CN110279642A

CN110279642A - 一种皮肤护理组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN110279642A
Application number: CN201910734819.3A
Authority: CN
Inventors: 胡兴国; 李强; 万岳鹏; 龚盛昭; 吴知情
Original assignee: Guangzhou Huanya Cosmetic Science and Technology Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Huanya Cosmetic Science and Technology Co Ltd
Priority date: 2019-08-09
Filing date: 2019-08-09
Publication date: 2019-09-27

Abstract

本发明提供一种皮肤护理组合物及其制备方法和应用，所述皮肤护理组合物中包括透明质酸类化合物和生姜提取物。所述皮肤护理组合物将透明质酸类化合物和生姜提取物进行复配，使二者协同增效，共同促进皮肤成纤维细胞的生长以及成纤维细胞胶原蛋白的生成、尤其是I型胶原蛋白的生成，进而修复皮肤真皮层中受损的胶原纤维和弹性纤维，从根源上预防和减轻皮肤老化，实现抗皱抗老化的功效。本发明所述皮肤护理组合物的制备方法简单，可应用于乳液、精华液、面霜、面膜以及头皮护理精华中，得到的护肤品具有良好的清除DPPH自由基和抗氧化功效，具有广阔的市场前景。

Description

一种皮肤护理组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于日用化学品技术领域，具体涉及一种皮肤护理组合物及其制备方法和应用。

背景技术

人的皮肤可以分为表皮、真皮和皮下组织三层，其中表皮是皮肤的最外层，具有保护、保湿的作用，能不断新生，又可分为五层：角质层、透明层、颗粒层、有棘层和基底层。表皮的基底层中由角质母细胞和黑色素细胞组成，角质母细胞能不断分裂产生新生细胞，把原有细胞向上推移，维持表皮层的新陈代谢；黑色素细胞可以产生黑色素，保护真皮层。随着年龄的增长，皮肤表皮层的新陈代谢速度减慢，引起诸多老化现象，主要表现为表皮层厚度降低、表皮萎缩以及角质层暗淡无光。真皮主要由胶原纤维和弹性纤维构成，与皮肤老化具有直接联系。胶原纤维和弹性纤维交叉形成一张弹性网，如弹簧一样保持皮肤的弹性和张力。年龄的增长或紫外线、自由基的伤害会引起胶原纤维和弹性纤维的受损、硬化、断裂，从而导致真皮层网状结构疏松，形成凹陷，在皮肤表面出现皱纹和松弛。出于健康以及美观的角度考虑，减少或祛除皮肤上的皱纹、延缓皮肤老化，一直是医学美容界的研究热点。

目前，针对抗老化抗皱纹的护肤品种类繁多，大部分产品从皮肤皱纹和松弛的形成机理出发，通过外源性地添加皮肤中缺少的成分来实现抗皱抗老化的目的。

CN109646323A公开了一种胶原蛋白抗皱面膜及其制备方法，该胶原蛋白抗皱面膜按照重量份包括如下成分：海参胶原蛋白30～40份、橄榄精华25～35份、玫瑰精华20～30份、芦荟精华40～60份、鳄梨精油20～25份、玻尿酸10～15份、维生素E 10～15份和维生素C15～20份。该胶原蛋白抗皱面膜的制备方法简单，使用的原料均为天然材料，无毒、无刺激、无副作用；海参胶原蛋白具有较高的抗氧化能力，能够清除自由基，补充皮肤中损失的胶原蛋白，具有抗氧化，抗皱的功能；鳄梨油有滋养润泽肌肤，防止老化的功效。

CN105168064A公开了一种浓缩型矿物质修护精华液，该精华液中包含如下重量比的成分：透明质酸钠0.05～0.3％、碳酸氢钠0.01～1％、碳酸钾0.01～1％、碳酸钠0.01～1％、金0.01～2％、水解胶原1～10％、酵母菌/锌发酵产物1～15％、酵母菌/钙发酵产物1～15％、酵母菌/硅发酵产物1～15％。该精华液能够产生高浓缩液态远红外碱性负离子活化能，这种液态活化能进入人体后释放大量的液态远红外线和碱性负离子，使人体生物酶提高200～400％，该精华液对年轻肌肤具有增强抗老化清除自由基的能力，对老化肌肤具有修复与再生的能力。

CN103040717A公开了一种中药抗皱组合物、面膜，所述组合物中包括15～25份当归、15～25份白芷、15～25份白茯苓、15～25份白芨、10～20份川芎、10～20份黄豆、10～20份薏仁、10～20份杏仁粉、10～30份珍珠粉、5～12份蜂蜜和5～12份食用滑石粉；其中当归促进皮肤代谢、活血亮肤，白芷、白茯苓、杏仁可以美白润肤，白芨紧实除皱，珍珠粉有美白收敛生肌、促进细胞再生及疤痕愈合的功效，黄豆粉能抗老化、紧实毛孔、祛除细纹。所述抗皱组合物、面膜有活血亮肤、美白防皱的功效，适用于修复皮肤的衰老松弛和皱纹。

然而在现有的抗皱抗老化产品大都通过添加外源性胶原蛋白、透明质酸等成分增加皮肤保湿度、补充皮肤中损失的胶原蛋白，并没有从根本上解决皮肤中因胶原纤维和弹性纤维受损导致的皮肤松弛和皱纹。

因此，本领域技术人员应当从修复皮肤真皮层中受损的胶原纤维和弹性纤维这一根本问题出发，开发一种能够保持皮肤细胞水分、促进皮肤细胞再生和胶原蛋白合成的皮肤护理产品。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种皮肤护理组合物及其制备方法和应用，所述皮肤护理组合物中通过透明质酸类化合物和生姜提取物的协同配合，有效促进了皮肤中成纤维细胞的生长增殖和成纤维细胞胶原蛋白的生成，从而达到减轻或预防皮肤老化的功效。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供皮肤护理组合物，所述皮肤护理组合物中包括透明质酸类化合物和生姜提取物。

透明质酸是一种酸性粘多糖，具有特殊的保水作用，可以吸收其自身重量100倍的水，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的“天然保湿因子”。透明质酸广泛分布于人体各部位，其中皮肤中也含有大量透明质酸，它可以改善皮肤营养代谢，使皮肤湿润、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。研究表明，透明质酸广泛存在于细胞外基质、细胞表面和细胞内部，对细胞具有多种作用，可以调控细胞生长因子和细胞因子的分泌，抑制蛋白酶的分解，影响细胞的黏附、生长、增殖和分化。目前常用的透明质酸类化合物包括透明质酸和透明质酸盐，其中透明质酸盐优选为透明质酸钠。

生姜具有广泛的药理学活性，据《本草纲目》记载，姜味辛、性热，归脾、胃、肺、肾、心经，有温中散寒、回阳通脉、燥湿消炎的功效。现代医学研究表明，生姜及其提取物具有解毒、止吐止泻、温肺化痰、发汗解表等功效，同时具有促进消化液分泌、促进血液循环、增强食欲、抗氧化、加速组织代谢、抗衰老、消炎杀菌等功能。生姜及其提取物已被证实对心脑血管、消化系统、免疫系统及神经系统等具有广泛的药理学活性，但现有技术尚未公开过生姜提取物针对皮肤抗衰老的相关研究，更未涉及过生姜提取物对预防和减轻皮肤衰老的机理性探索。

胶原蛋白是细胞外基质的主要蛋白，I型胶原蛋白和III型胶原蛋白是皮肤的真皮细胞外基质的重要组分，约占70～80％，且I型胶原蛋白和III型胶原蛋白主要由真皮成纤维细胞产生。成纤维细胞是构成皮肤真皮的主要细胞，也是皮肤组织受损后的主要修复细胞，其正常的增殖、分化维系着皮肤正常的结构和生理功能。本发明提供的皮肤护理组合物中包含透明质酸类化合物和生姜提取物，其中透明质酸类化合物的渗透性极强，能够进入皮肤真皮层，提升真皮层的储水保湿能力，并通过调控细胞生长因子和细胞因子的分泌影响细胞的黏附、生长、增殖和分化；生姜提取物可促进皮肤成纤维细胞的增殖。本发明创造性地将透明质酸类化合物和生姜提取物进行复配，使二者协同增效，共同通过调节TGF-β信号通路促进皮肤成纤维细胞的生长以及成纤维细胞胶原蛋白的生成、尤其是I型胶原蛋白的生成，进而修复皮肤真皮层中受损的胶原纤维和弹性纤维，达到预防和减轻皮肤老化的功效。

优选地，所述皮肤护理组合物按照质量百分含量包括如下成分：

透明质酸类化合物 0.01～5.0％

生姜提取物 0.01～3.0％。

本发明提供的皮肤护理组合物中，透明质酸类化合物和生姜提取物的含量应在上述限定的范围内，若有效成分透明质酸类化合物和生姜提取物的含量低于本发明限定的范围，则无法有效发挥保湿和促进胶原蛋白生成的功效；若有效成分的含量高于限定范围，则会增大皮肤的吸收负担和代谢负担，并可能造成毒副作用。

本发明中，所述透明质酸类化合物的质量百分含量可以为0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.8％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％或4.5％，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

所述生姜提取物的质量百分含量可以为0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.8％、1.0％、1.3％、1.5％、1.8％、2.0％、2.3％、2.5％或2.8％，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

优选地，所述透明质酸类化合物为透明质酸和/或透明质酸钠；

优选地，所述透明质酸钠的分子量≤6000Da，例如5900Da、5700Da、5500Da、5300Da、5100Da、5000Da、4800Da、4600Da、4400Da、4100Da、4000Da、3800Da或3500Da等。

透明质酸类化合物 0.01～0.5％

生姜提取物 0.01～0.5％；

所述透明质酸类化合物为透明质酸钠。

另一方面，本发明提供一种如上所述的皮肤护理组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将透明质酸类化合物和水混合搅拌，得到混合液I；

(2)将步骤(1)得到的混合液I冷却，与生姜提取物和水混合，得到所述皮肤护理组合物。

优选地，步骤(1)所述混合搅拌的温度为45～60℃，例如46℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃或59℃等，进一步优选为50℃。

优选地，步骤(2)所述冷却的温度为15～35℃，例如16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃或34℃等，进一步优选为30℃。

优选地，所述制备方法具体包括以下步骤：

(1)将透明质酸类化合物和水在45～60℃混合搅拌，得到混合液I；

(2)将步骤(1)得到的混合液I冷却至15～35℃，进而与生姜提取物和水混合，得到所述皮肤护理组合物。

另一方面，本发明提供一种护肤品，所述护肤品包括如上所述的皮肤护理组合物。

优选地，所述护肤品包括头皮护理精华液、面膜、面霜、乳液或面部精华液中的任意一种。

优选地，所述护肤品为头皮护理精华液，所述头皮护理精华液中所述皮肤护理组合物的质量百分含量为0.02～10％，例如0.03％、0.05％、0.07％、0.09％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.8％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9％或9.5％，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

优选地，所述护肤品为面膜，所述面膜中所述皮肤护理组合物的质量百分含量为0.02～10％，例如0.03％、0.05％、0.07％、0.09％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.8％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9％或9.5％，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明提供的皮肤护理组合物包含透明质酸类化合物和生姜提取物，其中透明质酸类化合物渗透性极强，能够进入皮肤真皮层，提升真皮层的储水保湿能力，并通过调控细胞生长因子和细胞因子的分泌影响细胞的黏附、生长、增殖和分化；生姜提取物可促进皮肤成纤维细胞的增殖。本发明所述皮肤护理组合物将透明质酸类化合物和生姜提取物进行复配，使二者协同增效，共同通过激活TGF-β信号通路促进皮肤成纤维细胞的生长、增殖以及胶原蛋白的生成、尤其是I型胶原蛋白的生成，进而修复皮肤真皮层中受损的胶原纤维和弹性纤维，从根源上预防和减轻皮肤老化，实现抗皱抗老化的功效。本发明所述皮肤护理组合物的制备方法简单，可应用于乳液、精华液、面霜、面膜以及头皮护理精华等护肤品中，得到的护肤品具有良好的清除DPPH自由基和抗氧化功效，具有广阔的市场前景。

附图说明

图1为本发明实施例4中皮肤护理组合物对成纤维细胞增殖的影响结果图；

图2为本发明实施例5中皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I的mRNA水平影响结果图；

图3为本发明实施例5中皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I蛋白水平影响结果图；

图4为本发明实施例5中皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I蛋白水平影响的免疫荧光图，其中A组为单独透明质酸钠处理，B组为单独生姜提取物处理，C组为1μg/mL透明质酸钠与1μg/mL生姜提取物联合处理，D组为1μg/mL透明质酸钠与10μg/mL生姜提取物联合处理，对照组为空白未处理；A～D组的标尺均为标注的200μm；

图5为本发明实施例6中皮肤护理组合物对TGF-β信号通路相关基因的mRNA水平影响结果图，其中(a)为CTGF的mRNA水平，(b)为TGF-βRI的mRNA水平，(c)为TGF-βRII的mRNA水平，(d)为Twist的mRNA水平，(e)为Snail的mRNA水平。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

本发明以下实施例中用到的材料包括：

透明质酸钠，分子量为6000Da，购自华熙福瑞达；生姜提取物来自于环亚研究院活性物研究中心。

成纤维细胞来自北京协和细胞资源中心，培养基为内含10％胎牛血清(Gibco)、100U/mL青霉素+链霉素双抗(Gibco)的低糖DMEM培养基(Gibco)，细胞培养条件为5％CO₂、37℃恒温恒湿培养箱。

实施例1

本实施例提供一种皮肤护理组合物，具体制备方法如下：

(1)将0.1重量份透明质酸钠溶于水中，升温至50℃搅拌、使透明质酸钠完全溶解于水中，得到混合液I；

(2)将步骤(1)得到的混合液I冷却至30℃，与0.1重量份生姜提取物混合，加水使物料总量为100重量份，搅拌均匀，得到所述皮肤护理组合物。

实施例2

本实施例提供一种皮肤护理组合物，具体制备方法如下：

(1)将0.2重量份透明质酸钠溶于水中，升温至50℃搅拌、使透明质酸钠完全溶解于水中，得到混合液I；

实施例3

本实施例提供一种皮肤护理组合物，具体制备方法如下：

(2)将步骤(1)得到的混合液I冷却至30℃，与0.2重量份生姜提取物混合，加水使物料总量为100重量份，搅拌均匀，得到所述皮肤护理组合物。

对比例1

本对比例提供一种皮肤护理组合物，具体制备方法如下：

室温下将0.2重量份生姜提取物与99.8重量份水混合，搅拌均匀，得到所述皮肤护理组合物。

对比例2

本对比例提供一种皮肤护理组合物，具体制备方法如下：

将0.2重量份透明质酸钠与99.8重量份水混合，升温至50℃搅拌、使透明质酸钠完全溶解于水中，冷却至室温，得到所述皮肤护理组合物。

实施例4

本实施例提供了本发明所述皮肤护理组合物对成纤维细胞增殖影响的测试实验，具体方法如下：

(1)将对数生长期的成纤维细胞以10⁵个/孔的密度接种于6孔板，将6孔板中的细胞分为5组，分别为：

A组：单独透明质酸钠处理组，使孔中透明质酸钠(简写为HA)的浓度为1μg/mL；

B组：单独生姜提取物处理组，使孔中生姜提取物(简写为GE)的浓度为1μg/mL；

C组：HA+GE处理组，使孔中HA和GE的浓度均为1μg/mL；

D组：HA+GE处理组，使孔中HA的浓度均为1μg/mL，GE的浓度均为10μg/mL；

E组：空白对照组；

将经过上述5组处理的成纤维细胞在5％CO₂、37℃恒温恒湿的条件下孵育72h；

(2)用细胞计数仪对步骤(1)中的5组细胞进行计数，分别统计细胞数目；

重复步骤(1)～(2)，得到3次独立实验的结果，对数据进行统计，得到本发明所述皮肤护理组合物对成纤维细胞增殖的影响结果图，如图1所示，*表示p<0.5。

从图1中可知，与空白对照组相比，单独透明质酸钠(HA)处理的A组和单独生姜提取物(GE)处理的B组的细胞数目略有增长，但增长率不大于30％；使用1μg/mL HA+1μg/mLGE处理的C组和使用1μg/mL HA+10μg/mL GE处理的D组细胞数目较空白对照组有大幅度增长，增长率可达到60％以上。由此可知，透明质酸钠和生姜提取物单独使用均无明显的促细胞增殖作用，而二者的联合处理对于成纤维细胞的增殖有显著的促进作用，因此本发明中将透明质酸钠和生姜提取物进行复配得到的皮肤护理组合物能够有效促进成纤维细胞的再生和增殖，达到抗老化的目的。

实施例5

本实施例提供了所述皮肤护理组合物对成纤维细胞胶原蛋白表达影响的测试实验。

(1)I型胶原蛋白(collagen I)的mRNA水平检测：

按照实施例4步骤(1)所述方法处理成纤维细胞，将经过处理的5组成纤维细胞在5％CO₂、37℃恒温恒湿的条件下孵育72h，收集，使用RNAiso Plus试剂(Takara)提取总RNA，具体操作按照说明书进行；利用PrimeScript RT试剂盒(Takara)将mRNA逆转录为cDNA，具体操作按照试剂盒说明书进行；取等量的cDNA通过Real-time PCR Master Mix试剂盒(ABI)以及目的基因的引物进行实时荧光PCR检测collagen I的mRNA水平，具体操作按照试剂盒说明书进行。

重复上述实验步骤，得到3次独立实验的结果，对数据进行统计，得到本发明所述皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I的mRNA水平影响结果图，如图2所示，***表示p<0.001。

从图2中可知，与空白对照组、单独透明质酸钠处理的A组和单独生姜提取物处理的B组相比，联合使用透明质酸钠和生姜提取物的C组(1μg/mL HA+1μg/mL GE)和D组(1μg/mL HA+10μg/mL GE)中collagen I的mRNA水平明显提高，说明本发明中将透明质酸钠和生姜提取物进行复配得到的皮肤护理组合物能够显著上调collagen I的mRNA水平，具有促进成纤维细胞中I型胶原蛋白生成的功效。

(2)蛋白免疫印迹实验：

按照实施例4步骤(1)所述方法处理成纤维细胞，将经过处理的5组成纤维细胞在5％CO₂、37℃恒温恒湿的条件下孵育72h后，加入SDS-PAGE上样缓冲液，置于沸水中加热10分钟；然后采用10％浓度的SDS-PAGE分离蛋白，并通过湿转法将蛋白转至PVDF膜上；利用collagen I抗体(A1352，Abclone)以及内参Tublin抗体(11224-1-AP，Proteintech)对蛋白进行检测，得到本发明所述皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I的蛋白水平影响结果图，如图3所示。

从图3中可知，与空白对照组、单独透明质酸钠处理的A组和单独生姜提取物处理的B组相比，联合使用透明质酸钠和生姜提取物的C组(1μg/mL HA+1μg/mL GE)和D组(1μg/mL HA+10μg/mL GE)中collagen I蛋白水平明显提高，说明本发明中将透明质酸钠和生姜提取物进行复配得到的皮肤护理组合物能够显著上调成纤维细胞collagen I的蛋白水平，具有促进成纤维细胞中I型胶原蛋白生成的功效。

(3)免疫荧光检测实验：

将对数生长期的成纤维细胞以10⁵个/孔的密度接种于内置盖玻片的12孔板，将12孔板中的细胞分为5组，分别为：

A组：单独透明质酸钠处理组，使孔中透明质酸钠(HA)的浓度为1μg/mL；

B组：单独生姜提取物处理组，使孔中生姜提取物(GE)的浓度为1μg/mL；

C组：HA+GE处理组，使孔中HA和GE的浓度均为1μg/mL；

E组：空白对照组；

将经过上述5组处理的成纤维细胞在5％CO₂、37℃恒温恒湿的条件下孵育72h后，用4％多聚甲醛对细胞进行固定，并使用0.5％聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)对细胞进行透化；将细胞利用3％牛血清蛋白BSA封闭处理后，加入用1％BSA稀释的collagen I一抗溶液(A1352，Abclone)，4℃孵育过夜；第二日用PBS洗涤细胞三遍后，加入1％BSA稀释的二抗溶液，按照孵育一抗的方式孵育二抗；孵育结束后室温静置1h，再用PBS缓冲液摇床洗涤细胞3次。利用含有4',6-二脒基-2-苯基吲哚DAPI的防荧光淬灭剂对盖玻片进行封片处理，通过正置荧光显微镜进行观察和拍照。

本发明所述皮肤护理组合物对成纤维细胞collagen I蛋白水平影响的免疫荧光图如图4所示，从图4中可知，与空白对照组、单独透明质酸钠处理的A组和单独生姜提取物处理的B组相比，联合使用透明质酸钠和生姜提取物的C组(1μg/mL HA+1μg/mL GE)和D组(1μg/mL HA+10μg/mL GE)中collagen I的信号明显增强，说明本发明中将透明质酸钠和生姜提取物进行复配得到的皮肤护理组合物能够显著上调成纤维细胞collagen I的蛋白水平，促进成纤维细胞中I型胶原蛋白生成。

实施例6

本实施例提供了所述皮肤护理组合物影响成纤维细胞胶原蛋白表达的作用机制的验证实验，具体实验步骤如下：

按照实施例4步骤(1)所述方法处理成纤维细胞，将经过处理的5组成纤维细胞在5％CO₂、37℃恒温恒湿的条件下孵育72h，收集，使用RNAiso Plus试剂(Takara)提取总RNA，具体操作按照说明书进行；利用PrimeScript RT试剂盒(Takara)将mRNA逆转录为cDNA，具体操作按照试剂盒说明书进行；取等量的cDNA通过Real-time PCR Master Mix试剂盒(ABI)以及目的基因的引物进行实时定量荧光PCR实验，检测各目的基因的表达情况，具体操作按照试剂盒说明书进行。

按照上述方法测试TGF-β信号通路重要基因CTGF、TGF-βRI、TGF-βRII、Twist和Snail的mRNA水平变化，进行3次独立实验并对数据进行统计，得到本发明所述皮肤护理组合物对TGF-β信号通路相关基因的mRNA水平影响结果图，如图5所示，其中(a)为CTGF的mRNA水平，(b)为TGF-βRI的mRNA水平，(c)为TGF-βRII的mRNA水平，(d)为Twist的mRNA水平，(e)为Snail的mRNA水平。

从图5中可知，与空白对照组、单独透明质酸钠处理的A组和单独生姜提取物处理的B组相比，联合使用透明质酸钠和生姜提取物的C组(1μg/mL HA+1μg/mL GE)和D组(1μg/mL HA+10μg/mL GE)中TGF-β信号通路中各重要基因的mRNA水平明显提高，说明本发明中将透明质酸钠和生姜提取物进行复配得到的皮肤护理组合物能够显著上调TGF-β信号通路中各重要基因的mRNA水平，其促进成纤维细胞增殖以及I型胶原蛋白的表达可能是通过激活TGF-β信号通路来实现的。

综上所述，本发明提供的皮肤护理组合物中透明质酸钠和生姜提取物相互配合，二者协同增效可以显著促进真皮中成纤维细胞的增殖和I型胶原蛋白的表达，所述促进作用可能是通过激活TGF-β信号通路来实现的。本发明中透明质酸钠和生姜提取物的复配可以促进成纤维细胞的增殖再生和胶原蛋白的生成，进而修复皮肤真皮层中受损的胶原纤维和弹性纤维，从根源上预防和减轻皮肤老化。

应用例1

一种头皮护理精华液，按照质量百分含量包括以下组分：

余量为去离子水；

将上述组分按照配方量混合，得到所述头皮护理精华液。应用例2

一种抗衰老保湿面膜，按照质量百分含量包括以下组分：

余量为去离子水；

将上述组分按照配方量混合，得到所述抗衰老保湿面膜。

性能测试：

清除DPPH自由基能力测试：DPPH自由基是一种稳定的自由基，利用其乙醇溶液显紫色并在波长517nm处有特征吸收峰，可测定受试物是否具备抗氧化性。移取2mL DPPH-乙醇溶液(0.2mmol/L)，加入2mL待测样品，充分混合后在暗处静置30min，以无水乙醇为空白对照，于517nm处测定其吸光度，并设置维生素C为对照，按照以下公式计算待测样品对DPPH的清除率：

DPPH清除率(％)＝[1-(A_i-A_j)/A₀]×100％

式中，A_i为待测样品与DPPH反应体系的吸光度，A_j为待测样品与无水乙醇混合后的吸光度，A₀为空白对照无水乙醇的吸光度。

按照上述方法测试应用例1、2提供的产品清除DPPH自由基的能力，具体数据如表1所示：

表1

应用例1、2中提供的产品均含有本发明所述的皮肤护理组合物，从表1的数据可知，应用例1中提供的头皮护理精华液和应用例2中提供的抗衰老保湿面膜都具有良好的清除DPPH自由基的能力以及抗氧化性，证明其具有预防和延缓皮肤老化的功效。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明提供的皮肤护理组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims

1.一种皮肤护理组合物，其特征在于，所述皮肤护理组合物中包括透明质酸类化合物和生姜提取物。

2.根据权利要求1所述的皮肤护理组合物，其特征在于，所述皮肤护理组合物按照质量百分含量包括如下成分：

透明质酸类化合物 0.01～5.0％

生姜提取物 0.01～3.0％。

3.根据权利要求1或2所述的皮肤护理组合物，其特征在于，所述透明质酸类化合物为透明质酸和/或透明质酸钠；

优选地，所述透明质酸类钠的分子量≤6000Da。

4.根据权利要求1～3任一项所述的皮肤护理组合物，其特征在于，所述皮肤护理组合物按照质量百分含量包括如下成分：

透明质酸类化合物 0.01～0.5％

生姜提取物 0.01～0.5％；

所述透明质酸类化合物为透明质酸钠。

5.一种如权利要求1～4任一项所述的皮肤护理组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将透明质酸类化合物和水混合搅拌，得到混合液I；

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述混合搅拌的温度为45～60℃，优选为50℃；

优选地，步骤(2)所述冷却的温度为15～35℃，进一步优选为30℃；

优选地，所述制备方法具体包括以下步骤：

7.一种护肤品，其特征在于，所述护肤品包括权利要求1～4任一项所述的皮肤护理组合物。

8.根据权利要求7所述的护肤品，其特征在于，所述护肤品包括头皮护理精华液、面膜、面霜、乳液或面部精华液中的任意一种。

9.根据权利要求7或8所述的护肤品，其特征在于，所述护肤品为头皮护理精华液，所述头皮护理精华液中所述皮肤护理组合物的质量百分含量为0.02～10％。

10.根据权利要求7～9任一项所述的护肤品，其特征在于，所述护肤品为面膜，所述面膜中所述皮肤护理组合物的质量百分含量为0.02～10％。