CN107540682B - 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107540682B
CN107540682B CN201710676122.6A CN201710676122A CN107540682B CN 107540682 B CN107540682 B CN 107540682B CN 201710676122 A CN201710676122 A CN 201710676122A CN 107540682 B CN107540682 B CN 107540682B
Authority
CN
China
Prior art keywords
stvp5
streptovaricin
gene
strain
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710676122.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107540682A (zh
Inventor
孙宇辉
刘源振
陈旭
邓子新
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan University WHU
Original Assignee
Wuhan University WHU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan University WHU filed Critical Wuhan University WHU
Priority to CN201710676122.6A priority Critical patent/CN107540682B/zh
Publication of CN107540682A publication Critical patent/CN107540682A/zh
Priority to PCT/CN2018/097950 priority patent/WO2019029408A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107540682B publication Critical patent/CN107540682B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D225/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D225/04—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D225/08—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with two six-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/18—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了曲张链丝菌素衍生物及其制备方法与应用，属于生物医药领域。该新型曲张链丝菌素衍生物1‑4是本发明以链霉菌XW‑1（Streptomyces spectabilis XW‑1，保藏编号为CCTCC NO：M2017417）作为出发菌株，分别对该菌株曲张链丝菌素生物合成基因簇中后修饰系统的P450基因（stvP4和stvP5）单一的失活或缺失。对这两个突变株发酵产物粗提物分离纯化，即得新型曲张链丝菌衍生物1‑4。本发明的新型曲张链丝菌素衍生物具有良好的抗菌效果，为抗生素耐药性问题提供了新的解决手段，为曲张链丝菌素类抗生素的结构改造提供了依据。

Description

曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及曲张链丝菌素制备领域，具体涉及新型曲张链丝菌素类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
二十世纪60年代以来，抗生素耐药性对公众健康逐渐构成严重威胁，可造成许多难以治疗的人类感染甚至死亡。特别地，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)现在被认为是导致人类重大疾病和死亡的“超级细菌”，由于其毒力大、分布广泛(如社区和医院环境)，可造成巨大的经济损失。因此，迫切需要开发新的药物来对抗这些病原体。天然产物已被证明是发现抗MRSA抗生素(如万古霉素和达托霉素)的重要资源；另一方面，工程化生物合成可以补充这一传统的耗时耗力的药物发现过程，通过在生产菌株中对其生物合成途径的直接遗传修饰或通过在异源宿主中的实现组合生物合成，可以获得新颖的“非天然”的天然产物。这一类方法代表着创制药物分子多样性的有吸引力的方法。
曲张链丝菌素(Streptovaricins)与利福霉素同属较早发现的安莎霉素类抗生素，它们对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌，特别是结核分枝杆菌具有广泛的抗菌活性。从结构上看，曲张链丝菌素与其他安莎霉素抗生素的区别在于主要在于“安莎桥”不同程度的氧化，例如，C-20位和C-28位的羟基化，Me-24的氧化和C-21位的脱氢。特别地，C-6和C-11通过亚甲基双氧桥(Methylenedioxybridge,MDB)连接以形成特征性的“萘并二恶英”结构。基于已报道的安莎霉素一般的生物合成途径推测，曲张链丝菌素的生物合成由I型模块化聚酮化合物合成酶(Polyketide synthase,PKS)催化完成，其生物合成途径始于一个特殊的起始单元，3-氨基-5-羟基苯甲酸(3-amino-5-hydroxy benzoic acid,AHBA)，随后经过多个聚酮链延长步骤，最终延伸链被酰胺合酶环化并从PKS上释放，并进一步进行PKS后修饰从而形成成熟的曲张链丝菌素类抗生素。
根据报道，曲张链丝菌素单体化合物之间的抑菌程度是不同的，且曲张链丝菌素生物合成目前仅通过用同位素喂养标记等实验证实其结构上的芳香发色团来自AHBA，且C-3位甲基、C-24位的羧甲基以及MDB结构单元中的亚甲基均来源于甲硫氨酸。然而迄今为止，曲张链丝菌素生物合成基因簇尚未见报道，其后修饰反应包括羟基化、甲基化、乙酰化和氧化还原等步骤仍不清楚；另一方面，基于化学合成或半合成、组合生物合成改造或代谢工程等方法创制具有新活性的曲张链丝菌素类衍生物尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于曲张链丝菌素(Streptovaricins)结构改造的新型曲张链丝菌素类衍生物及其制备方法和他们在制备抗菌药物中的应用。
曲张链丝菌素产生菌为从武汉大学校园土壤中分离纯化出的链霉菌XW-1(Streptomyces spectabilis XW-1)，已于2017年7月7日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017417。本发明通过操纵链霉菌XW-1曲张链丝菌素生物合成后修饰系统中的P450基因stvP4和stvP5，获得2个单基因敲除突变株。从这2个突变株的发酵液中分离到4个不完全修饰的曲张链丝菌素衍生物。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
第一方面，本发明涉及一种曲张链丝菌素衍生物，其结构式如式1-4中的任意一种所示：
第二方面，本发明涉及一种上述的曲张链丝菌素衍生物的制备方法，包括如下步骤：
A、以曲张链丝菌素原始产生菌链霉菌XW-1为出发菌(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)克隆得到曲张链丝菌素生物合成基因簇，该基因簇中包含5个参与曲张链丝菌素生物合成后修饰过程中的P450基因，该5个P450基因由stvP1、stvP2、stvP3、stvP4、stvP5基因组成，分别位于SEQ ID NO：1的第13481-14773位碱基处、第15800-17005位碱基处、第18765-19958位碱基处、第83977-85221位碱基处及第87228-88481位碱基处；
B、对所述曲张链丝菌素生物合成后修饰系统的P450基因中的stvP4或stvP5基因进行选择性单基因失活，获得stvP4基因失活突变株ΔstvP4或stvP5基因失活突变株ΔstvP5；
C、对所述突变菌株ΔstvP4进行发酵，其发酵产物进行提取，经分离纯化，制得如上述式1和式2所示的曲张链丝菌素衍生物；
或对所述突变菌株ΔstvP5进行发酵，其发酵产物进行提取，经分离纯化，制得如上述式3和式4所示的曲张链丝菌素衍生物。
优选地，步骤B中，所述的选择性失活是同框敲除，以曲张链丝菌素野生型产生链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)的染色体DNA为模板，以stvP4-L-F和stvP4-L-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2-3所示，在stvP4基因上游扩增出1990bp片段作为stvP4同框敲除同源左臂stvP4-L；以stvP4-R-F和stvP4-R-R为引物，其核苷酸序列如SEQID NO：4-5所示，在stvP4基因下游扩增出1989bp片段作为stvP4同框敲除同源右臂stvP4-R；
或以曲张链丝菌素野生型产生链霉菌XW-1(其保藏编号为CCTCC NO：M2017417)的染色体DNA为模板，以stvP5-L-F和stvP5-L-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6-7所示，在stvP5基因上游扩增出2098bp片段作为stvP5同框敲除同源左臂stvP5-L；以stvP5-R-F和stvP5-R-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：8-9所示，在stvP5基因下游扩增出1928bp片段作为stvP5同框敲除同源右臂stvP5-R。
优选地，步骤C中，所述对突变菌株ΔstvP4或ΔstvP5的发酵产物的提取具体为：发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，收集乙酸乙酯相；用旋转蒸发仪将乙酸乙酯相浓缩至干，随后用0.05倍的甲醇再次溶解，溶解物中即含有曲张链丝菌素衍生物。
优选地，步骤C中，所述对突变菌株ΔstvP4或ΔstvP5的发酵产物提取后的纯化具体为：将提取后的发酵产物溶于甲醇中后过有机系滤膜，过滤后取溶液，进样，通过HPLC制备各目标产物，色谱条件为：A相为水；B相为乙腈；流速3mL/min，洗脱程序为0-20min,35-65％B；20-28min,65-95％B；28-30min,95％B；目标化合物出峰时间为12～24min处，色谱柱为Agilent公司的ZORBAX Eclipse XDB-C18反相柱(5μm,9.4×250mm)。
第三方面，本发明涉及一种产生上述新型曲张链丝菌素衍生物1和2的工程菌株，为失活或缺失stvP4基因的曲张链丝菌素产生菌链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)。
第四方面，本发明涉及一种产生上述新型曲张链丝菌素衍生物3和4的工程菌株，为失活或缺失stvP5基因的曲张链丝菌素产生菌链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)。
第五方面，本发明涉及新型曲张链丝菌素衍生物1-4在制备抗菌药物中的应用。
优选地，所述细菌为耐药性细菌，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
本发明具有的有益效果为：本发明从链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)的突变株中分离了4种新的曲张链丝菌素衍生物，丰富了曲张链丝菌素衍生物结构的多样性；且失活或缺失stvP4或stvP5基因的曲张链丝菌素产生菌能够较大量产生这些新结构化合物(一般发酵产量约5～20mg/L)，本发明的新型曲张链丝菌素衍生物具有良好的抗菌效果，为抗生素耐药性问题提供了新的解决手段，为曲张链丝菌素类抗生素的结构改造提供了依据。
附图说明
图1是新型曲张链丝菌素衍生物1-4化学结构图。
图2是pWHU2801质粒图谱、突变株ΔstvP4的敲除模型和Southern blot分子杂交验证结果图
a为pWHU2801质粒图谱、突变株ΔstvP4的敲除模型；b为Southern blot分子杂交验证结果。
图3是pWHU2802质粒图谱、突变株ΔstvP5的敲除模型和Southern blot分子杂交验证结果图。
a为pWHU2802质粒图谱、突变株ΔstvP5的敲除模型；b为Southern blot分子杂交验证结果。
图4是各突变株发酵产物的HPLC-UV 432nm检测结果图。
图5是化合物1-4的LC-ESI-HRMS结构鉴定结果图。
图6是化合物1的NMR结构鉴定结果图
a为1H-NMR；b为13C-NMR；c为1H-1H COSY；d为HSQC；e为HMBC。图7是化合物2的NMR结构鉴定结果图
a为1H-NMR；b为13C-NMR；c为1H-1H COSY；d为HSQC；e为HMBC。图8是化合物3的NMR结构鉴定结果图
a为1H-NMR；b为13C-NMR；c为1H-1H COSY；d为HSQC；e为HMBC。图9是化合物4的NMR结构鉴定结果图
a为1H-NMR；b为13C-NMR；c为1H-1H COSY；d为HSQC；e为HMBC。
具体实施方式
在本申请人同日提交的发明专利申请《曲张链丝菌素生物合成基因簇及其应用》中公开了负责曲张链丝菌素生物合成的基因簇，整个基因簇是包含41个基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1中第1-95304位所示，在负责曲张链丝菌素生物合成后修饰的基因中包含5个P450基因，依次是stvP1、stvP2、stvP3、stvP4、stvP5，这5个基因分别位于SEQ ID NO：1的第13481-14773位碱基处、第15800-17005位碱基处、第18765-19958位碱基处、第83977-85221位碱基处及第87228-88481位碱基处。
本发明通过操纵链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC NO：M2017417)曲张链丝菌素生物合成后修饰系统中的P450基因(stvP4和stvP5)，从而获得一系列不完全修饰的曲张链丝菌素衍生物。这些新型曲张链丝菌素衍生物包括：28-去羟基曲张链丝菌素F(1)，6-甲氧基-8-羟基-24-羧甲基-原曲张链丝菌素I(2)，24-去羧甲基曲张链丝菌素G(3)和24-去羧甲基曲张链丝菌素C(4)，其结构式如图1所示。
一、实验材料
1.菌株、质粒及引物如表1-3所示。
表1实施例中所主要使用菌株
注：链霉菌XW-1(Streptomyces spectabilis XW-1)已于2017年7月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M2017417(地址：中国.武汉.武汉大学)，其状态为存活。
表2实施例中所使用主要质粒
参考文献：
1.Wardenburg JB,Schneewind O.2008.Vaccine protection againstStaphylococcus aureus pneumonia.Journal of Experimental Medicine 205:287-294.
2.Sun Y,He X,Liang J,Zhou X,Deng Z.2009.Analysis of functions inplasmid pHZ1358influencing its genetic and structural stability inStreptomyces lividans 1326.Appl Microbiol Biotechnol 82:303-310.
上述参考文献2中详细记载了相应菌株或质粒的构建方法，本领域技术人员根据所记载的构建方法能够重复得到相应菌株或质粒。
表3实施例中所使用引物及其序列
2.培养基
(1)2×TY液体培养基：酵母提取物10g，胰蛋白胨16g，氯化钠5g，Milli-Q纯水1L，115℃高温灭菌30min。
(2)2×TY固体培养基：酵母提取物10g，胰蛋白胨16g，氯化钠5g，琼脂粉20g，Milli-Q纯水1L，115℃高温灭菌30min。
(3)ABB13固体培养基：可溶性淀粉5g，大豆蛋白胨5g，碳酸钙3g，3-(N-吗啉)丙磺酸2.1g，盐酸硫胺0.01g，氧化亚铁0.012g，琼脂粉20g，Milli-Q纯水1L，氢氧化钾调节pH值至7.0，115℃高温灭菌30min。用前按1％的体积比加入过滤除菌后的1M氯化镁溶液。
(4)TSBY液体培养基：以蛋白酶酶解大豆肉汤30g，酵母提取物5g，蔗糖105g，溶解于去离子水中定容到1L，115℃高温蒸汽灭菌30min。
(5)SFM液体培养基：称取黄豆饼粉(Soya flour)20g溶解于1000mL去离子水中，115℃高温蒸汽灭菌30分钟后(煮沸后再煮3h)，4～8层纱布过滤除去不溶物。加入甘露醇(Mannitol)20g，充分溶解后，用去离子水定容到1000mL，再次115℃高温蒸汽灭菌30min。
3.抗生素及其浓度如表4所示。
表4抗生素及其使用浓度
二、实验方法
1.大肠杆菌与链霉菌XW-1的培养
大肠杆菌的培养采用2×TY培养基，220rpm 37℃培养。野生型XW-1及其突变株的培养采用SFM培养基，220rpm 28℃培养7d。
2.大肠杆菌-链霉菌属间接合转移
取在ABB13固体培养基上生长3-4d的链霉菌XW-1约1cm2菌块于15mL TSBY液体培养基中28℃220rpm培养2d至生长对数期作为接合转移受体菌。将在37℃220rpm过夜培养后以1:100(v/v)比例转接后培养2.5-3h至生长对数期的大肠杆菌ET12567/pUZ8002作为接合转移供体菌。将生长至对数期的供体菌与受体菌以分别5000rpm×5min离心去除上清后收集菌体，并以2×TY液体培养基分别洗涤菌体2次后，去除大部分上清，供体菌留存约1mL上清液，受体菌留存约5mL上清液，分别尽量吸取上部幼嫩菌体100μL后混合，再涂布于含有1％氯化镁的ABB13平板上，吹干后倒置于28℃恒温培养箱中培养12h。再取1mL含阿泊拉霉素和萘啶酮酸的无菌水均匀地覆盖培养基表面，使平板上的抗生素终浓度达到阿泊拉霉素35μg/mL，奈啶酮酸30μg/mL，待培养基表面液体被吹干后将平板后封口，倒置于28℃恒温培养箱中培养。一般约6-7d后可见明显接合转移子。
3.链霉菌XW-1的发酵与发酵产物的提取与分离
(1)链霉菌XW-1的发酵培养：
取在ABB13固体培养基上培养3-4d的链霉菌约1cm2菌块接种于40mL TSBY液体培养基中，28℃200rpm培养3d，作为种子培养基。将种子培养基以1:20的比例转接至60mL发酵培养基中，28℃200rpm培养7d。
(2)链霉菌XW-1发酵产物的提取与分离：
发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，收集乙酸乙酯相；用旋转蒸发仪将乙酸乙酯相浓缩至干，随后用0.05倍的甲醇再次溶解，溶解物中即含有曲张链丝菌素衍生物。
4.曲张链丝菌素衍生物的纯化与制备
HPLC从发酵液提取产物中纯化曲张链丝菌素衍生物
将提取后的发酵产物溶于甲醇中后过有机系滤膜，过滤后取溶液进样，色谱条件为：A相为水；B相为乙腈；流速3mL/min，洗脱程序为0-20min,35-65％B；20-28min,65-95％B；28-30min,95％B。目标化合物出峰时间为12～24min处。色谱柱为Agilent公司的ZORBAXEclipse XDB-C18反相柱(5μm,9.4×250mm)。
5.曲张链丝菌素衍生物的LC-ESI-HRMS检测
将提取后的发酵产物溶于甲醇中后过有机系滤膜，过滤后取溶液进样，色谱条件为：A相为水；B相为乙腈；流速1mL/min，洗脱程序为0-20min,35-65％B；20-28min,65-95％B；28-30min,95％B；30-33min,95-35％B；33-38min,35％B。色谱柱为Dikma公司DiamonsilC18反相柱(5μm,4.6×250mm)。洗脱后的液体进过1:1分流后接入ESI-HRMS检测器，ESI选用正离子模式。经过优化后的离子源条件是：喷雾电压3.5kv，毛细管温度275℃，鞘气流速50L/h，辅助气流速10L/h，离子源温度为275℃，扫描范围m/z 300-1000，样品进样量为10μL。
6.生物学活性——最小抑菌浓度值(Minimal inhibitory concentration,MIC)的测定
本方法参考美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory StandardsInstitute，CLSI)的需氧菌的稀释法抗菌药物敏感性试验，批准标准-第九版(Methods forDilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That GrowAerobiacally,Approved Standard-Ninth Edition)中微量肉汤稀释法。
(1)抗菌药物原液的配置：
取常用测定浓度上限10倍数值为抗菌原液浓度，即1280mg/L。原液配置好后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，小量分装备用，剩余原液-20℃保存。
(2)测试菌的接种：
培养基的配置：菌株活化培养基选用哥伦比亚血平板。抑菌试验选取MH肉汤。
测试菌液的准备：将测试菌以平板划线法在哥伦比亚血平板上进行活化，37℃培养观察16-18h待单克隆菌株生长后，挑取几个单一菌落直接悬浮与MH培养基中至0.5麦氏比浊标准，再用肉汤以1:100稀释(含菌量约106CFU/mL)备用。比浊标准：0.048mol/L氯化钡0.5mL加0.18mol/L硫酸溶液99.5mL，混匀后用530nm波长调整期浊度，使吸收值为0.1，该浊度为0.5麦氏比浊标准，相当于5×(107-108CFU/mL)。
抗菌药物的稀释：将抗菌药物用MH肉汤以二倍稀释法将第2至第12个孔稀释成下列浓度：256mg/L、128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L，稀释方法见表5。
表5抗菌药物的稀释方法
测试菌的接种：取稀释好的测试菌液依次由抗菌药物低浓度至高浓度从第1至第11个孔中每孔接种100μL，则每孔最终接种菌量约为5×105CFU/mL，每排药物最终浓度为128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L、0mg/L物与菌液混匀后，加盖并用封口膜密封后置于37℃培养观察18-20h，操作步骤如表5。
(3)结果判断：
在黑色背景光源下观察肉汤出现浑浊，孔底出现沉淀为标准判断测试菌是否生长，无测试菌生长的所含最低抗菌药物浓度即为MIC值。为使结果更快速清晰，可在每孔中加入5g/L氯化三苯四氮唑(TTC)5μL，35℃孵育1-3h后呈红色的为有测试菌生长。
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
【实施例1】产生新型曲张链丝菌素衍生物(1和2)工程菌株的构建
产生新型曲张链丝菌素衍生物工程菌株为失活或缺失stvP4基因的曲张链丝菌素产生菌。
(1)stvP4同框敲除重组质粒pWHU2801(图2a)
1)以曲张链丝菌素野生型产生菌链霉菌XW-1(保藏标号为CCTCC NO：M2017417)的染色体DNA为模板，以stvP4-L-F和stvP4-L-R为引物，在stvP4基因上游扩增出1990bp片段作为stvP4同框敲除同源左臂stvP4-L。以stvP4-R-F和stvP4-R-R为引物，在stvP4基因下游扩增出1989bp片段作为stvP4同框敲除同源右臂stvP4-R。
2)将同源左臂stvP4-L直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP4-L，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点NdeI与PstI将其酶切回收。同样，将同源臂右臂stvP4-R直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP4-R，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点HindIII与PstI将其酶切回收。
3)将上述回收的两个片段同经过NdeI与HindIII酶切回收的载体pYH7进行三片段酶连，经过酶切验证后得到正确的重组质粒pWHU2801，用于基因stvP4的同框敲除。
(2)stvP4同框敲除菌株ΔstvP4的构建
将stvP4同框敲除重组质粒pWHU2801转入大肠杆菌ET12567/pUZ8002，以阿泊拉霉素、卡那霉素及氯霉素作为抗性筛选标记进行筛选，将筛选到的经质粒提取及酶切验证正确的转化子ET12567/pUZ8002+pWHU2801作为接合转移供体菌，以曲张链丝菌素野生型产生菌XW-1作为接合转移受体菌，按照上述接合转移方法将pWHU2801导入其中。再利用阿泊拉霉素为筛选标记，筛选到具有阿泊拉霉素抗性的接合转移子后将其进行松弛培养(松弛培养：在含有1％MgCl2的培养平板上划单克隆培养)，将松弛培养获得的单克隆经在含有阿泊拉霉素和非抗平板上进行影印培养，筛选到对阿泊拉霉素敏感的菌株，这些菌株为可能的双交换突变株或野生型菌株。利用验证引物CK-stvP4-F和CK-stvP4-R，以其基因组DNA为模板进行PCR筛选和验证，理论阳性扩增条带为1001bp。经PCR筛选和验证正确的菌株为双交换突变株即stvP4同框敲除菌株ΔstvP4，进一步通过Southern blot分子杂交证实突变株ΔstvP4构建成功(图2b)。
将突变株ΔstvP4与野生型XW-1对照组一起进行发酵，并对其发酵产物进行HPLC-UV分析检测，结果如图4所示。结果显示突变株ΔstvP4产生了新型曲张链丝菌素衍生物1和2，而对照组野生型XW-1不能被检测到这些新化合物。
【实施例2】产生新型曲张链丝菌素衍生物(3和4)工程菌株的构建
产生新型曲张链丝菌素衍生物工程菌株为失活或缺失stvP5基因的曲张链丝菌素产生菌。
(1)stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802(图3a)
1)以曲张链丝菌素野生型产生菌链霉菌XW-1(保藏编号为CCTCC M2017417)的染色体DNA为模板，以stvP5-L-F和stvP5-L-R为引物，在stvP5基因上游扩增出2098bp片段作为stvP5同框敲除同源左臂stvP5-L。以stvP5-R-F和stvP5-R-R为引物，在stvP5基因下游扩增出1928bp片段作为stvP5同框敲除同源右臂stvP5-R。
2)将同源左臂stvP5-L直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-L，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点NdeI与PstI将其酶切回收。同样，将同源臂右臂stvP5-R直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-R，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点HindIII与PstI将其酶切回收。
3)将上述回收的两个片段同经过NdeI与HindIII酶切回收的载体pYH7进行三片段酶连，经过酶切验证后得到正确的重组质粒pWHU2802，用于基因stvP5的同框敲除。(图3a)。
(2)stvP5同框敲除菌株ΔstvP5的构建
将stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802转入大肠杆菌ET12567/pUZ8002，以阿泊拉霉素、卡那霉素及氯霉素作为抗性筛选标记进行筛选，将筛选到的经质粒提取及酶切验证正确的转化子ET12567/pUZ8002+pWHU2802作为接合转移供体菌，以曲张链丝菌素野生型产生菌XW-1作为接合转移受体菌，按照上述接合转移方法将pWHU2802导入其中。再利用阿泊拉霉素为筛选标记，筛选到具有阿泊拉霉素抗性的接合转移子后将其进行松弛培养(松弛培养：在含有1％MgCl2的培养平板上划单克隆培养)，将松弛培养获得的单克隆经在含有阿泊拉霉素和非抗平板上进行影印培养，筛选到对阿泊拉霉素敏感的菌株，这些菌株为可能的双交换突变株或野生型菌株。利用验证引物CK-stvP5-F和CK-stvP5-R，以其基因组DNA为模板进行PCR筛选和验证，理论阳性扩增条带为1006bp。经PCR筛选和验证正确的菌株为双交换突变株即stvP5同框敲除菌株ΔstvP5，进一步通过Southern blot分子杂交证实突变株ΔstvP5构建成功(图3b)。
将突变株ΔstvP4与野生型XW-1对照组一起进行发酵，并对其发酵产物进行HPLC-UV分析检测，结果如图4所示。结果显示突变株ΔstvP5产生了新型曲张链丝菌素衍生物3和4，而对照组野生型XW-1不能被检测到这些新化合物。
【实施例3】菌株发酵产物的HPLC-UV分析
将上述构建的各高产菌株及对照组野生型XW-1一起进行50mL小规模平行发酵与产物提取，并对其发酵产物进行HPLC-UV检测，对各突变株中曲张链丝菌素系列产物的离子峰进行了抽提，结果如图4所示。
突变株ΔstvP4按预期积累了曲张链丝菌素D，其产量相较于野生型XW-1提高了约100倍，同时突变株ΔstvP4积累了两个明显的曲张链丝菌素生物合成中间体或旁路代谢产物(1和2)；突变株ΔstvP5仍然能够产生原曲张链丝菌素I，且同时积累了两个明显的曲张链丝菌素生物合成中间体或旁路代谢产物(3和4)(图4)。
【实施例4】新型曲张链丝菌素(化合物1-4)的制备与生物学活性测定
(1)突变株的大量发酵与产物粗提取
将突变株ΔstvP4或ΔstvP5按如下方法进行大量发酵与产物粗提取：
将在50mL×4TSBY培养基中28℃培养2d的种子发酵培养基以1:10(v/v)的比例转接至250mL×8的SFM高产培养基中28℃发酵7d。将发酵完成的发酵液以等体积的乙酸乙酯萃取3遍，保留乙酸乙酯相。将乙酸乙酯相分离出来后经过旋转蒸发仪浓缩至干，然后重新用色谱级的甲醇溶解至10mL得到发酵提取浓缩液。
通过HPLC从发酵浓缩液中制备各目标产物，将这些产物进行了LC-ESI-HRMS及1H、13C、1H-1H COSY、HSQC和HMBC核磁共振分析检测(图5-图9)，经结构鉴定，上述各组分产物结构均与图1中结构相符，其LC-ESI-HRMS如图5所示，1H、13C NMR检测波谱数据见表6。
表6化合物1-4的1H和13C NMR波谱数据(600M,D2O,ppm)
(2)生物活性测定
选取金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213、ATCC25904、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC43300、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离菌株USA300 LAC和USA400MW2作为测试对象，对新型曲张链丝菌素(化合物1-4)，以万古霉素作为阳性对照进行最小抑菌浓度(MIC)测试，测试结果如表7所示。
表7微量肉汤稀释法MIC值测试结果
表中所述化合物2，3和4对金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 43300，以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离菌株USA300LAC和USA 400 MW2均表现出较强的抑制活性，其最小抑菌浓度(MIC)值可低至2μg/mL。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 武汉大学
<120> 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用
<160> 13
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 95304
<212> DNA
<213> Streptomyces spectabilis
<400> 1
gtcaccaacg gcgcccgcct ggagacgtac accatcgagg gcgagcgcgg cagcggcgtc 60
atcgggatca acggcgcggc cgcgcacctc gtgcaccccg gcgataaggt gatcgtcatc 120
agctacgccc aggtcgacga cgccgaggcc cgcaccctgc ggccgcgggt cgtgcacgtc 180
gacgagggca accgcgtcgt ggccctcggt gacgacgccg ccgcaccggt gccgggcgcc 240
gccgacatgg cgcgctcccc gcaggcggcg gcgcgcgcct agcggcacca cgcgacagcg 300
gcacggccat acggcgcccg gccggggcgc ggcgaggagc ggcgacgatg agtgacaccg 360
cggcggccgg gcggccgttc ggcatccggg acgacagggc gcgcggcgtc ctgctcgccg 420
aggaggacgg gcagaccgtc ggccggatcg tctacttcac cctggccgcg ccggagcccg 480
ccctcgtgcc cgtgcacacc gaggtgccgc ccgcccacga gggccgcggc atcgcgagcg 540
ccctggccac ggagctgtac gcgctcgcgg cccgcgagga ccgcgcggtc gtgccgctgt 600
gcccgtacgt cgccaagtgg gcggagcgcc accaggtccc ggcgccctcc gccgcgctcg 660
tcgaggccgc gctcgccaag gtcgaggacg acccgtcgac gtggtgaccc tcgcgctcct 720
gcacacctcg cccgtccacg tgccggtctt cgacgcgctc cgggaccagg accagccggg 780
cctggcactg tgccacctcg tgcacgaggg gctgctcgac cgcgcccgcg acgaagggcc 840
cgacgccgtc gcggacgagc tcgggcagat cctggaacgg gccgtggccg acggcgcggg 900
cgccgtgctg tgcacctgct cgacgatcgg cggcgtcgcc gaggcccgcg ccgccgcgct 960
cggcgtgccc gtgctgcgcg tcgaccggcc catggcggcc gccgccgtca ccgagggccc 1020
ggcggtcacg gtcctcgcca cggtcaccag caccctcgcg cccaccgccg ccctcctggc 1080
ggaggaggcc gagcgggccg ggcgcaggat cgacgtgcgc accgtcgtgg tggacggcgc 1140
gtgggagcgc ttcgaggcgg gggaccggga cgggtatctg cggctgatcg ccgccgccgt 1200
cgagcgggcc gacgccgacg gcgccgatgc cgtcgtgctc gcccaggcct cgatggcgga 1260
cgccgccgcc cgctgtgccg tgcgggtgcc ggtcctcgcg agcccgcgca cgggtctgcg 1320
cgccgccgcc ctgtgcgtgc cgcgcggctc ctagcgcgcc gcgcgccccg tcgggaggag 1380
tggactcggc gcgcgtgggc acgcgagccg ggagagagtg ggggacggcg gcctccgcgg 1440
cgccgcgcgc ggccgtcccg ccggaaggtg ccggccgcct ccacccaccc ctgggaggaa 1500
gcatgaccaa cccgttcccc gaccccgtcc agcccggccc cactccgggc ccccgcccgg 1560
agccgccgcc ggggcccccg ccaggaccgg ggcccgcccc gggcccggtg cccgtgccgc 1620
agcccccgcc gtccccggtg cccaagccgc cgggcccgga ccccgtaccg gatccggacc 1680
cgacgcccga gccgatgagc taggcccgct ccgcgcgagg gctacgcctc gacctccgag 1740
cggtcgccgc cccacagcgt gtggaacgaa ccctcgcggt ccgtacggcg gtaggtgtgc 1800
gcgccgaagt agtcccgctg cccctgcgtg agcgcggcgg gcagccgctc cgcgcgcagc 1860
gcgtcgtagt aggcgagggc cgcggcgaag cccggcgcgg gcacgccctg ctgggtcgcg 1920
gcgacgagca cggcgcgcca gtcgtcctgc gccgcgccga tctcgcgcgc gaagccctcg 1980
tcggcgagga ggctcggcag gtcggcgcgc gcgtcgtacg cggcgcggat gcggtcgagg 2040
aacgccgccc ggatgatgca gccgccgcgc cagatcgagg cgaccgcgcc caggtcgatg 2100
tcccagccgt actccgcgct gcccgccgcg atctcgtgga agccctgcgt gtacgacacg 2160
atcttcgagg cgtacagcgc ctgctcgacg cggtcggcga aggccgccgc cgcctccttg 2220
gacagcggtt ccgcgaccgg gcccgccagg tcgcgcgagg cggcgcgcag ctccgtgtgc 2280
cccgagacgg aacgggcgaa caccgcctcc gcgatgcccg acaccggcac gcccaggtca 2340
agggcgatct gcacggtcca gcggccggtg cccttctgct cggcccggtc cgccacgacg 2400
tccacgaacg gcttgccggt cgcggcgtcc acgtgcgcca ggacctcggc ggtgatctcg 2460
atcagatagg agtcgagccg cccccggttc caggtgcgga agatgtcggc gatctcggcg 2520
ggggagtagc ccgccacctc gcggagcagc tggtacgcct cggcgatcag ctgcatgtcc 2580
gcgtactcga tgccgttgtg caccatcttc acgaagtggc ccgcgccgtc cgggccgatg 2640
tgcgccgtgc aggggctgcc gtcggcggcc ttcgcggaga tcttctccag catcggaccg 2700
agcgccgcgt acgactccgc ggagccgccg ggcatgatgc tcgggccgtt gagcgcgccc 2760
tcctcgccgc cggagacgcc ggtgccgacg aagtggatgc cgagctcgcg cagttcgcgc 2820
tcgcggcgcc gggtgtccgc gaagtgcgcg ttgccgccgt ccacgatcat gtcgcccggt 2880
tcgaggagcg gtgcgaactc cttgatgacg gcgtccgtcg gctcgcccgc cttcaccatg 2940
acgacgaggc ggcgcggccg ctcgagggcc gccacgaagt ccttcgcggt ctccgtgtag 3000
acgaactccc cctcgtcgcc gaactcgtcg acgagcgcgc gggccttggc cgcggtgcgg 3060
ttgtgcacgg cgaccgtgaa gccgttgcgg gcgaagttcc gggcgaggtt gcgccccatc 3120
accgcgagac ccgtgacgcc gatctgcgct gaactgctca tgtgctagct cctgggttcc 3180
tggaaatccg acgtaccgcg accgcccggc acaccgcctg acctgccggg cacgtcatgg 3240
gtgacgcatg tgtcgtaggt aacgcgtctg cccgtcagta tcactccgcg gcgtaccgtg 3300
accttggaca ccgtgcccga aggaggagcc gcccgtgccg catttcgacc tgccgctcga 3360
ccaactgcgc cagtaccacc cggacctgcc ggaacccgag gacttcgacg ccttctggga 3420
gaagaccctc gcggccgcgc gggagcacga cctggacgtc cggttcgagc ccgtggacgt 3480
gccgctcgcc tcggtcgacg tcttcgacgt gaccttcgcg ggcttcggcg gtcaccccgt 3540
caagggctgg ctgctgctcc cggccggggc gcgcgagccg ctgcccgccg tggtcgagta 3600
catcgggtac ggcggcgggc gcggcctgcc gcacgagcga ctgctgtggt cggcggccgg 3660
gttcgcgcac ttcatcatgg acacgcgcgg gcagggcagc ggcggctcgg taggcgacac 3720
ccccgacccc gtgggcagcg cgccggcgta ccccggcttc ctgacgcgcg gggtcgagga 3780
cccgcacgag tactactacc gccgcgtctt cacggacgcc gtgcgcgccg tcgaggcggt 3840
gcgcgcgcat ccgctggtgg acgccgcgcg cgtggccgcg gtcggcgaca gccagggcgg 3900
cggcatcacg ctcgccgtcg gcgggctcgt gccggacctc gccgcgatct ccccgaacgt 3960
gccgttcctg tgcgacttcc cgcgcgcggc gacgctcacc gcccggcccc cgtaccggga 4020
gatcggactg tacctggggg cgcgcagggg gcgcgaggac cgggtgttcc gcaccctctc 4080
gtacttcgac ggcgtgcact tcgcggcgcg cggccgggcg cccgcgctgt tctcggccgc 4140
tctggaggac gagacgtgcc cgccgtcgac ggtcttcgcc gccttcaacg cctacgcggg 4200
cagcgagcgg tccatggagg tctaccgctt caacgaccac gagggcgggg gcgtcttcct 4260
ccaggatgtg caactccggt ggcttccggg gcatttgagg aactgaccag ttcaacgccc 4320
tctgcgcgcc ctcctcttgt cacagtgacg gccgaccggc tagcttgcgg ccttgtcctg 4380
tggctgacgt gtgaccttgc gtacaacgcg tgtctgaggg ggctctcatg gccttacgag 4440
gccggcatcg ccggtaccag ccgagccgga tcaaccgtgc ctcgctcacc gtcacggcgg 4500
gcggcgcggg cctcgcgctg cccctggtgt ccgcgggcac gggccacgcg gcggacgtcg 4560
acacctggaa caaggtggcc gcctgcgagt ccacgaacaa ctggagcatc aacaccggca 4620
acggcttcta cggcggactg cagttcaccc agtccacctg ggaggcctac ggcggcacgg 4680
cgtacgcgcc gcgcgccgac ctcgccacca aggaccagca gatcgccgtc gccgagaagg 4740
tcctcgacgg gcagggcccc ggcgcctggc ccgtgtgctc ggtgcgggcg ggcctgaccc 4800
ggggcggcga caccccggac atcaagcccg ccacggcacc ccagaagcgc acgggcacgg 4860
cgaacgacgc cagggcggag ggcggccgca cggcaccgag gccgccgcag cgcaccgtca 4920
aggacgtcaa gccggagtcc accccgcagt ccgccgcggg caccgcccgc atgtacacgg 4980
tggtgcgcgg cgacaccctc tccggcatcg ccgacgagcg ccgggtgcgg ggcggctggc 5040
cgcagctgta ccagaacaac cgccgtgcca tcggcgacga tccggacctc atcaccccgg 5100
gccagcggct ctcgctgcgc ggcgcggacg gcaaggagaa gcggcccgcc cggccgcccg 5160
agcgcaggaa gccggagggc acggagcgcc cggacaagcg gccggtgcgc gcgcccgaga 5220
agcagcgctc gcatccgcag gccaagccgc aggagcgcaa gcaggccaag ccgcaggagc 5280
ggaagcaggc caggcccgcc ccgaagcgcg acacggcacc ggcgggacag cggaaggcga 5340
aaccggccgc acaggcgcag tcgggcgcca ccgcgcccgt cgccgcctcg atcggcacgc 5400
cctaccgcgc ctccggcagc tcctggtcga agggctacca cacgggcgtc gacttccccg 5460
tgcccacggg caccgcggtg aaggccgtcg ccgcgggcac ggtcgtcgag tccggctggg 5520
gcggctcgta cggctaccag gtcgtgatcc gccacgccga cggcaggtac tcgcagtacg 5580
gccacatgtc ggcgctctcg gtgaaggccg ggcagaaggt cgtcccgggc cagcgcatcg 5640
gccgctccgg atcgaccggc aacagctcgg gcccgcatct gcacttcgag atccgcacgg 5700
gccccggctt cggctcggac gtcgacccgc tggcctatct gcgggcgcgc ggcgtccgca 5760
tctgaggcgc ccgcgccgcg gacacacgcg tacgggcccc gggtctcggt gagagacccg 5820
gggcccgtac gtacgcgtgc cgtccgtctt ccgctacgcg cgtgccgccc tggcgtccgc 5880
acgcgggaac gtctgcagga ccggttgcat cggcacgccc gcgagcccgg cgaggccctc 5940
gggcaggaac gactgctccg gcgcggcctg ttcgcccggc cgcgaccgcg tgcccgcgtc 6000
ggcgccgggg cgctcgtcgt ggtccggcac gcgctgctcg gtgaccgtgg ccgtctcctc 6060
cgacgcggcg gaggcggggg agacggcagc accgggagag acaggggaga tgggggagac 6120
gggagaggtg ggtgaggcgg tcgagggcgt ggggacggag cgggccaccg gctcggcggc 6180
gggccggtcg tcgcggggcg cggccggtgc ggcgtcgtcc cgggccgcgg ccgaggccgc 6240
ctccgccccg atgcgctccg tggtcagcag gataagcccg cccgcggcga ccacgccgca 6300
ggtcagcgcc accgccgtgc ccacggctcc gtagcggaag gattctccga acagggtgag 6360
gccgaccgcg gccgctatca ccgggttcac caccgtcacc gtggacagcg gcgccgcgag 6420
gcccgcgccc cggtaggagg cctgggacag caggagtccg gcgaccgcga gcaccgcgat 6480
caccgcgagg ctcggcacct gccgggtcag cggctcgtgg gcgtcccagt ccaccgcgac 6540
cgtcttcgtg aagaccgagg agatgccgaa ggcgatgccc gccgccgtgg cgagcagcac 6600
gctgcgcacc gccgggtgcc ggtgcgccgc gtgcgcgagc agcatcaggc agaccacggc 6660
cccgcccgtg ccgagcgcga gcatgacgcg ctcggtgtcg gccagggacc gggagtcggc 6720
ggcctgcgtc agcgagagca ggcccgccag gcccagggtg gccatgaggg cgccgcgcca 6780
ggcggtggca ccggccttgc ggcgcacgaa catcgccgcc atcggcaggg cgaacacgat 6840
cgtcagggcg cccaggggct gcaccaggct cagcggcccg taggcgagcg ccacgacgtg 6900
cagcagcccg ccgaggccgt tcaggaccac cgcgacccac cacacgccgc ggcgcagcgg 6960
cgcgtactgg tactgcgagg ccgtcgccgc cacctgctcc tggaggatcg ccccgcccgc 7020
gtacgccacg gcggagacga gggagagcag gacggacagc gcgagggcgc tcatgaggcg 7080
ctccaccggt gagggcaacg ccggtcggcc cggtacgtgt cgtgcccgta cgtccggtac 7140
gaacggtgcg gcgtgcggtc ggcttccatg ttcaccacaa tgtcgcgcga agcgcggcaa 7200
gtcgtcgtcc ctgagcagtc aatccgtcct actaccgatg gagtacgacc tcccgtatgt 7260
cctccccagg tctggttacc cacgaggtcg ggggcttctg atgtactgct gcggtgacag 7320
ctcgcagccc tgacatcgcc tgggacgtgg tcggatccgt cggcggcttc ttcgccctgc 7380
ggacggggga gccgccgggt cggacactcc ccatggtcgc acgcgtgtac gagatcggca 7440
gggtggtcac ggagggtgac ccgctgtcct tccgcgtcac caaggtcgcc gcccggctcg 7500
ccgctcccga gccgcgcgtc gcggcctcca tcgcccacct cggcctcgcc gcccgcctgt 7560
ggtccctcgc gctcggcccg gccgccctgt acgggcgcgt gcccgacctc gacccgcggc 7620
ggctgcgctg ggacgccgac ggcagctcgc cggacgacct gtggctcagc ggcgaccgca 7680
ccttccccgc cgacgccgcg cgcatccggg aagtcgtcct ggaaggtcac ctcgcgccgc 7740
tcgcggccgc cctgcgcgcc cgctaccgga tctcccccgc cctcctgcgc ggcaacgcgg 7800
gctcggccct cgcgggcgcc gcccgcgaac tgcacgcctg ggcggagcgc accggccgcc 7860
ccgaggcggg acggcgggca ctcgccctcg ccaccgaact cttcaccgcg ccggagctgc 7920
gcggcaccgg caccctggac ggcaccgcgt tccggcggcg cagctgctgc ctgtactacc 7980
gctgtccgaa cggcggcctg tgcggcgact gttgcttcga ccggccgccg cagcggtctt 8040
ccctcgaagc gcccgctggg tgaccatgag ggggccggcc gacgacgggg ggctccgctc 8100
gtgaaagtgg gactgctcac ccgcgagtac ccgccggacg tctacggcgg cgcgggcgtc 8160
cacgtcgagt tcctcgcccg cgagctgcgc gccctgaccg acctcgacgt ccactgctgg 8220
ggcaccgaca ccgaccgcgt ggccgccgcc gacgcggcgg tgcgccaccg cgcgtggagc 8280
gccctcgaca ccgccaatga cgcgctgcgc accctgtccg tcgacctcgc catggcggcc 8340
gcgctcgacg gccgcgacct cgtgcacacc cacacctggt acgccaacct cgccggccac 8400
gtcggcaagc ttctgcacgg catcccgcac gtcatgacct cgcactccct ggagccgctg 8460
cgcccctgga aggccgagca actgggcggc ggctacgccg tgtcgagctg ggccgagcgc 8520
accgccgtcg aggccgccga cgccgtcatc gccgtctccg gcgccatgcg cgaggacatc 8580
ctcgcctgct atccggccgt cgaccccgcg aaggtgcgcg tcgtccacaa cggcatcgac 8640
accgagctgt accgcccgga cccgggcacc agcgccctcg tccggcacgg cgtcgacccc 8700
acccgcccgt acgtgctgtt cgtcggccgc atcacccggc agaagggcgt gccccacctg 8760
ctgcgcgcgg cccggtgcct ggagcccggc gtccagctgg tgctgtgcgc gggcgcgccc 8820
gacaccccgg agatcgaccg ggagttccgc gccctgttcg aagagctgag ccgcgcccgc 8880
gccggcgtcc actggatccc gcgcatgctg ccgcgccccg aggtcgtgca actcctcagc 8940
cacgcggcgg tgttcgcgtg cccctcggtg tacgagccgc tcggcatcgt caatctggag 9000
gccatggcct gcggcacggc cgtcgtcgcc tcgcgcgtcg gcggcatccc ggaggtcgtg 9060
gcggacggca cgaccggact cctcgtgccc tacgaccggc acgacgagga gcgcttcgag 9120
cacgacctcg gtctgctcct gaaccacctg gccgccgatc cgcgccgggc ggcggccatg 9180
ggcgcggccg gacgctaccg ggccaggcgc gagttcggct ggggcacggt ggcccggcgc 9240
acggtcgagg tgtacgagga cgtactgggc gtgctcaagg caacgtaagc gggcacacgg 9300
acactcgggg gcgtccgcac gcccccgcca cccggccgag gaacggtccg ggcccacagg 9360
gcggtagagg gggcggcgat gcgcggcgga ccttcggtgc tggggatcgt cctggcgggc 9420
ggcgcgggca agcggctgct gccgctcacc gccgaccgcg cgaaaccggc ggtgaccttc 9480
ggcggcacct accgcctcgt cgacttcgtg ctctccaacc tcgtcaacgg cgacgtcctg 9540
cgcatctgcg tcctcacgca gtacaagtcg cactccctgg accggcacgt gtccaccacc 9600
tggcgcatgt cgagcctgct cggcaactac gtcacgccgg tgcccgccca gcagcgcctc 9660
gggccgcgct ggtacctggg cagcgcggac gcgatcctgc agtccctgaa cctcgtccac 9720
gacgaacagc cccactacgt cgcggtgttc ggcgccgacc acgtgtaccg catggacccc 9780
cggcagatgc tggagcagca cgtcgagtcc ggcgcgggcg tcaccgtcgc cgggatccgc 9840
gtgccgcgcg cggacgcccg gcagttcggc gtcatcaccc cggcgcgcga cggcacgctc 9900
gtggagcgct tcctggagaa gccgcaggac ccgccggggc tgccgggcgc cccgcaccag 9960
gtgtacgcct ccatgggcaa ctacatcttc accaccaagg ccctcgtgga cgccctgcgg 10020
caggacgccg atgacgagga ctcggcgcac gacatgggcg gctccatcct gccgatgctc 10080
accgagcgcg gcctggccca ggtgtacgac ttcgacggca accacgtgcc gggggagacc 10140
gcacgggacc acggctactg gcgcgacgtc ggcacgctcg acgcgtacta cgaggcgcac 10200
atggacctga tctccgacca gcccgtgttc aacctcgaca accgctgctg gcccatctac 10260
acccaccccg gccagctccc gcccgccaag ttctgcgcgg gcggcatcgc cggggagtcg 10320
atcgtcagtc ccggctgcgt catccgcggc caggtcacgc ggtccgtgct ctcgcccggc 10380
gtcaccgtcg aggagggcgc ggtcgtccag ggttcggtcc tccacgacaa cgtgcgcgtg 10440
ggccggggcg cggtggtgcg cggcgccgtc ctggacaaga acgtggacgt cccgcccggc 10500
gccacgatcg gcgtgaaccc ggagcgggac gccgagctgt acacggtctc gcgggccggg 10560
gtcatcgccc tcggcaaggg gcagtgcgta ccggagtgac cggagcggcc ggggcgacca 10620
gagcggtcgg ggcggccggg gcgcggggac ggcccggcgg agactaccca cgctggtgat 10680
ggttccggcg ggcggtgagg gcgagactga gcgcacttca gacccgcagt gcgtcggcag 10740
ccgtgccggg agcgacgtcg ccggcctgct cgccacggca gcactccact cgaaggacct 10800
cacttgacgg aaacaagagc tggggattcc gcgcggccgc tggaggtggc cctgatcggc 10860
gccggactga tcgcgcggct gcacctcgac gcctggatca gcacgggggc gtccgtgcgc 10920
gtccactcca aggacggccg cgcccccgac ctggcacgcg cctgcggcgc gcgggccgtc 10980
gacaccctcg acgaggcgct ggacggcgcg gacgtcgtgg acatctgctc cccgacgagc 11040
agccaccacg agatcgccat ggccgccgtc gcggcgggcg tcggcatcgt gtgcgagaag 11100
ccgctggccg ccgacgtgac ggaggccgag gagatcgtca ccgcggcgga gcgggccggg 11160
gtgcggctct gcccgaccca caacgcccgc ttcgccccgg cgttcgcccg gctccacgac 11220
ttggtcgcgg cgggcggaat cggcgcgggc gcggtcgcca cgttcgacgt cgccggatac 11280
cacccgcggc cctggaccgg ccgcgcctcc gcgcggtcgg gaggcatcct gaccgaccag 11340
atgctgcacg gcgtcgacat cgcctactgg atcttcgggg acgtcgtccg cgtgcacgcc 11400
cactaccagg ggcagctcac cgccccggcc cccgagggcg ccttcgcggt cggcaccgcc 11460
gtcctcaccc acgccgacgg cgcgctcagc cggatcgtga gccgctggac ggcgacgccg 11520
gacccgccca tccgcgtcgc ctaccacgtc tcgggcacgg gcggcacggt gctccacgac 11580
tccgaatggc cccaggagat caaggtgttc ggcggcgcgg gcggggcctt cgccccgcac 11640
ggggaatcgc cgttcctcgc cgagatccgc gagttctccc gggcgttcca gggcggccca 11700
gagccccgcc tcggcccccg cgacgcgctg gccgccgtcc gcatcaccca ggccgccgcc 11760
gagtccgcga gcacgggccg ggccgtggaa ctgcccgtga agggggccgc atgaaggtcg 11820
cagtgctctc gctcgcccac gaacgcgccg cggcgtacgc ccggctgctg cgcgccatgc 11880
caggcgtcga cctgctcgtc gcggaccccg aaggagcgcc ggacgagcag ggccgggggc 11940
aggccgcggc ccggcggctc gacgcggcgt acgcgggcag ttgggacaag gcgttcgcgc 12000
tgcgccccga cgccgtcgtc gtcacgagcg aggtcgcccg ccgccgtgaa ctggtcgagc 12060
gcgccgccga gatcggcgcc cacgtcctgt gcgagcggcc gcaggcggac acggaggcgg 12120
acgccgatgc catggtgcgc gcctgcgagg acgccggggt gcggctgacc ctcgcggcac 12180
cggcctgctt cagcccggcg ctcgccgccg tgcgcgcaca gctcgccgac ggcgcggcca 12240
tcggcccgct caccaccgtc cacggcacgt actacggccc cggcgaccgg gcggccggcg 12300
gagcgctgcg cacccacgcg cccgtcctgc tcgacctggt ggacaccgtg ctcgacggcg 12360
cacccgcggc gcaggtctac gcccagtcga acagcgtcct cagcggcgac ccggacgtcg 12420
agagcgcggc cctgctcacc ctgcgcttcg ccgacgggac ggtcgcggcc ctcgactgcg 12480
gctggagccc gccggggaac caccgagcag ccgcgggacc caccctgacc ttcgtcggcg 12540
agcggggaag cgtcgagttc accgctcgcc cgaagctgct cggcggattc gactccggca 12600
cggcccgcga gcggtggacc acggccgtga gcgacccgta cgcggtcgtg ctcgacgcct 12660
tcgtcgcctc ggtcgcaacc ggccgcggga ccgggcccga cggcgcgacc ggcgtgcgta 12720
ccctccgggt gatcagggca gcctacgagt cggcacgcac cggtgagccc gttgacgtgg 12780
ccgtaccgca gcccgtacgg ccgtagcgga cccgctcggt ccatcctcat cggaggggtg 12840
cgcggcgcac gcgcccgcac ccctccgccg cgacagggag agacgcgcat gacaaggatc 12900
gggatcatcc tcggcaccac ccgccccggc cgcgtcggac cccaggtcgc ccagtgggtc 12960
gagaaggcag cccggacgcg cggcgacgcg gacttcgaac tcgtcgacct cgccgacttc 13020
gacctgccgc tcttcgacga gccgcgctcc ccgcgcatgg gcgcctatga gcacgcccac 13080
acccgcgcct ggagcgccaa gatcgccgaa ctcgacggct tcgtgttcgt cacccccgag 13140
tacaactggt cgatcccggc cgcgctcaag aacgccatcg acttcgtcta caacgagtgg 13200
aacaacaaag cggcggcctt cgtcggctac ggagcaagcg ccaacggcgt ccgggccgtc 13260
gagcacctgc gcgccatcgc cgcagcggtc cagctctcgc ccgtgtacac acaggtcaac 13320
ctgtcgctcc tgaccgactt cgagcagtac gagaccttca cccccgccga gcgccacgac 13380
gccgcgctcc agcggatgct cagcgaactg atcacccgga cccatacgct cgcgcccctt 13440
cgccgggcgt gaaccaccgc acgtgcaagg aggaccaccg atgagcctgc cgaccgcggc 13500
tcccgccacc gggcccacgc cgccggacga caccaccccc tcggtctacc gattgccttt 13560
tccgcccggg ttcaccgagc gcagcggctg ccccttcgac ccgcccccca tgctccgcga 13620
ccaccacgac cagggcgagg tgcgcgagat cgccctgacc gacggcggca ccggctggct 13680
cgtcaccggg tacgaggagg gccgcacgct gctcagcgac ccccggctca gctccgaccg 13740
gctgcgcaac ccgctggtcg tgaagctgcc ggcggagctg cgcgcccagc tcatggccga 13800
cgaggcggtc gcgggcaact tcatcgccat ggacccgccc gaccacaccc gctaccgcaa 13860
gatgctgacc cggcagttca cgctgcgccg ggtgcggcag ctggagccgc ggatcctgga 13920
gatcgtcacc gagcgcatcg acgccatgct cgcccgcggc aacagcgccg acctcgtcaa 13980
ggacttcggc ctcgcggtgc cgtccctggt gatctgcgaa ctgctcgggg tggcctacga 14040
ggagcgcggg gagttccagg cccgcaccga ggaactgctc aacctggaca tcccgttcga 14100
gaagcagctg gccgccctcg acgagctgcg gaagttcatc ctcggccagg tgcggcgcaa 14160
gcgcgcgacc cccaccgacg acatgctgtc cgacctcatc cgctccgaca ccgaaccgcc 14220
gctcaccgac gaggaagtcg tcggcatggc caacctgctg ctcgtcggcg gccacgagac 14280
gaccgcgaac atgctgtccc tcggcacctt cgccctcctg gagcaccccg agcagttcag 14340
ggccctgcgc gaccgccccg aactcatgga cggggcggtc gaggagctgc tgcgctatct 14400
gtccatcgtc caccacggcc tgctgcgcac caccaccgag gacgtcgaga tcgcggggcg 14460
gaccattccc gcggagtccc tggtcatcat ctcggtgtcc gaggcgaacc gggatccgcg 14520
ccactacgac agcccggccg ccctcgacgt gagccgcccg cgcaggaccc acctcgcctt 14580
cgggcacggc atccaccagt gcatcggcca gcagctcgcc cgcagcgaga tgaccatcgc 14640
cttccccgaa ctgctgcggc ggctgcccgg cctccgcctc gccgtcccgg ccgacgaggt 14700
gccgctgcgc gagaagatgg ccgtgtacgg cctgcacagc ctgccggtga cctgggacgc 14760
gcccgacgcg taggcgtctc gcacgcgtcg tcctaccgcg tacggctctc ccgtgcaccg 14820
ctctcccgta cgccctcccc tccgtacgcc cttccccgcc ctcccgcacg gaatagggcg 14880
tacggaaatg ccgtacaaac acgcgccgtg caaaagcgga attccgcggc ggccgcgcgc 14940
ggccggaatt ccggtgaatt ccggagcgcc ggggaaaatt accaggttga ggggtgctcc 15000
taggggccgc cgctgcctca ccctgggaga cgtcaccagc caatcgtcga cgacagggac 15060
ggaccgggat gaccgacgac aacgcatacc agcacttcga cgcgaccacc ctggactacg 15120
aacgcgcgta tcggaccagc tccctggtgg agggcgtggt gctggagcgg atgccctggg 15180
acatcggcgg accgcagccg gtcctggtcg aactggaaag ggcgggccgg gtgtccggcg 15240
acgtcctcga catcggcagc ggcgtgggtg acaacgcgat ccacctggcc cggtgcggct 15300
atcgcgtgac cggcctcgac gtcgcgccca ccgccgtgga gaaggcgcgc gcccgggccg 15360
cggagaaggg cgccgacgtc accttcgccg tcggcaacgc gacgagcctg gacggctacg 15420
agaaccagtt cgacacggtg accagcagcc tcgtcttcca ctgcttcggg ccgaagcagc 15480
gccgcgcgta cgcggacgcc atcgcacggg tcctgcggcc cggcgggcgg ctgctccagt 15540
ggtgctcccg cggcgccgct gccggtcccg agccgatcac cgaggagacc atcagggacg 15600
ccttcagcgg ccccggctgg tccatcacca cgctccgcgc gcagcacctg acgacgaccg 15660
tcctggacga gcccctgcgc aaggactacg agggagggca gctcgacacc gacgacagcg 15720
gggccacgct gctgccgatc tggctcctcg aggcggcgcg cgactgagcg cccccggacc 15780
cgcgcacgag ggtgccgaca tgaccgagac gcccgccacg ccgacgggcc tgcccaccgc 15840
ccgcgcggcc ggctgcccgt tcgacccgcc ccccggcctc gccgcgctgc gcgaccgggc 15900
cccgctgacc cgcatggagt tcccgaacgg ccacgtcggc tggctggcca cgggccatgc 15960
ggtggtgcgt gccgtgctcg ccgacccgcg cttcagccac cgcaacgaca ggaggcactg 16020
gcccctggcc gacatcggcc gggggttccc gccgctgccc ggcgacatgc tccacatcga 16080
cccgccggac cacacgcgct accggaagct gctcgccggc aagttcacca tgcgccggat 16140
gcgccggctc accggcagcg cccaggagat cgtcgcgggc aagctggacg ccatggagcg 16200
gcacggcggc ccgctggacc tgctggagtt cttcgcccgc cccgtgccga cgctgatggt 16260
ctgcgccctg ctcggcgtgc cgctccagga ccgcgccacc ttccacccgc cggtccgcgg 16320
gaccgacgac gccgcagccg tggaggcgga cgtcgccgcg tacgtcgaga tgacgtacgc 16380
cgacatgcag gagtacttcc ggaagctggt ggcggccaag cgtgccgcgc ccgccgacga 16440
cctgctgagc gatctgacca cgtccgacct caccgaggac gaactggtgg gcctgtgcgc 16500
cgtcatgatg cacgcgggcg tcgactcgac ctcgaacatg ctggccctgg gcacgtgggc 16560
gctcctggag cgcccggacc aactggcggc cctgcgcgag cggccggacc tcgccgaccg 16620
tgccgtcgag gagctgatgc gctacatgag cgtcgtgcac accggctccc gcgcggcgct 16680
ggaggacgtc gaactggccg gggaggtcgt cagggccggt gagtcggtgg cgttctcggt 16740
gcaggccgcc aaccgcgacc cggcccgctt cgccgacccg gacacgctcg acatccggcg 16800
cggtgccgtg gggcacctgg ggttcgggta cggcgtgcac cagtgcctgg ggatgcagtt 16860
ggcgcgcgtc gagatgcgcg tggccttccc ggccctgttc gcgcggttcc ccgccctgcg 16920
cctcgcggtg cccgccgggg acgtaccgat gcgggacgac ctggtcatcc cttacggggt 16980
gcaccggctg ccggtcacct ggtaggtgac gggccgccgc gtgacgctgc cggagcccct 17040
ggcatcgggg ctccggcagc gtcgtgttcg tgtgtgtggt ggtgtgtggg gggcgtgggt 17100
ggtggtcagg cctgcgacgt caggcggttc agcacctgcc gcaggcagtc cagacgcctc 17160
ggcagctccg cgtccccctc gggccacgcc aggtcgatcc ctatgcggcg gtcgaaggtg 17220
gtggccacat agccgccgat ggccgcgaac tcgccggggg ccaccttcct gcgcgaggag 17280
gagtggaagt tggtgaggag caggccgtcc ggcgtccgca gggtcggcac gacgccccag 17340
ttcgacacgc tcaccacggc gggagccggg cccgcggcgc gcggcttcgc gtgcggcgcg 17400
ggctgggtga ccatgtccag gaggctgcgc tggatggagc cgtcggcgag gcccgcccgc 17460
agccgctcgc cgagcgccct gccgatggcg acggcgctgg gttcgacgtc gtcggcggcc 17520
ttgaacaggc cgcccccgac gacgttcgtc ccctcggtcg ggccgatcgg gggagtgagg 17580
cggttgcgca ggttcaccgt gtaccggaac agcagctcgg acaccggcag gccccggacc 17640
tcggcctcga cgaggaggac ggcgcccgag aggaggccgt tgagcgtcac ctgctcgcgg 17700
tggccgagct ccgcgagcgc cgtcgtctga tcctcgctca ggcggtgctg caccacgtgc 17760
cggactatcg ggatccgtgc ggaggcgggc agttcggtca cggtcttcaa cggcgccgac 17820
gcgccgcctt cgccggacgc ggcccggtgg atgccgcgct cggcgagaag gtcctcgagg 17880
gaccgcgggt acggccggcg cggcaggtcg acggacgcgc cccggaccac gtcggcgtag 17940
caggcccaca gggccgagag cagctcgatg gagtggtggg cgtcggcgat gctgtgatgg 18000
gtcagcaggg tcacgctcgc ctcgctgccg tcgcgcacca cgttgagcgc gctcagcatc 18060
cggtactcgt ccaactccac gccggtcagc gggtggtcgg ggtcgcccgc gcagatctgg 18120
acctcgggcg gggcgccgga ctccacgaag gcgagcccgc cgtcgtcggc cacgagccgg 18180
gcggcgagct gcggatgcgc gcggcacacc gccgcgtagg cggtccgcag cgcagccgga 18240
tccagtcggc cgacggtacg caccgtgtag cccacgtaca tctccacgtc ggcatagatt 18300
ttctcggtgg gtgtcagcgc acgctgaatt gcagctgtcg tcatgaatga atggcccttc 18360
cgccgacgcc cggcatgtcc gaagcctgat catttttgcc cacggggtac ggcggggcca 18420
tcaccaacgt gagtagtctc cgtaaggccg cggcccgtcc cgctcgtcga cgggcgtccc 18480
gccgcccccg cactccccgg ccgccggaac cgtttcccca cccctatgac caacgggcgc 18540
tagccgtcgc cgacttggcc accccggccc taccaggttg ggggattccg cgccgacacc 18600
gctcgactag cctggccaca gagattcaag cagcatgcgc gcggtgcgca tcccgtgtct 18660
ccggaattcc gctgcttggt ccatgacccc gtgttcgcgc ccttggccga cgttttcgcg 18720
agccgcagcg catgcgggac tttaccccga gcgggaggat ttccatgagc gacgcgattt 18780
cctatgaggt gccgtgggcg cggacccatc agttcgatcc tcccgccgtg ttcgacgcgc 18840
tgcgtgccga gcggccgctg gcgcgcatga cctacccgga cgggcacgag ggctggatcg 18900
ccaccggcca cgaagtggtg cgcgaggtcc tcggcgaccc gaggttcagc cacagcacgg 18960
agatcgggca cttcccagtg acccaccaag ggcagctggt gccgaaccat ccgaagatcc 19020
ccgggatgtt catccacatg gacccgcccg accacacgcg ctaccgacgg ctgctgaccg 19080
gggagttcac cgtccgcagg gcgagccgcc tgaaggcgcg cgtggaggcc gtggccgccg 19140
agcagatcga cgtgatgcgc gcgcacgggt cgcccgccga cctggtggag accttcgcca 19200
ggccgctcgt cctgagggtg ctctccgaac tggtcgggct gccctacgac gagcgcgagc 19260
actacgagca cgcgccgacg ctcctgcacg acccggacgc gaatccgcag gaagtggccg 19320
ccgctttcga gaaggcgggt gccttcttcg tcgaagtcat cgagcgcaag cggaagaatc 19380
ccggggacga cctcctcagc cgcctcacag cggacggtca gctgaccacg gaagagctgt 19440
gcaacatcgt cgtcctgctg ttgttcgcgg ggtacgagac cacggagagc gcgctgtccg 19500
tcggcgtctt cgcgctcctc caccacgcgg aacaactggc ggtgctccgc gcggatccgg 19560
agaaactcga caccgcggtc gaggaactcc tgcgctatct caccgtcaac cagtaccaca 19620
cctaccggac cgccctcgaa gacatagagc tgaacggtga gacggtcaag aagggcgaca 19680
ccgtgaccgt ttcgctgccc gcggccaacc gcgaccccgc gaaattcacc tgccccgaaa 19740
aactggacat cggccgcgac accgccgggc acgtggcgtt cggctacgga atccaccagt 19800
gtctgggcca gaacctggcc cgcgtcgaac tgcgcgccgg aatcgcggct ctcctcgggg 19860
catttcccga cctgcgcctc gccgtcgcca cggacgaggt gccgctccgg ctcaagggct 19920
ccgtcttcgc cgtgaagggc ctgcccgtct cctggtgagt ccccttctcc ctttctccct 19980
ccgaaaggaa ccgcggcatc gtgcgcaccg acctcatcaa gccgctgccc gtcgccctcc 20040
tggagaacgc ggcccgcttc cccgacaagg tggctttcga ggacgaccgg cgggcggtca 20100
cctacgcaga ccttgaggcg cggacgcgca ggctcgccgg tcacctcgcg gacctgggcg 20160
tggcccgcgg cgaccgggtg gccatctgcc tcggcaacac cgtctccacg gtggagagtt 20220
acctcgcggt cgtccgcgcc ggcggcatcg gcgtgccggt caatccggcc tcggcccttg 20280
ccgaactgga gtacgtactg gccgacagcg gcgccacggc ggtcatgacc gacgccgcgc 20340
aggcggcgcg cctggggcgc tcggccgccg tggaccccgc caccacgctg ctggtgaccg 20400
gcgaggcccc cgaggtgccg ggagcgcacg cgtacgacac actcgccgtc accgagccgc 20460
ccgtgcccgc ccgggacgac ctcggcctcg acgacgtggc ctggatgttc tacacctccg 20520
ggacgaccgg caggcccaag ggcgtcctgt cgacgcagcg caactgcctg tggtccgtgg 20580
cctcctgcta cgtgccgata ccgggcctca cggaccggga ccgggtgctc tggccgctcc 20640
cgctgttcca cagcctctcc cacatcgcgt gcgtcctgtc cgtcaccgtg gtcggcgcca 20700
ccgcccggat catggacggc agctccgcgg acgacgtgat cgaggcgctc cgcgagggcg 20760
gcgcgacgtt tctcgccggg gtgcccacca cgtaccacca cctggtgacg gccgcccggc 20820
agaacggctt ctccgcgccc gccctgcgga tcggcctcgt cggcggcgcg gtcaccgggc 20880
ccggcctgcg ccgggacttc gaggacacct tcggcgtgcc gctggtcgac gcctacggct 20940
ccaccgagac ctgcggggcc atcaccatca acccgcccga cggcgcccgc gtcgacggct 21000
cctgcggcct gcccgtgccg ggcgtcggcg tccgcgtcgt cgaccccggc accggcctcg 21060
acgtccccgc cgggcaggag ggcgaggtgt gggtcagcgg gccgaacgtc atggtcggct 21120
accacaacag ccccgaggcc accgccgagg cactgcgcga cggctggtac cggaccggcg 21180
acctggcccg gcgcgacgac gcgggctact tcaccatccg cggccggatc aaggaactcg 21240
tcatccgggg cggcgagaac atccaccccg aggagatcga ggcggtcctg cgcaccgtcg 21300
agggcgtcgc cgacgcggcc gtcgcgggcg caccgcacgc gacgctcggg gaggtgcccg 21360
tcgcgtacgt ggtccccgga cccgccggct tcgacaccgc gacgctgctc gaccggtgcc 21420
gcgagcggct ctccgcgtac aaggtgccgg agcggatcca cgaggtcacc ggcatcccgc 21480
ggaccgcgtc gggcaagacg cggcggcgcc tccttgccga ccggccgagc agactgcggt 21540
acgcggcgag cggccaccac gaggggctgc tgagcctcga ctgggcctcg gtcgcggccc 21600
cggcggaccc cggccccccg gcccgggact gggcggtggt cggcccggcg gcggccggac 21660
tcggcacggc cctgaaggcc gcgggcgccg acgtacggca ctacccggac ctggcggcgg 21720
tccgggccgc ggcggccgac gaggacgcgg ctcccgaggt gacggtcgtc gtacggccgc 21780
cggtaacggg cgtcgtacgg ccgtcggccc cggcggcacc ggggggcgcg cgggaggcga 21840
tcgccgccgg ccgtgagggc gcgcggctgt gggccgacga gctgcggtcc tggctggaac 21900
gtccggagtc ggccgcgtcc cgcctcgtgg tgctcacccg cgccgcggtc gtggccagcg 21960
cgcaggacga tcggcaggac ctggccgcag ctccgctgtg ggccgtcgtc ccgtccttcc 22020
aggagggggg tgcggggtcg ctcaccctcc tggacctgga tgccgacgcg gacccggaca 22080
tcttgtgcgc cgcgctcgcg acaggcgagc cgcggatcgc ggtgcgtgcg ggcgccctcc 22140
tcgcgccgcg accgagtcga ctgccggtgg ccgacgggcc gggggcggac gggcggggga 22200
cggacgggcc gggggcggag gcctggcccg gagccaccgg cacggtggtg gtcaccgggg 22260
cggacacgga gcacggcgcg gcactcgcgc accggctcgt cacggtccac caggtggaga 22320
gcctgctcct cgtcgacacc ccggggagcg ccggtacgcc gaccgcgccc gctcccccgg 22380
gggcggacat cgtccgggtg gccgccgacg ggcagcaccc ggagcagctg cgggccgcgc 22440
tcgccgacct gccccgtccg gtgagcgcgg tggtgcacgc cgccgacgac cccgaactgg 22500
ccctgcttct cgacgagatg accgcggcga acggactcgc cgccttcgtc gccgtgtccc 22560
atacggccgc gccgctcggc acgcccgacc gcctcggggc ggccgtcgac ggagccctga 22620
ccgaggcggt ggtgcgtgac cggcggctgc ggaacctgcc cggcacgttc ctcgcccggg 22680
ccgacggggt cgacatccgg gcaggagggg ccgacacggc gtgggcgggc agcccgctcc 22740
tctccgcgtt cgacctcgcc ctgaccacga acccgccgac gctcctggcc ctcgacccga 22800
gcgcgctcgc cgacagctct cgactcccca ccctgctcgc gaccttgacg gaaccgcagc 22860
cccggcggag cgagcccgac gacgccgtcg cggcggccct gcgcgagcgc ctcgccgcgc 22920
tggacgagcg tgcgcagcgg gcgctcctag aagacctggt ccgtacgcgg gccgccgcgg 22980
tgctgcaccg gtcagggtcc gaaccgatac cgtccgaccg ggccttccgc gacctgggct 23040
tcacctcgat ggccgtcgtc gaactgcgca accggctgac agagagcacg ggcctgccgc 23100
tgcccaccac cgtcgtcttc gaccacccca cccccgaggc cctcgcggcc cggctgcgcg 23160
ccgagatcct cggggtcccg cagccggtga ccgagccggt cccggcggcc gaccccggcg 23220
aaccgctcgc catcgtgggg atggcgtgcc ggttgcccgg cggcgtggcg ggcccagagg 23280
atttgtggca gctcgtggcc gagggccggg acgcggtgtc gggcttcccc gaggaccgcg 23340
gctgggacct ggagggcctg ttcgacccgg acccggaccg cgcgggcacc tcgtacaccg 23400
accagggcgg cttcctgcgc ggggcgggcc tcttcgacgc cgggttcttc ggcatctcgc 23460
cgcgcgaggc cctggcgatg gacccgcagc agcggctgct cctggaaacc tcatgggagg 23520
ccctggagcg ggcgggcgtc gaccccctgt cgctgaaggg ctccgacgtc ggggtgttct 23580
ccggcgtgtt cggccagggc tacggggcga ccggcaccgg cgtcgtcgca cccgaggtgg 23640
agggcttcgc cagcacgggc tcggcgggca gcgtggcctc gggccgggtg tcgtacgtgt 23700
tcggcttcga gggcccggcc gtcacggtgg acacggcgtg ctcgtcgtcc ctcgtggcga 23760
tccacctggc cgcgcaggcg ctgcggcagg gcgagtgctc gatggccctc gccggtggcg 23820
cgacggtgat ggcgacgccg ggcaccttcg tggagttctc ccggcagcgg gccctcgcgc 23880
ccgacggccg gtgcaaggcg ttctcgtcgt cggcggacgg caccggctgg gccgagggcg 23940
cgggcgtagt ggtccttgag cgcctgtcgg tggcgcggga gcgcggccac cacgtcctgg 24000
ccgtgctgcg cggcagcgcg gtgaaccagg acggcgcctc caacggcctc accgccccca 24060
acggtccctc acagcagcgc gtcatccgca gggcgctcgc aggcgccggg ctcgcgccgg 24120
ccgacgtgga cgcggtggag gcccacggga ccggcacggc cctcggcgac ccgatcgagg 24180
cccaggcact cctggcgacg tacggacagg accgggaccc gcaacagccc ctgtggctcg 24240
gctcgttgaa gtcgaacctc gggcacacgc aggccgccgc cggtgtctcc ggtgtgatca 24300
agatggtgca ggcgctgcgg cacggcgtcc tcccggcgac cctccacgtg gccgcgccca 24360
ccccccaggt cgactggtcg gcgggcgcgg tggaactcct caccgaggcg cgggagtggc 24420
cgcgcaacgg gcgtccccgg cgggcggggg tgtcgtcgtt cggtgtgagc gggacgaacg 24480
cgcacgtgat cctggaggag gcccccgagg agccggtcca ggcaggggct gcttccgcga 24540
gcgcggtgcc gttggtggtg tcggcgcgga gcccgaggtc gctggcgggg caggcccgtc 24600
gcctcgtgtc gtacgtggag tccggcgccg acggggtgtc gctggcgggc gcggcccggg 24660
ccttggtgtc gggtcgggcc gtcctcggcg agcgtgccgt ggtggtggcc gactcgggcg 24720
aggaggcgct ggccgggctg cgggcgctcg cgcggggcga gagcggaccg aacctggtga 24780
ccggcagcgg aggtgtgccg ggcaaggtgg tgtgggtgtt ccccgggcag ggctcgcagt 24840
gggtgggcat ggggcgcgaa ctcctcgatt cctcttcggt gttcgtcgag cgggtcgcgg 24900
agtgtgctgc cgctttggag cggtgggtgg actggtcgct tgtcgacgtg ctgcggggtg 24960
aggtcgagcc cgcgttgctt gagcgggtgg atgtggtgca gcccgcgggc tttgcggtga 25020
tggtggggtt ggcttcggtg tgggcgtccg tgggtgtgaa gccggatgcg gtgcttggtc 25080
actcgcaggg tgagattgcc gcggcttgtg tggcgggtgc gttgtcgctt gaggatgcgg 25140
cgcgggtggt ggcgttgcgc agtcaggcca tcgcggcgcg gctggccggg cgtgggggca 25200
tggcctcggt cgccctcagc gaggaggacg cggccgggcg tctggagccc tgggccgacc 25260
gcgtcgaggt cgcggccgtc aacgggccgt cctccgtcgt ggtcgccggt gacgccgagg 25320
ccttggacga ggccctgcgg gagctctccg gtgacggcgt acgagtgcgg cgcgtggccg 25380
tggactacgc ctcgcacacc cgtcacgtcg aggacatcga ggacaccctc gccgaagccc 25440
tggccggggt cacggccaag gccccggtgg tgccgttcta ctcgaccgtc acgggcagtt 25500
gggtggagga cgccggggtc ctggacggcc ggtactggta ccgcaacctg cgcggacagg 25560
tgcggttcgg cccggccgtc cgcgaactgc tcggccaggg ccacggggtg ttcctggagg 25620
tgagtgctca cccggtgctc gtgcagccga tcaccgaggc cgtggacgcc gccgacgccg 25680
atgtggtggt gaccgggtcg ctgcgccgtg acgagggtgg cctgcggcgg ctcctggctt 25740
cgatggccga gctgttcgtg cggggcctgg ccgtcgactg ggccgccgtg ctgcccgcag 25800
gggccgcgcg tgcggagctg ccgacgtacg ccttcgacca cgagcactac tggctcgagc 25860
cggccgaccg ggccaccgac gcggcctcgc tggggcagac cgccggtgac catccgctgc 25920
tgggcgcggt cgtcggcatg ccggactcca gcggtctcat ggccacgtcg aggtggtcgc 25980
tccgctcgca gccctggctc gcggaccacc tggcgtcgga cgcggtcgtg gtgccgaacg 26040
cggccctggt cgaagtggcc gtccggctcg gcgacctggc cgccaccccc gtactcgacg 26100
aactcgccgt cgacgcgccc gtggtgctgc cgcggcgggg cagccgcggc atccaggccg 26160
tcgtcggtga gccggacggg gcgggacggc ggtcggtgga gatctactcc cgcgccgggg 26220
acgcccccct ggacgcgcgc tggacccggc acgcgcacgg gacgctgtcg acccgtgccg 26280
tcgaggtccc ggcggcggga cccgcgaccg aggtcgcgct tgacggtgcc gcgctccgcg 26340
acgcgggccg gtacggcgtg caccccgcgc tgctggaagc cgccgtccgt acggtcatcg 26400
ccgacggcac ggtcccggcg gtgtggaccg gagtgaccct gctggcgtcg ggcgccaccg 26460
cgctccacgt acgagcgggc gacaccacgc cggagggcac cggtctgcgg ctgaccgacc 26520
ccacggggca gcccgtcatg accgtcgcgt ccgtacgcgg ggcggcgttc tgccccgaac 26580
aggcagaaca ggcaggggcc gacggtgcgg tgacgcacga cgcgctgttc cgcgtcgact 26640
ggagggaact ggcgctgccc gccgtggagc gcccgccggc cagcgtgacc gtcgcgaccg 26700
gcgaggacgt caccaccacc gccgcgggtc cggtcgcacc tgatgtgctg ctgtacgaag 26760
ccgtgcgcgc ggccgccgac ccccgcgtcc cggtcaacgc ggccctcgcc gtgctccagg 26820
cctggctcgc cgagcccgcc ctggcgcgga cccggctcgc cgtggtcacc ggggaccacg 26880
ccgaactcga cgcggccgcc gtgtggggcc tggtgcgctc ggcccagtcg gagcatccgg 26940
gccggatcgt cctcgtggac ctcgacgagg cctcccggga cgccctgccc gccgcgctgc 27000
tgagcggtga accgcagctg agggtgcgcg acggcgtcgc gtcggtgccc cgcctcgcac 27060
gcgcggccgt cccggcgggc gcggcgcccg ccggagccgg gcggcggccc cggccgctcg 27120
accccgaagg caccgtactg atcaccggcg gcaccggcac gctcggcgcc gtgacggcac 27180
ggcacctcgt cgccgcgcac ggcgtccggc acctggtcct ggccggccgc cggggccagg 27240
ccccggagct gcgcgacgag ctgaccggga tgggggcctc cgtcaccctc gccgcctgcg 27300
acacggcgga ccgggcccag gtggcggcgc tgctgcgggc gatacccgcc gcgcaccccc 27360
tcaccgccgt ggtgcacgcc gccggggtcc tggacgacgg ggtgctcacc gaactgaccc 27420
cggaacgcct cgacaccgtg ctgcggccga agctggacgc cgcccggcac ctgcacgagc 27480
tgacccggga cctggacctc gccgcgttcg tcctcttctc ctcggcggcg ggcgtcctcg 27540
gcaacccggg ccaggccaac tacgcggcgg ccaacgccgc cctggacgcc ctggcgcgtc 27600
agcggcaccg ggcgggcctg cctgcggtgt ccctggcctg gggctactgg gcgacggcca 27660
gcggcatgac cgcgcacctg ggcgccgccg acctgcggcg caaccggcgc atcggcatgg 27720
tcggactgtc cccggccgag ggcatggccc tcctcgacgc cgccctgaac accccggcgg 27780
acgcggccgg aacgctcgtg gcggcgaagt tcgacctcaa cgcgctgcgg gccgcggcgg 27840
ccgaagagcc gctgccgccg ctgctgcgcg gcctcgcccc ggcaccgcgg cccaccgccc 27900
ggacggccgc accggccggg cccgcggcgc tgcgggaacg cgtcacaggc ctggccgccg 27960
ccgagcggac cgaggccctc gtcgacctgg tgcgccggca cgccgccgaa gtgctcgggc 28020
acaccaccgc cgacgccgtg cgggcggacc ggaccttcaa ggaggccggg ttcgactcgc 28080
tgaccgccgt ggagctgcgc aaccggctcg ccgccgcgac cgggctcacc ctctccccgg 28140
cgatggtctt cgaccacccg aagccgaccg cgctcgccgc gcacctgggc gatcggctcc 28200
tcggcgtggc ggcgcagcgc ccggccgggc ccggcgcgcc cgcaccgacc accgacgagc 28260
cgatcgccat cgtcgccatg gcgtgccgct tccccgcggg cgtgcacagc ccggaggacc 28320
tctggcgggt ggtggccgac gggatcgacg ccgtcaccga gttccccgcc gaccggggct 28380
gggacaccga ccggctcttc cacgcggacc ccgaccacga gggcaccacc tacgtgcgcc 28440
acggcgcctt cctcgacgac gccgccgggt tcgacgccgc cttcttcggc atctcgccga 28500
acgaggccct cgccatggac ccgcagcagc ggctgctcct cgaaacgtcc tgggaggcct 28560
tcgagcgggc cgcgatcgac ccgaccgcgc tggccgggca ggacgtcggc gtcttcgtcg 28620
gcgtcaacag ccacgactac agcgtgcgca tgcaccgggc ggccggtgtc gagggcttcc 28680
gcctcaccgg cggctcgggc agcgtcgcct ccggccgcgt cgcctaccac ttcggcttcg 28740
agggccccgc cctcacgatc gacacggcct gctcctcctc cctggtggcc ctgcacacgg 28800
ccgcgcaggc gctgaaccgc ggcgagtgct ccatggccct ggccggcggc gtgatggtga 28860
tgggcaccgt ggagacgttc gtcgagttct cccggcagcg cggactcgcc cccgacggcc 28920
ggtgcaaggc gttcgcggac ggcgccgacg gcaccggctg gtccgagggc gtggggctgc 28980
tcctcgtgga gcgcctgtcg gacgcccgcc gcaggggcca tcccgtactg gccgtcgtcc 29040
gcggctccgc cgtgaaccag gacggcgcgt cgaacggcct gacggccccc aacggccccg 29100
cgcagcagcg cgtcatccgc aaggccctgg cccacgcggg cctcggcacg caggacgtgg 29160
acgccgtgga ggcgcacggc acgggcacga cgctcggcga cccgatcgag gcccaggcgc 29220
tcctggcgac gtacggccag gaccggcccg cgggacggcc gctgtggctg gggtccgtga 29280
agtcgaacct cggccacacc caggcggcgg cgggcgtcgc cggtgtgatc aagatggtca 29340
tggccatgcg ccacgacacg ctccccaaaa cgctgcacgt ggaccgcccg tcgtcccgca 29400
tcgactggtc cgcgggcgcc gtggagctgc tgacacaggc ccgtgactgg ccgcgcgagg 29460
gccgtccgcg ccgggccgcc gtgtcctcct tcggcatcgg cggcaccaac gcgcacgtcg 29520
tcatcgaaga ggcccccggc acggcggcgg ccgagcccga ccccaggcgc gcggaggaac 29580
cgacggacct cccggtgccg gtgcccgtgt cggcgcggac gcccgccggg ctgcgcggcc 29640
aggccgaccg gctcgcccgc ttcctcgacg acaggaccga cttacgcctc accgacgcgg 29700
cgcacgccct ggccaccacg cgcgcccggc tcgaccaccg cgccgtcgtc ctggcctccg 29760
accggccgca gctcggagcg gacctccgcg ccgtcggccg gggcgaggag cgccccgcgg 29820
tcgtctccgg caccccggtc gcgggcaagc tcgccgtcct cttcaccggc cagggcagcc 29880
agtgggcggg catgggccgt caactggccg ccacgtaccc ggtcttccgc gacgccttcg 29940
ccgccgcgtg cgccgccgtg gaggcgcatc tgagcggcct cgcggcgcgc ccgctgcacg 30000
acgtggtgtt cgccgctccc ggggcgcccg gcagcgaact cctcgaccgg accatgtaca 30060
cgcaggccgc cctgttcgcc ctggagaccg cgctgttccg gctcttcgag tcctggggtg 30120
tccggccgga cctcctcgcc gggcactcga tcggagagct caccgccgcg cacgtctccg 30180
gagtgctcgg cctggccgac gcgggcgaac tggtagcggc ccgcggccgg ttgatgcagg 30240
ccctgcccga gggcggcgcg atggtcgccg tccaggccac cgaggccgac gtcgaaccgc 30300
tgctcgcccg ggcccatggc gcggtctgcg tggccgcggt caacggcccc gacgcgctgg 30360
tgctctccgg cgccgagaac gccgtgctcg ccgccgccga cgcactggcc cgccggggcc 30420
gcaagacgcg gaggctggcg gtcagccacg ccttccactc gccgctgatg gaccccatgc 30480
tcgacgagtt ccgcgcggtc gcggagcgcc tgtcgtaccg gccgggcgac cttcccgtcg 30540
tctccaccct gaccggtgac cttgcccagg acgggcagct cgccgacccc ggccactggg 30600
ccgaccaggt gcggaacacc gtccggttcg gcgacgccgt caccgcgctc gcccggcggg 30660
gcgcgacgac gttcctcgaa ctgggcccgg gcgggaccct cgccgcgatg gcgctcggct 30720
cgcccgacgc accggagcgg agctgcgtcg ccaccctgcg caaggacggc gcggaggccg 30780
tcgacgtcct gaccgcgctc gccgaactgc acgtgcgcgg cacgtccgtg gactggacgg 30840
ccgtactcgg acacccggcc gcggcggccg gaaccgagct gcccacctac gcgttccagc 30900
accagcggta ctgggtcgag tccgacgacg ccgcatcggc cgacgcggaa gccctcggca 30960
ccaccggcgc ccggcacccg ctgctcggca ccgtcatcga cgtaccgggc gacgacggcg 31020
gcaacggcag cggcggtgtc gtgctcaccg ggcgcctcgc accgcacggc ccgggccgcc 31080
tccccggccc ggccgcggcc gacggcacca cccggatccc ggccgccgta ctcctggaca 31140
tgatcgtcgg ggccggtgac gaagtgggct gcggcggcct cgaacaggtc gtcgtcgaga 31200
gcccgttgac ggttccggag cgcggccaca cccacgtgcg ggtgtccgtg accgcccggg 31260
gcccggacgg gcgccgccgc gccgccgtcc acggccgccc cgcagggccg gaacgaacgc 31320
cctggacgtg ccacgcccga gcggtcctcg tccccggcgc gccgcgcccg gccttcgacc 31380
tgcgggcctg gcagccgccc gcggacgcct ccgcgccgct ccccggaacg cgcgtgtggc 31440
agcaggacgg ccgcacctgc gcggaaatca cgctcccgga cgaactcgta gccgaggcgg 31500
ccgacttcgc gctgcacccc gtgctcgtcg acaccgcgct gcgcgtcctg gaccggagcc 31560
ccggccggga cctgtccgat tgcgccgcgc tcgcggtgta cgcggagggc gccacctcgc 31620
tgcggctgcg gatcacgccg cggccggacg gccgccacct gctggagctg gcggacgcgg 31680
acggtgaacc cgtcgcggcc ctcggcccgt tgagcctcga agccctgccc ggggagggtc 31740
ccgcgtcgcg tgattccgcg ccgtacgagg acgccggcgt accggcggtg cccggtgtca 31800
cccgccgcgt ggtcgcgcgc ggggaagaca ccggaggcgc catggccgac cggctgaccg 31860
accggctgac cggccgacgg accgaccagc tggccgaccg gctggccgac cggctggccg 31920
ggctcccggc cgcggagcag caccgcaggg tcctctcctt ggtccaggag agcaccgcgg 31980
tcgtgctcgg ccaccgccag ggcgaccgct tcgacgacga gcagcccttc aagaacctcg 32040
ggttcgactc cctcagcgcc gtcaagctcc gcaaccggct gcgcgacttc accggcgtcg 32100
acctgcccag ctccctggtc ttcgaccacc cgacccccgc cctcctcgcg gccttcctgc 32160
gcgccgaact gctcggcgag cagcccgcgg cacccgcccc cgccacggcg gcagcggctt 32220
ccgacgagcc catcgcgatc gtcgcgatga gcagtcggct gcccggcgga gcggacagcc 32280
ccgaagagct gtggcagctg ctcgtggagg gccgggacgc ggtctccggc ttcccggtgg 32340
accgcgactg ggacctggag gggctgtacc acccggaccc gggccacccc ggcacgagct 32400
acacgcgctc gggcggattc ctccacgagg ccgcgcggtt cgacgccggg ctcttcggca 32460
tctcgccgcg cgaggccctc gccatggacc cgcagcagcg gctgctcctc gaaacctcct 32520
gggaggccct ggaacgggcg ggcgtcgacc cgctgtcggc caggggcagc gacatcggcg 32580
tcttcaccgg gatcgtccac cacgactacg tgtcccggct ccaccgggtg cccgaggacg 32640
tgcagggcta cctcatgacc ggtacggcgt cgagcgtggc gtcgggccgg gtgtcgtacg 32700
tgttcggctt cgagggcccg gcggtcaccg tcgacacggc gtgctcgtcg tccctggtcg 32760
cgatgcacct ggccgcgcag gcgctgcggc agggcgagtg ctcgatggcc ctggccggtg 32820
gcgcgaccgt gatggccggt cccgacgcct tcctggagtt ctcacggcag cgcggtctgt 32880
ccgccgacgg ccggtgcaag gccttctccg cgacggccga cggcaccggc tgggccgagg 32940
gcgtgggcgt ggtcgtcctg gaacgcctct cggtcgcgcg ggaacgcggc caccaggtcc 33000
tcgcggtcat ccggggcagc gcggtgaacc aggacggcgc ctccaacggc ctcaccgccc 33060
ccaacggccc ctcgcagcag cgggtgatcc gccgggccct cgacacggcg gggctcgcgc 33120
ccgcggacgt ggacgtggtg gaggcccacg ggaccggcac ggccctcggc gacccgatcg 33180
aagcccaggc actcctggcg acgtacgggc agggtcgggg cgccgaacag cccctgtggc 33240
tgggctcgtt gaagtccaac atcggtcaca cgcaggccgc cgcgggcgtg gcgggcgtga 33300
tcaagatggt gctggcgctg cgccacgcgg tcatgccccg caccctgcac gtcgacgagc 33360
cgacggccga ggtggactgg tcggcgggcg cggtggagct gctgaccgag gccaggaact 33420
gggagcggaa cggccgtccg cgccgggcgg gcgtctccgc gttcggcgcc agcggcacga 33480
acgcccatct gatcctggag gaggcccccg aggaccccgt cgcggcggag accgtgccgg 33540
tgggtgtggt gccgctggtg gtgtcggcgc atagccaggc ttcgctggcg gggcaggccg 33600
gtcggctggt gtcgtacgtg gagtcgggga ctggtggtcc gtcgctcgcg ggagtggccg 33660
gggccctggt gtcgggccgg gccgtcctcg gtgagcgcgc ggtggtcgtg gccgattcgc 33720
ccaccgaggc gctgaccggg ctgcgcgcgc tggcccgggg ggagagcggt ccgcacctgg 33780
tgtccggcag cgcggccccg ggcgcgcccg gcaaggtcgt gctggtgttc ccgggccagg 33840
gctcgcagtg ggcgggcatg gggcgtgaac tccttgatgc ctccccggtg ttcgccgagc 33900
ggatcgctga gtgcgcggct gcccttgagc cgtggctgga ctggtccctc atcgacgtac 33960
tacgtggtga ggccgagccc gagttgttgg agcgggtgga cgtggtgcag cccgccagct 34020
tcgcggtgat ggccgggctg gcttccgtgt gggcgtccgt gggggtcgag ccggacgcgg 34080
tgctcgggca ctcccagggg gagatcgcgg ccgcctgcgt ggcgggtgcg ctgtcccttg 34140
aggacgcggc ccgcgtggtg gccttgcgca gccgaaccat tgccgcggag ctggcggggc 34200
gcggcggcat ggcgtccgtc gccctcggcg agcaggaggc ggccgcccgt ctggagcggt 34260
gggcggaccg ggtcgaggtg gccgcggtga acagcccgtc gtcggtggtg atcgcgggcg 34320
atgccgcggc cttggacgag gtcctggagg agctttccgg tgccggggtg cgggtgcggc 34380
gcgtggccgt ggactacgcc tcgcactccc ggcacgtcga ggacatcgag aacacccttg 34440
ccgaagccct ggcgggggtg aacgcgaagg ctccggtggt gccgttctac tcgaccgtca 34500
cggggagttg ggtggaggac accggggtcc tggacggctc gtactggtac cgcaacctgc 34560
gcgggcaggt gcggttcggc cccgccgtgg ccgacctgct ctcccagggc cacggcgtgt 34620
tcgtggaggc cagcgcccac ccggtcctgg tgcagcccgt caccgaggcc gtcgacggca 34680
cggacgccga agcagtggtg accgggtcgc tgcgccgcga ggacggcggc ctgcgacggc 34740
tcctcacgtc ggcggccgag ctcttcgtgc gcggagtcgc cgtcgactgg gccggtgtgc 34800
tgcccgccgg agccctggcc cggcccgcgc gcgcggacct gcccacgtac gccttcgacc 34860
gccggcacta ctggctgcgc gaggcggaga cgacggccga cgccgacggc gccgccgaca 34920
gctcggactc cgccttctgg tccgccgtcg agcaagccga cacggactcg ctcggcgccc 34980
tcctcgaaac ggcgtcgggc gaccagctcg gcgccctcgc caccctcgtg cccgtgctcg 35040
ccgagtggcg cgggaagcgc cgccgccgct ccgcggccga gaagctgcgc taccacgtca 35100
cctggcagcc cctcgcacgc gaagccaccg gagtgcccgg tggccggtgg ctggtcgtcg 35160
taccggccga acgcaccgac gacagcggca ccgacgcgct tctggacgaa ctgaccggcc 35220
tcgggctcga cgcgctcctc ctggaggtcg gcgcgtccga cggcggccgg gagcggctcg 35280
ccgagcggct ggccggagtc ctcgccgaag acgacgtgac cggtgtgctc tcgctgctcg 35340
ccctcgaccg gagcgcacgc ggcgccccgc aggaccccac cgccgtcacg gcggcggccc 35400
tcgccctcat ccaggcgctg ggcgacaccg gcgccgcccc gccgctgtgg tgcgtcacca 35460
ggggcgcggt gaacatcggc atccacgacg ccctcacctc acccgcgcag gcggccctgt 35520
ggggcctcgg ccgcgccgcc gccctcgaac ggctcgaccg ctggggcggc ctggtcgacc 35580
tgcccgcggc gacagggccg cgcacggccc gccagctcct cggcgtgctg aactccgccg 35640
cgggcgagga ccagctggcg gtccgcaggt cgggcgtgta cgcgcgcagg ctcgtccgca 35700
aggccgtgcc ggaggccgcg ggggacaccg gctggcagcc ccggggcacg gtcctggtga 35760
ccggcggcgc cgaaggactc ggcaggcacg tctccttgtg gctcgccctc gccggcgtcg 35820
accggctcct cgtcaccacc accccgcacg cccccgaagg gagtacggcc gaactccgct 35880
cccaaatcgc cgggttgggc ctcgccaccg tcgtggagtc ctgcgcggac accgaccggg 35940
acgcgctcgc gcgcctcgtc tccgcgacgc ccccggagca gccgctgacc gccgtcgtgc 36000
acgcggccga catcacgcgg accagtaccg tcgacgacac cggcgcacac gacctcgccg 36060
aggtgttcgc ggccaaggtg gacacggcgg tgtggctgga cgagctgttc gaggacacgc 36120
cgctcgacgc gttcgtcgtc ttctcctcca tcgccggagt gtggggcggc ggcggccagg 36180
ggccgtccgg cgcggcgaac gccgtcctcg acgccctggt cgaatggcgc cgggcccggg 36240
ggctgcgggc gacgtcgatc gcctggggag ccctcgacgg gatcggcgtc ggcatggacg 36300
aggccgccct cgcccagctc cgccgccggg gcgtcctgcc catggcgccg cagctggccg 36360
tcaccgcgat ggtgcaggcc gtgcagggcg acgagaagtt cgtgacggtc gccgacatgg 36420
actggggcgc cttcgtcccc gccttcactt cggtccgcgc cagccccctc ttcgccgacc 36480
tgcccgaggc gaaggcggtc ctcgacgcgg cgcgggacga cggcgaggac agcgacaccg 36540
cggcctccct cgcggactcc ttgcgggcgg tccccgacgc cgagcagcac cgcctcctgc 36600
tgcgcctggt ccgcggccac gcctcgacgg tcctcggcca cggcggcgcg gagggcatcg 36660
gcccgcgcca ggcgttccag gaggtcggct tcgactccct ggccgccgtc aacctgcgca 36720
acagcctgca cggggccacc ggactgcgcc tgcccgccac gctgatcttc gactacccca 36780
ccccggaggc gctggtcggc catctgcgca ccgaactcct caaggaagcc gacgacggcc 36840
tcgcggggcg ggaggacgac ctcaggcggg tcctggcgtc cgtgccgctc acccggttca 36900
aggaggccgg ggtgctcgac gccctcctcg gcctcgccga gaccgagacc gggaccgggg 36960
ccgaggcgga gaccgacacc ggggccgccg cgggcgcggc tacccgtacg ggcgccgcgg 37020
acgcggagct gatcgacgcg atggacgttg ccgacctggt gcaacgggcc ttgggcaaga 37080
cgagctgacc acctgtgaac gagtcccgga aggatggcta tgtcggcgcc agacgagcag 37140
gtcattgagg cactgcgtgc ctcgctgaag gagaacgccc ggcttcagca ggagaacagc 37200
acactcgtcg cggccgccgc ggagcccgtc gcgatcgtct ccatggcctg ccgctacgcc 37260
ggtggcgtcc ggggcccgga ggacctctgg cgcgtggtgt ccgaaggcgc cgacgtctac 37320
ggccccttcc ccgacgaccg gggctgggac gtcgagggcc tctaccaccc cgaccccgac 37380
caccccggta cgacgtacgt gcgcgagggt gccttcctgc acgacgcggc gcggttcgac 37440
gccgggttct tcggcatctc gccgcgcgag gccctcgcga tggacccgca gcagcggcag 37500
ctcctcgaag tgtcctggga gaccttcgaa cgcgccggga tcgaccccca cgcgatgcgc 37560
ggcggtgacg tcggcgtgtt cgccgggatc gtgcaccagg actacgcccc ggacctcagc 37620
ggattcgagg ggtacctaag cctggagcgc gccctgggca ccgcgggcgg cgtcgcctcc 37680
gggcgcgtcg cgtacaccct gggactcgaa ggccccgcgg tgaccgtcga caccatgtgc 37740
tcctcgtccc tcgtggcgat ccacctggcc gcgcaggcgc tgcgcagggg cgagtgcacg 37800
atggcgctcg cgggcggctc gacggtgatg gcgacgccgg gcggcttcgt cggcttcgcg 37860
cggcagcggg cgctcgcctt cgatggccgc tgcaagtcct acgccgccgg agccgacggc 37920
tccggctggg ccgagggcgt gggcgtgctg ctccttgagc gtctttcggt ggcccgggag 37980
cgcggccacc aggtcctcgc ggtgatccgc ggcagcgcgg tgaaccagga cggcgcctcc 38040
aacggcctca cggcccccaa cggtcccgcg cagcagcggg tgatccgcaa ggcgctggcc 38100
ggcgccgggc tcgccccgtc ggacgtggac gcggtggagg gccacggcac cggcacggtc 38160
ctcggcgacc cgatcgaggc ccaggcgctg atggccacgt acgggcaggg ccgggacccg 38220
gagcggccgc tgtggctcgg ctcggtgaag tccgtcatcg gccatacgca ggcggcgtcc 38280
ggcgtggccg gtgtgatcaa gatggtgcag gcgctgcggc acggcgtgct cccggcgact 38340
ctgcacgtgg acgcgcccac cccgcaggtg gactggtcgg ccggggcggt ggagctgctg 38400
accgaggcca ggggctggga gcgcaacggc cgtgcgcgcc gggcgggcgt ctccgcgttc 38460
ggcgccagcg gcacgaacgc ccatctgatc ctggaggagg cccccgaggc cccggtcacg 38520
gaggagagcg cgccttcggg cgtggtgccc ctggtggtct cggcgggcac tgcggcttcg 38580
ctgacggagc aggccgaacg cctcgcctcg tacctggagt cgggtaccga cggggcgtcg 38640
ctcgcggcgg tcgccgggac gctggccgcg ggccgggccg tcctcggcga gcgcgcggtg 38700
gtggtggcgg gcacgaccga cgaggcactg accggcctgc gggcactcgc ccgcggcgag 38760
aacgcgaccg gcctcgtcac cggcacgggc acgccgggca aggtggtgtg ggtgttcccc 38820
gggcagggtt cgcagtgggt gggcatgggg cgcgaactgc tcgattcctc tccggtgttc 38880
gtcgagcggg tcgcggagtg tgctgctgct ctggagcggt gggtggactg gtcgcttgtc 38940
gacgtgctgc ggggtgaggt cgagcccgcg ttgcttgagc gggtggatgt ggtgcagccc 39000
gcgagctttg cggtgatggt ggggttggcg gcggtgtggg cgtctgtggg tgtcgagcct 39060
gatgcggtgc tcggtcactc gcagggtgag atcgcggcgg cttgtgtggc gggtgcgttg 39120
tcgcttgagg atgcggcgcg ggtggtggcg ttgcggagtc aggcgatcgc ggcgcggttg 39180
gccgggcgtg ggggcatggc ctcggtcgcc ctcagcgagg aggacgcggc cgggcgtctg 39240
gggccctggt cggatcgggt cgaggtcgcg gctgtcaacg ggccgtcctc cgtcgtggtc 39300
gccggtgacg cccaagccct ggacgaggcc ctggaggccc tggacgacca gggcgtccgc 39360
atccggcgga tcgcggtgga ctacgcctcg cacacccggc acgtggagga cgtccgcacc 39420
acgctcgccg aggtgctcgc cgggatcggc gcacaggagc cgacggtgcc gttctactcc 39480
accgtcaccg gcggttgggt gacggacgcc ggggccctgg acagcgccta ctggtaccgt 39540
aacctgcgcg aacgcgtacg gttcggcccg gccgtcgccg acctgctcga ccaggggcac 39600
ggggtgttcg tggaggtcag cgcccacccc gtactggtcc agcccatcac cgaggccgtg 39660
gtcgccgccg acgccgacgt ggtggtgacg ggctcgctgc gccgcgagga cggcggcctg 39720
cggcgcctcc tcacctcgat ggccgagctg ttcgtccggg gcaccccgct ggactgggcc 39780
agggcgctgc ccgccggggc cacgtcccgg cgcgtcgacc tgccgacgta cgccttcgac 39840
caccagcact actggatccg gatgggcgcg tccgccacgg actccgcgtc cctcggcctc 39900
gccggggccg accacccgct gctgggcgcg gtcgtaccgc tgccgcagtc cgacggcctc 39960
gtcttcacct cacgcctctc gctgcggacg cacccgtggc tcgccgacca cgagatcggc 40020
ggcgcggtcc tcgtccccgg caccgtgtac gtcgatctcg cggtgcgcgc gggcgacgag 40080
ttcggccacg gcctcctgga ggaactcgtc atcgaggcgc cgctggtgct gcccgacagc 40140
ggcggcgtac gactccaggt cgcggtgagc ggacccggcg cgacgggttc gcggaccgtg 40200
gacgtgtact cccagcgcga ggacgccgcc gacgacggcg gcgcggacga cgtgtggacg 40260
cggcacgcca ccggcctcct ggcggcctcg ccgacggcgc ccgacccggg gcgcgcgttc 40320
gacttcgcgg cctggccgcc gcccggcgcg gagccggtcc cgatgacgga cttctacgcc 40380
gacctggtcg agcgcggcta cgcgtacggg cccgccttcc agggcctgcg cgcggtgtgg 40440
cgacgcggcg acgaggtctt cgccgaggcc gcgctgcccg aggaacaccg agaggaggca 40500
ggcgggttcg gcatccaccc ggcgctcctc gacgccgccc tccacacgaa cgccttcgcc 40560
cgcccggacg acgaccgcaa ggtgctgccg ttcgcctgga acgggctgct cctgcacgcc 40620
gtgggcgcct ccgcgctgcg cgtgcgggtc gcaccgtgcg gcccggacgc gctgtcgttc 40680
cacgccgccg acgacaccgg cgccacggtc ctgacgatgg actcgctggt gtccctgccg 40740
gtctccaccg accagctgga cgccgcggcg gcggacggga gccgcgacac gctgttcggc 40800
gtggagtgga ccgaactgcc gccggtacga ggggatgtgg ccggaagcgc gacggccccg 40860
ccgttggccg tcctggaggc cttcggggac gacggcgagg gcgcggtact cgccctgacc 40920
acccgcgtgt tgggggcggt gcaggagtgg cttgccgggg cgggctctga cgattcgcgc 40980
cttgtggtgg tgacccgggg ggcggtgccc gcgggcgacg gagcggtgac ggatccggct 41040
ggagcggcgg tgtggggcct ggtgcgtgcc gcgcaggcgg agaatccgga acggatcctg 41100
ctcgtcgaca ccgaccccgc ggccggagga gacctggatg cggcgctggg ggtggcgctg 41160
gccagtggtg agccgcaact cgcggtgcgt ggtgcgattt tctcggtgcc caggctggtc 41220
cgtgttgcgg gtcgggggct gggttcgggg aacgtattcg ccgctggaaa gaccgttcta 41280
cttagtggtg gaacaggatc cctgggtggc ctggtggccc gccacttggt cgcgcggcat 41340
ggcgtccggc atctgctgct tgcgagtcgg cggggtgcgg atgccgaggg catgccggag 41400
ttggtggccg agctcgccga gcagggcgcg gtcgtgtcgg tagtggcctg cgacgtgtcc 41460
gaccgcgacc aggtccgggc cctgctggcc gccgtaccgg acgagcaccc cctgacgggc 41520
atcgtccaca tggccggagt gctcgacgac ggagtgattg ggacgctgac gccggagcgc 41580
ctcgcgggcg tgttcgcgcc gaaggtggac gcggtcagcc acctcgacga gctgacccgc 41640
gaactgggcc tggaactgga cgcgttcgtg gtgttctctt ccgctgcggc gctcatgggg 41700
tcggcaggcc agggcaacta cgcggcggcg aacgcctacc tcgacgggct catgtccggc 41760
cgccgggcgg cgggcctgcc cgggatctcg ctggcctggg gcctgtggga gcagaccgct 41820
ggcctgaccg cgcacctcag cagcgtcgac caggcgcgga tgagccgcgg cggcgtcctc 41880
gcgatgaccc cggccgaggg cctggccgtc ttcgacatcg gcctgcacgc gggccaggcg 41940
ctcctcgtgc cgatcaagct ggacctgcgc acgctgcgga cccaggcggc ggcgggcggc 42000
ggggtgccgc agctgctgcg cggcctcgtc cgcgcgggcc gccgcgtggt acgggcggcg 42060
gccggggaca gcggcggcct ggtccgccgc ctcgccgggc tgcccccggc cgagcaggag 42120
aacctcctgc tgtccctcgt ccagggcgag gcgggcggcg tgctcggttt cagcggcccc 42180
gaactgaccc agggaacaag gggattcagc gacatcgggt tcgactccct gaccgccgtc 42240
gaactgcgga accggctgag cgcggcgacc ggcgtgaaac tgcccgccac cctgatcttc 42300
gactacccga ccccggtggc gctcgcccgc catctgcggg aggagctggg cgacacggcg 42360
gacggcgccg ccgcaccggc cgcggtcgcc gtcgcggacc cggacgagcc gatcgcgatc 42420
gtcgggatgg cgtgccgact gcccggcggg gtgacggacc ccgacggcct gtggcggctg 42480
gtgcgcgagg gccgcgaggg catgtcggac ttccccgacg accggggctg ggacctggag 42540
ggcttgttcg acgcggaccc ggacaacgcc ggtacgtcgt acgccagtca gggcgggttc 42600
cttgagggtg cggggctctt cgacgccggg ttcttcggca tctccccgcg cgaggccctg 42660
gccatggacc cgcagcagcg gctgctcctc gaaacctcct gggaagccct ggaacgggcc 42720
ggaatcgacc cgaccacggc acgcggcgcc gacatcggcg tcttctccgg cgtctccatc 42780
cacgactacc tggagtccct cagcaacatg cccgacgagc tcgaaggctt cgtcacgacc 42840
gccacggcgg gcagcgtcgc gtcgggccgg gtgtcgtacg ccttcggctt cgagggcccg 42900
gcggtcacgg tggacacggc gtgttcgtcg tccctggtgg cgatgcacct ggccgcgcag 42960
gcgctgcggc aaggcgagtg ctcgatggcg ctcgccgggg gcgtcgccgt gatggggtcc 43020
ccgatcggcg tcctcggcat gtcccggcag cggggcctgg ccgccgacgg ccggtgcaag 43080
gcgtacgcgg acggcgcgga cggcacggtg ctctccgagg gcgtcggcct ggtggtcctt 43140
gaacgcctgt cggtggcgcg ggaacgcggg caccgggtcc tcgcggtgat ccggggcagc 43200
gcggtgaacc aggacggcgc ctccaacggc ctcaccgccc ccaacggccc ctcccagcag 43260
cgagtgatcc gcaaggctct ggcgaacgcg ggcctctccc cgtccgaggt ggacgtggtg 43320
gagggccacg gcaccggcac caccctgggc gaccccatcg agacgcaggc gctcctcgcc 43380
acctacggga aggggcggga tgccgaacag ccgctgaggc tggggtcgtt gaagtccaac 43440
atcggccata cgcaggccgc cgccggtgtg tccagcgtga tcaagatggt ccaggcgctg 43500
cggcacaacg tcatgccgcc cacgctgcac gcacaggagc ccacccacca ggtcgactgg 43560
tcggcgggcg ccatcgagct gctgaccgag ccccgcgact ggccgcgcaa cggccgcccg 43620
cgccgggccg gagtgtcctc gttcgggatc agcgggacga acgcccatct gatcctggag 43680
gaggcacctg aggagccgct ttcggaggag ccggcttcgg tgggtgtggt gccggtggtg 43740
gtgtcggcgc gtagtgcggc ttcgctggcg ggacaggccg gtcgcctcgc gtcgtacgtg 43800
gagtcgggcg ggggtgcctc gctggcaggc gtggccgggg cgttggtgac cagccgggct 43860
gccctggacg agcgtgcggt ggtggtggcg ggttcgaacg cggaggcact cggcgggctg 43920
cgggcgttgg ctcggggcga ggacgcggcc ggtgtggtgt ccggcaaggt cgcgggttcc 43980
ggtgtgccgg gcaaggtggt gtgggtgttc ccggggcagg gcgctcagtg ggcgggcatg 44040
ggtcgcgaac tcctcgacac ctcaacggtg ttcgccgagc ggatcgctga gtgcgcggcc 44100
gcccttgagt cgctggtgga ctggtcgctc gttgacgtac tgcggggtga ggtcgagccc 44160
gcgctgcttg agcgggtgga tgtggtgcag cccgcgagtt tcgcggtgat ggtgggtctg 44220
gcttcggtgt gggcgtccgt gggtgtgaag ccggacgcgg ttcttgggca ctcgcagggg 44280
gagatcgcgg ccgcctgtgt ggcgggggcg ttgtcccttg aggacgcggt gcgggtggtg 44340
gcgttgcgca gccaggccat cgctacggag ttggccgggc ggggcggcat ggcgtccgtt 44400
gccttgagcg cggacgaggc agccgcgcgc cttgaggagt gggcgggccg ggttgaggtc 44460
gcggcggtca atgggccgtc gtcggtggtg gtcgcgggcg atgccgaagc cttggacgag 44520
gcgctggagg ccctggcggg cgacggtgtc cgaacccgcc gcgtggccgt ggactacgcc 44580
tcgcacaccc ggcatgtgga ggacatccgc gacaggctcg ccgaggcgct ggcgggggtg 44640
agtgcggagg ctccggtggt gccgttctac tcgaccgtta cgggcagttg ggtggaggac 44700
gcgggggtgt tggacggcgg gtactggtac cgcaacctgc gcgggcaggt gggcttcggc 44760
cctgcggtgg ccgatctgct ggcgcagggg catggggtgt tcgtggaggt cagcgcccac 44820
cccgtactgg ttcagcccgt cagcgaggct gtggatgaga gcggtgccga tgccgtggtg 44880
acagggtcgc tgcgccgcga cgaagggggc ttgcggcggc tgctgatgtc gatggcggag 44940
ctgttcgtac ggggtgtggc ggtgggctgg tcggccgtgc tgcccggcgg ggccggggtc 45000
gagatcgcgc gcgtggagtt gccgacgtac gccttcgacc atcagcacta ctggctcaag 45060
acggctgccc aggtcaccga cgcggcgtcg ctggggcagg cggcggcgga tcatccgctg 45120
ctgggtgcgg tggtgcggct gccgcagtcc gacgggctcg tcttcacctc gcgcctgtcg 45180
ctgcgcacgc acgcctggct ggccgaccac cgggtcggcg acgtggtgct ggtcccaggc 45240
accagtctgg tggagctggc ggtgcgggcc ggtgacgagg ccgggtgcgg ggtgctggac 45300
gaactcgtga tcggggaacc gttggtggtg cccgagcgcg gcggggtgcg ggtgcaggtc 45360
gcggtgggcg ggccggggga gaacggtgcg cgcacggtgg aggtgtactc ccagcgcgag 45420
gacgcgggcg atgaagccga cgcgtggacg cggcatgcca ccggcgtcct gtccgccgcc 45480
accgaccggt ccacgggcag cggcacgggc ttcgacttca cggcctggcc gccgccgggg 45540
gccgagccgg tggggatcgg ggagttctac gccgacctcg ccgagcaggg gtacgcgtac 45600
ggtccggcgt tccagggcgt gcgggcggtg tggcggcgcg gcgaggaact gttcgcggag 45660
gtcgcgctgc cggaggagca gcacaaggaa gcgggcaggt tcggcatcca ccccgcactc 45720
ctcgacgcgg ccctgcacgc cggggagccg ggcgccgcgg ccgaaggcgt caaggagctg 45780
cggcaaccgc tcgactggaa cggcctggtg ctgcacgccg cgggcgcctc ggcgcttcgg 45840
gcgcggcttg tgcccgccgg gcccgacgcc gtgtcgttgg aggcggcgga cgaagccggt 45900
ggcctggtgg tgacggcgga atcgctgacg tggcgagagg tgtccaccga ccggccgggc 45960
gcggcggaca cgctggtcgc ccagtcgctg ttcggcgtgg tgtggaccga gctgcccccc 46020
acgcagggcg cgattacgtc gctgtcgtgg atgccggtgg ccgccgccga cgaggtggcg 46080
acgctgaccg atgaagtggc ggcgggcgcg gccgccccga tggcggcggt cctggaggcg 46140
ttcggcggcg gcgacggtga ggaactggcc ttgtcctccc acgtgttggg agtcgtgcag 46200
gggtggttga acggggccgg gcttgaggag tcacgccttg tggtggtgac gcggggtgcg 46260
gtgcccgctg gtgaaggtgc ggtgacggat ccggcggcgg ccgccgtgtg gggtctggtg 46320
cgtgcggcgc aggcggagaa cccggacagg atcgtcctgc tggacctcga cccggcctcc 46380
gacgacgcag cgggctccgt actggacacg gtgctgggag ccgtcctggc caccggcgag 46440
cctcaaatcg cggtacgcgg aacggccttc tcggcgcccc gactcgtccg agtgccagcg 46500
caagccccgg acagccagtc ggtgttcaca tccgagggga ccgtcctcat caccggtggc 46560
accgggtcgc tcggtgctct cgtggcccgt cacctcgtca cccggtacgg cgtacggcgg 46620
ctgctcctcg ccagcaggcg gggccgggac gccgagggcg cgccggagct ggcggccgaa 46680
ctcgccgagc tgggcgcgac cgtctcggtc gtggcgtgcg acgtgtccga ccgcgaccag 46740
gccaaggccc tgctcgcgtc ggtatcggac gaccacgaac accggctgac cggcatcgtg 46800
cacacagcgg gcgtgctgga cgccggggtc atcggagcgc tgacgccgga gcgcctggag 46860
cgggtgttcg cgccgaaggt ggacgcggta cggcacctcg acgagctgac ccgcgaactg 46920
ggcctggacc tggacgcgtt cgtcgtctac tcgtccgtgt ccggcgtctt catgggcgcg 46980
ggcagcggca gctacgccgc cgccaacgcc tacctggacg gcctgatggc caaccggcgg 47040
gcagcgggcc tgcacggcct gtcgctggcc tggggcctgt gggcgcagac cagcggcatg 47100
gcggccaaca ccgacgacct caccaggaac cggatgaacc gccggggcgg cctgcaagcg 47160
atgtcgctga cggaaggcat ggagctgttc gacgccgccg tggggacccg ccagtccttg 47220
ctggtaccgg ccaggctcga cctgcgcggc gtacgcgccg acgcggcggc cggtggcggc 47280
gtgccgcaca tgctgcgcgg cctcgtacgc gccggccggc aggcggcacg ggcggcggac 47340
ggcggcgaca agcggcgccg gctgaccgac cggctcaccg ggctcgcacc ggcggaacaa 47400
gaagccctgc tcctcgacct ggtccgggcc cgggccgcgg tcgtgctcgg gcacgccggg 47460
ccctcgggcg tgcagccgga catggcgttc aacgaggtcg gattcgactc gctcacggcg 47520
gtggagctgc gcaacaggct gcgcgaggcg accggcctga agctgcccgc caccttgatc 47580
ttcgactatc cgaacccgct ggccctcgcc cgctacctgc accgcgaact gctcccggac 47640
gacggcgcga acggacagga gctggacgag gcgcggctgc ggcgcgccct cgcctccctc 47700
ccgctggccc gcttccgggc ggccggactg atggacgccc tggtcgagct ggccgccctc 47760
gccgacggcg caccgcacac ccgcacgacc gacgagaaca gcgaggccga ggggggcgac 47820
gagaagcggg cgatcgccga gctggacgtc gacgacctcg tgcacctggc gctcggcgac 47880
tgaggacctt tcgaaaccgc tggctgattg gggaattcaa gtgagcgcgt catatgaaac 47940
agtcgtccag gcgctacgga agtcgctgga agaagtcggc tcgctgaagc agcagaaccg 48000
ccgtctccgc gacgcttccc gcgagcccgt ggcgatcgtc ggcatggcgt gccggttgcc 48060
cggcggcgtg gcgggcccgg aggatttgtg gcgcctggtg gccgagggtc gggacgcggt 48120
gtcgggcttc cccgaggacc gcggctggga cctggagggc ctcttcgccc cggaccccga 48180
gagcgcgggc acgtcctata cccggcaagg cggattcctg cacgaggcgg ggctcttcga 48240
cgcggggttc ttcggcatct cgccgcgcga ggcgatggcg atggatccgc agcagcggct 48300
gctcctcgaa acgtcctggg aggccctgga ggcggccggg atggacccgg gctcgctgaa 48360
gggcgccgac gtcggggtgt tctccggggt gttcacgcag gggtacgtgg ccccgggagc 48420
cagcggggtg acgccggaag tggagggctt cgcgggcacc ggcggctcga cgagcgtggc 48480
ctcgggccgg gtgtcgtacg tgctcggttt cgagggcccg gcggtcacgg tggacacggc 48540
gtgttcgtcg tccctggtgg cgatgcacat ggcggcccag gcgctgcggc agggcgagtg 48600
ctcgatggcc ctggccggtg gtgcgacggt gatggcgacg ccgggcgcct tcgtggagtt 48660
ctcgcggcag cggggcctgg ccgccgacgg ccggtgcaag gcgttctcgt cgtcggcgga 48720
cggcaccggc tgggccgagg gcgtgggcgt agtggtcctt gagcgcctgt cggtggcgcg 48780
ggagcgaggc caccggatcc tcgcggtgct gcgcggcagc gcggtgaacc aggacggcgc 48840
ctccaacggc ctgaccgccc ccaacggccc ctcacagcag cgcgtgatcc gaggcgccct 48900
ggcgaacgcg ggcctgtccc cgtccgaggt ggacgtggtg gagggccacg ggaccggcac 48960
caccctgggc gaccccatcg aggctcaggc gctcctggcg acgtacgggc gcggccgcga 49020
ccccgaacag ccgctgtggc tcggctcgtt gaagtccaac atcggccatg cccaggcggc 49080
cgccggtgtg gccggtgtga tcaagatggt gcaggcgctg cggcacggcg tcctcccggc 49140
gaccctccac gtggccgcgc ccacccccca ggtcgactgg tcggcgggcg cggtggaact 49200
gctgaccgag acccgggagt ggccgcgcga cgggcgcccg cgccgggccg gtgtgtccgc 49260
cttcggcatg agcgggacga acgcccacct gatcctggag gaggcacccg agcagccgct 49320
ccccgaacac gcggtgcccg cgggggtggt gccgctggtc gtgtccgcac ggagccagac 49380
atcactcacg ggccaggcgg aacggctgat cacgcacctg gagtccgccc ccgacggcac 49440
ggcaccgctg gccccggttg ccggggcgct ggtgtcgggt cgtggggtgt tcggcgagcg 49500
tgcggtggtg gtggcgggtt cggagggcga ggcggtgtcc gggttgcggg cgctggcgcg 49560
gggcgagagt gatgtgaacc tggtgtctgg gagcgggggt gtgccgggga aggtggtgtg 49620
ggtgttcccg gggcagggct cgcagtgggc gggcatgggg cgtgaacttc tcgactcctc 49680
gccggtgttc gccgagcggg tgggggagtg tgctgcggcg ctggggccgt gggtggactg 49740
gtcgctcgtc gacgtcctgc ggggtgacgt cgagcccgcg ctgcttgagc gggtggatgt 49800
ggtgcagccc gcgagctttg cggtgatggt ggggttggct tcggtgtggg cgtccgtggg 49860
tgtgaagccg gatgcggtgg ttggtcactc gcagggtgag attgcggcgg cttgtgtggc 49920
gggtgcgttg tcgcttgagg atgcggtgcg ggtggtggcg ttgcggagtc aggcgatcgc 49980
ggcgcggctg gcggggcggg gtggcatggc gtccgttgcc ctcgcagagc aggaagtggc 50040
cgggcggctg gagccgtggg ccgagcgggt cgaggtcgcg gccgtcaacg ggccttcctc 50100
cgtggtgatc gctggtgatg ccgaagcctt ggacgaggtc ctgcaagtgc tctccgacga 50160
cggcgtacga gtgaggcgcg tggctgtgga ctacgcctcc cacacccggc acgtcgaaga 50220
catccaggac accctcgccg aagccctggc cggggtgagc gcgcaggctc cggccgtgcc 50280
gttctactcg accgtcacgg gcagttgggt ggaggacgcg ggggtgttgg acggcgggta 50340
ctggtaccgc aatctgcgcg gtcaggtggg cttcggcccc gcggtggccg atctgctggc 50400
gcaggggcac ggggtgttcg tggaggtcag cgcgcacccc gtactggtcc agcccgtcag 50460
cgagatcgtg gacgagagcg gtgccgacgc cgtggtgacg ggctcgctgc gccgtgacga 50520
agggggcttg cggcggctgc tggtgtcgat ggcggagctg ttcgtacggg gcgtggcggt 50580
cgactgggcg gccgtgctgc ccggcggggc cgggggtgat accgcgcgcg tggagttgcc 50640
gacgtacgcc ttcgaccacc ggcactactg gctcaagcag ggagcgtcgg ccaccgacgc 50700
ggcgtcgctg gggcaggcgg cggcggatca tccgctgctg ggcgcggtgg tgcggctgcc 50760
gcagtccgac gggctcgtct tcacctcgcg cctgtcgctg cgcacgcacg cctggctggc 50820
cgaccaccgg gtcggcgacg tggtgctcgt accgggcacc ggtctggtgg agctggcggt 50880
gcgcgccggt gacgaggccg ggtgcggggt tctcgaagag ctggtcgtcg aggcgccgct 50940
ggtcgtgccc gagcgcggcg gggtgcgggt gcaggtgtcg ctgggcgggc cgggtgagaa 51000
cggtgtgcgc acggtggagg tgtactccca gcgcgaggac gcgggcgatg aagccgacgc 51060
gtggacgcgg cacgccaccg gcctcctctc ggcagcggca cggccggacg gcagcagtgg 51120
cggcagtagc ggcggtggcg gcagcagtgt ggacttcacc gcctggccgc cgcgcggcgc 51180
gcagccggtc gaggtggggg acttctacga agcgctggcc gagcgcggat acggctacgg 51240
cccggcgttc cagggcgtgc gggcggtgtg gcggcgcggg gacgaggtgt tcgcggaggt 51300
cgtgctgccg gaggagcagc gtaaggaggc gggtaggtac ggcatccacc cggccctgct 51360
cgacgcggcc cttcaggcgg gcacgatcgg cgccgctgcg ggtccggcgg tggagggttc 51420
cggggagccg gtgctggcgt tcgcgtggaa cggcttggtg ctgcacgccg ggggtgcttc 51480
ggcgctgcgc gtacgcgtcg cgcccagtgg tccggacgcg ctgtcggtcg aggcggcgga 51540
cgaggccggt ggcctggtgg tcacgatgga ctcgctggtg tcccggccgg tgtcggcgga 51600
ccagttgggg gcggcgacgg ccgctcactc gctgttccaa gtggagtggg ccgaggtgtc 51660
gcaagagccg gagccgtccc cgttgtgggc accggtcacc acccccgacg acgtggcgct 51720
cctgcccggc aacgggccgg cggtggccgt catggaagcc ctcggaggcg acgaggaaga 51780
cgcggtactg accctgacgt cccaggtgct ggcggtcctc caggcgtggc tggccgaggc 51840
cgccctcgag gagtcgcggc tggtggtggt gacgcggggt gcggtcgccg ccggtggtga 51900
ggacatggtc acggatccgg cggcggccgc cgtgtggggt ctggtgcggg ccgcccagtc 51960
cgagaacccg gaccggatcg tcctcctcga caccgacccc acggcggaca cggctccgga 52020
cacaactccg gacacgtctc cggacgcggt actgggtgcg gtcctggcct gcggagagcc 52080
ccaggtcgcg gtgcgcggag gcgcgctctt gctgccccgg ctcggccgcg tcgccggtca 52140
tgtcacggac ggccccgcgg tgttcgggcc ggagggcacc gtcctgatct cgggcgccgg 52200
atcgctcggc gccttggtgg cccggcatct cgtcacccgg cacggagtgc ggagcctgct 52260
gctcgccagc cggagcggca ccgacgccga gggtgtgccg gaggtcatcg cggagctcac 52320
cgaacagggc gcgaccgtat cggccgtggc ctgcgacgtg tccgatcgtg atcaggtgaa 52380
ggcgctcctt gcggccgtac cgcaggagca ccggctcacg ggtgtcgtcc acacggcggg 52440
cgtcttcgac gacgggctga tcgcggcgct gtccccggag cgcctggagc gggtgttcgc 52500
gccgaaggtg gacgcggtgc ggcacctcga cgagctgacg cgcgacctgg acctcgacgc 52560
gttcatcgtg ttctcgtccg tcgcgggcct gtccggcggc gcgggccagg gcagctacgc 52620
cgcggccaac gccttcctcg acggcctgat ggccagccgc cgggcggccg gtctgcccgg 52680
cctgtcgctg gcgtggggcc tctgggagga gagcctcggc atggccgccc gcctcagcag 52740
cgtcgaccgg gcgcgggcga gccgcggcgg cgtgcgggcg atcgcggcgg ccgagggcat 52800
ggcgctcttc gacgccgccg cggggtccgg gcagtcactg ctggtgccca tcaagctgga 52860
cctgcgcgga ctgcgcgccg acacggcgtc cggcggggga gttccccctc tgctgcgcgg 52920
cctcgtacga gcgggccggc aaccggcgcg ggcggcggac acaggcgacg ggcaccggcg 52980
cctttccgcc cgcgtcgccg ggctcgcggc ggccgaacag gaggccttcc tcctggacct 53040
ggtccgcgcc gaggccgcgg tcgtgctcgg gcacaccggg ccgggaggcg tgcgcgagga 53100
ggtcgcgttc agggacgccg ggttcgactc cctcacggcg gtggagctgc gcaacaggct 53160
gcgcgaggcg accggcctga agctgcccgc caccctggtc ttcgactacc cgaccccgct 53220
ggccctggcc cgccgcctgc gcgacgggtt gggcgacgcg tcaccggtgt ccgaccggcc 53280
gacggccgtg gtggccgaca cgggtgagcc gatcgcgatc gtgtcgatgg cgtgccggta 53340
tccgggtggt gtgtcgtcgc cggaggagct gtggaggctg gtggccgacg gtgtcgacgc 53400
ggtttccgac ttcccggacg accggggctg ggacctggag ggtctgttcg acccggatcc 53460
tgatcacgcc ggtacgtcgt acacgcggca gggtggcttc ctgcgcgggg cggggctctt 53520
cgacgcgggg ttcttcggca tctcgccgcg cgaggcgatg gcgatggatc cgcagcagcg 53580
gctgctcctc gaaacgtcct gggaggccct ggaggcggcc gggatggacc cgggttcgct 53640
gaagggcacc gacgtcgggg tcttcaccgg cgtggcgagc cagggctacg gcaccggcgt 53700
ggtcgccccg gaagtggaag gcttcgcggg cacggggctc gcgggcagcg tggcgtcggg 53760
ccgggtgtcg tacgtgttcg gcttcgaggg cccggccgtg tcggtcgaca ccgcctgctc 53820
gtcctcgctc gtggcgatgc acctggccgc gcaggcgctg cggcagggcg agtgctcgat 53880
ggccctcgcc ggtggcgcga tggtcatggc cacgcccggg gccttcatgg ccttctcccg 53940
gcagcggggc ctggccgacg acgggcggtg caaggcgttc gcggacggcg cggacggcat 54000
gggcctcgcc gagggcgtcg gcgtcgtact ccttgagcgc ctctcggcgg cgcgggagca 54060
cggacaccag gtgctcgcgg tcctgcgcgg cagcgcggtg aaccaggacg gagcctccaa 54120
cggcctcacc gcccccaacg gcccgtcaca gcagcgcgtc atccgcaagg ccctcgacac 54180
ggcacgactc acccccgccg acgtggacgt cgtcgaaggc cacggcaccg gcacggcctt 54240
gggcgacccg atcgaggccc aggcgctcct ggcgacgtac ggacagggcc gggacccgca 54300
acagccgctc tggctcggct cgttgaagtc caacatcggc cacacccagg ccgccgcggg 54360
cgtggccagt gtcatcaaga tggtgcaggc gctgcgccac ggcgtcatgc cgcccaccct 54420
gcacgtgcgc gagccctcga accaggtcga ctggtcggag ggcgcggtgg aactgctgac 54480
cgaggccaag gactggccac ggaacggccg tccgcgccgg gcgggcgtgt cgtcgttcgg 54540
cgtgagcggc acgaacgccc atctgatcct ggaggaggca cccgaggccc cggtcacgga 54600
agaggcggct tcggtgggtg cggtgccgct ggtggtgtcg gcgcgcagcc agggttcgct 54660
ggcgggccag gccggtcgcc tcgcgtcgta cgtggagtcg gacgcgggtg gtgcctcact 54720
ggcggacatc gccggggcgc tggtgtcggg tcgtggggtg ttcggcgagc gtgccgtggt 54780
ggtggcgggt tcggaggacg aggcgctgtc cgggttgcgg gcgctggcgc ggggcgcgag 54840
tgatctgaat ctggtgtccg cgagcggggg tgtgccgggg aatgtggtgt gggtgttccc 54900
cgggcagggc tcgcagtggg tgggcatggg ccgtgaactc cttgacacct ccccggtgtt 54960
cgccgagcgg gtgggggagt gtgctgcgac gctggagccg ttggtggact ggtcgctcgt 55020
cgacgtacta cggggtgagg ccgagcctgc gttgttggag cgggtggatg tggtgcagcc 55080
cgcgagcttt gcggtgatgg tggggttggc ggcggtctgg gcgtctgcgg gtgtgatccc 55140
tgatgcggtg gttggtcact cgcagggtga gattgcggcg gcttgtgtgg cgggtgcgtt 55200
gtcgcttgag gatgcggtgc gggtggtggc gttgcggagt caggcgatcg cggcgcggct 55260
ggccggacgg ggcggcatgg cgtcggtggc gctgagtgag gaggaggcgg ccgggcgtct 55320
ggagccgtgg gccgagcggg tcgaggtcgc ggccgtgaac gggccttctt ccgtggtggt 55380
cgcgggtgat gcccaggcct tggacgaggt cctggaggcc ctgtccagtg acggtgtccg 55440
cacccgccgg gtggccgtgg actacgcctc ccacacacgg catgtcgagg acatccgcga 55500
caccctggcc gaagctctgg ccggggtgag cgcgaaggcc ccggtggtgc cgttctactc 55560
gaccgtcacg ggcagttggg tggaggacgc cggggtcctg gacggccggt actggtaccg 55620
caacctgcgc ggacaggtgc ggttcggccc ggccgtggcc gacctgctct cccagggcca 55680
cggtgtgttc gtggaggtca gcgcccaccc cgtactggtt cagccgatca ctgagatcgt 55740
cgacgacgcc gacggcgcgg cagtggtgac cggttcgctg cggcgtgagg aggggggcct 55800
gcggcggctg ttgatgtcga tggcggagct gttcgtgcgg ggtgtggccg tggactggtc 55860
cgcgatcgtg cccacgggga ccgcgtcggg gcgcgtggcg ctgccgacgt acgccttcga 55920
ccatcagcac tactggctca agccgggcgc acaagccacc gacgcggcgt cactgggcct 55980
tgcgggggcc gaacaccccc tgctgggtgc ggtggtgcgg ctgccgcagt ccgacggact 56040
tgtcttcacc tcacggttgt ctctgcggac ccagccgtgg ctcgccgacc atgccatcgg 56100
tggtgtggtg atcctgccgg gcacgggact ggtggagctg gcggtacggg cgggtgacga 56160
ggccgggtgc ggggtccttg aagagctggt gatcgaggcg ccgctggtcg tgcccgagcg 56220
cggcggggtg cgggtgcagg tgtcgctggg cgggccgggt gagaacggtg tgcgcacggt 56280
ggaggtgtac tcccagcgcg aggacgcggg cgatgaagcc gacgcgtgga cgcggcacgc 56340
caccggcctc ctctcggcag cggcacggcc ggacggcgta agggctggta ctggtaccgg 56400
cttcgacttc acggcctggc cgccgccggg agcgcggccc gtcgaactcg gggacctcta 56460
cggcgacctg gccgagcacg gctacgcgta cggcccggcg ttccaaggtg tgcgggcggt 56520
gtggcggcgc ggggacgagg tgttcgcgga ggtcgtgctg ccggaggagc agcgtaagga 56580
ggcgggcagg tacggcatcc acccggccct gctcgacgcg gcccttcagg cgggcacgat 56640
cggcgccgcg gcgggtccgg cggtggaggg ttccggggag ccggtgctgg cgttcgcgtg 56700
gaacggtctg gtgctgcacg ccgggggtgc ttcggcgctg cgcgtacgcg tcgcgcccag 56760
tggtccggac gcgctgtcgg tcgaggcggc ggacgaggcc ggtggcctgg tggtcacgat 56820
ggactcgctg gtgtcccggc cggtgtcggc ggaccagttg ggagcggcga cggccgccca 56880
agcgctgttc cacgtggact ggacggagct gcccccggcc caaggggcgg gttccgcgct 56940
gtcgtggatg tcggtgatcg ccgccgatga ggtggcgacg ctggcggagg aggtggcggc 57000
tggggcggcc gtgccgatgg cggcggttct ggaggccttc ggcggtgtgg gtggtgagga 57060
tgcggtactc gccctgacct ctcaggtcct tgaggtcgtc cagggatggc tggccggggc 57120
cgggcttgag gagtcgcgcc ttgtggtggt gacgcggggt gcggtgcctg caggtgaggg 57180
tggggtgacg gatccggcgg cggccgcggt gtggggtctg gtgcgtgcgg cacagtccga 57240
gcacccggac cggatcgtcc tgctggacct cgacccggcc tccgacgacg aagcgggctc 57300
cgtactggac acggtactgg gcgccgtcct cgccaccggc gagcctcaga tcgcgctccg 57360
cggcacgaca ctgtccgtgc cgcgactggc tcgcgtcgct gatcaagtac cgcagagtcc 57420
ggtggtgttc gggtcggagg gcactgtgtt ggtctcgggt ggcgggtcgc tgggtgctct 57480
ggtggctcgg catctggtcg tccggcacgg ggtgcggggc ctggtgctcg ccagtcggcg 57540
gggtgtggat gcggagggtg tgccggagct tgtcgcggag ctgaccgagc tgggtgcgac 57600
ggtgtcggct gtggcctgtg acgtctccga tcgtgatcag gtgaaggcac tgctggcggc 57660
cgtaccgcaa gagcggcgac tcacgggtgt cgtccatacg gcgggtgtct ttgacgccgg 57720
tgtgatcggg gcgctgtctc cggagcgtct cgcgggggtg ttcgcgccga aggtggatgc 57780
ggtgcggcat ctggacgagc tgactcgggg cctggatctg cgtgcgttcg ttgtttactc 57840
gtcggcttcg tctgtgttca tgggtgcggg tagtggtggt tatgcggcgg cgaacgcgtt 57900
cctggacggg ttgatggcgc agcggcgggc ggcgggtctg cccggtctct cgctcgcctg 57960
gggcccgtgg gagcagacca ccggcatggc ggacaccatc gacgacctca ccagggcgcg 58020
gatgagccgg cgtgaagggc gcgggggagt cctggcgctc aagtccagcg aaggcctgga 58080
gctgttcgac gccgccctgg cgtccgggtg ggcgctgctg gtgccggtca agctcgacct 58140
gcgtgatgcg cgtgcggacg cggtggccgg cggcggggta ccgcccctgc tgcgcggtct 58200
cgtccgcgcg gcccggcaac cggcacgggc ggcgggaggc accggcggcg atcaccggca 58260
gttggccgaa cggctggccg ggctcgccgc cgcggagcgt aggaaattcc tgctcgacct 58320
ggtgcgcgcc caggccgcgg tggtgctcgg ccacaccggg ccggggagcg tacggccgga 58380
cacggcgttc aacgaagccg ggttcgactc gctcacggcg gtggagctgc gcaaccggct 58440
gcgcgaggcg accggcctga agctgcccgc caccctggtc ttcgaccatc cgaccccggt 58500
cgccctgtcg gcgtacctgc tcggcgaaat cgccgtcgac agcgcgtccc ccgcggaccc 58560
ggtcctcgcc gggctcgccg gactggaggc ggccatcgag tcggcggcgg gcgacgagga 58620
ggcccgggac cggatcaccg tacgcctgcg ggaactgctg aaggccgccg aggccgccga 58680
ggccgctgag gcggcgggag gccgggacgc ggcaccggac gccgcgggca cgagcgaaga 58740
cgatctcgaa aacgcgagcg acgaggagct gttcgcgatc ttcgaccggc tcgactgacc 58800
agaccccgcc cgactgagca ggacccgccc cgattgacca ggccccgccc gactgactag 58860
gacccgcccc gactgagcag ggcccgtaag gcgcgtcgac cgacccgcat ccactccacc 58920
gccatcgcac acatcgaatt cctgggagct gagttcagtg gctgacgagg tacaactccg 58980
cgactacctc aagagggcca tcgccgacgc ccgcgacgcc cgcaagcgtc tgcgtgaggt 59040
cgaggaccag gcgcgggagc cgatcgcgat cgtgtcgatg gcgtgccggt atccgggtgg 59100
tgtgtcgtcg ccggaggagc tgtggaagct ggtggccgac ggcgtcgacg cggtttccga 59160
cttcccggac gaccggggct gggacctgga gggtctgttc gacccggatc ctgatcacgc 59220
cggtacgtcg tacacgcggc agggcggctt cctgcgcggg gcggggctct tcgacgcggg 59280
gttcttcggc atctcgccgc gcgaggcgat ggcgatggat ccgcagcagc ggctgctcct 59340
ggaaacctcg tgggaggccc tggagcatgc gggcatcgat cctctgtcgt tgaagggcac 59400
cgacgtcggg gtgttctccg gcgtgtccag ccaggggtac ggagccggtg ccggggtggt 59460
gacgccggag tcggagggct tcgcgggcac gggcgcgacg ccgagcgtgg cctcgggccg 59520
ggtgtcgtac gtgttcggct tcgagggccc ggcggtcacc atcgacacgg cgtgctcgtc 59580
gtcgctcgtg gcgatccacc tggccgcgca ggccttgcgg aacggcgact gttcgatggc 59640
cctggccggt ggtgcgatgg tcatggccac gcccggcaac ttcgtggcgt tctcccggca 59700
gcggggcctg gccacggacg ggcggtgcaa ggcgttcgcg gacggcgccg acggcatggg 59760
cctcgccgag ggcgcgggcg tggtcctgct cgaacgcctc tcggtggccc gggaacgcgg 59820
gcatcaggtc ctcgcggtgc tccggggcag cgcggtgaac caggacggcg cctccaacgg 59880
cctcaccgcc cccaacggcc cctcccaaca gcgggtgatc cgccgggccc tggcgaacgc 59940
ggacctgtcc ccgtccgacg tggacgtggt ggagggccac ggcacgggga cgtccctcgg 60000
cgatccgatc gaggcccagg cgctcctggc gacgtacggg aaggggcggg acccacagca 60060
gccgctctgg ctcggctcgt tgaagtcgaa catcgggcac acccaggccg ccgccggtgt 60120
gggcagcgtg atcaagatgg tgcaggcgct gcgccacggc gtcatgccgc cgaccctgca 60180
cgtccaggag cccacgactg aagtggactg gtcggcgggc gcggtcgagc tcctgacgga 60240
ggcgcgcgcg tggcctcgtg acgctcgccc gcgccgggcc ggggtgtcct cgttcggcgt 60300
gagcgggacg aacgcgcatc tgatcctgga ggaggtcccc gaggagccgg tctccgagga 60360
gccggtcccc gaggagagcg ggtcgtcggg tgtggtgccg ctggtcgtgt cggcgcgtgg 60420
ccacgcggcg ctctcgggac aggccgcgcg cctcgcggca cgcgtcgaaa ccgtcggtga 60480
ggtgtcgttg gcgggtgtgg ccggggcgct ggtgtcgggc cgggcgctgc tggacgaccg 60540
cgcggtggtc gtggcgggct cggccgagga cgcactcgcc gggctggggg cgctggcgcg 60600
gggcgagagc ggcccggacg tcgtgtccgg gagcgtcgcc ggttcaggtg agccgggcgg 60660
cctcgtgctg gtgtttccgg ggcagggttc gcagtgggcg gggatggggc gtgaactgct 60720
cgattcctcc ccggtgttcg ctgagcgggt cgctgagtgt gcggctgccc ttgagccgtg 60780
ggtggactgg tcgcttgtcg acgtactgcg gggtgaggtc gagcctgcgt tgttggagcg 60840
ggtggatgtg gtgcagcccg cgagctttgc ggtgatggtc gggctggctt ccgtgtgggc 60900
gtccgtgggt gtgaagccgg atgcggtgct cggtcactcg cagggtgaga tcgcggcggc 60960
ttgtgtggct ggtgtgttgt cgcttgagga tgcggtgcgg gtggtggcgt tgcggagtca 61020
ggcgatcgcg gcgcggctgg cggggcgtgg gggcatggcg tcggtcgccc taggtccgca 61080
ggaagtggcc gggcgtctgg agccgtgggc cgagagggtc gaggtcgcgg ccgtgaacgg 61140
gccgtcctcc gtggtgatcg ccggtgacgc cgaggccttg gacgaggccc tgcgggagct 61200
ctccggtgac ggcgtacgag tgcggcgcgt ggccgtggac tacgcctcgc acacccgcca 61260
cgtcgaagat atccgggaca ccctcgccga ggcgctgacc ggggtgagcg cgcaggctcc 61320
ggccgtgccg ttctactcga ccgtctccgg cggttgggtg caggaggccg gtgtcctcga 61380
cagtgagtac tggtaccgca acctgcgcgg gcaggtgggc ttcggcccgg ccgtggccga 61440
tctgctggcg caggggcacg gcgtgttcgt ggaggtcagc gcccaccccg tactggtcca 61500
gcccgtcagc gagatcgtgg acgagagcgg tgccgacgcc gtggtgacgg gctcgctgcg 61560
ccgcgacgaa gggggcttgc ggcggctgct gatgtcgatg gcggagctgt tcgtgcgggg 61620
tgtggccgtg gactggtccg cgatcgtgcc cacggggacc gcgtcggggc gcgtggcgct 61680
gccgacgtac gccttcgacc atcagcacta ctggctcaag ccgggggagt cggcatccga 61740
cgcggcgtcg ctgggccaga ctcccgccga acatccgctg ttgggcgcgg tggtgcggct 61800
gccgcactcc gacagccttg tcttcacgtc ccggctctcg ctgcgctcgc acccctggct 61860
ggccgatcac gccgtcggtg gtgtggtgat cctgccgggc acagggctcg tggagttggc 61920
ggtacgggcg ggtgacgagg ccgggtgcgg ggtccttgaa gagctggtga tcgaggcgcc 61980
actggtcgtg gccgagcatg gtggggtccg tatgcagatc gcggtgggcg caccgggtga 62040
gagcggtgcg cgcacggtcg aggtgtactc ccagcgcgcg gacgccggcc ctgccgacgc 62100
atggacgcgg cacgccaccg gactcctgac ggcatcgcaa gcgacacccg cggaggtgcg 62160
ggagtacgac ttcgccgcct ggccgccgcc cggcgcgcgg aaggtcgagg tggaggcgag 62220
cgacttctac gacggtctgg tcgcgcgtgg tttcggctac gggcccgcgt tccagggggt 62280
gcgggccgcg tggcggcgcg gcgacgaggt gttcgcggag gtcgcgctgc ccgaggagca 62340
gcgcaaggag gcgggcaggt acggcatcca ccccgcgctg ctcgacgcgg ccctccaggc 62400
cgggacgttc gccgccgagg cggatccgac ggcggaggac tccggggaac cgatcctcgc 62460
gttcgcgtgg aacggcctgg tgctgcacgc cgcgggagct tcggcgctgc gcgtacgcat 62520
cgctccgtgc gggccggacg cactggccgt acaggctgcc gacgagaccg gtggcctggt 62580
cgtcacgatg gactccctgg tgtcccggcc ggtgtcggcg gaccagttgg gggcggcgac 62640
ggacggggcg gtcgcagact cgctgtacca cgtggactgg accgagctgc ccccggccca 62700
ggtgcgggag cccgcgccgc catgggcggc cgtggccacc gcggccgagg tggcggccct 62760
cgcagggagc ccgacggttc cgccggtggc cgtcctggaa gcggtcggag acgatggcgc 62820
ggacgcggta ctggccctga cctcccgggt gttggcggtg gtccaggcgt ggctcgccga 62880
ggccgggctt gaggagtcac gccttgtggt ggtgacgcgg ggcgcggtgt ctgcgggtga 62940
ggacgcggtg ctggatcccg cgggggccgc cgtgtggggt ctggtgcggg ccgcgcaggc 63000
cgagaacccg gaccggatcg tcctcctcga caccgacccg gtatcccagg agggcctggc 63060
atccctactg ggaccggccc ttgccaccgg cgaaccccaa gtggccgtgc gtggagcgac 63120
tctctccgtg ccgaggctgg atcgcgtcac tgatcaagta ccgggaaatc cggtggtgtt 63180
cgggtcggag ggcactgtgt tggtctcggg tggcgggtcg ctgggcgctc tggtggctcg 63240
gcatctggtc gtccggcacg gggtgcgggg cctggtgctc gccagtcggc ggggtgtgga 63300
tgcggagggt gtgccggagc ttgtcgcgga gctgaccgag ctgggtgcga cggtgtcggc 63360
tgtggcctgt gatgtgtcgg atcgtgatca ggtgaaggcg ttgctggcgg ccgtagcgga 63420
cgatcacgag cggcgactca cgggtgttgt tcatacggcg ggtgtcttcg atgccggtgt 63480
gatcggggcg ctgtctccgg agcgtctcgc gggggtgttc gcgccgaagg tggatgcggt 63540
gcggcatctg gacgagctga cgcggggcct gggtctgtgt gcgttcgtcg tctattcgtc 63600
ggcttcgtct gtgttcatgg gtgcgggcag tggtggttat gcggcggcga acgcgttcct 63660
ggacgggttg atggcccagc ggcgggcggc gggtctgccc ggcctctcgc tcgcatgggg 63720
cacctgggag cacgccacca acatgaccac gcacctcagc acggccgacc ggacgaggat 63780
gagccggcgc gcgaaccgta ccggcgtcgt gggcatcaag cccgccgagg gcatggagct 63840
gttcgacgcc gccgtggcgt ccgggcgggc actgctggtg cccgtcaagc tcgacctcca 63900
gggcgtgcgc gccggtgcgg cgggcggcgg tggagtgccg cccctgctgc gcggcctcgt 63960
gcccgcggcc cggcagcagg cgcgggcggc ggccgcgaac gaaggcgacc tcgtccgccg 64020
cctggcccag ctcaccggcc cggagcagga ggccctgctg ctcgacctgg tgcggacaca 64080
ggccgccgtg gtgctcgggc acagcgggcc gggcggcgta cgggcggaca cggcgttcaa 64140
ggacgtcggc ttcgactcgc tcacctcggt ggagctgcgc aaccggctgc gcgaggcgac 64200
cggcctgaag ctgcccgcca cgctcgtctt cgaccagccg aacccgctgg tcctcgcccg 64260
ccatctgcgc gacggcctcg gcgtcagcga cgacgtgctc gcccgcgtgc acgcgaggat 64320
cgaggacgtc gagacgctga tcggcggact gtccctcgac gcggccatga aatccagtgt 64380
cgcgctgcgc cttcagggac tggtggccag gtgcaacgga gtgctcgagc agacggacgt 64440
ctcgacggtc gcggacaagc tggaatccgc gtcggccgac gaagtcctcg acttcatcga 64500
cgacgaactg ggtcttgtct gagaccggtt cgaggccctg cggcgccacc cgaccttcgt 64560
ggaccgaaca acccttcgtg aggactgaac catggccacg gacgacaaac tcctcaagta 64620
cctcaagcgc gtcacgacgg aactgcacca gctgcggaaa cagggatcgg cgcacccggg 64680
cgagccggtg gcgatcgtgg ggatggcctg ccggctgccc ggcggcgtga cgggcccgga 64740
ggacctgtgg cgcctggtgc gcgagggccg ggacgcggtg tcgggcttcc ccgacgaccg 64800
gggctgggaa ctggagggcc tcttcgaccc tgaccccgac aacccgggta cgtcctacac 64860
cgaccagggc ggattcctgc gcggggcagg cctcttcgac gccgggttct tcggcatctc 64920
gccgcgcgag gccctggcca tggacccgca gcagcggctg ctcctggaaa cctcctggga 64980
ggcgctggag catgcgggcg tcgaccccct gtcgttgaag ggcaccgacg tcggagtgtt 65040
ctccggcgtg tccagccagg ggtacggggc cggtgccggg gtggtcgccc ccgagttgga 65100
gagcttcacc ggcacgggcg tggccgggag cgtggcgtcg ggccgggtgt cgtacgtgtt 65160
cggcttcgag ggcccggcgg tcaccgtcga cacggcgtgc tcgtcgtcgc tcgtggcgat 65220
ccatctggcc gcgcaggcac tgcggcaggg cgagtgctcg atggccctgg ccggtggcgc 65280
gatggtcatg tcgacacccg gcaccttcgt ggcgttctcc cggcagcgcg gcatggcatc 65340
cgacgggcgg tgcaaggcgt acgccgacgg cgccgacggc atgggcctcg ccgagggcgc 65400
gggcgtggtc gtactcgaac gcctctcggt cgcgcaggag cgcggccacc gcgtcctcgc 65460
ggtcgtccgg ggcagcgcgg tgaaccagga cggcgcctcc aacggcctca ccgcccccaa 65520
cggcccctcg caggaacgcg tgatccgcaa ggccctggcc ggggccggac tggtctcggc 65580
ggacgtcgac gtcgtggagg gccacggcac cggcacggcc ctcggcgacc cgatcgaggc 65640
ccaggcgctc ctggcgacgt acggacaggg ccggagcccc cgacagccca tatggctggg 65700
ctcgttgaag tccaacatcg ggcacaccca ggccgccgcc ggtgtggcca gcgtgatcaa 65760
gatggtgcag gcgctgcgcc acggcgtcat gccgcccacc ctgcacgtcc aggagcccac 65820
gaccgaggtg gactggtcgg cgggcgcggt cgagctcctg acggaggcgc gcgcgtggcc 65880
tcgtgccaca cgtccgcgcc gggccgggat ctcctcgttc gggatcagcg gcaccaacgc 65940
ccatctgatc ctggaggaag cgcccgccga cgaggccgag cccgccccgg cggaggcgga 66000
ggtggaggcg gagcccgggg gcgtggtgcc gctggtcgtc tcggcgagca gtggcggcgg 66060
gctgacgggc caggccgcgc gcctgacggc gtatctggag gccccgggaa cgtccctggc 66120
gggtgtcgcc ggggcactcc tgtcggaccg ggccctgctc gacgaacgcg ccgtggtgct 66180
cgcccgcacg gacaccgagg ccctggcggg cctcggcgcg ctcgcacgcg gcgagagcgc 66240
caccggtgtg gtgtccggcc ggatcgccgg gtccggcgtg ccgggcaagg tcgtgtgggt 66300
gttccccggg cagggctcac agcgagtggg ggcgggccgg gaactgtacg accggcaccc 66360
gctgttcgcg gcggccttcg acgaggcctg cgagcacctg gacgcgcgcc tcgccggatg 66420
ggtcgaccat ccggtgcgtg acgtggtcct gggcacggtg gcgggcagcg ccgacctgct 66480
gaaccagacg gtgttcaccc aggccggact gttcgcggtg gagagcgcgc tggcccgcct 66540
cgtggagtcc tggggcgtac gcccggacgt ggtcatcggg cactcgatcg gcgaggtcac 66600
cgccgcgtac gtcgcgggcg cgctgacgct gcccgacgcg gcgcgcctgg tcgccgccag 66660
ggggcggctc atgcaggcgc tgccccctgg cggggccatg gtcgcggtgg ccgcgaccga 66720
ggagcaggtc accgggctgc tgggcgcggg cgtggagatc gcggcggtca acggcccgtc 66780
cgcgctggtg ctctccggag acgaggacgc ggtcctcgcg gcggcggacc agctgcggga 66840
gcgggggcac aaggcgaagc gcctcgccgt ctcgcacgcg ttccactccg cgcggatgga 66900
gccgatgctc gccgacttca ccgccgagct cgccacggtg gcgtggcggc agcccgcgat 66960
cccggtgatc tcgaacgtga ccgggcggcc cgcagagccc gacgcactcg ccgacccccg 67020
gtactgggcc gagcacgtgc ggcgtccggt gcggttcgcc gaaggcatcg cggccgccgt 67080
ggagtgcggc ggcaccctgt tcgtggaact gggtcctggc gcggccctga ccggcctggt 67140
cgaggagacc gccaccgcct cgaccgccgc ggtgacctgc gtcgcggccc tgcgcgaagg 67200
acgcccggag gagcggacgc tcctcgcctc gacggccgaa ctgttcgtgc ggggcgtgac 67260
cgtggactgg acccgcctac tgcccgccgg agccgcctcc gcccccgtgg acctgccgac 67320
gtatgccttc gaccaccggc actactggct gcagcccggc gcatcggcca cggacgccgt 67380
gtcgctgggg cagaccccgg cggaccaccc gctgctgggc gcggtggtgc ggctgccgca 67440
ctccgacggc ctggtcttca cctcccggct ctcgctgcgc tcgcacccgt ggctggccga 67500
ccacgcggtc ggcggcgcgg tcctcgtccc cgggaccgcg ctcgtggaac tcgcggtgcg 67560
cgccggagac gaagccgggt gcgcggccct cgaagagctc gtggtcgagg cgccgctggt 67620
ggtgcccgcg cgcggcgcgg tgcgggtgca ggtcgcggtg ggcgccccgg gtgcgacggg 67680
cgcgaagggc tcgcgcacgg tggaggtgta ctcccagccc gaggacgccg ccgacggggg 67740
cggcaccgac acgtggaccc ggcacgcggc gggcctcctg tcggtcaccg tcccgccccg 67800
cggcgacagc gccttcgact tcaccgcctg gccgccgcgc ggcgcgcagc cgatcgacgt 67860
ccaccccgat gacttctacg acggactgac cgagcgcggc tacggctacg gccccgcgtt 67920
ccgcggcctg cgggcggtgt ggcggcgcgg cgaggaactc ttcgcggagg tcgccctgcc 67980
cgatgaacag cgcaaggacg ccgagaggtt cggcatccac cccgcgctcc tcgacgcggc 68040
cctgcacgcc ggaatgctcg ccaccacggc ggacacgaca gcggatgacc ccgggcagcc 68100
ggtgctgccg ttcgcgtgga acggcctcgt gctgcacgcc gccggtgcct ccacgctccg 68160
ggtacgcctg acgcccggcg gccccggcgc cgtgtccctg acggcggcgg acgagaccgg 68220
cggcctcgtc gtggccatgg actccctggt gtcccggccg gtgtccgcag gccagttgga 68280
gagcgcgacg gacacggcgg ccgccgacgc gctcttcgcc gtggagtgga ccgagctgcc 68340
gtcggtacgg ggggacgcgc cgtcctgggt gccggtggcc acggccgacg acgtgatggc 68400
cctcgaccgg agcgcgacgg ccccgccgtt ggccgtcctg gaagctttcg gcggcgaagg 68460
ggagggcgcg gcactcgccc tgacctccca ggtccttgag gtcgtacagg cgtggctgac 68520
cggggccggg tttggggatt cgcgccttgt ggtggtgacc cggggggcgg tgcccgcggg 68580
cgatggagcg gtgacggatc cggctggagc ggcggtgtgg ggtctggtgc gtgccgcgca 68640
ggcggagaat ccggaccgga tcctcctcat tgataccgat cccacggccg aaggggatct 68700
ggatgcggcg ctgggggtgg cgctggccag tggtgagccg caggttgcgg tgcgtggtgc 68760
gactttctcg gtgcccaggt tggtccgtgt tgcgggtcgg gggctgggtt cggggaacgt 68820
attcgccgct ggaaagaccg ttctacttag tggtggaaca ggatccctgg gtggcctggt 68880
ggcccgccac ttggtcacgc ggcacggtgt gcggcatctg ttgcttgtga gtcgtcgggg 68940
tgcggatgcg gagggcgtgc cggagttggt ggccgagctc gccgagcagg gcgcggtcgt 69000
gtcggtagtg gcctgcgacg tgtccgaccg cgatcaggtc cgggccctgc tggccgccgt 69060
accggacgag caccctctga gcggcgtcgt ccacaccgcg ggggtgctgg acgacggagt 69120
gatcggagcg ctgacgccgg agcgcctcgc gggcgtgttc gcgccgaagg tggacgcggt 69180
ccgccacctc gacgagctga cccgcgaact gggcctggaa ctggacgcgt tcatcgtcta 69240
ctcctccgcc tcgggagtgt tcggttcggc aggtcagggc aactacgcgg cggcgaacgc 69300
ctacctcgac gggttgatgg cgaaccggcg ggcggcgggc ctgcccggta tctcgctggc 69360
ctggggcctg tgggagcaga ccgcgggcat gaccgcacac ctggacgagg tggaccaggc 69420
gcgcgccagc cgtggcggcg tgctggccat cacgcccgcc gaaggcatgg agctgttcga 69480
cgccgcggcg gcgtcccggc acgcgctgct ggtcccgatc aagctggacc tgcggggagc 69540
gcgcgccggt gcggcctccg gcggagcggt tccccacctg ctgcgcggcc tcgtacggac 69600
gggccggcag caggcgcggg cggcgtccgg gagcgacggc gagctggccc gtcgcctcgc 69660
cggactcacc gaggcggagc agaaggccct gctcctcgac ctggtccgca cccaggccgc 69720
cgtcgtgctc gggcacgcag gccccggaag cgtgcggccg gacatggcct tcaacgaagc 69780
cgggttcgac tcgctcacct cggtggaact gcgcaaccgg ctgcgtgagg cgaccgctct 69840
caagttcccc gccaccctcg tcttcgacta cccgaccccg gaagcgctcg cccgctacct 69900
gcgcgaagag ctcgccgatt cggccgaagc cgccgcaccg gccgcggctg tcgtcgcgga 69960
cccggacgag ccgatcgcga tcgtcgggat ggcgtgccga ctgcccggcg gggtgacgga 70020
ccccgacggc ctgtggcggc tggtgcgcga gggccgtgaa ggcgtgtcgc cgttccctga 70080
ggaccgcggc tgggacctgg agggcttgtt tgacgcggat ccggacaacg ccggtacgtc 70140
gtacgccagt cagggcggtt tcctgcacgg cgcgggcctc ttcgaccccg ggttcttcgg 70200
catctcaccg cgcgaggcgc aggcgatgga cccgcagcag cggctgctcc tcgaaacctc 70260
atgggaagcc ctggagcagg cgggcatcga cccgctgtcg ctgaagggca ccgacgtcgg 70320
ggtgttctcc ggcgtgtcca cccagggcta tgggatgggc gcggccgcac gggacgtgga 70380
gggctacacg ggcacgggtt cggcgcccag cgtggcgtcg ggccgggtgt cgtacgcctt 70440
cggcttcgag ggcccggcgg tcaccgtgga cacggcgtgc tcctcctcct tggtcgcgat 70500
gcacctggcc gcgcaggcgc tgcggcaggg cgagtgctcg atggcgctcg ccggaggcgt 70560
cgcggtgatg gcgacgcccg gggccttcgt ggagttctcg cggcagcggg gcctggccac 70620
cgacgggcgc tgcaagtcct acgccgcggg agccgacggc accggctggt ccgagggcgt 70680
cggcctggtg gtcctcgagc gcctctcggc ggcgcgggag cgcggccacc gggtcctggc 70740
cgtgctgcgc ggcagcgcgg tgaaccagga cggcgcctcc aacggcctga ccgcccccaa 70800
cggcccctcc cagcagcggg tgatccgccg agccctcgcg aacgcgggtc tctccccgtc 70860
cgatgtggac gtggtggagg gccacgggac cggcacaacc ctgggcgacc cgatcgaggc 70920
ccaggcgctg ctcgcgacgt acgggcaggg gcgggatccc gaacagccgc tgtggctggg 70980
ctcgttgaag tccaacatcg gtcacgcgca ggcggccgcg ggtgcggccg gtgtgatcaa 71040
gatggtgcag gcactgcggc acgcgttcat gccccccaca ctgcacgtcg acgagccgac 71100
ggccgaggtg gactggtcgg cgggcgcggt ggagctgctg accgaggcgc gggagtggcc 71160
gcacaacggt cgtccgcgcc gggccggggt gtcctcgttc gggatcagtg gcacgaatgc 71220
gcatctgatc ctggaggagt cgcctgagga gccggtttcg gaggagagcg ggccggtggg 71280
tgtggtgccg ctcgtggtgt cggcgcgtag tcgggcttcg ctgacgggac aggccggccg 71340
gctggtgtcg tacgtggggt cgggggctgg tggttcgtcg cttgtggggg tggccggggc 71400
gttggtgtcg ggccgggccg tactgggtga gcgtgcggtg gtggtggcgg gttcggaggg 71460
cgaggcggtg tccgggttgc gggcgctggc gcggggcgag agtgatgtga atctggtgtc 71520
cgggggcggg ggtgtgccgg ggaaggtggt gtgggtgttc ccggggcagg gttcgcagtg 71580
ggcgggcatg gggcgtgaac ttctcgactc ctcgccggtg ttcgctgagc gggtggggga 71640
gtgtgctgcg gcgctggggc cgttggtgga ctggtcgctc gtcgacgtcc tgcggggtga 71700
ggtcgagccc gcgctgcttg agcgggtgga tgtggtgcag cccgcgagct ttgcggtgat 71760
ggtggggctg gcttcggtgt gggcgtccgt gggtgtgaag ccggatgcgg tgcttggtca 71820
ctcgcagggt gagatcgcgg cggcttgtgt ggcgggtgcg ctctcccttg aggatgcggc 71880
gcgggtggtg gcgttgcgga gtcaggcgat cgcggcgcgg ctggccggac ggggtggcat 71940
ggcgtccgtc gccctcgcag agcaggaagt ggccgggcgg ctggagccgt gggccgagcg 72000
ggtcgaggtc gcggccgtga acgggccttc ctccgtggtg attgctggtg atgccgaagc 72060
cttggacgag gtcttgcaag tgctctccgg tgacggcgta cgagtgcggc gcgtggctgt 72120
ggactacgcc tcccacacac ggcacgtcga ggacatcgag gacaccctcg ccgaagccct 72180
ggccggggtg agcgcgcagg ctccggccgt gccgttctac tcgaccgtca cgggcagttg 72240
ggtggaggac gcgggggtgt tggacggcgg gtactggtac cgcaacctgc gcgggcaggt 72300
gggcttcggc ccggccgtgg ccgatctgct ggcgcagggc cacggcgtgt tcgtggaggt 72360
cagcgcccac cccgtactgg ttcagccgat cactgagatc gtcgacgacg ccgacagtac 72420
ggcggtggtg accggttcgc tgcggcgtga ggagggtggt ccgcggcggc tgttggcgtc 72480
ggtggccgag ctgttcgtgc ggggcgtgac cgtggactgg gcccgcctgc tgcccgccgg 72540
agccgcctcc acacgcgcgg acctgccgac gtacgccttc gaccaccggc actactggct 72600
caagccggcc gcgcaaggca ccgacgcggc ggcactgggc cttgcggggg ccgaacaccc 72660
cttgctgggt gcggtggtgc ggctgccgca gacggacggg ctcgtcttca cctcgcgcct 72720
gtcgctgcgg acccacccct ggctggccga ccacgcggtc agcggagtcg tactcgtccc 72780
gggcaccggg ctcgtggaac tggccgtgcg ggccggtgac gaggccgggt gcggggtcct 72840
ggaagagctg gtgatcgagg cgccgctggt cgtgcccgag cacggtgggg tgcgggtgca 72900
ggtcgcggtg ggcgggcccg gcgagacggg cgcgcggacc gtggaggtgt tctcccagcg 72960
cgaggacgca gccgacgacg gtggcgcgga cgcgtggacg cggcacgcca ccggactcct 73020
cgcgaccacc ggccgacccg gggccggcgg cagcggctac gacttcgcgg cctggccgcc 73080
gcccggcgcc gaaccggtgg acatcagcga cggctacggc ctgctcgccc ggggcggcta 73140
cggctacggg cccgcgttcc agggcgtacg ggccgtgtgg cggcgcggcg acgaagtgtt 73200
cgcggaggtc gccctgcccg aggagcagcg cgaggaggcg ggcaggtacg gcatccaccc 73260
cgcgctcctc gacgcggccc tgcactcgac catgctgaac gccgtggcgg cgctcacggc 73320
ggccgccgac ggcgcccctg accgcgagga cggccttgag ctgcggctgc cgttcgcctg 73380
gaacgggctc gaactgcacg cggcaggcgc atcggcgctg cgcgttcgcg tggcgaggcc 73440
cgagcccgac gcgctgtccc tggaagcggt ggacgaggcc ggtggcccgg tcgtgacgat 73500
ggaatcgctg gtgggccggg tggtgtccac cgagcaactg gcggcggcgt cggacacggc 73560
acgcgtcgac tcgctgtacc gggtggagtg gaccgagctg cccccggcgc gggaggcggg 73620
acccgcgcct tcacgggtga cggtagccac cgcggaggaa gtggcgacgc tggccgacga 73680
cgtggagtcg ggagcggcgg cggccccggc agcggcggtg ctggacgccg tcggcggcga 73740
cgaggaggac gcggcgcttt ccttggcctc ccgggtcctc gacgtggtgc agtgctggct 73800
ggccgggacc gggctcgaag agtcgcggct cctcgtggtg acgcggggcg cggtccccgc 73860
gggcgacgga gcggtgacgg atccggccgg agcggccgtg tggggcctgg tacgcgccgc 73920
acaggcggag aacccggacc ggatcgtcct gctcgacacc gacaccgaca ccgacaccga 73980
cgcaggcacc gacaccgacg caggcaccga caccgacacc ggcatcgact tcgacgccga 74040
cacggaacgt gttctgggta cggtcctcgc cagcggcgag ccgcagctgg cggtgcgcgg 74100
cacgcgcttc tccgtgcccc gcctcacccg agccaccggc caagtcccgg acgtacccgc 74160
ggtgttcggg cccgacagca ccgtcctgat ctcgggcgcc ggatcgctgg gagctctcgc 74220
ggcccggcac ctggtcaccc ggcacggcgt acggcggctg ctcctcgcca gcaggcgggg 74280
ccgggacgcc gagggcgtgc cggagctggt ggccgagctg accgagcagg gcgcgacggt 74340
gtcggccgtg gcctgtgacg tgtccgaccg ggaccaggtc aaggccctgc tggcgtcggt 74400
accggacgag cagcggctca ccgggatcat ccacacggca ggtgtgacgg acgacggcgt 74460
gatcggagcg ctgacgccgg agcgcctgga gcgggtgttc gcgccgaagg tggacgcggt 74520
gcggcatctc gacgagctga cgcgtgaact gggcctggac ctggacgcgt tcgtcgtcta 74580
ctcgtccgtg tccggcgtct tcatgggcgc gggcagcggc agctacgccg ccgccaacgc 74640
ctacctggac ggcctgatgg ccaaccggcg ggcggcgggc ctgccggggc tctcgctcgc 74700
ctggggcctg tgggagcaga acaccggcat ggccgcccac acggacgacc tcaccaagag 74760
ccggatgagt cggcgcggcg gcctgacggc gatgacaccc accgagggca tggagctgtt 74820
cgacgccgcg gtggcgtccg gacaggcgct cctggtaccg gccaggctcg acctgcgcgg 74880
cgtacgcgcc ggtgcggcgg ccggtggcgg cgtgccgcac ctgctgcgcg gcctcgtccg 74940
cgccggccgc caactggcgc acacggcggg cggcgcgggc gagcaccggc agctggccga 75000
gcggctcgcc gcactgcccg ccgccgagcg ggcgaaggcg ctgctcgacc tggtgcgggc 75060
gcaggtggcc gcggtcctcg gccacggcac gacgtaccac atcgacgccg accaggggct 75120
cttcgagatc ggcttcgact ccctcacggc catcgagctc cgcaaccggc tgcgcgccct 75180
caccgagcgg agactcgcgc ccagcctcgt cttcgaccac ccgacgccag ggatgctcgc 75240
cgcgcacctg cacgcgctga tgtacggcgc acaggccgcg gccccggtgc cgctctccgt 75300
gtgaacccag tgatccccct gtgaatccgt agaaagcaga aagaggcgac gacgtgttcg 75360
acgtgagcga ctacctccag cggatcggct gcggcggaga gaccggcgtg gacgccgcga 75420
cgctgcggaa gctgcacaag cgccacctca tggcgattcc gtacaacggc gccgcgcagg 75480
acctccgcga cggcatccgc ctcgtggacc tcgacgagga cgccgtgttc gagacgagcg 75540
tcgtcgacgg gcacggcggc acctgcttcc agctcgcccg gctcttccac cggctgctcg 75600
ccgcactcgg ctacgacgtc acgctgatgg cgggcagcac cgccgaaggc cgcgagaact 75660
tcgggctcga cgtggagcac atgttcagcc gggtcgccct cgacggcgag gagtggctcg 75720
tcgacgtcgg ctacccgggc ccgaactaca tcgagccgct gcggatcacc gacgcggtgc 75780
agagccagta cgggtgccag taccgcctcg tcgaggacgc ctcggggttc gccctccagc 75840
ggcgggggcg ggtcagccgg tggagcgtcg tctacacctt caccaggaag ccccggcagt 75900
ggagcgactg gaaggaactg gaggagtacc tcaaccggga gtacgcggcc gcccccgccg 75960
aatccgacgc ctgcccgatc gcgcgcggca cggaccgcat cttcggggag atcgaggcgg 76020
ccaccggcgc gcacgagggc caggacgtgc tgtgcggccg caccttcgac aacggccagg 76080
tcgtgctgaa gggacgccgc tacctgacgg tccgcgacgg ccgcgaagaa gtccgcacga 76140
tcaaggacga cgacgaacac cgcgacctgg tcttctgcat cctgtccggc gacttcagct 76200
gaacgcgcgc cgcgcacacc ccgcacagca cccgtccgaa gggggacatg atggccaccg 76260
ttccgctgcg tctcgacgac cacgcgtacg acgtgctgat cggcccgggg gtgcgcgcgt 76320
cgctcaccga cgtggtccgg cgcctcggcg ccggacgggc cgtcgtcgtg tcggcccgcc 76380
ccgcggagtg ggtgcccgac accggtgtcg agaccctgct gctgcgggcc cgggacggcg 76440
agcgggacaa gaccctcgcg accgtggagg cgctgtgcgg tgagttcgtg cggttcgggc 76500
tcaccaggtc cgacgtcgtc gtgtcctgcg gcggcgggac gaccaccgac gtggtcggcc 76560
tcgcggccgc gctgtaccac cggggcgtgc ccgtggtcca tctgcccacg tcgctgctcg 76620
cccaggtgga cgccagcgtc ggcggcaaga cggcggtgaa cctgtcggcg gggaagaacc 76680
tcgtcggcgc gtactggcag cccagcgcgg tgctgtgcga cacggactac ctcacgaccc 76740
tgccgcgcag ggaactcctc aacgggctcg gggagatcgc ccgctgccac ttcatcggcg 76800
cggccgacct gcgcggcctg ccgctcgtgg aacagatcac ggcgagcgtg accctcaagg 76860
cccgcatcgt ggaggcggac gagcgggaca ccggcgtgcg gcacatcctc aactacggcc 76920
acacgctggg ccacgccctg gagaaggcga ccgactacgc cctgcgccac ggcgaggcgg 76980
tggccgtcgg cacggtcttc gcggggcgcc tcgccggagc cctgggccgc atcggcccgg 77040
cacgggtcgc ggaacaccag gacgtcgtcg cgtactacgg actgcccgcc gcgctgcccg 77100
ccgaggccga gcccgcggac ctgctgcggc tcatgcggca cgacaagaag gcgatcaccg 77160
gcctcgcgtt cgccctggac ggcccgcacg gcgcggagct ggtgagcgac gtgccgcccg 77220
aggtggtcgc gcgcgtcctg gagcggatgc cccgggcgcc cctcgccgac ctcgtcggcg 77280
ccgccgcgac cggcgccgcc gcgaacgacg cggcccggac gtgaggcgcg cgccccggcc 77340
gacggccgga cccgagagcg cggccggacc cgaagggacg gccgacgccg ccgatccggt 77400
gcaccgcctc ctggcgggga agctgacggc ggccctggcc cgaccggccg cccagcagcc 77460
gcactggccg gacccggagc gggcgaaggc cgtggtggcg tccctgagcc gggccgcgcc 77520
gatcgtgacg cccgccgaga ccgcgcgcct ggcggaccgg ctcgccgcgg tcgcgcgcgg 77580
cgaggcgttc ctgctccagg gcggtgactg cgccgaagcc ttcgccgaga acaccgaagc 77640
ccaccagcgg gccaacctgg ccgtgctcac cgacatggcc gcggtcctcg cccgccgcac 77700
cgcactgccc gtcgtcgcgg tcgcccgcat ggccgggcag tacgccaagc cccgctcccg 77760
gcccttcgac gcgctgggcc ttcccgtcta ccgcggcgac ctggtcaact cgatcgagcc 77820
cacgcccgcc gcgcgcacgc cggacccctc ccggatgctg cgggcccgcg ccgaagcggc 77880
gggcgccatg gccgtggtcc gcgccttccg ccccggcgcc acgcccgacg cgcgggcgcg 77940
gcccggcggc gtgagcgagc tctacgtcag ccacgaggcg ctcgtactcg actacgagcg 78000
gtcctcgctg cgggcggaca ccagcggccc cgaaccccgc ctggccagcg gcctcgggca 78060
cttcctgtgg atcggcgagc gcacccgtga cctggacggc gcgcacatcg cgttcgcgga 78120
gctcctggcc aacccgatcg gcctcaagat cggcccccgt accaccccgg agcaggccgt 78180
cgactacgtg cgcaggctcg acccgcacgg cgaaccgggg cgcctcacgc tgatcagccg 78240
catggggcac acccgggtcc gtgccgtcct gcccgcgatc gtggagaagg tcaccgcctc 78300
gggacaccag gtgatctgga gctgcgaccc catgcacggc aacacgtaca ccgcggcgaa 78360
cggctacaag acccgcgagg tccggcacat cgccgacgag atctccggtt tcttcgccgt 78420
gcaccggcgc ctcggcaccc accccggcgg cctgcacgtc gagctcaccg gcgacgacgt 78480
cacggagtgc gtcggcggcg cccgcggcat caccgaggcc gacctgcccg cccgctaccg 78540
cacggcctgc gacccgcgcc tcaacgcgga gcagtcgatg gaactcgcca ccgccgtcgc 78600
ggacctcgcg gcggccggtc ccacggacag agaacgcacg gaaagctgag gccgcgatga 78660
ccggacaccc tcccggcacg cccatcaagg gcaccaccag gctgtacgcc gtcctcggcg 78720
accccgtcgc ccaggtccag tcgcccggcc tgatgaatcc gctcttcgcg cggctcggca 78780
gggacgccgt gctcgtgccg gtgcacgcca gggcgccgca cctcgacgcc gtcgtgcgcg 78840
gcctgcggcg gatcgacaac ctcgacggca tgttcgtcac cgtgccccac aaggcggccg 78900
tacgccggct cgccgaccgg tgcggcccga ccgtggacgt cgtcggcagc gcgaacgtgc 78960
tgcgccggga ggccgacggc tgctggctcg ccgagaactt cgacggctcg ggcttcgtca 79020
cgggactcgt cgcggccgga cacgaaccca agggcgccca cgtggcgctg gtcgggacgg 79080
gcggcgcggg cagcgccatc gccgcggccc tcctcgccgc gggcgtcgac cgcctgtccg 79140
cgtacgacac ggacaccgcg aagctcggcg ccctgatcac ccgcctcgac gcgcactggc 79200
ccggccgggt ccgcgcgctg gccggaccgc acctgcggga cgtcgacatc gccgtcaacg 79260
cgacgccgct cgggctgcgc cccgacgacc cgctgccctt cgcgccggac ggcctgccgc 79320
cgggcggcgt ggtggccgac atcgtgatga agccgcgcga gacgaagctc ctgcgcgagg 79380
cggccgccct gggccacccc gtccaccacg gcattcacat gctggaaggc caactggagg 79440
cctatcaggc cttcttcggc ctgacctgag gcaggccagg aggcccgccc cgaggcccgc 79500
ccagaggtct gccccgaggt cggcccgagg tccgccccga gcgcgcgccg actacctgac 79560
cgagggatgc ggaggcgtcg tcaggcctct actttggacc tgttggtcat cttttctccc 79620
ctccgcggca cgcggccccg actgtcccgc accccgcgtc gagccgatcc atggttggag 79680
aaacatgaac gtgcgacaga cgccggaatt ccccgagtgg ccgcagtacg acgcgaagga 79740
gcgggaaggc ctcgtccgcg ctctcgaaca gggccagtgg tggcggatgg gcggcagcga 79800
agtcgactcc ttcgagcggg agttcgccga gcaccacggc gccgcccacg ccctggcggt 79860
caccaacggg acacacgcgc tcgaactcgc cctgcagtgc atgggcgtgg gcccgggcac 79920
cgaggtcatc gtcccggcct tcaccttcat ctcctcctcc caggcggccc agcggctcgg 79980
cgcggtcgcg gtcccggtgg acgtcgacga ggacacgtac tccatcgacg tggcggcgac 80040
cgccgccgcc gtcacgccca ggacccgggt gatcatgccc gtgcacatgg cgggcttcat 80100
ggcggacatg gacgccctcg ccaagctctc cgccgacacg ggcgtcccgc tgctccagga 80160
cgccgcgcac gcccacggcg cccgctggcg cggcaggcgc gtcggcgaac tcggctccgt 80220
cgccgcgttc agcttccaga acggcaagct catgaccgcc ggtgagggcg gcgccgtcct 80280
gttccccgac acggagatgt acgagacggc gttcctgcgg cacagctgcg ggcggccccg 80340
caccgaccgc aggtacctgc accggatcgc cggatccaac ctgcggctca acgagttctc 80400
cgcggccgtg ctccgcgccc aactgggccg cctcgaacag caggtgacga cccggcagca 80460
gcgctgggcg ctgctttccg ggctcctcgg cgcgatcgac ggcgtggtcc cgcagcgcgg 80520
cgacgagcgc accgacttcc cctcgcacta catggccatg ttccggatcc ccggcatcgg 80580
cgaggagcag cgcaacgcgc tcgtcgaccg gctcgtggcg gcgggcgtcc cggcgttcgc 80640
gggcttccgc gcgatctacc gcaccgacgc cttctgggag ttcggcgcgc ccgacgagag 80700
ccccgacgag gtcgccgagc gctgcccccg caccgaggcc atcagccagg actgcgtctg 80760
gctccaccac cgggtgctgc tcgccgccga gcaggccctg cacgagaccg cggcgatcgt 80820
cgcggacgcc gtggccgcca tatgagcgtc aggacggccg tcgtcgggct cggctgggcg 80880
ggccgggagc tgtggctgcc gcggctgcgc gcgcacgccg acttcgacgt ggtggccgcc 80940
gtcgacaccg aacccgcggc acgggccgcc ttcgacaccg ccctcggcgt ccccgtgcac 81000
ccgacggccg acgcactcac cgcgcaggac gtcgacctcg ccgtcgtcgc cgtacccaac 81060
catctgcacg ccgaggtggc gggagccctc ctcggccgag gcgtccccgt cttcctggag 81120
aagccggtgt gcctgaccgc cgccgaggcc gacgccctgg ccgccgccga acgcgacggc 81180
gacgccacgc tcctcgcggg cagcgccgcc ccgcaccgcg gcgacgtggc ggccctggcg 81240
gccctggtgc cggacctcgg ccacgtccgg cacgccgatc tttcctgggt cagggcgcgc 81300
ggcgtccccc gggcgggcgg ctggttcacc cggcgcggca cggccggtgg cggagtgctg 81360
ttcgacctcg gctggcacct gttcgacacg ctcgcctcgc tgctcggccc cgcccccttc 81420
acccaggtcg tcggcgtgac gtcgagcgac ttcgtcaacg ccgccgcctg gggcgcgacc 81480
tggcggcggg accggcccgc cgacgacgcc gtcggcgacg tcgaggacac cgcccggggc 81540
ttcctggtcc gcgccgacgg gatctccgtg tcgctgcgcg cggcctgggc gtcgcacgag 81600
gccctggacg tcacccggat ccagctcgtg ggcagcgagg gcaccgccga actgcggtgc 81660
accttcggct tcagccccaa ccgcgccccc gagtcggccc tgaccctgac gcgtgcgggc 81720
accaccacgg gcgtcccggt gccggacgag cccatcggcg acgagtaccg gcgccagctg 81780
gacggcctcg ccaccgtcct gaaggaaccg gccagccgcg gcagggccgt cggcgaggcc 81840
cgcacgacgg tccgcgtcat cgaggacttc tacgcctcgg cccgttccgc acccgcgcgg 81900
aacgtcgggc ccgctcaccg gtggacgggg gaggaccagt gacagcagcg gttccgggag 81960
agccggccga cgcgctggac ggcgatcgcg tgccgggccg ggcgccgggg gcagccgcga 82020
cggacacgct caccccggtc aggcgtgccg tggtcttcga cctggacggg gtgatcgtcg 82080
acagcttcgc ggtgatgaac gaggccttcg ccctcgccta caaggaggtc gtcggcgagg 82140
gcccggcccc cttcgacgag taccggcggc acctggggcg ctacttcccg gacatcatgc 82200
ggatcatggg cctgcccctg gagatggagg agccgttcgt ccgcgagagc taccgcctcg 82260
cccccaaggt gcccgtcttc gagggcgtcg tcgagctgct cctgaccctg cgcgtgcgcg 82320
ggctcaagct cgccgtggcc accggcaaga gcgggccgcg ggcgcgctcc ctgctggagc 82380
agctgggcct cctcccgttc ttcgcccacg tcctcggctc ggacgaggtg ccacggccca 82440
agcccgcgcc cgacatcgtg gagcacgccc tgcgcctgct ggacgtgacc gccgaggagg 82500
ccgtcatggt gggcgacgcg ccgaccgacc tcgccagcgc ccagggcgcg ggagtgaccg 82560
cggtcgccgc gctgtgggcc gtggacgaca cggacgagct gctcgccgcc cggccggacg 82620
ccgtcctgcg ccgcccggcc gacctgctgg acctgtgccc gcccgtgccg ggcgcctgag 82680
ggaggaaggg cgtacggcat ggacagcgcc gggtacctgg gagttgacat cgggggcacc 82740
aaggtcgcct tccgggtgga gaccgaggcg gagtgcgtcc acgagagcgc gttcgcgtgg 82800
gacccgcggc acagcgccgc ccgcgacctc cgccaactcg ccgacgccgt cgccgaggtg 82860
cgggcgcgcc tcggcgcccc cttccgggcg gtgggcgtcg ccatgcccgc gacggccggg 82920
ccggacgagc gcgtcaccgc ctggccgagc agacctgagt ggaccggcac ggacctgggc 82980
gcggccctgc gcccgctgtt ccccgaagca gccgtcgcct gggcggacga cggcgacctc 83040
ggcgcactcg cggagtcccg ggccgcgggc tgcgacgacc tgctctacct cggtgtgggg 83100
acgggcgtcg gcggcggcct cgtcctgcgg ggcgagccgt gccccgggat cggccgcggc 83160
tccttcgagg tcgggcacgt ggtcgtcgag ctcagcggcc cgcggtgcgg ctgcggccgc 83220
aggggctgtc tccaggcggt ggcgtcgggc ccggccaccc tgcgccgcgc gcaccggctg 83280
cgggggagcg cggtcacctt cgacgacctg ctcacggcct ggggcgacgg gcggccgtgg 83340
gccgtcaccg cgctgcgcgg gacctgccgg gctctggccg ccgcggcggt gggcgtccag 83400
gagctgctcc ggccgcgcct cgtacgcgtc ggcggcggct tcgcgagcgg catcccgggg 83460
ttcgccgggc tcgtcgccga ccacgtcacg gaactggccc gccccggact gcccccgctc 83520
ccggtggagc aggccgcgct gggcggcctg tcgtccttgc acggcgcggt gtcactggcc 83580
cggctgatcg cagcgcgccc cgttccggat ttcgtacagc gggaaaagag cgcggaatcc 83640
ttatcaggtt gaggggtgct caaccggtta tggctgccct atcgtcccga agggtcgggc 83700
tgttccggag cgccggcacg cattccggca cggcgcgacg actcatcggc gtaccgacgg 83760
cttatcggca taccgatgat tcatcggtgc gctgaaggcc tatcggtgta ccgacggcat 83820
atcggcgtac cggcgcagca cggagagcac cggcgtggcc cggaggaatt gaggccgccg 83880
gtccttcacc gccccgcacg gcagcgcccg tccctctcgc cgtcccacgt cggtgggtcg 83940
gcaggtcact ttcctcgacg cagaaggggt acccccatga cagccaccgc cgagaacgcg 84000
accgagccga tcgacctgct ctcgccggac ctgactgccg accccttcgc caagtacgcg 84060
cggatgcgcg agcaggcgcc ggtcctcgcg ggcacggtcc tggggtcacc gatgtggctc 84120
gtcaccggct acgacgacgt gcgtctggtc ctcaccgacc cccggttcgt caccgacgcg 84180
acgtccgtac gaggagacga cccggacggc gggcacgcga tcctgaagaa gctcaacatc 84240
ccgtccgacg tggaggacct catcgccaag gcgatgatga acctcgacgg cgccccgcac 84300
gcccggctgc gcaaactggt ctcgcgcgcg ttcaccgccc gacgggtggc cgagatgcgc 84360
ccgcgcatcg aggaactcac cgcgcggctg ctcgacggga tggcggcggc gggccgcgac 84420
ggcacgcccg tcgacctcgt cgaggcgttc tgctacccgg tgccgatcgc cgtgatctgc 84480
gagctggtcg gcatcgacga ggaggaccgg ccgcagtggt cgggctgggg gcgcgtgctg 84540
tccctgatgc aggtcgagca cctccccacc atcctgcgcg agtgctccgc acacgtcatg 84600
gacgtcatcg aacgccgccg cgccgagccg cgcgacgacc tgatctccgc gctcatccag 84660
gcccaggagg acgacggcga ccggctctcc gaccgggaga tggtcacgct cgtcttcacc 84720
atggtcaccg cggggcacga gtcgacgacg tacctcctcg ggaactccgt gctcgcgctc 84780
ctggaacagc cggaccagct cgccctgttg cgtgcggacc cgtcccgatg gcagccggcg 84840
gtgcgcgaac tcatgcgcct gggcccctcg cagttcgcac agccccggta cgcggcgcag 84900
gacgtcgagc tgagcggcgt gcgcatcccc gcgggctccg cggtcacccc gctgctcctg 84960
gccgcgaaca ccgacccgcg caagtacgcg gaccccgagc gcctcgacgt cggcagggga 85020
gccgcgagcc acgtcggctt cggcatgggg gtgcaccact gcctgggcgc gccgctggcc 85080
tatctggagg cggaggtggc gctccaggcg ctgttcgacc ggttccccga cctgtccctc 85140
gcggtgccgc gcgaggagat cccgtgggcg ctgcggcccg gcttcacccg ggtcgcggag 85200
ctgccgctgc gcctggcctg accggccacc gaccgcccgc tcaccgcccg cggcggatcg 85260
cgcgacggcc cgtcagacgg ccccgcgcgg tgcgccggcc gggaccgggg cgcgcagctg 85320
gtcccgcagg tcgtcgagca gctcccggat gccgtcgggc ccgctcgcgg cgccgaagac 85380
gtggtagtcc gggcggacga gcagcgccgt cgccgcgaac cgggcgaggt acggccggta 85440
gacgccatcg gtgtccacca cctcgacgac gccgggcgcc gcggcgtcca ccgcggcggg 85500
cgcgtccttc cgcgcggctc ccggcggcag cagccgcacc acgtgggccg cgaggtcccc 85560
gaggagggcg agccgctcct cgtcgagcac ggcccgcggg tcctcggtgg tcagcagcac 85620
gaaaccgcgg cccacgacgt cgtcgaagag cccgccgaag ccgccccggt ccacgcgccc 85680
ttgcgggacg accgcgcccg cgggcgcggt cgccgcggca ccccggtgca gcagcccgcc 85740
cgggagcggc ttcgcgggct caggccccga cggcacgcgg ccgcgccggt tggcgaggac 85800
ggtggcgtcg cgctcggcgg cggccacggg gtccgtcaca cagatcagcc ggcccagctg 85860
gaccgacgcc aggatcgcct ccttggcctg cgcgcggcgc tcccgcgcat agctgtccag 85920
gagggccggt cctgcctgcc cgcgcagcgt cagatccagc ttccacgcca ggttgacgac 85980
gtcccggatg ccggagcaca tgccctgccc ggcgaacggc ggcatcagat gcgccgcgtc 86040
cccggccagc aggacgtgcc ccacgcgcca ctggtcggcc caactggcct ggaagatgta 86100
cgtggtgctg cgcagcagcg tcgccgtgtc gggagtgacg ccgaacggcg cgagcagccg 86160
ccaggccgcc tcgtccccgc tgagctcgac ggcccgctcg cccggcaggc gcatgaactc 86220
ccagcgccgc cgcccgggac cgctgcccac cagggtcgtg ggccgcgccg ggtcgcagat 86280
ctgcacgttg gtgggggtga acgcgcgcgg ctcgcgcagt tcgacgtcgc agagcagcca 86340
ctcgtaggag aacccgaggt cggtgacggg cacgtcgagg tggtcgcgca cgaagctgtt 86400
ggcgccgtcg cagcccacga cccatcgcgc ggacagggcc cgggtggtgc cgtcgtcggt 86460
ggcggccgtc acctccaccc ggtgctcgcc gtcggcgatc cccacgacct cgtggccgcg 86520
caggaccgtc accccgagcg ccgcggccct ggccgcgatc aactcctcca gggcgggctg 86580
gtgcatcgtg ttggcgtccg gccagccgta ggggcccgcc gtggtgaagg ggatgtcgag 86640
gagcgccgcg cctgcggccg tccgccactg gtagccgttg gccggttcgg tgatccggcc 86700
gaggtccggg ccgatgccgg tggcggccag gagccgggcg gtctccccgt cgaagctggt 86760
ggcgcgcggc agcggatacg gcctgcggcg gcgctccagg acggtcacgc gcagtccgcg 86820
ctgggcgagc agcaccgaaa gcgcggcgcc gaccggtccg ttgcccacga cgacgacatc 86880
cgcgtccgtg gggtccgcgg gcacttccaa aaggggtgtc aaggaaaacc tcacagatgc 86940
gcaccgtttg acgaaatgaa ttccatcgtg ccgaaaagcg ccgacagttg caggaaatcg 87000
ctggcaccgt attccgcagt acgaaacgtg tcaagaagcg gaaaacctta ccaggttgag 87060
ggatgccccg ccggtcattt ccgccctatc ctgccgagga gtcgtgcctc ataaccgtaa 87120
gagcaccggc acttcacgcc gcacggccgc aggaacgtcg gaattcccgt ccgccggtcc 87180
cattcagctc cgcacgcgcg acatccttga cgccgaaggg gagacctatg acagccaccg 87240
ccgagaacgc gaccgagccg gtcgacctgc tctcgccgga cctgatcgcc gacccgttcg 87300
ccgcgtacgc gcggatgcgt gagcaggcgc cgaccctgac cggttcgatc atgggcgggc 87360
gcccgatgtg gctggtcacc cgctacgagg acgtccgcaa ggtgctcacc gacccgcggt 87420
tccacaacaa cccggcatcg gtgccggacg ccccggacac ccggacgacg atcatgcgcc 87480
agctcaacct gccgaccgac ctggtcgact acctcgaaga caagctcatg cagatcgacg 87540
gcgccgacca ccgccggctg cgcggcctgg tctccaaggc gttcacggca cggcgggtgg 87600
cccgcctccg cccccgggtc gaggagatca ccacgacgct gctcgacggg atggcgcagg 87660
cgggccgcga cggcacgccc gtcgacctgt tgaccgcgtt ctgctatccg ctgccgttca 87720
ccgtgatctg cgagctggtc gggatcgacg aggccgaccg cgcgccctgg ttcgagtggg 87780
ggcactgcct gtcctcgccc acggagcacc gcgagcgcct cccgcaggtc atgcgcgagt 87840
gcgtcgacca catgctggag gcgatcgagc ggcgccgcgc cgagccgcgc gacgacctga 87900
tctccgcgct cgtccaggtc caggaggacg acggcgaccg gctctccgag cgggagatgg 87960
tcaccctggt cttcaccctg gtgatcaccg gacacgagac gacgacgcac ctgctcgcca 88020
actcggtgct cgccctcctg gagaacccgg accaactggc cctcgtacgc gccgatccgt 88080
cccggtggcc gcaggcggtg aacgagctca tgcgcctggg gcccacgcag tggggcctgc 88140
cccggcaccc gtcggaggac gtcgaagtcg gcggcgtgac gatccccgcg ggcgccaccg 88200
tcatgccgct gatcctgccc gcgaacaccg atccgcgccg gtacgacgac cccgagcgcc 88260
tcgacatcgg ccgcgagacc gggcagagcc acctcggctt cgggcagggg gcgcactact 88320
gcctcggcgc gccgctggcg ctccaggagg cggaggtggc gctgcacgcg ctgttcgagc 88380
ggttccccgg tctgtccctc gcggtgccgc gcgaggaggt cgtctggacg ctgcgccccg 88440
gcgtcacccg tgtcgagaag cttccgctgc gcctcgtctg agcacacagg acgccgtacc 88500
ccctcgcccg ctgctgccaa gggcgagggg gtacggcgtg tgctgcgggg gatcagagcg 88560
cgtcgacggc gtacggcacg gccagggtcg gctcaggcga ccttcgtcgc gcacaggatg 88620
ccgtgggcga tcagggcccc cggcatggtg gtgaggtcct gggcgaccgt cctggtgacc 88680
cggaacccgg cttcctccag ccacttccgg tacgtcgaca gcttctgcgg cccgccctgc 88740
cccatggtgc aggcgaggaa gtaggcgggg aagatgtcga cgccggcgct gctgggctcc 88800
gtgatgtcct cggggtagac cggcaccagg atgttgacct tcccgccgac gtcgagggcc 88860
tcgctcacgc cgttgaggat cgtgcgcacg tcgtccttgt cgaacatgtc gaggaagtgc 88920
ttgatcagga cgacgtcgaa ccctttgggg acgctcttga agacgtcgcc gccgatgaag 88980
gagcagtgct ccgccacgcc ctcggcccgg aagttctcca ggcactcggc ttccttctcg 89040
ggcaggtcga acgtcgtcac gcgcaggccg ggcgaggcct tgaggcggtg ggtcaggatc 89100
gcgccgagcc cggtgttccc ggccaggtcg agcacccgcg agcccggcgg gatgtggatg 89160
ttgcggaaga accaggggtc catgtgggcg gtgacgtcgt ccatcatcgt cgcccaggac 89220
tcgcgcaggt ccttgtgctc ggccacggcc tcgtacaggt tcccctcgaa tccgtacagc 89280
ttgtccaggc cgacgatgct gccggtcctg acgctgtcgg tgaggtagaa caactgccgg 89340
agcatgacca ccttgatcat gttcaggacg gggagcaccc gctggagatc ggcgtcggac 89400
acgcccgcga acgcgtcgag ggagtagccg ccggaggcct tgtcgaaggc gacgaagccc 89460
tccttgaccg gcaggtgcag gagttgctcc acggcgtccg gcttggcgct gacggcctcg 89520
ccgagctggg ccgcggtcag accgggccgc ttccgcagcg cgtcgacgat gccgagctcg 89580
aaacaggaca gcaggatcat gaaccgcgag ggccccacca tgtactcgcg cagacgcgtg 89640
aacgtggcca ctgcattcat cgcactcatt ccttcgggtc ggctgatcgg ctgccacaac 89700
gtcccgctcc ggcacggcgg cttccgtgcc ccgcactcac tccggtcgcc gggcgacgat 89760
cctggcgtgg tggagaccgg ccttgcccgc ggcgaaggcc gcccgcagca cctcgtccac 89820
gaactcgtcg acgcgctcgc cgagggcgtc ggcctgcgtg gcgaagccca tcagcttgta 89880
ccgcctgcgc atctcggcca gctccgcgtc ggacggcagg gatccgttcc cgcccaggga 89940
gtgcacgatc gccgggtcgt agtcgaccag ttcgagaccg gcgtcccgga gcaccgccgc 90000
cacctcgtcg gccgggtagt cccgcatcgc gggcggcgcc gacgccagca gatcccgcca 90060
cttcgcgctg cccgagacct cgcgcacgat cccgaacatc cccgcgccgt cgccgcgcgg 90120
ctgggcgccg gaccactgga gtacgaggtg gccgcccggg cgcagcgcgc gggccatccg 90180
gcgcagcggc tcctcggcct cggccagcca gtgcagcacc caggaggagt ggatcaggtc 90240
gaactggccc tgtggcagct ccaggcgctc ggccgggcag acatcggccc gcacggagag 90300
ccccgcgcac cgctgccgcg tggcctccac catggacggc gaggcgtcgc tggcccatac 90360
gtcgaagccc cgctccgcga cggcccgcgc gacctctccg gtgccgcacc cgatctcggc 90420
gaaggagccg cccttctcca gggcgccgcc cgcgagttcg agagcggcca gggccgtctt 90480
gatgtgtggc gcgttgacct gcgcgtagtc ctcggccagc caggcgttga ctgcggtcat 90540
cgacgaagtc ctctctctgc cgggaagacc gcggcggccg gagcgcgagc cgtacggcac 90600
gccgctctcg tgcgacaccg cggtcacgag tgcccgggac accggaaggg atgaggcgcc 90660
gtcagagttg agtaccgatg cggtactggg ggccgttgtc ggcccgccgc ggcccctgcc 90720
cttccgtagc ctagggcggc cccgagcggc ttggcacccc tcgatctgat agggcgtcgg 90780
ccggtcagtc ggccagggag agggcctggc ccgggcagtt gtcgacggcc tcgtgggccc 90840
ttcgcaccag gagttcgccc tcgggctcgg cgttcaggac gacgaccgtg ccctcgtcct 90900
cgctctggtc gaacaggccc ggttcggtga acacgcactg gccggagccg acgcatttgt 90960
cggcgtccgc gatgatcttc atggtgatgc ctcctccttg cgaaacccgt cgtgcacggg 91020
ggaaagagcc acccgtcgtg cacgctgaaa gagccgcccg gaaggccgcg tcgggcaccg 91080
ctgaattccg tcggcgccaa cggtgttggc gagtggcgcc gacgggatcg gacgcgcgcc 91140
gcggcacggt gaattgctcc gcggaagtgc cccgatgatc gtgcggaaat gtgcgtggaa 91200
atccgtgagg acctctgtcc gcacgtcgtg cgggatatcg cggggcactt cctggtatcc 91260
gggatgtccg gccgggtaac gttaccaccg gacgtcggac gacggtgccg ggctcagtag 91320
tcggcgctcg aaatccggct ccacgtacgc gtgagttcga cgcgcgaggc cacgttcatc 91380
ttgcggaaga tcttcttgag gtggaaagcc accgtgtgcc cggagatgaa aagccgctca 91440
ccgacctggg agttcgtgaa gccctggctc accagctcgg ccacggccac ctccgaattg 91500
gtgagagagc cgaccttcac gctgtcgtgg gcggcgtact gcggatagcg gccgcgccgc 91560
actcccagtg acctgagcct gctcacgacc cggcgggcat cgcgcggggc cgaggacttc 91620
gagtatccgt ccaccgcccg ttcgaggacg tccaccgccc ggtcgcggtc ctgccgggtg 91680
tccgcgagca gctttccggc gtcttcgtag gcggacgcgc ccgcccacag atcccggtgt 91740
gcctcggccg cggcgatcag gaattccgga ttctcggcca ccagcccgtc ggcgtgcgtt 91800
cccgccgcct ccacggaacg gatcccgcgg ttgcgcgcgg cgagttcgga cgcctcggcc 91860
gccacccgct tggcgaggac ctcgtcgccc agcttccgcg cggcccggac gagccaggcg 91920
gcggcggccg gctgcgcggc aaggagctcc aggatgagct ggtcgtcggt gatgatgccg 91980
acgacgaggt gggcggcgct cggcgcaccg ccctgcacct ccaggagctg ggccgccgcc 92040
caggcgcact ggctggggcg gtggatcgtc tgcccgagga gggcgtcgtc ccggagctga 92100
ttggcgaagt ccgagctcac gctcatgttg ccctgcctga gggcgctgag cgccatcacg 92160
gcgtgcgcct cggggagcag acaggtgagg cccagctgct gtgcctcgcg cacccccttc 92220
tccgccaggt cgacagcggt gtcgatgtcc ccctgggtga aggcgagttc cgccgcgcac 92280
gtcagcgagg ccgcgaccag accgccggac gtcgtggtgc cggccgtcag ctcctccacg 92340
ccggcgagta cgcgtgctcc ggccgccggt tcgcggattc tcaccaggag ggcggagtgc 92400
cagatcctgg cgaggcccac acatttcccc gagcactccg gttgtgtttt cccggctctt 92460
tccgcaaggc gcaggccttc tgtgagatcg ccgcgcgacc aggcggaaaa ggagagtgtg 92520
gcaagccgaa cggtttcgca ggagctgttc tcgcaggccc ccatgacgta cagggaaggc 92580
ggcagctgca ggcggaacgg tgaatcgagc atcacatctc ctgtcggtgg atcatcacta 92640
acgcctggtg gtccgcgcgc ggttccggca gcgccgaccg tgggaagtgt gcacaggaac 92700
ggttgcagtt atggcggaca ggtgcgcaag ggggcgcgcg ccaccactat gtgacgcctc 92760
gtcgactacc gcgtggcgcc ggcttcgccg accgaaggcg ggcagacatg ccgcaggggc 92820
ggcacgagtc ggtgccgacg agggggaact ggctggaggg gggtgggggc tcaagttgca 92880
tctgacatgt tccgatgatc caacgttaag ccccggaagt gcaggagcac ttcagcggag 92940
atgaagcata atttcaaagc tgcggcaggg cctcagaggt gtcgcttgcg atttgaccga 93000
ttttgcagcg atcttcccgg gggcagcttt cctgtggcca attccttact gtggccagtt 93060
tcttacctta gccgcagcgc ggggacttac gggcgagtaa ccctcgcatt cgcgcctgct 93120
tcgtcaactc cggcgcgccg tggggcggtc ggggcgcgcg gggatagggg cttacggggt 93180
ctttgcagga tgatcttggt gtggcacggt gggtgcctgc gcgatcacgt ccgggtgtgc 93240
cgcccgggcg gaagtgggct ggtggggcgc gcagttcggc ccggccggat cgacgggtga 93300
gtcaggtgcg gaccttgcgg cagccatgtg cggagtgacc gtccgggacg gggtggacct 93360
tgtgcgtgaa gtggcccgcg gagcggcccg gggagcggcg tccggcggtg gcgcgaaagg 93420
cctcggtgct caccgggaac ccggtcgggg ccggcggcaa caacgccacc gcccgtatcc 93480
agggtgtcct gcgtgccgac ggcgacaact gccccgcgac gcccgcaagt tcactcaagc 93540
aaaattcaag ccggaactac agctaccgtt tcggagcaat agcagccggg taggtcttca 93600
ggtcggatca atagggggcg ggtagttcgg atcgaggcaa gaggagccgg gtaggtcatc 93660
agtatttctg gagggaagcg ttttgggaaa gccatccaca cgcgttctgc tggtaagcaa 93720
tgatgcgcgt ctgagcactg ccctgcacca cccaccgctc cccgcgaagt acttcgtcat 93780
ctcggtgccg accagcacgc aggccctgga gaacttcggc gatttcgacc tcttgctgct 93840
cgactcctcc acacccggta tggacagcca cgaggtgtgc aaaagaatcc gcaaccaggc 93900
gtcggtgccc atcatcattc tcggcccctg cgtgaatgag atcgaccggg tactggcgct 93960
gaacgccggg gcggactact gcgtggtgaa atcggactcg ctccacgagt tgcaggcgag 94020
catggacgcc gtcatgcggc gctcgtcccc ctgtccgacc ggtcagaatg ctccggggtc 94080
agccgctcag ggcggcgaga tcctggtcgc cgggccgctg cggctgaatc cgcgcaaccg 94140
ggacgtgacc ttggcgggac ggccggtcag gctgaccccc aaggagttcg atctgctcgc 94200
catgctgatg gaggatccgg acaccctgca cacccgcaag gccatcatcg cgcgggtgtg 94260
gaacgagcac tggttcggct cgactcggac cctggacgtc catatcgggg cgctgcgtca 94320
gaaactcggt tcctacgaat ggatcgagac caaacgcggg atcggattcc ggctcggcac 94380
ggtgccggtg cccggtgccc gggactcgcc gtagccgtgg gcatcacggc cgcgtctgcc 94440
cgccgacctt gccgttcgag ccgcgcgggc tccgcggggc cgccgcggtg aggtgcaaca 94500
gggcgcgggc ggccaggcga tagccgaagg ccccaagacc gaccacgact ccgctcgcca 94560
acggagcgat caccgactcg tggcggaatt gctcgcgggc ccacacgtta ctgagatgca 94620
cttcgaccca cggcggcgca tagctcgcca gcgcgtcgcg cagactccat cccgcaatca 94680
tgagggcgcc cggattgacg atggcgccga ccgtgctctc gccgtgccgg tgaatcgcgc 94740
cgacgagatc cccttccgaa tcgtgctgga cggagaggac ttcccatccc cgggcccgca 94800
cttcatcggc gaccgctgcc tcgatgtcgg cgagcgtatc ggtgccgtat atctcgggct 94860
cacgtcggcc cagaacgccc aggttgggtc cgttgaggag cagcacgaca ctcaagggga 94920
acctcgctat tccttgggaa ggcggacggt cggcggaccg gggaccgctc cccataatcg 94980
gcgatcccgg gcaccgcaca ccatcatcag aattgatagt tccggtggcg cgcgggagcg 95040
gccgacgtgc tgcgcggcag ggcggacaac aggtctacca gcatgggtag acctgggtgt 95100
cgaggcgatt gcggacgccc gcgcgtatac cactccgcgt atccgccgcg tacgctggcg 95160
gcaactcctt gacggagcgg gggagacggg ggaacggggg ttgatggctt tcggccgagc 95220
gatccggtgc gacggtccgc accagtgcgg ctgcacggca caggacggca cggaacagaa 95280
cggcacggcg cggtgcggca ccgc 95304
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcgcatatgg agctgaatgg gacc 24
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
cgcctgcagt gaccggccac cgacc 25
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gttctgcagg gtggctgtca tgggg 25
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gggaagcttc gacggacacg ctcac 25
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cgtcccgcaa gggcgcgtgg accgg 25
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cgggctcgtc gccgaccacg tcacg 25
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
agacatatga cttcgtcgat gaccg 25
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cttctgcagc gcctcgtctg agcac 25
<210> 10
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
gttctgcagg gtggctgtca taggt 25
<210> 11
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gtcaagcttg tcgtcgagca gctcc 25
<210> 12
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
acgtcttcaa gagcgtcccc aaagg 25
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ggcggtctcc ccgtcgaagc tggtg 25

Claims (5)

1.一种曲张链丝菌素衍生物，其特征在于，其结构式如式3-4中的任意一种所示：
2.一种权利要求1所述的曲张链丝菌素衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、以曲张链丝菌素原始产生菌链霉菌XW-1为出发菌克隆得到曲张链丝菌素生物合成基因簇，该基因簇中包含5个参与曲张链丝菌素生物合成后修饰过程中的P450基因，该5个P450基因由stvP1、stvP2、stvP3、stvP4、stvP5基因组成，分别位于SEQ ID NO：1的第13481-14773位碱基处、第15800-17005位碱基处、第18765-19958位碱基处、第83977-85221位碱基处及第87228-88481位碱基处；其中，所述链霉菌XW-1的保藏编号为CCTCC NO：M2017417；
B、对所述曲张链丝菌素生物合成后修饰系统中的P450基因，单独的对stvP5进行选择性失活，获得stvP5基因失活突变株ΔstvP5；
(1)stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802：
1)以曲张链丝菌素野生型产生菌链霉菌XW-1的染色体DNA为模板，以stvP5-L-F和stvP5-L-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：8-9所示，在stvP5基因上游扩增出2098bp片段作为stvP5同框敲除同源左臂stvP5-L；以stvP5-R-F和stvP5-R-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：10-11所示，在stvP5基因下游扩增出1928bp片段作为stvP5同框敲除同源右臂stvP5-R；
2)将同源左臂stvP5-L直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-L，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点NdeI与PstI将其酶切回收；同样，将同源臂右臂stvP5-R直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-R，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点HindIII与PstI将其酶切回收；
3)将上述回收的两个片段同经过NdeI与HindIII酶切回收的载体pYH7进行三片段酶连，经过酶切验证后得到正确的重组质粒pWHU2802，用于基因stvP5的同框敲除；
(2)stvP5同框敲除菌株ΔstvP5的构建：
将stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802转入大肠杆菌ET12567/pUZ8002，以阿泊拉霉素、卡那霉素及氯霉素作为抗性筛选标记进行筛选，将筛选到的经质粒提取及酶切验证正确的转化子ET12567/pUZ8002+pWHU2802作为接合转移供体菌，以曲张链丝菌素野生型产生菌XW-1作为接合转移受体菌，按照上述接合转移方法将pWHU2802导入其中；再利用阿泊拉霉素为筛选标记，筛选到具有阿泊拉霉素抗性的接合转移子后将其进行松弛培养，将松弛培养获得的单克隆经在含有阿泊拉霉素和非抗平板上进行影印培养，筛选到对阿泊拉霉素敏感的菌株，这些菌株为可能的双交换突变株或野生型菌株；利用验证引物CK-stvP5-F和CK-stvP5-R，以其基因组DNA为模板进行PCR筛选和验证，理论阳性扩增条带为1006bp；经PCR筛选和验证正确的菌株为双交换突变株，即stvP5同框敲除菌株ΔstvP5，进一步通过Southern blot分子杂交证实突变株ΔstvP5构建成功；所述松弛培养为在含有1％MgCl2的培养平板上划单克隆培养；
C、对所述突变菌株ΔstvP5进行发酵，其发酵产物进行提取，经分离纯化，制得如上述式3和式4所示的曲张链丝菌素衍生物；
所述对突变菌株ΔstvP5的发酵产物的提取具体为：发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，收集乙酸乙酯相；用旋转蒸发仪将乙酸乙酯相浓缩至干，随后用0.05倍体积甲醇再次溶解，溶解物中即含有曲张链丝菌素衍生物；
所述对突变菌株ΔstvP5的发酵产物提取后的纯化具体为：将提取后的发酵产物溶于甲醇中后过有机系滤膜，过滤后取溶液，进样，通过HPLC制备各目标产物，色谱条件为：A相为水；B相为乙腈；流速3mL/min，洗脱程序为0-20min,35-65％B；20-28min,65-95％B；28-30min,95％B；目标化合物出峰时间为12～24min处；色谱柱为Agilent公司的ZORBAXEclipse XDB-C18反相柱，所述反相柱为5μm,9.4×250mm。
3.一种产生权利要求1所述的曲张链丝菌素衍生物3和4的工程菌株，为失活stvP5基因的曲张链丝菌素产生菌链霉菌XW-1，链霉菌XW-1的保藏编号为CCTCC NO：M2017417；所述失活stvP5基因的方法为：
对所述曲张链丝菌素生物合成后修饰系统中的P450基因，单独的对stvP5进行选择性失活，获得stvP5基因失活突变株ΔstvP5；
(1)stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802：
1)以曲张链丝菌素野生型产生菌链霉菌XW-1的染色体DNA为模板，以stvP5-L-F和stvP5-L-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：8-9所示，在stvP5基因上游扩增出2098bp片段作为stvP5同框敲除同源左臂stvP5-L；以stvP5-R-F和stvP5-R-R为引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：10-11所示，在stvP5基因下游扩增出1928bp片段作为stvP5同框敲除同源右臂stvP5-R；
2)将同源左臂stvP5-L直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-L，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点NdeI与PstI将其酶切回收；同样，将同源臂右臂stvP5-R直接连接到pEASY载体上，得到重组质粒pEASY-stvP5-R，经酶切验证和测序验证正确后利用事先克隆进同源臂两端的酶切位点HindIII与PstI将其酶切回收；
3)将上述回收的两个片段同经过NdeI与HindIII酶切回收的载体pYH7进行三片段酶连，经过酶切验证后得到正确的重组质粒pWHU2802，用于基因stvP5的同框敲除；
(2)stvP5同框敲除菌株ΔstvP5的构建：
将stvP5同框敲除重组质粒pWHU2802转入大肠杆菌ET12567/pUZ8002，以阿泊拉霉素、卡那霉素及氯霉素作为抗性筛选标记进行筛选，将筛选到的经质粒提取及酶切验证正确的转化子ET12567/pUZ8002+pWHU2802作为接合转移供体菌，以曲张链丝菌素野生型产生菌XW-1作为接合转移受体菌，按照上述接合转移方法将pWHU2802导入其中；再利用阿泊拉霉素为筛选标记，筛选到具有阿泊拉霉素抗性的接合转移子后将其进行松弛培养，将松弛培养获得的单克隆经在含有阿泊拉霉素和非抗平板上进行影印培养，筛选到对阿泊拉霉素敏感的菌株，这些菌株为可能的双交换突变株或野生型菌株；利用验证引物CK-stvP5-F和CK-stvP5-R，以其基因组DNA为模板进行PCR筛选和验证，理论阳性扩增条带为1006bp；经PCR筛选和验证正确的菌株为双交换突变株，即stvP5同框敲除菌株ΔstvP5，进一步通过Southern blot分子杂交证实突变株ΔstvP5构建成功；所述松弛培养为在含有1％MgCl2的培养平板上划单克隆培养。
4.权利要求1所述的曲张链丝菌素衍生物3-4在制备抗菌药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抗菌药物为抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物。
CN201710676122.6A 2017-08-09 2017-08-09 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用 Active CN107540682B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710676122.6A CN107540682B (zh) 2017-08-09 2017-08-09 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用
PCT/CN2018/097950 WO2019029408A1 (zh) 2017-08-09 2018-08-01 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710676122.6A CN107540682B (zh) 2017-08-09 2017-08-09 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107540682A CN107540682A (zh) 2018-01-05
CN107540682B true CN107540682B (zh) 2019-08-20

Family

ID=60971395

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710676122.6A Active CN107540682B (zh) 2017-08-09 2017-08-09 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN107540682B (zh)
WO (1) WO2019029408A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107540682B (zh) * 2017-08-09 2019-08-20 武汉大学 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用
CN111378008B (zh) * 2020-03-02 2022-04-12 中国科学院南海海洋研究所 脂肽类化合物Totopotensamides及其制备方法和应用
CN111607603B (zh) * 2020-05-19 2021-12-17 武汉大学 Hangtaimycin生物合成基因簇及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4031215A (en) * 1974-11-11 1977-06-21 Kaken Chemical Co., Ltd. Streptovaricinone C derivatives as antibiotics
CN102977118A (zh) * 2012-11-17 2013-03-20 浙江工业大学 一种作用革兰氏阳性菌的新抗生素及其制备方法和应用
CN105017267A (zh) * 2015-06-26 2015-11-04 浙江工业大学 一种抗生素及其制备和应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5052073A (zh) * 1973-02-01 1975-05-09
WO1986005784A1 (en) * 1985-04-03 1986-10-09 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotics and preparation containing same
CN107540682B (zh) * 2017-08-09 2019-08-20 武汉大学 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4031215A (en) * 1974-11-11 1977-06-21 Kaken Chemical Co., Ltd. Streptovaricinone C derivatives as antibiotics
CN102977118A (zh) * 2012-11-17 2013-03-20 浙江工业大学 一种作用革兰氏阳性菌的新抗生素及其制备方法和应用
CN105017267A (zh) * 2015-06-26 2015-11-04 浙江工业大学 一种抗生素及其制备和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chemistry and biochemistry of the streptovaricins. XV. Protostreptovaricins I-V;Prabhakar V. Deshmukh et al.;《Journal of the American Chemical Society》;19760204;第98卷(第3期);第870-872页 *
Kenneth L. Rinehart et al..Relative Biological Activities of Individual Streptovaricins and Streptovaricin Acetates.《Biochemistry》.1974,第13卷(第5期),第861-867页. *
Relative Biological Activities of Individual Streptovaricins and Streptovaricin Acetates;Kenneth L. Rinehart et al.;《Biochemistry》;19741231;第13卷(第5期);第861-867页 *
壮观链霉菌中抑菌组分的初步分离与纯化;易小利 等;《浙江农业科学》;20121231(第8期);第1212-1215页 *
壮观链霉菌非大观霉素抑菌组分的分离纯化与鉴定;易小利;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》;20130315(第03期);第B018-64页 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019029408A1 (zh) 2019-02-14
CN107540682A (zh) 2018-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2271666T3 (da) Nrps-pks-gengruppe og dens manipulation og anvendelighed
CN107540682B (zh) 曲张链丝菌素衍生物及其制备方法和应用
CN107868789B (zh) 可利霉素生物合成基因簇
KR20100049580A (ko) 티오펩티드 전구체 단백질, 그를 코딩하는 유전자 및 그의 용도
CN101691575B (zh) 一种萨菲菌素的生物合成基因簇
CN107794286B (zh) 一种环脂肽类化合物生物合成基因簇及其激活方法与应用
CN111378008B (zh) 脂肽类化合物Totopotensamides及其制备方法和应用
CN101175767A (zh) 马杜拉放线菌色蛋白、载脂蛋白和基因簇
CN111607603B (zh) Hangtaimycin生物合成基因簇及其应用
EP0929681A1 (en) Rifamycin biosynthesis gene cluster
CN101063140B (zh) 万古霉素生物合成基因簇
CN101578268A (zh) 新的化合物及其生产方法
CN114517175B (zh) 基因工程菌及其应用
KR101189475B1 (ko) 삼원환 화합물의 생합성을 담당하는 유전자와 단백질
CN112359048B (zh) 一种吕宋肽菌素c的制备方法
CN106676115A (zh) 2’‑氯代喷司他丁和2’‑氨基‑2’‑脱氧腺苷生物合成基因簇及其应用
CN107541523B (zh) 曲张链丝菌素生物合成基因簇及其应用
CN107164394B (zh) 一种非典型角环素类化合物nenestatin A的生物合成基因簇及其应用
US20030113874A1 (en) Genes and proteins for the biosynthesis of rosaramicin
CN112442507B (zh) 马度米星化合物的生物合成基因簇及其应用
CN101027395A (zh) 用于制备复合聚酮化合物的生物合成基因簇
CN101346354A (zh) 用作抗肿瘤剂的21-脱氧麦克菌素类似物
KR20190031865A (ko) 밀베마이신 d를 생산하는 재조합 미생물 및 밀베마이신 d 생산 방법
CN101142313A (zh) 编码产生地索拉唑类的合成途径的基因
KR20100089370A (ko) 슈도노카디아 오토트로피카의 신규한 폴리엔 생합성 유전자

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant