CN107648335A - 调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法 - Google Patents

调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法，调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，以重量份数计，包括如下成份：虎杖10‑20份，山楂5‑15份。一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物的制备方法，称取虎杖和山楂，制备成汤剂、浸膏剂等剂型。汤剂的制备方法为：将虎杖和山楂投入蒸煮提取锅中，加水浸过中药，进行蒸汽蒸煮后过滤，将两次蒸汽蒸煮后取得的滤液合并。将所述汤剂进行浓缩，在60℃时，浓缩后浓度与浓缩前浓度比为1.30:1‑1.33:1，制备出浸膏剂。

Description

调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法。
背景技术
目前，动脉粥样硬化(AS)是动脉壁变厚并失去弹性的几种疾病的统称，是动脉硬化中最常见而重要的类型。动脉粥样硬化的主要病变特征为动脉某些部位的内膜下脂质沉积，并伴有平滑肌细胞和纤维基质成分的增殖，逐步发展形成动脉粥样硬化性斑块。细胞因子以及介导细胞因子生物学活性的信号通路在动脉粥样硬化的发生、发展中具有重要作用。研究表明：细胞自噬与凋亡均参与到动脉粥样硬化的整个病理过程中，影响动脉粥样硬化的发生发展。自噬是细胞质内一些损坏的细胞器或未折叠蛋白被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体中进行降解的过程，也是细胞自身修复和维持生命的重要过程。凋亡则是指生理或病理条件下，细胞受内在遗传机制调控而自动结束生命的过程。
以往应用中药调整自噬和凋亡来治疗动脉粥样硬化的研究较少，课题组在临床实践中发现，许多动脉粥样硬化疾病如心肌梗死、不稳定性心绞痛患者或急性脑血管病患者，多具有发病急骤、病情重，局部剧烈疼痛、胸闷憋气，或伴发热、心悸心慌、烦躁不安、大便不畅，舌质暗红、舌苔黄腻、垢浊、或黄燥，脉象滑数或弦数等一派火热炽盛，热毒内蕴的症状。现有药物制作复杂、副作用较大且成本高。
虎杖首见于《雷公炮炙论》，味苦、辛、涩，性寒，归肝、胆、大肠及肺经，功能清热解毒、活血祛瘀、清泄湿热，兼有祛风通络、消痰化浊、泻下通便之功，外用还能解毒收湿敛疮。如《药性论》曰：“治大热烦躁，止渴，利小便，压一切热毒”。根据现代药理学研究结果显示虎杖具有确切的调脂、抑制血小板聚集、抗血栓形成、改善微循环、抑制内皮细胞和血管平滑肌细胞增殖等诸多药理方面的作用，尤其是其调脂、保护血管内皮及抗炎(抗病毒、细菌)、抗内毒素等作用，值得深入系统研究。
山楂为蔷薇科植物山里红、山楂等的成熟果实，首见于《本草衍义补遗》，味酸、甘，性微温。归脾、胃、肝经。沉降敛涩，长于行瘀滞，消食积，止泻痢。主治肉食积滞，脘腹胀痛，泄泻痢疾，产后瘀滞腹痛、恶露不尽，痰瘀胸痹、眩晕，寒湿腰痛，疝气，睾丸肿痛。《医学衷中参西录》：“皮赤肉红黄，故善入血分而为化瘀血之要药。化瘀血而不伤新血，开郁气而不伤正气，其性尤为和平也。”山楂抗动脉粥样硬化具有调节脂质代谢、抗氧化、调节免疫功能等作用，不断受到关注。
发明内容
本发明的目的是提供一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物及制备方法，可以制备成散剂、汤剂、颗粒剂、浸膏剂、胶囊、冲剂或煎膏剂，剂型种类多样，制作工艺简单，成本低，完全由天然植物制成，不含激素，也不添加色素等其它化学合成品，对人体无毒副作用；能够用于调节动脉粥样硬化的自噬与凋亡。解决了现有药物制作复杂、副作用较大且成本高的问题。
为了实现上述目的，本发明提供的一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，以重量份数计，由虎杖10-20份和山楂5-15份组成。
中药组合物中只含有山楂和虎杖，药物配伍的复杂度低，只需山楂和虎杖就能够取得调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的有益效果，成本低，完全由天然植物制成，不含激素，也不添加色素等其它化学合成品，连续使用后，对人体无毒副作用。
优选地，以重量份数计，由虎杖12-18份和山楂8-12份组成。
将中药组合物中山楂和虎杖的成分比例进一步限定，能够更加有效地调节动脉粥样硬化自噬与凋亡，对人体无毒副作用，成本低。
进一步地，以重量份数计，由虎杖提取物虎杖苷10-20份和山楂提取物山楂总黄酮5-15份组成。
进一步地，以重量份数计，由虎杖提取物虎杖苷12-18份和山楂提取物山楂总黄酮8-12份组成。
虎杖的提取物虎杖苷和山楂的提取物山楂总黄酮，能够调节动脉粥样硬化自噬与凋亡，实际应用或用于实验用途时，中药组合物中的提取物可以选取市售的虎杖和山楂的提取物成品，或者选取虎杖和山楂进行提取。
本发明还提供一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物的制备方法，称取中药组合物，制备成散剂、汤剂、颗粒剂、浸膏剂、胶囊、冲剂或煎膏剂。
调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物的制备方法，制作工艺简单，剂型种类多样，能够调节动脉粥样硬化自噬与凋亡，对人体无毒副作用，成本低。
进一步地，所述汤剂的制备方法为：将虎杖和山楂投入蒸煮提取锅中，加水浸过中药，进行蒸汽蒸煮后过滤；在滤渣中再次加水并浸过滤渣，进行蒸汽蒸煮后过滤；将两次蒸汽蒸煮后取得的滤液合并。
进一步地，将所述汤剂进行浓缩，在60℃时，浓缩后浓度与浓缩前浓度比为1.09:1-1.12:1；之后，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均匀，静置12小时以上使沉淀完全，取上清液，回收乙醇，进行浓缩，在60℃时，浓缩后浓度与浓缩前浓度比为1.30:1-1.33:1，制备出浸膏剂。
本发明提供的，具有如下有益效果：
剂型种类多样，制作工艺简单，成本低；
中药组合物中只含有山楂和虎杖，药物配伍的复杂度低，只需山楂和虎杖就能够取得调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的有益效果，成本低，完全由天然植物制成，不含激素，也不添加色素等其它化学合成品，连续使用后，对人体无毒副作用。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物方案，中药药物是由下述重量份数原料组成：虎杖10-20份，山楂5-15份；优选地，虎杖12-18份，山楂8-12份。可制成散剂、汤剂、颗粒剂、浸膏剂、胶囊、冲剂或煎膏剂，其制作工艺简单，成本低，完全由天然植物制成，不含激素，也不添加色素等其它化学合成品，连续使用后，对人体无毒副作用；能够用于调节动脉粥样硬化的自噬与凋亡。
本发明的作用物质为虎杖的提取物虎杖苷和山楂的提取物山楂总黄酮。实际应用或用于实验用途时，中药组合物中的提取物可以选取市售的虎杖和山楂的提取物成品，或者选取虎杖和山楂进行提取。
虎杖和山楂的中药制备方法，包括：(1)按所述中药药物的组成称取虎杖和山楂，作散剂口服；(2)按所述中药药物的组成称取虎杖和山楂，投入蒸煮提取锅中，加水浸过药材，开启蒸汽蒸煮两次，过滤，合并滤液作汤剂口服；(3)将步骤(2)中的滤液浓缩至60℃时相对密度为1.09～1.12，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均匀，静置12小时以上使沉淀完全，取上清液，蒸馏回收乙醇后，按乙醇与料比例为20:1(mL：g)加入65％乙醇溶液，于50℃水浴1小时，离心取上清液，旋转蒸发，得到浓缩至60℃时相对密度为1.30～1.33的浸膏，再用体积分数为35％的乙腈-水溶液定容，制成浸膏剂备用；(4)提取有效成分虎杖的提取物虎杖苷和山楂的提取物山楂总黄酮，制成颗粒剂口服。(5)加入辅料：按所需剂型的制备工艺制成胶囊、冲剂或煎膏剂等相应的剂型。
实施例1：虎杖山楂调节小鼠动脉粥样硬化自噬与凋亡
1、材料与方法
1.1动物
ApoE-/-小鼠由北京大学医学院动物科技部提供,动物合格证号C57BL/6J:0016516,动物使用许可证号SYXK(京)2002-0002,动物生产许可证号SCXK(京)2002-0001,饲料合格证号0026271。
1.2材料
虎杖苷由西安冠宇生物技术有限公司提供，虎杖苷含量为99.42％,批号为GY080320；山楂提取物由福建汇天生物药业有限公司提供，山楂总黄酮含量为86％，批号为071104；辛伐他汀由扬子江药业集团有限公司生产，每粒20mg,批号为07101101。
1.3药品配制
用蒸馏水分别将虎杖苷、山楂总黄酮、辛伐他汀充分溶解,配制成100％实验浓度的储备液,-70℃保存；临用前用0.22μm的一次性滤器过滤除菌，装瓶，密封，4℃保存。
1.4分组与造模
将小鼠随机分为6组：C57组，模型组，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组，每组10只。除C57组外，其余各组给予高脂饮食，造动脉粥样硬化模型。
1.5灌胃
各组给予灌胃，模型组每日给予等体积蒸馏水灌胃；中药原方组每日给予虎杖苷39mg/Kg，山楂总黄酮26mg/Kg灌胃；中药对照1组每日给予虎杖苷52mg/Kg，山楂总黄酮39mg/Kg灌胃；中药对照2组每日给予虎杖苷26mg/Kg，山楂总黄酮13mg/Kg灌胃；辛伐他汀对照组每日给予辛伐他汀1.7mg/Kg灌胃；空白对照组每日给予等体积蒸馏水灌胃，一共灌胃8周。
其中给药量为虎杖苷和山楂总黄酮的有效成分净含量。
1.6指标检测
检测各组小鼠心肌细胞bcl-2，bcl-xL，bax，caspase3，P62，mTOR，Lc3-BII及Beclin-1基因表达水平。
2.统计学方法
采用SPSS 21.0统计软件包进行处理，所有数据采用x-±s表示，组间差异采用单因素方差分析(OneWay ANOVA)，以P<0.05为差异具有统计学意义。
3结果
3.1中药对小鼠心肌Bax基因表达的影响
由表1可知,与C57组比较，模型组心肌Bax基因表达显著升高(P＜0.05),与模型组比较,中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌Bax基因表达降低(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组Bax基因表达升高(P＜0.05)提示：中药原方组可降低心肌Bax基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表1-8中*表示与模型组比较,P＜0.05；
△表示与中药原方组比较,P＜0.05。
表1：中药对小鼠心肌Bax基因表达的影响
3.2中药对小鼠心肌Bcl-2基因表达的影响
由表2可知,与C57组比较，模型组心肌Bcl-2基因表达显著降低(P＜0.05),与模型组比较,中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌Bcl-2基因表达升高(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组Bcl-2基因表达降低(P＜0.05)。提示:中药原方组可升高心肌Bcl-2基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表2：中药对小鼠心肌Bcl-2基因表达的影响
3.3中药对小鼠心肌Bcl-xL基因表达的影响
由表3可知,与C57组比较，模型组心肌Bcl-xL基因表达显著降低(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌Bcl-xL基因表达升高(P＜0.05),与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组Bcl-2基因表达降低(P＜0.05)。提示:中药原方组可升高心肌Bcl-2基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表3：中药对小鼠心肌Bcl-xL基因表达的影响
3.4中药对小鼠心肌Caspase3基因表达的影响
由表4可知,与C57组比较，模型组心肌Caspase3基因表达显著升高(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌Caspase3基因表达降低(P＜0.05),与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组Bcl-2基因表达升高(P＜0.05)。提示:中药原方组可降低心肌Caspase3基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表4：中药对小鼠心肌Caspase3基因表达的影响
3.5中药对小鼠心肌P62基因表达的影响
由表5可知,与C57组比较，模型组心肌P62基因表达显著升高(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌P62基因表达降低(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组P62基因表达升高(P＜0.05)。提示:中药原方组可降低心肌P62基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表5：中药对小鼠心肌P62基因表达的影响
3.6中药对小鼠心肌LC3-BII基因表达的影响
由表6可知,与C57组比较，模型组心肌LC3-BII基因表达显著降低(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌LC3-BII基因表达升高(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组LC3-BII基因表达降低(P＜0.05)。提示:中药原方组可升高心肌LC3-BII基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表6：中药对小鼠心肌LC3-BII基因表达的影响
3.7中药对小鼠心肌mTOR基因表达的影响
由表7可知,与C57组比较，模型组心肌mTOR基因表达显著升高(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌mTOR基因表达降低(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组mTOR基因表达升高(P＜0.05)。提示:中药原方组可降低心肌mTOR基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表7：中药对小鼠心肌mTOR基因表达的影响
3.8中药对小鼠心肌Beclin-1基因表达的影响
由表8可知,与C57组比较，模型组心肌Beclin-1基因表达显著降低(P＜0.05)，与模型组比较，中药原方组，中药对照1组，中药对照2组和西药组心肌Beclin-1基因表达升高(P＜0.05)，与中药原方组比较，中药对照1组和中药对照2组Beclin-1基因表达降低(P＜0.05)。提示:中药原方组可升高心肌Beclin-1基因表达，效果优于中药对照1组和中药对照2组。
表8：中药对小鼠心肌Beclin-1基因表达的影响
本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由虎杖10-20份和山楂5-15份组成。
2.根据权利要求1所述的调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由虎杖12-18份和山楂8-12份组成。
3.根据权利要求1所述的调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由虎杖提取物虎杖苷10-20份和山楂提取物山楂总黄酮5-15份组成。
4.根据权利要求2所述的调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由虎杖提取物虎杖苷12-18份和山楂提取物山楂总黄酮8-12份组成。
5.一种权利要求1-4任一项所述的调节动脉粥样硬化自噬与凋亡的中药组合物的制备方法，其特征在于，称取中药组合物，制备成散剂、汤剂、颗粒剂、浸膏剂、胶囊、冲剂或煎膏剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述汤剂的制备方法为：将虎杖和山楂投入蒸煮提取锅中，加水浸过中药，进行蒸汽蒸煮后过滤；在滤渣中再次加水并浸过滤渣，进行蒸汽蒸煮后过滤；将两次蒸汽蒸煮后取得的滤液合并。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将所述汤剂进行浓缩，在60℃时，浓缩后浓度与浓缩前浓度比为1.09:1-1.12:1；之后，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均匀，静置12小时以上使沉淀完全，取上清液，蒸馏回收乙醇后，加入乙醇溶液，水浴后离心取上清液，蒸发，制备出浸膏，在60℃时，浓缩后浓度与浓缩前浓度比为1.30:1-1.33:1。
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