CN107753544A - 一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用 - Google Patents

一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用，所述制备方法包括以下步骤：(1)将玛咖溶于溶剂中进行提取得到混合物；(2)将步骤(1)中混合物进行固液分离，得到上清液；(3)将步骤(2)中上清液装柱、酶解，而后进行柱分离，得到所述玛咖提取物；通过本发明制备方法制备得到的玛咖提取物，作为胰岛素抵抗改善剂，具有非常良好的改善效果，改善率一般可达到30～55％，并且通过酶解产生的效果，进一步提高了改善率，本发明制备的提取物无毒副作用、安全性高、成本廉价、可大规模产业化生产。

Description

一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和 应用
技术领域
本发明属于生化工程领域，涉及一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用。
背景技术
糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一种多病因的代谢性疾病群，主要与胰岛素产生和作用异常有关，可引起糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱，以血糖增高和尿糖为特征，进而导致多个系统、多个脏器损害的综合征，是人类患心脑血管疾病、致盲、截肢和肾衰的主要原因。目前已研制出多种新型降血糖化学药物应用于临床，如改善葡萄糖耐受性及胰岛素应答水平的胰岛素分泌促进剂(二肽基肽酶DPP-IV抑制剂)、改善葡萄糖代谢剂(双胍类药物)、可有效改善机体聚醇代谢，预防和延缓病症发生的醛糖还原酶抑制剂(吡咯啶环类物质)以及胰岛素增敏剂。其中胰岛素增敏剂已成为目前口服降糖药物的研发热点，可增加人体组织对胰岛素的敏感性，特别是α-葡萄糖苷酶抑制剂，如阿卡波糖，其作用机制为竞争性地抑制α-葡萄糖苷酶，在碳水化合物消化的最后一步抑制双糖降解为单糖，延缓碳水化合物在肠道的消化，延迟来自双糖、低聚糖及多糖的葡萄糖吸收，有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高的时间及进程，是糖尿病人常用的控制血糖的药物。
虽然现有抗糖尿病种类较多，疗效确切，可有效控制血糖，但均为化学药物，存在着作用途径单一，甚至具有严重的不良反应，如导致低血糖、乳酸酸中毒等，长期服用伴有药效降低的可能。
玛咖(Lepidium meyenii)，又名玛卡、秘鲁人参等，属于十字花科独行菜属一年生草本植物，玛咖含有多种化学成分，如氨基酸、维生素、黄酮类、多糖、生物碱、玛咖酰胺、芥子油苷等。玛咖营养丰富，具有重要的生理作用包括：消除疲劳、抗压力、提高免疫、缓解更年期综合征、抗前列腺增生、提高性功能等作用。
CN102836196A公开的一种玛咖提取物及其制备方法，选择无腐烂、无霉变、无肉眼可见外来杂质的玛咖，将干燥根进行细粉碎，粉碎粒度为能通过60～100目筛；粉碎后的原料投入提取罐中，加入重量比7～9倍量的50％～90％酒精溶液45～55℃循环提取2～5h，得提取液；提取液放入沉淀罐自然沉淀6～10h，取上清液进行真空抽滤，滤液用高速离心机以10000～40000r/min的转速离心；取离心液在40～55℃真空浓缩至相对密度1.0～1.3，在40～55℃干燥后得玛咖提取物。该方法制备的玛咖提取物胰岛素抵抗改善活性不高，抑制率较低；CN103519180A公开的玛咖提取物的制备方法：包括以下步骤：(1)玛咖提取液的制备；(2)玛咖提取液的预处理；(3)陶瓷膜过滤；(4)真空浓缩；(5)喷雾干燥得到的玛咖提取物，该方法制备的玛咖提取物作为胰岛素抵抗改善剂，胰岛素抵抗改善活性活性不高，抑制率较低。
目前还没有关于从玛咖中提取胰岛素抵抗改善剂的相关研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种玛咖提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将玛咖溶于溶剂中进行提取得到混合物；
(2)将步骤(1)中混合物进行固液分离，得到上清液；
(3)将步骤(2)中上清液装柱、酶解，而后进行柱分离，得到所述玛咖提取物。
在本发明中，通过上述制备方法制备得到的玛咖提取物，可作为胰岛素抵抗改善剂，具有非常良好的改善效果，改善率一般可达到30～55％，并且通过酶解产生的效果，进一步提高了玛咖提取物的改善效率。而在目前有关玛咖提取物的研究中，并没有通过使用本发明制备方法来提取玛咖的活性成分，而通过其他方法提取得到的玛咖提取物，几乎没有可以达到胰岛素抵抗改善剂的改善效果。
优选地，步骤(1)中所述玛咖为玛咖根和/或玛咖叶。
优选地，所述玛咖与溶剂的固液比为1:5～1:20，例如可以是1:5、1:6、1:8、1:10、1:15、1:18或1:20，进一步优选1:10。
优选地，步骤(1)中所述溶剂为水和/或醇。
优选地，所述醇的浓度为1～70％，例如可以是1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％，进一步优选50～70％。
优选地，所述醇为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或至少两种的组合。
优选地，步骤(1)中玛咖经过粉碎之后溶于溶剂中。
优选地，所述粉碎为将玛咖粉碎到20～60目，例如可以是20目、30目、40目、50目或60目，进一步优选40目。
优选地，步骤(1)中所述提取的方法为热水法、循环超声法或微波法中的任意一种。
在本发明中，热水提取法指的是用热水作为提取媒介，通过搅拌提供传质动力的方法；循环超声法是指用提取温度比热水提取低，通过超声和搅拌提供传质动力的方法；微波法指的是利用微波生热结合微波产生的微孔效应提高提取效率，进行提取的方法。
优选地，步骤(2)还包括将上清液进行浓缩。
优选地，所述浓缩的方法为真空减压浓缩或膜浓缩。
优选地，所述浓缩后的体积为浓缩前上清液体积的0.05～0.2倍，例如可以是0.05倍、0.08倍、0.1倍、0.13倍、0.15倍或0.2倍，进一步优选0.1倍。
优选地，所述热水法的提取温度为60～80℃，例如可以是60℃、64℃、65℃、70℃、75℃、78℃或80℃，进一步优选68～78℃，最优为70℃。
优选地，所述热水法的搅拌转速为800～1500rpm，例如可以是800rpm、1000rpm、1200rpm、1400rpm或1500rpm，进一步优选1000rpm。
优选地，所述热水法的提取时间为1～3h，例如可以是1h、2h或3h，进一步优选2h。
优选地，所述循环超声法的提取温度为25～35℃，例如可以是25℃、28℃、30℃、31℃、32℃或35℃，进一步优选30℃。
优选地，所述循环超声法的超声功率为1000～1500W，例如可以是1000W、1100W、1200W、1300W、1400W或1500W，进一步优选1200W。
优选地，所述循环超声法的搅拌转速为800～1500rpm，例如可以是800rpm、1000rpm、1200rpm、1300rpm或1500rpm，优选1000rpm。
优选地，所述循环超声法的提取时间为1～2.5h，例如可以是1h、1.2h、1.5h、2h、2.3h或2.5h，进一步优选2h。
优选地，所述循环超声法的占空比为1:1～1:3，例如可以是1:1、1:1.5、1:2、1:2.5或1:3，进一步优选1:1。
在超声波提取中，振子产生的超声波是间隙的，如占空比1:2，指的是间隙1秒，超声2秒，如此一直进行循环超声。
优选地，所述微波法的提取微波功率为1000～1500W，例如可以是1000W、1200W、1300W、1400W或1500W，进一步优选1200W。
优选地，所述微波法的提取时间为1～2h，例如可以是1h、1.2h、1.5h、1.6h、1.8h或2h，进一步优选1.5h。
步骤(3)中将上清液装柱后，柱分离前，需将上清液进行酶解。
优选地，所述酶解时使用的酶为硫酸酯酶和/或黑芥子酶。
在本发明中，硫酸酯酶和黑芥子酶都能够水解玛咖的芥子油苷，使其脱掉结构上的硫酸根，使得玛咖提取物产生更好的胰岛素抵抗改善效果。
优选地，所述酶解的温度为30～40℃，例如可以是30℃、32℃、34℃、36℃、38℃或40℃，进一步优选34～36℃，最优选35℃。
优选地，所述酶解的时间为10～20h，例如可以是10h、13h、15h、18h或20h，优选15～16h，最优选16h。
优选地，所述柱分离使用的分离填料为葡聚糖凝胶树脂。
优选地，所述葡聚糖凝胶树脂的型号为DEAE-Sephadex A-50或DEAE Sephadex A-25。
优选地，所述柱分离使用的层析柱径高比为1:8～1:20，例如可以是1:8、1:10、1:12、1:15、1:18或1:20，进一步优选1:10。
优选地，所述柱分离用水进行洗脱。
优选地，所述水的洗脱体积为2～6倍柱体积，例如可以是2倍柱体积、3倍柱体积、4倍柱体积、5倍柱体积或6倍柱体积，进一步优选3倍柱体积。
在本发明中，步骤(3)柱分离之后，将分离得到的洗脱液进行浓缩，干燥得到玛咖提取物。
其中干燥的方式为冷冻干燥、超声波干燥、真空脉动超声干燥、真空超声干燥、真空干燥或喷雾干燥中的任意一种。
在本发明中，由如上制备方法制备得到的玛咖提取物，可以加工为片剂、软胶囊。
本发明提供一种胰岛素抵抗改善剂，所述胰岛素抵抗改善剂包括如上所述的玛咖提取物的制备方法制备得到的玛咖提取物。
本发明提供一种胰岛素抵抗改善剂作为预防、抑制和治疗糖尿病及其并发症的药物制剂、保健食品和降血糖食品添加剂的应用。
在本发明中，治疗和预防糖尿病及其并发症的药物或者保健食品，可以与辅料混合形成各种形式的丸剂、散剂、片剂、膏剂，粉剂、水剂、颗粒剂、胶囊、注射剂等；保健食品形态可以是液体的比如像清凉饮料，碳酸饮料，调味品；作为添加剂，比如加入到面食类，果冻，冰淇淋，腌制品，火腿，点心等中。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
在本发明中，通过上述制备方法制备得到的玛咖提取物，作为胰岛素抵抗改善剂，具有非常良好的改善效果，改善率一般可达到30～55％并且，并且通过酶解产生的效果，进一步提高了玛咖提取物的改善效率。而在目前有关玛咖提取的研究中，并没有通过使用本发明制备方法来提取玛咖的活性成分，而通过其他方法提取得到的玛咖提取物，几乎没有胰岛素抵抗改善剂改善效果。
本发明创造性地为治疗糖尿病的药物制剂开辟一种新的原料，提供一种以玛咖为原料，制备玛咖提取物，可作为胰岛素抵抗改善剂应用于治疗糖尿病领域，该提取物无毒副作用、安全性高、成本廉价、可大规模产业化生产。
附图说明
图1是本发明实施例1-10及对比例1-2作为胰岛素抵抗改善剂的改善率对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
现有技术方法：使用Hep-G2肝细胞评价胰岛素抵抗，先用胰岛素以及地塞米松，黄嘌呤，诱导Hep-G2细胞产生胰岛素抵抗(细胞对葡萄糖的利用效率降低的模型)，实验中设置多组，模型组和样品组，通过比较样品组和模型组的葡萄糖利用效率，得出改善胰岛素抵抗的程度。在以下实施例中提到的“现有技术方法”均参照此法进行试验。
实施例1
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖根干燥后，粉碎到40目，准确称量100g；而后将玛咖粉与纯水，按照1:15固液比混合，置于热水中进行提取；提取条件为：温度80℃，搅拌速度800rpm，提取时间1h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.1倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:5，加入黑芥子酶30℃静置16h，用5倍柱体积水洗脱；收集洗脱液，使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为35.47％。
实施例2
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖根干燥后，粉碎到20目，准确称量100g；而后将玛咖粉与水，按照1:5固液比混合，置于热水中进行提取；提取条件为：温度60℃，搅拌速度1000rpm，提取时间2h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.2倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-50葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:1，加入硫酸酯酶35℃静置16h，用3倍柱体积水洗脱；收集洗脱液液使用喷雾干燥进行干燥。将收集液浓缩到固形物含量60％左右，进行喷雾干燥，得到玛咖提取物。其中，喷雾干燥的条件为：进风温度210℃，出风温度为90℃。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为40.41％。
实施例3
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖叶干燥后，粉碎到60目，准确称量100g；而后将玛咖粉与水，按照1:20固液比混合，置于微波提取器中进行提取；提取条件为：功率1000W，提取时间1h。提取结束后，固液分离，上清液进行膜浓缩；浓缩至原始提取液体积0.05倍；将浓缩液加入到DEAESephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:20，加入硫酸酯酶35℃静置12h，用5倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为35.51％。
实施例4
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖叶干燥后，粉碎到40目，准确称量100g；而后将玛咖粉与70％乙醇，按照1:15固液比混合，置于循环超声提取机中进行提取；提取条件为：温度为30℃，超声功率为1000W，循环转速为800rpm，占空比为1:3，提取时间为2.5h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.1倍；将浓缩液加入DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:16，加入硫酸酯酶30℃静置16h，用4倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为37.89％。
实施例5
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖根干燥后，粉碎到60目，准确称量100g；而后将玛咖粉与50％乙醇，按照1:10固液比混合，置于微波提取器中进行提取；提取条件为：功率为1500W，提取时间为2h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.1倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-50葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:10，加入黑芥子酶35℃静置16h，用4倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为49.76％。
实施例6
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖根干燥后，粉碎到40目，准确称量100g；而后将玛咖粉与70％甲醇，按照1:10固液比混合，置于循环超声提取机中进行提取；提取条件为：温度为35℃，超声功率为1500W，循环转速800rpm，占空比为1:1，提取时间2h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.1倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:12，加入硫酸酯酶35℃静置12h，用5倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为53.57％。
实施例7
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖根干燥后，粉碎到30目，准确称量100g；而后将玛咖粉与30％甲醇，按照1:15固液比混合，置于热水中进行提取；提取条件为：温度为75℃，搅拌转速1500rpm，提取时间3h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.125倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-50葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:4，加入硫酸酯酶35℃静置20h，用3倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用冷冻干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为51.18％。
实施例8
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖叶干燥后，粉碎到60目，准确称量100g；而后将玛咖粉与70％异丙，按照1:20固液比混合，置于循环超声提取机中进行提取；提取条件为：温度为25℃，超声功率为1000W，循环搅拌转速1500rpm，占空比为1:2，提取时间1.5h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.125倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:16，加入硫酸酯酶37℃静置10h，用4倍柱体积水洗脱；收集洗脱液，进行喷雾干燥，得到玛咖提取物，其中喷雾干燥的条件为：进风温度200℃，出风温度为90℃。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为52.88％。
实施例9
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖叶干燥后，粉碎到60目，准确称量100g；而后将玛咖粉与70％异丙，按照1:20固液比混合，置于循环超声提取机中进行提取；提取条件为：温度为30℃，超声功率为1200W，循环搅拌转速800rpm，占空比为1:1，提取时间2h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.125倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:2，加入硫酸酯酶37℃静置10h，用3倍柱体积水洗脱；收集洗脱液，进行喷雾干燥，得到玛咖提取物，其中喷雾干燥的条件为：进风温度205℃，出风温度为90℃。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为54.32％。
实施例10
本实施例通过以下方法制备玛咖提取物：
将玛咖叶干燥后，粉碎到60目，准确称量100g；而后将玛咖粉与1％异丙，按照1:10固液比混合，置于循环超声提取机中进行提取；提取条件为：温度为35℃，超声功率为1000W，循环搅拌转速1000rpm，占空比为1:1，提取时间1h。提取结束后，固液分离，上清液进行真空减压浓缩；浓缩至原始提取液体积0.1倍；将浓缩液加入到DEAE Sephadex A-50葡聚糖凝胶树脂层析柱中，径高比为1:18，加入硫酸酯酶40℃静置10h，用3倍柱体积水洗脱；收集洗脱液使用真空脉动干燥进行干燥，得到玛咖提取物。
取本实施例提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗实验，测得改善率为49.77％。
实施例11
玛卡提取物片剂的制备方法如下：
玛咖提取物片剂由以下质量的原料组成：玛咖提取物15g、柠檬酸1g、硬脂酸镁0.1g、淀粉5g、糊精10g。
具体方法为：按照配比称好各原料，配质量浓度为6％的柠檬酸水溶液；将提取物、淀粉、糊精混合，过40～60目筛，均质10～15min；将均质好的混合物加入柠檬酸水溶液中，搅拌过筛后，得到粗粒；将粗粒过10～20目筛，干燥，整粒；加入硬脂酸镁，混合均匀，压片，即得玛咖提取物片剂。
实施例12
玛咖提取物软胶囊的制备方法如下：
(1)制备软胶囊芯料液：玛咖提取提取物6份，桑叶提取物4份，分别过80目筛；搅拌混匀，过分体式胶体磨研磨～3次至内容物细致均匀，静置后抽真空至无气泡，真空度为-0.06～-0.08MPa，过80目筛，转入储料筒中即为软胶囊芯料液；
(2)制备软胶囊皮胶液：按比例将纯化水加入化胶罐中，加热至40～50℃时，加入明胶、甘油、二氧化钛，加盖密封，加热至65-75℃，搅拌成均匀的胶液，停止搅拌，抽真空排气泡，加压出胶，过120目筛，将胶液注入保温桶中55～65℃保温放置；
(3)制备软胶囊：采用旋转模压法：将制备好的软胶囊芯料液用输液管输送到软胶囊机的储料槽中，将制备好的软胶囊皮胶液用输液管输送到软胶囊机的储胶槽中55～65℃保温；开动软胶囊机，压制胶丸，控制每粒囊芯料液重0.5g；
(4)定型干燥：制备好的软胶囊滚动并自然吹风，使软胶囊初步定型和干燥；
(5)清洗软胶囊干燥：用乙醇洗涤初步定型和干燥的软胶囊，除去表皮残余的油液；控制干燥室的温度为20～40℃，控制室内相对湿度≤35％，待胶丸的柔软适度时，停止干燥；
(6)捡软胶囊：干燥后剔除异形软胶囊、有气泡或漏油胶囊即得玛咖提取物软胶囊。
对比例1
参照CN102836196A专利中实施例1方法制备玛咖提取物，检测其胰岛素抵抗改善活性
选择无腐烂、无霉变、无肉眼可见外来杂质的玛咖干燥根1kg，细粉碎至可通过60目筛；将粉碎后的原料投入沉淀罐自然沉淀6h，取上清液进行真空抽滤，滤液用高速离心机以10000r/min的转速离心；取离心液在0.02-0.08Mpa、40℃真空浓缩至相对密度为1.0，在40℃干燥后得到玛咖提取物。
取该提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗改善活性实验，测得改善率为12.42％。
对比例2
参照CN103519180A专利中实施例1方法制备玛咖提取物，检测其胰岛素抵抗改善活性
首先用逆流提取玛咖干根1kg，加入重量9倍的90％的乙醇，70℃下提取，得到玛咖提取液；将提取液离心，上清过0.09μm陶瓷膜，最后真空浓缩得到玛咖提取物。
取该提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为3mg/mL的玛咖提取物溶液，按照现有技术方法进行胰岛素抵抗改善活性实验，测得改善率为16.27％。
对比例3
与实施例1不同的是，本对比例不包括加入黑芥子酶30℃静置16h的步骤，其他条件、过程完全相同。得到的玛咖提取物按照现有技术方法进行胰岛素抵抗改善活性实验，测得改善率为25.38％。
将本发明中实施例1-10及对比1-2进行对比结果可以得出的结论是(具体对比结果图如图1所示)，本发明制备方法制备得到的玛咖提取物改善率明显高于对比例，效果明显优于其他方法。此外，通过实施例1与对比例3的对比发现，如果制备方法中缺少了酶解的步骤，制备出的玛咖提取物改善率也有所下降。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种玛咖提取物的制备方法及由其制备得到的玛咖提取物和应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种玛咖提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将玛咖溶于溶剂中进行提取得到混合物；
(2)将步骤(1)中混合物进行固液分离，得到上清液；
(3)将步骤(2)中上清液装柱、酶解，而后进行柱分离，得到所述玛咖提取物。
2.根据权利要求1所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述玛咖为玛咖根和/或玛咖叶；
优选地，所述玛咖与溶剂的固液比为1:5～1:20；
优选地，步骤(1)中所述溶剂为水和/或醇；
优选地，所述醇的浓度为1～70％；
优选地，所述醇为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1或2所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中玛咖经过粉碎之后溶于溶剂中；
优选地，所述粉碎为将玛咖粉碎到20～60目。
4.根据权利要求1-3任一项所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取的方法为热水法、循环超声法或微波法中的任意一种；
优选地，步骤(2)还包括将上清液进行浓缩；
优选地，所述浓缩的方法为真空减压浓缩或膜浓缩；
优选地，所述浓缩后的体积为浓缩前上清液体积的0.05～0.2倍。
5.根据权利要求4所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，所述热水法的提取温度为60～80℃；
优选地，所述热水法的搅拌转速为800～1500rpm；
优选地，所述热水法的提取时间为1～3h。
6.根据权利要求4所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，所述循环超声法的提取温度为25～35℃；
优选地，所述循环超声法的超声功率为1000～1500W；
优选地，所述循环超声法的搅拌转速为800～1500rpm；
优选地，所述循环超声法的提取时间为1～2.5h；
优选地，所述循环超声法的占空比为1:1～1:3。
7.根据权利要求4所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，所述微波法的提取微波功率为1000～1500W；
优选地，所述微波法的提取时间为1～2h。
8.根据权利要求1-7任一项所述的玛咖提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述酶解时使用的酶为硫酸酯酶和/或黑芥子酶；
优选地，所述酶解的温度为30～40℃；
优选地，所述酶解的时间为10～20h；
优选地，所述柱分离使用的分离填料为葡聚糖凝胶树脂；
优选地，所述葡聚糖凝胶树脂的型号为DEAE Sephadex A-50或DEAESephadex A-25；
优选地，所述柱分离使用的层析柱径高比为1:8～1:20；
优选地，所述柱分离用水进行洗脱；
优选地，所述水的洗脱体积为2～6倍柱体积。
9.一种胰岛素抵抗改善剂，其特征在于，所述胰岛素抵抗改善剂包括如权利要求1-8中任一项所述的玛咖提取物的制备方法制备得到的玛咖提取物。
10.根据权利要求9所述的胰岛素抵抗改善剂作为预防、抑制和治疗糖尿病及其并发症的药物制剂、保健食品和降血糖食品添加剂的应用。
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