CN107621450A - 一种测定前白蛋白的试剂及其测定前白蛋白的方法 - Google Patents

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李宁
苏少博
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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种测定人前白蛋白的检测试剂。一种测定前白蛋白的试剂，包括第一试剂和第二试剂；第一试剂由NaH2PO4、PEG‑6000、Tween‑80、NaN3、NaCl、水组成，第二试剂由NaH2PO4、EDTA·Na2、NaN3、NaCl前白蛋白抗血清、水组成。本发明还涉及一种利用测定前白蛋白的试剂测定前白蛋白的方法。本发明具有原料种类少、消耗量少、试剂空白值低、准确度高、灵敏度好、操作简便等特点。

Description

一种测定前白蛋白的试剂及其测定前白蛋白的方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种测定人前白蛋白的检测试剂。
技术背景
血清前白蛋白(PA)，由肝细胞合成，是由4个相同亚基组成的四聚体，分子量55.0kD，具有重要的生理活性。可视作一种转载蛋白，与甲状腺素结合球蛋白(TBG)和白蛋白(ALB) 一起，协同参与甲状腺素的转运。与视黄醇结合蛋白(RBP)形成复合物，具有运载维生素A 的作用。
PA在甲状腺激素运输中的作用仅次于TBG。TBG负责转运甲状腺素总量的70％～75％， PA转运15％～20％，而ALB转运的甲状腺素更少些(10％)。在正常生理条件下，血浆甲状腺素几乎全部(99.98％)通过与这三种蛋白质结合运转，到达靶细胞。
PA的另一重要功能是协助RBP转运视黄醇。当机体需要维生素A时，贮存在肝脏内的视黄醇酯被水解，游离的视黄醇与RBP结合，被分泌到血循环中，再与PA结合，所形成的视黄醇RBP-PA大分子结合物，通过循环转运到有特异性RBP受体结合部位的靶组织中，一进入靶细胞，视黄醇-RBP-PA结合物即分离。
PA分子量小，半衰期短，相较ALB具有更高的敏感性，升高和降低更为明显，可作为早期肝功能损伤的指标。PA的检测同时可用于判断患者的营养状况，也可作为实体瘤患者化疗后肝功能损害的预见性指标。
PA的测定方法由很多，包括：放射免疫分析法、免疫电泳法、免疫扩散法等。这些方法均不同程度存在操作法繁琐、原料种类多、消耗量大等问题，不适于大规模生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：如何提供一种操作简单，适合大规模使用的测定前白蛋白的试剂及其测定前白蛋白的方法。
本发明所采用的技术方案是：一种测定前白蛋白的试剂，包括第一试剂和第二试剂；第一试剂中NaH2PO4含量为20～30mmol/L，PEG-6000含量为30～50g/L，Tween-80含量为0.5～ 1ml/L，NaN3含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，其它物质为水；第二试剂中NaH2PO4含量为20～30mmol/L，EDTA·Na2含量为0.8～1.2g/L，NaN3含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，前白蛋白抗血清质量百分比浓度为18～20％，其它物质为水。
一种所述的测定前白蛋白的试剂测定前白蛋白的方法，按照如下的步骤进行
步骤一、测定第一试剂的吸光度为A1空白，将第一试剂和血清样本按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1样本，将第一试剂和已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1校准；
步骤二、测定第二试剂的吸光度为A2空白，将第一试剂、第二试剂、血清样本按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2样本，将第一试剂、第二试剂、已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2校准；
步骤三、血清样本中前白蛋白含量为ΔA0/ΔAs*Cs，其中：以空白管吸光度为对照的样本管吸光度ΔA0＝(A2样本-A1样本)-(A2空白-A1空白)，以空白管吸光度为对照的校准品吸光度ΔAs＝(A2校准 -A1校准)-(A2空白-A1空白)，Cs：校准品中前白蛋白的浓度。
作为一种优选方式：所有吸光度的测量都使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为340nm，副波长为700nm。
本发明的有益效果是：本发明试剂可直接应用于全自动生化分析仪进行测定，具有原料种类少、消耗量少、试剂空白值低、准确度高、灵敏度好、操作简便等特点。
具体实施方式
下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。
实施例1：
第一试剂(R1)：
其溶剂为纯化水
第二试剂(R2)：
全自动生化分析仪参数设置
检测温度：37℃；检测波长：主波长340nm、副波长700nm；反应时间：10min；反应方向：正方向。
步骤一、测定第一试剂的吸光度为A1空白，将第一试剂(210μl)和血清样本(3μl)进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1样本，将第一试剂210μl和已知前白蛋白的浓度(29.2mg/dL)的校准品(3μl)进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1校准；
步骤二、测定第二试剂的吸光度为A2空白，将第一试剂(210μl)、第二试剂(70μl)、血清样本(3μl)进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2样本，将第一试剂(210μl)、第二试剂(70μl)、已知前白蛋白的浓度的的校准品(3μl)进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2校准；
步骤三、血清样本中前白蛋白含量为ΔA0/ΔAs*Cs，其中：以空白管吸光度为对照的样本管吸光度ΔA0＝(A2样本-A1样本)-(A2空白-A1空白)，以空白管吸光度为对照的校准品吸光度ΔAs＝(A2校准 -A1校准)-(A2空白-A1空白)，Cs：校准品中前白蛋白的浓度。
下表为十次重复检测的结果，单位为mg/dL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 偏差
实施例1 30.1 29.3 28.3 29.8 29.2 29.3 29.0 29.0 29.2 30.2 1.93％
实施例2
与实施例1不同之处在于已知前白蛋白的浓度的校准品的浓度为18.8mg/dL。
下表为十次重复检测的结果，单位为mg/dL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 偏差
实施例2 19.9 20.5 20.2 20.1 20.6 19.8 20.5 19.9 20.4 19.9 1.49％
实施例3
与实施例1不同之处在于：
第一试剂(R1)：
其溶剂为纯化水
第二试剂(R2)：
下表为十次重复检测的结果，单位为mg/dL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 偏差
实施例3 30.4 30.5 31.2 31.0 31.1 29.7 30.1 30.0 30.3 30.5 1.62％
实施例4
与实施例3不同之处在于已知前白蛋白的浓度的校准品的浓度为18.8mg/dL。
下表为十次重复检测的结果，单位为mg/dL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 偏差
实施例4 22.2 21.7 21.8 22.4 22.0 21.8 22.1 22.0 22.1 21.6 1.12％
本发明所制得的前白蛋白检测试剂对校准品1(前白蛋白含量为29.2mg/dL)和校准品2 (前白蛋白含量为18.8mg/dL)的检测结果不准确度相对偏差(CV(％))不超过±5％，说明本申请公开的试剂的准确度符合诊断试剂的技术指标。
本发明试剂与对照试剂相关性
下表为实施例1所制得的前白蛋白检测试剂与进口前白蛋白检测试剂(对照试剂)对35 例人体血清样本连续测定其前白蛋白含量。
下表为实施例3所制得的前白蛋白检测试剂与对照试剂对35例人体血清样本连续测定其前白蛋白含量。
结果表明：实施例1、3和对比试剂的相关系数大于0.99，相关性良好。说明本申请公开的试剂与对照试剂的相关性符合诊断试剂的技术指标。
分析灵敏度
下表为实施例2和实施例4的试剂在相同条件下分别连续测定三次质控品，计算当样本浓度为180mg/L时，吸光度变化值ΔA
结果表明，实施例2和实施例4的试剂在样本浓度为180mg/L时，吸光度变化值ΔA大于0.050，说明试剂分析灵敏度符合诊断试剂技术指标。
试剂空白
下表为实施例1和实施例3的试剂在相同条件下分别连续测定三次空白吸光度，取平均值。
结果表明，实施例1和实施例3的试剂在检测空白吸光度时，吸光度小于0.200，说明试剂空白吸光度符合诊断试剂的技术指标。
上述实施例仅说明本发明的原理及功效，并非限制本发明，其他任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的任何修改、修饰、替换等的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种测定前白蛋白的试剂，其特征在于：包括第一试剂和第二试剂；第一试剂中NaH2PO4含量为20～30mmol/L，PEG-6000含量为30～50g/L，Tween-80含量为0.5～1ml/L，NaN3含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，其它物质为水；第二试剂中NaH2PO4含量为20～30mmol/L，EDTA·Na2含量为0.8～1.2g/L，NaN3含量为0.5～1.2g/L，NaCl含量为5～10g/L，前白蛋白抗血清质量百分比浓度为18～20％，其它物质为水。
2.一种利用权利要求1所述的测定前白蛋白的试剂测定前白蛋白的方法，其特征在于：按照如下的步骤进行
步骤一、测定第一试剂的吸光度为A1空白，将第一试剂和血清样本按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1样本，将第一试剂和已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比70:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1校准；
步骤二、测定第二试剂的吸光度为A2空白，将第一试剂、第二试剂、血清样本按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2样本，将第一试剂、第二试剂、已知前白蛋白的浓度的校准品按照体积比:210:：70：3进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2校准；
步骤三、血清样本中前白蛋白含量为ΔA0/ΔAs*Cs，其中：以空白管吸光度为对照的样本管吸光度ΔA0＝(A2样本-A1样本)-(A2空白-A1空白)，以空白管吸光度为对照的校准品吸光度ΔAs＝(A2校准-A1校准)-(A2空白-A1空白)，Cs：校准品中前白蛋白的浓度。
3.根据权利要求2所述的一种测定前白蛋白的试剂测定前白蛋白的方法，其特征在于：所有吸光度的测量都使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为340nm，副波长为700nm 。
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