CN107586736A - 两歧双歧杆菌m2017063及其在缓解慢性肾脏疾病药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株具有很强的辅助治疗肾脏疾病的两歧双歧杆菌CCTCC NO:M 2017063，分离自健康幼儿粪便，为革兰氏阳性多形态杆菌，有很强的降解小鼠血清肌酐、尿素氮的能力，可开发作为微生态菌剂，用做发酵剂或添加剂，改善肾脏疾病患者的身体状况。

Description

两歧双歧杆菌M2017063及其在缓解慢性肾脏疾病药物的应用

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及一株新分离的两歧双歧杆菌(Bifidoacferiumbifidum)菌株及其益生功能，主要是用于降低慢性肾脏疾病患者肌酐和尿素氮。

背景技术

肾脏疾病是一个严重的公共健康问题，威胁着患者的身心健康，给患者及社会带来了沉重的经济负担。目前世界上超过5亿人患有不同的肾脏疾病，每年超过百万人死于与慢性肾脏病相关连的心脑血管疾病，而我国成年人群中慢性肾脏疾病的患病率为10.8％(1.2亿)。此病晚期或者到尿毒症期，治疗极其困难，不仅要忍受疾病的痛苦，也会造成难以承受的经济包袱。

目前主要依靠药物(激素类和解毒类)和肾脏替疗法(血液净化、膜透析、肾脏移植)治疗慢性肾病。这些方法需要大量的经济基础，而且效果不理想，肾移植不仅费用昂贵，移植后生存期一般为5-7年。

乳酸菌可调节机体胃肠道菌群平衡，清除肠道内有毒代谢产物，维持肠道粘膜屏障的完整性，提高机体免疫力等方面的特殊生理活性。

肌酐是一种胍类化合物，是蛋白质代谢产生的一小分子尿毒症毒素，正常情况下主要由肾小球滤出排出体外，血肌酐水平保持稳定，肌酐蓄积会导致机体酸中毒，不仅会对肾脏有损伤，还会累及呼吸系统、心脏、胃肠道系统等，造成全身性的伤害。临床上检测血肌酐是常用的了解肾功能的主要方法之一，肾功能不全时，肌酐的排泄减少，在体内蓄积成为对机体有害的毒素，因此清除肌酐对于辅助治疗肾功能不全的患者有重要意义。

发明内容

现在，本发明人分离鉴定了一种两歧双歧杆菌CCTCC M2017063，是一类严格厌氧，不产孢子的革兰氏阳性菌，菌体呈短杆状，在MRS+0.5％L-半胱氨酸的琼脂平板培养基中呈乳白色透明，圆形，光滑的菌落。

两歧双歧杆菌CCTCC M2017063可以降低慢性肾衰竭小鼠的血清肌酐和尿素氮的含量，改变小鼠肾脏转录水平的变化，减缓小鼠的肾衰竭症状。

本发明的两歧双歧杆菌CCTCC M2017063作为益生菌，具有极强的清除肌酐和尿素氮的能力，是一株性能优良的菌种。因此具有很高的研究价值和应用价值。

本发明两歧双歧杆菌(Bifidoacferium bifidum)，于2017年2月24日保藏在中国典型培养物保藏中心(中国武汉武汉大学)，编号：CCTCC NO:M 2017063。

一种微生物菌剂，含有所述两歧双歧杆菌CCTCC NO:M 2017063。

所述菌株的各种细胞成分及其全部代谢产物。

包含所述的两歧双歧杆菌的乳制品、蔬菜制品及饮料制品。

包含自所述菌株的各种细胞成分及其全部代谢产物作为添加剂。

一种组合物，包括两歧双歧杆菌菌株，或微生物菌剂，或包含所述的两歧双歧杆菌的乳制品、蔬菜制品及饮料制品等。

本发明还涉及，所述两歧双歧杆菌在制备缓解慢性肾脏疾病药物或保健品中的应用。

附图说明

图1两歧双歧杆菌CCTCC M2017063对慢性肾脏疾病小鼠血脂、肝功能的影响

图2两歧双歧杆菌CCTCC M2017063对慢性肾脏疾病小鼠肾功能的影响

图3两歧双歧杆菌CCTCC M2017063对慢性肾脏疾病小鼠肾脏纤维化的影响

A，模型组；B，正常组；C，灌胃两歧双歧杆菌CCTCC M2017063组

图4两歧双歧杆菌WBBR04对慢性肾脏疾病小鼠肾脏HE染色结果A，模型组；B，正常组；C，灌胃两歧双歧杆菌CCTCC M2017063组

具体实施方式

以下结合实例来进一步解释本发明，但实施例仅用于说明本发明，而本发明的应用范围不能以任何方式由这些实施例所限制。

实施例1：两歧双歧杆菌CCTCC M2017063的分离与鉴定

两歧双歧杆菌CCTCC M2017063是从健康幼儿粪便中分离。将1g粪便溶于10mL10％蛋白胨溶液中，玻璃棒充分搅拌溶解后，滤纸滤去残渣，收集滤液于5000rmp离心10min，弃上清，沉淀用1mL10％蛋白胨水重悬。按1％接种到MRS+0.5％L-半胱氨酸的液体培养基中，于37℃厌氧过夜培养。培养液采用10倍梯度稀释，分别取10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度稀释液1mL分别均匀涂布于MRS+0.5％L-半胱氨酸的琼脂平板上，37℃厌氧培养48h。挑取单菌落，在平板上划线分离，反复进行纯化培养，用革兰氏染色法观察菌落形态选出革兰氏阳性菌，并进行菌落PCR。将阳性PCR产物送至公司测序。

将所分离菌菌株的16S rRNA碱基序列分析测序碱基序列进行比对分析，发现与NCBI数据库里的两歧双歧杆菌序列相似性大于99％(该碱基序列见序列表)，因此确认为两歧双歧杆菌，并保存于武汉市中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2017063。

两歧双歧杆菌为革兰氏阳性多形态杆菌，不产芽孢、不运动，菌落光滑、边缘整齐、质地柔软。能在pH6.2-6.4的MRS+0.5％L-半胱氨酸培养基中正常生长。

实施例2:菌株对腺嘌呤诱导的慢性肾损伤小鼠的作用

雌性Balb/C小鼠30只，随机分成三组，正常组(10只)：生理盐水100μl灌胃；模型组(10只)：每日予2％腺嘌呤混悬液100μl灌胃，共4周。两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063组(10只)：每日予2％腺嘌呤混悬液100μl灌胃1周后，每日将两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063重悬于2％腺嘌呤混悬液中，分别灌胃100μl共3周。饲喂结束后，眼眶采血，断颈处死小鼠。血浆4℃静置后取血清检测相关的生化指标。取肾脏进行HE染色，观察小鼠肾脏衰竭的程度及改善状况。

实验结果：

如图1所示，灌胃两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063菌株后血清血糖血脂和肝功能均没有改变，说明该菌株对小鼠的生理功能没有影响。

如图2所示，两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063显著性的减少小鼠血清肌酐，与模型组相比降低了59.53％，与正常小鼠基本一致。尿素氮同样与模型组相比显著降低了54.22％，恢复到正常水平，说明了双歧杆菌CCTCC M 2017063对肾损伤有的缓解作用。

如图3所示，灌胃两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063后，小鼠的肾脏明显由白色向暗红色恢复转变，进一步说明该菌株能改善小鼠肾功能损伤。

如图4所示，HE染色可以看出，灌胃两歧双歧杆菌CCTCC M 2017063，能较少小鼠肾小球损伤。

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序列表

<110> 南昌大学

<120> 两歧双歧杆菌M2017063及其在缓解慢性肾脏疾病药物的应用

<130> 2017

<150> 2017103102424

<151> 2017-05-05

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1412

<212> DNA

<213> Bifidobacterium animalis

<400> 1

tgcttaacac atgcaagtcg aacgggatcc atcaagcttg cttggtggtg agagtggcga 60

acgggtgagt aatgcgtgac cgacctgccc catgctccgg aatagctcct ggaaacgggt 120

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cccgggcctt gtacacaccg cccgtcaagt catgaaagtg ggcagcaccc gaagccggtg 1380

gcctaacccc ttgtgggatg gagccgtcta ag 1412

Claims (8)

1.一株保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC的两歧双歧杆菌(Bifidoacferiumbifidum)菌株，保藏编号：CCTCC M2017063。

2.一种微生物菌剂，其特征在于含有权利要求1所述两歧双歧杆菌。

3.权利要求1所述菌株的各种细胞成分及其全部代谢产物。

4.包含权利要求1所述的两歧双歧杆菌的乳制品、蔬菜制品及饮料制品。

5.包含自权利要求1所述菌株的各种细胞成分及其全部代谢产物作为添加剂。

6.一种组合物，包括两歧双歧杆菌菌株，或微生物菌剂，或包含所述的两歧双歧杆菌的乳制品、蔬菜制品及饮料制品等。

7.权利要求1所述两歧双歧杆菌在制备缓解慢性肾脏疾病药物或保健品中的应用。

8.权利要求1所述两歧双歧杆菌在制备降低血肌酐药物/保健品中的应用。