggtct cccgggcgga gaaggggaaa ggggcgggaa ggaggggaag aaggggaggg 2640
aggggcaggc gggggggggg tgggcacggc aggacacgcc gcggcggtgt gaggggcgtc 2700
gcgacgaccg gcgggcgggg cggggcaccc gtacgcagtc acggcgtgcg ctcccgcgcg 2760
gccgtgcggc gaccgcgtcg cgggccgcgt tcggtgcatg ccgcgccggg gggaggagga 2820
ggacggaacg ccgtcagcgc ggagcggggc cgtcgcggag cgggccggta cacagacagc 2880
cggcgagcag acagagatcg acgtggtagc ggcgggtgag ggccctcggg ggccgcggct 2940
ctccggtcat cgcgatgtcc cgtcccctcg cctaccgcag ggccagcagc gtgtcgtaac 3000
cgctgcgccc gtcggtgagt tgccaggacg tcatccacgc gtagctttcg gtgaaccgtt 3060
cccgcgtgaa gggagtggcg tgcgtgtagc ggtggtagtc cggacgcagc cgaccggggg 3120
cgagcgagcc gtcgagctcg ctgacgatgt gtccggccca ggccgagcgg tcggcgttga 3180
tgatgtcgac tgccgcgttg acggcggaca tgtagacgtc gagccgctcg gcgggcaggt 3240
gcggtgccac gacctgtgtg ccccggtaga agtagcagcc cagcaggtgg gctccgcgct 3300
ccagggcgag ggtgagatag ggctccatga gcatcacggc gcggatgctc ccggtggcgg 3360
ccgcctccag gcgggcggac ggcgggccca cgtgttccag ggtgatccgg tcgcggggga 3420
cggtgccttc gaggaggtgc agagcggtgt agtgcgagcc ggtgaactcg ttgacgccga 3480
cgggtatgcc gctcacgtcg tgcggttcgc ccagcgccgg gtcgaagctg atcagcccct 3540
gggcgacgac cgccgggcgc aggtaaccga tgtagccgcc gcgccggttg cgttcgagcc 3600
ggtcgatgcc gccccactcg cacaggttga acaggtcggc gcgctccgac tcgaagaggg 3660
cctccttgcg acgcgcgatc gggtcgcggg actcgcgctc ccgggacggg gtgttgtgcg 3720
cgaggcggac gtcgagaccg gcctgctcga acaggccgtg ctccgtggcg acgatctcgg 3780
ggaggtcgaa gacggggtgg ttgcgggaga tgacgatctg gtcgccgtgc gcttgcgtcg 3840
tcatgctgcc ctccctcctg tcctcggact gccgatgact gtaggcgggc cccacacgcc 3900
cgtcaacgga ctcttttcgc gatacgcgaa gggatttcac tctgcgggaa ggcccgtctc 3960
ccttggtggc acggcgtgtt ggggcgccac ggatcccgcg gaggagccga gggctgcaac 4020
atgattgaca tgttcggccc gagaacggcc cgagatcggc ccgacagggg gagagccgtc 4080
agagctgtcc gagggccagg gctaccggca ggccccgcag gctgtccgcc gcggcgacca 4140
cccgcgcacc gagcgcgtcc agacggtcgt cggtcatgcg ccccgccggc ccctggatgt 4200
cgacggccag ctggatgtag ggcgatccgc tgtccacggg cgcggcgagt ccccgcaggc 4260
cactgccgtc ggcgccgtcg agcacggcat agccccggaa ctgcgcggcg agcagccgca 4320
cgtgccagga ccacttctcg gcgtcctcgg tgtcctcggt cgggtcgggg ccggcctgct 4380
cgtcgccgcc ccggcgctgt cccggagtcc gctgcggcga cggggtgtcg aaggccagca 4440
gggcgacgcc catcgccgtc cgcgtcagcg gcacggacac ccccggctcg cccaggtacc 4500
gcagcggctg ctcggactgg acggagacga gcaccagcac gcggtcgccg cggcgcatgc 4560
cgatgctcgc ggtctccccg gtcgcgtccg ccagttcctt gaggaccgcg gtgacctccg 4620
gcagcccggt ggacgccagc gaccggcggc cgagccgcag cagtaccggt ccgggctgga 4680
accggtcacc ctcacgggag cggcagagca ggccctccgc gcacagtgtt cccagcagcc 4740
ggtgcacggt gctcacgttc agcccggtga gcttggacaa ctcggtgagg gtcgcaccgc 4800
cggacgggct gtccaccacg gcccccagca gcgccgccgc ccgggcgacc gactggacgc 4860
cggaactgcg cggagtgcgg ctcgcgagat cggtggagga ttcagtcacc tcgggacggt 4920
acaccagcgc ctcggagctc cgccgaaagc gggcccggca cgggacccgc cccgtacgtc 4980
agtgcccgtg aggaccgtcc gccgccttct cggcgaacag gtcgagcaag ccctgggccg 5040
tgttgtccgc ggagtcgaac gacggcatct cgtcggtcgc ggtctccgcg ctgcggggaa 5100
acatgaccgc ctcgtaccgg gcgagtgccg cctcggggtc gtcggggtgc gcggcgagcg 5160
ccaggccgag gtcggcgccg tccagcatgg caaggttggc gccctcgccg ttgggggcgg 5220
agaggtgggc ggcgtcaccg agcagggtga ccccggggat ccggtcccag cggtgtccgg 5280
gcgtcagggc gaagagcgga cgcaggaccg gcgcggtgtc ggtgtcggtg atcagcgcgg 5340
tgagttccgg cgcccagccg gcgaacgccc gcgcgatcca ctcggtggca gccgcggcgt 5400
cgccgaagtc ggcggcggcg aaccactcct gcggctcggc cagtcccacg taggcgtgca 5460
gggtgtcgtt tttctcccgg tgggcgaaga tctcccggcc gggcgaggga gcgatcagca 5520
ttccgccgcc caccgccttc gaggcggccg ggtgcctggc gtcggcgtcg aacaggtagg 5580
tctcgacgac cgacttcccg atgtactcgg gtgtggcggc ggacaccagc ggcctgaccc 5640
gtgaccaggc cccgtccgct ccgaccagga ggccggtgac gatggtggtg ccgtcagcga 5700
acgtcacttc gtggaggccc ccggcaagag cacggaggcg ggcggccttg tgcccccacc 5760
gcaccgtgcc cgccggcagc gagtcgagca ggagccgccg caggtcgccg cggtggacct 5820
cggggcgtcc gcccgttccg tcgtcgggct ggtcgagcag gacggttccg tcccggtcca 5880
ggagccgcag ggcctggcgg cccggcagaa ccatcgcgcg gaactcgtcc gtcaggccgg 5940
cggcccgcag cgcgagttgc ccgctgtcgt cgtggatgtc cagcagtccg ccctggggcc 6000
gtgccgacgg ggaggggtcc gcctcgtaca cggtgacggg tatcccgtgg acgtgcagga 6060
cgcgggccag ggtgagtccg ccgagtccgg cgccgacgac ggtgactggg gtgggcatgg 6120
tggctccttc cgttgcgtgc cgtccggtgc ggtcccggcg gccgtccacg gaaaggtgtc 6180
agtcgccgcc gacgatccac cgacatcgca ccgacatgcc accgacagct cccgacgacc 6240
ctcgacggtg ttccgacacg tcaccggcgc cgcggaaccg gccgcgacgc gtcgtgccgt 6300
ctcagcccgg gtcgacgcgg gcgaccgccc cggtctccag cgcggtccac agtgcgccgt 6360
ccggccccag gacgatgccg tggggttccg aggacgggct cggcaggccg tactcgtcga 6420
tccggccgtc ggtcgtgatg cggccgacgc ggttggcgcc ccactcggtg aaccagcagt 6480
ccccgtcggc gccggccgtg atggcgtgcg ggcggcacga ggggtcgggc aggccgtact 6540
cgtcgatccg gccgtccgtc gtgatccgcc cgacccggcc ggctccgatc tcgacgaacc 6600
agagggcgcc gtcgccgccg gccgcgatgc cgacaggggc ggcggcgggc gtgggcagcg 6660
cgtggacggt cacgtcaccg tcgcacgtga cggcaccgat cgcgttcgcc tggttcatcg 6720
tgaaccacag ccggtcgtcc gggcccgtgg cgatggccga cggaaaggcc cccgtgacgg 6780
ggagggggaa ctcggtgaca cggccgtcgg tcgtgatgcg gccgacgcgg tcggcgccgg 6840
cctcggtgaa ccacagcgcg tcgtcggggc cggccacgat gccgaacggg ccggagtccg 6900
gagtcggcag cgggaaggag gtgatctccc cggacgtgcc gatgcgtccg atgcggtgcc 6960
cgcggaactc ggtgaaccac agggcgccgt cgggccccgc cgcgatgagc gacggtccgc 7020
cggtgtccgg ttcgagccgg tgcgagatgg tgtcgccgtc cggtgtgatc ctgccgatcc 7080
gtccgtggtg gaccatggtg aaccacagcg cgccgtccgg tccggaagtg attccgtagg 7140
gcccggcccc gggaccggag acggggaact ccgtgatgga gacggccgga cggcagggca 7200
tgggcggttc tccggatggc gggcggaaga ggtgcgacga ccgggtgatg ttatccgggc 7260
ggtggtcccc gagcccctga ttttttcggt ggccccgcgc gggggcgccg gcggtgcccg 7320
ccgaccggtg ctcaccgccg gccggagccg tacggcacct gaccaggtgc cgtacggccg 7380
aacccggtca gcccgcgacg aggacgggcg ccgaccgcgt gaccgccgac ggtgatgcgg 7440
ccgcgccggc gaagttgtcc tcgacctccg ccttctccgc ggcgttcgga tacgggttcg 7500
tgcactcggt gcccgcgctc gccccggaca tcaggctgga gcaggggccg ggcttgcggt 7560
ccggcagccc caggatgtgg ccgagttcgt gggacgagat ccgcaccgtg ttgtggccct 7620
cgttcaccgc ctcacgcccg atccagaccg tgccgttgcc caacgaggtg gtgagggcgc 7680
gcggccagcc gtcgtcggcc aggacgcgga tgttggcctg ctgtccggcc gcggcgggcc 7740
gcagttctgc gccctcgacg ctctcgttcc agatctccgc gccccggtcc accgcggacc 7800
tgaactccgc ggaaccgctc gcgtcgtagg tcaggacccg ggccgcggcc ggggaacccg 7860
cggcgtcgcc cggtgagccg gcggccgcgg cctggccgct cagcaggggc agcgacatca 7920
gcagggtcgc ggcgagggag ccggtcagtg tacggacgtg catgtcgacc tccttgtggg 7980
ggagaggagt cgtgctcatg acatcatcgg ggacatcatg gcatcgcctg tctccctgcc 8040
cgccggcgcc cgccgccaat ccgtcagtcg tgcgcaacgg ccgacggccc gccgggcacg 8100
ccggggaaag tccggaccgg cgtgcccgag tggtgtctcg cgaggccgtt cagccgtcgg 8160
tcggccgtcc cggcccggct gccggcgtca gcaggtgcgg cccgtgtacc acgcgccgtc 8220
gacgccggag gcggaaccga tccaggtcac gccggggccc acgcactgtt cgctgttggg 8280
cccccagtcg tcgatctcga tgacgatgtg cgagccgtcc gaagtgcagt ggttgtagta 8340
cgcgtcggag gcggtctcgt agaagccgca ggggttcgcg gcggccgggc cggcgctcag 8400
tgcgacggcg ccgacggagg cgaggacgag ggcgaaggag gcgagggcgc tggtcagggc 8460
acgacgaaga ggcaagggga ctccctacag tggaggggcc ggagcaggaa cgtccgtgtc 8520
ctgccgaccc gttgtcgatg cgaggcccag gctcgcagct cgggagggcc cagctcgccg 8580
tcggtggaac cgttcacccg gtgaaacgat ttgctgttgc gccgatcagt tgatccccga 8640
cgattcgccg cgtgtcaggg cgtcgcggtc cagcccagcg cgggtccgag ccgtccggag 8700
atgtcggtga ggatctgctc gtagtccgcc tgctcgaagt cgaacggcag ggcgaaggcc 8760
acctcgtcca cttcgcggaa cgccgcgtgg gcgcggaggc gttccgcgat ccactcggag 8820
gggcccacga gatccggggc gaacagcaga cgggccggtc cctgcggttg tgcggtgcgg 8880
ggcagtcgcc gcgcggcgta ctcctcgtac ttcccgcgct gccccgagtc ggccgagtcg 8940
gtggggatca ccacgagccc ctgggacacg cgggccgcct ctccggccgg gtgggcggcc 9000
cggaaggcgc ggatgtggga gagctggatg gcagcgaagt ccccggaaac cgagccctgt 9060
tgaggctcct ccgccttgac cacactgctg gtgaggaggt tcatggcgtt ctccccggcc 9120
cagcgggccg accgcaggct gccgccgccg taccacatcc gttgccgcag gccgggggag 9180
tgcggctgca cacggtccga gtagctctcg atgccctccg tgccgtggaa gccggtgacc 9240
ggctcgccgg cgatgtggtc gaggaggcgc cgcacccgct cgtagccgaa ctcctccgcg 9300
tcggccgtgt ccgggtacag ggcgcctctc acccggtcga agtgcatcgg cggtccggtg 9360
ctcaccccgg ggttgaaccg cccgtgggac aggatgtcga cggtcgccca gtcctcggcg 9420
aggcgcagtg ggttctccca gcccagaggc gtgaccgcgg tcccgagttc gatgcggcgg 9480
gtgcgctggg tggcggccgc gaggagggcc acgggtgagg cgacgccgta ctggaggtgg 9540
cggtggcgca cccacgcgct gtcgtaaccg agctgctcgc ccagctccac catgcgcagc 9600
gtggtctcgt gtcccgggcc cggatcgtcc tcgtcgaaca gcccgatcgt gaggaacccg 9660
agcctcttca gcggcctgcc gtccacgtcc acctgactcc cctcggccgg ggccacgagg 9720
cccggacccc cagggtacgg ggcagcacac cctcctccgc gtccggtctc gtccgcgccc 9780
gcgcgtcagg tgtcaggtgt ccggacgggc ctcggtccac accgtgatgg cccccgtggg 9840
gcagagaccg gcggcgtcac gtaccgcgtc ccacgagtcg gccggcggct cgggacgcag 9900
gacgacggcc ttcccgtcgt cctcgcgctg gtcgaacacc tcaccggccg tcagggcgca 9960
catccccgat ccgatgcaac gcccggtgtc caccccggtc ctgacggctc ggccctcctg 10020
gttcacgcgt cccacgtgac cggaaggctc ttcaccccgt ggatgtcgga cagctccgtg 10080
cgcatgacga tctcctcggc cgggaccgcg agccgcagcg aggggaagcg gtcgaccagc 10140
gcggggaaac ccacgcgcat ctccacccgc gccagttgct ggcccaggca ctggtggatg 10200
ccgtgcccga aggccacgtg cccgccgtcc tgccgccgga agtcgagcac gtgcgggtcg 10260
gtgaaacgct cggggtcccg gttcgcggtg ttgtaggaca ggatgagcga cgagccggcc 10320
ctgacggtgc ggccgccgag gcggacgtcc tccagcgccg tccgcatgaa ggtcttgccg 10380
acgctgagat accgcagcag ctcctccacg gcccggtcgg cgagcccggg gtcggcgcgc 10440
agcgcggcga gctgctcggg gtggcgcagc agcgcgaagg tgccgagcgc cagcatgttc 10500
gccgtggtgt ccaggccggc cgcgagcagc accagggcca tgccctgcag ctcctcgtcc 10560
gtgaggtcgc tgtcggtcag ctcgctgagc acgtcgtcgg tgggctgcgc gcgtttggcg 10620
gccaccagct cgcccaggcg gtcccgggtc gcggtgtagg cggtcgccgc gtcctcgtcc 10680
tgcgcctcgg cgtccatgaa cgactcgaac tgcgcctgga aggagggccg gtcggcggcg 10740
ggaacgccca gcagctcgca gatcaccatg gccgggacgg gcttggcgaa cgcgctcgcg 10800
agatccgcgg gagggcccga ctcctccatc gcgtccaggt gctcggcggt gatctgctcc 10860
acgcgctcgg tgagcagccg catccggcgc acggtgaact tgcccatcag gggcttccgg 10920
tagcggctgt gctcggggtc gtccatgagg aggaactcgc ccggcggcac cggcggcagc 10980
tgcaacccgc cgtagtcgac ggtcggatgg cgcatgaact cccgccgcga actgaaccgc 11040
gggtccgaca gcaccgactt gatcaggtcg tatccggtga ccagccagcc gacgtgtccg 11100
ccggggaagg tgtagctgct gagcggaccg tgccgacggg cttcgagcag ctcctccgga 11160
gggtcgaagg ggcagccggg ccgccgcgcg gtcggcagtg tggagacggt gtgcaacggg 11220
tcacccatga cccttcctca tctcgcgaga gtacgaattc gacaaggccc gaaaggcatg 11280
ccccgcgggg tgacgctcag caatgtgggg aatgtgcggc aacagtgtga ggcggtgccc 11340
gacgtccggc aggtgcgaca ggaagaaagc accgggcgcc tttctacccg gcgggcggcg 11400
cacatgtcca ccccgcccct cgttcttccc cgccgcggcc ccgggaaatc cgccacgact 11460
ccacaccccc tgccgaatgc ctttcgcgtc gaccggcgag tgaaggcgga aagggcaatc 11520
ggtgccgtaa cggcggagct ccccgatgcc cgcagggggc ggagcccggt gaggatggcg 11580
agtgctctgc ggagttcgcg accggccggc ccccgacgag caaccggcag gccccccgac 11640
gagtaggcgg ttcactgcat gcttctgaac agttttgacg agtggtcgcg actgcgtgag 11700
gtcgtcgtcg gatccgcgga gaactacgtc tcgcacgagc gggagctctc gttcgacctg 11760
ttcttccacg acaacctcgc ccaggacaac ccgagccgtt ccgagtggta ctacccacgg 11820
ctgtccgcgc ggagcgagcc ggccgaccgg cggcggctgc cggtggcacg gcgctacgtc 11880
gacgagctga acgaggatct ggaggggctg gccgacaccc tgcgcgacct cggcgtcacc 11940
gtccaccgcc cccgcgcgct ccccgccgag accgccgagg tcaccacccc ggcctggtcc 12000
gcctccgtcg tgccgccgct caacatccgc gacaacacgc tcgtcctcgg cgacgagatc 12060
atcgagacac cgccgatgat ccgctcccgg tacttcgaga cccagctgct gaaaccgctg 12120
ttccaggagt acttccgcag cggctgccgc tggaccgtca tgccccggcc gctgatgacc 12180
gacgcgtcct tcgacctgtc ctacgtacgg accgccaccg ccggcggacc gaccgagccc 12240
gtcgaggagc cccggccgtc gccgtacgac gtcggactgg agatgatgtt cgacgcggcc 12300
cagtgcctcc ggctcggccg cgacatcgtc gcgaacgtct cgaccgagaa ccacgaactc 12360
ggggtcgcct ggctggagcg ccacctcgag ggccgcttcc gcgtccaccg ggtccaccgg 12420
ctgagcgaca gccacatcga cagcatggtg ctcgcgctgc gccccggcct gctgctggtc 12480
cgctcggagg cggtcgtgga ggccctgccg cccgccctgc gccggtggga ccggatcgtc 12540
gcccccaccc ccacggagaa caacttcccg cgctacgacg acgacgcgct catcctgacc 12600
agccccttca tcgacctgaa cgtgctgtcc gtcgacccgg agaccgtcct ggtcaacgag 12660
gcgagcccgg agctggtccg gaccctggag gacgcgaagt tcaccgtcgt gccggtacgg 12720
caccggcacc ggcgcctctt cggcggcggg ttccactgct tcaccctcga caccgtgcgg 12780
gacggcgggc ccgaggacta cctcgaatga gccggccgca gtgcccgacg gcatttccgt 12840
cccgcccggg gacgtgaccg tggagacgta acggtggagt tcgccgatgg tggcgcaccc 12900
gccgggtgaa accgtatgac gcagcgccgc ccgtaccacc tccggcattc gaatccgggc 12960
gaattcggtt accggtattc atgccgttcc tccgctcccg gttcctgcac tccctttcgt 13020
gcgggacccc gggacccgga ggcccgggaa atacagaggg cccggggagt ccgggaggtc 13080
cgggaaatcc atccaggaaa tctagggagt cgcattcatg agcgcagcgg acggccggga 13140
ctcggcgctc gccatcgtcg gtgtctcctg ccgtttcgcc ggggcggaga acccggacga 13200
gctgtggcga ctgctggact cgggcggcag cggcgtcggc gaggtcccgc ccggtcgctg 13260
gacgggagcc gccgcggagc acaccccacg caccggtggc tacctggagc acgtcgaccg 13320
gttcgacgcc tcgttcttcg ggatctcacc gcgcgaggcg ccgttcgtcg acccgcagca 13380
gcggctcgcc ctcgaactgg gctgggaggc gctggaggac gcccggatca caccggaccg 13440
ggtacgcggg acccggctcg gcacgttcgt cggcgtcacc ggcgacgact acgcccaact 13500
cctctctccg cacgcccaga cactcgccac gcagcacgcg ttgaccggcg tgcagcgcgg 13560
cgtcctcgcc aaccggctgg ccgccttcct cggcgcccgc ggaccgagca tcaccgtcga 13620
ctccgcgcag tcctcctccc tggtggcact gcacctcgcg ggcgcgagcc tgcgcgcggg 13680
cgagtccgac gcggccctgg tctgcggggt caacctccac ctgctgccgc agagcgtgct 13740
gctcgccgcc cgcctgggcg cgctgtccac cctcggccgc tgcttcacct tcgacgagcg 13800
cgccgacggc tacgtaccgg gcgagggcgg cggcgccgtc gtcctgaagc gcctcgacac 13860
cgcactcgcc gacggcgacc gcatcctgtg cctggtccgg ggcagcgcga cgaacaacga 13920
ccccgccggc gcgaccctga cggcgccgac cgccgaggcc cagtccgacg tcctcacctc 13980
cgcctaccgc agcgccggca tcgcgcccga ggccgtcggc tacgtcgaac tccacggcac 14040
cggcacgccc accggggacc ccgtcgaggc cgccgcactg ggcgaggcac tcggccgcca 14100
ccgccccgcc ggccggcccc tcgccgtcgg ctcggtgaag accaacatcg gccacctcgg 14160
cggcgccgcc ggaatcgccg gcctcatcaa ggtcgtcctc tccctcaagc accgccggct 14220
gcctcccagc ctcaacttcg agaaccccaa cccgcgcatc cccctggacg aactcaacct 14280
ccgcgtgcag cgggacgcgg agccgtggcc cgaagaggcc gcggagccgg gggacccggc 14340
cggcgaactc gtcgccgggg tcagctcctt cggcatgggc ggcaccaact gccatgtggt 14400
cctgtccgac tggcaccccc gcccgccggc ccccgccgta ccggcggcgg caccgtccga 14460
agtgccgtgg ctgctgtccg cgcgcaccga cgccgccctg cgcgacgccg cctcccggct 14520
ggcgggcagc ggcgcggccg acggcacggt ggcgtcggcc gcggacgtcg catggtccct 14580
cgcctcgtcg cgcaagggct tcgaacggcg cgcggccgtc gtggcggcct cgcacgagga 14640
cctgctcgcc ggagtacgcg gactcgccga cggcaccccc gctcccgacg tcctgctgtc 14700
cggcccggcg gccccgggcg aggccgccgt ggtcttctcg ggcggggcgc cgaagcccgg 14760
tggcgcgggc gcggtcctct ccgtcttccc ggtcttcgcc gaggcgctca cggaagtgtg 14820
cgcggccttc gacgaggtgg ccggcgaggt cgccgacatg ctcggactgc cggcgcgggc 14880
gcgtacccga ctcgggctgg aggacggcac gttcggcgcg gagctgcgcc gggccatgac 14940
cgcgcgggcc gacgacgcgg agaccggcac ccgggagccg gagccgcggg acgacggccg 15000
ggaccaggcc ggcgccttcg cgttcggcgt ggccgcgtgg cggctgctga cgtcgtgggg 15060
actgcggccg acgacggtgg ccggacacgc ggtgggcgag ctgacggccg cccacgcggc 15120
gggcgtgtgg tccctgcggg acgcggcgcg catgacgctg gcacgcggct ggctgagcga 15180
gacctcaccg gccgacgggg cgcgggccca ccgcagggtg ctgtcgacga tcgagtccgc 15240
cgctccccgg ctcaccgtgg cctcgacgat gctgggcggg acggcggagc ccgcactcct 15300
ccaggacccc gcgcactggc tgcggcaggc ggcggagacc ggaccgcccg ccgacggcct 15360
ggcgctggtg cgcgacagcg acctgccggc cttcgtggag gcgggccccg acgcggccct 15420
caccgccctg gccgagcgcg gggacgacac agcagcggcc gccctcgtcc cgctggtcgc 15480
ggagaccgag gaccgcgtgc cggtcaggtc gctggcgagg ctgtgggtgg cgggcgccga 15540
catcgactgg accccgctgc tgggcggcgc cggagtggtc gacctgccga cctacccctt 15600
ccagcgccgc cgccactggc tcgaaacggg acccgcgccg gccgccacgg aagcacccgc 15660
ccccgacggc acggacaccg tcgccgtacc cgccgtaccc gccgtacccg acgtggaccc 15720
cgcgcacccc gggcgcgagg ccgtggccgc gctgagcggg ctcaccggac cgaaacggac 15780
ggcggcgctg cgcgcgttcg tgtgcgagca ggcggccacc gtcatgcggg acacgggacc 15840
ggtcgacccg gcgcgcacgt tcaaggacct cggcttcgac tccgtcatga tcgaggaact 15900
cggcaggacc ctcgcggcgt gcacgggact gcccgtcagg gcgagcaccg tcttcgacca 15960
ccccacgccc cgggcactgg cagcgcacat cggcgccgcg ctcaccgccg ccgaccggga 16020
gaccggcccg cagaacgggg ccccggcgac ccgcaccctc ccgaagcccg ccaccggact 16080
ggccacccgc tcgaagacgc cgcacgggac gaccacggac ccggaccacg accaccccgc 16140
gatgcccgcc gctccgccgg acgacggcac gaccggcccg gcgcacgagc aggacgccag 16200
tccggcgcgt accgacgacg aacccgtggc cgtggtcggc gtggcctgcc gctaccccgg 16260
cggagtcgcc tcggcggacg acctgtggcg tctcgtcgcc gacggcgagg ccgtcccgac 16320
gacctggccc gcggaccgcg gctgggcacc gcggggaacg gacaggcggg aaggcgccgc 16380
cggtggcgga ttcctcgacg gggcggcgga cttcgacgcg gagttcttcg ggatctcgcc 16440
gcgtgaggcg ctggcgatgg acccgcagca gcgactgctc ctcgaaacct cctgggaggc 16500
cctcgaacag gccggactgg accccgacgg tctgcgcagc tcggccacgg gcgtctacgt 16560
cggcgccacc acccacgact acggcccccg cgccgaccag gcccccgacc acctcgccgg 16620
ccagatcctc accggcagca cccccagcgt gatctcgggc cgggtggcct acacgttcgg 16680
tttcgagggt ccggcggtga cggtggacac ggcgtgctcg tcgtcgctgg tggcgatcca 16740
cctggcgggc agggccctgc ggtcgggcga gtgcgatctc gcgctggccg gcggggtggc 16800
cgtcatggcg acccccggca tgttccgcga gttcgaacgg caagggggcc tggcgcccga 16860
cggccggtgc aagcccttct cggcggacgc cgacggcacg tcgtggtccg agggcgtggg 16920
cgtcctggtc ctggagcggc tgtcggacgc ccggcgcaac ggccaccggg tgctcgcggt 16980
cgtgcagggc agcgccgtca accaggacgg tgcgtcgaac ggcctgtccg cacccagcgg 17040
ttccgcgcag caacgcgtca tccgcgccgc gttggcggac gccgggctcg gcacctcgga 17100
cgtggacgtg gtggaggcgc acggtaccgg gacgaggctc ggtgatccga tcgaggcgga 17160
ggcgttgctg gcgacgtatg ggcaggggcg ggatgccgag cggccgttgt ggctggggtc 17220
ggtgaagtcg aatgtggggc acacgcaggc ggcggcgggt gtggcgggtg tgatcaagat 17280
ggtggaggcg ttgcgtcggg ggttgttgcc ggcctcgctg cacgcggggc ggccgtcgtc 17340
gcatgtggac tggtcgtcgg gtggggtgcg gttgctggac cgggcgtgtg agtggccgga 17400
ggtggggagg ctgcgtcggg cgggtgtgtc gtcgttcggg atcagcggca ccaacgccca 17460
tgtcgtcctc gaacaggccc ccgccgcgat cgagccggtg agccgtcgtg acgtgccctc 17520
cgtggtgccg tgggtgctct cggcccacgg cgccgaagcg ctccggggcc aggccgagcg 17580
gctggccgcg ttcgtggacg cccggccgga cgtgtccgcg gccgacgtgg gtctctccct 17640
ggcggtgggt cgtgcggtgc gtgggcatcg tgcggtggtg gcgggtgcgt cgcgggagga 17700
gttgttgggt ggggtgcggg cgttggcccg gggtgagggt ggttcgggtg tggtgggggt 17760
gggggcggat gctgcgcggg cggtgttcgt gtttccgggt caggggtcgc agtgggtggg 17820
tatggcgttg gggttgttgg gtgatgtgcc ggtgtttgct gagcggttgg gggagtgtgc 17880
ggcggcgttg gagccgtttg tggatgttcc gttgttggag gcgttgggtg atggggtggc 17940
gttggggcgg gtggaggtgg tgcagcctgc gttgtgggcg gtgatggtgt cgttggctcg 18000
ggtgtgggag tggttcgggg tgcggccggc tgcggtggtg ggtcattcgc agggtgagat 18060
tgcggctgcg gtggtggcgg gcgcgttgag tctggaggac ggtgcgcggg tggtggcgtt 18120
gcgcagtcgg gcgatcgccg cggaactcgc cggccacggc ggcatggtcg ccgtgcagcg 18180
gcccctcgcc gaggtggagg ggatactcgc cggctacggg gaggaggtca cggtcgccgc 18240
ggtgaacggg cccggatcca ccgtggtctc cggcggcacg gcggccctcg acgccctgat 18300
ggccgactgc gagacccgcg gtgtccgggc ccgccgcatc cccgtcgact acgcctccca 18360
ctccgcacag gtggacgcgc tcaccgaccg gatcctcgcc gacctggccc ccgttcgcgc 18420
gggccgcgcc cgggtgccgt tcttctcgac ggtcaccggc gactggctcg gcgacgacgt 18480
gccggacgcc gcctactggg tgcgcaacct ccgccaccgg gtccgcttcg aggaagcggt 18540
acgggaactc gccgccgacg gcttcgacgc cttcgtggag tgcagcgccc acccggtact 18600
cgccgggagc gtgacgcaga cgctggagga cgcgggccgg gacgcggtcg tgaccggctc 18660
gctggtcctc ggcgacggcg gcctgcgacg cctgctgacc tctctgagcg ccgtcttcac 18720
gcacggcatc cccgtggact ggacccggat ccacaccggt accggagccc gccacgtccc 18780
gctgcccacg tacgccttcc agcacgaacg ctactggctc gacaccggca ccggcaccgg 18840
cgccccggac gtcgcgtccg ccggactcac cccggcccgc cacccgctgc tcggcgcggc 18900
cctgcgtacc gccaccgacg agagcctcgt cctgaccgga cgactcaccc cgcaccgcca 18960
ccgctggctc cacgaccacg ccgtcggcac cctcccgctc ctgccgggaa cggccctcct 19020
cgaactggcg gtgcacgcgg gcgaacggta cggcaccccc cacatcggtg aactcaccct 19080
gcacgccccg ctgccgctgc ccaccggaag cgacaccacg gacctccagg tcaccgtcac 19140
ccccgacggc cccgacggcg cgaccgcgac cgtgcacagc cgccccggaa ccgacgccgg 19200
cccggacacc cgggactccg ccgccccctg ggtccaccac gcgacggcgg cgctccgcgc 19260
ggacgccccc gcaccggacc ccgccgaacc ccagtgggcc gccacctggc cgccctccgg 19320
caccaccgag gccgacctca ccggcctcta cgacgaactg gccgacgacg gctacgtcta 19380
cggccccgcc ttccagcgac tcgcccgcct ctggcacgcc cccgacggca ccgtctacgc 19440
ggaggcgcga ctgcccgagc acggcgagcc ggtgtccccg gacgaggagg gcttcaccct 19500
ccatccggca ctcctcgacg ccgtcctgca cgccgtggtc accaccaccc gctccgagga 19560
cggtgtgcgc ctgccgtacg ccttcgacga cgtcgccgtg cacgcacccg gagcccgcgt 19620
gctgcgcgcc cggatcaccc gctccggcga ctccgccgtc gccctcgacc tcgccgaacc 19680
gtcggggcgg cgggtcgcga gcatcggctc cctcaccctg cggcccgccg acaccgcgcg 19740
gctcaccgcg tcgcacggcg cggcggcccg ctccctgttc gccgtggaat gggaaccgct 19800
gacaccgccc cgcgaggaac gccccaccgg cctgtgggcc gtactgggcg acggcgacgg 19860
cgcccccgta ctcgaagcgc tccgcggtgc cggcgccgca ccggacgcct accgcgacct 19920
cgacgggctg ctcgccgccc tcgacgccgg cgccacggcg cccgacctcc tcgtgtggac 19980
cgtcggcgac cggcacgacg acaccgtgac cgcggcgcac gaccacacgg ccacggccct 20040
ggcgaccgcc cgcgccctgc tcctcgacga acggctggcc ggcacccggc tgctcgccgt 20100
caccgaggga gcggccggcc cgaaccccgc gaccggcgtc gccgccgcca ccgtctgggg 20160
cttcctgcgc accgcgcaca ccgagacacc cggacggttc ctcctcgccg acaccgaccg 20220
ggaccccgcg tcgctgcgcc tcctgcccgc cgtcgccgcg ggcgacgaac cccaggtcgc 20280
cctgcgcgcc ggccgggcgc acgccccccg cctcacgcgc tccaccgacc gggccaacga 20340
caccaccgcc cccttcggcc ccgacagcac ggtcctgctc accggcgcca ccggacacat 20400
cggccggctg atcgcccggc gcctggtgcg tgagcacgga gtacgccgac tcgtcctcgt 20460
cagccggcgg ggaggcgagg cgacccgcga cctcaccgcc gaactcgccg gggccggctg 20520
cgaggtgacc acgctcggct gcgacccggc ggaccacggc gccctgcgga ccgcgctcgc 20580
gggcgtccgc gccgagcaca cccccaccgc ggtggtgcac gcggcgggcg tcctcgacga 20640
cggagtcgtc acctccctga cgcccgacca gctcacgacc gtgctgcgcc ccaaggtcga 20700
cgccgcctgg aacctgcacg aactcacccg cgacgagccg ctgaccgcgt tcgtcctcat 20760
gtcctcggtc tccggcgtcc tcggcggcgc ggggcaggcc aactacgccg ccgccaacgc 20820
cttcctggac gcactcgccg cccaccgcag cgacctcggc ctgccgggac agagccacgc 20880
ctggggcctg tgggaccagg acgacgtcag cggcggcatg gcctccggtc tggacaccac 20940
cgatcgcgcc aggctggccc ggctgggcgt ggcgcccctg cccgaggacc aggccctcgc 21000
gctgttcgac cgggcggtca cggaccccgc accgctcgcc gtgcccacca ggctggacct 21060
ccggcaggta cgcgaacagg cggagagcga agggatcccg ccactgctgc gcggactcgt 21120
ccgcccgcca cggcccgcgg gcagcgacgg aaccttcacc gagcgtctga cggccctgac 21180
accggacgag cggatcgacc tggccctcgg gctcgtacgc gacctggccg ccgccgtact 21240
cggccatgcc tcggccgacc gggttcccgc cacgcgtgcc ttccgcgact ccggcttcga 21300
ctcgctcggc gcactcgaac tgcgcaaccg gctgaacaac gccaccggac tgcgcctccc 21360
cgccggactg gtcttcgacc accccacccc cacggagctg gccgcccacc tggtggacca 21420
gctgcccggc gcggcgccgc aggaggaacc ggccgcgccc gcggccccca ccgacgaacc 21480
cctcgcgatc gtcggcatgg cctgccgcta tcccggcggc gtcaccagcc ccggggaact 21540
ctgggagctg gccgccaccg gcgccgacgg catcggccgc ttcccggccg accgcggctg 21600
ggatctcgac gggctctacc accccgaccc ggaccacacc ggcacctcgt acacccgcga 21660
agggggcttc ctctacgacg cgggcgactt cgacgcgggc ttcttcggga tctcgccgcg 21720
tgaggcgctg gcgatggacc cgcagcagcg gctgctcctc gaaacctcct gggaggccct 21780
cgaacaggcg ggactcgacg ccgacaggct gcacggcagc cgcaccggag tgttcgcggg 21840
gcaggtctac cacgactacg caccggcccc ggagcggacc cccggacacg tagagggcct 21900
gctcatgacc ggcggcgcgg gcagcgtcct gtccggccgg gtggcctaca cgttcggttt 21960
cgaggggccg gcggtgacgg tggacacggc gtgctcgtcg tcgctggtgg cgatccacct 22020
ggcgggcagg gccctgcggt cgggcgagtg cgacctcgcg ctggccggcg gcgtgaccgt 22080
catggcgacc cccggcccct tcgtccagtt cgcccggcag cggggtcttg cgcccgacgg 22140
ccggtgcaag cccttctcgg cggacgccga cggcataggg atggccgagg gcgcgggcgt 22200
cctggtcctg gagcggctgt cggacgcccg gcgcaacggc caccgggtgc tcgcggtcgt 22260
gcggggcagt gcgatcaacc aggacggtgc gtcgaacggc ctcacggcac cgaacggccc 22320
cgcgcagcag cgggtgatcc gcgcggcgct ggccgacgcc gggctcgcca cctcggacgt 22380
ggacgcggtg gaggcgcacg gcaccggcac cgtcctcggc gacccgatcg aggcggaggc 22440
gttgctggcg acgtatgggc aggggcggga tgccgagcgg ccgttgtggc tggggtcggt 22500
gaagtcgaat gtggggcaca cgcaggcggc ggcgggtgtg gcgggtgtga tcaagatggt 22560
ggaggcgttg cgtcgggggt tgttgccggc ctcgctgcat gccgggcggc cgtcgtcgca 22620
tgtggactgg tcgtcgggtg gggtgcggtt gctggaccgg gcgcgtgagt ggccggaggt 22680
ggggaggctg cgtcgggcgg gtgtgtcgtc gttcgggatc agcggcacca acgcccatgt 22740
cgtcctcgaa caggcccccg ccgagaccgg gcccggagca gagcgacgcg ccgaactccc 22800
ggtcgtgccc tgggtgatct ccggtcacca ccaggaggcc ctgcgggcgc aggccggacg 22860
gctggcggcc ttcgtcgagg cacggccgga cacctccgcc acggatgtcg gcgccgcact 22920
cgcggtgggt cgtgcggtgc gtgggcatcg tgcggtggtg gcgggtgcgt cgcgggagga 22980
gttgttgggt ggggtgcggg cgttggcccg gggcgagggt ggttctggtg tggtgggggt 23040
gggggcggat gctgcgcggg cggtgttcgt gtttccgggt caggggtcgc agtgggtggg 23100
tatggcgttg gggttgttgg gtgatgtgcc ggtgtttgcc gagcggttgg gggagtgtgc 23160
ggcggcgttg gagccgtttg tggatgttcc gttgttggag gcgttgggtg atggggtggc 23220
gttgggtcgg gtggaggtgg tgcagcctgc gttgtgggcg gtgatggtgt cgttggctcg 23280
ggtgtgggag tggttcgggg tgcggccggc tgcggtggtg ggtcattcgc agggtgagat 23340
tgcggctgcg gtggtggcgg gtgcgttgag tctggaggac ggtgcgcggg tggtggcgtt 23400
gcgcagtcgg gcgatcgccg cggaactcgc cggccacggc ggcatggcat cggtggcggc 23460
ctccgagaag gacgtgcgcc gacttctgga cggcatcaag gaccccgtga ccgtggccgc 23520
ggccaacggg cccgccacga ccgtcgtctc gggcaccccc gaagggctcg acgcgctccg 23580
ggcccggtgc gaacgggacg gagtgcgcta ccgccgcatc ccggtcgact acgcctccca 23640
ctccgggcag gtggacgcgc tcaccgaccg gatcctcgcg gacctggccc ccgttcgcgc 23700
ggcccgcgcc cgggtgccgt tcttctcgac ggtcaccggc gactggctcg gcgacgaggt 23760
gccggacgcc gcctactggg tccgcaacct ccgccggccg gtgcggttcg aggaagccgt 23820
acgcgccctc gccgcgacgg acgccggagc gttcgtggag tgcagcgcgc acccggtgct 23880
gaccgcggcc gtgcacgaga cactggaggc ggccggtcac gaggccgcgg tgaccgggac 23940
cctgcgccgc gacgacggag gggcccggcg cctgttcgcc tcgctcggcg aggccttcgc 24000
gcacggcgtg cccgtggact gggcgcgggc gttcgccgcc gccggcaccg gacacgtcga 24060
ccttcccacc tacgccttcc agcgcgaacg ctactggtgg gaccccgaca cgctgcgcgg 24120
gcccgccgcc gcgcaggaca cccgccccgg cgacgacacc ggcttctggg aagcggtgca 24180
gagcgacgac gccggaaccc tcgccgacct gctcgacgtg gacggcgaag ccctggacgg 24240
cgtactgccc gccctgcgga cctggcgccg ccaccgtacg gccgaggccg cggtcgactc 24300
ctggcggtac cacgtgcgct ggtcccctgc ggccctgccc ggcgaccccg tgctgaccgg 24360
cacgtggctg ctggcggtcc cggcggactc cgccgcggcg gccgactgcg ccgacgcggt 24420
cgccgccgcc gtacgcgacc acggcggtga cgtcaccacg ctcaccctcg ccgcggacgc 24480
cacccgggac gacgtcgtcc gcctgctgcc cgacgggtcc ttcgcggggg tgctgtccct 24540
gctgaccgtc accgacggaa ccgctcgggg acgcgtcgaa cgcaccggcc tcaccaccac 24600
cgtcgccctg ttccaggcgc tcggcgaggc cggggcccgc ggccccctgt ggtgcctgac 24660
ccacgacgcg gtcaccgcga ccgccgagga cgcgcgcacc gcccgggacg ccgccgcggc 24720
ccagcacatg gtgtggggcc tcggccggat cgcggccctc gaacaccccg agcggttcgg 24780
cggcctcgtc gacctgcccg cccgccccga cgggcgcacg ggccgcctcc tcgcggcggt 24840
cctggccggc gacagcggcg aggaccaggt ggccctgcgg ccgtccggcg cgctcgtccg 24900
gcgcctgtcc cgcaccggtg ccaccgggac gcggccggcg tggcgcccgc acggcaccgt 24960
cctggtgacc ggcggcaccg gaggcctcgg cgcccgcgtg gcccgccacc tcgcccggca 25020
cggcgccgac cacctcctgc tggcgagccg acgcggcccg gacgcgccgg gcgccgccga 25080
actgcgcgcc gaactggagg agaccggcgt ccgcgtcacc ctcaccgcct gcgacgtcgg 25140
cgaccgggag gccgtcgccg agctgctcgc gaccgtgccc gccgaccacc cgctgacggc 25200
ggtcgtgcac accgccgccg tcctggacga ctccgtcgtc gaacgcctca cccccgaccg 25260
gatcgaccag gtcctgcggg tcaaggccga cggcgcccgg cacctgcacg atctgaccct 25320
tgacaccggc ctggacgcct tcgtgctctt ctcctccctg gccggcaccc tgggcgcctc 25380
cggacagggc aactacgccc ccggcaacgc ctacctggac gccctcgccg agcagcggca 25440
cgccctggga ctgcccgcca cctccatcgc ctggagcatc tgggacgagc gcggcatggc 25500
caccgagggc gacatcgagg cgaccgccgg ccgccacggc ctgcccgtga tggaccccgg 25560
cctggccgcc gcggccctcg tcgcggtggc cggcgacacc gaaccgaccg tcgtggtcgc 25620
ggacgtggag tgggacaggt tccacgtggc cttcaccgcc acccgcccca gccccttcct 25680
cgccgacctg cccgaggtcc gccggctcac cgccgcggcc accgggccgg cccccgacac 25740
cgccgccggc gccggcaccc tcgccgggcg catcgccgca ctgggcggcc gggccgaaca 25800
gcaggccgcc ctgctcaccc tcgtccgcga acaggccgcc gaggtcctcg gccactccgg 25860
acccgacgcc gtcgacccca cgacggccta ccgcgacctc ggcttcgact ccgtcaccgc 25920
cgtcgaactg cgcaaccggc tgaacaaggc gaccggactg cggctggcct ccaccatcgt 25980
cttcgaccac cccaccgccc gcgatctcgc cgcccacctg cgggacgaac tcgtcggcgg 26040
cctcggcgcg gacccggccc cggcgcccgc gcccggcccc gctccggccc cggcggacgg 26100
ggacgacctg atcgccgtgg tcggcatggg ctgccgcttc cccggagaca tccgctcccc 26160
gcagcagctg tggcacctgc tccgcgacgg ggtcgacgcc atcaccccgt tccccgacga 26220
ccgtggctgg gacctcgacg ccctccgggg gaccgacccg ggtggacgcg ccggcacgtc 26280
gactgcccac gagggcggat tcctccacga cgcgggcgac ttcgacgcgg agttcttcgg 26340
gatctcgccg cgtgaggcgc tggcgatgga cccgcagcag cggctgctcc tcgaaacctc 26400
ctgggaagcc ctcgaacagg ccggcatcga cccgaccagc ctgcacggca cccgcacagc 26460
cgtgttcacc ggcaccaacg gcggcgacta cctcacggtc agtcccgacg tgcccgagga 26520
gaccgccgga tacgtcgcca cgggcaacat cggcagcgtc ctctccggcc gggtcgccta 26580
caccctcgga ctggagggcc cggccctcac cgtcgacacc gcctgctcgt cgtccctcgt 26640
cgccctgcac ctggccgtgc gctcgctccg ccagggcgag tgcgacctgg ccctcaccag 26700
cggtgtcacc gtcatgtcca ccccgggcat cttcaccgag ttcacccgcc agggcggtct 26760
ggccgccgac ggccgcagca aggcgttcgc agccggtgcg gacggcgccg ggttcgccga 26820
gggggtcggc gtcctcgtcg tcgaacggct ctcggacgcc cggcgcaacg gccaccaggt 26880
gctcgcggtc gtgcggggca gcgcggtcaa ccaggacggc gcgtcgaacg gcctgtccgc 26940
acccagcggt ccggcgcagc aacgcgtcat ccgggcggcg ttggcggacg ccgggctgga 27000
ggggtcggac gtggacgtgg tggaggcgca cggtacgggt acgaagctgg gtgatccgat 27060
cgaggccggg gcgctgctgg cgacgtacgg gcaggggcgt gatcccgaac ggcctctgtg 27120
gctggggtcg gtgaagtcca acatcgggca cacgcaggcc gccgccggcg tcgcgggcgt 27180
catcaagacc gtcctcgccc tgaggcacgc agccctgccc cggaccctgc acgccgacga 27240
gccctccgca cacgtcgact ggtccaccgg caccgtggca ctcctcacgg ggccccgcga 27300
ctggccggag acgggacggc cgcgccgcgc cggtgtctcg tccttcggcg tcagcggcac 27360
caacgcccac gtcatcctgg agcagggacc ggacccggag gcccgcgacg acgaccaccc 27420
caccgacggc accgtcgaac cctggacact gacggcgcgg tccgacgcgg ccctgcggga 27480
acaggcccgg ctcctgctgc cgttggcgga aggcgccgca cgggacaccc gggccccccg 27540
gggcgacgac atcggccatg ccctcgcgac cacacgcgcc gtactcgacc accgggcggt 27600
cgtcctcggc gcgaccggcg ccgacccgac cggcgccctg accgccctgg ccgagggccg 27660
gccgacaccc gccgtcgtgc acggcacggc cacctccgcc gacgaccgcg tcgtcttcgt 27720
cttcccgggt caggggtcgc agtgggtggg tatggcgttg gggttgttgg gtgatgtgcc 27780
ggtgtttgct gagcggttgg gggagtgtgc ggcggcgttg gagccgtttg tggatgttcc 27840
gttgttggag gcgttgggtg atggggtggc gttggggcgg gtggaggtgg tgcagcctgc 27900
gttgtgggcg gtgatggtgt cgttggctcg ggtgtgggag tggttcgggg tgcggccggc 27960
tgcggtggtg ggtcattcgc agggtgagat tgcggctgcg gtggtggcgg gtgcgttgag 28020
tctggaggac ggtgcgcggg tggtggcgtt gcgcagtcgg gcgatcgccg cggaactcgc 28080
cggccacggc ggcatggtcg ccgtggaccg gcccctcgcc gaggtggaac ggctcctcgc 28140
cggctacgcc gggtccgagc acgacggaca gctcacggtc gccgccgtga acagccccgc 28200
caccacggtg gtctccggcg gcacggaggc cctcgacgcc ctgatggccg actgcgaggc 28260
ccgcggtgtc cgggcccgcc gcatccccgt cgactacgcc tcccactgcg cccaggtcga 28320
gaacatccgg acccaggtcg agaaggcggc agccgacgtg gtgccgcggc ccgcgcggat 28380
accgttcttc tccacggtga ccgggggcga cctcgcccac accgaattgg acggcgccta 28440
ctggtaccgc aacctgcggt ccaccgtccg cttcgaggac accgtccgcg ccctgctcga 28500
cgccgggttc cgcaggttcg tcgaggcgag cgcgcacccg gtgctgacca ccgggatcca 28560
gatcaccgcc gaggaccacg gcacggacgt gtccgtcacg ggcaccctgc gccgcgacga 28620
cggcggccgg ccgcgcctgc tgcgctcgct cgccgaggca ttcgtcacgg gcgtacccgt 28680
gcgatgggcc cgctcctacg acggccgcgc gacccggcgg gtcgagctgc ccacgtacgc 28740
cttccagcac cgccgcttct gggtggcgga cggcggcgcc gcccgtcgcg ccacgcacgc 28800
gcaccaggac ggcgcggagg ccaccgggca cgccctgctc ggcagcgcgg tgccgctgcc 28860
cgggaccggc ggagtcctgc tcaccgggcg gctctcgccg cgggaacagc cctggctgcg 28920
cgaccactcc gtacacgggc gcgtactggt gccgggtacg gcactgctgg acatggtcct 28980
gcgtgccggg gacgcggtcg gctgcgaccg ggtggaggaa ctgaccctgg agaccccgct 29040
gctcctggac gcgtccaggc cgacccaggt acaggtgctg gtggccgggg ccgcggcgga 29100
cggcagccgc gcggtggacg tccacgcccg gctccaggac gccgcgcccc aggaggcgga 29160
ctgggtacgg cacgcacggg cgacgctcgt ggacggcacg gggcgccggg aacccgtggg 29220
cgccgaggag caccgggagc ccgtgacctc cgagagctgg cccccggcgg acgcgcagcc 29280
cgtggacgtc acgggactct acgagcggct gcacgagaag ggcctcacct acggagcggc 29340
gttccgagga ctcacgcggg tctggcgcgg gacggcgggc gagctgttcg ccgaagccga 29400
actgcccggg gcggacgtgg cgggcttcgg catccacccg gccctcctcg acgccgccct 29460
gcacgcctgg ccggcctgcg cggaggacga gcacatcggc cggctgccct tcctctggac 29520
cggcgccacc ctccacgcca ccggagccga acggctgcgg gccacgctcg ccccgacggc 29580
cgagggcgcc ttctcggtac gggtcacgga cagcgcgggg ctgccggtcc tgtccgccga 29640
cggactactg acgcgtccgc tcgacgagac gcgcctgccc gccccgcccg aggacggcgt 29700
cgccgccgcc caccgggtcg cctggacccg cgtaccggac tcgtcccggg acaacgaacc 29760
tccgcgcgtc gcggtgctcg gggagacggc ccccgggctc cccgcgaccg acccggcctt 29820
cgcgggatgc gccgacctgg gagcactggc ggaacgcctg gcggacggcg gaacggcggc 29880
acccgggcac gtcctggtgg acctgcggac cggcgtgtcc caggacaccg gcggcgacat 29940
ggccgcggac gccgagcgca ccgccctgca cgcgctggac ctcgtgcagc agtggctgtc 30000
cggcgagcac ttcgcgcagt cccggctggt cctcgtcacc ggcggagccg tccacgtcca 30060
cgacgcggaa cgcatggacc acctcgcggc cgcacccgtg tggggcctgg tgcgttcggc 30120
acagaccgag caccccgggc gcttcgtcct cctcgacgtc ctcggccaca cccccgcggc 30180
ccccgagacg gtgttgcgtg ccctctcctc gagtgagccc caactcgccg tccgcggcga 30240
cgagatcctg gccccgcgct tggtgcgcgg cgacgcgccg acgacggcgc cggtggagga 30300
acgggccgaa acggtcccgg cgcacgacga ggagccggcc ggggcacagc agctcaccca 30360
cgccggaaac ggcaccctcg aagggatcgt ctggggcccg gcgcccgagg accggggcga 30420
ccgcgccccg gacgagcacg aggtgcgcgt cgacgtccgc gccgtcggcc tcaacttccg 30480
cgacgtgctg attccgctgg gcatgtaccc ggacgcggag agcgcgcgca tgggcagcga 30540
gggggccggc gtggtcaccg ccgtcgggtc cggcgtgacg ggtgtcgcgg tgggcgaccg 30600
ggtcatgggc gtctggcagg acgcgttccg gtcctccgtc gtggtggatg agcgggtggt 30660
ggtgggggtg ccggaggggt ggtcgtttgt tgaggcggcg tcggtgccgg tggcttttgt 30720
gacggcgttc tatgcgttgg tggatgtggc gggtgtgcgg tcgggtgagt cggtgttggt 30780
gcatgcggct gcgggtggtg tggggatggc tgcggtgcag ttggcccggt ggttgggtgc 30840
ggaggtgtgg gcgacggcga gtgagtcgaa gtggtcggtg gtgcgggggt tgggtgtggc 30900
gggggagcgg attgcttcgt cgcggtcggt ggggttcgcg gaggtgttcg ggcggggtgt 30960
gggttcgggt gtggatgtgg tggtggattc gttggcgggg gagttggtgg acgcttcgtt 31020
ggggttggtg cgtccgggtg gccggttcgt ggagttgggg aaggcggacg tacgggatcc 31080
gggtgaggtg gccgcggcct acgagggcgt gatgtaccgg gcgttcgacc tggcggaggt 31140
ggcgccggag cggctggggg agatgctccg cgaggtggtg gagctgttcg ggaccggcgc 31200
gctggagttg ctgccgaggc aggagtggga tgtccggcgg gccggcgagg cgttcgcgct 31260
gatgagccgg gcgaagcacg tggggaagct ggtgttgagc gttccgtcgg ctcccgcggc 31320
tcccgcgact cccgtggctc ccgcgacttc cggggctcct gtggcttccg gggctgcttc 31380
tgcgggcgtg gtgtcgtcgg tggggggcgg gggttgggtg ttggtgtcgg gtggttcggg 31440
tgtgttgggt ggggtggtgg cgcggtattt ggtgggggtg cggggtgtgc gtcggttggt 31500
gttgttgagt cgtggtggtg atgtgggtgg tttggtgggg gagttgtcgg gttggggtgc 31560
tgaggtgcgg gtggcggtgt gtgatgtggc ggatcgggtg gcgttggagg gtgtggtggg 31620
tggtttgccg ggtggggtgt cgggggtggt gcatgcggcg ggtgtgttgg acgacgtggt 31680
ggtggagggg ttgtcggggg agcggttgcg gggtgtgctg gcggcgaagg tggtgggtgg 31740
gtggaatctg catgaggtga tggcgggttc gggggggttg tttgtgttgt tctcgtcggc 31800
ggccggggtg ttgggggctg cggggcaggc gaattatgcg gcggggaacg cgtttttgga 31860
cgggttggcg gcgtttcggc gggcgcgtgg gttgtcgggt gtgtcggtgg cgtgggggtt 31920
gtgggaggag cggagtgtga tgacgggggg tctggagcgg tcggatctgg cgcggatgcg 31980
tcgtatgggt gtgctgccga tgtcgacgga ggacggactg cgactcctcg acaccgccga 32040
acggtcggcg gacagcctgg tcgtggccgc gcgtttcgat ccccgggccc tggccgcggg 32100
cggggcccac ggcgccgccc agcccatgct gcgcgaccac aagccccacg accaccaggc 32160
cacctccgtg cctctccggc gccgcaccgt cgcctccgcc ggggacgacg ggcagccgga 32220
cggcccctcc ctgccggcgc gactcgaggg actcggcgac gacgaacggc ggcaactggt 32280
gctgcgcacc gttcgggaac acacggcgac cgtgctgggg tacgactcgg ccaccgcgat 32340
ccccgccgaa cgggggttcc tggacctcgg catcgactcg ctcaccgcgg tcgaactgcg 32400
caaccggctc aagaccgaca ccggcctgcc cctgcccgcc accctggtct tcgaccatcc 32460
cgacgccacc cgcctcgccc ggcacctcgc ggaagcgctg gcggcgaacg acgccgcagg 32520
cgcacccggc gatgccgacg ccgaaccgcg acggggggct cacggtgccg ccgcaccggc 32580
ggccgtcccc ggggccgacg cgtccgacgt gtccgggcac ctgcagtcgg cggacgccga 32640
cgaactcttc gacttcatcg accgggaatt cggttccgac tgaccgccac gacacactcc 32700
ccggcgccct gcggccaggt gcgcgccgtc cgacctctga caccgcggca agaccatgtg 32760
aggccctgat gccggaagat gacaagctcc tcggctacct gcgccgggtg accgccgacc 32820
tgcacgacac ccggggacgg ctgcgcgaga tcgaggccgc ggcccacgaa ccgatcgcgg 32880
tcgtcggcat ggcctgccgc ttccccggcg gcgtcgccac ccccgaggac ctctggcacc 32940
tcgtccgcga ggggagcgac gccatcaccc cgttccccga cgaccggggc tgggacctcg 33000
acgcccgcta cgaccccgac ccggacgcac ccggacgcac ctacgtccgc gaaggcggct 33060
tcctgcacga cgcgggcgac ttcgacgccg acttcttcgg catctccccg cgcgaggccg 33120
acgcgatgga cccccagcag cgccttctcc tcgaagcgtc ctgggaggcc gtggaacggg 33180
caggcatcga ccccgcctcc ctcaagggcc gtgccgccgg agtgttcgtc ggcgccgtcg 33240
ccctcgacta cgggccgccc ctggacgccg ccgacggcat cgagggacac ctgatgacgg 33300
gcaccaccac cagcgtcgtc tccggccgca tcgcgtacac gctcgggctg cagggccccg 33360
ccgtcacggt ggacaccgcc tgctcgtcgt ccctcgtcgc cctgcacctg gccgtgcgct 33420
cgctccgcca gggcgagtgc ggcctcgccc tcgccggcgg tgtcaccgtc atgcccacgc 33480
tcggcacctt catgggattc agccggcagc ggggcctggc ccccgacggc cggtgcaagc 33540
cgttctccgc cgccgccgac ggcttcggcc cggcggaggg cgccggcgtg ctctgcctcg 33600
aacggctctc cgacgcccgc cgcaacggcc accgcgtcct cgccgtcgtc cgcggcacgg 33660
cggtcaacca ggacggcgcc agcagcggac tctccgctcc gaacggcccc gcgcagcaac 33720
aggtcatccg ggcggcgttg gcggacgccg ggctggaggg gtcggacgtg gacgtggtgg 33780
aggcgcacgg tacgggtacg aagctgggtg atccgatcga ggccggggcg ctgctggcca 33840
cgtacgggca ggggcgtgat cccgaacggc ctctgtggct ggggtcggtg aagtccaaca 33900
tcggccacac ccaggccgcc gccggagccg cgggcatcat caagaccgta ctcggcctgc 33960
ggcaccagga gctgccgcgc accctgcacg ccgacgagcc gtccccgcac gtcgactggt 34020
ccgccggtac cctgcgcctg ctcacccggg ccgtcccctg gccccgggcc gagcggccgc 34080
gccgcgccgg tgtctcgtcg ttcggcgtca gcggcaccaa cgcccacgtc atcctcgaag 34140
aggcaccggc cgccgaagag ccccggacgg ctgaggcgcc ggccgccgaa gagacccgta 34200
ccgcccggac gctcccgctg gtgccgtggg tcctgtcggc caagtccgcc gacgccctgc 34260
gcgaccagtg cgcacggctc gccgcccaca ccgaggcgca ccccgaccgg acgcccgccg 34320
acatcggcct cacactcgcc accgcgcgca ccgccttcga ccaccgggcc gtactcctca 34380
cccgggaccg ggccgagggc gcggacctgc tgcggcagta cgcgtccggc gcggagcccg 34440
tcgcactcgt ctccggcacg gtccgcgact cgatcggccc cgtcttcgtc ttcccgggcc 34500
aggggtcgca gtggaccggt atggcggtgg aactgctcga cgcctccccg gtcttcgcgc 34560
gccgcatgga cgagtgcgcg gcggcgctcg ccccccatct ggacgtcccc ctgctggaag 34620
cgctgcggga cgaggcggcg ctggaacggg tggaggtcgt ccagcccgcg ctgtgggcgg 34680
tcatggtgtc gctggccgag gtgtggcagt cctacggcgt ccgaccggcc gcgatcgtgg 34740
gccactcgca gggcgagatc gccgccgcgg tggtcgcggg cgcgctgacc ctcgaggacg 34800
gggcgcgggt ggtggcgctg cgcagccggg cgctgacggc agtcgccggg cgcggcggca 34860
tggcctccgt cacggcaccc gcggacgacg tgcgccgcgt cgtcgagtcc caccgcggcg 34920
ccctgtccgt cgccgcggtc aacggcccct cgcacgtcgt ggtctccggc gacgccgccg 34980
ccctggacgc gctgctggcc gcctacgagg ccgacggcgt gcgcacccgc cgcatcccgg 35040
tcgactacgc ctcccactcg gtccacatgg aggagatccg cgccgaggtc gagaaggcgg 35100
cgtccggcct gtccccgcgc ccctccgacg tgccgttcca ctccaccgtg accgccggga 35160
aggccgacac gaccacgctg gacgccgcct actggtaccg caacctccgc tcccaggtcc 35220
gcttcgagga caccgtgcgc ggcctgctcg acgcgggctt ccgccacttc gtcgaagtca 35280
gcccgcaccc ggtgctcacc cccggcgtgg agcggaccgc cgaggaccac ggcagcgacg 35340
cgtcggtggt cgggacgctg cggcgcggcg acggcggcga accccggctg ctcaggtccc 35400
tcgccgaggc ccacgccgcc ggaacgcggg tggactggtc ccgcgtgttc gacgcgaccg 35460
gagccgtcca cgtcgacctg cccacctacg ccttccagcg ccgccggcac tggctcgact 35520
ccgccacgtc cgccgtagtg gacgccgccg cgaccggcat ggaacccgtc gggcacccgc 35580
tgctcgacgc gggcgtgccc ctgcccgact gcgacggcca cctgttcacc ggccgctggt 35640
cactgcgcac ccacccgtgg ctggccgacc acacggtggg gggccgggcg gtcgtcccgg 35700
gcagcgccct cgtcgagacc gtgctgcgcg cggcagacgc cgtcggctgc gaccggctgg 35760
aggaactgag catcgaaacg ccgatcgtgc tccccgccga ccgcggcgct ctgcgcgtcc 35820
aggtgatggt gggcggcccc gaggacggcg acggccgccg tgccgtgggc gtgtacgtct 35880
gcgacaccga gggcgtctgg gcgcggcacg cccgcgccac cctcaccgcc gcccccgacc 35940
ggcacgaacc cgccggactc gacgactggc cccccgccga cggtgcccgg caggtcgaca 36000
cgagtgggct gtacgagcgg ctcgccgccg ccggactgtc ctacggcccg gtcttccgcg 36060
gcctcggcac cgtctggagc cggggcgacg agatctacgc cgaggtcacc ctgcccgacg 36120
aggcacgtgc ggccgccgac ggattcggcc tgcacccggc actgctggac gccgccctgc 36180
acgcctggcc ggcccgcgag gacgacctca cctccgccga actgccgttc ctgtggaccg 36240
gtgtctcgct gtacgccacc ggagcgtcgc ggctgcgggt gcggctcacg ccggtcaccg 36300
gcggtgggat gtcggtgctg ctggcggacg aggcgggccg gccggtggca tccgccgaca 36360
cactggtgac ccgcccgctc caggacgccg gcccggcggc cggccggggc gcgggcaccc 36420
tgcaccgtgt gcactggacc cccgtaccgg tgccggccgc cggcacggag cccgcggccg 36480
acgcaccggt cctcgcgttc gtcggcccgg agatccccgg tgccggcctc gacgccggca 36540
cgtcacgcca cgacgatctg accggcctgg ccgagcagtt ggccgacggc cggtgcccgg 36600
caccggcgta cgtgctggcg agcacggccc agggcccggc gctcccggcc ggcgccgaag 36660
gggacacggc gcaggaggcg ctggccgccg ccgggcgcgc gctggacctc gtgcagtcct 36720
ggctggccga cgaggcgttc gccgccaccg gcgccaagct ggtgctgctc acccggggag 36780
ccgtcgcggt ggggccgggc gagggcgtgc cgggtctcgc ggccacgccg gtctggggcc 36840
tggtgcgttc cgcgcagtcg gaacaccccg gccggttcgt cctggccgac ctcgaccacg 36900
acccgggctc actcgccgcc ctgccctccg ccctcggcac cggggaaccg caactggcgc 36960
tccggcgggg cgaggcgctc gtcccgcgac tcaccgcggt accggacacc cccgaactcc 37020
cggacacacc gtggcggttg cggaccacgc ccggagccgc gctcgacggg atcgccccgg 37080
ttccggagac ggcggcggcc cggccgctcg gcgagcgcga cgtgcgcgtc gacgtccgag 37140
cagccggcgt caacttccgc gacgtgctga tctcgctggg cacctacccc gacgcggaga 37200
gcgcgcgcat gggcagcgaa ggcgccggcg tcgtcaccgg gatcggcccc ggcgtgaccg 37260
gcgtggccgt cggcgaccgg gtcatggggc tgggcggcga ctggttcggc tcgtccaccg 37320
tggtggatga gcgggtggtg gtgggggtgc cggaggggtg gtcgtttgtt gaggcggcgt 37380
cggtgccggt ggcttttgtg acggcgttct atgcgttggt ggatgtggcg ggtgtgcggt 37440
cgggtgagtc ggtgttggtg catgcggctg cgggtggtgt ggggatggct gcggtgcagt 37500
tggcccggtg gttgggtgcg gaggtgtggg cgacggcgag tgagtcgaag tggtcggtgg 37560
tgcgggggtt gggtgtggcg ggggagcgga ttgcttcgtc gcggtcggtg gggttcgcgg 37620
aggtgttcgg gcggggtgtg ggttcgggtg tggatgtggt ggtggattcg ttggcggggg 37680
agttggtgga cgcttcgttg gggttggtgc gtccgggtgg ccggttcgtg gagttgggga 37740
aggcggacgt acgggatccg ggtgaggtgg ccgcggccta cgagggcgtg acgtaccggg 37800
cgttcgacct cgtggaagcg ggtccggacc gcatggggga gatgctgcgc gaggtggtcc 37860
ggctcttcga gagcggcgtg ctgacgcgcc tgcccctcgg agtgtgggac gtgcggcggg 37920
ccggcgaggc gttcgcgctg atgagccgcg ccggacatgt gggaaagctg gtgctcgatg 37980
tgccggccgc caccggcacc gccgcggtgt cgtcggtggg gggcgggggt tgggtgttgg 38040
tgtcgggtgg ttcgggtgtg ttgggtgggg tggtggcgcg gtatttggtg ggggtgcggg 38100
gtgtgcgtcg gttggtgttg ttgagtcgtg gtggtggtga tgtgggtggt ttggtggggg 38160
agttgtcggg ttggggtgct gaggtgcggg tggtggtgtg tgatgtggcg gatcgggtgg 38220
cgttggaggg tgtggtgggt ggtttgccgg gtggggtgtc gggggtggtg catgcggcgg 38280
gtgtgttgga cgacgtggtg gtggaggggt tgtcggggga gcggttgcgg ggtgtgctgg 38340
cggcgaaggt ggtgggtggg tggaatctgc atgaggtgat ggcgggttcg gaggggttgt 38400
ttgtgttgtt ctcgtcggcg gccggggtgt tgggggctgc ggggcaggcg aattatgcgg 38460
cggggaacgc gtttttggac gggttggcgg cgtttcggcg ggcgcgtggg ttgtcgggtg 38520
tgtcggtggc gtgggggttg tgggaggagc ggagtgtgat gacggggggt ctggagcggt 38580
cggatctggc gcggatgcgt cgtatgggtg tgctgccgat gtcgacggag gacggactgc 38640
gactcctcga caccgccgaa cggtcccccg agagcgcggt cctggccgcc cgcctcgaca 38700
cccgctccct cgcggccggc gacgccgccg accaccccct gctgcgcggc ctcgtccgga 38760
aacccgccgc accccggcgc cgcagcctga ccgacgccgc caccggcacc gcggaccggg 38820
ccacggcgct gcgggactcc ctgctccggc agccgcccga cgcccgccgg gccaccctgc 38880
tcgacctggt ccgcgcccag gtgaccaccg tgctcgggca cgcggacgcc ggcacgatcg 38940
cgccggaccg ggcgttcagg gacctcggcc tcgactcgct gaccgccgtc gacctgcgca 39000
accggctcgg cgccgccacg ggactgcggc tgcccgcgac ggtggccttc gaccacccca 39060
actgctccgc cctcgccggg cacctcctcg gcgaagtcct cggagcggag gccgacgagg 39120
cggagcccac ggccaccgcg cccggccggg acggccacga ggcacccggt acgtccacgt 39180
ccgacgaccc gatcgccatc gtcggcatgg cctgccgcta ccccggaggc gtgaccaccc 39240
ccgaggacct gtggcggctc gtcgactccg gcggcgacgc catcggcccg ctgcccgcca 39300
accggggctg ggacctcgac accctctacg accccgaccc cgacacaccc ggccgggcct 39360
acgtccgcga gggcggcttc ctgcacgacg ccgggcgctt cgacgccgag ttcttcggca 39420
tctcgccggt ggaggccctg gccaccgacc cccagcagcg actgctcctg gaaacgggct 39480
gggaggccgt cgaacgggcc ggcatcgtcc cggcgtccct gcgcggcagc cggaccgggg 39540
tgttcgtcgg ctcgcactac caggagtacg gcccgcgcct ccaccaggcc ggacaaggca 39600
ccgagggcca cctcatcacc ggcaccgccg gcagcgtggt gtccggacgg atcgcctacg 39660
tcctgggcct cgaaggcccg gccgtcaccg tcgacaccgc ctgctcgtcc tccctcgtcg 39720
ccctgcacct ggccgtacgg gcgctgcggg cgggcgagtg cgacctcgcc ctggccgggg 39780
gagtcgcggt gatgccggga ccgggcgccc tcatgggctt cagccggcag cgcggcctgg 39840
caccggacgg gcgctgcaag ccgttcgccg aggcggcgga cggaacctcg ctcgccgagg 39900
gcgcgggcgt cctgctggtg gaacggctct ccgacgcacg ccggagcggc catcccgtcc 39960
tcgccctggt gcgcggtacg gcgaccaacc aggacggcgc ctccaacggc ctctccgccc 40020
ccaacggacc gtcccagcag cgcgtcatcc gcgcagccct cgccgacgcc cgcctcacca 40080
cctccgacgt cgacgccgtg gaggcgcacg gcaccggcac ccggctcggc gacccgatcg 40140
aggcacaggc cgtcctcgcc acctacggcg ccgaccgcgc cgaccgggtc ccggtacggc 40200
tcggctcggt gaagtccaac atcgggcaca cgcaggccgc cgccggggcg gccggtgtca 40260
tcaagatggt gcaggcgctg caccacgccg tactgccccg ctccctgcac ctcgacaagc 40320
cgtcggacca cgtcgactgg acgagcggcg acgtcgagct gctgcgcgac cccgtcgcct 40380
ggcccgccgg cgaacggccc cggcgcgccg gcgtgtcctc gttcggaatc agcggcacca 40440
acgcccacgt gatcatcgag gaggcgccgc gggagcgccg gcccgcgccg gacaccgcgc 40500
ccacccccgg cgctgccggg ggcctcccgg tccgcgccct gccgtgggtg ctctccgggc 40560
actccccggc cgcgctgcgc gaccaggccc gccgcctcct cgcgcacctg cggcagcagc 40620
cgcccggcgc cgcccccgcc ccgcgcgacc tggccgtcgc gctcgccacc cggcggtcgc 40680
cgttcaccca ccgggccgtc gtcaccggcg aggagcacga cgacctcgcc tcgggactgg 40740
cggccctcgc cgccggacgg cccgcgcccc acctggtgac gggcgccgcg ccggccgggc 40800
gcacggcggt cctgttcaca ggccagggca gccagcgcgc gggcatggcc ggacagctcc 40860
accgcaccca cccggtcttc gccgccgcct tcgacgccgt ctgcgcccgc ttcgacgccc 40920
tgctccccga cgaaccgccc ctgcgggacg tcgtcttcga caccggcgag accgccgcac 40980
gcaccctcac cgggacgctc cacgcccagt gcgcgctgtt cgcggtcgag gtcgcgctgt 41040
accggctcct cgcctcctgg ggcctgcgcc ccgacgcggt cgcgggccac tccgtcggcg 41100
agatcaccgc ggcccacgtc gccggtgcgc tcaccctcgc ggacgcgtgc acgctcgtcg 41160
ccgcccgcgg ccggctcatg cggagcctgc ccgaagacgg cgcgatggtc gccgtacggc 41220
tgcccgaggc ggaggtcgag ccgctgctgg ccggccgcgc ccacgaggtc ggcctggccg 41280
ccgtcaacgg ccccgactcc gtcgtcctgt ccggagcggc ggacgccgtc gacgagatcg 41340
tcggccggct cgaacagcgc ggcgcgcgga cgcgtcggct gaccgtctcc cacgccttcc 41400
actcgccgct gatggagccc gtactggccc ccctgcgcgc cgaactggcc ggcctcgccg 41460
ctgccgtgcc cgagatcccg gtcatgtccc acctgacggg cgacttcctg ccctcggacc 41520
ggccggtcga gccggagcac tgggtgcggc acgtgcggga accggtccgc ttcgccgacg 41580
gggtcgccgc gctggccgcc cggggtgcga ccaccttcct cgagatcggc cccgacgccg 41640
tactgtccgc catgggccag gacagcgccc ccgaggccga gttcatcccc acgctgcgcg 41700
cgaagaaggc ggagcacgca ggggacgcgg agcacgcggc ggaggacgag gcagccgccc 41760
tgacccagac cgtggggcag ctcttcgtac gcggcacgga catcgactgg tccgccgtac 41820
tcggcgtccc ggacgacgcg ccgtccaccg ccgacctgcc cacgtacgcc ttccagcgga 41880
ccgagtactg gctgccctcg gaaggtggcg cccggggccc cgggcgcgcg ggtctcgtcc 41940
cccacgacgg cgacgacgcc gctctcgccg ccgaactcgg cctgggcgac cccgagtcgg 42000
cggccacact gctgccgctc ctggccgcct accgccgacg acgcgacgac gacgcccggg 42060
tcgacggatg gcgccaccgc accgcctgga cgacggccgc cgtccccccg gcggcaccgg 42120
ccggcacctg gatcctcccc gtccacgcgg agcaggccga cgacccgtgg gtcaccggcc 42180
tcgtcgcggc actgtccgcc gggggcgtgc ggccggtcct cctgccgtgc gccggggacg 42240
ccgcactggc cggactactc cggtccgcga caggcgacgc agggcccgtc tccggcatcc 42300
tgtcgctgtt cgccctggcc ccgggacggc accccgccca cgacgcgctg ccccagggaa 42360
ccgtcctcac cctggcgctc ctgcgcgcac tggaggagag cggcagccgg gtccccgtgt 42420
ggcacgccac ccgcgccgcc gcggcggtcg gcccggccga gcgggtgcac caccccgaac 42480
aactcgcagt gcgggcactc ggacgcgtcg ccgtcctgga gtcctcccgg cactgggcgg 42540
gcacggtcga cctgcccgag cggatcgacg cctggaccgg cggccggctc gccgcggtcc 42600
tcgcgcacag cgcggccgac ggcgaaaggg ggagcggcca cgagtccgag aacgacatcg 42660
ccgtccgcgg cgccggcctc ttcgcccgcc gcgtcgtcca ggcgcccgca cccgcacccg 42720
cccctgtgac cgtcgacgcc ggcgccgcca ccccgtggcc gcccaccggc accgtcgtcg 42780
tcaccgacgc caccagcccc ctcggccggc aggtcgccct gcacctcgcc cgcggcggcg 42840
ccgaacacct cctgctcgtc acccgccccg ccccggcgga cccgcaggcc gcgccggccg 42900
gggcggacac agcgaccgcg tcagccggga cgcccccgga gcccacggac gcgaccgagg 42960
ccctgcgcgc cgaactcacc gcactcggcg cccgcgccga cttcaccgcc cgcgacctcg 43020
gcgaccgtgc cgaggcggcc gccctgctgg acggcatccc cccgaccggc cccctcaccg 43080
tcgtcgtgcc cacccgcacc gcctccggcg gcagcaccct cgcccagcac accgcccccg 43140
ggctccagga gatgctgcgg gccgatgccc gggccgcccg gcacctgcac gacctcaccc 43200
gcgacaggac cgaaccggcg gccttcgtcc tcctcaccac cctcgccgcc accgtcgggg 43260
cccccgggcg ggccggaccg gccctggccg acgccctcct ggacgccctg gccgaggagc 43320
gccgaagcgc cggactgccc gtgacccgcg tcgcgctggg cccgtgggcc ggtgcggaac 43380
ccgctgagga caccacggag gacaccgccc cggcccggga cggcggcctg ctcccgatgc 43440
gcccggacct cgccctgcgg gccgtcgacc gggccgtccg cgcccgggag accgggaccg 43500
ccgtcttcga cgccgactgg gaacgcgtcg cggcccacgc cgccgccacg cccgcagccc 43560
ggccgacggc caggctgttc gacggcgttc ccgcgctgcg cgacgccgtg cgcggtaccg 43620
gatccgcgcg cgaggacacc ggcgccgagg acccgcagga gttccgccgc cgcctcggca 43680
cgctgcccgc gaacgagcgg agcgccgaga tgctgcggct cgtacgcacc cacgccgccc 43740
tggtgctggg ccacggcacc gacgccgtgg tggcccccga ccggggcttc gtcgagatgg 43800
gcttcgactc gctcaccgcg acccggctgc gcaaccgtct cggcgccgcg accggcctcc 43860
agatcagcgc cgccaccgtg ctggaatgcc ccaccccaca gaccctggcc gaccatctgc 43920
tcgggctctg cacggccccg cgcgcccgaa cgcgtccccg gctgcgcccc cgggaccgcg 43980
actgacacgc cgtacgcacg cgggcggggc cgacccggag gccggccccg cccgcgtgcc 44040
tacggtcagc gcttgacgcc caggctcagc ccgtgctcgt agggcagccc cggaacggtc 44100
ccgacctccc cgaacccggc ctcgctcagc cagcgttcgt agtcgcgcgc cggataggcc 44160
atgccccggc cgctcgccag cacgttgaag tacagcccga gccgggcgcc gaacacgccg 44220
tccgtctcgt cgtcggagac gttgtagccg tacaccatga ccctgccgcc cacgggcagg 44280
gcgtcgtacg ccttcttcag caggagcagg atcgcctcct cgtcgaagat ctccagcaca 44340
tggctgaaga gcacggcgtc cggcccctcg gggaacggat cggtgaacat gtcaccgggc 44400
accacactca cccgctccga ctgcgccccc gcctccgccc ccgcgccgga cgcgagccgg 44460
gagacgctcg gcatgtcgaa caccgtcgtc cggagccgcg gatggcgtgc gaccagcctc 44520
gccgaggtgc tgccgtcgcc gccgcccacg tcgagcacgt gccgcacgtc ctcgaagacc 44580
ggctgcccga tcagcgcgtc caccgaacgc agcgtgaaag ccgtcatcgc ccggtggaag 44640
acctcctcca gcggaggatt gcgggccagc cgcccgtaca gggtcggctc gtcgccggga 44700
tgcgccgcca gggcggtgtt ggtacccgcc cgcagcgccg ccgtcatgtc cgcgaacgcg 44760
ggatagtaga cctccttcca gccggtcaga atgtgactcc agctgtccgg ctcctcgtcc 44820
gcggccagca gttcctcggc gacggacgag ttgtggtaga caccgccccg ccgctccagc 44880
agccccgtcg tgcacaccgc ctggagcagc acccgcaact ggtgcgcggg cagaccgcag 44940
aacgaccgga tctccgccgc actcgcgccg ggactccccg acaggaaggc gaagatcctc 45000
agctcggctg cggtggtgac ggcgttgaac agcgccggag cgttgacgag gaagtggaag 45060
cgttcgagga ccggatcgtc ctcgtgagcg tcttcgtgga cggcgttctt catcgttctc 45120
ccgggaagga aaggcgtcgg ccggcacgcc acggtggtcc cggcacgcta ggcgggcacg 45180
aaccgggcgg caacgacgat ccccgccgtt acggacacac cgtcgcccgc gaccggacga 45240
cccgctccgc cgcccggtgc ccgcgcaccc gcgccgctcg taactgtggc tcccaccgat 45300
gccggtgtcc gccgcgcctc agcaccatca ctactgcccg cacagggccg cgacgcgctc 45360
cgtggacgcc ccgcgcggac acgaccgacg gcccagcccg catggaggag tgcacgtgat 45420
ccctgcgtcc tacgcgcaac gccggctgtg gctcgtggac cggctggaag gcccgagcgc 45480
cctctacacc gttccgctgg tcctgcacct gaccgggcgg ccggacgtga ccgcgctgcg 45540
ggcggcgctg cacgacgtgg tcgcccgcca cgaggcgctg cggacccggt tcccccaggt 45600
cgacggcgaa cccgtgcagg agatcgtgcc cgccggcgaa ctcgacgacc tgctgaccga 45660
ggacgaggta cgggccgacg agctgcagga cgagatcggc cgcaccgccc ggcacgtctt 45720
cgacctggcc gccggcatcc ccttccacgc ccgcctcctc accgtcgacg accggacctc 45780
ggcactcgtc gtcgccctgc accacatcgc cgccgacggc tggtccgccg ccccgctctg 45840
gcgggacctc tccgccgcct acgccgcgcg cctgaccgga gccgaacccg acctcgcgcc 45900
cctgcccgtg cagtacgccg actacaccct gtggcagcgc gaactgctcg gcgacgccgc 45960
cgaccccggc agcctgctcg ccgaacaact cgcccactgg cgcgcggcgc tggccggtgc 46020
cccggaggaa ctcgcgctgc ccaccgaccg gccgcggccc gccacctccg cgcacgacgg 46080
cggggtcgtc cgcctcgacg taccggccgg cctgcacgcc cgcctcgccg acctcgcgcg 46140
ggacgagaac gccaccatgt tcatggtctg gcacgcggcg ctcgccgtcc tgctctccaa 46200
gctcggcgcc ggagaggaca tccccgtcgg cagcccgttc gccggccgcg acgaggccga 46260
cctcgaagac ctcgtcggat tcttcgtcaa caccctcgtg ctgcgcaccg acgtgagcgg 46320
cgaccccgcc ttcaccgagg tcgtccggcg ggtgcgcggc accgccgtcg acgccatgaa 46380
ccaccaggac gtgcccttcg agcggctcgt ggaggacctg gcccccgccc gctcactgac 46440
ccggcacccc ctcttccagg tcaacctcac cctgcacaac accccgcggc tccccgtcga 46500
cctgcccgga ctgacggccg tcgccgagtt cgccgcgccg ccgctggcca agtacgacct 46560
cgacgtccag gtccaggagc aggtcgacgc gcagggccgg cccgccggac agcgcgtcga 46620
actgcactac agcgccgacc tgttcgaccg cgccaccgcc gaagccatcg ccggccggct 46680
cctgcgcgtc ctgtcgcagg tcgcgcacac ccccgaactg cccctgcacg ccgtcgacgt 46740
cctctcgccc gccgaacacc aggcgctgcc cgccgcggcg ggcagcgccg cggccccgcc 46800
gcccggggcg accgtccccg acctcttcgc cgcccgggcc gccgcccacc ccgacgcggc 46860
ggccgtcacc cacggcacga ccaccctcac ctacgccgag ctggacgccg agtccaaccg 46920
cctcgcccgc cacctcgtgg cctgcggcgc gggccccgaa acccgggtcg cggtgtcgct 46980
ggaacgcact ccgggcctcg tcaccgcact gctcgcggtc atgaaggcgg gtgccgccta 47040
cctcccggcc gaccccgccc acccggccgc ccggaccggc gcgctcctcg ccgacaccgc 47100
ccccgccctc ctgctcacca ccgccgacac cgccgcgcac gccgccgcag ctcccgacct 47160
gcgccgcgtc ctgctcgacg acccgcagac ccgcaccgcc gtcgccgccc gcgacgccgg 47220
cccgctcacc caggacgaac gccgcacccc cctgcggccc ggccaccccg cctacgtcat 47280
ccacacctcg ggctccaccg gcgcccccaa gggagtcgtc gtcggccacg cccaggtgac 47340
ggcgctgctg cggtccgccg ccgaccggta cggcttcggc accgacgacg tctggacctg 47400
gttccactcc tacgccttcg acttctcggt ctgggaactg tggggcgccc tcctcaccgg 47460
cggccgcctc gtcgtcgtcg accacgacac ctcccgctcc ccggacgact tccacgacct 47520
cctggtccgg gaaggagtca ccgttctcag ccagaccccc tccgccttcc agcaactcga 47580
ccaggccgac gcccgccgcg acgccgccgc gctcggtgcc cggctgcggc tcctcgtctt 47640
cggcggcgag gccctggacc ccgcacggct caccgactgg cacgaccgcc acggcaccga 47700
cggcccgcgc ccggtcaaca tgtacggcat caccgagacc accgtccacg tcacccacct 47760
cgacctggac cccggcaccg ccgccgcacc cggcacgcac ggcggcagcc ccgtgggacg 47820
ccccctcgac cacacccgcg tccacgtcct cgacgacgcg ctgcgacccg taccgcccgg 47880
cgtgcccggc gagatgtacg tcaccgggtc gggagtcgcc cgcggctacc tgaaccggcc 47940
cgcgacgacc gccgcacgct tcgtggcctg ccccttcgaa ccgggcaccc gcatgtaccg 48000
cacgggcgac cgggcccgcc gcgccgccga cggaaccctc acctacctgg gccgcaccga 48060
cgaccaggtc aaactgcgcg gcttccgcat cgaacccggc gaggtcgagg ccgccctcct 48120
ggaccacgag ccgatcggcc gggcggccgt cgtgctccgc accgataccc ccggcgaccg 48180
gcgactcgtc ggctacgtcg tcccccgcga ccgggccgcc gccaccggcg aggacggcgc 48240
ggaactggca cgccgggccc gcgagcacgc cgccgcgctg ctgcccgccc acatggtgcc 48300
ctcggtctgc gtgccgctgg cgcggctgcc gctcaccgcc aacggcaaac tcgaccgcgc 48360
cgcgctcccc gcccccgacc gggaaggcgc cgcgggcggc cgagcccccg cgaccgcccg 48420
cgaggagatc ctctgcacgg ccttcgccga ggtcctggac ctgccctcgg tcggagccga 48480
cgacgacttc ttcgccctcg gcggccactc catgctcgcc gtacgcctcc tcgaccacct 48540
caggacccgg ggcgtccgcg tcgacatgcg gaccctgttc accgccccga cgcccgcccg 48600
gctggccgcc gaggcgggtc ccgagcccgt gcgggtcccc gagggcaccg tcccgcccgg 48660
cgccacccgc atcacccccg agatggtccc cctggccggc ctcaccgagg acgaactgcg 48720
caccgtcacc gacgccctgc ccgacggcgc ggccggtgtc gccgacgtct accccctcgg 48780
accgctgcag gagggcctct tcttccacca ccgcctgaac gccggcaccg gcaccgcggg 48840
cggcagcggc gacggcgacc cctacgtcgt ccgctacgtc ctgggcttcg acaccccgcg 48900
gctgctcgac tcgttcctcg ccgcgctggc ccaggtcatc gaccgccacg acgtgctgcg 48960
cacctccctg gcctggacgg gcctgccgca ccccgtacag gtcgtgcacc ggcacgccga 49020
gctgcccgtc accgagaccg acctgggcga cggaccggac cccgtcgcac gactgctggc 49080
ccacggcgac gagcccctcg acctgcgccg cgccccgctg atggacgccc gcaccgccac 49140
cgaaccaggc accggccgcc ggctgctcgc cgtccgcatg caccacatca cccaggacca 49200
caccacgctc gacctggtgc tgcgcgaggc caccgccgta ctcgccggcc ggggcgaaac 49260
cctgcccgcc ccgcgtccct accgcgagtt cgtcggccgg gccctgctca ccacccccgc 49320
cgaggaacac ctcgcccact tcggccggct cctcggcgac gtcaccgaac ccaccgcccc 49380
cttcggcgtg tgggaggtcc ggggcggcgg caccgacgtc accgaacgcc gcaccgtcct 49440
cggcgaaccg gtggcggccc ggctgcgcgc acaggcccgg cgcaccggag tgagcgccgc 49500
gaccgtcctg cacgtcgtgt ggtcccgggt cctcgccgcc gtgtccggac gcgacgacgt 49560
cgtcttcggc accctcctcc tcggccgcat gcaggccggc gacggcgcgg gcgacgtgcc 49620
cggcatgttc atcaacaccc tcccggtgcg cgcccgcacg acggggaccg acgtggcaca 49680
ggcggtccac gccatgcacc accagctcgc ggagctcatg gtgcacgaac acgcctcgct 49740
cgccgtcgcc cagcgcgcag gcggcgtgcg accgcccgca ccgctcttca ccgccgtact 49800
caactaccgg cacaaccccg cgggcggccc cggcacggtc ctgccgcccg gcacggaact 49860
cctcgccttc cgggagcgga ccaactaccc gctgctcgtc tccgtcgacg acgacggcgg 49920
gacgctcgcc ttcgacgtcc aggccgccgc cccgatcgac cccgacctcg tcacccggct 49980
gctgcacgcc accaccgaac gcgtcgtcga cgccctcgaa caggccccgg acaccccgct 50040
cgccgacgtc gacgtcctgc cggccgccga acgccaccgc gtcctcaccg agtggaacga 50100
caccggccgg cccgacacgg cccgcaccct cgccgacctc ctcgccgacc gcgccaccgc 50160
caccccgcac gcccccgcgc tcacctacga ccacgacggc gcacccgaac agctcgacta 50220
cgccgagctg ttcgcccgcg ccaaccggct ggcgcgccac ctgatcgggc agggcgtcgg 50280
ccccgaggac cgggtcgtgc tcctcatgga ccgctcgccc gacctcgtcg tcgcgctcct 50340
cgcggtcgtc ggggccggtg ccgcctacgt ccccgtcgac ccggaccagc ccgccgtacg 50400
cgtcgcccac ctgtgcgccg acgccgcccc ggcggccgtc ctcaccggca cggcccacgc 50460
cgcgtccgtg ccccggtccg cgccggcgcc gatcgtcgtg gacgaccccg aggtacgctc 50520
cgccgtcgcg gcacacgccc cggacccgat cggccgggac gagcgcaccg gcccgctccg 50580
cccctcccac ccggcgtacg tcatctacac ctcgggctcc accggcatcc ccaagggcgt 50640
cgtcgtcccg cactccggag cggtcaacct cctcgccttc cgctggcccg gcctgaccgc 50700
cgacagcagc ctgctgcagt tcgcctcgat cggcttcgac gtcgcgacct gggagatcat 50760
gacggccttc gccgcgggcg cccgcctcgt cgtcgccccc gcagcccggc tcctgcccgg 50820
cgccggcctc gaagacgtcg tcgaacgcca cgcggtcacc cacctgcaac tcccgccgac 50880
cgtcctcggc atggtcgcgg acgaccaccg actcgcctcc gtgcgcaccc tgctggtcgc 50940
cggcgaggcc ctcggccagg cgctcgtcga ccgctggggc gccggccgct ggttcggcaa 51000
cgcctacggt ccgaccgaga tcaccgtcat cgccgccgcc gacggcccac tgcgccccgg 51060
ggacgccccc accatcggcc gccccctgcc cggcgtccgc ctgtacgtcc tcgacgcccg 51120
cctgcgtccc gtccccgacg gcgtcgacgg cgacctgtac gtcgcgggcg ccggcctggc 51180
gcgcggctac ctcgaccggc ccggcctcag cgccgaacgc ttcgtggccg acccccacgg 51240
agccgccggc acccgtatgt accgcaccgg ggacaccgtg cgccgcaccg ccgacggccg 51300
cctgctgtac accgggcgcg ccgacgacca ggtcaagatc cggggcttcc gcgtcgagcc 51360
gggcgagatc gagacccggc tcaccgagca cgaaggcgtc gcacacgccg ccgtcgtcgc 51420
ccgcgacgac gtgcccggcg ccccgggcga cacacgcctc gtcgcctacg tcgtgccgag 51480
cggccccggt gtccccgggc tgcccgccac gctgcgcgac cacctcgcgg ccctgctccc 51540
cgcccacctg gtgccgtccg cgttcgtggc cctggaccgg ctgccgctgt cggtcaatgg 51600
caaactcgac cgggccgcgc tgcccgtccc ggaccccgcc accggcgccg gcgccgcacg 51660
ccccgcgggc acgtacgacg aactgctctg cgccgccatg gcccaggtcc tgggcgtacc 51720
gagggtgggt gcggacgacg acttcttcgc cctcggcggc cactcactgc tcgccgtccg 51780
cctggtcggc cggatccgcg ccgtgctgga cgtcgagatc cccgtgcacg cggtcttcga 51840
ggcccccacg gcggcgcgac tcgcggcgcg gctggacgac acggcggggg cggaggtgcg 51900
tccgtcggtg gtggcggggg agcggccgga gcggttgccg ttgtcgtacg cgcagcggcg 51960
gttgtggttc gtggaccggt tggagggtgc gagcgcgctg tacaacattc cgttggtggt 52020
gcggttgtcg ggtcgggtgg atgtgggtgc gctgggtgcg gcgctgggtg atgtggtggg 52080
gcggcacgag gcgttgcgta cgcggttccc gcaggtggag ggggagccgt tccaggaggt 52140
cgtgcccgtc gcggaggcgc gggtggagtt gccggtggtg ccggtggcgg ccggtgagct 52200
ggaggcgagg atcgaggagg tctccggcca cgtcttcgac ctggccgccg aactcccgct 52260
gcgcgcggtt ctcctgaccc aggacgggaa cgagaacgac gacgggcacg aggagagttc 52320
cgtcctcgtc ctcgtcgtgc accacatcgc cggtgacggc tggtccctgg cacccctgtg 52380
gcgggacctg tccgccgcct acggcgcgcg tcgggccggg agcacgccgc ggttcgcgcc 52440
gctgccggtg cagtacgccg actacaccct gtggcagcgc gacctgctcg gcgacgcggc 52500
cgaccccggg agcgtgctgg cggagcaggt cgcgcactgg cgcacggcac tcgagggtgt 52560
gcccgaggag ctgtccctcc ccgccgaccg gccgcgaccg tccgcggaga cgcaccgggg 52620
cgcggccgtt cccgtgcgtg tcccggccgg actgcacgcg cgcctggccg agttggcgcg 52680
gtcggagggc gtgacgatgt tcatggtgtg gcaggcggcg gtggccgtgc tgttctcgcg 52740
gctgggcgcg ggggaggaca tcccgctggg cggcccggtc gcgggccgta cagacgagtc 52800
gctggaggac ctggtcgggt gcttcgtcaa caccctcgtg ctgcgcaccg acgtgtccgg 52860
cgaccccgcc ttcaccgacg tactcgcccg cgtccgccgg gacacgctga gtgccctgca 52920
ccggcaggag gtcccgttcg aacggctggt ggaggaactg gcaccgccca ggtcgatggg 52980
ccgccacccc ttcttccaga ccgtcctcga agtgcagtcc acgcccctcc tcgcgccgga 53040
actggacgga gtggacgtgg cggtgctgcc ccacgcggtc cgcgacgcca agttcgacct 53100
cgacctgcag atcgccgaga gcttcgacgc cgaaggccgc cccaccggca tggcgggcga 53160
actcgtctac gccgccgacc tcttcgacca cgccaccgcc gagaccctga ccgcccggct 53220
gctgcgcgtc ctggacgccg tggccgacgc tccgggacgg cccgtgcaca ccgtcgacgt 53280
gctcgacgac gccgagcggc accggctggt gggggagtgg tcccgccggc agccggcgat 53340
cgccggcccg gacgtccgtg tcttcgtcct cgacgaccac ctcatgccgg tcccgcccgg 53400
cgtcaccgga ctgctctaca ccacctgcga cgcgtccgcg gactccacgg tcgcctgccc 53460
gttcaccgag gaggagtccg tcatgcgacc caccggcgca caggcccgct gggacgacga 53520
gggccgcgta cacgtcgtgc cggccgacga cgcggcggcc ccggagccgg acacgcagcc 53580
gtccggcgcc ccggtcccgc gcggaagcgg aacggaactg cgcgaggaac tgctccgcac 53640
cgtcttcgcg caggtgctcg gcgtgccgga ggtgggtgcg gacgacgact tcttcgccct 53700
cggcggccac tccctccagg ccgtgcgcct ggtcagccgc atccgcgccg tcctcggcgt 53760
cgaactgctc gtccgcgacc tcttcgagac acccaccgtg gccggactgg ccgcccggct 53820
ggacgacacg gcgggggcgg aggtgcgtcc gtcggtggtg gcgggggagc ggccggagcg 53880
gttgccgttg tcgtacgcgc agcggcggtt gtggttcgtg gaccggttgg agggtgcgag 53940
cgcgctgtac aacattccgt tggtggtgcg gttgtcgggt cgggtggatg tgggtgcgct 54000
gggtgcggcg ctgggtgatg tggtggggcg gcacgaggcg ttgcgtacgc ggttcccgca 54060
ggtggacggg gagccgtatc aggaggtcgt gcccgtcgcg gaggcgcggg tggagctgcc 54120
ggtggtgccg gtggcggccg gtgagctgga ggcgaggatc gaggaggtct ccggccacgt 54180
cttcgacctg gccggtgaac tccccgtgca cgccgcgctg ctgacgtcgg gcgaggagag 54240
ttccgtcctc gtcctcgtcg tgcaccacat cgccggtgac ggctggtccc ttgcacccct 54300
gtggagggac gtgtcgacgg cgtacgcggc acgccgctcg ggcaagaccc cggacttccc 54360
cccgctgccg gtgcagtacg ccgactacgc gctgtggcag cagcggctgt tcggcgacga 54420
ggacggagcc ggcagccggc tcaccgcaca ggtcgagcac tggcgggcca ccctcgacgg 54480
cgtcccccac gaactctccc tgccgttcga ccggccccgg ccggccaggc ccggacgcgg 54540
cggcggctgg gccgacatcg aagtccccgc cgaactgcac gcccggatgg ccgagttggc 54600
gcggtcggag ggcgtgacga tgttcatggt gtggcaggcg gcggtggccg tgctgctctc 54660
gcggctgggc gcgggggagg acatccccct gggcagcccg gtcgcgggcc gcaccgacga 54720
gtcgctggag gacctggtcg ggttcttcct caacaccctc gtgctgcgca ccgacgtgtc 54780
cggcgacccc gccttcaccg acgtgctcgc ccgggtgcgc agcacggcac tggacgccct 54840
cgaccaccag gacgtcccct tcgaccgcct cgtggagaag ctggcacccg cccgctacac 54900
cgaccgcgtc cccttcttcc aggtcctggt cgccgtgcag aacatgccgc aggcccaggt 54960
cgcgctgccc ggcctggacg tcgacgccgg acccggcaaa cccaccacgg ccaaggtcga 55020
cctcgacgtc caggtcgtcg aactgcacga cgcggacgga gcgccgagcg gcatggccgg 55080
agggctcacc tacgccaccg acctcttcga ccactccacc gccgagagcc tcgtcgcccg 55140
gctgctgcgc gtcctggagg cggtcaccgc cgaccccgcc cgccgggtct cccgcatcga 55200
cgtcttcgac cccgccgaac ggcggcgcct gctcaccgag tcgaacggcg cccgcagcga 55260
caccctggca ctcaccgtcc ccgaactgtt cgccgtccgc gcctcccgcg cgccgaaggc 55320
cgtcgccctc gacaccgggg ccgaaccggt cacctacgga caactggacg cccgctccaa 55380
ccggctcgcc caccacctca tcgacctcgg cgtcggcccg gagaccgtgg tcgccgtcgt 55440
catggaccgc tccccggacg tggtcaccac cctgctggcc gtactcaagg cgggcggcgc 55500
ctacctcacg ctcgaccccg cccaacccga ctcccgcacc gccgagatga tcgccctcgc 55560
cggagccggg gtctgcctgg ccgaccagcg gtacgccgaa gcggcgcgcg cccggttcgc 55620
caccgtcgtc gtcgccgacg cgggagacgc cgagtgggcc gaccggcccg ccggcaccgt 55680
cgccggacgc agcctgcccg accagctcgc ctacctcatg ttcacctccg gctccaccgg 55740
cgaacccaag ggcatcggca ccacccaccg cgacatcgtg gacctcgccg gcgaccgctg 55800
ctggcagttc cccggcaccg cgcgcggcat gttcgccgcg ccgcacacct tcgacgggtc 55860
caccgtcgag gtgtgggtac ggctgctcac cggcggcacc ctgatcgtca ccccgcccgg 55920
gcggaccgac gccgcccgcc tgcgctccct cgtcgccgac cacggactca cccacgccca 55980
tctgaccgcc ggcctgttcc gggtcatcgc cgaagaggac ccggccgcct tcaccggcgt 56040
ccacgacgtg ctcaccggcg ccgacgtcgt ccccaaggag gcggtccgcc gcgtcctcga 56100
agcggtcccc ggcatcgtcg tccgcagcag ctacggaccg accgaggcga ccgtcatcgc 56160
cacccagatc ccgctcaccg aacccgacgc cctgggcgac gtcgtgtcga tcggccgcgc 56220
catggacaac accggcgtgt acgtcctcga cgacagcctc caaccggtcc cggccggcgt 56280
cgcgggcgag gcgtacatcg cgggcgccgg actcgcccgc ggctacgtcg cccgccccgg 56340
actcaccgcc gagcggttcg tggcctgtcc gttcgacgta cccggcgccc gcatgtaccg 56400
caccggggac atcgtgcgcc gacgggccga cggcgcgctg gagttcgtgt cccgggccga 56460
cgaccaggtg aagatccgcg ggttccgggt cgagcccggc gaggtcgaga agatcctggc 56520
cggacacccc gccgtcgccc aggccgtcgt caccgtccgc gaggacaccc ccggagacaa 56580
gcgcctggtg gcccacctga ccgcggcgcc cggcgaagcc ctcccggacg tccgggagtt 56640
cgtcgccggc cggctgcccg agtacctcgt gccggacgcc gtcgtcgtcc tggaccgact 56700
gccgctcacc gccaacggca aggtggaccg cgcggcgctg cccgcccccg aggcggcgag 56760
cacgggcgcg gcgcgccggc cgccgtccct gcgcgaggac ctcctctgct ccgtcttcgc 56820
ccaggtcctg ggcgtgcccc gggtcggggt ggacgacgac ttcttcgccc tcggcggcca 56880
ctcgctgctg gccgtgcgcc tggtcagccg catccgcagc gtcctcggcg ccgagatccc 56940
cgtacaggcg gtcttcgaga cctccaccgt cgccggtctc gcccccaccg tcgaggccgc 57000
cggctccacc ggcgtcctgc ggcccgccct tgccgccggg ccccggcccc gtcggctgcc 57060
gctctcgtac gcccagcgcc gcctgtggtt cgtggaccgg ctggaggcgg ccggacccct 57120
ctacaacgtc ccgctcgcgc tccggctgac cggcgcactc gacaccggcg cactccgggc 57180
ggcctggacc gacctgctca ctcggcacga gagcctgcgc acccggttcc tgcacgccga 57240
cggcgacccc taccaggaca tcgtctccct cgacgacttc cccccgtact tcgccgtcga 57300
gtccgtggga cgcggggaac tggaagcccg gatcgacgag gccgccggcc acgtcttcga 57360
cctcaccgcc ggaccgcccg tgcgggccac cctcctggac gtggacgggc ccgacgccga 57420
cgaggcggtg ctggtcctgg tcacgcacca catcgtcgcc gacggctggt cgatggtccc 57480
gctgctgcgc gacctgtcca ccgcctacac cgcccgccgg gccggccgcg cccccggctg 57540
ggaaccgctg cccgtgcagt acgccgacca caccctctgg cagcgcggcc tgctgggcga 57600
ccgcgacgac cccgacagcg tcctcgccgg ccaggtagcc cactggcggg acgcgctgga 57660
cggcagcccc gaggaactgg ccctgcccac cgaccggccg cgtcccgccg tggcgagccg 57720
cgagggcggc tgggtgccca tgagcgcacc cgccgacctg cacgcccgcc tgacggaact 57780
cgccgtcgcc cagggggcca ccgccttcat ggtgtggcag gcggcgctcg ccgtcctgct 57840
ctcccggctg ggcgccggcc aggacatccc gatcggcagc cccgtggcgg gccgcaccga 57900
cgaggccgcc gacgacctga tcggcttctt cgtcaacacc ctcgtgctgc gcaccgacct 57960
ctccggcgac cccaccttca ccgaggtgct cggcagggtc cgccggtcgg cgctgggcgc 58020
cctgggacac caggacgtac cgttcgagcg gctggtggag gagctggccc ccacgcggtc 58080
ccgcgcccgc caccccctct tccagatcct gctcgccgtg cagaacgtgc ccgccgccac 58140
cgtcgacctg ccgggcctgc gcgtggaggc gctccccacc gaactgggcc gcgccaagtt 58200
cgacctcgac ctccacgtcg ccgaagcctt cgacgacgag ggccgtcccg ccggcatcga 58260
cggcggcatc acctacgccg ccgacctctt cgaccgcacg acggtggagg ccctgctcga 58320
ccgcctcctg ctcgtcctgc acgccgtcgt cgccgacccc tcccggcgcg tccacgacat 58380
cgccctgctc gacagcgacg accggcaccg tgtcctcacc gagtggaacc gcaccgaacg 58440
ggccgcaccg gccgccaccg tgcccgacca cttccgggcc caggccgccc gcacccccga 58500
cgccgtcgcc ctggtcaccg acggcgcccg gacgacgtac gccgaactcg acgcagcctc 58560
cgaccggctc gcccggtacc tgacccggca cggcgcgggc cccgggcgcc tcgtcgccgt 58620
cgtcatggag cgctcgccgg agacgatcac cgccctcctc gccgtcctga agaccggcgg 58680
cgcctacctc cccgtcgacg tcggctaccc cgccgcccgt atcgaactga tgctgcgcga 58740
cgccgccccc gccctcctcc tcaccaccac cgacctcgcg gaccggctgc ccgggagcac 58800
cggcggaccg gaccgcgtcg tcctcgacga cccctcggtc cgggacgcgg tggccgcaga 58860
ggacgccacc cccacggcca cgcccccgca cccggactcc gccgcctaca ccatctacac 58920
ctccggatcc accggcaccc ccaagggcgt cgtcgccacc caccgcgccg tcgaccggct 58980
cgtccgcccc gccgactacg ccgacctgcg cgccggagac gtcgtctccc acctggggtc 59040
cgtctccttc gactccacca ccttcgacat ctgggccacc ctcctcaacg gcgccaccct 59100
cgccgtggga ccggcgggct ccccgtccgt cgccgacatc cgcgactacc tcgcccggca 59160
ccgggtcacc gtcgccctgc tgcccaccgg actgctgcac caggtcatcg acctcgacgt 59220
cgaggcgctg cgcggtgtcc gctccgtact gaccggtggc gaggcgctct ccgtcgaaca 59280
ctgccgcacc ctgctcgaca ccctgcccgg cacccggctg atgaacggct acggccccac 59340
cgagagcgtc acctacaccc acacccaccc cgtcacccgc gcggacgtcg acagcggccg 59400
ggcgatcccg ctgggccgcc cgctggcccg cacccgcgcc tacgtcctcg acagcgccct 59460
gcggcccgtc cccgtcggcg tgcccggcga gctgtacatc gcgggcgacg gcctcgcccg 59520
cggctacgcg aaccgtccgg gcctgagcgc cgaacggttc accgcctgcc cgttcgagga 59580
cggcggcgcc cggatgtacc gaaccggcga cctcgtgcgg tggcgggccg acggggtgct 59640
ggagttcgtc ggccgggccg acgaccaggc caagatcggc gggttccgcg tcgaacccgg 59700
ggaggtggag gccaccgtct ccgcccaccc cgacgtggcc caggccgtcg tcgtggtccg 59760
cgaggacacc cccggcgaca agcgcctcgc cgcctacgcg gccccggcgg accccgccgt 59820
ctccggccgc gaactggccg accgcatccg gcacttcgtc gccgaccggc tgccggacca 59880
cctcgtgccg ccgttcgtga ccgtcctgga ccggctgccg ctcaccccga acgggaaggt 59940
cgaccgggcc ggcctgcccg tcccggaccc gatggccgcc gtcagcgtcg cacgcggccc 60000
cgcctcgccg tacgaggaac tgctcggcgt cgtcttcgcc gacgtgctgc gcctgccccg 60060
cgtaggcgtc gacgacgact tcttcgccct gggcgggcac tcgctgctcg cggtccggct 60120
ggtcagccgc atccgcgccg tactgggcgc cgagacctcc gtggccaccg tcttcgagaa 60180
cccgaccgtg tccggcctcg cgcggcagct gacccgggcc ggcggccggg cccgtcccgc 60240
cgtcgtgccg atgccccggc caccggtgct gcccctgtcc tacggccaga gccgcctctg 60300
gttcgtggac cgcatcgaag gccccaacca cctctacaac atctgcctcg tgctgcgcct 60360
caccggcgac ctggaccccg ggctgctgcg cctggccctc gccgacgtcg tcgcccggca 60420
cgagagcctg cgcaccacct tccccctggt cgacgacgag ccgagccagc acgtcctggc 60480
cgtcgaggag gcggccgtgg acctgccggt caccgccgtc accgaggagg aactggccgg 60540
ccggctcgac gcgctcgccg cccacccctt cgacctggcc cgcgagctgc cgctgaagac 60600
cgcgctgttc tccctgcgtc cgggcgagtg ggtgctctcg gcgaccgtcc accacatcgc 60660
cggcgacgga tggtcgatgg gcccgctgtg gcgggacctc tcgcaggcgt accgggcgcg 60720
cgccgccgga cgcgcccccg aatgggaacc gctgcccgtg cagtacgccg accacaccct 60780
gtggcagcgg gacttcctcg gcgacgtgga cgaccccgac agcgtgctcg ccacgcaggt 60840
agcccactgg aaggagcggc tgcgggacgc cccccaggag ctcgccctgc ccgtcgaccg 60900
gccccgtccg gcggtgtcgg accaccgggc cggactggtg ccgctgaaca tcccggcacc 60960
cctgcacgca cggctggccg agctggcact cggacagggt gtcaccatgt tcatgctgct 61020
gcacgcggcg gtcgcggtcc tgctgtcgaa gagcggcgcc ggacgcgaca tcgtgctggg 61080
cagccccgtc gccggccgca ccgaccaggc cctggacgac ctcgtcggct acttcgcggg 61140
caccctggtg ctgcgcaccg acctgtcggg ggaccccgac ttcctggaac tgctcgaccg 61200
ggtgcgcacg gccggactgg acgccttcga gcaccaggac gtgcccttcg aacggctggt 61260
ggaggagctg gccccggccc gctccatggc ccgcaacccc ctgttccagg tgatgctcgc 61320
cgtgcagaac aaccagcggg gcacgctcag ccttcccggt gtgcaggtgc gcgaggagcc 61380
ggccggggcc ctgacggccc ggttcgacct ggacttcgag gtccgggaga gcttcgacga 61440
gtcgggcgcg cccgccggac tcgacggaga ggtcgtctat gccaccgaac tcttcgaccg 61500
ctccaccgtg cagacgctca ccgcccggct cctgcgggtc ctggagacgg tggccgccga 61560
ccccaccctc ccggtgaccc gcgtcgacct cctcgacgac gccgagcggc ggcgcgtcac 61620
cgaggagtgg aacgacaccg ccggcccccg cccggacggc accctcgccg ggctcttcga 61680
ccggcaggcc gcccgcaccc ccgacgccgt cgccctggtc cacgacggca cagaggtcac 61740
gtacgccgaa ctcgacgagc gctccggccg gctcgcccgg cacctgatcg gcctgggagc 61800
cgcgccggag accctggtcg gcgtagccct cgaccggtcg gtggaacaga tcgtcgcgct 61860
cctggccgtc gtcaggaccg gcgccgccta cctgcccgtc gaccccggcc agccgcggcg 61920
gcgcaccgac ctcgtgctca ccgacgcctc gccggtcctc gtgctgagca ccgcggagac 61980
cacggcccgg ctcggcggca ccgaggccgg aacgccggcc cggtggatcg acctcgacgg 62040
acccctggcc gacggcctcc gggacacccc ggcgcccgcg gccgtcaccg acgccgaccg 62100
ggggacgccg ctgcggccgc accacccggc ctacgtgatg tacacctccg gttccaccgg 62160
caccccgaag ggcgtcgtcg tcccgcactc cggcgtggtc aaccaactgg cctggatgca 62220
ggaggagtac cgcctcgaac cggccgaccg catgctgcag cgggcgtcgt tcggcttcga 62280
cgcctcggtg tgggagatct tctggtccct gctgaacggc gcggcggtgg tcctgagcgg 62340
ccccggctcc cacgcggacc ccgagtacct cgccgacctc gtcgaccggg aacgggtgac 62400
cgtcgcccag ttcgtcccct ccgtgctgcg gacgttcctc gacggcggcg ccgccgggcg 62460
gtgcacgagc ctgcggacgg tcctctgcct cggcgaggcg ctcccggccg ccgtgcgcga 62520
ccgcttccgg cagaccctgg acgcggagct gcacaacctc tacggcccca ccgaggcgtc 62580
cgtcgcggtc accgcctggc cgtgcgacgc ggcacaggac ggcgcctccg tgcccatcgg 62640
acgccccctg cgcaacatca gggcgtacgt cctcgacgac ggcctgctgc ccgtgccccc 62700
cggcacggcc ggtgaactgt acgtcgccgg caccggcctg gcccgcggct acctggaccg 62760
gccggtactc acctccgagc gcttcgtggc ctgcccgtac ggaccggcgg gcgagcggat 62820
gtaccgcacc ggcgacatcg tgcgctggac ggccgggggc caactggagt tcctcgaccg 62880
cgcggacgac caggtgaaga tccgcggctt ccgggtcgag ccgggcgagg tcgaggcgac 62940
cctggccacc cacccgaagg tcgcccaggc cgccgtcgtc acccgcgagg gccccggcgg 63000
cgaccccgcc ctcgtcggct acctggtacc ggccaccgcc ggcgacgacg gggcggacct 63060
ggtggcgcag gtcagggagt acctgacgga gcgcctcccg gagcacctgg tgccgcccgt 63120
gctgacgccg ctggacacgc tgccgctcac ccccaacggc aaactcgacc gggccgccct 63180
gcccgccccc gactacaccg ccctcgcgac cggcggccgg gcacccgcca ccctgcgcga 63240
gcagctgctg tgctccgtct tcgagcaggt gctcggcgtc tcacccgtcg gcgtcgacgc 63300
gagcttcttc gacctcggcg gccactcgct gctcgccgta cggctcgtca accgcatcag 63360
ggtggtcgtc ggcgccgacg tcccggtccg ggccgtcttc gaggcaccca ccgtcaccgc 63420
cctgctggcc tggatcgccc gcgaaggacg ccaggggacc gccgacgtgc tggtgcccat 63480
gcgctccacg ggcgagaggc ccccgctgtt ctgcgcccac accgtgctcg gcctcggctg 63540
ggagtacggc tggctcaccg acgccgcgcc gggcgaccag ccgctgtacg ccctgcgccc 63600
ccgcggcatg gacaccggca ccgcggaact gcccgactcg ctgccccgga tggccgccga 63660
ctacgtcgag cagatccgca ccgtgcagcc caccggcccc taccacctgc tcggctggtc 63720
cttcggcggc aacgtcgtcc aggagatggc ggcccagctc caggacgcgg gagaagaggt 63780
ggccgccctc gtcctgctgg actccagccc cgtggacggc cccgccaccg ccgagcagcg 63840
ggcgggcttc gccgaacagg aggagacggt ggccggcgca ctcaccggtg aggagcacga 63900
ggcgtacctc cgcatcgtcc gcaacaacac ccgcatcctg ctcgcccacc gcacccggaa 63960
gaccaccggc accctgctgc tcgtctccgc cgactccgag acgaaggcgg cactgtggcg 64020
ccccttcgtc tccggcgagg tacgggaaca cgtgctcgac tgcgcccacc gcgacatgct 64080
cctgaacccg gacgtcgtcc ggcggatctg ggacatcgcg gcgggcgagc tggaaccgac 64140
cgacaccgac gacaacgaca acgaccccga ccgggcgtaa cggcccggcc cggcggaccg 64200
aagcccctgc gagacgagga tggccgtggg cgaccccctg tacaccgtca ccaccatgcc 64260
gacgcgacgc cggcccgacc ggccgttcga cccgccggcc gaactgctcg aagcccgccg 64320
ccacggcccc atcagccgct acgtcttccc cggcggcgtc gacggatggc tggtcaccgg 64380
atacgacctc atccggtcgg tgctggccga cccccggttc agctcgcgct gggaactcct 64440
gcgccacccg accgtcgacc acggggacgt cgaactcgaa ccggcgcccc cgggcgagtt 64500
cctcttcatg gacgaaccac gccacggccg ctaccgcaag ccgctgatgg gcaagttcac 64560
cgtgcggcgc atgcggctgc tgacccgacg catcgaggag atcaccgccg aacacctcga 64620
cgccatggaa ctggccggag ggcccaccga cctggtgacc gcctacgcca aacccatccc 64680
cgccgtcacc atctgcgaac tgctgggcgt cccgcacgag gagcgcgcca ccttccagaa 64740
acaggtcgac gccttccggg acctggagtc cgaccgcgac gacctcatag cggcctacca 64800
cgcgacccgc gcccacctcg ccgcgctggt ggccgccaaa cgcgcccgcc ccaccgacga 64860
cgtgctcagc gaactcaccg acggggacct caccgacgag gaactggtcg ggatgtccct 64920
cttcctgctc gcggccggac tcgacaccac catgcacatg atcggtctcg gcaccttcgc 64980
gctgctgcgc caccccgaac agctcgccgc gctgcgcgcc gaccccgcgc tcgccgaccg 65040
ggccgtggag gagctgctgc gctacctgag cgtcggcaag accttcatgc ggacggcact 65100
gcgggacgtg gaactcggcg ggcacaccgt caaggccggc acctcactga tcctgagcta 65160
caacacggcc aaccgcgacc ccgagcgctt caccgacccc caccggctcg acctgcaccg 65220
ccaggagggc gcgcacatcg ccttcggaca cggcatccac cagtgcctgg gccagcaact 65280
ggcccgcgtc cagatgaagg tggcgttccc ggccctggtc aaccgcttcc cgacgctgcg 65340
cctcgccgta cccgcagagg agatcgccct gcgccccgag gcggagatcg cggacgtcta 65400
cggcgtgaag agcctgcccg tcacctggga cgcgtagacg cgtaactgtg gcgaacgtgg 65460
atgccgtccg gcccccgcca cggcagattg tgaccgatcc gctgcccctc ccgtgcacca 65520
gtgaggaacg tcgccatgag tgatcagaca ctgactcaag caccgcgccg gtacaagtcg 65580
ccgcagcagg acagtgcccg ctgggacgac ttcccgctgc gcgagggcga catcgtcgtc 65640
agcagtccgg ccaaggccgg tacgacatgg gtgcagatga tctgcgcgct gcttgtgttc 65700
cagaccccgg aactccccaa gccgctgtcg gccctgtcgc cgtggctgga ccagctcttc 65760
acaccgcagg accagatgta cgcgcagctc gccgagcagg agcaccggcg cgtcatcaag 65820
acgcacgtcc cgctcgacgg actgccgctc gacccgcgcg tcagctacct cgtcgtcaac 65880
cggcaccccc tggaccgggc cctgtccatg taccaccagg tcgccaacgt ccgcgccgag 65940
tggctgcgcg ccttcaacag cgaccaggac tccgagaagt actccgggcg ggcccgcgag 66000
tacctgctga actggtgccg cgccggcgag tccgacggct gggagcagga cgtggccgcg 66060
gccgaactcc accacccgct cgacgcctgg aaccggcgtg acgagccgaa cgtacggctg 66120
ctgcactacg aggacctgtg cgccgacctg gagggccaga tggcggcgct ggccgagtgg 66180
ctgggcatca ccgtggaccc ggccgtctgg ccggagctgg tgcgggcggc gaccttcgac 66240
gagatgaagg gccgcgcgga acacctggcg ccggacaagg agatcctcgc ggaccccgcg 66300
gagttcttcc gctcggggcg ctccggcggc gcccgcggcg tcctgaccga cgccgacctc 66360
gacgcctatc acgagcgcgt cggtgccctc gccccgaagc cgttcctcga ctggctgcac 66420
ggcggagcgg cgggcgcccg cccgtgacgc ctgcccggcg gcccgccgac gcggcacttc 66480
gccgcccaca ccacgactcg aaggagaccc cgctgtgacc ccgtccgcgc caccgcagcc 66540
cgccaccgcc gcccggcccg ccaccgcccc cgccgacgcc ctcgacgtcc gccgcgtctc 66600
cggcgccctc ggggccgagg tccgcggcat cgacctcaac gacctcaccg acgcgcagtt 66660
cgaccggatc cacgagctga tgctcgaaca cctcgtgctg ttcttcccgg accaggagaa 66720
gctgaccccc gccgggcacg tggcgttcgg ccggcgcttc ggcgaggtgg aggtccaccc 66780
cttcctgccc aagctggcgg accaccccga gatcacggtg atcgaacccg acaagggcgg 66840
caaggccgac gagtggcaca tcgacgtcag cttcagcccc agcccgccga tcgcgtcgat 66900
cctgcacctg atcgacaccc cctccgcggg cggcgacacc atgtggagca accagtaccg 66960
ggcgtacgag acgctctccg agccgttccg ggagatgctc gaagggctca ccgcggtcca 67020
cgtcctgaag atcccgccgg tcgtcgagat gtccgcagag caccccgtcg tccgcgtcca 67080
cccggtgacc ggacgcaagt cgctctacgt cacccggatg tggacctcgc acatcccgca 67140
gctcacccgg caggagagcg acaccgtcct gcagcacctg ttcgagcact ccgagcagcc 67200
cgccttcacc ctccggcacc gctgggaccc gcacaccgtg gccctgtggg acaaccgcgt 67260
cacccagcac atcgccatca acgactacca ggagcaccgc cgcggccagc gcgtcacggt 67320
caacggcgac gtgccctcca gcaacacccc ccgccggccc gagtaccggc gcaacggtga 67380
cgagcggtac tacccgcgcc gcatcaacgc caaggtcggc tactgagccg gtcccgcacc 67440
ccgcggagga catccccacg caggaaagac ggaggaagac gtgcgcggaa cccagcaacc 67500
ggccggccgg gcacccgggc cgccgccgca gcgagcagcc gccgggtccc cgggactggc 67560
cggtgtgggc accgccgtac cgcccgtctc gtacacccag cgggaggtcc tcgacacctt 67620
cggcatcacc gaccggcgca tccgctccgt cttcctcggc ggcaacatcg agcgccgcaa 67680
cctcaccctg cccccgatcg gccccgacgg gacacctctt gaggagtccc agggcgattt 67740
gctgcgcaag cacaccgaga ccgggctgcg gatgggccgg gaggcggtcg aacgctgcct 67800
ggcggacgcc ggcgcggaac tcgacgacgt ccgctacctg tgctgcgtca cctccaccgg 67860
actgctcacg cccggtctct ccgcgctcct catccgggac ctcggcatcc atccgtcctg 67920
ccagcgcctg gacgtcgtcg gcatgggctg caacgccggg ctcaacgcgc tcaacgccgt 67980
cgcgggctgg gccggcggcc accccggcga actcgccctg atggtctgcg tggaggcctg 68040
ctccgccgcc tacgtcttcg acggcaccat gcgctcctcg gtggtcaaca gcctgttcgg 68100
ggacggcgcg gcggccgtcg ccgtccgcgc ccgggagcac cccggcgacg aggcgccgcc 68160
cggccccgaa ctgctgaggt tcgccagcca catcatcccc gaggccgtct ccgcgatgcg 68220
gtacgactgg gacgacgcgc acggcaagtt cagcttctac ctcgacgccg acgtgcccta 68280
cgtcgtcggc gcgcacgccg agacggcggt ctcccgcctc ctggacggca ccggactggg 68340
caccggggac atcgaccact gggtggtgca ctccggcggc aagaaggtca tcgacgcgat 68400
ccgggtgaac ctcgaactgt cccggcacga cgtgcggcac accaccggag tgctgcgcga 68460
ccacggcaac ctctccagcg gatcgttcct gttctcctac gagcggctgc gcgacgagaa 68520
ggccgccgtc cccggcgacc tcggagtcct gatgacgatg gggccgggct cgaccatcga 68580
gacggccctg gtgcgctggt gaggaaagga gctggtacga cgatgaagac cggacccgac 68640
cggacgggac tgcccgggga actgggcatc ctggtccggc tggacggcgg cagcccgctg 68700
cccgaactga ccgccgcgct ggacgcggtc tgcgaacagg ccggggaacg gggcgaacgg 68760
acggtcgtgg tcctgcggtt caccccggca ccccaccagc cgcgcgagtg gcccggcggt 68820
gtctccatcc aggaggtcaa gcgctgggag cgggccgtgc gccgcctgga acggctcgac 68880
cacgtcaaca tcgccgccgt ggaggggacg tgcggcggcc cggtcctcga cctgctgctg 68940
gccgcggact accggatcgc ggggcccgac ctgcgcctgc tgctgcccgt caacgagggg 69000
cacttctggc ccggcatgac cctctaccgg ctcgtgcagc acatcgggct ggcccgcgcc 69060
cgccggatcg tgctctggga ctccgccatc gaactcggcg acgccacgga actcggcatc 69120
gtcgaccagg tcagcgagga cctcaccgag gccgtccaca ccgcggccgt cctgcgcggc 69180
cggctctccg accgggagac ccgcatccgc cggcggctcc tggaggaggc cgcctccgcc 69240
gagtacgagg acgcgctcgg cgtccacctg gccgcctgcg accgcgagtt gcgacgcctg 69300
tccggcaacg tcccggaacc gacggaggcg ccgcagtgac cacccggccc gccgcccccg 69360
ccgcccccac cggccccgcc gcccccgtcc tgctctccgg ccgcttcgac gacgacgcac 69420
ggcatctcgc cgaacaggcc gtggcagccg agcagatcct cgcggcgctg cccccggtcc 69480
ccgggaggtc ccggggcgag cggacccgcg ccgcgaccgc acacgcggag gtccgcgccg 69540
tccggcggga cttcctcgcc aggcacaccg acaccgtcta cgggctgctc accgacggcc 69600
tgacccggcg cccgcgcctg cccgacctcg tggacgccgc cgccgaccgg gtgcccggcc 69660
tggtgcccac ccgtgcgcag atggccgccg aactccgctt cgtccaggcc gagaaggaag 69720
gccgcgagat cgaccagggc cggttctgcg gcgccgtgct gcgctcgccc accgccggcc 69780
ggcacctcgt ggagacgatg ctcgggccca ccccgcgcgc cctggaactc ctggaccgct 69840
tccgcgccga gggccgcgtc gaactggacg ccgtccacgt cgaacgccgc ggcaccgtgg 69900
cccacgtcga gttccgcaac ccgggacggc tcaacgccga gaacgcccgg ctcgtcgcgg 69960
acctcgacac cgccgtcgac ctcgtcctgc tcgacgacac ggtccgcgtc ggcgtcctgc 70020
gcggcggcac caccgaccac cccgcccacc gggggcggcg cgtcttcagc gccggcatcg 70080
acctcaccga cctgcgcgac ggccggatcc cgctggtcgg cttcctcctc gcccgggaac 70140
tcggctacgt caacaagctg ctccacggcc tgctgaccga cccggccccc ggcgccggca 70200
gcgaacggta cgtcaccaaa ccgtggatcg gggccgtcga caccttcgcc atcggcggcg 70260
gcatgcaact cctgctcacc ctcgaccacg tcgtcgccga agagggcgcc tacgtcagcc 70320
tgcccgccgc cgaggagggc atcgtgcccg gcgcgggcaa cctccggctc acccggcaga 70380
cgggagcccg cctcgcccgg caggtcgtgc tcggcggacg ccggatcgcc gccaccggcc 70440
ccgaggccgc cgcggtctac gacgaggtcg tccccgccga ccgcatggac gaggcggtcg 70500
aacgcgccgc ggcggccctc gccgcccccg ccgtcgccgc caaccggcgg atgctcgccc 70560
tcgccgagga acccctcgac cacttccgca cctacctcgc cgagttcgcc ttcgcccagg 70620
cggaccgcgc ctacgccccg gacgtcctcg acaaggtcga acgccgctgg caggagcgcg 70680
agcggcggcg cgccgcacga gggagccgga catgaccggt gcccccgacc tgagcgcggc 70740
ggacctgcac gggtccctcc aggacccggt gctcggcgcc atcggcttcc tcaacgaggt 70800
gatggaccgc caccccgacg ccatctcctt cgcccccggc gccccgcacc ccgacttcgt 70860
ccagggcctc gacctgcggg ccctgaccga ccgcttcctc acccacctgc gcaccgaccg 70920
cggcctcgac ccgtcccgcg ccgaacgcgt gctctacgag tacggccccg cccagggact 70980
catcaacgac ctcgtgaccg aggccctccg caccgaccag ggcatccacg ccgcacccga 71040
ggacgtcgtg atcaccgtgg gcgcccagga ggccatgctc ctcaccctgc gggccctgta 71100
ccgggacgct gcccacgacg tgctcgccgt ggccgacccg tgcttcccgg gcatcgtcgg 71160
cgccgcacga ctcctcggca tccccgtcac cgacgtccgc gaggacgccg ccggactcga 71220
cgtggagcac ctcgccgccc gctgccggca ggcccggtcc gaagggcgcc gcgtccgcgc 71280
ctgctacgtc gcccccgact tctccaaccc cggcggcgcc cggatgaccc tcgacgcccg 71340
gcacgcgctg ctcgacctgg cggaacgcga ggacctgctg ctcgtcgagg acaacgccta 71400
cgccttcacc gcccccgagg acgacgccct gcccggcctc aaggccctcg acacccggcg 71460
gcgcgtcgtc cacctgggca cgttcgccaa ggtcgggttc cccggggccc gcgtcggcta 71520
cgccgtcgcc gaccagcgcg tcggccgggc cggcggcacc cggtccctcg cccgggagct 71580
cgccgacctc aagacgatgg tcaccgtcaa cacctcgccc ctgtcccagg ccgtcgtcgg 71640
cggcctcctg ctggaacacg ggcgctccct gcgggccctg gcccggcgca aggccgaccg 71700
ctaccggtcc aacctcgcgc acctgaccga cgctctggaa cggcacctga ccgacgacgc 71760
gccggcgggc gtctcctggc accgcccggc cggcggcttc ttcgcccgcg tcgacctgcc 71820
cgtacccgcc gacctcgccc tcctggaggt ctcggcggac cgctacggcg tgctgtggac 71880
gccgatgcgg cagttctccc tcaccgaccg cggcgaccgg cagatccggc tgtcgtgcag 71940
ctacctggag cccgaccgga tcgagaccgg tgtgcggcgc ctcgcggcct tcctgaaaaa 72000
ggaggccgcg ggatgacgag cggacaccgc acgcgggccg ccaccccccg acgccccacg 72060
aaaggccccc gccgatgcgc ctgaacagtt acgacgactt caccccgctg aaggaggtcg 72120
tcctcggctc ggcggacggc tacctcgacc gcgtgcgcga catgtcgttc gacatgttca 72180
tcagcgacaa cctctccgga gcccgcggct actacccctc catctccacc tggcgcgacg 72240
gcgaggaacg ccgcgaccgc aacacccccc accgcctggc gcagaaggag cgcttcctcg 72300
gcgaactcgt cgaggacgtc gaaggactcg cggcgcagct caccgcgctc ggcgtcacgg 72360
tgcaccggcc cctgccgccc gcccgggaga cgacccgggt cgccaccccc gccttcgagg 72420
ccgccgtcac accgccgctg aacctccgcg acaacaccct gatcatgggc gacgagatca 72480
tcgagacccc gcccatgctg cacgaccgct acttcgagac ccagttcctc aagccggtct 72540
tcctggagta cttccgcggc ggcgcccgct ggacgaccat gccgcgcccg ctgatgaccg 72600
accactcctt cgaccccgcc aacgtcgccc acgccgcacc gaacatcgaa gtccccctcg 72660
acccgcggga gtcgccgtac gacgtgggca tcgaaccgat gatcgacgga gccaactgcc 72720
tgcggctggg ccgcgacctg atcgtcaacg tctccaacgc caaccacgcc ctcgcgctcg 72780
actggctgac gcgccacctc gacggacggt tccgcgtgca ccgcatggac cggctgaccc 72840
agagccacat cgactccgtc gtggtcccgc tgcgccccgg caccctgctg ctgcgcgacc 72900
cgggcgtcgt ggactacctg cccgaggccc tgcgcggctg ggacgtcgtg gtcccgccgc 72960
cgcccggcgt cgacgactac ccgcagtacg agaacgacga cccgatcccc gccagcccct 73020
acatcgacct gaacgtgctc tccgtcgacg aggacaccgt cctggtcaac gacgcctgca 73080
agaccctcgt ggccacgctg gagcagcacg ggttcaccgt cgtccccgtc cgccaccgcc 73140
accggcgcct gttcggcggg ggcttccact gcttcaccct cgacacggtg cgcaccggcg 73200
gcgccgagga ctacctggcc tgaacgtccc gccccgaccg catgccgacc caccgacagc 73260
aggagcgtcc cgatgcagga aacagcaccc gacccggtcg ccgggcggca gccggcaccc 73320
gccgggccgg aggacgccgt cgcggccctc gcccacgcct gcgcggcggc cctggcctcg 73380
gacccggcct ccgtacggct cgccgcgcgg ctgaaggccg cctcggtgct cctgggcagg 73440
gcctccccgg cccccgacgc ctcctggcgc gatctggtgc gccacgtggg caccgacgac 73500
ggacggagcg aggcggagga ggcctgggcg aacgcgtcgg ccgcggccgg cgcgaccgcc 73560
gaacgcctcg gagggtacga gctgcgcgcg ctgcggctga tgacggacga cccggacctg 73620
ccgcacaccc ggcacgggct cctgacgccg gaggagaccg aggccgtcgt cgcacgcggc 73680
gccggaccgc tgcggccgct gccgggccgc cgcttccacg aactcttcga ggaacgcgtc 73740
cggcgccacc ccgacgccgt ggccgtcgtg cacgggacca ccacgcgcac gtaccgcgaa 73800
ctcaacgacg acgccaaccg gatcgccggg acactgctgc gggaggggct tgccccggag 73860
gacgtcgtgg ccgtcgtcac cggacgccac ccgctctggc cggccgcggt gctcgccgtc 73920
ttcaaggcgg gcggctgcta cctgccgctg gagccggagt tccccgcctc gcgcatcgcc 73980
aggaccctca cccgcagcga gtgccgctgg gtgctctccg atccggacgt gccgtccctc 74040
gacgaggccc tgaacggccg cgacacgatc cgccggatga ccgtcgggga cctcgcccgc 74100
ggcgacggac ccacgcggga cccgggcgtc gccgtggccg gggaccagct ggcgtacgtc 74160
tacttcacgt cggggtccac cggtgagccc aagggtgcca tgtgcgagca cgacggcttc 74220
ctcaaccacc tctacgccaa gatcgaggac ctcggcgtcc aggagggcga caccgtcggg 74280
cagaccgccc cgcagtgctt cgacatctcc ctgtggcagc tggtctcccc gttcctcgtc 74340
ggcggacgcg tcctgctggt cgagcaggag gccgtactgg acgtggcccg gttcacggac 74400
ctcgtcaacc ggcaccgcgt ccaggtcctc caactcgtgc ccacctacct cgaactcgtc 74460
ctcgcggagg ccgcccgggg ccgcgccgcc ctgccgcacc tgcgcgtcat ggccgtgacc 74520
ggcgaggcgc tcaagaagga actggtgcgc cgctggttcg agcagttccc cggcgtgccc 74580
ctcgtcaact gctacggcct caccgaggtg agcgacgact cccaccacgg cgtcatgcgc 74640
accgtgccgg accaccgctc ggtgcccctc ggcgacacca tccgcaactg ccgcgtctac 74700
gtcatggacg aacagctcca cctcgtcccc gacggcgctc cgggcgagat cgtcatcgcc 74760
ggtgtgtgcg tcggccgcgg ctacgtcaac gaccccgacc gcaccgccgc cgtctaccac 74820
caggaccccc tacggcccgc cgaacgcctc taccgctccg gcgacttcgg ccgccggctc 74880
ccctccggcg aactggagta cctgggccgg cgcgacgccc aggtgaagat cagcggcttc 74940
cgcatcgaga tcggcgagat cgaggaccgg ctgctccagg tccccggcgt ccgcgacggc 75000
gccgtcgtcg tcgccggcac cgacgacgcg ccccagctcg tcgcctacta cacgggcgag 75060
gacgcccccg acggagcggg caccgcacac gccctgggca ccgccctgcc ccactacatg 75120
gttccgcacc ggctccaccg cgtccgtgaa ctccccctgt ccggcaacgg gaagatcgac 75180
aagaaggccc tcaccgcccg cgcccgcgac aacgcgcccg cccgggggag cgccggcacc 75240
ggcgccccgc ggctggacac ccccgccgaa cgccgcgtcg cagccgtctg ggcccgcctg 75300
ctgcacgtgc cggaagaccg catcggacgc gacagccgct tcaccgacct cggcggcacc 75360
tccctcaccg cgatccgcct ggccatcgaa ctcgaccgca gggtgaccgt cgccgaactc 75420
cgcgacaccc ccacggtcgc cgatgtcgcc gccctgctgg acggcaagtc cgctcccgcc 75480
cgggcgaccg ccccggccgg ccccgccccc gcgaccaccc cggccggccc cgccgagggc 75540
ccggcgccgc tgccggtcct cgactgccgc accgccgacc ccgaccccgc cgcccgcgcc 75600
gcagcgcacc gcgccccggc gctcgacgcc ctcgccgcct ccggcgccgt catgctccgc 75660
ggcgtcgatg cccgcacccc cgccgacgtc gcgcgcgtcg cggcggcgct cggcatcgaa 75720
cccctgacgg aacgggaggg cttcgcgccc cgcaccgcac tcgcccccgg cgtgtactcc 75780
ggcagccact ggcccgccga ggacccgatg tgcatgcacc acgagctgag ccacgccgcc 75840
accgtccccg gcaccctgct cttcgcgtgc ctcaccgcgc ccgacggcgg aggccgcacc 75900
accgtcgccg actcccagca ggtactcgcc gcgctcccgt ccgacctgac cgcccgcttc 75960
gccgagcacg gctggctgct gcgccgtgcc taccacgacg tcgggctctc ctggcccgag 76020
gcgttcggca gcaccgaccg cgcgtcggtc gacgcgtact gcgccgaagc cgccgtcgaa 76080
cccacctggc tcgccggcgg cagcctgttc acccgccagc gccgcgccgc ggtggtgccc 76140
cacccgcgca ccggggctcc ctgctggttc aaccagatcg ccttcctgaa cggcctcacc 76200
ctcgaacccg cgatccggga gtacctcacg gacgtctacg gacccggcgg gctgcccttc 76260
gacaccgccg cgggcgacgg cggccccgtc accgccggca cggtcgagga gatcaacgcc 76320
gtctacgacc ggttcaccgt cggggagccc tggcaggagg gcgacgtcct gctcgtcgac 76380
aacatccgca ccgcccacgc ccgcgaaccc tacgagggcg cccgggagat cgccgtcgtc 76440
ctcggcgacc cggtacggct gcccggccac gtcctgccgc tgagcgacgg cgggccgtcg 76500
tgacgcgtcc cggacccgcc gtccgcgacg gccggcccgc acccgacgcc gccgggccgg 76560
ccaccgcccc ggcgacgtac gcccaggaac gtgcctggct ggcctcccgg ctggcccacg 76620
acccgccgac ctactgcgcc gtcgacgagt tccccctgca cgcggccgtg accgcgaacg 76680
acctcgtgca cgccctgtac gtcctcatgg accgccacga acccctgcgc accgtcttgc 76740
ggaccgtgga cggacggctc cgccaggagg tgcacccccg ccccgagccg cggatcgaac 76800
tggccgacct gagcgcgcac gaccacgccg cacaggccga ggagcggcgt tccctgcgcg 76860
cccggctggc ccgcaccccg ttcgaccccc accgggcacc ccagtggcgc gcggccgtcc 76920
tgaacctggg ggagggggcc tggtcggtgg tcttcgcggc ccaccacacg gtgtacgaca 76980
ccgcctccgg gttcaacgtc cacgccgaac tcaccgaact ctgcgccgcc gccgaggaag 77040
gacgcgaggc gcgcctgccc cggctgcccc tcggctacgg cgcgtacgcg cggcgcgaac 77100
gcgagcgggc acgcaccggc ggcgccgacg cggctgccgc ccactggcgg acccggctgc 77160
gcgggctgcc ccccgtgcac accgtcccgc tggaccggcc gcgcccgccc gcccgcacct 77220
tccgcggggc cgaggtgcgc gccgccctgc cggtcggcgt caccgcggcc ctgaccggtg 77280
ccgcccggca ccacgggacc cgccccgtca tgctgttcct cgccgcctgg accgcgctgc 77340
tccaccacca ctccggcgcc gccgacttcg ccgtcggcct gcccgtcgcc ggccgcgacg 77400
accccgccac ccgcgccatg gtcggcacct tcgtcaacat gcgcgtcctg cgggccgacc 77460
tctccggcga ccccgacggc accgaactgg tccgccgcac caccaccgcc gtccgcgccg 77520
gggagaagtt cgacatccct ttccagagcc tcgtcgaact cctcgcggcg ccacgcctgc 77580
ccggcgtacc gcccctctac cagctcgctt tcaaccacac ccccgccgac ggtctgggcc 77640
cgcccgtctc ctcctgcgag gaggacctcc tcctcgacgt cgccggcagc ggtctccgcc 77700
tcgtctacga cgccgccctc ttcgaccgct ccaccgccga cctgctgctc gccgactacc 77760
tgcggttgct cgccgtcctc ctcgacgctc ccggcacccg cctctccgcg ctgctggccg 77820
cccccgcccc ccggcacacg ccccgctccg cgggcgccgc gccggccgca cggaccgccc 77880
cggccgcgcg gaccgccccg cgcgacgcgg ccgaggaacg ggtggcggcc gtctggcgga 77940
cgctgctcgg caccgacagc ggcaccgtcg acgtacacga ggacttcttc accgcgggcg 78000
gccactcgct ccaggcgctg cgcctgctgg cccgcctcgc cccggcgcgg ggtagcggtc 78060
ccacgctgcg gaccttcttc gcagacccga cggtggccgg actcgccacc gccctgaaaa 78120
gcaccccgga cgggaggacg gcatggcggt gaccggccgg atcgacggcg caccgagcga 78180
cgtgtggcac gaggaggtgc tcgccgcgca gttcgcccac gaggccgaac acctgctgcc 78240
ccactacgtc gccgtcgagc gggccctcct gcgcgaatac ctgaggatgg ggctggtcga 78300
caccgcgggc gccgcgtccc tcgacgcccg cctcggcgcg ctcgacgccg acgcgatacg 78360
cgccgacccg cagcgcaaca tgtccgacat ctccttcgcg ctggaacacc acgtgcagtc 78420
cggccccacc ccgcccttcg ccgcctggca cgtcgaccgc agccgcaacg acgcccaggt 78480
gtgcgcccag ctcatggcag cacgcaccga cttcaccgcc gtcgcggcgg acctcctgga 78540
cctcggccgg gccgtcaccg ccctcgccgc ccgccacacc gacaccccca tgcccggcta 78600
cacccacggc caggccgcgc agatcatcac ccccggctac cacctcgccg ccctcgccgc 78660
cgagaccaac gccgcactcc gccgcatgct gcacacctac gacgagacgg acgcctgccc 78720
gctgggatcc ggcgccatgg ccggacagga actgccctgg gaccgtgacc ggctcgccgc 78780
ccacctcggc ttcgcccgcg cccagccgca cgcgctggtc ggtgtcgcct cccgcacctg 78840
gaccaccgcc atggcctcgg acctcgccgg ttacgccgcc gtcctcagcc gcttcaccac 78900
cgacttcatg acctggggcg gcagcggctt cggcttcctc gacctgcccg acgacctcgc 78960
gggcatctcc gcggccatgc cgcagaagcg caacttcccc gtactcgaac gcatccgcgg 79020
acgctgcgcc cacgtcgtcg gccgggccgc cgacctcgtc gccgggcagc gcaacacccc 79080
gtacagcaac accgtggagg tgtccaagga gaccggcgcc cacctgcaca cccaaatccg 79140
ggccatgcgc tcgctgctgc gtctgaccca cgccgtcgtc accggcacca cctaccgcac 79200
cgaccggatg cgcggcgcct gcgccgagga ccacctcggc ggcttcaccc tcgccaaccg 79260
cctcaccctg gactgcggca tcccctggcg caccgcccag atcgtcgccg gacgctacgt 79320
caagcgcgcc gtcgagcagg gactgcgcgc cgaccgcccc gacgccgacc tgctgcgggc 79380
ctgcgccgcc gaatccggtc acgaggccga accggccgcc gaactgctcg ccgagtcctt 79440
cgacatcgac gccggactgc gcgccaagcg ctcggccggc tccgctcacc ccgaccaggt 79500
cgcgcggctc ttggccgacg agtcgcgcga actcgaccgg ctcgacgccg agtggtcgcg 79560
caggaccgca caccggacgg ccgcggcacg tcacctcgaa acccccgtca ccgcacggga 79620
ccaggcatga cggggctgcc ggcggccgcc cgccgggtcg ccgtggacat cgccgagggc 79680
accggcgccg cctgcggcac cttcggggaa ctcctccagg gcgtcctgcc cgacggcacg 79740
gccttcctgg ccaccctccc gatcagcctc ggcagccgcg cccggttccg cttcgacccg 79800
ctcggcccgc tccacgtcta ccccgcgcac aagaccaagt cgctcacgct ggcgagggcc 79860
atgctcgaca cccacggcga cggcggcggg ggcaccctcc tgctggacag cgacctgctc 79920
gtcggcaagg gcctcgccag ttcctccgcc gacctcgtcg cgacggcccg cggcgtcggc 79980
accgtactcg gactggacac ctcaccggcc gccgtcgagg actggctgcg ccccgtcgaa 80040
cccaccgacg gggtcatgca ccccggcgtc gtcgtcttcg aacaccgtgc cgtccggctc 80100
cgcgcccgcc tcggcgtgct gccgcccgtc accgtcgtcg ccgtcgacga gggcggacac 80160
ctcgacaccg tcgcccacaa ccggcgcccc caccccgtgc cgcccggact tcggcacgag 80220
tacgcgcgac tcgtcgacga cctcgcccgc gccgtgcgcg gcgccgacct gagcgccgtc 80280
ggcgcggtca gcacccgcag cgccgtcctc aaccagcgcc ggctgcccaa gcgcaacctc 80340
gacgccatga ccgccatcgc cgaccgcgtc ggcgcccccg gagtggtctg cacgcacagc 80400
ggcaccatgc tcgggctgct cctcgacacc accgccgacg ggcaccggga gaggctcgca 80460
gcggcgcgcg ccgcctgctc cgagcttccc ggaaccctct ccgtctaccg ctcggccgcc 80520
gcggaggcgc cggagacgcg gtagccggag aggggcgccg gatcacaccg gagcggactc 80580
cgcgcccttc gtccagtgca tgccgtcctg agccacgacc agcccgtcct tgacggccgg 80640
aacgtcgtcg tccgcctcgc cgaaggccgc ctgcatctgg atgcggtgcc cctcccagtg 80700
gacgtcgcgg gactgctgcc gcaggtcctt cttgcgctgg tcgcggtagt cgtcggaggt 80760
cagcgccgtg tcgtccgagg cacccccgcc gaccagcccg acgaacgccc cggcgccggg 80820
cgcggagtca cgggtgacgc gccgggcgtc gtcgaagtac tgctgctcgt cccgggtgac 80880
gtcgtagaag ctgacgagga agtcgtggaa ggtctggtac tccttgcggt accgggcctc 80940
gtactccgcg aagcactcct cttcctccag gtcgccgcgg agcacgctgt tgatggaacg 81000
cgcggccagc agcgcactga acgtggccat gtgcacgccg gaggagaaca gcgggtcgat 81060
gaagcccacc gcgtcgccca ccagcgtcag gcccggccgc cagaagctgt cgtgcaggta 81120
cgagtagtcc ttgcgcaccc ggacctcgcc gtacggcccg ctggtgaccc gttccgcctc 81180
cgacaggtag tcggagacga gcgggcagtc ggcgatcatc ccggccagtg cctcgccgcg 81240
gtcgccccgg atccggtcgg cgcactcctt gcgcaccacc gcgcccaccg aggtgagggt 81300
gtcggacagc gggatgtacc agaaccagcc cgagtcgaag gcgacacagg tgatgttgcc 81360
gctgttcggc gccggcggcc gcttgccgcc ctcgaagtag ccgtagagcg cgatgttctg 81420
gaagaactcc gagtagcggc gctcgccgcc gacgcgtccc tgcagccggc tctggttgcc 81480
ggaggcgtcg acgacgaacc gcgcgcgcgt ctcccgctcg gtgccgtcct cgtccgtgca 81540
gcgcaccccg ctcacccggc cgccgtcctc caggacgtcg cggaccgcgc agcgctcacg 81600
gaccacgacg cccttgcgcc gggcgttgtc gagcagcaac tggtcgaact tcatgcgctc 81660
gacctggtag gcgtacgagg tggggcccgc gaacttctcg gagagcgcga agtcgaaggt 81720
ccacggttcg gtgttggagc cccagcggaa cgtgccgccg tgcttcttca cgaacccggc 81780
actgtgcagt tcctcggaca cgccgaggag cgcacagatc ccgtgcaccg tggacggcag 81840
cagggactca ccgatctggt gccgggggaa gctctccttc tccagcagca ggacacggtg 81900
cccctgcatg gccacgaacg tcgcggccga cgacccggcg gggccgcctc cgacgacgat 81960
cacgtcgaac gactccgccg attccgaatc gccggtactg gtcatggtgg cccttccgac 82020
cgagggagac cggccgacgg gaccggccgg cggcgaccac ggcgcggtcg tccggacgga 82080
agcctcgcgg gcaacgaccc ccggaacatc ggtgtcagcc accgttacgc gcggcggcgc 82140
cccgcgctca caccatcggc gagaagaagt acgtgttgcg ggcctcgaag agcaggtcct 82200
cgttcagccg gaagaagtcg gcgaaccgca ggtccacctc gctgccgtcc ttcagtgtcc 82260
cgcggaactc accctccacg gcggcgtcgg ccgccccgac caccagcctg acgaccgtgt 82320
gactccccgt gtcgatgacc cgcgcaccgc ggtagaaggc gtcgagcccg tcccgtccga 82380
cgatcggctc gtagccggga cgctcgtaca ccgcgcggtc ggcgaagagc ccgacgactc 82440
cccggacgtc tccgtcgtcc accaacgcgt agtagcggcg gactcgttcg gcgatctggt 82500
ccacctcgaa agcggtcatg ccgtttcctt ccggtcatga gggcgctcgg cgctccgcgc 82560
gacggggagc cggccggcgc cgacggtggg gggggaagag ggatccggtc cgcggtgcgc 82620
gagaacggat ccggcaggcg acaggcgaac ggcctggctg cgcgagttct gcgagagctg 82680
tgcgactcct gcaagactag acacacttgg gtgcgttgtg gcagcccgcc gggaaaagaa 82740
gtccggtggg cggcttcgtc gttgggaccg gcaccggtcg gccccgggtc accgctcacg 82800
gcgggcgggg gcggcgtccg cgccgccccg cggccgcccc agggcgctcc gcaactcctt 82860
ccgccccgac agaccgagct tgcggtagac ggaggtcagg tgcagttcca ccgtgcggcg 82920
cgtcacgaag agcgcctccg cgatctgcag gttggtccgc cccgccgccg ccagccgtgc 82980
cacctgcttc tcgctgcggg tgagttcgcc cgcaccgcgc gaggcggcgc gccgcggccg 83040
ggcccccgcg ctgagcagca gaccgtgcgc ctcgtcgtgc agggcgtggg ccccgagcgc 83100
gtgcgactcg tcccagcccc ggcgcagcac cttccgggcc ggtccgacgt gcccggcccg 83160
cagcagcgca cggccgcggg ccacccgggt ccgtgccagg gagagcgcgg ccccgctctg 83220
cgccagcacg ctctcggcgt cctcgagaat ctgcagccgc ccgcgttccc cgcccgccga 83280
ggccagcagc tccagcgccg tgcccagggc gacggggaag tcggcggagt gcgcgagatc 83340
cacggcccgg gtggccagcc ggcctgcctc ggccgggtcc ccggcggcca ggtgggcgtg 83400
gccggcccag taccaccaag gtgaggcggc cgggttcgtc cgctgccaca gctcctgccg 83460
gcggccgcac tccgtcaggt ccgccaccgc ggccaccggg tcgtcctggg ccagccggag 83520
gcgcccgcgg gcggcgaggt actcgctcca ctgccaggcg tcgtcgatcg cgtccggcgg 83580
caccgtaccg gccagggcgt cggccgacac gacgtcgccc cggtcgagca gcgcgtgcag 83640
ccggaccgcc agcgccagcg tctggtggtg ggtgacccgt gcgccgggcg tcgaccccag 83700
ggcctgggcc gtcgagcgga gcgccaggtc gatacgcccc agccgctggg cggcctcacc 83760
gtccagggcg agcaggcccg cccgcagatg gtccggcacg gcgtcggcac cctccagcag 83820
ctgccggtac acgtgggcgg cgtcggcggg acggtccgcg tacgccagcg cggcggccgc 83880
ggcggccagc gagacggggg agtcggtgag cggggtaccg ctcagcagca ccctgtccgc 83940
cgcggacagc gcctgcggaa ggcgctcgcc ccggctcacc gcgatgaagg cacggcccgc 84000
cagcagggcc cgctcctccg cggtcgtgcc gggcaggtcc aggcgcagcg acaccccttc 84060
gagcaggtcc gtgtaggcct cgcggttgtc ggtcgcggcc agcagcatgt ccgcctccag 84120
cagctggagg cgcgcccgcc cggagggcga accggtgtcc tgggcggcca gcagctgagc 84180
cgcacgtccc gtcctgccgg tgcgggtcag ggcgccgacg agtgcgctga gcgccgtcag 84240
gcgcaggtcg gggccgggca ggcggtccag cacggacgtc aggtgcccga tgccggactc 84300
cgcgtccacc ctgctctcgg cgatgcccag ttccatcacc agcaccgggt cgcaggtgtc 84360
ctcgcggccg ggcgggacgc aggaccgcag taacctcacc gcgtgttccg cggccccgtg 84420
caggagcgcc gtgcgggcct cctcccgcag cagggcccgc gcccacggct cccgcgcgac 84480
ggccggcgac gccagcaggt ggccggcgat gtcggcggcc ggtgccccgc tgtcgtgcag 84540
cagccgggcg gcgcgcccgt gcaggtccgt ccgggtcctg gacggggtgc ccgtcaggac 84600
cgcgtgccgg acggcggggt gagcgaggga ccacgtgtcc gcggcggagg cccgggccag 84660
cccgaccgcc tccagcctgc gcagggaacg ggtgaacgcg gtcgtctcca cccgcgccag 84720
cccggccccg gtcgtggtcg cggtcccgtc gcccagcacg gccatcgcct gtgccgcgcg 84780
caccgcgacg ggggactgcc cgtgcaggag acgccgcacc cgtgtaccga acaccgggat 84840
gtcgcccccg ctcgccgctt cgagaccggc gcccgtcagc ggcaggcgca gctcgcccag 84900
tcccgcgacc agccccgtca ccagtgaggg gatgccgccg gtcgcggcca ggcagcccgc 84960
ctggaacccg ggctcgacgg cggtccccgc cacccggcgg accaccgtgg cgacacccgg 85020
cccggagagc ggccggggcc tgagcacctc gagcgtcgaa cgggtcgccc attccacggg 85080
tgcggcctgc tcctcgcggt cgcgccagcc gagggccagc aggaccggca ggtcgtgccg 85140
ggtccgcatg agacggacga gcgcccggat cgactccagg tcggcgcggt cggcgtcgtc 85200
gaccgacagg agcgtcggac gtgtcaccga ggcggagccc accacctgcc ggtaggtgag 85260
gagcgggccg tggaggggtg gtgcggcggt gccatcgggc gaggcgaacg gggcgcgtgc 85320
ccgcccgccc cgatcgccgg accgctcggc ccggtcaccg gaccgcccgc cccgggcggg 85380
ggcgcgtccg tcggcggccg aggtgtcgag ggccgcggtg ccgagcggag cgcccggaga 85440
gccgaagcgg agcatccgtt cccgcgcccc cgccgtttcg acgacgcgca gaccgcggcg 85500
ctcggcctcc tcggccagcg cacgcaggag cgccgtcctg ccgataccgg ccggcccctt 85560
gacgacgacg agaccggtgc gccccgccgc ggtacggcgg acgaggtcgc gcagaacagc 85620
ggtctcctgc tcacgttcga cgagtcgcgg atgtgtccga ccggccgaca gctcttggtc 85680
gtgggcgccc gacgtagtga tactgaccgc ctctctgggc cgtgcacccg gtcctgatca 85740
caccatgatc gagtgaaatc gaccttagga agcggaatcc tgctcggtca agcaaacctt 85800
cgcgcggtgc gaaaacactg tggtcccggg gttcggtgcc gttcattccg cgccgatgtc 85860
cggtggaagg gcatggcgcc cgctgatgtc gagcttgcgg tacgcgttgg tcaggtacct 85920
ctcgatcatg cgcctggaca cctggagctc acgcgcgatg tccgcgttgt gcagtccggc 85980
ggccgccagc ctggcgaccc gcgcctcgga cggggtgagt tcgagccgct gctcgggcac 86040
ggcgggacgc cggccgatct gctcccggat ctgccgcgtc acccggtccg caccgctcac 86100
gacggacagc tcgcgggccc gttccagcgc gtcggcggcc cgccgcccgt ccacgccctc 86160
cctgctgccg taggcgtaca gcgcccggca cagctcgtgg gcgttcgtgg accgctccag 86220
cacggagacc gcctccgcca gcagttccgt tccccggcgg ccgggcgtga cgcggccgag 86280
cgccaccagt gcccgcccct ccacggacgg tgccccccac gtgcgggcct gctccacctc 86340
cagccgtgcc gcggccagcg cccggtcctg ctcgcccagc cggtggtgca tgagggcggc 86400
ccgggaggac cacggcagca cggccggatt cgaccagccg acccgctcca gccgctcacc 86460
ggccgtacgg aagtggtgga gggcgatgag gtcgtgccgg cgccgggccg cgagcagacc 86520
gcgcgtcatg tgcaggagcg cggcgtggta ctggtcctgg tgatgggaca ggttgccggt 86580
cagcagtctt tcggccagtt cgggctcgtc gctgtgcagg gtgacgatgg cctggacggc 86640
ggtgcagagg gccgaggcac gggcctgcgc ctcctcggcc gtgcccgtcg gtacgaccgc 86700
ccggcgcgcc tcggcgatcc ggccgtggga gagggccacc atggcgcgct ccgcccgcag 86760
cacggccgtc tccgcgtccg tgtcccggtg gccgacgcga cggccgaccg cgtccagcca 86820
gcggaccgtc tcggcggtgt gctccgcggc ggccagggcg ttgaccgcca gcggcagggg 86880
agtgtgggcg tggcggggat ccggcggttc gagggccatg aggggtgccc cgaggtccgc 86940
cacccgctcg gccgacgcgt tgttggtgac gaacgcgacg tggatcagcg cggcgagcag 87000
ttcccgttcg cccaccgtcc ccgcgggcgg gcggggcccc agctcgtcga gccggcgcag 87060
agcggccggg agaaccgcgg gatcctgggc gcccagggcg tagtggcggg cctccagccg 87120
cagcgcgagt tcggccgccg cggcgtcgtc cccgccccgc gtccgcagct gggcggcgag 87180
gtccccggtc agggcggcga tgccggactc cgacggctgg tagagcagcg ggcccagctg 87240
caccgcggcg gcggcacggt ccagggcgga atcgaacaac ggcaacgcct cgaccacgtg 87300
ccgcagcgcc gcgacggtcg cgaactgccg ctccgccacc gccaggtcgg tcagcacccg 87360
ggcccggagc aggccggtgc acgagccgtc cagcagggcc tggcgcagat accgggccgc 87420
gtcgcgcggc gctccccgcg ccagcgcgcg gtcggcggcg gcacgcagga tacgcacggc 87480
cccgggagcc cgcagggtgt gcaccgacat gagctgcccg gcggcggcct ccacggagtg 87540
ccccgtccgg tgcagcagga ccgcggcgcg gttgcgcatc acggtgagct cgtccgccgg 87600
gacgccgtcc gccagcgcgt cccacaggag cgtgccgtgc tcctcgtccc ccggccggcc 87660
cagcccccag cggtgcagcg tgccgaccgc ctccgcgtac ccggccgcgt ccaggtcggc 87720
cagcagggcg gcgacccgct ggtccgcgtc accgcccagg acgcacaggg cgtgcacggt 87780
gcggcggacc gggccgggct gggaccgcag gaaggcggac aggtactggc acaggatctc 87840
ggagcggagc gtacgcacga cttccgcgtc ctgggcccgg ggccgcagac cgcgggagta 87900
ggcctcgtcc agcagggacc tgagcagcag cggattgccg gcggaccgcg tccgcaccgc 87960
cgccacgaac tccgcttccg cgccgcccag ggcggcctcg accgaccggc gcacgccctc 88020
ggggccgagg gcgcccagcc ggatcctccg gtccgccgca cccaccagcg cgcccagggc 88080
ggagcccgcg gcgggcacga caccggacgg cagcgacagg gcggacacga cgcggcggcc 88140
gtgccgtccg gccaggccct tcgagagctc cgccagcgac tccgtgtcgc accactgcag 88200
atcgtcgacc aggacgagca ccgcaccgtc gccgggcaca ccgtccagga ccgccgacag 88260
gggcacccgg tcgccgaccg gtccgcggtg cgcgtcgtcg caggcccgcc gcgccttgcc 88320
ggaccccgcc gtcgccgcga cacaggccgc ggactccagc agctggtcga ccacaccgaa 88380
cgccagccac cgctccgagc gggacgcctg cgccctgagg accgtgatcc gctcgccgga 88440
cgcctgctgg ggcagggcct cgaggaacga cgatctgccc gcgccgagcg ggccctcgac 88500
cagcagcagg gatccgtgtc ccgccgcggc ccggcgcagg caggcagccg ccagcgccag 88560
ttcggtctca cgttccagta gcacctaagt cgtcccgttc ccgtgcgcgc cggcggccgt 88620
ctccgtacgt acttctaccc atcctcggac cgacgagcgc cggaacaccg ccgggcccgc 88680
caccgcgtcc gaatccagta cgcatcacgc ggacgaacgg ctcacacacc gcgacgggcc 88740
actacgggga cagagtgcaa cgggtgaaga tgtccgtcag ctcccgggcc aggtggtcga 88800
ggtcggcgac ggcgaacaac tcgtggtggc ggaccacgtt gtcgagggct ccctgcacgg 88860
ccagcgccag caccggcggg tcggcgatgc ggaactcgcc cgcacggcac ccctcctcga 88920
gcagtgccac cagagcctcc accgacaggg cgctgcgcgc gacgtcgtcc agttccggca 88980
ccggctgctc gcggacgagt tcggcgatct cggtgagcgc ccgggcgtgc gccgggtaac 89040
gggccatgaa gtcgaagtgc gcggcgatgt aggcgaccag cttcccgcga tacgtcgcct 89100
cctgcgcgac gcggctggtc cgcagcgtcc ccgccttctc cacgatggtg cgggtgacct 89160
cccgcagcaa ttgcggcttt ccggcgaaat ggtaagaaat caggccggtg ctgctcaggt 89220
tcgcgtgtct gcagatcgcc gtgaacgacg tcttcgtgtg accgatctcg gccagcgtct 89280
cgatcgtggc ctcgacgatc tgcgccctcc gcgcctcctg ggtgaaggtg cggccgtgca 89340
cgggaccgga cggcggtttc ctgtacatcg tgtcctcaag ttggtggtga caggcgctgg 89400
tcctgtttcg gcccgcccac gggacggctg cgaaacccgc accccggcag cccccatccg 89460
gcaaactccc ggaacacggc cccagttcta gcaggcacgt tgcgaggggg cggtccccgc 89520
ggcgccgtaa cggtggatcc caccgaggac cggcccggcg cgcgccgtga ggatgacggc 89580
gcgacggtgg agcggccacc gcgcgaagac acgggaaagg gcggtgggac aggtgaaccc 89640
gttcgacgac ccggacgcca ccttccaggt cctcgtcaac gacgaggggc agcactcgct 89700
gtggcccgcg ttcgcggagg tccccgacgg ctggaccgtc gcgcacgacg aggacagccg 89760
cgaggcgtgc ctggcctaca tcgaggagaa ctggaccgat ctgcggccca ggagcctgat 89820
cgaggccatg gaacgctgac cgaggcacac cccgaggagc gcgcatgcga cacgacaccc 89880
tcgtcgacgc catcggcaac accccggccg tccggctgcg gacggacgcc cccgacggcg 89940
tcgaggtcta cgccaaactc gaactgctca acccctacgc catgaaggac cgcgtcgccc 90000
gccgcatcat cctcgaggcc cgccgcaccg gcgtgctgcg agagggcgct cccatcgtgg 90060
agagctcttc cggcaccatg gccctcggcg tcgccctggt cggcacctac ctcggacatc 90120
cggtgcacat cgtcaccgac ccgcgcatcg accccgtcac cctcgccaag ctggaggcga 90180
tgggctgcag tgtgcacatc gtggaggcca tgaccgccca gggctggcag agcgcgcgcc 90240
tcgaacgcct cgccgacctg atgcgcgacc tgccgggcgc ctggtggccg cagcagtaca 90300
gcaacccgga caacccggcg gcctaccgca ccctcgccga cgaactcctc gacgacctgg 90360
gcaccgtcga cgtcctggtc ggctccgtcg gcagcggcgg ctcgctctgc ggcacctccg 90420
ccgcgctcct ggagcacctg cccgatctga aggtggtcgg cgtcgactgc gtcggcagcg 90480
tcctgttcgg ccagcccgac ctcgccaccc gcaagcagag cggactcggg aacagcctct 90540
accccgacaa catcgactac cggctcttcg acgaggtcca ctggctctcc gacgacgagg 90600
ccttcgacgc gacgaagagc ctagcgcggg aacagaagat cttcgccggc aacacctccg 90660
gttcggtcta ccgggtcctc acccacctcg cggcccgcgc cgcccccggg acccgcctcg 90720
tcggcatcat gccggaccgc ggggaccgct atgccgagac cgtctaccgc cacgaggctg 90780
cgggccccgt cgccaccgtc cccaccgagg tgcccttcgg cacgaccgtc caccgctggt 90840
cctacgcggc gattccgcgc cggcaccgcc ccgtgctctt cttcgtcgag tccaacacca 90900
ccggcaccgg catgctggcc ctgcgcaccg cgacccggct gggcctcgcc ccggtcctcc 90960
tgaccaagga cccggcccgg tacgcggggc tggagaagac cggctgtccc gccgtccgct 91020
gcgacaccga ggacgaggcg gccctgcgcg ccgccgccga ctcggccgcc gccggacgcc 91080
ccgtcgcggg ggtcaccacc accagcgact tctacctcgt ccacgcggcg gccctggccg 91140
gatcgttccg gcggcccgga cacgcctcgg gcaccgccgg actctgccgt gacaagtcgc 91200
tgagccgcgc ggtgctgagc gaggcgggag tgccgcagcc cgcccacgcc gtcgtcgaat 91260
cggccgacgg tgtcgccgcc gccgtcgccc gcgtcggcct gccctgcgtg gtcaaaccgg 91320
ccgacggctc cggctcgcag gacgtgcgct ggtgcgccga cgaggcgagc gccctcacgc 91380
aggccgcgcg catcctcgcc gtcaccgaga acgtccgggg ccagcagcgc gcgggcaggg 91440
tactcgtcga ggagttcgcg cagggtcccg agtacagcgt ggagatgttc tgcaccgacg 91500
gcgaggccgt gtgcgtcgga atcacccagc ggaccaccac cgcactgccg tacttcgtcg 91560
agaccggcca cctcttccct gccgtactgc ccgccgcggc cgaggcggag ctggcggaga 91620
gcgcacggca ggcactcaag gccggcggct tcgaactcgg tcccgcccat gtcgaggtcc 91680
ggctgacccc ggcgggaccc gtcgtcatcg aggtgaacgg acggctggcc ggcggcatga 91740
tccccgagct gatccgcgcg gcgaccggca tcgacctgct ggagcagcag ctccgcgccg 91800
caaccgggcg gcccctcgcg ctgagcgcgg accgtgcccg gtacgccggg ctgcggttcc 91860
tgacggcgac ggagaccgga cgactgaccg gcatcaccgg tgccgccgag gccgcccggg 91920
tccccggcgt cgaatccgtc gtcaccaccg gggtacccgg ccgcgcggtc cgcccgccgc 91980
aggacgccta cgaccgcctg ggccacgtcg tcgccgtcgg ctcgacaccg cgggaggtcg 92040
agaccgccct ggacaccgcg acggcactga tccgggtgga gaccaccccg acaccatgag 92100
cccgacacca tgagaccgcc gcaccaccgg ctgccccgcc ggccgcactg ccgggggcaa 92160
ccaccgtgcg caccactgga ggcgccacca ggccgcaccg cgcgccgccc gccggtcgga 92220
cggcaggctg ccccacctgc tcggaccacc ggcggggcag ccggtaggcc ccgccccgcg 92280
cccgacggtt ccgccggggt cgggctgctg cgcgcccggg gcggccccgt cccgcccggc 92340
cggtccgtcc gcgcccgact gcttcgtccc gggcccgact gttctgcccg gggcgggtcg 92400
ctgcgcgccc cgggtcgccc tgtccagccc ggtcagtccg actgcgtccg gctaccccgc 92460
cccccgcccc ggctgctccg gcgggacccg gcgaacggcg cccccggggc cgttcaccgg 92520
gtccggccgc cgtgccgccg ggacacggtc cgggaccggc cgccgtaccg ccgctcacac 92580
ggcggtcgtg ccacgacggc ccgggcggcc ggcgtcgcgg ctacgcgccc cgcagctccg 92640
ggcgggcggc cccgcccccg atacccaccc cccgcagtac ctcgcggggg tcgggcagcc 92700
gccgcagcgc cacggccgcc gacgccgacg cgaagggcgc cggggcaggc gcgggcgtct 92760
gcggtccgtc ggcctgctgc tgcgccgccc acgccgcgat gtgcgcccgg gaccgcagtc 92820
ccagcgtggt gcggatgtgc cggatgtgcg tctccaccgt gcgcacggac acgtggatgc 92880
gcgccgcgat ctgccggttg gtcaaaccct ccacgaccag tgcggccacg tcccgctccc 92940
gcctgctcag cgggtgcgcg gcccccctgg cccgaggctc cgccgattcc tcgccgagcg 93000
ccagacacag cgcctgacgc cacggcatcg cccgtcccgc ctccagccag gactcggccc 93060
ggcccacggg cagcgcccgc agcgcggtct cacgcgcctg ctggacacgc tgccgccacc 93120
agtcgctctc tcccggcctg ccgccacgca cccgctccgc cacgcccagc agccgcaccc 93180
cccggtcgaa ccggtaacca cgggtggcta ccagcgccag cccctccaac gcccgtgcgg 93240
cgtcctcatg ctgatgcgca cggcagcgca gcgcctgggt gaagtactcc tccgcccgtt 93300
tcaagtcgcc cttctccagc gccagcgaac ccgcggtgga cagaacggcg ctcagccact 93360
gcggggccac cccgcagcgc agcacgggaa gggcccgtcc gagctcgcgt tccgcgcccg 93420
ccgggtcgcc gctctccagc cagtgccggg cgagagcacc cagactcagt gccacgaggg 93480
tgtcgtgctg cgaccgcagt ccgatctcca gcgactcgtc caggtcgtcg agcgacgccc 93540
ggtgctcgtc gcgcccctgg cgcaggatcc cgcgttccag cagcagccgg cccaacagcg 93600
cggtgcggcc ccgcctccgc tcctcccgta ccgcccggtc gatgcgcagc gccgcctcgt 93660
cggactcggt gccccggcgg gcgagagccg tcgcctccag cgccacggcg cggtactcgg 93720
agtccggcgc ggtctgcgcc aaggcgtgct ccacgagccc ggccacctcg gcgtcccgcc 93780
cctgcgcccc ctccaccgcg gccaacgcgc cggccaggag cagctggcgt tcgtcggagc 93840
ccgctcccag ccgccgcacc gcgtgcgcga ggttgacgcg ctcctcggcc agccggtcca 93900
gcgctgcgac cggcaccacg gcctcgttcc gcaaggggag cgatatcgtt gtcagccagg 93960
cggtcagccg ttcgtacgtc gccgtgtcct cgccctcggc gacgagccgc tcctgcccga 94020
agcacagcgt ggactccagc atccggaaac gggcggcgcc accgcccgcg cccgtcagcg 94080
gggtgatgac ggacttcgac tccagggcga ccaggagttc cggcagcgcg gtcgccgccc 94140
ccggcacgtc cgccgtgacc gccgtcgccg cgtccggccc gaagccgccc ggcaggaccg 94200
acagccgtcg cagcagcgcc tgttccaccg gcttcagcag cgcgtacccc cactccagcg 94260
cggcgcgaag actctggtgg cggtcgtcgg cgagccgcca gccgttcgtc aggagcgcca 94320
accggtcgtg cagccgggag cggatctcgg ccggtgggaa gacccggatg agccgggcgg 94380
ccatctcgat ggggagcggc agtccgtcaa gacgtgcgca tatctcggcc acgtcggcgg 94440
cgttgtcgcg gctgagccgg aaatccgggg cgacggcgcg ggcccggtcc atgaagagcg 94500
agacggcgtc cgaacgcagg ctgtcggaga gcgagttgac ggactccggg tcgctcaggg 94560
ccagaccggt cacggagaac accgactcgc ccggcaggcg cagcggttcc ctgctggtgg 94620
cgagcacgct cagccgcggc cgtccgggga gcagctcggt cagcagcgtc ccgcacgtgt 94680
acaggacgtg gtcgcagtcg tccagaacga gcagccggtc cggggccgag gccgccgggc 94740
caccgtccgg ttcgtcgccg agcgcgtcga gaacgcgtcg gcgcacggct tcggcgccgg 94800
tgaccgcgcc cagcctcacc accgacacct cgctccggcg gccgcgcgcc tcctgcccgg 94860
ccacctccag cgccagccgg gacttgccca cgccggcggg gccggtgagc gtcagcagcc 94920
gcacctcgtg caacagccgg gtcagctcga ccagttcgtc ggcccggccg acgaagctgc 94980
tcagctgggt caacagttcg ctgctcagtc cggcatccac accgccggac cggtgccgaa 95040
gccggtagga gcgctgccgg caggcgttgg agcagtagcg ggcccggggc tgcggggtgc 95100
gggactgttt ggagcgggtc agtgaggttc cgcaggtgtc gcacgtgaca gtcgtggggg 95160
tggacatggc acacaccttt cgtggtgtcg gcgggtgcag tgacgtgctg tacttcggaa 95220
gggggaggtc ggctgtggag aaactggaac agccggtcga aacgaggcag aaaaccggcg 95280
tggcgaaaac gccgggaaac agcgcggagc agcggcgagc agccggatga ttgaaaagaa 95340
actttccagt gcattggcac gcgtccgccc ggtccgccgt cgggaaggcg aagaaggcga 95400
gccgcggtgc ggggagctac cggtcgcgtg tgctcgcgtt cggcccggtt atccgccggt 95460
gaaccggccg taccggttca ccggccggcc gtcggtgtgc ggggtatctg caaggcgggt 95520
ggtcactacc ggataccctc tttctgcact gatgcggggg tgtcacacag aacgaatgcc 95580
ggggcgtggg gcacccgatt cgcttcgcgt gattgcctcc gagcctagga atggccgcct 95640
ccgcgggtca agcaacgctt tgctcgtacc caaaagactg tggttcggag gttcggtggg 95700
gcacggtgtc cgtttccccg gtggacggag tccgtttcgg gcccgtttcg aaaaggcaca 95760
ccgcacggct ggtcgcgaac cgctcccatg acggcgtacg gcggacccgt tctgcgtgaa 95820
gaggacgccg gattacttcc gtttcccggc gcttcccgcg ctcccggcgg cggcggtcgc 95880
ggcggccggt gaccgcggcg accgcggcga ccgcgacgga cgcggcccgt gatcagccgg 95940
gcagctccgc ctccaccaga tcggccgctc gccgggagcc gtctcccgat gcgagctccc 96000
gctgcgcggc gcagcgcgcg gcgacggccg gatcgtcggc gagtcgcaga accgccgcac 96060
gcagcgcctc gacggcgacg tcggcggagt cgacgcgctc ggcgacaccc agccggacca 96120
gcatggcggc gttgtcgaac tgatcgccgg cctggggtac gcagagcatc ggggtgccgg 96180
tggccaggcc ctcctgggcc ccgccggcac cggcgtgggt gacgaagacg tcggcctgcc 96240
gcaggacgcc cggctgcggc acccaggggc ggacctcgac gttgtccggc agcgaaccca 96300
gttcccccgc cgacacctgg ctgcccacct ggagcagcag ataccagtcg ggcagcgcac 96360
cgaaggcctc cgcgcaggtc cggtagaagc ggggctgctt cgtgaagttg gagccgagcg 96420
agaccaacgc gacgcgcctg cccgctgctt cggcagggcg agtccagaca tcgtgctccg 96480
cccgctcacc ctggcacggt ccgacgaaac tgtaacggcg ggtgtccaca cggtcggcgt 96540
gcggctggag ggcggggtgg atcagcacga gcgagcgcgg cgggcggctc atgaaggcgt 96600
ccgggtcgac tcccgccagg tcgttggcgg cgagccagga gcgccagcgc gcgtagtggg 96660
cgcgcccgcg cgcgcaggac ttcagctcct gggccagcct cgcaccgacc tcctcctcgt 96720
agccctccca gggcaccagc tgaggggaca gctgcacgta gcccaccgac cagcggtgcg 96780
cgagcacccg ggccgcccag ccggagaagt cgctgagcac caggtccggg acgtcgtccc 96840
ggtagagctc cgccaactgc gggagcgcct ggacggcgtc ccgcaggaac aactcggcga 96900
cgtcgagccg ggtctcgccc catctgctcg gatcgtctcc ggcggcgggc agcgtggacc 96960
tccagaccct gggctcggcg ccggtggcgc gcacccgccc gacgaagtcg ccctcgtcgg 97020
ggatggcata actgacccgg tggccgcggg cgaccaactc ccggacgatt cccaggctcg 97080
gattcacatg accgtggtgg gcgatactga ccatggcgac gtgactcatg ctgtggacgg 97140
tagtggagac gacgtatgcc cacaacggtc ttccggggcg tgacagcggg gtaggggaac 97200
gggtgcggtg aaccacgacc cagggagcgt ccatggccga cattcgatcc gtccaggttg 97260
ccgaaggatt tcacgtctcc gcgccgcagg tggaaggcgc actcatctct gagatccact 97320
tcatctacaa cgaggtgttc gtggaccgcg actacctcaa acacgggata cgcattcccg 97380
gttccgcgcg cgtcgtggac gtcggtgcga acgtgggcat gttctcactg ttcgtcgtgg 97440
gagagtgccc ggatgcccgg atcctggcct tcgagccgat tcccgagatc taccaggcat 97500
tgcgggaaaa cctgagcagg tacggggcga agggcgtgaa accggtgagg gcggcgctcg 97560
gcggactgcc cgaggaaaag gtccggttca cctatttccc cgcgctgcct ggtaactcca 97620
cccggcaccc cgaggagaaa caactcaaca agaggctggt cgaggagcaa ctgggccctg 97680
aagcggtgga ccgcatcctg ggcgccgtcg aggtggaggc cgaggtgctc cggttgtccg 97740
acgccctgcg cgactgggag cccgaggggc cgatcgatct gctgaagatc gatgtggagg 97800
gctcggaact cgaagtcctg gaaggcatcg acggctcgga ctggcgacgg atccgacagt 97860
gcgtgatcga ggtgcaggac ctcgacggcc ggctcgacgc cgtactcggc ctgctcggtg 97920
ccgagggttt caccgtcgcg accgaacgcg cggccaacat cccggacgtg ctgcgccact 97980
ggatggtgta cgccgcgaag aaggacgccc agtgagcctc ccgacgccgc cgccggactg 98040
agacggttgc ggcgggcgag ggccgggccg aaccgacgtc ggcgtgcgga tggtgcgcga 98100
cacgcataca gtgcgcgtgg cgtatccagt tcccgggact ggccggcggc agagcgggtg 98160
cccgcttcgg cggaaccagc acgcgggcct cgaaggcgga aagggggcgg ggccggcgga 98220
cgtgctccgg ccggccccct gcaccagtga cgaccgagta cgaaccccgt gacatgcggg 98280
cccgcaacaa gcaggccaca cgcgaggcga tcggcgccgc ggcgctgcgt ctcgccctgg 98340
agaggggccc cgacggactg gcttcggtgc gggtgcgcga catcgccgag gctgccgggg 98400
tcgcccccag gacgtacaac aactacttct ccagccggga ggaagcggtc tgcgtcttcc 98460
tgaacgatca ggctcgccgc ctcggcgcgg ccctgagagc caggccctgg ggtgagccac 98520
tcggggaggc gatcgccgcc gctgcggtcg acgtcttcgc cgatcccgaa cccgaccggg 98580
ccgggctgtc catgatcatg tccgctccgg cgctgcgagg tgaggcgttg aaggccttcg 98640
ccatggccga ggagccgctg gccgccgcga tcgccgagcg cgccggcgtc gaccgccggg 98700
cactgtcacc ggccgtcacg gctgccgccg tcgccggggc cgtccgtgcg gccgcttcgc 98760
actggctcgc cggacccgac cccgcaccct tcgccgaagt cctgcgcgag gccctgggga 98820
ccgccgtctc cccccgccct tccgggctcc ctcacccgtg acgctcccgc gggccgcccg 98880
gggcgtcacg cctccttggg gcgcggaacg ctctcggtct tcttgtccgg cacgggggtc 98940
tccaccagcc gcttcggcag gaggacggtc ggaacgacgg cgaggaggag gaacgcgacg 99000
ctccaccaga aggtgttgct gtacgcgggg gccagcgcgt cgggtccggg gctgccgccg 99060
ggagcggcgt cctgctgcct cgtcaactgg aactggagga cgacgcccac gaccgccgtg 99120
cccgccgaaa ggccgatctg ctggaagatc cgcgatccgc tcgtcgccct cgtgacctgc 99180
tcgggcggca gaccgatgta gagcgcggtc gtcatcgaca gcaccatcat tccgaatccg 99240
acgcctgtga cgaacatggc gaccacgatg accagggcgc tggtgttcgc gtcgaactgg 99300
gtgaagatca ggcgtccgac gagggcgcag gcgagaccgg ccacccccac gcgcatcggc 99360
ccgacacggt tgaacacccg tcccatcgtg agggaggcga gcgccgaccc gacgccggcc 99420
gcgaccagca ggaggccggc gcccagcgcc gactccgagt gaacctgctg gaggaacaag 99480
gggtccacga acccggctcc catggtgaga ccgagcagca gcagcaggat gctggacgtc 99540
gcgaagccgc ggtaccggaa caggcgcatc gacaccaggg cgtcgatgtt cggccgcgcc 99600
gcgtgccagg cgaacccggc gaccatcgcc gctccgaggc tgagcgccac gacgacctgg 99660
actccgccga aaccgacggt ggtggcctgg gagaggccgt acacgatggc cacgagcccg 99720
ggaaccagca gcgccacacc gaccacgtcc agaccggcgc cgctgctcgc cttcaggttc 99780
ggcatggccc gtcccgcgac caggaacgcg accagcccga tcggcagatt gatgaagaac 99840
atccaccgcc agctgaggtc gtcgacgatg atgccgccga cgacggggcc gagcgtcggg 99900
ccgacgacag cggggacggc catcagcgag accagctggg cgcggcgttc gacaccgccg 99960
acccggacga gcatcgcctg gccgaccggg gccatcatgc cgccgccgag gccctgcacc 100020
acccgcgccg cgatgagcat ccacaccgag ttcgacaggc cgcagagcag tgacccgacg 100080
aggaagccga tgagggagaa gttccagatc gtccgggtgc cgaaccggtc cgcggcccat 100140
ccggcgatcg gcatgccgac catcagggcg agcaggtagg cggtcaccac ccactgcacc 100200
gtggacaccg agacggacag ctccccgacc agcttgttca gcgcgatgct gaccatcgtt 100260
ccgtcgaact gcatcagcag catgccgagc aggacgaccc ccgcgacctt cagcaactcc 100320
gccgggaggc gttgcttgcc ggctgcgggc ggagagtcac cggtctgcgt ctgcgccatc 100380
agctttcctt cgctcggcgg gcacggcccc gctccggggg ccctcgtcac ggttccacgc 100440
tcccacaaag cttgcgtgcc gcgcaatttc gtgcagatac tgcatgtgtc gcgggacggc 100500
agtcggtcgc gccccccgct tcaggcgact tttagcggga tgggctttgc tgtgggcggt 100560
ccgccttcga tcagaggaga cacgatggcc gccgtagagc ccctccggat gccgccgctc 100620
tcggacggtg gcgacgaggt cctgacctgg ctgaagcgga tgcgcgacga gcagccgctc 100680
tgggcggacg agcggggcgt gcagcacgtc ttccggtacg acgacgtgca ggcggtgatg 100740
tccgatccgg cgcgtttctc gtccaacatc ggccgggtca tgccgggttt cgaccctgaa 100800
caggtcagtg ccaacctcgc gtcgcaggac cctccggagc accggctgct gcggcagttg 100860
gtgagccagg cgttcacccc gcggacggtc accgggctgc ggccgcggat cgccgagatc 100920
acccgggaac tgctggacgc ggcgcccgag ggcgagttcg acttcgtcga gcatgtggcc 100980
catccgctgc cggtgacggt catcgccgaa ctgctcggcg tctcgccggg ggaccgggcc 101040
ttcttccggt cgtgcgccga cgccctgctg ggcacgcggg cggaggcggt gtcggccgcc 101100
gagcacgcca aggcgctcgc cgaggccaac aaggaactgc aggagtatct gagcgccgag 101160
gcccggcgcc gccgggcgga cggctcgggc ggactgatcg gggcgctcac ggccgccgag 101220
ctggacgggc ggcggctgac ggacctgcag gtcgccacgt tctccgggct tctgctgacc 101280
gccggccaca tcacgatcac gctgctgctg ggaagcactc tgctggccct gcgcgacaac 101340
cccgaagccg aagcgcggct gcgcaaggac cggtcggcgg ttcccgccgc gttcgaggag 101400
tcgctgcggc tccggccgcc gttccaccgg gtcgtccggg tctccaccca ggacgtggag 101460
gtcgccggcg gcgtcatacc ggcccaccgg ctcgtgatgg cctcgacgct gtcggccaac 101520
cgggacgacc ggcagttccc cgatccggac cgcttcgacg tcgaccgtcg gccgaaccgg 101580
catctcggct tcggccacgg catccacttc tgcctcggcg gcccgctggc cagggtggag 101640
accgagatcg cgctcaatct gctgttcgac gagttcaccg agctcgaggt gaccggcgag 101700
ccggccttcc acgactcgga gttctacgga ccgaagcagc tgacagtgtc cgcgcgccgc 101760
tagggggagt cggtgaccgg cggcaacgcg gcagccggac gctgccgggg cccgtatccc 101820
cggcagcgtc cggacgacga ccccgagacg ctgcggacca agctccgcag cgtcatgaag 101880
aaacagccag aaagaggcag gaatcgatgg agtacacccg tctgggatcg tccggactga 101940
aggtcagccg gctcgctctc ggctgcatga gcttcggcgt cccctcgccg gtccagccgt 102000
ggacgctcga cgacgaggcc gccgagcccc tcttcaagca ggcggtcgag ctcggcatca 102060
ccttctggga caccgccaac atctacggga tgggcgcgtc ggaggagatc gtcggacgcg 102120
cgctccgcaa gtacacccgc cgcgaggacg tggtcctggc gaccaagctg ttcttcccga 102180
tgaggcaggg ccccagccgt cccggcctgt cccgcaacgc gatcatcgaa cagctcgacg 102240
cgtcgctgga ccgcctcggc accgaccacg tcgacctcta ccagatccac cggttcgacc 102300
ccgagacccc ggtggaagag acgatggagg cgctgcacga cgtcatcaag gcgggcaagg 102360
tccgctacat cggggcgtcg tcgatgtgga cctggcagtt cgccaagatg cagcacgccg 102420
ccgaggcgaa cgggtggacg aagttcgtct ccatgcagga ccagtacaac ctgctgcagc 102480
gcgaggagga gcgggagatg ttcggcctgc tcgccgacca gggggtgggc agtctgccct 102540
ggggccccct cgcctccgga ctgctcgccc gtccctgggg gcagggaggc acgacccgtg 102600
gcgggaccct tcggcccacc gacccctacg ggcgtccgct gtacgtggag agcgacgagg 102660
ccgtggtggg cgcggtggag cggatcgcgg aggcgcgggg cgtctcgatg gcgcaggtgg 102720
ccatggcgtg ggtgctgaag aaccccgtcg tcaccgcccc cctcgtcggc gccaccaagc 102780
cggagcattt caccgacgcg gtcgccgcgc tggacatccg gctcaccgac gaagagatca 102840
cctcgctcga gtcgtcgtac accccgcgcc tgcccacgca cttctgatcc cgagggttca 102900
ttcgggtgac gatggcaatg gcccggcttc gcgcgaagcc gggccattgc catgctcgtc 102960
tgttttaggg ggagttcaga attacctggt gggatggggg gcgaaaccgg ggtaccagaa 103020
ggggtggaaa tggtgagcaa agaagccaag acggtcgaga gggcggcagg tccgactgca 103080
tcggaccttc ccgaggccta cctcgatctg ctgaagaaat gtcttctccg tttccacgat 103140
ggtgccgcgt tcccctacac caccgaatcg ggaggcgaga gcgaccagcg gctggcctac 103200
ctggcgggca agggaatcat gccgcacgta caggcggaca ccatggtcag ccgggaccgc 103260
ctggacaaca tccagcaggc caccgccacg gtcatcaggg agggagtccc gggcgacttc 103320
atcgagaccg gggtgtggcg cggcggctcc tgcatcctca tgcgcgccgc cctcacggcg 103380
tacggcgaca agacccggaa ggtctgggtc gccgactcct tcgacggatt cccgcccccg 103440
accgacaagt acccgtcgga tccctggaag ggacagagcc aggacatcat cggcacgatg 103500
ggggtctccc tcaaggtcac cttcgacgag gtgaaggacc ggttcgaccg gtacggcctg 103560
ctcgacgagc gagtcgagtt cctcaccgga ttcttcgcga acacgctgcc cgacgcgccg 103620
atcgagaagc tggcgatcct ccgcctggac ggcgacctct accagtcgac ctacgaggcc 103680
ctcgaggcgc tctacccgaa gctctcggtc ggcggctact gcatcatcga cgactacttc 103740
tacacgatgt gcagcaaggc cgtggacgac taccgccggg agcacggcat cgacgagccc 103800
atcgaggcgg tcgactggac ctgcgtccag tggcggaaga ccaagtagga cacagggccg 103860
ggcaggacgc ggggcccggc agcacatgcg tgtccgaagc tccccgaccg atcccggcgt 103920
cggggagctt cgtcgttcga acggccgggt ccggtgctca gccccggatc gccccgcgcg 103980
ccgcgaccgc ctcgaccact tcccgcgcga ccaggtcgac ctcctcgtcg agcaggtcct 104040
ggtgcgccgg cagcagcagg gccgtgtccg acaccttgtc cgtcaccggc agtacggcgt 104100
ccgtggcccc gtaccgcgca accctgtgca aggggtagta gcgccaggag gtgtagatgt 104160
ccttggccag caggtcctcg ctcaccccgt cccggacggc ctgggtgtcg aagcggaccc 104220
agtagaagta gtgggtcgag agatggccct ccggcagggg cggcggaacg cggacaccgg 104280
ggacaccgga cagggcccgg gtgtaccgct cggcgatcgc ccgacgccgg ccgacgaatt 104340
cgggaagcct gcgcagctgc accttgccca tcgcggcggt catgtcgttg ccgacgaggc 104400
ggcggccgat gtcctcgatg tcgaaactcc accacagatg cggcgacttg gcggcggtgg 104460
tgaacgaact gcggtcctcc aggccgtggt acgccagccg gcgcgccctg cgggccacct 104520
cggggtcccg cacgtacagc atgccgccgt caccggtggt gatgaccttg cgcgcgtcga 104580
agctccagat gccgaagtcg ccgaacgtgc cgcacatccg gccgcccgcg ctcgacgcga 104640
ccgagacggc cgcgtcctcg atgagtgcga caccgcgttc cgcgcagagg gcggcgatct 104700
tctccacttc gccggggtag ccgccgtagt gcagcaccat caccgccttg gtgcgcggcg 104760
tgagcacctt gacgacgtcc tcgacccggg ggttgagaac gccgtcgtcg atgtcgcaga 104820
acaccggacg ggcaccggcg tcgatgacgc agttggcgtt ggcgatgaac ccgttcgacg 104880
gcagcacgac ctcgtcgccc ggaccgatgc cgagcagttc cgcggtga 104928
Claims (3)
1.一种环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇的激活方法,其特征在于,敲除链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 02999的基因组中的环脂肽类化合物Totopotensamides生物合成基因簇中的totR5基因和xiaP基因,以及超表达totR1基因使链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 02999产生化合物Totopotensamide A和化合物Totopotensamide C;
所述的环脂肽类化合物Totopotensamides的生物合成基因簇,其核苷酸序列如SEQ IDNO.1的第2972-101763位核苷酸序列所示;
所述的totR5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第98247-98861位核苷酸序列所示;
所述的totR1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第82789-85455位核苷酸序列所示;
所述的化合物Totopotensamide A和化合物Totopotensamide C的结构式如下:
其中化合物1为Totopotensamide A,化合物2为Totopotensamide C。
2.一种环脂肽类化合物Totopotensamides的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:
制备突变株△totR5i/△xiaPi/totR1的发酵培养物,将发酵培养物分成发酵液和菌丝体两部分,发酵液中的次级代谢产物用XAD-16大孔树脂吸附,再用丙酮洗脱,减压浓缩得到浓缩液A;菌丝体用甲醇浸提,浸提液减压浓缩得到浓缩液B,将浓缩液A和B混合,再用丁酮萃取,减压浓缩至干得到粗提物;
将粗提物经正相硅胶柱层析,用氯仿/甲醇从体积比100/0、100/1、100/2、100/4、100/8、100/16、100/32和0/100梯度洗脱,顺序得到8个馏分Fr.1-Fr.8,氯仿/甲醇体积比100/32洗脱的馏分Fr.7经凝胶Sephadex LH-20柱分离,用体积比1:1的氯仿/甲醇洗脱得到7个亚馏分Fr.7-1-Fr.7-7,馏分Fr.7-2经半制备HPLC纯化得到化合物1,馏分Fr.7-4经半制备TLC纯化,用体积比3:1的氯仿/甲醇展开,乙酸乙酯洗脱得到化合物2;
所述的环脂肽类化合物Totopotensamides的结构式如下:
所述的突变株△totR5i/△xiaPi/totR1是将totR5和xiaPi基因敲除,以及totR1基因超表达的链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 02999;
所述的totR5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第98247-98861位核苷酸序列所示;
所述的totR1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第82789-85455位核苷酸序列所示。
3. 根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的制备突变株△totR5i/△xiaPi/totR1的发酵培养物具体步骤为:将活化的菌株接入种子培养基中,28 °C,200 rpm,培养48 h制得种子液,将种子液以体积分数10%的接种量接入到发酵培养基中,28 °C,200rpm,振荡培养7d,而制得发酵培养物,所述的种子培养基和发酵培养基的配方为,按质量分数100%计,包括可溶性淀粉 2%,甘油 1%,甘氨酸0.01%,丙氨酸0.01%,苏氨酸0.01%,异亮氨酸0.01%,CaCO3 0.5%,海盐3%,余量为水,pH 7.0。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710928251.XA CN107794286B (zh) | 2017-10-09 | 2017-10-09 | 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710928251.XA CN107794286B (zh) | 2017-10-09 | 2017-10-09 | 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107794286A CN107794286A (zh) | 2018-03-13 |
CN107794286B true CN107794286B (zh) | 2021-01-08 |
Family
ID=61533844
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710928251.XA Active CN107794286B (zh) | 2017-10-09 | 2017-10-09 | 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107794286B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109613162A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-04-12 | 海南省海洋与渔业科学院(海南省海洋开发规划设计研究院) | 一种诱导海洋放线菌沉默基因表达产生新物质的方法 |
CN110903368B (zh) * | 2019-12-10 | 2020-09-11 | 华中农业大学 | 一种控制玉米雌性性状的基因以及用于创制玉米雌性不育系的试剂盒、突变基因型和方法 |
CN111378008B (zh) * | 2020-03-02 | 2022-04-12 | 中国科学院南海海洋研究所 | 脂肽类化合物Totopotensamides及其制备方法和应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101838314A (zh) * | 2009-11-16 | 2010-09-22 | 华东理工大学 | 一种环脂肽类化合物制备及其应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102757908B (zh) * | 2012-05-11 | 2014-05-14 | 中国科学院南海海洋研究所 | 链霉菌和吲哚倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌抗肿瘤药物中的应用 |
CN106434702B (zh) * | 2016-09-06 | 2019-06-21 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种帕克特酰胺的生物合成基因簇及其应用 |
-
2017
- 2017-10-09 CN CN201710928251.XA patent/CN107794286B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101838314A (zh) * | 2009-11-16 | 2010-09-22 | 华东理工大学 | 一种环脂肽类化合物制备及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Chen,R.等.Streptomyces pactum strain SCSIO 02999 ABC-type transport protein, transcriptional regulator,.《Genbank Database》.2017,第1-29页. * |
Lin Z等.Totopotensamides, polyketide-cyclic peptide hybrids from a mollusk-associated bacterium Streptomyces sp..《 Journal of Natural Products》.2012,第75卷(第4期),第644–649页. * |
郑维等.芽孢杆菌产环脂肽类化合物结构与生物合成机制研究进展.《山东化工》.2016,第45卷(第8期),第51-52页. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107794286A (zh) | 2018-03-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK2271666T3 (da) | Nrps-pks-gengruppe og dens manipulation og anvendelighed | |
CN107794286B (zh) | 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用 | |
CN111607603B (zh) | Hangtaimycin生物合成基因簇及其应用 | |
CN111378008B (zh) | 脂肽类化合物Totopotensamides及其制备方法和应用 | |
CN108048472B (zh) | 一株高效异源表达Disorazole Z的工程菌株和构建该菌株的基因簇及其应用 | |
CN108456703B (zh) | 一种异源表达埃博霉素的方法 | |
CN101691575B (zh) | 一种萨菲菌素的生物合成基因簇 | |
KR20040099138A (ko) | 항생물질의 생합성을 위한 스트렙토마이세스시아네오그리세우스 아종 논시아노게누스 유래의 유전자클로닝 및 사용 방법 | |
CN107540682B (zh) | 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用 | |
CN101818158B (zh) | Fr901464的生物合成基因簇 | |
EP0929681A1 (en) | Rifamycin biosynthesis gene cluster | |
CN110857447B (zh) | 提高米尔贝霉素a3/a4或其衍生物产量的方法 | |
CN101063140B (zh) | 万古霉素生物合成基因簇 | |
CN114517175B (zh) | 基因工程菌及其应用 | |
KR101189475B1 (ko) | 삼원환 화합물의 생합성을 담당하는 유전자와 단백질 | |
CN112359048B (zh) | 一种吕宋肽菌素c的制备方法 | |
CN107164394B (zh) | 一种非典型角环素类化合物nenestatin A的生物合成基因簇及其应用 | |
CN106676115A (zh) | 2’‑氯代喷司他丁和2’‑氨基‑2’‑脱氧腺苷生物合成基因簇及其应用 | |
CN102517309A (zh) | 一种手霉素类抗生素生物合成基因簇 | |
CN107541523B (zh) | 曲张链丝菌素生物合成基因簇及其应用 | |
US20030113874A1 (en) | Genes and proteins for the biosynthesis of rosaramicin | |
CN112442507B (zh) | 马度米星化合物的生物合成基因簇及其应用 | |
KR20190031865A (ko) | 밀베마이신 d를 생산하는 재조합 미생물 및 밀베마이신 d 생산 방법 | |
CN112921045B (zh) | 氨基糖苷类抗生素生物合成基因簇及应用 | |
CN111304225B (zh) | 生物碱cyanogramide的生物合成基因簇及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: No.1119 Haibin Road, Nansha District, Guangzhou City, Guangdong Province Applicant after: SOUTH CHINA SEA INSTITUTE OF OCEANOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES Address before: 510301 No. 164 West Xingang Road, Guangdong, Guangzhou Applicant before: SOUTH CHINA SEA INSTITUTE OF OCEANOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES |
|
CB02 | Change of applicant information | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |