CN107690285A - 用于减轻婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌负荷的含有低聚果糖的营养组合物和婴儿配方食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于下调、减少或抑制婴儿或幼儿的肠道中致病性细菌种群的生长的营养组合物,所述营养组合物具有低聚果糖和任选地高sn‑2棕榈酸酯。所述婴幼儿可为0至12个月大,并且所述组合物可为婴儿配方食品。较高剂量的低聚果糖增强效应。所述组合物促进健康的肠道微生物群。
Description
技术领域
本发明涉及用于婴儿和幼儿的营养组合物以及其对婴幼儿健康的影响。具体地讲,本发明涉及包含相对高量的低聚果糖和任选地相对高量的高sn-2棕榈酸甘油三酯的婴儿配方食品。
背景技术
每当母亲不能母乳喂养其婴幼儿时,婴儿配方食品可为使用人类母乳的天然母乳喂养提供合适的替代方案。用于婴儿和幼儿的营养组合物通常作为用水重构的散剂或在某些情况下作为即饮型或浓缩液体组合物出售。这些组合物旨在覆盖婴儿或幼儿的大部分或所有营养需要。
然而,已经知道人类母乳代表婴幼儿的营养方面终极的黄金标准。婴儿配方食品制造商已作出许多尝试来产生接近或类似于人类母乳的益处的营养健康影响。
建议所有婴幼儿采用母亲的乳汁喂养。然而,在一些情况下,由于某些医学原因,母乳喂养并不足够或不成功,或者母亲不选择母乳喂养。已针对这些情况研发了婴儿配方食品。还研发了用特殊成分丰富母亲的乳汁或婴儿配方食品的强化剂(fortifier)。
然而在许多实例中,研究表明,与人类母乳相比,婴儿配方食品不会对身体产生相同的影响。例如,喂食婴儿配方食品的婴幼儿和喂食人类母乳(HBM)的婴幼儿可表现出不同的肠道微生物群。
健康的肠道微生物群是婴幼儿健康的指示,肠道微生物群的改变可能是异常健康事件诸如腹泻、营养物质吸收不足、绞痛、睡眠改变和生长发育改变的指示(和/或起因)。
已知分娩方式可影响婴幼儿的初始肠道微生物群:与经阴道分娩的婴幼儿相比,经剖腹产分娩的婴幼儿具有不同的肠道微生物群。
已知,除了其他成分之外,非消化性碳水化合物(益生元)尤其会影响特定微生物群的繁殖。例如,已证实某些低聚半乳糖(GOS)和/或某些低聚果糖(FOS)可促进肠道尤其是婴幼儿肠道中的双歧杆菌的生长和繁衍。
然而,在婴幼儿的发育过程中,肠道微生物群及其进化是许多肠道细菌种群的存在和繁衍(数量)之间的精密平衡。关于肠道细菌对婴幼儿总体健康的影响,一些肠道细菌被分类为“通常阳性”,而另一些为“通常阴性”(或致病性)。
相比于母乳喂养的婴幼儿,某些种类的细菌(诸如双歧杆菌),在喂食常规婴儿配方食品的婴幼儿中可能不足。类似地,一些细菌种群被认为是致病性的,并且在肠道微生物群中应保持低繁衍。
虽然许多研究已经确定了促进婴幼儿的肠道中阳性细菌的生长和繁衍的方法,但很少有人知道如何减少婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌的生长和繁衍。
需要减少或抑制婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌的生长。
需要下调婴幼儿的肠道中致病性细菌或“阴性细菌”的发育和生长。
需要选择性地影响婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌的生长,而不影响阳性肠道细菌的生长。
需要加强婴儿和幼儿的总体肠道微生物群的良好平衡。需要产生这种良好的平衡,以致积极影响婴儿和幼儿的总体健康和发育。
在建立这种平衡时,需要在出生后的头几周期间增强婴幼儿的总体肠道微生物群的良好平衡,尤其是通过下调或抑制致病性细菌的生长。
需要通过耐受性良好的“软冲击”(指没有或有很少的副作用)来增强这种良好平衡。
需要对婴儿和幼儿的肠道中致病性细菌的生长产生不利影响,尤其是要同时避免促进粪便硬结、痉挛和绞痛。
Manjiang Yao等人于2013年5月16日公布的WO2013068879A2报道了高sn-2棕榈酸酯饮食(存在或不存在低聚果糖)对婴幼儿的粪便软化和阳性细菌诸如双歧杆菌的诱导的影响。
发明内容
本发明涉及用于婴儿和幼儿的营养组合物,诸如婴儿配方食品或较大婴儿配方食品。组合物可为粉末状形式或液体形式。当为即饮型液体形式时,组合物包含至少3g/L或至少5g/L的低聚果糖。当为粉末状形式或浓缩液体形式,即需要在食用之前稀释时,组合物包含足够量的低聚果糖,以在重构组合物中分别获得至少3g/L或5g/L的低聚果糖。优选地,组合物为粉末状形式。
本发明的组合物具有下调、减少或抑制婴儿或幼儿的肠道中致病性细菌的生长以及减少其丰度的作用。优选地,婴儿或幼儿为0至12个月大的婴幼儿。
附图说明
图1和图2:图1和图2示出了各种营养组合物对婴幼儿微生物群的影响。
图3:图3示出了喂食组中所选择的排泄物致病性细菌物种浓度相对于基线的变化。所示的细菌种群包括非致病性、潜在致病性和致病性细菌种群以及总细菌。
图4:图4示出了喂食组中总测量的病原体相对于基线的变化。总测量的病原体[包括大肠杆菌(Escherichia coli)(EPEC)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、艰难梭菌(Clostridium difficile)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)在内的所有4种病原体的总计数]的调整后的平均排泄物计数的变化计算为基线和第8周处的总病原体计数的对数差值。
在所有4个图(图1、图2、图3、图4)中,数据示出了喂食组中排泄物细菌群浓度相对于基线的变化。所示的数据表示调整后的LS平均log10转换细菌浓度(以计数/g粪便湿重表示)的差值(基线至第8周)。P值表示与对照的比较。
具体实施方式
定义:
如本文所用,下列术语具有如下含义。
术语“婴儿”是指年龄在12个月以下的小孩。
表述“幼儿”是指年龄介于一岁和三岁之间的小孩,也称为学步儿童。
“经剖腹产出生的婴儿或幼儿”是指通过剖腹产分娩的婴幼儿。这意味着婴儿不是经阴道分娩的。
“早产婴儿”或“早产儿”是指不足月生产的婴儿或幼儿。通常是指在妊娠期满36周之前出生的婴幼儿。
表述“营养组合物”是指供给受试者养分的组合物。一般情况下,营养组合物经胃肠道或不经胃肠道摄入,或者以口服或静脉注射方式摄入,并通常包含脂质或脂肪源和蛋白质源。优选地,营养组合物用于口服使用。
表述“低变应原营养组合物”是指不大可能引起变态反应的营养组合物。
表述“合成组合物”是指采用化学和/或生物方法获得的混合物,该混合物的化学性质可能与哺乳动物乳汁中天然存在的混合物相同。
表述“婴儿配方食品”是指专用于供给出生后四至六个月婴儿营养,而且本身可满足这类婴儿的多种营养需求的食品(符合欧盟委员会1991年5月14日颁发的针对婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的第91/321/EEC号指令中第1.2条的规定)。
表述“1段婴儿配方食品”是指专用于供给出生后不满四个月婴儿营养的食品。
表述“较大婴儿配方食品”是指专用于供给四个月以上大的婴幼儿营养、并且是这类婴幼儿逐渐多元化的饮食中的主要流质食物的食品。
表述“婴孩食物”是指专用于供给出生后不满1岁婴幼儿营养的食品。
表述“强化剂”是指适宜与母乳或婴儿配方食品混合的液态或固态营养组合物。
术语“断乳期”是指在婴幼儿饮食中逐步用其他食物替代母亲的乳汁的这一时期。
“母亲的乳汁”应理解为母亲的母乳或初乳(=人类母乳=HBM)。
本文所用的术语“低聚果糖”是指果糖低聚物。其可为长链或短链,具体取决于低聚果糖的聚合度(单体的数量)。优选地,本发明的低聚果糖为短链低聚果糖,最优选地其具有2至10的聚合度,例如2至8的聚合度。
本文所用的术语“sn-2棕榈酸酯”是指棕榈酸在甘油三酯的sn-2位与其键合。
“高sn-2棕榈酸甘油三酯”是指在sn-2位含有超过30%的棕榈酸的甘油三酯(TG)。例如,由脂类营养公司(Lipid Nutrition)出售的可商购获得的高sn-2棕榈酸甘油三酯成分是BetapolTMB-55。其为来源于植物油的甘油三酯混合物,其中至少54%的棕榈酸处于甘油分子的sn-2位。
“α-乳白蛋白”是指高质量的易于消化的乳清蛋白,其占总人类母乳(HBM)蛋白的20%至25%,并且是HBM中发现的主要蛋白质。α-乳白蛋白的结构由123个氨基酸和4个二硫键组成,并且该蛋白质具有14.2K道尔顿的分子量。由于α-乳白蛋白具有高含量的必需氨基酸(具体地色氨酸),所以它是低蛋白婴儿配方食品的理想选择。
术语“益生元”是指通过选择地刺激健康细菌(诸如人类结肠中的双歧杆菌)的生长和/或其活性而对宿主产生有利影响的非消化性碳水化合物(Gibson GR,RoberfroidMB.Dietary modulation of the human colonic microbiota:introducing the conceptof prebiotics.J Nutr.1995;125:1401-12)。
术语“益生菌”是指对宿主的健康或良好状态具有有益影响的微生物细胞制剂或微生物细胞组分。(Salminen S,Ouwehand A.Benno Y.等人“Probiotics:how should theybe defined”Trends Food Sci.Technol.1999:10107-10)。微生物细胞一般为细菌或酵母。
术语“cfu”应理解为菌落形成单位。
除非另外指明,否则所有百分比均按重量计。
现在开始更详细描述本发明。应当注意,本申请描述的多个方面、特征、实施例和实施方案可以相容和/或可以组合在一起。
另外,在本发明的上下文中,术语“包含”或“包括”不排除其他可能的要素。本发明(包括本文所述的多个实施方案)提到的组合物可包含下列要素、由或基本上由下列要素组成:本文所述的基本要素和必要限制,以及本文所述的任何其他或可选(或者说视需求来定)的成分、组分或限制。
本发明的详细描述
通常,即食型液体形式(例如由粉末重构)的婴儿配方食品提供60-70kcal/100ml。婴儿配方食品通常包含,每100kcal:约1.8-4.5g蛋白质;约3.3-6.0g脂肪(脂质);约300-1200mg亚油酸;约9-14g碳水化合物,所述碳水化合物选自乳糖、蔗糖、葡萄糖、葡萄糖浆、淀粉、麦芽糖糊精和麦芽糖以及它们的组合;以及必需维生素和矿物质。乳糖可为婴儿配方食品中主要的碳水化合物。例如,液体婴儿配方食品可含有约67kcal/100ml。在一些实施方案中,婴儿配方食品可包含每100Kcal约1.8-3.3g蛋白质。婴儿配方食品可为可通过加入一定量的水来重构成即喂型液体从而产生例如具有约67kcal/100ml的液体的粉末形式。
婴儿配方食品还可包含核苷酸,所述核苷酸选自胞苷5'-单磷酸(CMP)、尿苷5'-单磷酸(UMP)、腺苷5'-单磷酸(AMP)、鸟苷5'-单磷酸(GMP)和肌苷5'-单磷酸(IMP)以及它们的混合物。婴儿配方食品还可包含叶黄素、玉米黄质、低聚果糖、低聚半乳糖、唾液酸-乳糖和/或岩藻糖基-乳糖。婴儿配方食品中可包含长链多不饱和脂肪酸,诸如二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(AA)。婴儿配方食品还可包含游离氨基酸。婴儿配方食品还可以包含本领域众所周知的其他成分。
在一个实施方案中,本发明的婴儿配方食品包含每100kcal约5-6g的脂肪(甘油三酯),其中该脂肪的至少约7.5重量%(例如约7.5重量%至12.0重量%)由处于甘油三酯sn-2位的棕榈酸组成。在一些实施方案中,脂肪的约7.8重量%至11.8重量%、约8.0重量%至11.5重量%、约8.5重量%至11.0重量%或约9.0重量%至10.0重量%为位于甘油三酯的sn-2位的棕榈酸。
在一些实施方案中,按重量计,棕榈酸占配方食品的总脂肪酸含量的约15%至约25%,诸如约15%至约20%,并且总棕榈酸含量的至少约30%(例如,约35%)至约43%位于sn-2位。
在一些实施方案中,婴儿配方食品还包含比率为约6至约1的至少一种ω6脂肪酸和至少一种ω3脂肪酸。在一个实施方案中,至少一种ω6脂肪酸占总脂肪酸的约10重量%至约15重量%,并且至少一种ω3脂肪酸占总脂肪酸的约1.2%至约3.6%。在一些实施方案中,婴儿配方食品包含至少一种以总重量的约2%至约4%存在的ω6脂肪酸和至少一种以总重量的约0.3%至约0.6%存在的ω3脂肪酸。
本发明的婴儿配方食品中的脂肪包括在牛奶和/或婴儿配方食品中常见的各种甘油三酯。甘油三酯中最常见的脂肪酸残基为棕榈酸和油酸。除了存在的油酸和棕榈酸之外,脂肪酸残基包括但不限于亚油酸、α-亚麻酸、月桂酸、肉豆蔻酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸。
最近的婴幼儿临床研究已经表明,含有比率为约6至约1的至少一种ω6脂肪酸和至少一种ω3脂肪酸的营养配方食品增加了红细胞和血浆中DHA的吸积。ω6脂肪酸与ω3脂肪酸的约6:1的平衡比率也可以提供长期的健康益处,包括对心血管疾病的保护。这种平衡将通过用具有ω6脂肪酸含量的植物油脂肪源(诸如例如,大豆油和葵花油)和ω3脂肪酸含量(例如,油菜籽、卡诺拉、亚麻籽、奇亚(chia)、紫苏属或核桃)配制本发明来实现。将使用具有5种不同油的独特脂肪共混物来实现改性的脂肪共混物。
在一个实施方案中,本发明的婴儿配方食品包含每100kcal约1.8g至约2.2g的总蛋白质,例如每100kcal约1.8g至约2.1g、或约1.9g至约2.1g蛋白质,其中约0.3g/100kcal至约0.4g/100kcal的蛋白质是α-乳白蛋白。本发明的婴儿配方食品可为即喂型液体的形式,或者可为可通过加入一定量的水来重构成即喂型液体从而产生具有约67kcal/100ml的液体的液体浓缩物或粉末状配方食品。本发明的婴儿配方食品包含美国或欧盟法律要求的所有成分,包括但不限于某些维生素、矿物质和必需氨基酸。它还可以包含核苷酸(诸如CMP、UMP、AMP、GMP和IMP)、叶黄素、玉米黄质和本领域已知的其他成分。
低聚果糖(OF)
本发明的婴儿配方食品可包含每100kcal的组合物至少约0.4g或至少0.7g的低聚果糖。在一些实施方案中,其含有每100kcal约0.4g至约0.9g、约0.4g至约0.7g、约0.4g至约0.5g、约0.7g至约0.8g、或约0.7g至约0.9g低聚果糖。
在一些实施方案中,低聚果糖具有2至10的聚合度。在一些实施方案中,低聚果糖的至少80%、90%、95%、99%或100%具有2至8(介于2和8之间)的聚合度。
在一个实施方案中,本发明的组合物包含:
-当组合物为即饮型液体组合物时,至少3g/L或至少5g/L的低聚果糖(OF),或者
-当所述营养组合物为粉末状或浓缩组合物时,足够量的低聚果糖,以在重构组合物中分别获得至少3g/L或5g/L的低聚果糖。
在一些实施方案中,本发明的营养组合物包含至少0.4g OF/100kcal组合物,或至少0.7g、或至少0.75g、或至少0.8g或至少0.9g OF/100kcal组合物。
从实施例所示的结果来看,普遍认为高量的低聚果糖递送更强的作用。低聚果糖的有益作用可能存在上限;然而,如果不存在则会产生不利的副作用。这种上限可为例如2.2g/100kcal、2.0g/100kcal、1.8g/100kcal、1.5g/100kcal或1.2g/100kcal。优选地,本发明的组合物包含5g OF/L组合物或0.75g或0.9g OF/100kcal组合物或至少这种量。
健康效应
本发明的组合物对受试者婴儿或幼儿的微生物群具有积极影响。这种积极影响的特征在于致病性细菌生长的下调、减少或抑制。这种致病性细菌可天生位于肠道中,或者可具有外源性来源。
这种生长的下调、减少或抑制可例如通过粪便的分析来测量。可优选地在4周大、8周大、12周大、16周大或24周大时测量这种生长的下调、减少或抑制。例如,通过与喂食不包含本发明中存在的低聚果糖的常规营养组合物(例如婴儿配方食品)的婴幼儿的肠道微生物群相比较来评估这种生长的下调、减少或抑制。
本发明的组合物对各种各样的致病性肠道细菌具有总体影响。在本发明的各种实施方案中,生长的下调、减少或抑制对肺炎克雷伯氏菌和/或大肠杆菌和/或肠致病性大肠杆菌和/或艰难梭菌和/或产气荚膜梭菌以及总测量的病原体是特别有效的(可见/可测量)(见图)。
通过下调、减少和/或抑制致病性细菌种群的生长,本发明的组合物提供了积极的健康效应并有助于诱导和维持健康的肠道微生物群。这种健康的肠/肠道微生物群最终与恰当的营养物质吸收、充分生长、较少绞痛、较少腹泻和最好的肠道健康关联。
本发明的效应可为预防性的(例如避免肠道微生物群不平衡、避免肠道感染、维持健康的肠道微生物群、诱导健康的肠道微生物群)或具有疗效的(当健康的肠道微生物群受损时进行修复、帮助消除或减少肠/肠道中的致病性种群、在由于例如腹泻或感染引起的损伤后诱导健康的微生物群)。
在一个实施方案中,本发明的组合物的特征在于,在微生物群上观察到的健康效应(即,下调、减少或抑制婴儿或幼儿的肠道中致病性细菌的生长)还使得肠道微生物群类似于或更类似于仅母乳喂养的婴儿或幼儿的微生物群(当与用常规组合物-即不含本发明的必需特征物质(例如不含低聚果糖)的组合物喂养的婴幼儿的微生物群相比时)。据了解,诱导与母乳喂养的婴幼儿的肠道微生物群相似/类似的肠道微生物群是有益的,因为人类母乳代表婴幼儿营养的黄金标准。
目标婴幼儿
在一个实施方案中,婴儿或幼儿为足月生产的。所有婴幼儿均可从本发明中受益,因为所有婴幼儿在某一年龄可能或可能会容易获得不平衡的肠/肠道微生物群。在一个实施方案中,婴儿或幼儿为未足月生产的(早产)。在一个实施方案中,婴儿或幼儿为经阴道分娩的。在一个实施方案中,婴儿或幼儿为经剖腹产分娩的。可以预见的是,本发明的组合物对于可能受损的肠道微生物群或脆弱的婴幼儿(诸如早产婴幼儿和/或经剖腹产出生的婴幼儿)可能更有利。还可以预见的是,本发明的组合物对于在出生后例如出生后的头4周内显示有肠道疾病(诸如腹泻、感染或绞痛)的婴幼儿可能甚至更有益处。
在本发明的实施方案中,婴幼儿为早产出生的或经剖腹产出生的,或者表现出不平衡或异常的肠道微生物群,或者患有肠道感染;任选地,当婴幼儿为0-6个月大时,所述以上病症是本发明的组合物的目标。不受理论的约束,据信年龄较小的婴幼儿从本发明中获益甚至更多,尤其是当婴幼儿具有(或有风险具有)“不平衡的肠道微生物群”和/或具有脆弱的健康状况时(如上述条件所例示)。
在一个实施方案中,婴儿和幼儿为0至6个月大、或0至12个月大或0至36个月大。可以预见的是,本发明的组合物对于刚出生(0至4周或0至8周)的婴儿可能更有利,因为它们的肠管可能更脆弱。
呈现以下实施例以说明本发明的某些实施方案和特征,但不应理解为限制本发明的范围。
预期喂食方案:
在一个实施方案中,本发明的组合物在2、4、8、12周期间或在至少2、4、8、12周期间喂食给婴儿或幼儿(或预期喂食或指导喂食)。在优选的实施方案中,在婴幼儿出生后的头4、8或12周期间喂食(或预期喂食或指导喂食)。据信早期开始(在出生时或接近出生时)更倾向于产生预期的效应。
蛋白质/α-乳白蛋白
本发明的组合物包含蛋白质源。这种蛋白质源可例如提供介于1.6g/100kcal和3g/100kcal之间的蛋白质。在专用于早产儿的一个实施方案中,该量可介于2.4g/100kcal和4g/100kcal之间,或大于3.6g/100kcal。在一个实施方案中,该量可低于2.0g/100kcal,例如量低于1.8g/100kcal。
只要满足必需氨基酸含量的最低要求并确保令人满意的生长,并认为蛋白质的类型是对本发明最紧要的。然而,特定的蛋白质可向微生物群提供最适合的底物。因此,可使用基于乳清、酪蛋白以及它们的混合物的蛋白质源,也可使用基于大豆的蛋白质源。就所关注的乳清蛋白而言,蛋白质源可基于酸乳清或甜乳清或它们的混合物,并且可包含任何所需比例的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。
优选地,蛋白质源主要是乳清(50%以上的蛋白质源于乳清蛋白)。在一个实施方案中,组合物的蛋白质为完整蛋白质,或大部分(90%以上)为完整蛋白质。
该蛋白质可为完整的或水解的,或为完整蛋白质和水解蛋白质的混合物。所谓术语“完整的”是指蛋白质的主要部分是完整的,即分子结构未发生改变,例如至少80%的蛋白质未发生改变,诸如至少85%的蛋白质未发生改变,优选地,至少90%的蛋白质未发生改变,甚至更优选地,至少95%的蛋白质未发生改变,诸如至少98%的蛋白质未发生改变。在一个具体实施方案中,100%的蛋白质未发生改变。
术语“水解的”是指在本发明的上下文中,蛋白质已被水解或分解成其组成氨基酸。
该蛋白质可为完全水解的或部分水解的。例如,对于被认为处于发生牛的乳汁变态反应风险的婴幼儿而言,提供部分水解的蛋白质(水解程度介于2%和20%之间)可能是期望的。如果需要水解的蛋白质,则可根据需要并且如本领域已知的那样进行水解过程。例如,可通过在一个或多个步骤中对乳清级分进行酶法水解来制备乳清蛋白水解产物。如果用作原料的乳清级分基本上不含乳糖,则发现该蛋白质在水解过程中经受少得多的赖氨酸封闭(lysine blockage)。这使得能够将赖氨酸封闭的程度从约15重量%的总赖氨酸降至低于约10重量%的赖氨酸;例如约7重量%的赖氨酸,这大大提高了蛋白质源的营养质量。
在一个优选的实施方案中,该组合物中的蛋白质为水解的、完全水解的或部分水解的。蛋白质的水解度(DH)可介于8和40之间,或介于20和60之间,或介于20和80之间,或大于10、20、40、60、80、90。应当理解,水解蛋白可对变态反应产生多种效应:水解蛋白可能更不容易引起变态反应,因此更不容易触发免疫变态反应。水解蛋白,特别是小分子肽(氨基酸数量少于20、10或5个)可诱导口服耐受性,从而影响受试者将来的变态反应状态。应当理解,水解蛋白可通过提供双重效应有利地与本发明的岩藻糖基化低聚糖组合,该效应可能是通过在过敏症状或过敏状态的建立中以至少两个不同的水平起效而实现的协同效应。
在本发明的一个实施方案中,至少70%的蛋白质被水解,优选地,至少80%的蛋白质被水解,诸如至少85%的蛋白质被水解,甚至更优选地,至少90%的蛋白质被水解,诸如至少95%的蛋白质被水解,具体地至少98%的蛋白质被水解。在一个具体实施方案中,100%的蛋白质被水解。
在一个实施方案中,水解蛋白是蛋白质的唯一来源(即,100%或至少90%的蛋白质被水解)。
在一个实施方案中,水解蛋白是蛋白质的主要来源(即,至少50%、优选地60%的蛋白质被水解)。
在一个实施方案中,本发明的营养组合物包含至少0.2g/100kcal或0.3g/100kcal或0.4g/100kcal或者至少1.7g/L、或2.0g/L或2.3g/L或2.6g/L的量的α-乳白蛋白。据信存在一定量的α-乳白蛋白通过向微生物群提供足够的营养底物来增强低聚果糖的效应。
另外的益生元:
本发明的组合物还可包含另外的非消化性低聚糖(例如益生元)。其量通常介于组合物重量的0.3%和10%之间。
益生元通常是非消化性的,在这个意义上来讲,它们在胃或小肠中是不能被分解和吸收的,因而它们通过胃和小肠到达结肠时可保持完整,在结肠处通过有益细菌选择性地发酵。益生元的示例包括某些低聚糖,诸如低聚果糖(FOS)和/或低聚半乳糖(GOS)。可使用益生元的组合,诸如90%的GOS与10%的短链低聚果糖。益生元的另一种组合是70%的短链低聚果糖和30%的菊粉(=长链FOS)。这两者以及低聚果糖(OF)都可商购获得,具体地从BENEO公司(德国曼海姆马克西姆大街68165号Beneo GmbH公司(Beneo GmbH,Maximilianstrasse,68165,Mannheim,Germany))商购获得。
优选的营养组合物基质:
根据本发明的组合物可为合成营养组合物。其可为婴儿配方食品、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、强化剂(诸如人乳强化剂)或补充剂。优选地,本发明的组合物是专用于不满4个月或不满6个月婴儿的婴儿配方食品或强化剂或补充剂。
脂肪/高sn-2棕榈酸酯:
在一个实施方案中,营养组合物包含具有高sn-2棕榈酸酯的甘油三酯,优选地在sn-2位具有超过33%的棕榈酸的甘油三酯。
在一个实施方案中,本发明的婴儿配方食品包含每100kcal约5g至6g的脂肪(甘油三酯),其中该脂肪的至少约7.5重量%(例如约7.5%至12.0%)由位于甘油三酯的sn-2位的棕榈酸组成。
在一个实施方案中,本发明的组合物包含的至少7.5%、优选地8%、更优选地至少9.6%的脂肪是sn-2棕榈酸酯。
在一些实施方案中,脂肪的约7.8重量%至11.8重量%、约8.0重量%至11.5重量%、约8.5重量%至11.0重量%或约9.0重量%至10.0重量%是位于甘油三酯sn-2位的棕榈酸。
在一些实施方案中,按重量计,棕榈酸占配方食品的总脂肪酸含量的约15%至约25%,诸如约15至约20%,并且总棕榈酸含量的至少约30%,例如,约35%至约43%位于sn-2位。
在一些实施方案中,婴儿配方食品还包含比率为约6至约1的至少一种ω6脂肪酸和至少一种ω3脂肪酸。在一个实施方案中,至少一种ω6脂肪酸占总脂肪酸的约10重量%至约15重量%,并且至少一种ω3脂肪酸占总脂肪酸的约1.2%至约3.6%。在一些实施方案中,婴儿配方食品包含至少一种以总重量的约2%至约4%存在的ω6脂肪酸和至少一种以总重量的约0.3%至约0.6%存在的ω3脂肪酸。
本发明的婴儿配方食品中的脂肪包括在牛奶和/或婴儿配方食品中常见的各种甘油三酯。甘油三酯中最常见的脂肪酸残基是棕榈酸和油酸。除了存在的油酸和棕榈酸之外,脂肪酸残基包括但不限于亚油酸、α-亚麻酸、月桂酸、肉豆蔻酸、二十二碳六烯酸和花生四烯酸。
由脂类营养公司出售的可商购获得的组合物是BetapolTMB-55,其为来源于植物油的甘油三酯混合物,其中至少54%的棕榈酸位于甘油分子的sn-2位。在一个实施方案中,本发明组合物的脂肪含量为约40重量%至50重量%(例如约43重量%至约45重量%)的BetapolTMB-55。本领域的技术人员将了解,在不脱离本发明的实质和范围的情况下,配方食品中所使用的高sn-2脂肪的百分比以及sn-2棕榈酸酯的总量可以有所变化,并且可使用不同的高sn-2棕榈酸酯油。
尽管用含有高百分比的sn-2棕榈酸酯的配方食品喂养婴幼儿有助于产生较软的粪便和结肠中双歧杆菌的生长,但高sn-2棕榈酸酯与低聚果糖的组合提供了显着优越的粪便软化,同时诱导最佳的肠道微生物群平衡以及增强喂养配方食品的婴幼儿结肠中致病性细菌的下调。
实施例1:
在以下实验结果中,所使用的婴儿配方食品如下。组合物3和组合物4是本发明的实施例。
1.对照配方食品(不是本发明的组合物),编码为“对照配方食品”。
作为即喂型液体婴儿配方食品,对照配方食品具有670kcal/L。成分如下所示:
对照配方食品还包含必需氨基酸、矿物质和微量元素、核苷酸,以及常用于婴儿配方食品中的各种任选成分和食品添加剂。
2.高sn-2配方食品(不是本发明的组合物),编码为“sn-2配方食品”。
该配方食品与对照配方食品相同,不同的是脂肪的9.6重量%是sn-2棕榈酸酯。这是通过使用含57%植物油和43%的BetapolTMB-55(其中棕榈酸的约55%位于sn-2位)的脂肪来实现的。(Betapol可从荷兰的Loders Croklaan公司(Hogeweg 1,1521AZ Wormerveer,P.O.Box 4,1520AA Wormerveer)商购获得)
3.高sn-2+低聚果糖配方食品A(本发明的组合物),编码为“sn-2+3g/L OF配方食品”。
该配方食品与高sn-2配方食品相同,不同的是它包含3.0g/L(0.4g/100kcal)的低聚果糖。
(注意,本发明组合物的另一个实施例是不含Betapol成分(其使得脂肪的9.6重量%为sn-2棕榈酸酯))的相同配方食品
4.高sn-2+低聚果糖配方食品B(本发明的组合物),编码为“sn-2+5g/L OF配方食品”。
该配方食品与高sn-2配方食品相同,不同的是它包含5.0g/L(0.7g/100kcal)的低聚果糖。
(注意,本发明组合物的另一个实施例是不含Betapol成分(其使得脂肪的9.6重量%为sn-2棕榈酸酯)的相同配方食品
组合物(1)“对照配方食品”、(2)“sn-2”配方食品、(3)“sn-2+3g/L OF配方食品”和(4)“sn-2+5g/L OF配方食品”成分的详细列表在下表1中给出。
表1:组合物汇总
实施例2:临床研究
设计与总体概述
这项研究是配方食品喂养的婴幼儿(n 300)和非随机HM喂养的参照组(n 75)的八周随机、对照、双盲临床试验。该研究包括3次临床访视(基线、第4周和第8周)和3次电话随访(第2周、第6周,以及最后一次临床访视2周后的研究后电话随访)。在基线访视时,收集参与者的人口统计学特征和住户特征。本研究的重点在于每组包括32至40名婴幼儿的婴幼儿亚组(n 183),这些婴幼儿在基线(研究第1天)和第8周提供粪便样本以分析排泄物微生物群组成和微生物代谢活性的参数(包括pH和有机酸)。
该研究于2009年4月和9月期间在菲律宾文珍俞巴市的文珍俞巴健康中心(Mutinlupa Health Centre,Mutinlupa City)进行。本研究根据“赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)”中主张的指导方针进行,并且涉及人类受试者/患者的所有程序均经菲律宾国家道德委员会和食品药品管理局(the Bureau of Food and Drug)批准。由每位婴幼儿的父母或法定监护人签署书面知情同意书。
参与者
根据菲律宾参照标准,招募健康、足月(妊娠期37至42周)、年龄7至14天、年龄标准体重≥第5百分位的单胎婴儿。要求婴幼儿只食用和耐受以牛乳汁为基础的婴儿配方食品以符合配方食品喂养组的资格,或者只食用HM以符合HM喂养组的资格。鼓励母亲进行母乳喂养,只有在母亲作出仅使用配方食品喂养的决定之后,才可以参与配方食品研究组。
排除目前正在接受或已经接受可能潜在影响研究终点的药物的婴幼儿;这些药物包括已知或怀疑会影响脂肪消化、吸收和/或代谢(例如胰酶)的任何药物;任何维生素和/或含钙的矿物质补充剂;栓剂、含铋药物、草药补充剂或可以中和或抑制胃酸分泌的药物。此外,排除目前正在接受或已经接受任何抗生素或抗真菌药物(局部除外)的婴幼儿,并且排除其母亲产后目前正在接受或已接受这些药物的HM喂养的婴幼儿。
当达到样本量目标时,停止招募。当最终受试者完成所有的方案要求或退出研究时,试验结束。
喂食研究
将配方食品喂养的婴幼儿随机分组以接受4个配方食品中的任意1个(即与实施例1的组合物类似的组合物):1.以牛乳为基础、乳清为主的富含α-乳白蛋白的含100%植物脂肪共混物(爱尔兰阿斯基顿市惠氏营养品公司S-26GOLD(S-26GOLD,Wyeth Nutrition,Askeaton,Ireland))的足月婴儿配方食品,(“对照”);2.高sn-2棕榈酸酯配方食品(将对照配方食品修改为含有60%植物脂肪共混物和40%高sn-2棕榈酸酯脂肪共混物[荷兰沃尔默费尔市Loders Croklaan公司的BetapolTM(BetapolTM,Loders Croklaan,Wormerveer,theNetherlands)])(“sn-2”);3.补充有3.0g/L OF(比利时蒂嫩市BENEO-ORAFTI公司的P95(P95,BENEO-ORAFTI,Tienen,Belgium))的高sn-2棕榈酸酯配方食品(“sn-2+3g/L OF”);4.补充有5.0g/L OF(P95)的高sn-2棕榈酸酯配方食品(“sn-2+5g/L OF”)。研究配方食品以粉末状形式生产,并且除了单个包装数量外,均以相同的方式包装。关于配方食品制备和储存的说明以英文和菲律宾文两种在配方食品标签上提供。所有研究配方食品都符合对婴儿配方食品的食品法典委员会营养需求(Codex Alimentariusnutritional requirements)。先前已经描述了这些配方食品的营养成分。使用经验证的随机化软件进行随机化,并且将婴幼儿以大约相同的数量分配到4组配方食品组中的每一组中,如下:75名婴幼儿到对照配方食品组,74名婴幼儿到sn-2配方食品组,76名婴幼儿到sn-2+3g/L OF配方食品组,并且75名婴幼儿到sn-2+5g/L OF配方食品组。任意喂养的HM喂养婴幼儿(n 75)纳为非随机参照组。
排泄物微生物群和生物化学分析
在基线(研究第1天)和第8周临床访视时收集婴幼儿亚组的粪便样品。父母或法定监护人同意收集这些样品。研究人员使用附接到无菌聚丙烯小瓶盖内部的勺子在临床上收集至少3g新鲜排放的粪便,并立即储存在-20℃的冷冻箱中。冷冻样品用干冰运输到荷兰埃德市荷兰乳品研究所(NIZO Food Research B.V.)。
使用荧光原位杂交(FISH)分析来测定细菌种群的浓度。如前所述将样品在多聚甲醛中固定过夜并储存,然后用干冰运输到荷兰格罗宁根市格罗宁根大学医学中心医学微生物学系进行FISH分析以与Lab158探针杂交,如其他地方所述,用溶菌酶和脂肪酶预处理样品以使革兰氏阳性细胞壁透化。通过自动化方法进行定量测定;使用累积CV来评估自动计数的质量。如果累积CV高于15%,则对样本进行重新计数。排泄物细菌群数据报告为log10转换计数/g粪便湿重。
为了进一步研究排泄物细菌群中所发现的变化,对特定排泄物细菌病原体进行探索性分析。使用市售的试剂盒进行实时PCR检测。目标包括:肺炎克雷伯氏菌、艰难梭菌(毒素B)和产气荚膜梭菌(所有菌株)(英国南安普敦市PrimerDesign公司(PrimerDesign,Southampton,United Kingdom))和肠致病性大肠杆菌(EPEC)(中国上海市上海之江生物科技有限公司)。排泄物细菌病原体数据表示为log10转换基因拷贝数计数/g粪便湿重。
如前所述通过HPLC测定排泄物有机酸,并表示为μmol/g粪便湿重。每种排泄物有机酸的检测下限根据样品基质中该酸的背景读数而变化,范围为40μg/g粪便湿重至400μg/g粪便湿重。所分析的所有酸的CV范围为3.2%至5.0%。通过在每次运行中包括含有不同浓度的主要有机酸的两个标准样品来实现质量控制。
统计分析
使用SAS软件8.2版本或更高版本(美国北卡罗来纳州)进行数据分析。
并非5个喂养组中所有可能的成对比较都是研究的重点。主要关注的比较包括接受对照配方食品组与接受三个实验配方食品组中的每一组之间的比较(仅sn-2、sn-2+3g/LOF和sn-2+5g/L OF),以及HM喂养的婴幼儿与四组配方食品喂养的婴幼儿中的每一组之间的比较。使用协方差分析(ANCOVA)和模型中包括的基线值和分娩类型(阴道分娩或剖腹产)分析配方食品喂养的婴幼儿中排泄物细菌群的数据(来自FISH方法),然后比较从ANCOVA获得的从基线到第8周的调整平均变化。使用上述类似的ANCOVA模型,在第8周进行单独的分析,将每个配方食品组与HM喂养的婴幼儿组进行比较。这些分析中的每一者产生配方食品组和HM组的调整平均值,因此计算总共4种不同的HM调整平均值。取决于成对比较中所涉及的配方食品喂养组,HM喂养组的调整平均值略有不同,以及与HM喂养组比较的P值表示所指的配方食品喂养组的调整平均值与适合于该比较的HM喂养组的调整平均值之间的差异。以对数转化值对排泄物细菌群进行分析。
以类似于上述排泄物细菌群的数据的方式分析粪便细菌病原体计数(来自qPCR方法)的数据。以对数转换值以及对数转换值的等级对排泄物细菌病原体进行分析。在这两种情况下,模型中均以基线值作为协变量以及分娩类型作为一个因素进行协方差分析(注:对于4种病原体中的3种,大多数报告的值为0。为了便于分析,所有0值都被设置为1,因为不能计算0的对数)。两项分析的结果类似;然而,优选基于等级的分析,因为即使在对数转换之后数据也不是正态分布的。因此,所呈现的细菌病原体数据表示基于等级的对数转换病原体计数和P值。
排泄物微生物群的PP群体(n 170)由以下人群组成:在研究期间仅接受研究配方食品的配方食品喂养的婴幼儿或仅喂食HM的HM喂养的婴幼儿;通过第8周完成所有研究访视的婴幼儿;在第8周有用于终点分析的可用测量结果的婴幼儿;以及没有任何重大协议违反行为的婴幼儿(例如,符合纳入和排除标准的婴幼儿)。如果婴幼儿接受了可能潜在影响研究终点的药物(以上列出),则将其从PP分析群体中排除,如果婴幼儿在接受母乳喂养时其母亲使用了这些药物,则这些曾接受过母乳喂养的HM喂养的婴幼儿和配方食品喂养的婴幼儿也被排除在外。在非盲性研究之前,确定婴幼儿是否违反了方案并被排除在PP分析之外。对EA和PP群体都进行统计分析。排泄物细菌群的结果在两种群体中类似,对于几乎所有(4例除外)的比较和参数都具有统计学意义和一致结论。由于这些发现排除接受了可能影响研究终点的禁用药物(包括抗生素)的婴幼儿,所以本文出示了来自PP分析群体的结果。示出了在EA和PP群体中不同的4种比较结果。由于细菌病原体分析是在对细菌群差异探索分析(在PP和EA中类似)之后进行的,并且由于细菌种类可能对抗生素的影响敏感,所以这些分析仅在PP群体中进行。所有的统计测试都是双侧的。统计显著性水平为0.05。
结果
研究人群
在原始研究中,三百名配方食品喂养的婴幼儿随机接受对照、sn-2、sn-2+3g/L OF或sn-2+5g/L OF。招募了75名HM喂养的婴幼儿。目前的分析示出了在基线和第8周收集有粪便样本的170名婴幼儿亚组,其组成了PP分析群体(每个喂食组30至37名用于排泄物细菌群以及排泄物pH和有机酸分析,每个喂食组具有足够样本的23至27名用于排泄物细菌病原体分析)。总体而言,尽管HM喂养的婴幼儿稍年轻、更可能通过阴道分娩出生并且不太可能是男性或头胎,参与不同喂养组的婴幼儿在各种基线特征方面基本相似。与完整研究的375名婴幼儿相比,参与亚组的婴幼儿在基线特征方面没有显著差异。总体而言,每个喂养组中在第8周具有可检测水平的排泄物病原体的婴幼儿的比例范围为:肺炎克雷伯氏菌,81%至100%;EPEC,19%至54%;艰难梭菌,0%至15%;产气荚膜梭菌,8%至40%。
研究结果如图1、图2、图3、图4和表2所示。在附图中报道了各种细菌种群的计数(作为相对于基线的变化,即研究第1天的种群)。报告了4组的种群计数:“对照”(不是本发明的组合物)、“sn-2”(不是本发明的组合物)、“sn-2+3g/L OF”(本发明的组合物)和“sn-2+5g/L OF“(本发明的组合物)。当存在时,统计意义上的显著差异由P值表示。在表2中,将各种细菌种群的计数报告为第8周的值(即研究结束时的种群)。报告了4组的种群计数:“sn-2”(不是本发明的组合物)、“sn-2+3g/L OF”(本发明的组合物)、“sn-2+5g/L OF”(本发明的组合物)和HM(婴幼儿喂食被认为是婴幼儿营养中“黄金标准”的人类母乳,不是本发明的组合物)。
图1(a)和图2(f)说明本发明的作用对潜在致病性细菌群(尤其是肠杆菌科和梭菌属,参见图1(b)和(c))是特异性的。乳酸杆菌/肠球菌
(Lactobacillus)/(Enterococcus)计数(图1(a))以及总细菌种群(图2(f))不受4组饮食的影响。其他非致病组不受饮食的影响。
图1和图2以及图3和图4说明:
-单独的高sn-2饮食对下调、减少或抑制潜在致病性或致病性细菌种群的生长没有任何影响(参见例如图1(c)、3(b)、3(d)的“sn-2”列)。
-低聚果糖对下调、减少或抑制潜在致病性和致病性细菌种群的生长具有效应。这种效应在3g OF/L(在研究条件下不具有统计学意义)下呈现出趋势,并且在5g OF/L更显著(特别参见图4、图3(b)、图3(c)、图3(d)、图1(c)。
-该效应在肺炎克雷伯氏菌、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、艰难梭菌和产气荚膜梭菌(见图3)以及总测量的病原体(所有4种病原体的计数总和)(见图4)上表现明显。图1(c)说明对于包括许多不同的梭菌属(Clostridium)物种的梭菌属分类群的影响。
表2:喂食组在第8周时所选择的排泄物致病性细菌物种的浓度
排泄物致病性细菌数据表示为log10转换细菌浓度(基因拷贝数计数/g粪便湿重)。
显示的HM(人乳)值表示HM与配方食品组的每个成对比较的HM LS平均值的范围。
§显示的标准错误用于调整的平均值。
P值来自基于等级的ANCOVA,并且表示与HM组的成对比较。
包括大肠杆菌(EPEC)、肺炎克雷伯氏菌、艰难梭菌和产气荚膜梭菌在内的所有4种病原体的总计数。
*结果在P<0.05(与HM组相比)下具有显著差异
表2说明:
-单独的高sn-2饮食对致病性细菌种群的丰度没有任何下调影响。
-低聚果糖对致病性细菌种群的丰度有影响,使得它们在进食8周后与HM喂养的婴幼儿更相似。在3g/L OF和5g/L OF下对于产气荚膜梭菌、在5g/L OF下对于肠致病性大肠杆菌(EPEC)和总测量的病原体(所有4种病原体的计数总和)在HM喂养的婴幼儿存在这种类似的效应。在p<0.05时,这种效应在3g/L OF下显现,并且在5g/L OF下统计学可见。
因此,不受理论的约束,表2表明本发明的效应不仅在于下调/抑制致病性细菌,本发明还促进细菌种群的总体丰度更接近喂食人类母乳的婴幼儿(与用常规配方食品诸如高sn-2婴儿配方食品喂养的婴幼儿相比)。
Claims (14)
1.用于婴儿和幼儿的营养组合物,其包含:
-至少0.4g或至少0.7g低聚果糖/100kcal所述营养组合物,或者
-当所述组合物为即饮型液体组合物时,至少3g/L或至少5g/L的低聚果糖,或者
-当所述营养组合物为粉末状或浓缩组合物时,足够量的低聚果糖,以在重构组合物中分别获得至少3g/L或5g/L的低聚果糖,用于下调、减少或抑制婴儿或幼儿的肠道中致病性细菌的生长。
2.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述婴幼儿为足月生产的。
3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述婴幼儿为0至6个月大、或0至12个月大、或0至36个月大。
4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于至少90%、95%、99%或100%的所述低聚果糖具有介于2和8之间的聚合度。
5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述组合物包含具有高sn-2棕榈酸酯的甘油三酯,优选地在sn-2位具有超过33%的棕榈酸的甘油三酯。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述组合物包含脂肪,并且所述脂肪的至少8%、优选地至少9.6%为sn-2棕榈酸酯。
7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述组合物为婴儿配方食品或较大婴儿配方食品。
8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述组合物包含至少0.3g/100kcal或2.3g/L组合物的量的α-乳白蛋白蛋白质。
9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述致病性细菌为或包括肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)和/或大肠杆菌(E.coli)和/或肠致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E.coli)和/或艰难梭菌(Clostridium difficile)和/或产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述下调、减少或抑制致病性细菌的生长在婴幼儿的粪便中是可测量的,任选地可在8周大时或之后测量。
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于在出生后的头4、8、12、16或24周期间喂食或预期喂食所述组合物。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述婴幼儿是早产出生的或经剖腹产出生的,或者表现出不平衡或异常的肠道微生物群,或者患有肠道感染;任选地,所述婴幼儿为0至6个月大。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述下调、减少或抑制婴儿或幼儿的肠道中致病性细菌的生长还引起所述婴儿或幼儿的肠道微生物群比喂食不含所述低聚果糖的常规组合物的婴幼儿的微生物群更类似于仅母乳喂养的婴儿或幼儿的微生物群。
14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其特征在于所述组合物包含:
-小于1g或小于2g低聚果糖/100kcal所述营养组合物,或者
-当所述组合物为即饮型液体组合物时,小于10g/L或小于15g/L的低聚果糖,或者
-当所述营养组合物为粉末状或浓缩组合物时,足够量的低聚果糖,以在重构组合物中分别获得小于10g/L或小于15g/L的低聚果糖。
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