CN107652270A

CN107652270A - 2‑（4‑吗啉基）‑4,6‑二取代嘧啶/均三嗪类化合物及其盐和应用

Info

Publication number: CN107652270A
Application number: CN201710882868.2A
Authority: CN
Inventors: 张三奇; 汪慧岩; 曹永孝; 王瑾; 张�浩; 辛敏行; 吕社民
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2017-09-26
Filing date: 2017-09-26
Publication date: 2018-02-02

Abstract

本发明2‑(4‑吗啉基)‑4,6‑二取代嘧啶/均三嗪类化合物及其盐和应用，公开的具有2‑(4‑吗啉基)‑4‑(N‑(1‑苯甲酰基‑4‑哌啶基)氨基)‑6‑(吡啶基或嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物，为具有以下通式的化合物。其中，X和Y为N或CH；R¹为C₁‑C₃烷基；R²为氢、卤素、甲基、三氟甲基；R³为氨基、甲氧基、氰基、三氟甲基；当R²为氢、R³为氨基且Y为N时，X不为N。该类化合物及其盐类具有抑制PI3K和RAF激酶的双重活性，可同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导通路和Ras/RAF/MEK/ERK信号转导通路，抗肿瘤活性更佳。本发明还公开了通式化合物作为PI3K/RAF双重抑制剂的用途。

Description

2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶/均三嗪类化合物及其盐和应用

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物及其可药用盐和应用。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的恶性疾病之一。近30年来，我国癌症发生率正处于快速上升期，癌症发病率约为200/10万人，每年新发病例达320万例以上，死亡约270多万，在治患者700万人以上。

目前癌症的主要治疗手段仍然是手术治疗、放射治疗及药物治疗，但在很大程度上仍是以药物治疗为主。因此，研究开发新的抗肿瘤药物具有重要意义。

近年来，随着肿瘤分子生物学研究的进展，对肿瘤发病机理有了更多的认识，找到了许多抗肿瘤药物作用的新靶点，使抗肿瘤药物的发展取得许多新的成就，如发展了表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂、Bruton酪氨酸抑制剂、选择性PI3Kδ抑制剂、BRAF抑制剂等。

在多数癌细胞中，一些激酶呈现高表达或因基团突变而激活。针对这一特点，已经开发了吉非替尼、伊马替尼、埃罗替尼、索拉非尼、舒尼替尼、依鲁替尼、奥希替尼和威罗菲尼等激酶抑制剂，用作抗肿瘤药物，治疗肺癌、血癌、黑色素瘤等。但是，有些激酶抑制剂应用于临床后发现其有效率并不高，多数激酶抑制剂在患者使用一年后，肿瘤细胞会产生获得性耐药。因此，研发结构新颖的高效低毒的抗肿瘤药物具有重要意义。

细胞内信号传到是通过多通路实现的。文献报道的绝大多数激酶抑制剂是单靶点或单通路激酶抑制剂，临床效果不佳。本发明提供的化合物具有抑制PI3K和RAF激酶的双重活性，可同时阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路和Ras/RAF/MEK/ERK信号通路，抗肿瘤活性更佳。

发明内容

本发明的目的在于提供一种2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物及其可药用盐，该化合物及其盐具有抑制PI3K和RAF激酶的双重活性，可同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导通路和Ras/RAF/MEK/ERK信号转导通路，抗肿瘤活性更佳。

本发明的目的还在于提供一种2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物及其可药用盐在制备抗肿瘤药物制剂中的应用，所制备的抗肿瘤药物制剂能够为癌症的临床治疗提供更多的选择。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物，其特征在于，其结构式为：

其中，R¹为C₁-C₃的烷基；R²为氢、卤素、甲基或三氟甲基；R³为氢、氨基、甲氧基、氰基或三氟甲基；X为N或CH；Y为N或CH；

当R²为氢、R³为氨基且Y为N时，X不为N。

优选地，所述的R¹为甲基、乙基、环丙基或异丙基。

优选地，所述的R²为氢、氟、氯、甲基或三氟甲基，R²位置为所在苯环的3-位。

一种2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物的可药用盐，其中，所述可药用盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、樟脑磺酸盐、苯甲酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟乙磺酸盐、琥珀酸盐、苯磺酸盐或甲磺酸盐。

2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物或其可药用盐在制备抗肿瘤药物制剂中的应用。

优选地，所述抗肿瘤药物制剂是能够抑制PI3K活性或RAF活性的药物制剂。

优选地，所述肿瘤为PI3K或RAF高表达或突变的肿瘤。

进一步优选地，所述肿瘤为PI3Kα或BRAF高表达或突变的肿瘤。

优选地，所述抗肿瘤药物制剂为片剂、胶囊剂或注射剂，其中每片、每粒或每支制剂中含30～500mg的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物或其可药用盐。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的化合物及其盐类具有抑制PI3K和RAF激酶的双重活性，可同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导通路和Ras/RAF/MEK/ERK信号转导通路，抗肿瘤活性更佳；实验表明，该类化合物对多种人癌细胞，如人结肠癌细胞HCT116、人肺癌细胞A549、人黑色素瘤细胞A375等抗增殖的活性，强于或接近于阳性药VS-5584或威罗菲尼。

本发明提供的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或三嗪)类化合物及其盐类，可用于制备抗肿瘤药物制剂，能够为癌症的临床治疗提供更多的选择。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明是在本研究室发明专利申请(申请号：201710440104.8，发明名称：2-(5-嘧啶基)-4-吗啉基-6-取代均三嗪类化合物及其盐、制备方法和应用)的基础上，进一步以2,4,6-三取代嘧啶或三嗪为药物骨架，将PI3K抑制剂的药效团和RAF抑制剂的药效团整合到一个小分子中，获得了2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物。实验结果表明，该类化合物既有抑制PI3K的活性，又有抑制RAF激酶的活性，可同时抑制PI3K/AKT/mTOR通路和Ras/RAF/MEK/ERK通路的活性，抗肿瘤活性更佳。

本发明的目的在于提供一种2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物。该类化合物具有抑制PI3K和RAF的活性及明显的抗肿瘤活性，可应用于抗肿瘤药物制剂的制备，而且其合成原料易得、合成方法容易实现。

本发明的目的还在于提供一种2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物的合成方法、可药用盐及应用。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物，其结构式为：

其中，R¹为C₁-C₃的烷基，R²为氢、卤素、甲基或三氟甲基；R³为氨基、甲氧基、氰基或三氟甲基。X为N或CH；Y为N或CH；当R²为氢、R³为氨基且Y为N时，X不为N。

所述的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物的合成方法，包括以下三步反应：

步骤一：在碱性试剂存在下，2,4,6-三氯嘧啶或2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪与4-取代氨基-1-苯甲酰基哌啶在有机溶剂中通过亲核取代反应，得到中间体M；

步骤二：2,6-二氯-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-1,3,5-三嗪或2,6-二氯-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)嘧啶与吗啉在有机溶剂中作用，得到中间体N；

步骤三：在钯配合物催化下，中间体N与取代3-嘧啶基硼酸酯或取代5-嘧啶基硼酸酯经过Suzuki偶联，得到产物P。

其合成路线如下：

其中，所述的碱性试剂为三乙胺、二异丙基乙胺、DBU、吡啶或碳酸钾、碳酸铯；所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺；所述的钯配合物为PdCl₂(dppf)、Pd(PPh₃)₄等。

2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶或三嗪类化合物的可药用盐，结构如下：

其中，HZ表示酸。

所述可药用盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、樟脑磺酸盐、苯甲酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟乙磺酸盐、琥珀酸盐、苯磺酸盐或甲磺酸盐。

2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶或三嗪类化合物与酸在有机溶剂中搅拌，可获得其盐类。

2-(4-吗啉基)-4-(N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或三嗪)类化合物或其可药用盐在制备抗肿瘤药物制剂中的应用。

其中，所述抗肿瘤药物制剂是能够抑制PI3K或RAF的药物制剂。更进一步地，PI3K主要是指PI3Kα；RAF是指BRAF。

其中，所述抗肿瘤药物制剂可用于PI3K或RAF高表达或突变的癌症的治疗。

其中，本发明所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物或2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物的可药用盐可与其他类型的抗肿瘤药物，如直接作用于DNA的抗肿瘤药物、抗代谢抗肿瘤药、抗有丝分裂药物及EGFR抑制剂、BTK抑制剂等组成的药物复合物，获得更佳的抗肿瘤效果。

所述抗肿瘤药物制剂为片剂、胶囊剂或注射剂，其中每片、每粒或每支制剂中含30～500mg的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或三嗪)类化合物或其可药用盐。

优选地，所述抗肿瘤药物制剂为片剂或胶囊剂，每片片剂或每粒胶囊中含有50～300mg的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或均三嗪)类化合物或其可药用盐。

进一步，所述抗肿瘤药物制剂还包括辅料，辅料包括稳定剂、增溶剂、润滑剂和崩解剂中的一种或几种。进一步优选地，辅料包括淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、果胶、环糊精、土温-80、聚乙烯醇、硬脂酸镁和滑石粉中的一种或多种。

与现有技术相比，本发明提供的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或均三嗪)类化合物及其盐类具有以下有益的效果：

本发明提供的化合物及其盐类具有抑制PI3K和RAF激酶的双重活性，

可同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导通路和Ras/RAF/MEK/ERK信号转导通路，抗肿瘤活性更佳。

本发明提供的化合物及其盐类活性强。该类化合物对多种人癌细胞，如人结肠癌细胞HCT116、人肺癌细胞A549、人黑色素瘤细胞A375等抗增殖的活性，强于或接近于阳性药VS-5584或威罗菲尼。

本发明提供的化合物，合成路线简单，合成原料易得、合成方法容易实现。

本发明提供的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(吡啶基或嘧啶基)嘧啶(或均三嗪)类化合物及其盐类，可用于制备抗肿瘤药物制剂，能够为癌症的临床治疗提供更多的选择。

以下通过本发明的一些代表性化合物的合成过程和药效对本发明做进一步说明，代表性化合物的编号、结构式如下：

下面给出上述化合物合成的实施例。

实施例1：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物1)的合成

步骤一：

将丙酮(15mL)和2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(0.61g)加入圆底烧瓶，冷却到-10℃，滴加4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶(0.90g)、三乙胺(TEA，0.46mL)和丙酮(15mL)的混合物。约30分钟加完，减压除去丙酮，向残留物中加入水(10mL)，用二氯甲烷(20mL)萃取两次。萃取液用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，得到中间体M1(油状物)。

步骤二：

将中间体M1、吗啉、二异丙基乙胺及二氯甲烷加入圆底烧瓶，混合物于室温下搅拌1小时。将反应混合物直接用硅胶拌样，硅胶柱色谱分离(洗脱机：石油醚/乙酸乙酯)，得到中间体N1。两步产率约70％。

步骤三：

向2-氨基-4-嘧啶基硼酸频哪醇酯的二氧六环溶液中，依次加入中间体N1，碳酸钾，PdCl₂(dppf)，水，混合物加热回流6h，减压除去溶剂，残留物硅胶柱色谱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇)得化合物1(淡黄色固体，收率71％)。EI-MS：520(M+H)。

实施例2：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-甲基苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物2)的合成

同化合物1的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-甲基苯甲酰基)哌啶代替4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶。三步总收率44％。EI-MS：516(M+H)。

实施例3：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-三氟甲基苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物3)的合成

同化合物1的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-三氟甲基苯甲酰基)哌啶代替4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶。

三步总收率46％。EI-MS：570(M+H)。

实施例4：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物4)的合成

同化合物1的合成。用4-环丙基氨基-1-苯甲酰基哌啶代替4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶，用6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替2-氨基-4-嘧啶基硼酸频哪醇酯，合成了化合物4。三步总收率50％。EI-MS：569(M+H)。

实施例5：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物5)的合成

同化合物1的合成。用6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替2-氨基-4-嘧啶基硼酸频哪醇酯，合成了化合物5。三步总收率30％。EI-MS：587(M+H)。

实施例6：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-甲基苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物6)的合成

同化合物1的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-甲基苯甲酰基)哌啶代替4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶，用6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替2-氨基-4-嘧啶基硼酸频哪醇酯，合成了化合物6。三步总收率28％。EI-MS：53(M+H)。

实施例7：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物7)的合成

步骤一：

将乙腈(10mL)、4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶(0.50g)、2,4,6-三氯嘧啶(0.47g)和碳酸钾(0.43g)加入圆底烧瓶。混合物在搅拌下加热回流5h，减压蒸馏除去溶剂，残留物硅胶柱色谱分分离(石油醚/乙酸乙酯)，得到中间体M5(白色固体0.43g，收率51％)。

步骤二：

将乙腈(10mL)、中间体M5(0.40g)、吗啉(0.22g)和二异丙基乙胺(0.45mL)加入圆底烧瓶。混合物在搅拌下加热回流20h，减压除去溶剂，残留物硅胶柱色谱分分离(石油醚/乙酸乙酯)，得到中间体N5(白色固体0.33g，收率72％)。

步骤三：

向6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯的二氧六环溶液中，依次加入中间体N5，碳酸钾，PdCl₂(dppf)，水，混合物加热回流约6h，减压蒸馏除去溶剂，残留物硅胶柱色谱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50：1)得化合物7(淡黄色固体，收率47.4％)。EI-MS：542(M+H)。

实施例8：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基)氨基嘧啶(化合物8)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶代替4-环丙基氨基-1-苯甲酰基哌啶，合成了化合物8。三步总收率20％。EI-MS：586(M+H)。

实施例9：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基嘧啶(化合物9)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-苯甲酰基哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，合成了化合物9。三步总收率24％。EI-MS：568(M+H)。

实施例10：2-(4-吗啉基)-4-(3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氯苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物10)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-氯苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物10。三步总收率32％。EI-MS：519(M+H)。

实施例11：2-(4-吗啉基)-4-(5-甲氧基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物11)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用5-甲氧基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物11。三步总收率36％。EI-MS：533(M+H)。

实施例12：2-(4-吗啉基)-4-(5-腈基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-三氟甲基苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物12)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-三氟甲基苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用5-氰基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物12。三步总收率30％。EI-MS：558(M+H)。

实施例13：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物13)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-氟苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用2-氨基-5-嘧啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物13。三步总收率31％。EI-MS：519(M+H)。

实施例14：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氯苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物14)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-氯苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用2-氨基-5-嘧啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物14。三步总收率30％。EI-MS：535(M+H)。

实施例15：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-三氟甲基苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶(化合物15)的合成

同化合物7的合成。用4-环丙基氨基-1-(3-三氟甲基苯甲酰基)哌啶代替4-甲基氨基-1-苯甲酰基哌啶，用2-氨基-5-嘧啶基硼酸频哪醇酯代替6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基硼酸频哪醇酯合成了化合物15。三步总收率29％。EI-MS：519(M+H)。

实施例16：2-(4-吗啉基)-4-(2-氨基-5-嘧啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基嘧啶盐酸盐(化合物16)的合成

将化合物13(0.5g)溶解于四氢呋喃(10mL)，通入氯化氢气体5分钟，密封，混合物于室温搅拌过夜，抽滤，干燥的化合物16。EI-MS：519(M+H)。

实施例17：2-(4-吗啉基)-4-(6-氨基-4-三氟甲基-3-吡啶基)-6-(N-环丙基-N-(1-(3-氟苯甲酰基)-4-哌啶基))氨基-1,3,5-三嗪(化合物5)甲磺酸盐(化合物17)的合成

将化合物5溶解于四氢呋喃，加入1.2倍摩尔量的甲磺酸，混合物于室温搅拌过夜，抽滤，干燥的化合物15。EI-MS：587(M+H)。

实施例18：化合物抑制激酶活性的测定

方法：将待测定化合物分别用DMSO溶解配制成10mmol/L的母液，逐级稀释，得到浓度为1μmol/L的溶液，并将5μL待测定的不同药物或DMSO分别加入酶反应体系中。酶反应体系的组成为：40mmol/L Tris，pH 7.4，10mmol/L MgCl₂，0.1mg/mL BSA，1mmol/L DTT，10μmol/L ATP，激酶和相应的底物，反应体系的终体积为50μL，DMSO的浓度为1％。反应体系置于30℃反应40min后，加入终止液终止反应，并用荧光素酶的方法检测体系内的ATP含量，在MD-SpectraMax M5多功能酶标仪上检测化学发光信号，化学发光信号的强度与反应体系的酶的活性成反比。将检测到的化学发光信号值代入公式：

抑制率＝[1-((Lu_酶-Lu_本底)/Lu_药物-Lu_本底)]×100％

式中：Lu_药物表示给药组，Lu_本底表示空白组(不加酶不加药)，Lu_酶表示溶剂对照组。

在浓度为100nmol/L时，化合物对两种激酶抑制活性见表1。

表1.化合物对PI3Kα和B-RAF^V600E的抑制率(％)

“-”表示未测定。

实施例17：化合物体外抗肿瘤活性的验证

为了验证本发明合成的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪及其盐的抗肿瘤活性，以VS-5584和威罗菲尼为阳性对照药物，采用体外MTT法测定了化合物1-15对人肺结肠癌细胞HCT116、人肺癌细胞A549及人黑色素瘤细胞A375生长抑制作用。

验证方法：将肿瘤细胞HCT116(或A549、A375)培养在含10％小牛血清的RPMI1640培养基中，内含青霉素有100U·mL^-1，链霉素100μg·mL^-1，于37℃、5％CO₂培养箱中传代培养。取0.3％胰酶消化贴壁的肿瘤细胞，含10％小牛血清的RPMI1640培养液配制细胞悬液，浓度为6×10³个细胞/毫升。于96孔培养板内每孔接种200μL(约含1000个肿瘤细胞)，37℃培养24h。给药组加入不同药物，每药设定的浓度为1.0μmol·L^-1，每组设3个平行孔。对照组加入与药物等体积的溶剂，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养72h后弃去培养液，每孔加入20μL 5mg·mL^-1的MTT溶液，孵育4h后，弃去上清液，每孔加入DMSO 150μL，轻度振荡后用酶标仪在490nm下测定光密度值(OD)。

结果计算：以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，按照下式求药物对肿瘤细胞的抑制率：

化合物在浓度为1.0μmol·L^-1时对不同肿瘤细胞的生长抑制率见表2。并与专利申请(申请号：201710440104.8)中活性最好的化合物19的活性做了比较。

表2化合物1-17对三种人肿瘤细胞的生长抑制率(％)

实施例20：体内抗肿瘤活性的验证

为了验证本发明提供化合物的体内抗肿瘤活性，我们采用小鼠S180移植瘤模型，灌胃给药，考察了化合物5的体内抗肿瘤活性。

验证方法：昆明种小鼠，雄性，体重19-22g。取出小鼠腹腔接种S180后第8天的腹水，用生理盐水以1:1比例稀释，制成S180细胞混悬液。用注射器在每只小鼠右腋窝皮下接种0.1mL。接种次日，将小鼠随机分为3组，每组8只，分别为：

1)空白对照组(NMP/PEG400/H₂O)

2)化合物5低剂量组(1.0mg·kg^-1)

3)化合物5高剂量组(10.0mg·kg^-1)

将化合物5用NMP/PEG400/H₂O(体积比为1:6:3)溶解。接种后第二天开始按上述给药方案灌胃给药，给药体积为10mL·kg^-1体重，一日一次，连续给药8天。每日给药前记录小鼠体重。停药次日将小鼠处死，剥离出瘤块，剔除其他组织后称重。

结果：化合物5在剂量为1.0mg·kg^-1和10.0mg·kg^-1时，对小鼠体内S180移植瘤的生长抑制率分别为42.8％和85.5％。

结论：本发明提供的化合物5具有明显的体内抗肿瘤活性。

本发明涉及的2-(4-吗啉基)-4-(N-烷基-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)氨基)-6-(3-吡啶基或5-嘧啶基)嘧啶或均三嗪类化合物及其盐的组合物在制备抗癌药物中的应用，这些应用可以是胶囊剂、口服液或颗粒剂或注射剂。这些制剂可按照各种制剂的常规制备工艺制成，其中有效成分的含量为30-500mg，优选的含量为50-300mg。

本发明涉及的口服制剂中可含有药用辅料，包括稳定剂、增溶剂、润滑剂等，如葡萄糖、乳糖、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、果胶、环糊精、土温-80、聚乙烯醇、硬脂酸镁、滑石粉等。

Claims

1.一种2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物，其特征在于，其结构式为：

当R²为氢、R³为氨基且Y为N时，X不为N。

2.如权利要求1所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物，其特征在于，所述的R¹为甲基、乙基、环丙基或异丙基。

3.如权利要求1所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物，其特征在于，所述的R²为氢、氟、氯、甲基或三氟甲基，R²位置为所在苯环的3-位。

4.权利要求1～3任一项所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶或均三嗪类化合物的可药用盐，其特征在于，所述可药用盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、樟脑磺酸盐、苯甲酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟乙磺酸盐、琥珀酸盐、苯磺酸盐或甲磺酸盐。

5.权利要求1～3任一项所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物或权利要求4所述的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物的可药用盐在制备抗肿瘤药物制剂中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物制剂是能够抑制PI3K活性或RAF活性的药物制剂。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为PI3K或RAF高表达或突变的肿瘤。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为PI3Kα或BRAF高表达或突变的肿瘤。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物制剂为片剂、胶囊剂或注射剂，其中每片、每粒或每支制剂中含30～500mg的2-(4-吗啉基)-4,6-二取代嘧啶(或均三嗪)类化合物或其可药用盐。