CN107727794A - 叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法及其评价方法 - Google Patents

叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法及其评价方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法，包括：(1)蚕豆种子培育；(2)对蚕豆幼苗叶片进行分组；(3)配制不同浓度京尼平苷水溶液对蚕豆幼苗进行喷施处理；本发明还公开了一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的评价方法，对蚕豆幼苗可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、叶绿素含量和鲜干重及水含量活性生理指标进行测定。

Description

叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法及其评价方法
技术领域
本发明属于植物培育技术领域，特别涉及一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法及其评价方法。
背景技术
京尼平苷是一种易溶于水的环烯醚萜葡糖糖苷，其主要存在于栀子、杜仲等植物中，其性质活泼，能发挥多种药理作用。研究发现，京尼平苷对各类疾病疗效显著，对作物增产也有明显地促进作用，可以提高扦插植物的成活率。
蚕豆又叫做胡豆、佛豆等，属豆科一年生草本植物。目前，蚕豆种植遍布世界各个区域。据了解，中国是种植蚕豆面积最广的国家，大多数国家以种植饲料用蚕豆居多，作为粮用和菜用的蚕豆种植比较少。中国西北地区主要是栽培粮用和菜用蚕豆，其他地方栽培面积较小。蚕豆的用处除了作为粮、菜外，同时它的植株还是很好的肥料，其用作肥料效果良好，且无化学污染，对改良土壤肥力和培育地力均具有良好的效果。
蚕豆籽粒具有丰富的营养，是豆类中的高蛋白豆种。蚕豆中富含蛋白质，其蛋白质中氨基酸种类也比较多，而且维生素含量丰富，是一种十分理想的蔬菜。蚕豆不但富含营养物质，还具有重要的药用价值，其茎、叶、花和种皮均可入药，有健脾利湿作用，而且可以降压止血和治疗水肿。另外，蚕豆籽粒内富含蛋白质、淀粉和维生素等，可以开发和加工出多种豆类制品。
京尼平苷具有一系列药理学作用，具有很强的生理活性，对扦插生根与作物增产有明显地促进作用，可以帮助很多的不易生根植物生根，并提高扦插成活率。将京尼平苷应用在小麦、黄瓜等农作物生产试验中，增产效果明显，京尼平苷对玉米幼苗的理化指标也有很好的促进作用，但京尼平苷对蚕豆的影响及作用机理尚未见报道，因此，这也成为我们研究的方向之一。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法，可以填补通过喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的技术空白，还能够解决现有技术中关于喷施京尼平苷促进植物生长的喷施过程和喷施量的问题。
一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法，包括：
步骤1：蚕豆种子消毒浸种后播种在装有营养土的花盆进行培育；
步骤2：蚕豆长出三片幼苗时将其按长势进行分组；
步骤3：配制不同浓度京尼平苷水溶液对蚕豆幼苗进行喷施处理；
所述步骤3中的京尼平苷水溶液的浓度分别为0、1、10、50、100mg/L；
所述步骤2中将蚕豆幼苗按长势分为5组；
所述步骤3中对蚕豆幼苗进行喷施处理为每隔6天进行一次，一共3次。
本发明还提供一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的评价方法。
一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的评价方法，包括：以蚕豆幼苗为实验材料，用5种不同浓度的京尼平苷水溶液即0、1、10、50、100mg/L喷施蚕豆幼苗叶片，并对可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、叶绿素含量和鲜干重及水含量活性生理指标进行测定；
进一步地，所述可溶性糖含量的测定包括：
a.取50mg磨碎后的蚕豆幼苗干叶片于刻度离心管中；
b.再加入80％的乙醇4mL，放入水浴锅中不断搅拌，离心，收集上清液；
c.残渣加2mL80％乙醇重复提2次，合并上清液；
d.在上清液中加少量活性炭脱色数分钟，再用80％的乙醇定容至10mL，收集其滤液测定，制作标准曲线；
e.吸取糖提取液1mL，加入5mL蒽酮试剂混合，在630nm处测得OD值，再通过标准曲线计算样品中的糖含量；
进一步地，所述可溶性蛋白含量的测定包括：
a.绘制标准曲线：在试管中分别加入蛋白质标准溶液2mL，浓度依次为0、20、40、60、80、100mg·L-1，然后在各试管中分别加入2mL考马斯亮蓝溶液，摇匀，放置5min，在595nm波长处测得OD值；
b.样品提取：取2g蚕豆叶片加水3ml研磨成浆，转入10ml离心管中，离心后把上清液转入25ml容量瓶中定容；
c.测定：在试管中取样品提取液2ml，加入考马斯亮蓝混匀后，放置5min，在吸光度为595nm处测定样品溶液的OD值，然后从标准曲线查得蛋白质质量浓度，或者根据线性方程式计算；
进一步地，所述叶绿素含量的测定包括：
a.取新鲜的除去叶脉后的蚕豆叶片0.5g，撕碎放入研钵中，加80％丙酮少量研磨成匀浆；
b.将匀浆转入离心管并用80％丙酮洗涤研钵，全部转入离心管，离心后滤掉沉淀；
c.上清液用80％丙酮定容至20mL，再取色素提取液1mL，加4mL 80％丙酮稀释后转入比色杯中；
d.测定663nm，645nm处的OD值，再根据公式计算提取液中各叶绿素的浓度，最后根据稀释倍数求出叶绿素的含量。
进一步地，所述对鲜干重及水含量的测定包括：
a.先用电子天平称量不同京尼平苷浓度处理下的新鲜蚕豆叶，并分别记录各组的鲜重m1；
b.再将各组叶片分别摊开放在报纸上然后放入烘箱，在100℃烘箱中过夜；
c.称量各组蚕豆叶片的干重m2，记录数据，再计算出它们5组的水含量。
本发明还提供了一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法及其评价方法的应用。
一种按照前述方法在促进蚕豆幼苗生长中的应用，其特征在于，京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性糖含量最高；京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性蛋白含量最高；京尼平苷水溶液浓度为0mg/L时，可溶性蛋白含量最低；京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的叶绿素含量最高。
附图说明
图1为本发明实施例中不同浓度京尼平苷对蚕豆幼苗可溶性糖含量的影响示意图；
图2为本发明实施例中不同浓度京尼平苷对蚕豆幼苗可溶性蛋白含量的影响示意图；
图3为本发明实施例中不同浓度京尼平苷对蚕豆幼苗叶片叶绿素含量的影响示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明技术方案进行详细描述。
一、实验方法
2017年3月13日将蚕豆种子消毒浸种后播种在装有营养土的花盆里，放置在阳光和空气充足的地方，每天浇适量的水，每隔一段时间用适量营养液浇灌，促进其生长。当蚕豆长出三片幼苗时，将其按长势分成株树相同的五组，每组大概有30株幼苗，各组保持一定的距离，然后用事先配置好的浓度分别为0、1、10、50、100mg/L的京尼平苷水溶液喷施处理，每隔6天进行一次处理，一共喷施处理3次，之后测定其各项生理指标。
二、实验设计
测定蚕豆幼苗可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、叶绿素含量、以及鲜干重和水含量这5个参数且对所得结论进行分析。本实施例实验分为五组，分别用浓度0mg/L、1mg/L、10mg/L、50mg/L和100mg/L的京尼平苷水溶液对蚕豆幼苗叶片的喷施处理。
(1)可溶性糖含量的测定：
a.取50mg磨碎后的蚕豆幼苗干叶片于刻度离心管中；
b.再加入80％的乙醇4mL，放入水浴锅中不断搅拌，离心，收集上清液；
c.残渣加2mL80％乙醇重复提2次，合并上清液；
d.在上清液中加少量活性炭脱色数分钟，再用80％的乙醇定容至10mL，收集其滤液测定，制作标准曲线；
e.吸取糖提取液1mL，加入5mL蒽酮试剂混合，在630nm处测得OD值，再通过标准曲线计算样品中的糖含量。
(2)可溶性蛋白含量的测定：
a.绘制标准曲线：在试管中分别加入蛋白质标准溶液2mL，浓度依次为0、20、40、60、80、100mg·L-1，然后在各试管中分别加入2mL考马斯亮蓝溶液，摇匀，放置5min，在595nm波长处测得OD值；
b.样品提取：取2g蚕豆叶片加水3ml研磨成浆，转入10ml离心管中，离心后把上清液转入25ml容量瓶中定容；
c.测定：在试管中取样品提取液2ml，加入考马斯亮蓝混匀后，放置5min，在吸光度为595nm处测定样品溶液的OD值，然后从标准曲线查得蛋白质质量浓度，或者根据线性方程式计算。
(3)叶绿素含量的测定：
a.取新鲜的除去叶脉后的蚕豆叶片0.5g，撕碎放入研钵中，加80％丙酮少量研磨成匀浆；
b.将匀浆转入离心管并用80％丙酮洗涤研钵，全部转入离心管，离心后滤掉沉淀；
c.上清液用80％丙酮定容至20mL，再取色素提取液1mL，加4mL 80％丙酮稀释后转入比色杯中；
d.测定663nm，645nm处的OD值，再根据公式计算提取液中各叶绿素的浓度，最后根据稀释倍数求出叶绿素的含量。
(4)鲜干重及水含量的测定：
a.先用电子天平称量不同京尼平苷浓度处理下的新鲜蚕豆叶，并分别记录各组的鲜重m1；
b.再将各组叶片分别摊开放在报纸上然后放入烘箱，在100℃烘箱中过夜；
c.称量各组蚕豆叶片的干重m2，记录数据，再计算出它们5组的水含量。
三、实验结果分析
(1)京尼平苷对蚕豆幼苗叶片可溶性糖含量的影响如图1所示：京尼平苷溶液浓度为0mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性糖含量最低；京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性糖含量最高，比对照组提高了23％；随着京尼平苷浓度的升高，可溶性糖含量逐渐降低，在100mg/L时可溶性糖含量比对照组增加了14％，这说明低浓度的京尼平苷有利于叶片内可溶性糖含量的积累，而高浓度的京尼平苷则没有显著地促进作用。
(2)京尼平苷对蚕豆幼苗叶片可溶性蛋白含量的影响如图2所示：不同浓度的京尼平苷对蚕豆幼苗可溶性蛋白含量相比于对照组均有促进作用，其中在0mg/L时的可溶性蛋白含量最低，在浓度为10mg/L时的可溶性蛋白含量最高，促进效果最为显著，之后随着京尼平苷浓度的逐渐增大可溶性蛋白含量会逐渐呈下降趋势。京尼平苷浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗叶片可溶性蛋白含量比对照组增加了46％，说明低浓度的京尼平苷对蚕豆幼苗可溶性蛋白含量有显著的促进作用；京尼平苷浓度为1mg/L和50mg/L时，其对蚕豆幼苗叶片可溶性蛋白含量的影响差不多，并且都是明显的促进效应，在浓度为100mg/L时的促进效果不太显著。整个影响趋势呈先升高而后降低，且有一个最高值。
(3)京尼平苷对蚕豆幼苗叶片叶绿素含量的影响如图3所示：不同浓度的京尼平苷对蚕豆幼苗叶片叶绿素含量均有不同程度的升高，其中叶绿素a含量呈先上升后降低的趋势，且它的峰值是10mg/L，其后随着京尼平苷浓度的升高，它的叶绿素a含量逐渐降低，甚至出现了抑制现象，其值稍低于对照组；叶绿素b含量也有一定的上升趋势，但是曲线很平缓，其在50mg/L时的含量相比其他组稍多一点，但不明显；叶绿素a+b的含量有明显的上升和下降趋势，在对照组时为最低值，在10mg/L时达到最高值，可见京尼平苷对叶绿素a+b的含量有显著的促进作用，在其他浓度时均有促进作用，但是在100mg/L时的促进作用不显著。
上述内容仅为本发明的较佳实施例。本领域技术人员会理解，本发明不限于这里所述的特定实施例，对本领域技术人员来说能够进行各种明显的变化、重新调整和替代而不会脱离本发明的保护范围。因此，虽然通过以上实施例对本发明进行了较为详细的说明，但是本发明不仅仅限于以上实施例，在不脱离本发明构思的情况下，还可以包括更多其它等效实施例，而本发明的范围由所附的权利要求范围决定。

Claims (10)

1.一种叶面喷施京尼平苷促进蚕豆幼苗生长的方法，包括：
步骤1：蚕豆种子消毒浸种后播种在装有营养土的花盆进行培育；
步骤2：蚕豆长出三片幼苗时将其按长势进行分组；
步骤3：配制不同浓度京尼平苷水溶液对蚕豆幼苗进行喷施处理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，优选的，所述步骤3中的京尼平苷水溶液的浓度分别为0、1、10、50、100mg/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中将蚕豆幼苗按长势分为5组。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中对蚕豆幼苗进行喷施处理为每隔6天进行一次，一共3次。
5.一种按照权利要求1-4任一项所述方法培植的蚕豆幼苗进行生长指标评价的方法，包括：以蚕豆幼苗为实验材料，用5种不同浓度的京尼平苷水溶液即0、1、10、50、100mg/L喷施蚕豆幼苗叶片，并对可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、叶绿素含量和鲜干重及水含量活性生理指标进行测定。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述可溶性糖含量的测定包括：
a.取50mg磨碎后的蚕豆幼苗干叶片于刻度离心管中；
b.再加入80％的乙醇4mL，放入水浴锅中不断搅拌，离心，收集上清液；
c.残渣加2mL80％乙醇重复提2次，合并上清液；
d.在上清液中加少量活性炭脱色数分钟，再用80％的乙醇定容至10mL，收集其滤液测定，制作标准曲线；
e.吸取糖提取液1mL，加入5mL蒽酮试剂混合，在630nm处测得OD值，再通过标准曲线计算样品中的糖含量。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述可溶性蛋白含量的测定包括：
a.绘制标准曲线：在试管中分别加入蛋白质标准溶液2mL，浓度依次为0、20、40、60、80、100mg·L-1，然后在各试管中分别加入2mL考马斯亮蓝溶液，摇匀，放置5min，在595nm波长处测得OD值；
b.样品提取：取2g蚕豆叶片加水3ml研磨成浆，转入10ml离心管中，离心后把上清液转入25ml容量瓶中定容；
c.测定：在试管中取样品提取液2ml，加入考马斯亮蓝混匀后，放置5min，在吸光度为595nm处测定样品溶液的OD值，然后从标准曲线查得蛋白质质量浓度，或者根据线性方程式计算。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述叶绿素含量的测定包括：
a.取新鲜的除去叶脉后的蚕豆叶片0.5g，撕碎放入研钵中，加80％丙酮少量研磨成匀浆；
b.将匀浆转入离心管并用80％丙酮洗涤研钵，全部转入离心管，离心后滤掉沉淀；
c.上清液用80％丙酮定容至20mL，再取色素提取液1mL，加4mL 80％丙酮稀释后转入比色杯中；
d.测定663nm，645nm处的OD值，再根据公式计算提取液中各叶绿素的浓度，最后根据稀释倍数求出叶绿素的含量。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述对鲜干重及水含量的测定包括：
a.先用电子天平称量不同京尼平苷浓度处理下的新鲜蚕豆叶，并分别记录各组的鲜重m1；
b.再将各组叶片分别摊开放在报纸上然后放入烘箱，在100℃烘箱中过夜；
c.称量各组蚕豆叶片的干重m2，记录数据，再计算出它们5组的水含量。
10.一种按照权利要求1-8任一项所述方法在促进蚕豆幼苗生长中的应用，其特征在于，京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性糖含量最高；京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的可溶性蛋白含量最高；京尼平苷水溶液浓度为0mg/L时，可溶性蛋白含量最低；京尼平苷水溶液浓度为10mg/L时，蚕豆幼苗的叶绿素含量最高。
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