CN107693779A - 一种祛疤组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种祛疤组合物，其包含以下质量百分比的成分：六聚肽2～8％、五矿肽2～8％、硫辛酸1～4％、白花丹素0.05～1％、肌醇1～4％、复合生物活性因子纳米脂质体2～6％、0.01～1.0％(m/v)的防腐剂和辅料70～80％。所述的祛疤组合物可显著增强基质金属蛋白酶的活性，促进其对堆积的Ⅰ型胶原的降解，并显著减少纤维连接蛋白的表达，降低成纤维细胞密度，减缓瘢痕的生成，降低瘢痕增生指数，显示较佳的祛疤效果；同时临床数据显示，所述的祛疤组合物对增生性疤痕志愿患者同样具有较佳的疗效，治愈率达96.7％。

Description

一种祛疤组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及疤痕修复技术领域，具体涉及一种祛疤组合物及其制备方法。
背景技术
疤痕是由外伤引起的增生性病变，其组织是由胶原纤维和基质、成纤维细胞及局部粘多糖沉积所形成，其形成过程包括炎症、细胞迁移/增殖和细胞外基质的沉积等不同阶段，临床表现为皮肤外形受损变形和不同程度的功能障碍。根据疤痕形成原因和症状的不同，可分为浅表性疤痕、肥大性疤痕、萎缩性疤痕、挛缩性疤痕、凹陷性疤痕、疼痛性疤痕和疤痕疙瘩。目前对于疤痕形成的机制目前尚未完全清楚，一般认为是创伤修复中成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制，细胞外基质中胶原的合成与降解失衡，相关的细胞因子的表达异常等构成了疤痕形成的生物学基础。
随着生活质量的提高，人们对于影响皮肤美观的疤痕的修复越来越关注，继而有效的祛疤治疗方法成为了临床和美容界关注的热点。对于疤痕，西医一般采用手术、磨皮术、胶原蛋白注射术、类固醇注射术、激光、放射电疗、硅胶贴、冷冻等。这些不仅达不到满意的效果，而且还可能产生许多不良后果。一般来说，手术切除或磨削，复发率很高，因为手术后总是会留下疤痕；而激光封闭往往疼痛难忍，并出现多种并发症，多年后甚至可能引发皮肤癌；至于各种注射术又可能会产生色素变化，加深皮肤的颜色，引发微血管增生，令皮肤下陷。
中医对疤痕的治疗，主要是软化疤痕，促其成熟，尽快稳定，改善组织吸收功能，达到疤痕削平，或者重新使凹陷性疤痕组织破坏开放，使组织去旧生新，生长肌肉，收口愈合凹洞长平，表面光滑。已公开用于治疗疤痕的天然植物成分主要有芦荟提取物、白藜芦醇、洋葱萃取物、积雪草苷、苦参碱、蛇床子素、汉防己碱、丹参素等，这些成分对于疤痕的修复具有其独特的优势，如副作用小、成本低、可以弥补激素类药物长期运用带来的不良影响。公开号为CN 101703460 B的中国专利“一种中药祛疤修复霜及其制备方法”，以具有活血化瘀、软结散坚、止痛止痒等功效的中药成分如大黄、穿山甲、藏红花、枳实、血竭、莪术、川芎、三七、土鳖虫和蜈蚣作为主要原料，经提取等步骤制成霜类成品，长期使用可消除皮肤表面各种疤痕，还原皮肤光滑、细腻，起到良好的美容效果。
此外，随着生物技术的发展，一些生物活性成分逐步被人们应用于疤痕的质量，并取得了显著的成效，如公开号为CN 106110304 A的中国专利“一种祛疤组合物和敷料”，以间充质干细胞提取物、成纤维细胞生长因子和芦荟提取物作为有效成分，与Ⅰ型胶原蛋白、壳多糖、糖胺聚糖、海藻糖和戊二醇等支架成分混合，经3D打印和固化制成敷料，能够有效抑制疤痕处色素的沉积，消炎补水，滋养肌肤，促进细胞的新陈代谢，从而达到淡化疤痕，修复皮肤创面的功效。
虽然，近些年来针对祛疤研发的各类产品层出不穷，但疗效显著、安全性高、使用方便并可产业化生产的产品还是相对较少，不能满足市场的需要。
发明内容
为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种祛疤组合物，所述的组合物祛疤效果显著，安全性高，使用方便。
本发明提供的一种祛疤组合物，包含以下质量百分比的成分：六聚肽2～8％、五矿肽2～8％、硫辛酸1～4％、白花丹素0.05～1％、肌醇1～4％、复合生物活性因子纳米脂质体2～6％和辅料70～80％。
其中，上述的复合生物活性因子纳米脂质体中的复合生物活性因子由重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子以(0.1～0.6):1的质量比组成。
优选地，上述的复合生物活性因子纳米脂质体中的复合生物活性因子由重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子以0.4:1的质量比组成。
进一步地，所述的辅料由聚乙烯吡咯烷酮K30、甘油、1,2-丙二醇和蒸馏水以1:0.8:0.2:10的质量比组成。
进一步地，所述的祛疤组合物还包含0.01～1.0％(m/v)的防腐剂，所述的防腐剂为二甲基异噻唑啉酮、咪唑烷基脲、二羟甲基二甲基乙内酰脲、苯氧乙醇、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、DMDM乙内酰脲中的至少一种。
本发明所述的复合生物活性因子纳米脂质体的制备包括以下步骤：
(1)称取0.2g磷脂酰胆碱、0.08g胆固醇、0.04g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，混合，溶于50mL乙醇，超声处理5min；
(2)然后在28℃，0.1MPa的条件下旋转蒸发，除去乙醇，静置30min，加入100mL pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，在35℃水浴中振荡水化反应约1h，得脂质体悬浮液；
(3)使用注射器式滤器调整脂质体悬浮液的粒径至150～200nm，得到复合生物活性因子纳米脂质体。
其中，步骤(2)中pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中含0.1～1％(m/v)上述的复合生物活性因子。
此外，本发明还提供一种所述的祛疤组合物的制备方法，其包括以下步骤：
取聚乙烯吡咯烷酮K30溶于蒸馏水，加入甘油和1,2-丙二醇，搅拌均匀，制成基质；依次加入硫辛酸、六聚肽、五矿肽、白花丹素、肌醇，充分搅拌均匀，最后加入复合生物活性因子纳米脂质体和防腐剂，涡旋3～5min，即得。
此外，本发明还请求保护上述祛疤组合物在制备祛疤修复剂中的用途。
在本发明的祛疤组合物中，六聚肽可显著减轻皮肤的起皱现象，使祛疤组合物充分地贴敷于皮肤的表面，发挥功效。其中，所述的五矿肽为活性矿物酵母多肽，具体为酵母多肽络合的锌、铜、镁、铁和硅，其以最接近人体矿物元素的存在形式，直接给皮肤补充微量矿物元素，快速被吸收，增强基质金属蛋白酶的活性，促进其对堆积的Ⅰ型胶原的降解，减轻瘢痕增生，同时，所述的白花丹素可下调转化生长因子-β1、结缔组织生长因子、纤维连接蛋白的表达，抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖并诱导其凋亡，进而减缓瘢痕的生成。
在本发明的祛疤组合物中，复合生物活性因子纳米脂质体中的复合生物活性因子以重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子进行复配，不仅对皮肤细胞的生长具有良好的促进作用，加快细胞的新陈代谢，增强皮肤细胞的活力，平复疤痕，抑制疤痕扩展，减少疤痕组织色素沉积，恢复正常肤色，还可通过促进单核巨噬细胞成熟，促进纤维母细胞的生长，诱导巨噬细胞和成纤维细胞游走，修复损伤造成的真皮层胶原纤维断裂与变形，促进真皮层生长与胶原蛋白的合成，促进皮肤微血管循环，还原皮肤光滑、细腻，消除皮肤表面各种疤痕。此外，所述的复合生物活性因子以纳米级的脂质体形式存在，可促进透皮吸收的同时，利于提高活性因子的稳定性。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明提供的祛疤组合物可显著增强基质金属蛋白酶的活性，促进其对堆积的Ⅰ型胶原的降解，并显著减少纤维连接蛋白的表达，降低成纤维细胞密度，减缓瘢痕的生成，降低瘢痕增生指数，显示较佳的祛疤效果；同时临床数据显示，所述的祛疤组合物对增生性疤痕志愿患者同样具有较佳的疗效，治愈率达96.7％。
具体实施方式
以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。
实施例1复合生物活性因子纳米脂质体的制备
本发明A组所述的复合生物活性因子纳米脂质体的制备包括以下步骤：
(1)称取0.2g磷脂酰胆碱、0.08g胆固醇、0.04g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，混合，溶于50mL乙醇，超声处理5min；
(2)然后在28℃，0.1MPa的条件下旋转蒸发，除去乙醇，静置30min，加入100mL pH为7.4含0.5％(m/v)复合生物活性因子的磷酸盐缓冲溶液，在35℃水浴中振荡水化反应约1h，得脂质体悬浮液；
(3)使用注射器式滤器调整脂质体悬浮液的粒径至150nm，得到复合生物活性因子纳米脂质体。
B-D组复合生物活性因子纳米脂质体的制备参考上述A组。
实施例2-4和对比例1-4祛疤组合物的制备
本发明实施例2-4和对比例1-4祛疤组合物的组成见下表所示：
实施例2祛疤组合物的制备：
取聚乙烯吡咯烷酮K30溶于蒸馏水，加入甘油和1,2-丙二醇，搅拌均匀，制成基质；依次加入硫辛酸、六聚肽、五矿肽、白花丹素、肌醇，充分搅拌均匀，最后加入复合生物活性因子纳米脂质体和咪唑烷基脲，涡旋4min，即得。
实施例3、4和对比例1-4祛疤组合物的制备，参考上述的方法。
试验例一、祛疤组合物对兔子皮肤病理性瘢痕的影响
采用3％戊巴比妥钠1.5mg/kg兔耳耳缘静脉麻醉，角膜反射迟钝即麻醉成功，沿兔子耳腹面侧长轴制作直径为1cm╳0.5cm大小的梭形创面，每耳6处，间隔至少2cm，完整切除全层皮肤，去除软骨膜，保留软骨，创面不予任何处理，任其自然愈合，4周后兔耳创面基本愈合，增生块达到高峰，创面约为耳廓厚度的3倍，造模成功。将造模成功的兔子随机分为8组，分别为空白组、实施例2-4组、对比例1-4组，每组4只。其中，空白组不作任何处理，实施例2-4组、对比例1-4组分别涂抹本发明实施例2-4组、对比例1-4组制得的祛疤组合物，每天涂抹3次，连续观察8周，取材，经固定、脱水、包埋、切片、HE染色等步骤制片，在光镜下观察瘢痕增生指数和成纤维细胞数密度，并采用免疫组化方法检测基质金属蛋白酶1(MMP-1)和纤维连接蛋白(FN)的表达。
其中，测定瘢痕增生指数：HE染色切片，低倍镜下用纤维测量尺测量，并计算瘢痕增生指数。计算公式为:瘢痕增生指数＝瘢痕突起最高点至耳软骨表面的垂直高度/瘢痕周围正常皮肤表面至耳软骨表面的垂直高度。
成纤维细胞数密度：HE染色切片，400倍光镜下观察在瘢痕中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取10个矩形视野，目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞的数量，结果取均数。
表1各试验组对兔耳病理性瘢痕的增生指数和成纤维细胞密度的影响
注：与同组治疗前比较，*P<0.05，**P<0.01；与对比1组比较，#P<0.05；与对比2组比较，▽P<0.05；与对比3组比较，★P<0.05。
表2治疗8周后各试验组对基质金属蛋白酶1和纤维连接蛋白的表达的影响
组别 MMP-1 FN
空白组 1.42±0.10 2.34±0.12
实施例2 1.84±0.13*#▽ 1.92±0.10*
实施例3 1.82±0.12*#▽ 1.93±0.09*
实施例4 1.86±0.14*#▽ 1.90±0.12*
对比例1 1.79±0.10* 1.94±0.10*
对比例2 1.56±0.09 2.18±0.13
对比例3 1.52±0.08 2.14±0.09
对比例4 1.60±0.12 2.12±0.10
注：与空白组比较，*P<0.05；与对比2组比较，#P<0.05；与对比3组比较。
由上表可知，本发明实施例2-4制得的祛疤组合物可使兔耳病理性瘢痕组织内成纤维细胞数目显著减少，并可显著降低瘢痕增生指数，促进瘢痕的消除，同时通过增加基质金属蛋白酶1的表达，减少纤维连接蛋白的表达，促进堆积的Ⅰ型胶原的降解，减轻瘢痕增生。
试验例二、祛疤组合物的临床疗效评价
据疤痕组织学和形态学分类，筛选增生性疤痕志愿患者150例，随机分为5组，每组30人，分别为实施例4组、对比例1-4组，各组分别涂抹本发明实施例4组、对比例1-4组制得的祛疤组合物，每日涂抹3次，连续涂抹2个月，评价疗效，其中，治愈：疼痛消失，疤痕完全软化、变平，12个月无复发；显效：疼痛消失或显著减轻，60％～70％疤痕软化、变平，12个月内无复发；无效，疼痛变化甚微，治疗后无变化。
表3治疗2个月后各试验组疗效评价
组别 治愈(n) 显效(n) 无效(n)
实施例4 29 1 0
对比例1 18 10 2
对比例2 12 12 6
对比例3 10 13 7
对比例4 16 11 3
由上表可知，本发明实施例4制得的祛疤组合物对增生性疤痕的治疗效果显著，连续使用2个月后，治愈例数达29例，显著优于对比例1-4组。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种祛疤组合物，其特征在于，包含以下质量百分比的成分：六聚肽2～8％、五矿肽2～8％、硫辛酸1～4％、白花丹素0.05～1％、肌醇1～4％、复合生物活性因子纳米脂质体2～6％和辅料70～80％。
2.根据权利要求1所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的复合生物活性因子纳米脂质体中的复合生物活性因子由重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子以(0.1～0.6):1的质量比组成。
3.根据权利要求2所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的复合生物活性因子纳米脂质体中的复合生物活性因子由重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子以0.4:1的质量比组成。
4.根据权利要求1所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的辅料由聚乙烯吡咯烷酮K30、甘油、1,2-丙二醇和蒸馏水以1:0.8:0.2:10的质量比组成。
5.根据权利要求1所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的祛疤组合物还包含0.01～1.0％(m/v)的防腐剂。
6.根据权利要求5所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的防腐剂为二甲基异噻唑啉酮、咪唑烷基脲、二羟甲基二甲基乙内酰脲、苯氧乙醇、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、DMDM乙内酰脲中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的复合生物活性因子纳米脂质体的制备包括以下步骤：
(1)称取0.2g磷脂酰胆碱、0.08g胆固醇、0.04g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，混合，溶于50mL乙醇，超声处理5min；
(2)然后在28℃，0.1MPa的条件下旋转蒸发，除去乙醇，静置30min，加入100mL pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，在35℃水浴中振荡水化反应约1h，得脂质体悬浮液；
(3)使用注射器式滤器调整脂质体悬浮液的粒径至150～200nm，得到复合生物活性因子纳米脂质体。
8.根据权利要求7所述的祛疤组合物，其特征在于，所述的复合生物活性因子纳米脂质体的制备步骤(2)中pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中含0.1～1％(m/v)的复合生物活性因子，所述的复合生物活性因子由重组人粒细胞集落刺激因子和重组人角质细胞因子以(0.1～0.6):1的质量比组成。
9.根据权利要求1-8任一所述的祛疤组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取聚乙烯吡咯烷酮K30溶于蒸馏水，加入甘油和1,2-丙二醇，搅拌均匀，制成基质；依次加入硫辛酸、六聚肽、五矿肽、白花丹素、肌醇，充分搅拌均匀，最后加入复合生物活性因子纳米脂质体和防腐剂，涡旋3～5min，即得。
10.根据权利要求1-8任一所述的祛疤组合物在制备祛疤修复剂中的用途。
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