CN107714716A - 黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织保护药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明基于实验手段考察了黑灵芝多糖对丙烯酰胺致肝、脾、肾脏损伤的保护作用。具体来看，口服黑灵芝多糖可提升肝、脾、肾脏组织中的抗氧化酶活性、降低过氧化物MDA含量；同时可恢复因丙烯酰胺所致的肝脏谷草转氨酶、谷丙转氨酶升高现象；还可降低肾脏组织中尿素氮、肌酐水平，恢复肾小球滤过能力。此外，本发明还发现黑灵芝多糖对丙烯酰胺所造成的炎症性损伤具有确切的缓解作用，并进一步确认其药理作用是通过下调促炎细胞因子IL‑1β、IL‑6、TNF‑α的表达量、同时上调抗炎细胞因子IL‑10的表达量实现的。基于黑灵芝多糖的以上新性质，本发明确定了利用其制备由丙烯酰胺所致肝、脾、肾脏损伤保护药物的新用途，其疗效确切，具有良好的应用前景。

Description

黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或 肾脏组织保护药物的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，进一步涉及物质的新的医药用途，具体涉及黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织保护药物的应用。

背景技术

丙烯酰胺(acrylamide，AA)是人们广泛接触的一种重要工业化合物，最初作为合成聚丙烯酰胺的化学单体，广泛应用于污水处理、造纸工业、医药、农药和染料等多种行业，是环境中潜在的有毒污染物。现有技术研究表明，丙烯酰胺具有多种毒性，其中包括神经毒性、遗传毒性、发育毒性、雄性生殖毒性等。丙烯酰胺可通过多种途径被人体吸收，其中经消化道吸收最快，在体内各组织广泛分布，包括肝脏、肾脏、脾脏、甲状腺、睾丸、乳腺、骨髓等在内的器官均可检出丙烯酰胺或其代谢产物。

作用于上述器官后，丙烯酰胺可影响氧化还原酶活性，同时促进活性氧自由基大量生成，导致广泛的脂质过氧化现象，进而造成氧化性损伤；此外，丙烯酰胺可致肝功能异常，以谷草转氨酶、谷丙转氨酶评价其含量出现异常升高；同时，还可影响肾小球滤过功能，导致尿素氮、肌酐升高，出现肾功能不全失代偿期的若干症状；另一方面，丙烯酰胺可导致广泛的炎症性损伤，并伴随着淋巴细胞亚群及细胞因子表达水平的变化。

黑灵芝多糖是多孔菌科灵芝属黑灵芝真菌菌丝体的次生代谢产物，存在于黑灵芝的菌丝体和子实体中。现有技术研究表明，黑灵芝多糖具有抗氧化作用和抗肿瘤活性，然而对于肝、脾、肾脏等器官，尤其是丙烯酰胺致损伤条件下的器官保护作用，现有技术中未见披露。

发明内容

本发明要解决的一个技术问题是提供黑灵芝多糖的一种新用途。

本发明要解决的另一技术问题是提供可对由丙烯酰胺所致的肝、脾或肾脏损伤起到保护作用的药物。

本发明要解决的再一技术问题是对丙烯酰胺作用下的肝脏氧化性损伤实现治疗作用。

本发明要解决的又一技术问题是对丙烯酰胺作用下的肝脏炎症性损伤实现治疗作用。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织保护药物的应用。

作为优选，所述保护是缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤。

作为优选，所述组织是肝脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低肝脏组织中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性实现的。

作为优选，所述组织是肾脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低肾脏组织中抗氧化酶SOD、CAT活性实现的。

作为优选，所述组织是脾脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低脾脏组织中抗氧化酶SOD、GSH-Px活性实现的。

作为优选，所述药物还降低丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝脏组织中谷草转氨酶、谷丙转氨酶含量。

作为优选，所述药物还降低丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肾脏组织中尿素氮、肌酐含量。

作为优选，所述保护是缓解由丙烯酰胺所致的炎症性损伤。

作为优选，所述组织是肝脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的炎症性损伤，是通过降低细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量、同时提升细胞因子IL-10的表达量实现的。

作为优选，所述药物的剂型是口服剂。

作为优选，所述药物还降低丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织中过氧化产物MDA的含量。

作为优选，所述药物的有效计量为20mg/kg。

在以上技术方案中，所述“丙烯酰胺损伤条件下”，是指由丙烯酰胺作用于哺乳动物肝、脾或肾脏而导致其发生病理损伤的过程中。所述黑灵芝多糖是指以黑灵芝菌丝体或子实体为原料，经常规的灵芝多糖提取手段提取得到的多糖；其中所述常规提取手段，可以是以下步骤：干燥的黑灵芝子实体粉碎到适合的粒度，用95％乙醇室温下搅拌48h脱脂，加入蒸馏水，100℃下提取2h，过滤，浓缩，过滤。滤液加入乙醇4℃下沉淀多糖(加入4倍于多糖水溶液的乙醇)，醇沉后，4000×g下离心20min，Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1)去除游离蛋白，透析，浓缩，冻干，得精多糖；当然，在以上技术思路的指引下，采用其他常规提取手段得到的黑灵芝多糖亦可用于本发明。

本发明提供了黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织保护药物的应用。在该技术方案中，首先利用灌药的方式造模，以所得的丙烯酰胺染毒模型动物为实验对象，分别考察了口服黑灵芝多糖对其肝、脾、肾脏的干预作用。具体来看，黑灵芝多糖可显著提升肝、脾、肾脏组织中的抗氧化酶活性，使其接近空白对照组的自然水平；同时以MDA含量评价其脂质过氧化现象亦得到明显缓解。此外，黑灵芝多糖干预条件下因丙烯酰胺毒性所致的谷草转氨酶、谷丙转氨酶升高现象得到恢复；而肾脏组织中尿素氮、肌酐等含量也降低至自然水平，这表明肝功能和肾小球滤过能力得到了恢复。同时，本发明还发现黑灵芝多糖对丙烯酰胺所造成的炎症性损伤具有确切的缓解作用，并进一步确认其药理作用是通过下调促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量、同时上调抗炎细胞因子IL-10的表达量实现的。

基于黑灵芝多糖的以上新性质，本发明确定了利用其制备由丙烯酰胺所致肝、脾、肾脏损伤保护药物的新用途，其疗效全面优于常规的丙烯酰胺毒性损伤保护药物N-乙酰半胱氨酸，且安全无毒副作用，具有良好的应用前景。

附图说明

图1是本发明具体实施方式中实验分组情况及流程图。

图2黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织形态学变化的影响；图中CON为空白对照组，AA为AA染毒模型组(20mg/kg浓度的AA水溶液灌胃处理组)；NAC为N-乙酰半胱氨酸阳性对照组(对AA染毒模型动物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃处理组)。

图3黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠脾组织形态学变化的影响；图中CON为空白对照组，AA为AA染毒模型组(20mg/kg浓度的AA水溶液灌胃造模)；NAC为N-乙酰半胱氨酸阳性对照组(对AA染毒模型动物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃处理组)。

图4黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肾组织形态学变化的影响；图中CON为空白对照组，AA为AA染毒模型组(20mg/kg浓度的AA水溶液灌胃处理组)；NAC为N-乙酰半胱氨酸阳性对照组(对AA染毒模型动物以200mg/kg的N-乙酰半胱氨酸灌胃处理组)。

图5是本发明具体实施方式中不同实验组之间肝脏组织抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性对比图。

图6是本发明具体实施方式中不同实验组之间肝脏组织过氧化产物MDA含量对比图。

图7是本发明具体实施方式中不同实验组之间肾脏组织抗氧化酶SOD、CAT活性对比图。

图8是本发明具体实施方式中不同实验组之间肾脏组织过氧化产物MDA含量对比图。

图9是本发明具体实施方式中不同实验组之间脾脏组织抗氧化酶GSH-Px、SOD活性对比图。

图10是本发明具体实施方式中不同实验组之间脾脏组织过氧化产物MDA含量对比图。

图11是本发明具体实施方式中不同实验组之间肝脏谷草转氨酶、谷丙转氨酶含量对比图。

图12是本发明具体实施方式中不同实验组之间肾脏尿素氮、肌酐含量对比图。

图13是本发明具体实施方式中不同实验组之间肝脏组织促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量对比图。

图14是本发明具体实施方式中不同实验组之间肝脏组织抗炎细胞因子IL-10的含量对比图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

1、材料与方法

1.1材料与试剂

黑灵芝采自江西赣州赣南灵芝基地，黑灵芝多糖由本实验室自制，黑灵芝多糖的分离纯化采用标准程序对黑灵芝多糖进行分离。干燥的黑灵芝子实体粉碎到适合的粒度，用95％乙醇室温下搅拌48h脱脂，加入蒸馏水，100℃下提取2h，过滤，浓缩，过滤。滤液加入乙醇4℃下沉淀多糖(加入4倍于多糖水溶液的乙醇)，醇沉后，4000×g下离心20min，Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1)去除游离蛋白，透析，浓缩，冻干，得精多糖。

超氧化物歧化酶测定试剂盒(SOD)、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒(GSH-Px)、丙二醛测定试剂盒(MDA)及BCA蛋白浓度测定试剂盒均购买于碧云天生物技术研究或者南京建成生物工程研究所。大鼠IL-6和IL-10ELISA试剂盒购自于武汉博士德公司，IL-Iβ、TNF-α、IL-6、IL-10ELISA试剂盒购自于南京建成生物工程研究所。谷草转氨酶(AST)试剂盒、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒、尿素氮(BUN)试剂盒、肌酐(CR)试剂盒、均购买于南京建成生物工程研究所。

实验动物：清洁级大鼠Sprague Dawley(SD)雄性大鼠，体重160-180g(资格证号)，购自于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.2主要仪器设备

高速台式离心机德国Sigma公司；全波长扫描式多功能读数仪(多功能酶标仪)美国Thermo公司；超纯水仪美国Millipore公司；生化培养箱上海森信实验仪器公司。

2、实验方法

2.1动物实验设计

健康成年雄性SD大鼠56只，体重(160±180)g，大鼠在12h：12h明暗循环的动物房内适应性饲养1周。然后将小鼠随机分为7组，每组8只，灌胃给药：1组为正常对照组，给同体积生理盐水；2组为AA染毒模型组，AA水溶液(20mg/kg bw)；3组为阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组，N-acetyl-L-cysteine，NAC：200mg/kg bw)；4-6组为毒性抑制组，分别在染毒AA水溶液中同时添加黑灵芝多糖低剂量(50mg/kg bw)、中剂量(100mg/kg bw)、高剂量(200mg/kg bw)；7组为高剂量多糖组(200mg/kg bw)。正常对照组给予等体积的生理盐水，2-6组在给予相应药物半小时候后，口腔灌胃AA水溶液，每天一次，连续30d，最后一次给药24h后处死动物，进行各相关指标的测定。动物实验流程如图1所示。

动物实验过程中选用的N-乙酰半胱氨酸是一种常用的抗氧化剂，N-乙酰半胱氨酸已经有大量文献报道，能够有效的减弱丙烯酰胺所导致的机体损伤，提高机体内的抗氧化防御能力等，因此本实验选用N-乙酰半胱氨酸作为阳性对照组是合适的。

2.2大鼠处理及样品的收集

大鼠处理及血清的制备：最后一次给药24h后，用4％的水合氯醛(1ml/100g)进行麻醉，用摘眼球取血法取大鼠外周血，放置室温待血清分层后，以4000r/min，4℃冷冻离心10min，吸取上层血清部分，4℃条件下备用。

解剖分离收集肝、脾、肾组织。并用生理盐水清洗，放置于EP管中，放于-80℃备用。

用于制作肝、脾、肾组织切片：取适量组织，在冰冷生理盐水中漂洗净后，于2.5％戊二醛-多聚甲醛中固定；其余肝、脾、肾组织放置于EP管中，放于-80℃备用。

2.3肝、脾、肾组织切片材料的准备及形态学的观察

按石蜡切片的常规制作方法：经固定-冲洗-脱水-透明-浸蜡-包埋-切片-固定-染色(脱蜡-染色-脱水)-封片-观察记录结果。光镜下观察组织形态学变化。

肝、脾、肾组织切片的制作：

(1)固定：大鼠解剖后，迅速取出肝、脾、肾组织，截取5cn左右的组织，注意不能人为损伤组织，并小心去除粘附的结缔组织，将取出的肝、脾、肾组织立即投入装有4％多聚甲醛的EP管中，固定5h后在横切面切口，利于组织内部固定，后再固定24h。

(2)脱水：将组织依次从低浓度酒精投入到高浓度酒精。具体为85％酒精2h，95％酒精Ⅰ1.5h，95％酒精Ⅱ2h，100％酒精Ⅰ1.5h，100％酒精Ⅱ1h。

(3)透明、浸蜡：将组织置于二甲苯中25min使组织透明，后移入石蜡内，于60℃孵箱3h。

(4)包埋、切片：将石蜡加热溶解后倒入长条纸盒内，浸蜡组织放于纸盒中央，应注意应切面朝下，位置正放，待石蜡变成固体状；于切片机上切成3μm的切片后，放入温水中，使切片平整无褶皱；将平整的切片小心移于载玻片上，放在40℃孵箱24h以烘干。

(5)石蜡切片脱蜡入水：将有切片的载玻片放入二甲苯Ⅰ(56℃)20min，二甲苯Ⅱ(56℃)20min，然后置于梯度酒精：100％酒精3min，95％酒精3min，85％酒精3min，70％酒精3min，自来水冲洗5min，蒸馏水漂洗5min。

(6)染色：将载玻片放入苏木精溶液中5min，过蒸馏水；饱和碳酸锂10～20s，自来水洗数秒；盐酸酒精分化2～3s，自来水冲洗数秒。

(7)石蜡脱水、透明及封片：将载玻片放入梯度酒精以脱水：95％酒精Ⅰ3min，95％酒精Ⅱ3min，95％酒精Ⅲ3min，100％酒精Ⅰ3min，100％酒精Ⅱ3min，100％酒精Ⅲ3min，然后放入二甲苯以透明：二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min，中性树脂胶封片。

(8)显微镜观察组织病理变化。

2.4肝、脾、肾组织中氧化与损伤相关指标的测定

氧化损伤指标：超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。按试剂盒说明书上的操作步骤进行检测和计算。

2.5肝组织中免疫指标的测定

用预冷的生理盐水或者PBS(0.01M，pH7.0-7.4)冲洗组织，去除残余血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按照1：9的重量体积比)加入组织匀浆器中，于冰上充分研磨，最后将匀浆液于4000×g离心15min，取上清检测。上清液可分装保存-80℃备用。免疫功能指标：IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α；均采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测。按照说明书上的操作步骤进行检测和计算。

2.7肝损伤指标的测定

谷草转氨酶(AST)试剂盒、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒。按说明书上的操作步骤进行检测和计算。

2.7肾损伤指标的测定

尿素氮(BUN)试剂盒、肌酐(CR)试剂盒。按说明书上的操作步骤进行检测和计算。

2.8统计学处理

实验数据采用平均值±标准偏差(means±S.D)表示，组间均数比较采用SPSS16.0统计软件，Graph Pad Prism 6作图，以单因素方差分析和Turkey’s多因素t检验进行。

3、结果与分析

3.1光镜下观察肝、肾、脾组织形态学变化

3.1.1黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织形态学变化的影响如图2所示。

经检测得，空白组对照组的大鼠肝组织形态正常，无异常状态，肝小叶结构完整，无细胞破裂、自溶或坏死等。与空白组相比，AA染毒组中组织病理结果显示肝组织出现严重病变。炎细胞浸润现象严重，肝小叶排列素乱，而且肝细胞肿胀严重甚至出现成片坏死现象，胞浆稀松，肝细胞之间边缘模糊的现象，以上病变特征表明造模实验有效，实验动物已处于丙烯酰胺致肝脏损伤状态。阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组)和黑灵芝多糖处理组病理结果表明能够对AA造成组织病变起到明显的改善作用，其中黑灵芝多糖不同剂量组病理切片与模型组相比，肝组织病变情况得到很好地改善，具体表现为：肝细胞未见明显病理症状，肝细胞排列正常，结构完整。结果表明黑灵芝多糖能够有效改善AA造成肝损伤的组织损伤。

3.1.2黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠脾组织形态学变化的影响如图3所示。

经检测得，空白组对照组的大鼠脾组织形态正常，无异常状态。与空白组相比，AA染毒组中组织病理结果显示脾组织结构受损，出现细胞坏死症状，尤其是白髓中央出现坏死，脾小体萎缩的比较严重，以上病变特征表明造模实验有效，实验动物已处于丙烯酰胺致脾脏损伤状态。阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组)和黑灵芝多糖处理组病理结果表明能够对AA造成组织病变起到明显的改善作用，其中黑灵芝多糖低高剂量组(50、200mg/kg bodyweight)病理切片与模型组相比，脾组织病变情况得到很好地改善。组织结构较完整，细胞形态无明显变异。

3.1.3黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肾组织形态学变化的影响如图4所示。

经检测得，空白组对照组可观察到肾组织结构完整，肾小管及肾小球的结构清楚、正常及肿胀坏死脱落的上皮细胞，无异常状态。与空白组相比，AA染毒组中组织病理结果显示大鼠肾脏组织可观察到典型的肾损伤，如肾小管扩张、小管上皮细胞崩溃脱落、细胞排列絮乱，以上病变特征表明造模实验有效，实验动物已处于丙烯酰胺致肾脏损伤状态。阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组)和黑灵芝多糖处理组病理结果表明能够对AA造成组织病变起到明显的改善作用，肾脏损伤程度有所减轻，能够降低肾小管上皮细胞的空泡数量及坏死明显改善，细胞排列整齐，肾小球和肾小管基本能够维持正常结构。

3.2黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝、肾、脾脏组织抗氧化酶活性(SOD、GSH-Px、CAT)和过氧化产物MDA含量的影响

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织抗氧化酶活性(SOD、CAT、GSH-Px)的影响如图5所示。

经检测得，阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组)和黑灵芝多糖处理组结果比较得出，肝SOD、CAT、GSH-Px显著性差异，与染毒模型组相比，阳性对照组和黑灵芝多糖处理组中SOD、CAT、GSH-Px的活力均有所升高，与染毒组相比，具有明显的显著性差异。而黑灵芝多糖单独处理组(200mg/kg body weight)中抗氧化物酶：SOD、CAT、GSH-Px与正常组相比，无明显的显著性差异，可以说明，黑灵芝多糖单独处理时，对机体内的抗氧化防御系统无损伤、对机体无毒害作用。

不同实验组中肝脏组织过氧化产物MDA含量的对比情况见图6。

结果发现，丙烯酰胺染毒组中，过氧化产物MDA的含量明显高于正常对照组，且具有显著性的差异，从阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸组)和黑灵芝多糖处理组的结果发现，不同浓度的黑灵芝多糖均能够明显降低机体内MDA的含量，随着黑灵芝多糖浓度的升高，机体内MDA含量逐渐降低，具有浓度依赖性。

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肾脏组织抗氧化酶活性(SOD、CAT)的影响如图7所示。不同实验组中肾脏组织过氧化产物MDA含量的对比情况见图8。

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠脾脏组织抗氧化酶活性(SOD、GSH-Px)的影响如图9所示。不同实验组中脾脏组织过氧化产物MDA含量的对比情况见图10。

结果发现，与其在肝脏组织中实验结果相类似，黑灵芝多糖可显著提升模型动物肾脏、脾脏中抗氧化酶的活性，同时降低其过氧化产物MDA的含量。

3.3黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量的影响

黑灵芝多糖对肝组织中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量的影响如图11所示。与染毒模型组相比，阳性对照组和不同浓度的黑灵芝多糖保护组检测得AST、ALT含量均明显的降低。

3.4黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肾组织中尿素氮(BUN)、肌酐(CR)含量的影响

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肾组织尿素氮(BUN)、肌酐(CR)含量的影响如图12所示。与染毒模型组相比，阳性对照组和不同浓度的黑灵芝多糖保护组检测得BUN、CR含量均明显的降低，具有显著性差异。同时，从图中可以发现，低浓度黑灵芝多糖组中BUN、CR的含量最低。

3.5黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织免疫因子的影响

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响如图13所示。与染毒模型组相比，黑灵芝多糖对体内炎症因子具有下调作用，使用不同浓度黑灵芝多糖处理的实验组大鼠其体内肝组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量均有所降低，尤其是对促炎细胞因子IL-1β、TNF-α的作用显著。从图13结果可以发现，口服不同浓度的黑灵芝多糖均可以有效的缓解丙烯酰胺所导致的炎症临床症状，黑灵芝多糖能够抑制丙烯酰胺诱导的大鼠肝组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达，对其细胞因子的分泌的一直作用均具有显著性。

黑灵芝多糖对AA染毒模型大鼠肝组织中抗炎因子IL-10含量的影响如图14所示。黑灵芝多糖能够抑制丙烯酰胺诱导的大鼠肝脏组织中抗炎细胞因子IL-10的表达，对其细胞因子的分泌的一直作用均具有显著性。能够上调抗炎细胞因子IL-10的表达。

4、实验结论

黑灵芝多糖可显著提升肝、脾、肾脏组织中的抗氧化酶活性，使其接近空白对照组的自然水平；同时以MDA含量评价其脂质过氧化现象亦得到明显缓解。此外，黑灵芝多糖干预条件下因丙烯酰胺毒性所致的谷草转氨酶、谷丙转氨酶升高现象得到恢复；而肾脏组织中尿素氮、肌酐等含量也降低至自然水平，这表明肝功能和肾小球滤过能力得到了恢复。同时，本发明还发现黑灵芝多糖对丙烯酰胺所造成的炎症性损伤具有确切的缓解作用，并进一步确认其药理作用是通过下调促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量、同时上调抗炎细胞因子IL-10的表达量实现的。基于以上药理作用，可利用黑灵芝多糖以口服给药的方式对由丙烯酰胺所造成的肝、脾、肾脏损伤实现治疗作用。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.黑灵芝多糖用于制备丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝、脾或肾脏组织保护药物的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述保护是缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述组织是肝脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低肝脏组织中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性实现的。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述组织是肾脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低肾脏组织中抗氧化酶SOD、CAT活性实现的。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述组织是脾脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的氧化性损伤，是通过降低脾脏组织中抗氧化酶SOD、GSH-Px活性实现的。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物还降低丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肝脏组织中谷草转氨酶、谷丙转氨酶含量。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物还降低丙烯酰胺损伤条件下哺乳动物肾脏组织中尿素氮、肌酐含量。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述保护是缓解由丙烯酰胺所致的炎症性损伤。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述组织是肝脏组织；所述缓解由丙烯酰胺所致的炎症性损伤，是通过降低细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量、同时提升细胞因子IL-10的表达量实现的。

10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物的剂型是口服剂。