CN107595903A - 一种从马齿苋中提取消炎成分的方法及消炎成分的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种从马齿苋中提取消炎成分的方法及消炎成分的应用，属于中草药提取技术领域。该方法包括的步骤有：将马齿苋全草干燥粉碎得马齿苋粉末；将马齿苋粉末用酸性乙醇超声波提取得到乙醇提取液；将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成溶液过大孔树脂吸附，粗提物溶液过完后用水清洗大孔树脂，再采用pH值为5～6且乙腈∶正丁醇的体积比为1：6‑8的混合液为洗脱剂，洗脱得到洗脱液；再经浓缩干燥得马齿苋消炎成分。本发明从马齿苋中成功提取到了抗菌消炎活性成份，这些活性成份的获得对于马齿苋在抗菌消炎方面的研究具有积极意义。
Description
【技术领域】
本发明涉及中草药提取技术领域，具体涉及一种从马齿苋中提取消炎成分的方法及消炎成分的应用。
【背景技术】
随着抗生素的广泛应用，细菌的耐药性逐年增加，成为临床医生难以对付的“超级细菌”。同时，抗生素本身具有的毒副作用，对人体和环境也造成威胁。天然药物是从植物、动物和微生物等天然资源中开发出来的药物，具有毒副作用小、耐药性小等优势。目前，在世界范围内的药品市场中，约30％来源于天然产品。从天然产物尤其是从药用植物中寻找新颖的抗菌药物受到国内外研究者的重视。
马齿苋(学名：Portulaca oleracea L.)一年生草本植物，马齿苋全草内含有杀菌消炎的成分，全草供药用有清热利湿、解毒消肿、消炎、止渴、利尿作用；从马齿苋中提取消炎成分对抗菌药物的研究具有积极的意义。然而，目前对马齿苋进行提取的研究工作，大多集中在提取和应用其多糖成分，对其消炎成分进行的相关研究较少。公开号为103622133A的中国专利申请公开了一种马齿苋提取物及其应用，将通过水提得到的提取物应用在杀菌防腐方面，然而其提取方法所得杀菌活性成份少，抑菌效果也不理想。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，本发明的目的之一是提供一种从马齿苋中提取消炎成分的方法，该方法通过筛选提取方法和提取溶剂，能够获得马齿苋中的消炎成分。本发明的另一个目的是提供上述消炎成分在抗菌药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从马齿苋中提取消炎成分的方法，包括以下步骤：
(1)将马齿苋全草去杂，干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为55～60％的乙醇水溶液中，以功率125～175W的超声波在55～60℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成9-12mg/ml的粗提物溶液，过大孔树脂吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用pH值为5～6且乙腈∶正丁醇的体积比为1：6-8的混合液为洗脱剂，以5～7BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
本发明中，优选地，步骤(1)中所述干燥是于40～50℃温度下恒温干燥，低温干燥有利于保护有效成分不被破坏。
本发明中，优选地，步骤(2)中所述乙醇的体积浓度为58％；乙醇水溶液与所述马齿苋粉的液固比为5-8：1；控制乙醇体积浓度和料液比可以最大限度提高提取物得率。
本发明中，优选地，步骤(2)中所述的乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.5-0.8％。
本发明中，优选地，步骤(3)中所述大孔树脂为D101或H-103。
本发明中，优选地，步骤(3)所述洗脱剂中，乙腈和正丁醇的体积比为1:7。
本发明中，优选地，步骤(3)所述粗提物溶液，过大孔树脂的速度为3.8-5.2BV/h。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明通过对马齿苋进行超声醇提后，在经过大孔树脂吸附和纯化等步骤，从马齿苋中成功提取到了抗菌活性成份，这些活性成份的获得对于马齿苋在抗菌性方面的研究具有积极意义。
2、本发明在马齿苋的提取过程中，通过使用酸性乙醇、控制乙醇的浓度和用量、通过采用水洗、大孔树脂吸附、乙腈和正丁醇混合洗脱的步骤，并通过控制过大孔树脂的速度可流量，优化提纯工艺，更能有针对性地得到马齿苋中的抗菌活性成份，得到的提取物抗菌活性较好。
【具体实施方式】
为了更清楚地表达本发明，以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
(1)将马齿苋全草去杂，于40～50℃温度下恒温干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为55％的乙醇水溶液中，控制乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.5％，控制乙醇水溶液与马齿苋粉的液固比为5：1；以功率125W的超声波在55℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成9mg/ml的粗提物溶液，以5.2BV/h的速度过大孔树脂D101吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用pH值为5且乙腈∶正丁醇的体积比为1：6的混合液为洗脱剂，以5BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
实施例2
(1)将马齿苋全草去杂，于40～50℃温度下恒温干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为58％的乙醇水溶液中，控制乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.6％，控制乙醇水溶液与马齿苋粉的液固比为6：1；以功率150W的超声波在58℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成10mg/ml的粗提物溶液，以4BV/h的速度过大孔树脂H-103吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用pH值为5.5且乙腈∶正丁醇的体积比为1：7的混合液为洗脱剂，以6BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
实施例3
(1)将马齿苋全草去杂，于40～50℃温度下恒温干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为60％的乙醇水溶液中，控制乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.8％，控制乙醇水溶液与马齿苋粉的液固比为8：1；以功率175W的超声波在60℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成12mg/ml的粗提物溶液，以3.8BV/h的速度过大孔树脂D101吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用pH值为5且乙腈∶正丁醇的体积比为1：8的混合液为洗脱剂，以7BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
对比例1
将新鲜的马齿苋原料在-20℃下冷冻24h，取冷冻的马齿苋原料，用食物调理机打成细粉，称量200g所述细末置于容器中，加入250ml纯净水，将混合物加热煮沸以进行提取，提取25分钟后，在6000rpm下离心分离30分钟，得到上清液，上清液浓缩干燥得提取物。
对比例2
(1)将马齿苋全草去杂，于40～50℃温度下恒温干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为58％的乙醇水溶液中，控制乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.6％，控制乙醇水溶液与马齿苋粉的液固比为6：1；以功率150W的超声波在58℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成10mg/ml的粗提物溶液，以4BV/h的速度过大孔树脂H-103吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用体积浓度为75％的乙醇为洗脱剂，以6BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
对比例3
(1)将马齿苋全草去杂，于40～50℃温度下恒温干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为58％的乙醇水溶液中，控制乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.6％，控制乙醇水溶液与马齿苋粉的液固比为6：1；以功率150W的超声波在58℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成10mg/ml的粗提物溶液，以4BV/h的速度过大孔树脂H-103吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用正丁醇为洗脱剂，以6BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
抑菌效果试验
1、菌悬液的制备
在无菌操作台中，挑取金黄色葡萄球菌、结核杆菌、肺炎球菌这3种标准菌株少许，接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，放置于37℃恒温水浴摇床中震荡培养18h。取18h培养的各菌株培养物，用牛肉膏蛋白胨培养基稀释1000倍得菌悬液用于实验。
2、供试液的制备
将本发明所得各实施例和对比例中的抗菌活性物质经冷冻干燥，分别用二甲亚砜溶解，制备成1mg·mL-1的初始浓度，在超净工作台中用0.22μm(尼龙66)的微孔滤膜过滤备用
3、二倍稀释法
对于每个受试样品分别取灭菌试管8支，第1管加入供试液0.1mL，第2-8管中分别加入0.1mL培养基液，取供试液0.1mL加入第2管中，混匀后取0.1mL加入第3管中，依次稀释至第7管，第7管吸出0.1mL弃去，第8管不加药液作为对照。每管加入菌悬液0.9mL，使得1-8管的液体总量均为1mL，受试药液浓度分别为：100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56μg·mL-1。将试管放入恒温培养箱37℃培养24h后，取出试管观察细菌生长情况。如药液管混浊，表示细菌生长，供试药液无抑菌作用；如药液管清亮则表示细菌生长受抑制，其能抑制细菌生长的最大稀释度的药液，即为该样品的最小抑菌浓度(MIC)。
4、抑菌结果
各组提取物对3种细菌的抑菌活性测试结果见下表1。
表1抑菌测试结果
从上表可以看出，采用本发明的方法提取的马齿苋中的提取物，对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、结核杆菌有很好的抑制效果，且抑菌效果好于对比例组，说明本发明的提取方法更能有针对性地得到马齿苋中的抗菌活性成份，所得提取物可以用于制作抗菌消炎药物中。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (8)
1.一种从马齿苋中提取消炎成分的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将马齿苋全草去杂，干燥至无水，再粉碎、过筛至50～60目，得马齿苋粉末；
(2)将马齿苋粉末置于含盐酸的体积浓度为55～60％的乙醇水溶液中，以功率125～175W的超声波在55～60℃下提取得到乙醇提取液；
(3)将上述提取液减压浓缩至无醇味，加水配制成9-12mg/ml的粗提物溶液，过大孔树脂吸附，粗提物溶液过完后采用用量大于5BV的水清洗大孔树脂，再采用pH值为5～6且乙腈∶正丁醇的体积比为1：6-8的混合液为洗脱剂，以5～7BV/h的洗脱速率洗脱得到洗脱液；
(4)将所述洗脱液浓缩后低温冷冻干燥得马齿苋消炎成分。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述干燥是于40～50℃温度下恒温干燥。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述乙醇的体积浓度为58％；乙醇水溶液与所述马齿苋粉的液固比为5-8：1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的乙醇水溶液所含的盐酸的质量分数为0.5-0.8％。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述大孔树脂为D101或H-103。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述洗脱剂中，乙腈和正丁醇的体积比为1:7。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述粗提物溶液，过大孔树脂的速度为3.8-5.2BV/h。
8.权利要求1-7中任一项所得消炎成分在制作抗菌消炎药物中的应用。
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