CN107722139A - 一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于透明质酸钠生产的技术领域，具体为一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法。通过不同的助滤剂、过滤装置，进行4次过滤、脱色，透光率达标后进行沉淀制粉，制得透明质酸钠，所得产物分子量8‑100万。可缩短生产时间，减少酒精使用量，减少酒精回收能耗，并且收率提高，成本降低。
Description
技术领域
本发明属于透明质酸钠生产的技术领域，具体为一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法。
背景技术
透明质酸钠， 英文名称：Sodium hyaluronate，还可以叫做透明质酸钠、玻璃酸钠、玻尿酸钠、糖醛酸钠。为从鸡冠中提取的物质，也可通过乳酸球菌发酵制得，为白色或类白色颗粒或粉末，无臭味，干燥时，氮含量为2.8%-4.0%，葡糖醛酸含量为37.0%-51.0%。在化妆品领域中使用较多，有保湿作用。
在之前的生产工艺中，发酵罐培养后的物料，通过醇沉淀和脱水得到透明质酸钠粗品，该透明质酸钠粗品都需要溶解解离后进行多次过滤，还需要膜过滤后得到合格的滤液，最后经乙醇沉淀，沉淀干燥即得到透明质酸钠。在已有的制备方法中，需要大量的酒精和水，生产周期长为72小时，回收酒精还需要能量消耗，另外还需要采用膜过滤，成本高，整体制备工艺步骤繁琐。
发明内容
本发明的目的在于针对之前生产工艺中工艺步骤复杂，酒精和水用量多，能耗大，生产周期长等问题，提供了一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，通过不同的助滤剂、过滤装置，进行4次过滤、脱色，透光率达标后进行沉淀制粉，制得透明质酸钠，所得产物分子量8-100万。可缩短生产时间，减少酒精使用量，减少酒精回收能耗，并且收率提高，成本降低。
本发明的技术方案为：
一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，具体步骤如下：
（1）发酵液预处理：将三氯乙酸溶于纯化水，配置成浓度为质量体积浓度为20%（w/v）的溶液，将三氯乙酸溶液分批加入发酵液中，边搅拌边添加，充分搅拌30-45分钟，检测pH值，直至料液pH在5.5-6，继续搅拌30-40分钟，待用；
（2）预处理后的发酵液升温到40-50℃，按照25-35g/L的量添加氯化钠，然后按照10~50g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10~30g/L的量添加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时；
（3）板框式压滤机采用2#珍珠岩预涂，选用9#滤布，对步骤（2）得到的料液初级过滤；
（4）用体积百分比浓度为20%（v/v）的盐酸溶液调节初级过滤后的滤液pH=4.0-5.0，按照10-30g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10~30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行二次过滤，滤布选用80目常规滤布；
（5）用质量百分比浓度30%（w/v）的氢氧化钠溶液调节滤液pH=8.0-9.0，按照10-30g/L的量添加注射级活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行三次过滤，滤布选用80目常规滤布；
（6）用体积百分比浓度为20%（v/v）盐酸溶液调节滤液pH=7，向滤液中缓慢加入95%乙醇，至溶液乙醇浓度为72-77%，边加边搅拌，进行絮沉，静置4小时后，弃上清液，沉淀物用95%乙醇洗脱3次；
（7）沉淀物30~75℃干燥即可。
本发明的特点还有：
所述的活性炭为工业用4级。
步骤（4）和（5）的活性炭为注射级活性炭。
步骤（1）中发酵液中醛酸含量为4-5g/l。
作为优选，步骤（2）中，预处理后的发酵液升温到45℃，氯化钠添加量为30g/L，活性炭添加量为30g/L，硅藻土添加量为20g/L。
作为优选，步骤（4）中，活性炭添加量为20g/L，硅藻土添加量为20g/L。
作为优选，步骤（5）中，活性炭添加量为20g/L，硅藻土添加量为20g/L。
氯化钠的添加量为25-35g/L，指的是每升料液添加氯化钠25-35g，关于活性炭、硅藻土的添加量含义相同。
本发明的有益效果为：
（1）对预处理的发酵液通过不同介质的过滤后，直接进行醇沉制粉，沉淀物干燥后即可得到透明质酸钠，省时省力。
（2）该方法不需要对发酵液进行絮沉、溶解，可节约酒精、水的使用量，还减少酒精回收的耗能量。
（3）该方法无需经过膜过滤，减少过滤膜的使用。
总之，本发明的制备方法，通过不同的助滤剂、不同型号的过滤装置，进行4次过滤、脱色，透光率达标后进行沉淀制粉，制得透明质酸钠，所得产物分子量8-100万。可缩短生产时间，减少酒精使用量，减少酒精回收能耗，并且收率提高，成本降低。
1、氯化钠、硅藻土、活性炭、PH值在工艺过程中的作用。
（1）氯化钠：加入氯化钠有助于产品的醇沉，试验结果见表1。
表1 氯化钠用量与结果列表
（2）活性炭：步骤（2）中活性炭作为脱色剂，添加量多后，活性炭自身造成的滤液颜色加深不易去除，加少脱色效果差。实验中选择了添加剂量为10-50g/L ，进行滤液颜色比对，添加量为30g/L时，效果最佳。
步骤（4-5）中活性炭作为脱色剂，实验中选择了添加剂量为10-30g/L ，进行滤液颜色比对，添加量为20g/L时，效果最佳。
（3）pH值：调节溶液pH后进行过滤，为了去除不同等电点的蛋白质。
（4）硅藻土：硅藻土是助滤剂，其添加量决定了过滤的速度。添加过多，过滤速度慢，添加少，过滤不彻底，过滤液透光率不达标。
按照过滤面积、滤室大小、结合过滤的速度和滤液的透光度确定硅藻土的使用量。
表2 硅藻土用量与结果列表
| 硅藻土添加量 | 试验结果 |
| 10g/L | 目测：滤饼厚度薄，过滤液浑浊。 |
| 20g/L | 滤饼结实，干燥，过滤液透光率大于99%。 |
| 30g/L | 滤饼厚但不成形，内含有大量料液，过滤1小时后，过滤速度严重下降，多次拆洗板框，过滤速度仍然很慢，为了避免长时间过滤造成对产品质量的影响，停止过滤。过滤液目测不达标，未进行检测。 |
根据结果硅藻土选择20g/L添加量为宜。
表3 本发明得到的透明质酸钠质量参数表
| 生产周期 | 产品主要指标 | 收率 |
| 60h | 醛酸46.61，蛋白质0.025，透光率99.7%，分子量：100万 | 95.65% |
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细的说明。
目前对于制备透明质酸钠的发酵液的制备步骤如下：斜面菌种→摇瓶种子→种子罐培养→发酵罐培养合格后得到发酵液。采用常规的制备步骤即可，本领域的技术人员均能实施。
实施例1
一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，具体步骤如下：
（1）发酵液预处理：将三氯乙酸溶于纯化水，配置成浓度为质量体积浓度为20%（w/v）的溶液，将三氯乙酸溶液分批加入发酵液中，边搅拌边添加，充分搅拌30分钟，检测pH值，直至料液pH在5.5，继续搅拌30分钟，待用，发酵液中醛酸含量为4-5g/l；
（2）预处理后的发酵液升温到50℃，按照32g/L的量添加氯化钠，然后按照10g/L的量添加活性炭脱色除杂，所述的活性炭为工业用4级，充分搅拌30分钟后，按照10g/L的量添加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时；
（3）板框式压滤机采用2#珍珠岩预涂，选用9#滤布，对步骤（2）得到的料液初级过滤；
（4）用体积百分比浓度为20%（v/v）的盐酸溶液调节初级过滤后的滤液pH=4.0-5.0，按照10g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行二次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（5）用质量百分比浓度30%（w/v）的氢氧化钠溶液调节滤液pH=8.0-9.0，按照10g/L的量添加注射级活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行三次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（6）用体积百分比浓度为20%（v/v）盐酸溶液调节滤液pH=7，向滤液中缓慢加入95%乙醇，至溶液乙醇浓度为72-77%，边加边搅拌，进行絮沉，静置4小时后，弃上清液，沉淀物用95%乙醇洗脱3次；
（7）沉淀物30-75℃干燥即可。
实施例2
一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，具体步骤如下：
（1）发酵液预处理：将三氯乙酸溶于纯化水，配置成浓度为质量体积浓度为20%（w/v）的溶液，将三氯乙酸溶液分批加入发酵液中，边搅拌边添加，充分搅拌45分钟，检测pH值，直至料液pH在6，继续搅拌40分钟，待用，发酵液中醛酸含量为4-5g/l；
（2）预处理后的发酵液升温到40-50℃，按照28g/L的量添加氯化钠，然后按照10-50g/L的量添加活性炭脱色除杂，所述的活性炭为工业用4级，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量添加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时；
（3）板框式压滤机采用2#珍珠岩预涂，选用9#滤布，对步骤（2）得到的料液初级过滤；
（4）用体积百分比浓度为20%（v/v）的盐酸溶液调节初级过滤后的滤液pH=4.0-5.0，按照10-30g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行二次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（5）用质量百分比浓度30%（w/v）的氢氧化钠溶液调节滤液pH=8.0-9.0，按照10-30g/L的量添加注射级活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行三次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（6）用体积百分比浓度为20%（v/v）盐酸溶液调节滤液pH=7，向滤液中缓慢加入95%乙醇，至溶液乙醇浓度为72-77%，边加边搅拌，进行絮沉，静置4小时后，弃上清液，沉淀物用95%乙醇洗脱3次；
（7）沉淀物30-75℃干燥即可。
实施例3
一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，具体步骤如下：
（1）发酵液预处理：将三氯乙酸溶于纯化水，配置成浓度为质量体积浓度为20%（w/v）的溶液，将三氯乙酸溶液分批加入发酵液中，边搅拌边添加，充分搅拌35分钟，检测pH值，直至料液pH在6，继续搅拌35分钟，待用，发酵液中醛酸含量为4-5g/l；
（2）预处理后的发酵液升温到45℃，按照30g/L的量添加氯化钠，然后按照10-50g/L的量添加活性炭脱色除杂，所述的活性炭为工业用4级，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量添加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时；
（3）板框式压滤机采用2#珍珠岩预涂，选用9#滤布，对步骤（2）得到的料液初级过滤；
（4）用体积百分比浓度为20%（v/v）的盐酸溶液调节初级过滤后的滤液pH=4.0-5.0，按照10-30g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行二次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（5）用质量百分比浓度30%（w/v）的氢氧化钠溶液调节滤液pH=8.0-9.0，按照10-30g/L的量添加注射级活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行三次过滤，滤布选用80目常规滤布，活性炭为注射级活性炭；
（6）用体积百分比浓度为20%（v/v）盐酸溶液调节滤液pH=7，向滤液中缓慢加入95%乙醇，至溶液乙醇浓度为72-77%，边加边搅拌，进行絮沉，静置4小时后，弃上清液，沉淀物用95%乙醇洗脱3次；
（7）沉淀物30-75℃干燥即可。
表4 实施例1-3获得的产品的质量参数对比表
| 生产周期 | 产品主要指标 | 收率 | |
| 实施例1 | 61h | 醛酸44.32，蛋白质0.085，透光率99.4%，分子量：80万，产品堆积密度0.69g/cm3 | 90.20% |
| 实施例2 | 62h | 醛酸46.61，蛋白质0.037，透光率99.7%，分子量：98万, 产品堆积密度0.325g/cm3 | 95.5% |
| 实施例3 | 60h | 醛酸46.61，蛋白质0.025，透光率99.9%，分子量：100万,产品堆积密度0.43g/cm3 | 95.65% |
Claims (7)
1.一种发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，具体步骤如下：
（1）发酵液预处理：将三氯乙酸溶于纯化水，配置成浓度为质量体积浓度为20%（w/v）的溶液，将三氯乙酸溶液分批加入发酵液中，边搅拌边添加，充分搅拌30-45分钟，检测pH值，直至料液pH在5.5-6，继续搅拌30-40分钟，待用；
（2）预处理后的发酵液升温到40-50℃，按照25-35g/L的量添加氯化钠，然后按照10-50g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量添加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时；
（3）板框式压滤机采用2#珍珠岩预涂，选用9#滤布，对步骤（2）得到的料液初级过滤；
（4）用体积百分比浓度为20%（v/v）的盐酸溶液调节初级过滤后的滤液pH=4.0-5.0，按照10-30g/L的量添加活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行二次过滤，滤布选用80目常规滤布；
（5）用质量百分比浓度30%（w/v）的氢氧化钠溶液调节滤液pH=8.0-9.0，按照10-30g/L的量添加注射级活性炭脱色除杂，充分搅拌30分钟后，按照10-30g/L的量加硅藻土，继续加热至50-60℃后，保温2-3小时后进行三次过滤，滤布选用80目常规滤布；
（6）用体积百分比浓度为20%（v/v）盐酸溶液调节滤液pH=7，向滤液中缓慢加入95%乙醇，至溶液乙醇浓度为72-77%，边加边搅拌，进行絮沉，静置4小时后，弃上清液，沉淀物用95%乙醇洗脱3次；
（7）沉淀物30-75℃干燥即可。
2.根据权利要求1所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，步骤（2）中，预处理后的发酵液升温到45℃，氯化钠添加量为30g/L，活性炭添加量为30g/L，硅藻土添加量为20g/L。
3.根据权利要求1或2所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，步骤（4）中，活性炭添加量为20g/L，硅藻土添加量为20g/L。
4.根据权利要求1或2所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，步骤（5）中，活性炭添加量为20g/L，硅藻土添加量为20g/L。
5.根据权利要求1所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，所述的活性炭为工业用4级。
6.根据权利要求1所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，步骤（4）和（5）的活性炭为注射级活性炭。
7.根据权利要求1所述的发酵液分级过滤快速制备透明质酸钠的方法，其特征在于，步骤（1）中发酵液中醛酸含量为4-5g/l。
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