CN107646701A

CN107646701A - 一种获得重瓣茶花植株的方法

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Publication number: CN107646701A
Application number: CN201711127129.9A
Authority: CN
Inventors: 范瑶飞
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-11-15
Filing date: 2017-11-15
Publication date: 2018-02-02

Abstract

本发明提供一种获得重瓣茶花植株的方法，更具体地，所述获得重瓣茶花植株的方法包括白库玛撒卡植株的果实预处理获得重瓣植株幼苗，将所述重瓣植株幼苗接种在愈伤组织诱导培养基上获得愈伤组织，将所述愈伤组织接种于分化培养基上获得不定芽，将所述不定芽种于复壮培养基上获得重瓣茶花再生植株，本发明提供一种高效获得重瓣茶花植株的方法，为满足重瓣茶花品种的市场需要提供了一条有效的途径，同时也为重瓣茶花分子育种奠定基础。

Description

一种获得重瓣茶花植株的方法

技术领域

本发明属于园艺植物领域，具体地涉及一种获得重瓣茶花植株的方法。

背景技术

世界上登记注册的茶花品种已超过2万个，中国的山茶品种有883个。中国中部及南方各省露地多有栽培，已有1400年的栽培历史，北部则行温室盆栽。重庆、云南、四川、中国台湾、山东、江西等地有野生种。茶花在中国的栽培历史可追溯到蜀汉时期（公元221-263年）。当时茶花被列为“七品三命”。

山茶花是我国的特色名贵花卉，也是世界闻名的观赏木本植物。茶花是园林绿化的植物造景材料，具有花色美，花期长，叶片亮绿，树冠多姿，以及在高大树冠下能良好生长的习性，被广泛利用于公园绿地、自然风景区和名胜古迹。山茶花亦是盆栽的佳品，某些矮生的灌木型品种，常被作为盆栽应用。山茶四季常绿，分布广泛，树姿优美，是中国南方重要的植物造景材料之一。

为保持山茶花品种亲本的优良性状，茶花的繁殖通常不采用实生籽播苗方式，完全重瓣型茶花品种因雌和/或雄蕊完全退化而不能结实。采用扦插和嫁接方式，对于一些稀有的山茶花品种来说，其繁殖系数较低，难以进行规模化生产，实现产业化目的，故目前一些重瓣茶花品种价格昂贵，难以实现园林、园艺应用上的普及。

利用愈伤组织途径再生不定芽可获得大量的无性分株，目前还未见从茶花愈伤组织中获得植株的报道。本发明提供一种高效获得重瓣茶花植株的方法，为满足重瓣茶花品种的市场需要提供了一条有效的途径，同时也为重瓣茶花分子育种奠定基础。

发明内容

为了解决上述技术问题，提高植物抗冻能力，降低植物抗冻损伤，本发明提供一种园林植物抗冻剂。

本发明是以如下技术方案实现的：为实现上述目的，本发明提供一种获得重瓣茶花植株的方法，所述获得重瓣茶花植株的方法包括白库玛撒卡植株的果实预处理获得重瓣植株幼苗，将所述重瓣植株幼苗接种在愈伤组织诱导培养基上获得愈伤组织，将所述愈伤组织接种于分化培养基上获得不定芽，将所述不定芽种于复壮培养基上获得重瓣茶花再生植株。

进一步地，所述获得重瓣茶花植株的方法包括将白库玛撒卡的果实用双蒸水冲洗干净，转移到无菌超净台上用体积比为75%乙醇表面消毒50秒，无菌水冲洗2遍，用重量比为0.1％的HgCl₂中浸泡10分钟，无菌水冲洗4遍，贴于种子预处理培养基上，培养温度为28±2℃，光照光强为2800～3000Lx，光照时间为24h/d 以获得小植株；

将所述小植株幼嫩叶片和/或茎段接种在愈伤组织诱导培养基上，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux获得愈伤组织；

将所述愈伤组织在分化培养基培养两周后形成颗粒状小突起，即生长点，转移培养于分化培养基上，在分化培养基上经培养后分化成不定芽，一块愈伤组织上可形成大量不定芽，在切除较大的芽后，还有不定芽不断的分化出来，培养不定芽至0.5cm即可分离，据此可获得大量新生不定芽；

将所述不定芽接种于复壮培养基上，1个月后芽条可长至4-5cm，切掉芽条基部，以800g/L的IBA 浸泡芽条的基部，然后接种在生根培养基上，生根培养基包括B5盐5g/L、B5维他命、B6维他命、MES 1.8g/L、蔗糖50g/L、琼脂12g/L、头孢霉素125mg/L、吲哚-3-丁酸(IBA)1mg/L，pH5.7上，在 25℃下培养至约12cm高，移至温室培养至结实。

进一步地，所述预处理培养基成分包括MS盐 4.4g/L、B5维他命、B6维他命、蔗糖1g/L、琼脂 10g/L、MES 4g/L、0.4 mg/L萘乙酸、ZT 2mg/L、6-BAP 1mg/L、AS 30mg/L，pH6.0。

进一步地，所述愈伤组织诱导培养基包括MS盐4.4g/L、B5维他命、2.5mg/l 6-BA、1.0mg/l NAA中、蔗糖 1.5g/L、琼脂 10g/L、0.4mg/L 萘乙酸、ZT 2mg/L、AS 30mg/L，pH为5.8。

进一步地，所述分化培养基包括B5盐 3.1g/L、B5维他命、MES 1g/L、蔗糖 30g/L、ZT 1mg/L、琼脂 8g/L、头孢霉素 150mg/L、谷氨酸50mg/L、天冬氨酸 50mg/L、赤霉素 1mg/L、生长素 1mg/L、四水硫酸锰 0.231mg/L、七水硫酸锌 0.86mg/L、硼酸 0.11mg/L，pH5.6。

进一步地，所述复壮培养基包括B5盐4.1g/L、B5维他命、MES 2g/ L、蔗糖40g/L、7-BAP1mg/L、琼脂10g/L、头孢霉素200mg/L、谷氨酸100mg/L、天冬氨酸100mg/ L，pH5.6。

本发明的有益效果是：

本发明提供一种高效获得重瓣茶花植株的方法，为满足重瓣茶花品种的市场需要提供了一条有效的途径，同时也为重瓣茶花分子育种奠定基础。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细描述。

实施例1：

本发明所述的这种茶花愈伤组织再生植株的方法，材料为白库玛撒卡植株。将采集的果实用双蒸水冲洗干净，转移到无菌超净台上用体积比为75％乙醇表面消毒50秒，无菌水冲洗2遍，重量比为0.1％的 HgCl₂中浸泡10分钟，无菌水冲洗4遍。贴于种子预处理培养基上，预处理培养基（MS盐4.4g/L、B5维他命、B6维他命、蔗糖1g/8L、琼脂 10g/L、MES 4g/L、0.4mg/L萘乙酸、ZT 2mg/L、6-BAP 1mg/L、AS 30mg/L，pH6.0），培养温度为28±2℃，光照光强为2800～3000Lx，光照时间为24h/d。

实施例2：

培养3周后实生苗长至4厘米高，将小植株幼嫩叶片和茎段接种在愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基包括MS盐4.4g/L、B5维他命、2.5mg/l 6-BA、1.0mg/l NAA中、蔗糖2g/8L、琼脂 10g/L、0.4mg/L萘乙酸、ZT 2mg/L、AS 30mg/L，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。培养两周后，叶片切块边缘起变化，2-3周后叶片切块边缘有少量愈伤组织长出，再过两周后愈伤组织直径可达1厘米左右,，所述的用于不定芽的愈伤组织优选为黄绿色块状、质地疏密适中的愈伤组织。

实施例3

愈伤组织在分化培养基培养约半月后形成颗粒状小突起，即生长点，培养于分化培养基上，分化培养基包括B5盐3.1g/L、B5维他命、MES 1g/L、蔗糖30g/L、ZT 1mg/L、琼脂8g/L、头孢霉素150mg/L、谷氨酸50mg/L、天冬氨酸50mg/L、赤霉素1mg/L、生长素1mg/L、四水硫酸锰 0.231mg/L 、七水硫酸锌 0.86mg/L、硼酸 0.11mg/L，pH5.6)，在分化培养基上经培养后分化成不定芽，一块愈伤组织上可形成大量不定芽，在切除较大的芽后，还有不定芽不断的分化出来，培养不定芽至0.5cm即可分离，据此可获得大量新生不定芽。

实施例4：

将新生不定芽接种于复壮培养基上，复壮培养基包括B5盐4.1g/L、B5维他命、MES 2g/L、蔗糖40g/L、7-BAP1mg/L、琼脂10g/L、头孢霉素200mg/L、谷氨酸100mg/L、天冬氨酸100mg/L，pH5.6。1个月后芽条可长至4—5cm，切掉芽条基部，以800g/L的IBA 浸泡芽条的基部，然后接种在生根培养基上，生根培养基包括B5盐5g/L、B5维他命、 B6维他命、MES 1.8g/L、蔗糖50g/L、琼脂12g/L、头孢霉素125mg/L、吲哚-3-丁酸(IBA)1mg/L，pH5.7，在 25℃下培养至约12cm高，移至温室培养至结实。培养3周月后根系较发达，生根率达100％,移栽成活率为100％。

实施例5：

本发明提供的方法可使不定芽的生根率达100％，再生植株的移栽成活率达100％。极大地提高了重瓣茶花的繁殖系数，既可缩短成苗周期，又可降低成本，为今后重瓣茶花的大面积园林应用和分子育种提供了非常有效的方法和基础。同时，以嫩叶为材料进行增殖和快繁，能够保持重瓣茶花的种性不变，为新品种培育中出现的较为珍贵稀有变种的保存提供了保障。对重瓣茶花无菌苗叶片进行培养及再生，使外植体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为重瓣茶花遗传转化和细胞工程研究创造有利条件，为利用转基因技术育种奠定了良好的基础。

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims

1.一种获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于，所述获得重瓣茶花植株的方法包括白库玛撒卡植株的果实预处理获得重瓣植株幼苗，将所述重瓣植株幼苗接种在愈伤组织诱导培养基上获得愈伤组织，将所述愈伤组织接种于分化培养基上获得不定芽，将所述不定芽种于复壮培养基上获得重瓣茶花再生植株。

2.根据权利要求1所述的获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于，所述获得重瓣茶花植株的方法包括将白库玛撒卡的果实用双蒸水冲洗干净，转移到无菌超净台上用体积比为75％乙醇表面消毒50秒，无菌水冲洗2遍，用重量比为0.1％的HgCl₂中浸泡10分钟，无菌水冲洗4遍，贴于种子预处理培养基上，培养温度为28±2℃，光照光强为2800～3000Lx，光照时间为24h/d以获得小植株；

将所述不定芽接种于复壮培养基上，1个月后芽条可长至4-5cm，切掉芽条基部，以800g/L的IBA浸泡芽条的基部，然后接种在生根培养基上，生根培养基包括B5盐5g/L、B5维他命、B6维他命、MES 1.8g/L、蔗糖50g/L、琼脂12g/L、头孢霉素125mg/L、吲哚-3-丁酸(IBA)1mg/L，pH5.7上，在25℃下培养至约12cm高，移至温室培养至结实。

3.根据权利要求1-2任一所述的获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于，所述预处理培养基成分包括MS盐4.4g/L、B5维他命、B6维他命、蔗糖1g/L、琼脂10g/L、MES 4g/L、0.4mg/L萘乙酸、ZT 2mg/L、6-BAP 1mg/L、AS 30mg/L，pH6.0。

4.根据权利要求1-3任一所述的获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于,所述愈伤组织诱导培养基包括MS盐4.4g/L、B5维他命、2.5mg/l 6-BA、1.0mg/lNAA中、蔗糖1.5g/L、琼脂10g/L、0.4mg/L萘乙酸、ZT 2mg/L、AS 30mg/L，pH为5.8。

5.根据权利要求1-4任一所述的获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于，所述分化培养基包括B5盐3.1g/L、B5维他命、MES 1g/L、蔗糖30g/L、ZT 1mg/L、琼脂8g/L、头孢霉素150mg/L、谷氨酸50mg/L、天冬氨酸50mg/L、赤霉素1mg/L、生长素1mg/L、四水硫酸锰0.231mg/L、七水硫酸锌0.86mg/L、硼酸0.11mg/L，pH5.6。

6.根据权利要求1-5任一所述的获得重瓣茶花植株的方法，其特征在于，所述复壮培养基包括B5盐4.1g/L、B5维他命、MES 2g/L、蔗糖40g/L、7-BAP1mg/L、琼脂10g/L、头孢霉素200mg/L、谷氨酸100mg/L、天冬氨酸100mg/L，pH5.6。