CN107669721A - 三七总皂苷提取方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了三七总皂苷提取方法及应用，涉及中药提取技术领域。该三七总皂苷提取方法，通过采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解后，依次将酶解物料进行水提以及多级逆流醇提，后采用大孔吸附树脂吸附处理，得到三七总皂苷。该三七总皂苷提取方法操作简便、耗时短，提取效率高，经检测三七总皂苷的得率可达80％以上，三七总皂苷的含量可达98％以上，改善了现有三七总皂苷提取方法中存在的提取时间长、提取率低的技术问题。本发明还提供了三七总皂苷提取方法的应用，为三七总皂苷的工业化提取提供依据。

Description

三七总皂苷提取方法及应用
技术领域
本发明涉及中药提取技术领域，具体而言，涉及三七总皂苷提取方法及应用。
背景技术
三七，别名山膝、金不换、田三七、田七、血参、人参三七等，为五加科人参属植物，是我国的传统珍贵药材。三七不同生长部位含有二十多种皂苷成分，主要为人参皂苷Rb1、Rg1、Rg2和少量人参皂甙Ra、Rb2、Rb和Re。现代药理研究证明三七中所含有的三七总皂苷具有多方面的药理活性，是其发挥药效的重要活性成分。
目前，常用的三七总皂苷的提取方法有水煎煮法和乙醇回流提取法，水煎煮法水煎煮过程中因三七药材含有大量的淀粉和多糖容易糊化，难于过滤。乙醇回流法耗时长、溶剂消耗量大。而且上述提取方法普遍存在提取时间长以及提取率低的问题。
有鉴于此，特提出本发明以解决上述技术问题。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种三七总皂苷提取方法，该提取方法耗时短、三七总皂苷提取率高，改善了现有提取方法中存在的提取时间长、三七总皂苷提取率低的技术问题。
本发明的第二个目的在于提供一种三七总皂苷提取方法的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供了一种三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，过滤，得到酶解物料；
(b)将酶解物料加水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的低碳醇提取多次，每次提取时间为0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，醇提取采用逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
进一步的，步骤(a)中，所述复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.05-0.3％；
优选地，步骤(a)中，所述复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.06-0.2％。
进一步的，步骤(a)中，所述复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶，所述纤维素酶、蛋白酶和果胶酶之间的质量比为(1-10):(1-10):(1-10)；
优选地，步骤(a)中，酶解的时间为2-4h，酶解的温度为35-40℃。
进一步的，步骤(a)中，酶解的同时进行超声处理，超声处理时间为0.5-1.5h。
进一步的，步骤(b)中，将酶解物料采用8-12倍的水提取0.5-2h；
优选地，将酶解物料采用9-11倍的水提取0.5-1.5h。
进一步的，步骤(c)中，所述低碳醇为碳原子数为C1-C4的低碳醇；
优选地，所述低碳醇选自甲醇、乙醇、异丙醇或叔丁醇中的一种或者至少两种的组合；
优选地，所述低碳醇为乙醇；
优选地，所述逆流提取为动态罐组式逆流提取。
进一步的，步骤(d)中，所述大孔吸附树脂的型号选自HPD-100、HPD-400、ADS-2、D101、D3520、D4020或DS-401中的一种或者至少两种的组合。
进一步的，在步骤(a)酶解之前，还包括将三七药材粉碎处理的步骤，处理后所得到的三七粗粉的平均粒径为10-500μm。
进一步的，所述三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解过程中同时超声，酶解后过滤，得到酶解物料；其中，复合生物酶占三七粗粉质量分数为0.05-0.3％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶；
(b)将酶解物料加8-12倍的水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的乙醇提取多次，每次提取时间0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，乙醇提取采用动态罐组式逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
本发明还提供了上述三七总皂苷提取方法在三七提取中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供了一种三七总皂苷提取方法，通过采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解后，依次将酶解物料进行水提以及多级逆流醇提，后采用大孔吸附树脂吸附处理，得到三七总皂苷。该三七总皂苷提取方法操作简便、耗时短，提取效率高，经检测三七总皂苷的得率可达80％以上，三七总皂苷的含量可达98％以上，改善了现有三七总皂苷提取方法中存在的提取时间长、提取率低的技术问题。
(2)本发明提供了一种三七总皂苷提取方法，在采用多级逆流低碳醇提取时，通过对于低碳醇浓度梯度的限定，使得提取体系的渗透压发生变化，有效成分含量在逐渐增加，有利于后续三七总皂苷得率的升高。
(3)本发明提供了一种三七总皂苷提取方法的应用，鉴于上述三七总皂苷提取方法的优势，使得该提取方法在三七提取技术领域具有良好的应用，为三七总皂苷的工业化提取提供依据。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
根据本发明的一个方面，提供了一种三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，过滤，得到酶解物料；
(b)将酶解物料加水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的低碳醇提取多次，每次提取时间为0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，醇提取采用逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
本发明提供的三七总皂苷提取方法，通过采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解后依次进行水提以及多级逆流醇提，后经过大孔吸附树脂吸附处理，得到三七总皂苷。其中，采用复合生物酶进行酶解，酶水解条件温和，有助于保持药效成分的原有性质，还能提高药效成分的提取率；同时，采用多级逆流醇提，可以大幅度降低醇提液的处理量，且通过多级逆流醇提时对于低碳醇浓度的限定，使得提取体系的渗透压发生变化，有效成分含量在逐渐增加，有利于后续三七总皂苷得率的升高。
具体的，作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.05-0.3％，进一步优选为0.06-0.2％，更优选为0.08-0.15％。
复合生物酶典型但非限制性的质量分数为0.05％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.15％、0.16％、0.18％、0.20％、0.22％、0.24％、0.26％、0.28％或0.30％。
采用复合生物酶，将植物组织温和分解，加速有效成分释放，提高提取率。复合生物酶的用量对于三七粗粉中有效成分的提取有直接影响，故应该控制复合生物酶的用量在合理的范围内。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶。
纤维素酶能水解结构致密的植物细胞壁，有利于细胞内三七皂苷等有效成分的溶出。果胶酶、蛋白酶能将三七中的大量淀粉、蛋白质等不溶物水解，从而增加提取率得率。采用纤维素酶、蛋白酶和果胶酶三酶联合作用对三七粗粉进行预处理，有利于三七中多种生物活性成分的提取，能够显著提高药效成分的提取率，而且操作简便易行，对设备要求不高。同时，上述复合生物酶水解条件温和，有助于保持药效成分的原有性质。
对于复合生物酶中纤维素酶、蛋白酶和果胶酶之间的用量配比也需要有一定的限定，纤维素酶、蛋白酶和果胶酶之间的质量比为(1-10):(1-10):(1-10)。纤维素酶、蛋白酶和果胶酶典型但非限制性的用量配比为1:1:1、1:2:1、1:5:1、1:8:1、1:10:1、1:2:4、1:2:5、1:2:7、1:2:10、2:1:1、4:1:1、5:1:1、8:1:1、10:1:1、1:3:8、1:3:10、5:1:5、8:1:5、10:1:5或8:1:5。
通过对复合生物酶中纤维素酶、蛋白酶和果胶酶之间的用量配比的优化，使得复合生物酶能够达到良好的酶解效果。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(a)中，酶解的时间为2-4h，酶解的温度为35-40℃，酶解时的pH为4.0-5.0；优选地，酶解的时间为2-3h，酶解的温度为37-38℃，酶解时的pH为4.2-4.8。
典型但非限制性的酶解时间为2.0h、2.5h、3.0h、3.5h或4.0h，典型但非限制性的酶解温度为35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃，典型但非限制性的酶解pH为4.0、4.2、4.4、4.5、4.6、4.8或5.0。
对酶解时间、酶解温度以及酶解pH进行优化限定，使得酶促反应速度达到较高水平。
在采用复合生物酶辅助提取过程中，各酶的种类以及配比、酶解温度、酶解时间、酶解pH等各因素的影响不是孤立的，而是相互影响的，需要从整体上考虑。
作为本发明的一种优选实施方式，酶解的同时进行超声处理。
酶解时采用适宜条件下的超声处理，可增加酶与底物的接触面积，促进酶的活力，从而有利于酶解反应的进行，进而促进有效成分的提取率。但是需要说明的是，边酶解边超声时，需要对超声时间和超声功率进行特殊限定，否则超声处理不仅不能对酶活力有提升，反而起到抑制作用。
优选地，超声处理时间为0.5-1.5h，优选为1.0-1.5h。典型但非限制性的超声处理时间例如0.5h、1.0h或1.5h。
通常情况下，频率越低，空化效应越显著，粉碎、破裂作用越强。三七在低频超声条件下提取，并不改变药物成分，且一般情况下，频率越低，有效成分提取率越高。但频率越低，空化效应越显著，对三七药材组织结构的损伤可能性就越大，可能会产生一些不利的影响。
故超声处理频率控制为20-40kHz，优选为25-40kHz，进一步优选为30-35kHz。典型但非限制性的超声处理频率为20kHz、25kHz、30kHz、35kHz或40kHz。
作为本发明的一种优选实施方式，在步骤(a)酶解之前，还包括将三七药材粉碎处理的步骤。
三七药材粉碎越细，越易悬浮在酶解液中，增加有效面积而易被复合生物酶水解，加快三七药材中有效成分的浸出。但是粉碎过细，用水提取时容易产生粘稠现象，影响提取率。故三七药材粉碎处理后的粒度应当控制在适当的范围内。
在未经粉碎处理时，三七粗粉的尺寸多处于1-10mm左右，经过粉碎处理后三七粗粉的平均粒径为10-500μm，进一步优选为50-450μm，更优选为100-400μm。三七药材粉碎处理后典型但非限制性的平均粒径为10μm、50μm、100μm、120μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm或500μm。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(b)中，将酶解物料采用8-12倍的水提取0.5-2h；优选地，将酶解物料采用9-11倍的水提取0.5-1.5h。
酶解后，将酶解物料进行水提。水的用量为酶解物料典型但非限制性的倍数为8倍、9倍、10倍、11倍或12倍，典型但非限制性的水提取时间为0.5h、1.0h、1.5h或2h。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(c)中，低碳醇为碳原子数为C1-C4的低碳醇；
优选地，低碳醇选自甲醇、乙醇、异丙醇或叔丁醇中的一种或者至少两种的组合；
但是考虑到食品安全与溶剂残留，低碳醇进一步优选为乙醇；
优选地，逆流提取为罐组式动态逆流提取。
罐组式动态逆流提取，是将两个以上的动态提取罐机组串联，提取溶媒沿着罐组内各罐药料的溶质浓度梯度逆向地由低向高顺次输送通过各罐，并与药料保持一定提取时间并多次套用。
罐组式动态逆流提取技术主要是利用了三七药材与低碳醇两相中有效成分的浓度梯度差，逐级将三七药材中有效成分扩散至起始浓度较低的低碳醇中，达到最大限度转移三七药材中有效成分的目的。
作为本发明的一种优选实施方式，步骤(d)中，大孔吸附树脂的型号选自HPD-100、HPD-400、ADS-2、D101、D3520、D4020或DS-401中的一种或者至少两种的组合。
采用大孔吸附树脂对三七中的三七总皂苷进行富集、纯化，该过程具有吸附快、吸附容量大、洗脱率高等优点，而且方法简单、树脂再生方便，为三七总皂苷的后处理提供了依据。
作为本发明的一种优选实施方式，三七总皂苷提取方法包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解过程中同时超声，酶解后过滤，得到酶解物料；其中，复合生物酶占三七粗粉质量分数为0.05-0.3％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶；
(b)将酶解物料加8-12倍的水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的乙醇提取多次，每次提取时间0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，乙醇提取采用动态罐组式逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
优选地，三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解过程中同时超声，酶解后过滤，得到酶解物料；其中，复合生物酶占三七粗粉质量分数为0.06-0.2％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶；
(b)将酶解物料加9-11倍的水提取，过滤，得到滤渣A，水提液保留；
(c)采用2-5倍30vol.％的乙醇对滤渣A逆流提取，提取时间0.5-2h，过滤，得到滤渣B，醇提液B1保留；
采用2-5倍50vol.％的乙醇提取对滤渣B逆流提取，提取时间0.5-2h，过滤，得到滤渣C，醇提液C1保留；
采用2-5倍70vol.％的乙醇提取对滤渣C逆流提取，提取时间0.5-2h，过滤，得到滤渣D，醇提液D1保留；
(d)合并水提液以及醇提液B1、C1和D1，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
通过三七总皂苷提取方法各工艺参数、步骤的限定，使得整个提取过程，耗时短，提取效率高。经检测三七总皂苷的得率可达80％以上，三七总皂苷的含量也达到98％以上。
根据本发明的另一方面，还提供了上述三七总皂苷提取方法在三七提取中的应用。
鉴于上述三七总皂苷提取方法的优势，使得该提取方法在三七提取技术领域具有良好的应用，为三七总皂苷的工业化提取提供依据。
下面结合具体实施例和对比例，对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供的一种三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解时间为2h，酶解温度为35℃，酶解pH为4.5，酶解后过滤，得到酶解物料；
其中，复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.05％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶，纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比为1:1:1；
(b)将酶解物料加9倍的水提取，过滤，得到滤渣A，水提液保留；
(c)采用5倍25vol.％的乙醇对滤渣A逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣B，醇提液B1保留；
采用5倍45vol.％的乙醇提取对滤渣B逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣C，醇提液C1保留；
采用5倍65vol.％的乙醇提取对滤渣C逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣D，醇提液D1保留；
(d)合并水提液以及醇提液B1、C1和D1，得到三七提取液，过大孔吸附树脂D101吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
实施例2
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例1的对照实验，除了两者不同之处在于复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.3％，其余与实施例1相同。
实施例3
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例1的对照实验，除了复合生物酶中纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比为5:1:2之外，其余与实施例1相同。
实施例4
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例1的对照实验，除了酶解温度为40℃之外，其余与实施例1相同。
实施例5
本实施例提供的一种三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解时间为3h，酶解温度为38℃，酶解pH为4.6，酶解后过滤，得到酶解物料；
其中，复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.1％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶，纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比为1:8:1；
(b)将酶解物料加10倍的水提取，过滤，得到滤渣A，水提液保留；
(c)采用4倍30vol.％的乙醇对滤渣A逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣B，醇提液B1保留；
采用4倍50vol.％的乙醇提取对滤渣B逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣C，醇提液C1保留；
采用4倍70vol.％的乙醇提取对滤渣C逆流提取，提取时间1h，过滤，得到滤渣D，醇提液D1保留；
(d)合并水提液以及醇提液B1、C1和D1，得到三七提取液，过大孔吸附树脂ADS-2吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
实施例6
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例5的对照实验，除了酶解过程中同时超声，超声频率为30kHz，超声时间为1h之外，其余与实施例5相同。
实施例7
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例6的对照实验，除了超声频率为20kHz之外，其余与实施例6相同。
实施例8
本实施例提供的一种三七总皂苷提取方法，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对平均粒径为8mm的三七粗粉进行酶解，酶解时间为4h，酶解温度为37℃，酶解pH为4.7，酶解过程中同时超声，频率为40kHz，超声时间为0.5h，酶解后过滤，得到酶解物料；
其中，复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.15％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶，纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比为2:1:10；
(b)将酶解物料加11倍的水提取，过滤，得到滤渣A，水提液保留；
(c)采用3倍30vol.％的叔丁醇对滤渣A逆流提取，提取时间1.5h，过滤，得到滤渣B，醇提液B1保留；
采用3倍50vol.％的叔丁醇对滤渣B逆流提取，提取时间1.5h，过滤，得到滤渣C，醇提液C1保留；
采用3倍70vol.％的叔丁醇对滤渣C逆流提取，提取时间1.5h，过滤，得到滤渣D，醇提液D1保留；
(d)合并水提液以及醇提液B1、C1和D1，得到三七提取液，过大孔吸附树脂D4020吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
实施例9
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例8的对照实验，除了步骤(a)之前，将三七药材进行粉碎处理，处理后得到三七粗粉的平均粒径为100μm之外，其余与实施例8相同。
实施例10
本实施例提供的三七总皂苷提取方法为实施例8的对照实验，除了骤(a)之前，将三七药材进行粉碎处理，处理后得到三七粗粉的平均粒径为10μm之外，其余与实施例8相同。
对比例1
本对比例为实施例1的对比实验，除了步骤(c)中采用常规的乙醇回流方法替代乙醇逆流提取之外，其余与实施例1相同。
对比例2
本对比例为实施例5的对比实验，除了步骤(a)中所采用复合生物酶为纤维素酶和蛋白酶，两者之间的质量比为1:8，其余与实施例5相同。
对比例3
本对比例为实施例5的对比实验，除了步骤(a)中所采用酶为纤维素酶，其余与实施例5相同。
对比例4
本对比例为实施例8的对比实验，除了步骤(c)中所采用的叔丁醇的体积分数依次为35vol.％、50vol.％和80vol.％之外，其余与实施例8相同。
对比例5
本对比例为实施例8的对比实验，除了步骤(c)中所采用的叔丁醇的体积分数依次为25vol.％、40vol.％和60vol.％之外，其余与实施例8相同。
为验证实施例1-10和对比例1-5的效果，特设以下实验例。
实验例1
测定实施例1-10和对比例1-5各方法提取的三七总皂苷含量以及三七总皂苷得率，具体见表1。
表1各实施例和对比例提取方法比较
样品组别 三七总皂苷得率(％) 三七总皂苷含量(％)
实施例1 84.8 98.4
实施例2 85.3 98.7
实施例3 85.2 98.8
实施例4 85.5 98.9
实施例5 85.7 99.1
实施例6 86.1 99.5
实施例7 85.9 99.3
实施例8 86.3 99.5
实施例9 86.5 99.4
实施例10 86.2 99.0
对比例1 74.6 86.1
对比例2 80.4 87.3
对比例3 76.5 86.8
对比例4 79.3 87.8
对比例5 77.9 87.5
从表1数据可以看出，本实施例1-10提供的三七总皂苷提取方法整体上要优于对比例1-5的三七总皂苷提取方法。
具体的，实施例2-4均为实施例1的对照实验。与实施例1相比，实施例2中复合生物酶的用量为实施例1中复合生物酶用量的六倍。可知，在一定范围内，复合生物酶的用量越多，酶活力越强，越有利于酶解过程的进行，从而有助于三七总皂苷得率以及三七总皂苷含量的提升。实施例3复合生物酶中的纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比与实施例1有所不同，实施例4中的酶解温度略高于实施例1的酶解温度。可见，纤维素酶、蛋白酶和果胶酶的质量比以及酶解温度对于酶解过程均会产生不同程度的影响。在酶解过程中，需要综合考虑各因素对酶活力的影响。
实施例6为实施例5的对照实验。与实施例5相比，实施例6在酶解过程中增加了超声处理步骤。由表中数据可以看出，酶解的同时进行超声处理，有利于酶解反应的进行，体现在表中即是三七总皂苷得率以及三七总皂苷含量的增加。
实施例7为实施例6的对照实验，对比可知，选择适宜的超声处理条件(超声时间、超声频率等)，有助于三七总皂苷得率以及三七总皂苷含量的进一步增加。
实施例9和实施例10均为实施例8的对照实验。与实施例8相比，实施例9和实施例10对三七药材进行超微粉处理，分别使得三七粗粉的平均粒径为100μm和10μm左右。三七粗粉粒径减小，容易被复合生物酶水解，加快三七中有效成分的浸出。但是粒径过小，用水提取时容易产生粘稠现象，影响三七总皂苷得率。
对比例1为实施例1的对比实验，对比例1未采用乙醇逆流提取，而是采用常规的乙醇回流方法。对比例1在实际提取过程中不仅会产生大量的乙醇溶剂需要再处理，而且所得到的三七总皂苷得率以及三七总皂苷含量远不及实施例1。
对比例2和对比例3均为实施例5的对比实验。与实施例5中采用的三种酶联合酶解过程不同，对比例2和对比例3中分别采用两种酶和单一酶进行酶解。由表中数据可以看出，采用三种酶联合酶解对于最终三七总皂苷得率以及三七总皂苷含量有良好的促进作用，再次说明三种酶之间存在着协同配合关系。
对比例4和对比例5均为实施例8的对比实验。三者不同之处在于步骤(c)中所采用的叔丁醇的浓度不同。由此可以看出，叔丁醇的浓度梯度应当控制在合理的范围内，才能保证有效成分的充分提取，进而促进三七总皂苷得率的提高。
综上所述，本发明提供的三七总皂苷提取方法操作简便、耗时短，提取效率高，三七总皂苷得率可达80％以上，三七总皂苷含量在98％以上，为三七总皂苷的工业化提取提供依据。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种三七总皂苷提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，过滤，得到酶解物料；
(b)将酶解物料加水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的低碳醇提取多次，每次提取时间为0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，醇提取采用逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
2.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(a)中，所述复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.05-0.3％；
优选地，步骤(a)中，所述复合生物酶占三七粗粉的质量分数为0.06-0.2％。
3.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(a)中，所述复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶，所述纤维素酶、蛋白酶和果胶酶之间的质量比为(1-10):(1-10):(1-10)；
优选地，步骤(a)中，酶解的时间为2-4h，酶解的温度为35-40℃。
4.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(a)中，酶解的同时进行超声处理，超声处理时间为0.5-1.5h。
5.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(b)中，将酶解物料采用8-12倍的水提取0.5-2h；
优选地，将酶解物料采用9-11倍的水提取0.5-1.5h。
6.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(c)中，所述低碳醇为碳原子数为C1-C4的低碳醇；
优选地，所述低碳醇选自甲醇、乙醇、异丙醇或叔丁醇中的一种或者至少两种的组合；
优选地，所述低碳醇为乙醇；
优选地，所述逆流提取为动态罐组式逆流提取。
7.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，步骤(d)中，所述大孔吸附树脂的型号选自HPD-100、HPD-400、ADS-2、D101、D3520、D4020或DS-401中的一种或者至少两种的组合。
8.根据权利要求1所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，在步骤(a)酶解之前，还包括将三七药材粉碎处理的步骤，处理后所得到的三七粗粉的平均粒径为10-500μm。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的三七总皂苷提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)采用复合生物酶对三七粗粉进行酶解，酶解过程中同时超声，酶解后过滤，得到酶解物料；其中，复合生物酶占三七粗粉质量分数为0.05-0.3％，复合生物酶包括纤维素酶、蛋白酶和果胶酶；
(b)将酶解物料加8-12倍的水提取，过滤，得到滤渣，水提液保留；
(c)将滤渣依次采用2-5倍的25-32vol.％、45-52vol.％和65-75vol.％的乙醇提取多次，每次提取时间0.5-2h，多次提取的醇提液保留，其中，乙醇提取采用动态罐组式逆流提取；
(d)合并水提液和多次醇提液，得到三七提取液，过大孔吸附树脂吸附处理，收集洗脱液，吸附脱色后干燥，即得三七总皂苷。
10.权利要求1-9任意一项所述的三七总皂苷提取方法在三七提取中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112168750A (zh) * 2020-08-31 2021-01-05 长春罗兰生物科技有限公司 一种人参皂苷提取物的制备方法及其在护肤品中的应用
CN115006585A (zh) * 2022-06-01 2022-09-06 楼天女 一种止血性能好的伤口敷料及其制备方法
CN115554217A (zh) * 2022-09-28 2023-01-03 山东华夏良子健康管理有限公司 一种消肿、祛皱的平衡霜及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1709399A (zh) * 2005-06-01 2005-12-21 浙江大学 从三七中提取皂苷类有效成分的方法
CN102100712A (zh) * 2011-02-17 2011-06-22 云南植物药业有限公司 一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法
CN102210732A (zh) * 2010-04-02 2011-10-12 文山三七研究院 一种酶处理提取鲜三七中三七总皂苷的方法
CN103933092A (zh) * 2014-04-10 2014-07-23 文山学院文山三七研究院 一种复合酶提取鲜三七中三七总皂苷的方法
CN103948659A (zh) * 2014-05-23 2014-07-30 云南维和药业股份有限公司 三七叶总皂苷的制备方法
CN104434676A (zh) * 2014-12-04 2015-03-25 文山学院文山三七研究院 一种三七浸膏粉提取工艺

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1709399A (zh) * 2005-06-01 2005-12-21 浙江大学 从三七中提取皂苷类有效成分的方法
CN102210732A (zh) * 2010-04-02 2011-10-12 文山三七研究院 一种酶处理提取鲜三七中三七总皂苷的方法
CN102100712A (zh) * 2011-02-17 2011-06-22 云南植物药业有限公司 一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法
CN103933092A (zh) * 2014-04-10 2014-07-23 文山学院文山三七研究院 一种复合酶提取鲜三七中三七总皂苷的方法
CN103948659A (zh) * 2014-05-23 2014-07-30 云南维和药业股份有限公司 三七叶总皂苷的制备方法
CN104434676A (zh) * 2014-12-04 2015-03-25 文山学院文山三七研究院 一种三七浸膏粉提取工艺

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周琳 等: "超声酶法提取三七总皂苷的研究", 《中成药》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112168750A (zh) * 2020-08-31 2021-01-05 长春罗兰生物科技有限公司 一种人参皂苷提取物的制备方法及其在护肤品中的应用
CN115006585A (zh) * 2022-06-01 2022-09-06 楼天女 一种止血性能好的伤口敷料及其制备方法
CN115554217A (zh) * 2022-09-28 2023-01-03 山东华夏良子健康管理有限公司 一种消肿、祛皱的平衡霜及其制备方法
CN115554217B (zh) * 2022-09-28 2023-11-17 山东华夏良子健康管理有限公司 一种消肿、祛皱的平衡霜及其制备方法

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