CN107771561B - 一种爪哇根结线虫的抗/耐病性鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种爪哇根结线虫的抗/耐病性鉴定方法。所述鉴定方法包括育苗、接种、抗/耐病性测定及抗/耐病性评价工序。所述的生物量测定方法与根结线虫耐病性的鉴定方法简便易操作，能较准确地反应不同品种对根结线虫的抗/耐病性，鉴定结果结论可靠，推广应用价值高。该技术用于种质资源或新品种抗/耐病性评价，为抗病育种及品种的合理布局奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于烟草抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种爪哇根结线虫的抗耐病性鉴定方法。
背景技术
根结线虫是烟草主要病害之一，严重影响烟草的产质量。该病害隐蔽性强、防治较为困难，相对其它主要病害其抗性鉴定、抗病育种也较为困难。种植抗/耐病品种是防治线虫病害最经济有效的手段。而目前衡量植物对根结线虫病抗性的标准仅有根结指数这一病理特征，反映的是狭义抗病，无法完全评估植物的抗损害、耐病能力，不能满足品种与资源的抗/耐病鉴定、选育抗/耐病品种的需要。爪哇根结线虫自 20世纪 90年代以来比例逐年上升, 在局部地区已成为优势种, 生产上迫切需求抗/耐爪哇根结线虫病品种及相应的抗/耐病综合鉴定技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种爪哇根结线虫的抗耐病性鉴定方法。
本发明的目的是这样实现的，包括育苗、接种、耐病性鉴定、抗病性鉴定步骤，具体包括：
A、育苗：将烟草种子播种于漂浮盘内，置日光温室内漂浮育苗；
B、接种：待幼苗长至3~4片真叶时，将幼苗移植盆栽，同时接种根结线虫，接种后常规管理；
C、耐病性鉴定：接种后1.5~2.5个月，采摘每株烟的全部鲜烟叶，记录每一株烟叶的鲜重，然后烘烤称重，记录每一株烟的干重数值，计算生物量的减少百分比，根据生物量的减少百分比评价品种的耐病性；
D、抗病性鉴定：
a、抗病性调查：接种后1.5~2.5个月，拔出烟株，用水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病发病情况；
b、病害严重度分级：根据病害严重度及对照品种的发病情况，确定病级并计算病指，计算公式如下：
DI=∑（各病级植株数×该级数）/（调查总株数×最重病级数值）×100；
c、抗性评价：根据感病对照达到感病时调查的各品种病指，将品种的抗性划分为四级：抗病（R），病指25以下；中抗（MR），病指在25.1~50；中感（MS），病指在50.1~75；感病（S），病指75以上。
本发明及时满足了品种与资源的抗/耐病鉴定、选育抗/耐病品种的需要，解决上生产上迫切需求抗/耐爪哇根结线虫病品种及相应的抗/耐病综合鉴定技术。
附图说明
图1为不同品种的耐病性示意图；
图2为不同品种的抗病性示意图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的爪哇根结线虫的抗/耐病性鉴定方法，包括育苗、接种、耐病性鉴定、抗病性鉴定步骤，具体包括：
A、育苗：将烟草种子播种于漂浮盘内，置日光温室内漂浮育苗；
B、接种：待幼苗长至3~4片真叶时，将幼苗移植盆栽，同时接种根结线虫，接种后常规管理；
C、耐病性鉴定：接种后1.5~2.5个月，采摘每株烟的全部鲜烟叶，记录每一株烟叶的鲜重，然后烘烤称重，记录每一株烟的干重数值，计算生物量的减少百分比，根据生物量的减少百分比评价品种的耐病性；
D、抗病性鉴定：
a、抗病性调查：接种后1.5~2.5个月，拔出烟株，用水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病发病情况；
b、病害严重度分级：根据病害严重度及对照品种的发病情况，确定病级并计算病指，计算公式如下：
DI=∑（各病级植株数×该级数）/（调查总株数×最重病级数值）×100；
c、抗性评价：根据感病对照达到感病时调查的各品种病指，将品种的抗性划分为四级：抗病（R），病指25以下；中抗（MR），病指在25.1~50；中感（MS），病指在50.1~75；感病（S），病指75以上。
B步骤中盆栽是将幼苗移植于装有无菌土的盆栽容器中。
所述的无菌土是将质量配比1:1:1的腐殖土、沙和基质混匀杀菌得到。
所述的基质为购自玉溪市乐土科技有限公司的育苗基质（烟草专用）。
所述的杀菌是将无菌土经160℃高温杀菌1~3h。
C步骤中所述的烘烤是恒温70℃烘烤2~4天。
根据生物量的减少百分比将品种的耐性划分为三级：耐病（N），生物量的减少百分比≤0；中耐（MN），0＜生物量的减少百分比＜3；不耐（NN），生物量的减少百分比≥3。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1
1、材料与方法
1.1供试的根结线虫及其来源
爪哇根结线虫 ( M. javanica)来自云南农业大学。先接种到用无菌土盆栽的易感番茄品种“Rutgers”根际，生长 50 d 后待番茄根系出现明显根瘤时，从番茄根部分离爪哇根结线虫的卵。
1.2烟草育苗
试验于 2016 年在云南省烟草农业科学研究院研和基地进行。供试烟草品种/系25个，分别为NC95、长脖黄、CC37、K346、云87、KRK26、NC2326、K326、Kutsaga 51E、KutsagaE1、Kutsage 110、SA1213、SA1214、SA1215、SA1223、SA1224、BA629-15-3-32-1、STNCB2-28、红花大金元、Y3、Black Mommoth Small Stalk、革新3号、小白筋、Carifonia valle、筑波1号。种子播种于 162孔穴漂浮盘内，置日光温室内漂浮育苗。
1.3 接种方法
将腐殖土、沙、基质按 1∶1∶1的比例拌匀，经 160℃高温杀菌2 h，装盆。幼苗长至3~4片真叶时，移植于直径21 cm、高17 cm的塑料盆中，同时接种根结线虫，按5000个卵/盆将线虫卵悬浮液注入根部土壤。每盆 1 株，每品种/系10株，三个重复，以不接种根结线虫的相同品种/系作对照。接种后常规管理。
1.4 耐病性鉴定
1.4.1耐病性调查
接种后2个月，采摘每株烟的全部鲜烟叶，放入尼龙网袋，扎好袋口。称重，记录每一株烟叶的鲜重。将称重后的鲜烟叶，放置于烘箱中，恒温70℃烘烤。3天后取出烟叶，称重，记录每一株烟的干重数值。计算生物量的减少百分比。
生物量的减少百分比=未接种干物质含量百分比-接种后干物质含量百分比
1.4.2 耐病指标
根据生物量的减少百分比将品种的耐性划分为三级：耐病（N）: 生物量的减少百分比≦0；中耐（MN）: 0<生物量的减少百分比<3；不耐（NN）: 生物量的减少百分比≧3。
1.5 抗病性鉴定
1.5.1 抗病性调查
接种后2个月，拔出烟株，用自来水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病发病情况。
病害严重度分级标准按照 GB/T 23222—2008 的规定。以株为单位分级调查，分级标准为：0级：根部正常；1级：四分之一以下主根和侧根上有少量根结；3级：四分之一至三分之一主根和侧根上有少量根结；5级：三分之一至二分之一主根和侧根上有根结；7级：二分之一以上主根和侧根上有根结，少量次生根上有根结；9级：所有根上（包括次生根）长满根结。
根据病害严重度及对照品种的发病情况，确定病级并计算病指。
DI=∑（各病级植株数×该级数）/（调查总株数×最重病级数值）×100
1.5.2 抗病指标
根据感病对照达到感病时调查的各品种病指，将品种的抗性划分为四级：抗病（R）：病指25以下；中抗（MR）：病指在25.1-50；中感（MS）：病指在50.1-75；感病（S）：病指75以上。
2、结果
2.1不同烟草品种对爪哇根结线虫的耐病性
不同烟草品种对爪哇根结线虫的耐病性鉴定结果表明（表1），NC2326、SA1213、SA1214、SA1215、SA1223、SA1224耐病，CC37、云87、KRK26、K326、Kutsaga 51E、Kutsaga E1、Kutsage 110、BA629-15-3-32-1、STNCB2-28、红花大金元、Y3、Black Mommoth SmallStalk、Carifonia valle中度耐病，NC95、长脖黄、K346、革新3号、小白筋、筑波1号不耐病。
表1 不同烟草品种对爪哇根结线虫的耐病性
2.2 不同烟草品种对爪哇根结线虫的抗病性
不同烟草品种对爪哇根结线虫的抗病性鉴定结果表明（表2），CC37、SA1224抗病，NC95、SA1214、SA1215、SA1223、BA629-15-3-32-1、STNCB2-28、Y3中抗，SA1213、Carifoniavalle、筑波1号中感，长脖黄、K346、云87、KRK26、NC2326、K326、Kutsaga 51E、Kutsaga E1、Kutsage 110、红花大金元、Black Mommoth Small Stalk、革新3号、小白筋感病。
表2 不同烟草品种对爪哇根结线虫的抗病性
Claims (2)
1.一种爪哇根结线虫的抗病性和耐病性鉴定方法，其特征在于包括育苗、接种、耐病性鉴定、抗病性鉴定步骤，具体包括：
A、育苗：将烟草种子播种于漂浮盘内，置日光温室内漂浮育苗；
B、接种：待幼苗长至3~4片真叶时，将幼苗移植盆栽，盆栽是将幼苗移植于装有无菌土的盆栽容器中，无菌土是将质量配比1:1:1的腐殖土、沙和基质混匀杀菌得到；同时按5000个卵/盆将线虫卵悬浮液注入根部土壤来接种爪哇根结线虫，接种后常规管理；
C、耐病性鉴定：接种后1.5~2.5个月，采摘每株烟的全部鲜烟叶，记录每一株烟叶的鲜重，然后恒温70℃烘烤2~4天后称重，记录每一株烟的干重数值，计算生物量的减少百分比，根据生物量的减少百分比评价品种的耐病性；根据生物量的减少百分比将品种的耐性划分为三级：耐病（N），生物量的减少百分比≤0；中耐（MN），0＜生物量的减少百分比＜3；不耐（NN），生物量的减少百分比≥3；
D、抗病性鉴定：
a、抗病性调查：接种后1.5~2.5个月，拔出烟株，用水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病发病情况；
b、病害严重度分级：根据病害严重度及对照品种的发病情况，确定病级并计算病指，计算公式如下：
DI=∑（各病级植株数×该级数）/（调查总株数×最重病级数值）×100；
c、抗性评价：根据感病对照达到感病时调查的各品种病指，将品种的抗性划分为四级：抗病（R），病指25以下；中抗（MR），病指在25.1~50；中感（MS），病指在50.1~75；感病（S），病指75以上。
2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于所述杀菌是将无菌土经160℃高温杀菌1~3h。
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