CN107586780A - 一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的长链非编码rna - Google Patents

Abstract

本发明属于禽畜医药领域，提供了一种抑制PRRSV病毒的长链非编码RNA(lncRNA)，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。敲低试验表明，敲低猪肺泡巨噬细胞中本发明所述的lncRNA后，PRRSV病毒的复制水平相对于未敲低的对照组均有显著升高，即本发明提供的lncRNA具有抑制PRRSV病毒复制的作用。

Description

一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的长链非编码RNA

技术领域

本发明涉及禽畜医药领域，具体涉及一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的长链非编码RNA。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又被称为蓝耳病，是近年来发生的严重危害世界养猪业的重要疫病。该病临床表现为母猪流产、死胎、木乃伊胎以及仔猪的呼吸道疾病。高致病性猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株(PRRSV)引起的一种极性高致死性疾病。感染后仔猪发病率可达100％、死亡率可达50％以上；母猪流产率可达30％以上，育肥猪也可发病死亡是其典型特点。

PRRSV病毒是一种单股正链RNA病毒，基因组全长约15kb，病毒变异频率很高。2006年，我国爆发了以高热、高发病率和高死亡率为特征的疫情，对养猪业造成巨大的经济损失。后证实该病是由一种变异的高致病性PRRSV(HP-PRRSV)毒株引发的，变异株与传统毒株(PRRS)相比在NSP2蛋白有一个不连续的30个氨基酸的缺失。PRRSV主要感染肺泡巨噬细胞(PAM)、成熟单核细胞、小胶质细胞等抗原递呈细胞。其感染后不能有效的引起宿主免疫应答，病毒特异性的中和抗体水平应答低，I型干扰素的产生被抑制，促炎性细胞因子和抑制性细胞因子过度分泌，造成免疫抑制状态。传统灭活和弱毒疫苗不能有效的起到保护作用，迫切需要发展新的抗病毒策略。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能有效抑制PRRSV病毒复制的lncRNA，本发明的目的还在于提供所述lncRNA在制备预防或治疗PRRSV病毒药物中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种抑制PRRSV病毒的lncRNA，所述lncRNA为LNC_000397，所述LNC_000397的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，用于扩增所述lncRNA的引物对为：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供了一种上述技术方案所述lncRNA在制备抗PRRSV病毒药物中的应用。

本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供了一种抑制PRRSV病毒的lncRNA，所述lncRNA为LNC_000397，所述LNC_000397的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。敲低试验表明，敲低猪肺泡巨噬细胞中本发明所述lncRNA后，PRRSV病毒的复制水平相对于未敲低的对照组均有显著升高，即本发明提供的lncRNA具有抑制PRRSV病毒复制的作用。

根据本发明提供的lncRNA序列，可用于制备出具有抑制PRRSV病毒复制的抗病毒药物，用于高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒病的预防或治疗。

附图说明

图1为GSWW组、VR2332组与Mock组相比LNC_000397的FPKM值差异倍数；

图2为RT-QPCR检测GSWW组、VR2332组与Mock组比较LNC_000397表达水平差异倍数；

图3为RT-QPCR检测靶向LNC_000397的siRNA在PAM细胞中的敲低效率，阴性对照siRNA，内参为GAPDH；

图4为RT-QPCR检测PAM细胞中LNC_000397敲低与阴性对照组相比PRRSV的复制水平，内参为GAPDH。

具体实施方式

本发明提供了一种抑制PRRSV病毒的lncRNA，所述lncRNA为LNC_000397，所述LNC_000397的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明中，所述LNC_000397来源于猪肺泡巨噬细胞(PAM)。PRRSV病毒感染后，猪体内的LNC_000397表达量显著升高；敲低LNC_000397后发现，同样感染了PRRSV病毒的猪，敲低LNC_000397的细胞中PRRSV病毒表达量显著高于未敲低LNC_000397的细胞，即LNC_000397能够抑制PRRSV病毒的复制。

本发明所述用于敲低LNC_000397的siRNA序列其中一条互补链具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，即5’-AUGAAACCUGGUAUGUUGG-3’。

在本发明中，用于扩增所述lncRNA的引物对为：上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，即5’-AAGCAGTGGTGAGGTATTC-3’；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，即5’-GTGAGATGGCAAGGTAGTT-3’。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种抑制PRRSV病毒的lncRNA，所述lncRNA为LNC_000397，所述LNC_000397的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

实施例2

本次试验用Cuffdiff软件对mRNA和LNC_000397进行定量及差异表达分析，以验证本发明所述lncRNA对PRRSV病毒的抑制作用。

1、样品准备：取3～4周龄的SPF加系大白猪，麻醉后颈动脉放血致死，打开胸腔，无菌分离肺脏。用灭菌的PBS缓冲液清洗肺脏表面2～3次，再用灭菌的PBS缓冲液灌洗肺脏，收集灌洗液。将灌洗液在离心转速400g的条件下离心10min，弃去上清，加入30ml PBS缓冲液重悬，重复上述离心、重悬操作2～3次后，收集最后一次离心的沉淀，用含体积分数10％FBS的RPMI-1640完全培养基重悬，调节重悬液中细胞浓度为8×10⁵个细胞/cm²，置于培养瓶中在37℃、5％CO₂的条件下培养6h。培养后得到的贴壁细胞即为猪肺泡巨噬细胞(PAM)，培养5～7h后更换含体积分数10％FBS的新鲜RPMI-1640完全培养基。

2、病毒感染细胞:将美洲型PRRSV/GSWW15高致病性毒株、疫苗毒株VR2332以MOI为0.1分别接种于PAM细胞，同时设未接病毒Mock对照。接毒1小时后加入含体积分数2％FBS的RPMI-1640完全培养基至5ml。Mock接种采用未接毒的Marc-145细胞培养物，所有操作与接毒组相同。

其中，美洲型GSWW15高致病性猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRSSV)，由兰州兽医研究所提供；VR2332高致病性猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRSSV)分离自弱毒疫苗免疫猪。

3、总RNA提取：采用Trizol提取法(Trizol提取试剂购自THermo FisherScientific公司，货号15596026)提取每个样品中的总RNA，用Nanodrop检测RNA样品的浓度和纯度，Bioanalyzer 2100system检测RNA的完整性。质控标准为：RNA总量≥3μg，OD_260/280≥1.8，28S/18S≥1，PIN值≥6.8。

提取结果为：每个样品中RNA总量约为5μg，OD_260/280均大于1.8，28S/18S均大于1.6，PIN值均大于9.4。

3、测序文库构建：每个样品总RNA分别取3μg，首先用Epicentre Ribo-zero^TMrRNARemoval试剂盒(购自EPICENTRE公司，USA)去除核糖体RNA，用质量分数70％的乙醇沉淀剩余RNA。然后用Ultra^TMDirectional RNA Library Prep试剂盒(购自Illumina公司，USA)构建cDNA测序文库，所有操作均按照生产商说明书进行。文库质量用Agilent Bioanalyzer 2100检测。

4、测序：将样品在Illumina HiseqX TEN平台上进行测序。

5、数据质控：测序得到的原始数据(Raw data)通过Perl语言脚本去除接头序列、低质量序列得到clean data，同时计算clean data的Q20，Q30值以及GC含量。本次测序样本Q30＞90％，GC含量约50％，符合质控标准。

6、转录本比对与拼接：利用TopHat v2.0.9软件将测序得到的双端Reads与猪的参考基因组(Sscrofa10.2)进行比对，将比对上的Reads用Cufflinks(v2.1.1)进行拼接。

7、定量及差异表达基因分析：用Cuffdiff(v2.1.1)软件对mRNA和LNC_000397的转录本进行定量分析，用FPKM表示转录本的表达量。FPKM是每百万fragments中来自某一基因每千碱基长度的fragments数目。Cuffdiff(v2.1.1)软件通过基于负二项分布的模型计算差异基因显著性。

检测结果：图1为GSWW组、VR2332组与Mock组相比LNC_000397的FPKM值差异倍数。差异表达分析结果如图1所示，本发明提供的抑制PRRSV病毒的lncRNA(LNC_000397)在GSWW和VR2332毒株感染后表达量均有显著升高。

如图1所示，GSWW组中LNC_000397的表达量为Mock组的1.74倍，VR2332组中LNC_000397的表达量为Mock组的2.53倍，图示为样本的平均值。GSWW组、VR2332组与Mock组相比LNC_000397的FPKM值差异倍数存在显著差异，这表明长链非编码RNA：LNC_000397在不同PRRSV病毒感染后体内表达量均发生了上调，表明PRRSV感染与LNC_000397之间存在一定的相关性，当PRRSV感染机体后LNC_000397相应的升高，可在抗PRRSV病毒免疫反应中发挥作用。

实施例3

本次试验采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)对LNC_000397在被PRRSV病毒感染后的表达水平进行检测

1、按照实施例2中步骤1～3制备GSWW组、VR2332组与Mock组的总RNA。

2、测定步骤1得到的总RNA浓度后，采用反转录试剂盒PrimeScript^TM RT MasterMix(Perfect Real Time；宝生物工程(大连)有限公司，货号RR036)对各组的总RNA进行反转录，每20μL体系加入1μg总RNA；反转录程序为：37℃、15min，85℃、5s。

3、以步骤2反转录得到的cDNA为荧光定量PCR模板，上下游引物序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，引物稀释为10μM；采用荧光定量试剂盒Premix Ex Taq^TMII(Tli RNaseH Plus；宝生物工程(大连)有限公司，货号RR820)进行荧光定量检测，反应体系和反应程序按照说明书进行。

4、根据荧光定量PCR实验的Ct值，以GAPDH为内参，用2^-△△Ct公式计算出接毒组(GSWW组、VR2332组)和对照组(Mock组)之间的LNC_000397分子表达变化倍数。其中，GAPDH的上下游引物如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。

检测结果：RT-QPCR检测的LNC_000397相对表达量如图2所示，GSWW组中LNC_000397的表达量为Mock组的1.51倍、VR2332组中LNC_000397的表达量为Mock组的2.02倍，图示数据为三次独立实验平均值。本次试验表明，不同的PRRSV病毒感染后的机体中本发明所述lncRNA表达量均有所上升。

实施例4

为了验证LNC_000397在PRRSV病毒复制具有抑制作用，本发明采用siRNA敲低LNC_000397的表达。

1、用于敲低LNC_000397在PAM细胞中表达的siRNA序列如SEQ ID NO:6所示，取125μL DEPC水溶解siRNA，制成浓度为20μM的siRNA溶液。

2、取250μL Opti-MEN培养基和5μL步骤1得到的siRNA溶液混合，得到混合液1。取250μL Opti-MEN培养基和5μL Lipofectamine-2000 Reagent混合，静置5min，得到混合液2。将混合液1与混合液2混合，孵育15min。

3、用Opti-MEN培养基清洗预先铺在六孔板中的PAM细胞，PAM细胞密度45～55％。将步骤2孵育后的混合液加入各孔中，再加入1.5ml Opti-MEN培养基。37℃、5％CO₂条件下培养24h，收集细胞。设置未添加siRNA的试验作为阴性对照组，其步骤与上述相同。

4、提取各孔中收集的细胞总RNA，反转录(操作与实施例3中步骤2相同)后用实时荧光定量PCR检测(操作与实施例3中步骤3～4相同)LNC_000397的表达水平。

5、取步骤3收集的PAM细胞，分别用MOI为0.1的GSWW和VR2332毒株接种细胞，37℃、5％CO₂条件下培养24h，弃去培养基，用细胞刮收集细胞。用Qiagen RNeasy Mini Kit试剂盒提取总RNA，反转录后用实时荧光定量PCR检测PRRSV病毒的ORF7表达量，以GAPDH为内参计算PRRSV ORF7 mRNA的相对表达量(操作与步骤4相同)。其中，PRRSV病毒的ORF7的上下游引物如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。

检测结果：如图3所示，以阴性对照siRNA组中LNC_000397的表达量为1，LNC_000397敲低组中LNC_000397的相对于阴性对照组的表达量为0.58，图示为三次独立实验平均值。

如图4所示，GSWW毒株感染后，PRRSV病毒的RNA拷贝数在敲低LNC_000397的PAM细胞中为阴性对照组的1.96倍，VR2332毒株感染后，PRRSV病毒的RNA拷贝数在敲低LNC_000397的PAM细胞中为阴性对照组的7.3倍。LNC_000397敲低组与对照组相比PRRSV的复制水平均有显著升高，表明LNC_000397具有抑制PRRSV病毒复制的功能，图示为三次独立实验平均值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所

<120> 一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的长链非编码RNA

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 8540

<212> DNA/RNA

<213> Sus scrofa

<400> 1

ctcaaggata taatgccaac cagaatcaac cagtcacaga aagactcttc actgacttgg 60

gtagaggagc agtctgggaa tatgggactc tcttcctttc cctggctgga tccctggatg 120

tgctaccctt tccttgcctg caagtggaag caaaggctgc acagacccac ttcgaactaa 180

caccagtcat tgctttgctt ctgattctgg gaaccacagc ataaagcagc acccaggacc 240

actcatgcca atcttctgta ctatttgtta ctctgccaca atttactaac cccagcaagt 300

ccaagcccgc tggagagatg cacttaagag gccggcgggg tctggctggg ggagccattt 360

tgccctccaa gtggctcgca gcagggcttc cagctgccat ccccttggac ctttcccagt 420

ggtactcatg gcacctgccc agccagggtt tttcactcga acctcctgac catccacaac 480

actaaactct agactcagga agttctgagt gtcttcctca ctccccaaca ccatctggtt 540

catatgaaca cattccttgc tccctcagac agctcctagt aaatccttct tttatgaacc 600

tgaacgttgt ttttcttcct gccgacagtc tttctttcct tcccaccttc tgtctgtctg 660

aggtgaagaa tctgaggccc agcagccacc ccctcattgg ttgagggcct gacttgaggt 720

cctccttagg tgataccacc acctttagga actcacccat cgccaacata ccaggtttca 780

tgctggaggc ctcaggaatt ggggcaagat actcaaatcc ctcctctcca aaattgaaat 840

aaggccctgg gcagacccat cacctgtgtg acataggagt cagtcagggt gtcctacagg 900

aactcgtggc acctggcaga cataggcaaa agcctcccca aatcccttca gttggaggtc 960

aagggctctt gaggtccatg agagaagtct tccaaatacc tgctctgtag ctgggcgtga 1020

tagttacctc ttgaggccct ctaaaatgac aggagtgaag gataatccta ctgcaacaaa 1080

gggaatatgc agccatcatc agtacccatg gatttctaca aaaatctgag agagagcatg 1140

gccaggggat aggtgactta cacaatagct agaccccacc aggagaaggc tatgaaagca 1200

ggggaggact ggagacatta aacagacaca ttaaacaatt ctaaaaatgt agatattgat 1260

ggaaggagca agcttcgctc caccccttcc tatacctgcc atctgcctag aagagcacta 1320

gacagtgagt ttgctaccta gagctaagaa tgagaagacc ctttcctaaa gtcaccagaa 1380

aaccatccaa gggatcttag ggtagccagt acagaacctg gcagaaaatc tctctccatt 1440

ctaagtttag ataagactca gcacactccc ctaaatactg accgtatagg ttgggttccc 1500

aggcagcctt tctgttactc cacttcagag ggtcacaggc aggcatgggc ctcctggcat 1560

gggagggaag tccgaaagaa agaccatgac gtacaaacac tgaccctgac aggaaaaaaa 1620

attgctagac cataaaataa gggatagcgt attttgccag gatgcaactc agagagcaag 1680

aaagaatgct tgcaaattta tttatttatt taggctgtac ccatggcaca tagaagttcc 1740

caggccaggg atcaaacctg tgccacagca gcaatccgag ccacagcagt gatgccatat 1800

ccttaatcca ctgagccacc agggaactcc aatgtatgca aatttaaaag gtgattgctg 1860

tgagttccct ggtggctcag agggttaagg atccagcgtt gtcactgctg tggtgtgggt 1920

ttgatcccta gcctgggaag ttctgcatgg ctcaggcata gccctccacc aaaataatgc 1980

gattgcggat tcaggcttaa aaaaggaagg aagttggagt tcccgtcgtg gtgcagtggt 2040

taacgaatcc gactaggaac tatgagattg caggttcgat ccctggcctt gatcagtggg 2100

ttaaggatcc agcgttgccc tgagctgtgg tgtaggttgc agacgcggct tggatcccga 2160

gttgctgtgg ctctggcata ggccggtggt tacagctctg attagacccc tagcctggga 2220

atctccatat gctgcgggag tggtcctaga aatggcaaaa agacaaaaat aaataaataa 2280

ataaataaaa aaggaaggaa gttctaacat atctacggca tggataaacc ttgaagttag 2340

taagctgagt gaaaaaaacc agtcgcaaaa ggacaaatat tatttgattc cacctacata 2400

aagttcctag agtagtcaaa ttgatagaga cataaaggag aatggagatt gacagcggtg 2460

gggacgggca cggagttaat gtttaatggg tagggagttt caggtgggaa agatgaaaaa 2520

gctctttttt ttttttgtct tttctagggc cactcccacg gcatgtggat ggtcccaggc 2580

taggggtcta atcagagctg tagccgccag cctatgccac agccacagca acgtgggatc 2640

caagctgcgt ctgcgaccta caccacagct cacagcaaca ccggatcctt aacccactga 2700

gggaggccag ggattgaacc cacaacctca cggttcctag tcggattcgt taaccactga 2760

gccatgacga gaactctgaa aaagttcttt agattggagt tcctgttgtg gctcagcagg 2820

ttaagaacct gacttagtgt ccatgaggag gcaagttcga tccctggcct cgctcatggg 2880

ttaaggatct ggcgttgttg caagctgtgg cataggctgc agatgtggct cagatgtggt 2940

gttcccatgg ctgtagcata ggcctgcagc ttcggctctg attctcccta gcctgagaac 3000

ttccacatgc cacaggtatg gccgtaaaaa gaaaaaaaaa gttctctata tgaatggtgg 3060

tgattgcata gcaatgagaa tgtgcttaat gccacagaac tatacattta aaaatagtta 3120

aaacagtgaa caccatatta tatatatttt atcgcaataa gaaatatgag aagttcctgc 3180

tgtggcacaa taggatcagc ggcatcttgg gagcactggt ttgcaggttc aatccccagc 3240

ctggcacagt gagttaggga tctggcattg ctgcagctgt ggcttaggtc acagctgtgg 3300

ctaggatctg gtccctggcc caggaactcc atatgttaca gagaggccaa agaagaaaat 3360

tgataaagta aaaaatcata aaaattgaat tccaactaaa atttaagaaa atttctgaca 3420

atgtagagca caaaaacaaa aacacaagga caaacctagg tcagacttta gacctacagg 3480

tggtccacaa aaagaagcca gagaaatcag ggtgcagcag attctcaaaa gtataacata 3540

agaaagttcc cgtttagggc agctaatttt gaataaagac ctgatcagag agaagaaaaa 3600

aaagaaaaaa agttcctaga gttgaaggaa gactcacata tttacattaa aaagatctaa 3660

caagagtcca gcaagatgaa agaaaagact cattcagaca catcatagga aatctcagaa 3720

gcccaaaggc aaaggaagca gcctaaaact gtcccaagag gaacaagagg ttcacctcca 3780

aagagctgag actcacatga gcatcaattt cccagtggta atactggatt ttagacaact 3840

gtcgagcagg gtcttcaggt ttctaagaga gactaatctt catctggacc acacccggaa 3900

atctaagcta aaagcagtgg tgaggtattc tgacacacgg cccagttgcc ttccttagga 3960

gttattttaa gatgaacttt agcaaagcaa ggaagtaaat caaaagagag taagacaaaa 4020

gatacatgaa acagtggctc cgacccagga gagagttgtg caagtcccag ggtaactacc 4080

ttgccatctc acatctcctc tggaaccttg ggtgctccct acagtgtcgt caacttggaa 4140

aactggaact ttcttgctta tccactgcag ggggtgcctg agtgaacatg gcctgtgtgc 4200

ttcatacaca caagtggcgg gaagaataac atggatctct gtgaatcaac ttgtgtatat 4260

tttcaaggca ttttagggag ccatatttta gttatagaat gacaccaaat tatcaagaaa 4320

cttctaaaat cagactccca aatgacctcc ataatgttct gaatgtctca tgggctcttc 4380

atctgtagtg gagcagaggt caaagagggc actcatcaag ctgtgacctg gtaccccctg 4440

ggctggagtg caagttcaag aaactgtcag tgagtgagga gatgaaaatc agaggcatgt 4500

acgagtccca ccagagtgat cttcctcaag tattccaaca gcttccattg ctcttaggat 4560

aaaatctctg ctccaggctg gcctgtgaag ccctgcagaa gtttggccca cctgcctctg 4620

gctctattcc cccaagcaca cctagatcag cccaacctca gggtcattgc ccttgctgtt 4680

ctctttgccc agactgttct tcctttggat ctgaatgttg gttgaatgtg cctatatatt 4740

gcaatatacc aggaaagcct aagatattta gacccacaca gcaaactgtc agctgccatg 4800

ggaagggtag aggcagtgtt tttgagtgga cctgctgtct tgacattgga gcacaaggaa 4860

gttgatggca aagctgctac tgaggatttc acgactattt tcgagacctt agggtcctaa 4920

gagaggaccc cgaatttaga acagaatccg cctagttaaa agaaggacta atacaaaaag 4980

cacagacctg ctacttgaac tttttttttt ttttttttta agctgcacct gtagcatgcg 5040

gaagttcctg ggccagggat ggaaccggtc cacagcaata accctagctg ctgcagtgac 5100

aatgccagat ccttaatctc ctgtagcaca aggaaactcc ctgctaccat aatttttatg 5160

cccagaaaaa tactggagga aaaggaaatg aagtcatcct acatgtagct tgatgggaag 5220

tccagcccag ctttgtacag atgtaggctt ggtacatgtt gtattctcct ggcttgaaat 5280

gggagaccag agaagtcttc cctgtaccaa gctgggctgc aggccctggc atgaggctta 5340

cttagatgaa atggtctcac cccctcctga gagctacaga ccagacccat gatgtgctgt 5400

gtggctagcg ggcttagggc ttggccgtct aaccctttag cttgtctatc ccactggaac 5460

acaagctcca agaggacaga gaggccctag tatgcagcag gcacttgata aagacctatt 5520

ataggagtct aggcctcaga gcagcctgga gtggcaaaga aagtaagcaa aagcagaaac 5580

gcaaagtccc ttggcaccaa gaggcagcct gtgtgcttcc ctcactgcag atgccaaact 5640

cagagaacaa gtgcatggaa acaccaaggt ccacggaatg caaagtggaa ggagcaccat 5700

agggagcttg cagatagcag ccttgagtga tagcctagaa aaaggatttt tgcttcctgc 5760

ttggaggcag ctgggctcta aatgtttgtc cacatgaaag ggtcattccc tggagttcct 5820

attgtgtttc agcggtaacg aactcgacta atatccatga ggacataggt ttgatccctg 5880

gccgcatggg taggattaag gatctggcaa tgccatgagc tgtggtgtag gtcgcagatg 5940

tggctcggat ctggtgtggc tgcagctgcg gctgcggctg tggctatggt gtaggtcagc 6000

agatgtagct ccaattcgac tcctaacctg agaactttca tatgccatga atttggccct 6060

caaaagcaaa aagaaaaaaa aaaaaaagaa gaagaagaaa tggtcacttc ctgagggtgg 6120

gtactctacc tgatagagcg cccatgttac ctggggcttc taaggcagct gggccaatgg 6180

gttctgagga tagagtaggg aggagggacc agatacagag ctgagttttt caaaatcagc 6240

cacaggctgg acctcaggat catgtggcca tcacaccccc atagcccttt ctctgtccaa 6300

cctaaactgg ggtgggcagg cagctctggc tccataaaga gagtggcaaa actgagataa 6360

gaaatgaaag agaaagatgg aggaattaaa ggtataaaaa tgagaggaaa ctggcttgta 6420

tgcattcatt cccccctgca gaggctgacc aggtactacg gtgtggagaa aggagtgtgc 6480

acatagatgg tgctgaggga ttcagattag gaggtggctc ccggtctact cacacccagg 6540

tgtgtacatg ttggggggac cggactccag ccagactcta gagcatctct gtggccctgg 6600

cacctgacag catttgaata aaaagcacta tatgcacaga ggacagtaag cttatttctg 6660

ctgaggagac tagggaaggc tctgcagggc agctgaccct tcggtgtgaa gagcagaagc 6720

acagaaaggt agaggagcaa gaaggcaagg tgtgttctat tggagttgac agtgtaatct 6780

ggctgaagcc tgaagatcca ctgtggccca gtgcggccag ctccatgagt gccttaagca 6840

cagcacaaag gttcctgaga gatgtttggc aaaggagtgg catgatgccc aggggccggt 6900

atactgggca gacaggagga gtggggagat gggtcacgag cctcacaagg aggtggtagc 6960

aagggaaagg gtcaggaagg caccacagaa gttagataag aaggttctag caactgactg 7020

gatgtggggt agagggagca caatgatttc ctaacattga aaagtggctc aaggagttcc 7080

tgtcgtggcg cagtggttaa cgaatccgac taggaaccaa gaggttgcgg gttcggtccc 7140

tgcccttgct cagtgggtta aggatctggc gttgccgtga gctgtggtgt agcttgcaga 7200

tgcggctcgg atcctgtgtt gctgtggctc tggtgtaggc cagtggctac agctccgatt 7260

ccacccctag cctgggaacc tccatatgcc gtgggagcgg cccgagaaat gacaaaaaga 7320

caaaaaaaca aaaaacaaaa aaaaaaaaaa aagaaaagtg gctcaaatag gagttctcat 7380

agcggctcag ccagttaagg accaatgtag tctttgtgag gatgcaggtt ttacacctgg 7440

tttcactcaa tgggttaaga attcttcagg agttcccgtc gtggcgcagt ggttaacgaa 7500

tccgactagg aaccatgagg ttgcgggctc ggtccctgcc cttgctcagt gggttaatga 7560

tccagcgttg ccgtgagctg tggtgtacgt tgcagacgcg gctcggatcc cacgttgctg 7620

tggctctggc gtaggccagt agctacagct ccgattagac ccctagcctg ggaacctcca 7680

tatgccgtgg gagcggccca aagaaatagc aaaaagacaa aaaaaaaaaa aaaagaattc 7740

ttcagcattg ctgcaagctg tggcacagga tgaagatgca gccccatcca gtgttgcggt 7800

ggctgtggca taggcctata gctgcagctc caattcgacc cctagcaggg gaaatttcat 7860

gtgccacagg tgtggtggta aaaaaaagtg gctcaaataa aagaggcttg gtcactgggt 7920

gtgtgttttc tgtctggatc atcagtgggg cagctgggca ggagataggc ctgaggatgc 7980

tcccagcctt tcagctgctg tgaaacactc aagaggaaga atgggtggcc acactggcag 8040

ggacatccat ctctctgcct cttggctccc tctgctggca gctttaatgt acacattcct 8100

gggaccagaa gagttatttt tgtccttttt ttaaggatgg acccaggcat atggaggtta 8160

ctaggctaga ggtccaatag gagctgtagc cgcaggccta cgccagggcc acagcaatgt 8220

gggatctggg tcgcgcctgc gacctacacc acagctcaca acaaagccat atccttaacc 8280

cactgagcaa ggtcagggat cgaacccatg tcttcatgga tgctagttgg gtttgttaac 8340

cactgagcca caaaggaaac tgtttgggag ttatttttgt ggatgctttc ctaattcaga 8400

atctgggaca aacagatgca ttagttgagc cattccataa acaggatgct caaacactac 8460

taattattaa agaaatacaa atgaaaacta cagtgagttc acaaacaata aatgctggag 8520

gtggtgtgga gaaaagagag 8540

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aagcagtggt gaggtattc 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

cggcaaatga taaccacgc 19

<210> 4

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

augaaaccug guauguugg 19

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

caagaaggtg gtgaagca 18

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aagtggaaga gtgagtgtc 19

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cggcaaatga taaccacgc 19

<210> 8

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ttctgccacc caacacgag 19

Claims (3)

1.一种抑制PRRSV病毒的lncRNA，所述lncRNA为LNC_000397，所述LNC_000397的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的lncRNA，其特征在于，用于扩增所述lncRNA的引物对为：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求1或2所述lncRNA在制备预防或治疗PRRSV病毒的药物中的应用。