CN107723243A - 藻类培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及藻类培养方法。本发明方法主要包括配置培养浓缩物、初级培养、次级培养和三级培养等步骤，首先制备了培养浓缩物，方便使用，使藻类能够在任何地方培养，并且该营养浓缩物的配方合理，能够满足水产养殖所需的藻类植物的营养需求，该培养浓缩物配置而成的营养液在回收后还能继续使用，节约资源，结合其他初级培养、次级培养和三级培养步骤，本方法能够最大限度减少藻类培养期间的污染，使藻类大量快速的繁殖，培养5天后藻类浓度达到1.5×1010cells/ml，培养周期比传统方法快两倍以上。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及藻类培养方法。
背景技术
藻类是水产养殖中中要的组成部分，藻类不仅是养殖鱼虾贝类幼苗的重要饵料生物，同时还可起到水质调节的作用，在水产养殖中扮演着十分重要的角色，在维持养殖系统多样性、物质循环和能量传递方面发挥着重要的作用。
目前藻类培养依然存在不足之处，例如在培养液方面，采用过滤海水制成，成本较高，过程较为繁琐，适用性不广，往往需要针对不同的藻类进行配方调整；而在培养方法方面，由于培养流程不合理，导致培养周期长，藻类易受污染，资源浪费等情况。
发明内容
针对以上现有技术的不足之处，本发明提供藻类培养方法。
本发明采取的技术方案如下：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为55～80g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类接种入培养瓶中，接种密度为180～230×103cell/mL，通入8％～12％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度1～2h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持5～6h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH7～10；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为130～150g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶6～7的体积比接种到10L培养罐中，通入10％～13％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶6～7的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为170～190g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25～70的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集。
优选的，所述培养浓缩物的制备方法为：取氯化钠110～120g、硫酸镁35～40g、钼酸铵0.3～0.8g、磷酸一氢钠1.2～1.7g、柠檬酸铁0.6～0.9g、氯化锰0.4～0.8g、L-苏糖酸钙加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物。
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优选的，所述步骤S5为：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
优选的，所述藻类包括微拟球藻、角毛藻、杜氏盐藻、卡德藻、扁藻、三角褐指藻、新月菱形藻。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供藻类培养方法，首先制备了培养浓缩物，方便使用，使藻类能够在任何地方培养，并且该营养浓缩物的配方合理，能够满足水产养殖所需的藻类植物的营养需求，该培养浓缩物配置而成的营养液在回收后还能继续使用，节约资源，结合其他初级培养、次级培养和三级培养步骤，本方法能够最大限度减少藻类培养期间的污染，使藻类大量快速的繁殖，培养5天后藻类浓度达到1.5×1010cells/ml，满足水产养殖的需求。
附图说明
图1：本发明实施例1中藻类从第一天至第五天的生长效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚，但本发明的保护范围不限于以下实施例。
实施例1：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠120g、硫酸镁36g、六氯化二铝1g、钼酸氨0.4g、磷酸一氢钠1.5g、柠檬酸铁0.7g、氯化锰0.5g、L-苏糖酸钙3g、硒酸酯多糖2g、止痢草细粉6g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物。
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为80g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如微拟球藻)接种入培养瓶中，接种密度为230×103cell/mL，通入12％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度2h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持6h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH10；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为150g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶6的体积比接种到10L培养罐中，通入10％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶7的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为170g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶70的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集:加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
实施例2：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠120g、硫酸镁40g、钼酸铵0.8g、磷酸一氢钠1.2g、柠檬酸铁0.6g、氯化锰0.4g、L-苏糖酸钙1g、硒酸酯多糖3g、止痢草细粉5g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为55g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如杜氏盐藻)接种入培养瓶中，接种密度为230×103cell/mL，通入8％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度2h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持6h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH 7；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为130g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶7的体积比接种到10L培养罐中通入13％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第4天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶7的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为170g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶70的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
实施例3：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠110g、硫酸镁40g、钼酸铵0.8g、磷酸一氢钠1.7g、柠檬酸铁0.9g、氯化锰0.4g、L-苏糖酸钙3.5g、硒酸酯多糖3g、止痢草细粉8g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为80g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如角毛藻)接种入培养瓶中，接种密度为180×103cell/mL，通入12％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度2h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持5h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH 7；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为130g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶7的体积比接种到10L培养罐中，通入13％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶7的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为170g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
实施例4：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠120g、硫酸镁35g、钼酸铵0.4g、磷酸一氢钠1.3g、柠檬酸铁0.7g、氯化锰0.5g、L-苏糖酸钙2g、硒酸酯多糖2g、止痢草细粉5g加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为60g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如卡德藻和扁藻)接种入培养瓶中，接种密度为200×103cell/mL，通入10％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度1h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持5h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH 8；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为140g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶6的体积比接种到10L培养罐中，通入13％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第5天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶6的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为190g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶50的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
对比例1：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠80g、硫酸镁20g、钼酸铵0.2g、磷酸一氢钠0.8g、柠檬酸铁0.4g、氯化锰0.2g、L-苏糖酸钙0.9g、硒酸酯多糖1g、止痢草细粉4g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为50g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如微拟球藻)接种入培养瓶中，接种密度为150×103cell/mL，通入5％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度0.5h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持3h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH5；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为100g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶5的体积比接种到10L培养罐中，通入7％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶5的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为150g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
对比例2：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物：取氯化钠150g、硫酸镁50g、钼酸铵1.2g、磷酸一氢钠2.0g、柠檬酸铁1.5g、氯化锰1.5g、L-苏糖酸钙4g、硒酸酯多糖4g、止痢草细粉10g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为90g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如微拟球藻)接种入培养瓶中，接种密度为250×103cell/mL，通入15％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度4h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持8h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH 11；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为160g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶8的体积比接种到10L培养罐中，通入15％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶10的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为210g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
对比例3：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：配置人工海水：采用Mocledon人工海水配方，即取氯化钠26.726g、氯化镁2.26g、硫酸镁3.248g、氯化钙1.153g、碳酸氢钙0.198g、氯化钾0.721g、溴化钠0.058g、硼酸0.058g、硅酸钠(Na2SiO3)0.0024g、硅酸钠(Na2Si4O9)0.0015g、磷酸0.002g、六氯化二铝0.013g、氨0.002g、硝酸锂0.0013g，加水至1L，即得；
S2～S5：与实施例1相同，区别在于，将初级培养液、次级培养液、三级培养液替换为步骤S1中所述的人工海水。
对比例4：
藻类培养方法，包括以下步骤：
S1：与实施例1相同；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为50g/L的培养营养液，置于培养瓶中，将藻类(如微拟球藻)接种入培养瓶中，室温条件培养；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为50g/L的培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶5的体积比接种到20L培养罐中；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为50g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25的体积比接种到1000L养殖池中；
S5：藻类收集：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
实验例：
监测实施例1～实施例4、对比例1～对比例4的藻类的扩繁情况，结果如下表所示。
结果表明，采用本发明的培养浓缩物及培养方法，藻类实现指数增长，在培养至第五天后，藻液的浓度达到了1.0～1.5×1010cells/ml，而对比例中藻液的浓度仅为1.3×107cells/ml以内，本发明方案培养的藻液繁殖速度明显高于对比例。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。
Claims (5)
1.藻类培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配置藻类浓缩物；
S2：初级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为55～80g/L的初级培养营养液，置于培养瓶中，将藻类接种入培养瓶中，接种密度为180～230×103cell/mL，通入8％～12％的CO2，3500±500Lux条件下摇瓶培养，缓慢加温，使得水温在1h内从室温升至45℃，保持此温度1～2h，然后缓慢降温至室温；在室温情况下加入冰块使藻类培养瓶中的水缓慢降温至0℃，维持5～6h，更换初级培养营养液，使养殖池中的水恢复至室温，用盐酸或氢氧化钠调节pH7～10；
S3：次级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为130～150g/L的次级培养营养液，将一级培养的藻液与次级培养营养液按1∶6～7的体积比接种到10L培养罐中，通入10％～13％的CO2和臭氧施的混合气体，室温，4000±500Lux条件下培养，培养到第4～6天，浓缩藻液，将浓缩后的藻液与次级培养营养液按1∶6～7的体积比转接到20L培养罐中培养；
S4：三级培养：取培养浓缩物，加水配置成浓度为170～190g/L的三级培养营养液，将次级培养的藻液与三级培养营养液按1∶25～70的体积比接种到1000L养殖池中培养；
S5：藻类收集。
2.根据权利要求1所述的藻类培养方法，其特征在于，所述培养浓缩物的制备方法为：取氯化钠110～120g、硫酸镁35～40g、钼酸铵0.3～0.8g、磷酸一氢钠1.2～1.7g、柠檬酸铁0.6～0.9g、氯化锰0.4～0.8g、L-苏糖酸钙1.0～3.5g、硒酸酯多糖2～3g、止痢草细粉5～8g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物。
3.根据权利要求2所述的藻类培养方法，其特征在于，所述培养浓缩物的制备方法为：取氯化钠120g、硫酸镁36g、六氯化二铝1g、钼酸氨0.4g、磷酸一氢钠1.5g、柠檬酸铁0.7g、氯化锰0.5g、L-苏糖酸钙3g、硒酸酯多糖2g、止痢草细粉6g，加水制成1L的溶液，浓缩，即得培养浓缩物。
4.根据权利要求1所述的藻类培养方法，其特征在于，所述步骤S5为：加入无机絮凝剂后进行离心浓缩，收集。
5.根据权利要求1所述的藻类培养方法，其特征在于，所述藻类包括微拟球藻、角毛藻、杜氏盐藻、卡德藻、扁藻、三角褐指藻、新月菱形藻。
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| 刘海娟等: ""单胞藻扩大培养技术的研究进展"", 《科技创新导报》 * |
| 孙成渤等: ""单胞藻的生产性培养技术"", 《水产科学》 * |
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