CN107653229A - 一种双酚s单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明制备了双酚S完全抗原，并将它与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，得到一株产生双酚S抗体的杂交瘤细胞株CGMCC No.14686。此细胞株分泌的单克隆抗体，对双酚S具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为0.2ng/mL)。本发明成果可用于建立食品接触材料中双酚S迁移量的免疫检测方法，具有实际应用价值。

Description

一种双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用
技术领域
本发明涉及一种双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。
背景技术
双酚S(Bis S)化学名为4，4-二羟基二苯砜，是一种重要的农药、染料、助剂的中间体，可以作为聚碳酸酯、环氧树脂、聚酯树脂、聚砜和聚醚砜的原料。被广泛用于禁止或限制双酚A使用的日常用具的制造，如食品包装材料、食品罐内衬、奶瓶和纸制品等。
随着人们对食品安全问题的关注度不断上升，在曝出双酚A的诸多问题后，许多塑料制品厂家开始用双酚S取代双酚A。但双酚S与双酚A结构相似，同属于环境雌激素类物质，可以通过包装材料迁移至食品中，对人体产生潜在危害，能影响生物体内的雌性激素，摄入过多会导致内分泌失调，同时双酚S还会导致新陈代谢紊乱从而引发肥胖。还有研究显示双酚S对淋巴细胞具有增值作用，当双酚S的浓度为2～20mg/L时，促进作用最为显著。
目前关于双酚类化合物检测方法还不成熟，需要建立一种灵敏度高的检测方法来监测双酚类化合物在食品包装材料的应用及食品中的迁移量分析。因此建立快速简便的双酚S检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是重要前提。
发明内容
本发明的目的首先是提供一株双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14686，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。由该细胞株制备的抗体对双酚S具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立双酚S的免疫学检测方法。
本发明的第二个目的在于提供一种双酚S单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCCNo.14686的双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌产生。
所述双酚S单克隆抗体的应用，用于食品接触材料检测中双酚S迁移量的分析检测。
本发明的第三个目的在于提供制备所述双酚S免疫原的方法，主要包括以下步骤：
1)合成半抗原Bis S：将4，4’-二羟基二苯砜完全溶解后，加入氢氧化钠固体，加热回流后加入4-溴丁酸甲酯，继续反应后调节pH值约3-4，TLC监测，出现少量二取代产物后淬灭反应；加入饱和食盐水充分振荡后静置分层，分去水相，有机相用无水硫酸钠干燥，静置一段时间后，过滤除掉硫酸钠，减压蒸去溶剂，粗产物经过柱色谱分离得到纯净的产物a；
将化合物a溶解，在搅拌下按比例加入KOH溶液，室温搅拌后调节反应体系pH值约为3，淬灭反应；加入饱和食盐水充分振荡后静置分层，分去水相，有机相用无水硫酸钠干燥，静置一段时间后，过滤除掉硫酸钠，减压蒸去溶剂，粗产物经过柱色谱分离得到纯净的产物b，即半抗原Bis S。
2)完全抗原的制备：
免疫原Bis S-KLH的制备：称取半抗原Bis S，1-乙基碳二亚胺盐酸盐，以及N-羟基琥珀酰亚胺，用无水N,N-二甲基甲酰胺溶解得到A液；取钥孔血蓝蛋白KLH，用硼酸缓冲溶液溶解得到B液，在室温条件，逐滴将A液加入到B液中，室温反应过夜，即得偶联物Bis S-KLH混合液，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到免疫原Bis S-KLH。
本发明的第四个目的在于提供制备所述双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株的方法，主要包括以下步骤：
(1)小鼠的免疫：将免疫原Bis S-KLH与等量弗氏佐剂混合乳化后，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠；首次免疫用完全弗氏佐剂，多次加强免疫用不完全弗氏佐剂，首次免疫与第二次加强免疫之间间隔28天，多次加强免疫之间间隔21天，最后一次用Bis S-KLH完全抗原(不含佐剂)冲刺免疫；通过间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)检测血清效价和抑制；
(2)细胞融合与细胞株建立：通过聚乙二醇(PEG 4000)法将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，通过HAT培养基培养，利用间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)检测阳性细胞孔，并进一步利用ic-ELISA测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制效果的阳性细胞孔进行三次亚克隆，最终筛选获得双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株；
(3)杂交瘤细胞株性质的鉴定：通过ic-ELISA测定灵敏度和特异性。
本发明的有益效果：本发明提供的双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，对双酚S具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为0.2ng/mL)，为检测食品接触材料中双酚S迁移量提供了免疫学方法。本发明提供的双酚S单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体可制成用于检测双酚S的试剂盒，具有实际应用价值。
生物材料保藏
一株单克隆细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14686，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1CGMCC No.14686分泌的单克隆抗体对双酚S的抑制标准曲线。
具体实施方式
本发明下面的实施例仅作为本发明内容的进一步说明，不能作为本发明的限定内容或范围。下面通过实施例对本发明作进一步说明。
本发明通过将双酚S完全抗原免疫小鼠，通过细胞融合，HAT选择性培养基培养，通过ic-ELISA筛选细胞上清，最终得到了对双酚S有较好特异性和灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株。
实施例1杂交瘤细胞株1C12的制备
(1)完全抗原的制备：
半抗原合成路线如下：
在10mL圆底烧瓶中加入1g(4.0mmoL，1eq)4，4’-二羟基二苯砜，再加入约6mL水，加热至94℃使4，4’-二羟基二苯砜溶解。待其完全溶解后，加入0.24g(6.0mmoL，1.5eq)氢氧化钠固体，加热回流1h后加入4-溴丁酸甲酯，继续反应约30h后加盐酸调节pH值约3-4。TLC监测，出现少量二取代产物后淬灭反应。反应体系用乙醚(30mL×3)萃取，所得有机相合并后加入饱和食盐水(10mL)充分振荡后静置分层，分去水相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置一段时间后，过滤除掉硫酸钠，减压蒸去溶剂。粗产物经过柱色谱分离得到纯净的产物a(产率40％)。
将0.55g(1.5mmoL，1eq)化合物a溶解在10mL甲醇中。在磁力搅拌下加入配置好的2mol/L的KOH溶液(n(KOH)：n化合物a＝6:1)，室温搅拌48h后加盐酸调节反应体系pH值约为3，淬灭反应。反应体系用乙醚(30mL×3)萃取，所得有机相合并后加入饱和食盐水(10mL)充分振荡后静置分层，分去水相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置一段时间后，过滤除掉硫酸钠，减压蒸去溶剂。粗产物经过柱色谱分离得到纯净的产物b，即半抗原Bis S。
b、称取1.2mg Bis S，1-乙基碳二亚胺盐酸盐2.2mg，N-羟基琥珀酰亚胺1.3mg，用400μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到A1液，室温搅拌反6-8h。取钥孔血蓝蛋白KLH 10mg(Bis S与KLH摩尔比为1500:1)，用4mL硼酸缓冲溶液溶解，得到B1液，在室温条件，逐滴将A1液加入到B1液中，室温反应过夜，即得偶联物Bis S-KLH(1500:1)混合液，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原；
按照以上步骤，再分别制备Bis S与KLH摩尔比为3000:1和4500:1的完全抗原，得到偶联物Bis S-KLH(3000:1)和Bis S-KLH(4500:1)。
(2)包被原Bis S-OVA的制备：
称取1.0mg Bis S，1-乙基碳二亚胺盐酸盐1.9mg，N-羟基琥珀酰亚胺1.2mg，用300μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到A2液，室温搅拌反6-8h。称取5mg鸡卵清白蛋白OVA(BisS与OVA摩尔比为30:1)，溶解于2mL硼酸缓冲溶液中，得到B2溶液，在室温条件下，逐滴将A2液加入到B2液中，室温反应过夜，即得偶联物BIS S-OVA混合液，通过透析分离包被原和未偶联的小分子半抗原。包被原用于单抗制备过程中小鼠血清效价和抑制的检测，并不直接用于小鼠，是制备单抗必需的。
(3)动物免疫：选择健康的6～8周龄的BALB/c小鼠进行免疫。取三种不同摩尔比的双酚S完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化后，通过背部皮下注射分别免疫BALB/c小鼠。第一次免疫用完全弗氏佐剂，之后都用不完全弗氏佐剂。首次免疫与第二次加强免疫之间间隔28天，多次加强免疫之间间隔21天。第三次免疫后7天采血(小鼠断尾采血5ul+995ul抗体稀释液＝抗血清)，使用ic-ELISA测定小鼠血清效价和抑制，选择效价高抑制好的小鼠，在第五次免疫后21天冲刺免疫，腹腔注射，要求冲免剂量减半且不含任何佐剂。
冲刺免疫小鼠的选择：用ic-ELISA测定小鼠血清效价和抑制率，发现当抗血清稀释倍数为27K且包被原浓度为0.1μg/mL时，用免疫原Bis S-KLH 1500:1，Bis S-KLH 3000:1和BisS-KLH 4500:1分别免疫的小鼠效价依次为1.930,1.822和1.697，加入100ppb双酚S标准品后抑制率分别为68％，56％和57％，显然，用免疫原Bis S-KLH 1500:1免疫的小鼠效价和抑制率都最高，故挑选此小鼠进行下一步实验。
(4)细胞融合：在冲刺免疫三天后，按照常规PEG(聚乙二醇，分子量为4000)方法进行细胞融合，具体步骤如下：
a、摘眼球取血，颈椎脱臼法处死小鼠后，立即放入75％酒精中消毒，浸泡5min左右，无菌操作取出小鼠的脾脏，用注射器的胶头适度研磨并通过200目细胞筛网得到脾细胞悬液，收集，离心(1200rpm，8min)，用RPMI-1640培养基洗涤脾细胞三次，最后一次离心后，将脾细胞稀释到一定体积，计数，备用；
b、收集SP2/0细胞：融合前7-10天，将SP2/0瘤细胞用含10％FBS(胎牛血清)RPMI-1640培养基在5％CO2培养箱中。融合前要求SP2/0瘤细胞数量达到1～4×107，保证融合前SP2/0瘤细胞处于对数生长期。融合时，收集瘤细胞，悬浮于RPMI-1640基础培养液中，进行细胞计数；
c、融合过程7min。第1min，将1mL的PEG 1500由慢到快滴加到细胞中；第2min，静置。第3min和第4min，在1min内滴加1mLRPMI-1640培养基；第5min和第6min，在1min内滴加2mL RPMI-1640培养基；第7min，每10s滴加1mL的RPMI-1640培养基。然后37℃温浴5min。离心(800rpm，8min)，弃上清，重悬入含20％胎牛血清，2％的50×HAT的RPMI-1640筛选培养液中，按照200μL/孔加到96孔细胞板，置于37℃，5％CO2培养箱中培养。
(5)细胞筛选与细胞株建立：在细胞融合的第3天对融合细胞进行RPMI-1640筛选培养液半换液，第5天进行用含20％胎牛血清，1％的100×HT的RPMI-1640过渡培养液进行全换液，在第7天取细胞上清进行筛选。筛选分两步：第一步先用ic-ELISA筛选出阳性细胞孔，第二步选用双酚S为标准品，用ic-ELISA对阳性细胞进行抑制效果测定。选择对双酚S标准品均有较好抑制的细胞孔，采用有限稀释法进行亚克隆，用同样的方法进行检测。重复三次，获得细胞株1C12。
(6)单克隆抗体的制备与鉴定：取8-10周龄BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射无菌石蜡油1mL；7天后每只小鼠腹腔注射1×106杂交瘤细胞，从第七天开始收集腹水，将腹水通过辛酸-硫酸铵法纯化。在偏酸条件下，正辛酸可以沉淀腹水中除IgG免疫球蛋白外的其他杂蛋白，然后离心，弃沉淀；再用等量饱和度的硫酸铵溶液沉淀IgG型的单克隆抗体，离心，弃上清，用0.01M PBS溶液(pH7.4)溶解后，透析脱盐，最终得到纯化后的单克隆抗体置于-20℃保存。
实施例2双酚S单克隆抗体的IC50的测定
碳酸盐缓冲液(CBS)：称取Na2CO31.59g，NaHCO32.93g，分别溶于少量双蒸水后混合，加双蒸水至约800mL混匀，调pH值至9.6，加双蒸水定容至1000mL，4℃贮存备用。
磷酸盐缓冲液(PBS)：8.00g NaCl，0.2g KCl，0.2g KH2PO4，2.9gNa2HPO4·12H2O，溶于800mL纯水中，用NaOH或HCl调pH到7.2～7.4，定容至1000mL；
洗涤液(PBST)：1000mL的0.01mol/L pH 7.4的PBS溶液中加入0.5mL的Tween–20；
PBST：含0.05％吐温20的PBS；
抗体稀释液：含有0.1％明胶的洗涤缓冲液；
TMB显色液：A液：Na2HPO4.12H2O 18.43g，柠檬酸9.33g，纯水定容至1000mL；B液：60mg TMB溶于100mL乙二醇中。A、B液按1:5混合即为TMB
显色液，现用现混。
(1)包被：将包被原Bis S-OVA用0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液从1μg/mL开始倍比稀释，100μL/孔，37℃反应2h。
(2)洗涤：将板内溶液倾去，并用洗涤液洗涤3次，每次3min.
(3)封闭：拍干后，加入200μL/孔封闭液，37℃反应2h。洗涤后烘干备用。
(4)加样：将抗血清(小鼠断尾采血后，以抗体稀释液稀释相应倍数后即抗血清)从1:1000开始倍比稀释，并加入到各稀释度的包被孔中，100μL/孔，37℃反应30min；充分洗涤后，加入1:3000稀释的HRP-羊抗鼠IgG，100μL/孔，37℃反应30min。
(5)显色：将酶标板取出，充分洗涤后，每孔加入100μL的TMB显色液，37℃避光反应15min.
(6)终止和测定：每孔加入50μL终止液以终止反应，然后用酶标仪测定各孔的OD450值。
用ic-ELISA测定单克隆抗体双酚S的IC50为0.2ng/mL，说明对双酚S有很好的灵敏度，可用于双酚S免疫分析检测。
我们分别测定了此双酚S单克隆抗体对结构类似物双酚A、四溴双酚A、双酚C和双酚F的交叉反应，结果表明，当双酚S抗体浓度为0.01ug/mL，且四种结构类似物均加标500ppb时，OD450nm分别为1.779,1.745,1.771和1.751，零孔值(不加标)为1.837，数值基本无变化，表明本发明制备的抗体对以上5种药物并无交叉反应。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (8)

1.一株单克隆细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14686，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种制备双酚S单克隆抗体的方法，其特征在于，由权利要求1所述单克隆细胞株分泌产生。
3.一种检测双酚S的方法，其特征在于，利用权利要求1所述单克隆细胞株自身或其分泌产生的双酚S单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的一种检测双酚S的方法，其特征在于，用于检测食品接触材料中的双酚S迁移量。
5.一种双酚S单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述单克隆细胞株分泌产生。
6.一种试剂盒，其特征在于，含有权利要求5所述双酚S单克隆抗体或权利要求1所述单克隆细胞株。
7.根据权利要求6所述的一种试剂盒，其特征在于，用于检测双酚S。
8.权利要求6或7所述试剂盒在检测双酚S中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115327097A (zh) * 2022-07-26 2022-11-11 中国海洋大学 利用金纳米花增强信号的双酚s竞争elisa试剂盒与方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105181957A (zh) * 2015-07-28 2015-12-23 广东产品质量监督检验研究院 双酚s检测试剂盒及其制备和使用方法
CN106636006A (zh) * 2016-11-01 2017-05-10 江南大学 一株罂粟碱单克隆抗体杂交瘤细胞株yh3及其应用
CN106929479A (zh) * 2017-04-26 2017-07-07 江南大学 一株维生素b2单克隆抗体杂交瘤细胞株gz‑4及其应用
CN106947742A (zh) * 2016-12-28 2017-07-14 江南大学 一株多效唑单克隆抗体杂交瘤细胞株cs12‑1及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105181957A (zh) * 2015-07-28 2015-12-23 广东产品质量监督检验研究院 双酚s检测试剂盒及其制备和使用方法
CN106636006A (zh) * 2016-11-01 2017-05-10 江南大学 一株罂粟碱单克隆抗体杂交瘤细胞株yh3及其应用
CN106947742A (zh) * 2016-12-28 2017-07-14 江南大学 一株多效唑单克隆抗体杂交瘤细胞株cs12‑1及其应用
CN106929479A (zh) * 2017-04-26 2017-07-07 江南大学 一株维生素b2单克隆抗体杂交瘤细胞株gz‑4及其应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115327097A (zh) * 2022-07-26 2022-11-11 中国海洋大学 利用金纳米花增强信号的双酚s竞争elisa试剂盒与方法

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