CN107099492A - 植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 - Google Patents
植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107099492A CN107099492A CN201710542574.5A CN201710542574A CN107099492A CN 107099492 A CN107099492 A CN 107099492A CN 201710542574 A CN201710542574 A CN 201710542574A CN 107099492 A CN107099492 A CN 107099492A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- constipation
- mouse
- lactobacillus
- activated carbon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 78
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 78
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 78
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 title claims abstract description 63
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 40
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 29
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 28
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 22
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 20
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 20
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 16
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 15
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 15
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 description 13
- 101150016206 Trpv1 gene Proteins 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 12
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 12
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 12
- 210000001809 melena Anatomy 0.000 description 11
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 10
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 10
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 10
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 10
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 10
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 10
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 8
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 8
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 7
- 210000004495 interstitial cells of cajal Anatomy 0.000 description 7
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 7
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 6
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 6
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 4
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 4
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 4
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N methane;hydrate Chemical class C.O VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 description 2
- 101710177504 Kit ligand Proteins 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N substance P Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100021022 Gastrin Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- -1 GelRed nucleic acid Chemical class 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 1
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 235000018823 dietary intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000002592 gangliocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009654 indole test Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 230000008991 intestinal motility Effects 0.000 description 1
- 238000009940 knitting Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000011022 operating instruction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 210000001187 pylorus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000019086 sulfide ion homeostasis Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/32—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the digestive tract
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了保藏编号为CCTCC NO：M2016750的植物乳杆菌YS4(Lactobacillus plantarum YS4)及其在制备预防便秘的食品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌YS4的应用范围，提高了其应用价值，而且给便秘的预防带来了新的希望。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种植物乳杆菌及其在制备食品中的应用。
背景技术
牦牛酸乳是青藏高原藏族地区的一种自然发酵乳制品，含有丰富的营养成分，具有抗氧化、降低胆固醇、调节免疫力的作用。由于特殊的自然发酵条件，包括发酵原料乳、发酵温度、发酵时间、发酵器皿，特别是特殊的发酵微生物组成，造成牦牛酸乳具有特殊风味及品质。
当每周排便次数低于3次的时候会被视为处于便秘状态，当次数低于1次视为严重的便秘状态，是一种威胁人体健康，特别是对结肠健康具有较大影响的复杂症状。便秘通常不被视为疾病，大多数情况可以通过日常饮食和习惯的调节预防便秘。
发明内容
本发明的目的在于对牦牛酸乳中的微生物进行分离鉴定，并对其活性和应用进行研究。
经研究，本发明提供如下技术方案：
1.植物乳杆菌YS4(Lactobacillus plantarum YS4)，保藏编号为CCTCC NO：M2016750。
2.植物乳杆菌YS4在制备预防便秘的食品中的应用。
本发明对青海玉树藏族自治州的牦牛酸乳中的微生物进行了分离鉴定，将其中一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)命名为YS4，于2016年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：M2016750。
活性炭诱导便秘模型小鼠研究结果显示，植物乳杆菌YS4的抗胃酸和胆盐能力强于保加利亚乳杆菌，能够抑制便秘造成的小鼠体重下降，粪便重量、颗粒数和含水量下降，同时可以提高活性炭在小肠中的推进率，减少排出首粒黑便的时间，还能使便秘小鼠的血清胃动素(MTL)、胃泌素(Gas)、内皮素(ET)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、P物质(SP)和血管活性肠肽(VIP)血清水平提高，生长抑素(SS)水平下降。RT-PCR实验结果进一步显示，植物乳杆菌YS4可以上调便秘小鼠小肠组织中c-Kit、SCF、GDNF mRNA表达，下调TRPV1、NOS mRNA表达。高浓度的植物乳杆菌YS4显示出更好的作用，且显著优于同浓度的保加利亚乳杆菌。这些实验结果证明，植物乳杆菌YS4可以有效的抑制便秘，能够用于制备预防便秘的食品。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种植物乳杆菌YS4，其可以有效的抑制便秘，且效果显著优于常用的保加利亚乳杆菌，能够用于制备预防便秘的食品，不仅扩大了植物乳杆菌YS4的应用范围，提高了其应用价值，而且给便秘的预防带来了新的希望。
附图说明
图1为植物乳杆菌YS4的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中M为λDNA/Hind IIIMarker，1为植物乳杆菌YS4的基因组DNA。
图2为植物乳杆菌YS4的16S rDNA基因片段的PCR扩增结果，其中M为DNA Marker，C为阴性对照，1为植物乳杆菌YS4的16S rDNA基因片段的PCR扩增产物。
图3为植物乳杆菌YS4对活性炭诱导便秘小鼠体重的影响。
图4为植物乳杆菌YS4对活性炭诱导便秘小鼠首粒黑便排出时间的影响。
图5为植物乳杆菌YS4对活性炭诱导便秘小鼠小肠组织中c-Kit和SCF mRNA表达的影响。
图6为植物乳杆菌YS4对活性炭诱导便秘小鼠小肠组织中TRPV1、GDNF和NOS mRNA表达的影响。
图3至图6中，LB表示保加利亚乳杆菌，LP-YS4表示植物乳杆菌YS4。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、植物乳杆菌YS4的分离和鉴定
一、乳酸菌的分离纯化
采集青海玉树藏族自治州牧民家庭的自然发酵牦牛酸乳样品10份，每份样品用无菌玻棒充分搅匀后，吸取50mL放入无菌离心管中，置于食品采样箱内带回实验室，4℃冰箱保存。
每份牦牛酸乳样品取1mL，用灭菌生理盐水作10倍梯度稀释至10-7。取10-5、10-6、10-7三个稀释度各1mL稀释液分别于装有15mL MRS培养基(含质量比为5％的CaCO3)的平皿中，混匀，置30℃恒温箱培养72±3h。每个稀释度作三个平行。菌落形成后，观察其形态特征，挑取有溶钙圈的不同菌落分别接种于脱脂乳培养基中，置30℃培养24～48h，待菌株生长良好后，划线接种于MRS琼脂培养基，置30℃培养48h；重复以上步骤至少三次，直至得到纯菌落。
将纯菌株在MRS固体培养基上划线，置30℃培养48h，用10倍放大镜观察菌落大小、形状等表观特征，进行革兰氏染色，挑取形态典型的菌株进行过氧化氢酶试验。将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性的球菌菌株和杆菌菌株，暂定为乳酸菌。
二、乳酸杆菌的鉴定
将初步筛选出的乳酸杆菌菌株分别进行生长温度试验(10℃、15℃、45℃、60℃，30min)、pH值梯度试验、运动性试验、接触酶试验、氧化酶试验、硫化氢试验、明胶液化实验、硝酸盐还原试验、吲哚试验、葡萄糖产气试验、联苯胺试验、石蕊牛乳试验、精氨酸产氨试验、酪素分解试验以及各种糖醇发酵试验。
结果从10份牦牛酸乳样品中共分离纯化出20株乳酸杆菌，均为革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性。通过形态学观察和生理生化试验，将这20株菌株初步鉴定为7种乳酸杆菌，依次编号为Lb1～Lb7，其中，编号为Lb7的乳酸杆菌初步鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)(表1)。
表1编号为Lb7的乳酸杆菌的形态学特征和生理生化试验结果
注：+，阳性；－，阴性；+w，弱阳性。
三、植物乳杆菌的鉴定
取编号为Lb7的乳酸杆菌液体培养的菌悬液，离心弃上清，收集菌体，按照细菌基因组DNA提取试剂盒(北京索莱宝科技公司)所述方法提取基因组DNA，进行琼脂糖凝胶电泳(凝胶质量比浓度0.8％，电压80V，电泳80min)，用GelRed核酸染料染色后，在凝胶成像系统中观察(图1)。将提取的基因组DNA稀释200倍，用紫外分光光度计进行浓度纯度测定。采用引物27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(SEQ ID No.1)和1492R：5’-GGCTACCTTGTTACGACTT-3’(SEQ ID No.2)对16S rDNA基因片段进行PCR扩增(图2)。扩增产物由生工生物工程(上海)有限公司和北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序，并将测序结果(SEQ ID No.3)与Genbank中相关序列进行比对。结果显示，编号为Lb7的乳酸杆菌的16S rDNA基因片段序列与Lactobacillus plantarum strain CIP 103151的相似性达到98％。
因此，编号为Lb7的乳酸杆菌鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，将其命名为YS4，并于2016年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：M2016750。
实施例2、植物乳杆菌YS4对活性炭诱导小鼠便秘的预防作用
通过给小鼠灌胃活性炭使胃肠道粘膜表面被活性炭附着，导致消化道中含水量下降，消化液减少，引发胃肠运动减慢形成便秘。在对乳酸菌便秘预防效果的前期研究中，发明人证实首粒黑便排便时间、MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP、VIP的水平等都可作为评价乳酸菌便秘预防作用的指标；通过进一步的分子生物学实验检测结肠组织中相关mRNA表达能更确切的证实乳酸菌的生理功效。
本实施例使用的主要材料、仪器与实验动物如下：植物乳杆菌YS4(保藏号：CCTCCNO：M2016750)，保加利亚乳杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心)；MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP和VIP(北京普尔伟业生物科技有限公司)；Trizol试剂、OligodT18、RNase、dNTP、MLV逆转录酶(美国Invitrogen公司)；ROX reference Dye和SYBR Premix Ex Taq II(日本TAKARA公司)；RT-PCR引物(北京天根生化科技有限公司)。D550数码相机(日本佳能公司)；SevenEasy pH计(瑞士梅特勒-托利多公司)；iMark酶标仪、T100梯度PCR仪(美国伯乐公司)。七周龄雌性昆明小鼠购自重庆医科大学实验动物中心(许可证号：SYXK(渝)2012-0001)，饲养于控温控湿环境中(温度25±2℃，相对湿度50±5％)，每12h调节光/暗周期，提供小鼠标准饲料和饮水。
一、植物乳杆菌YS4抗胃酸能力和胆盐耐受力检测
乳酸菌要发挥益生菌作用，需要在胃和肠道的强酸性条件下，到达目的地(通常是大肠)定植并发挥其生理功效。因此，为了研究乳酸菌的潜在益生菌作用，建立体外虚拟模型，检测乳酸菌的抗胃酸能力和胆盐耐受力是重要的检测手段。
将NaCl和胃蛋白酶溶于蒸馏水中并用1mol/L的HCl调整pH为3.0，达到NaCl的质量比为0.2％，胃蛋白酶的质量比为0.35％，真空过滤去除细菌，作为人工胃液备用。将植物乳杆菌YS4活化后进行培养，取培养液5mL，3000r/min离心10min，收集菌体，用5mL生理盐水重悬后，与人工胃液按体积比1∶9混匀，37℃培养3h，测定0h和3h时的植物乳杆菌YS4活菌数，按公式计算植物乳杆菌YS4在pH 3.0人工胃液中的生存率(％)＝3h活菌数(CFU/mL)/0h活菌数(CFU/mL)×100。
将植物乳杆菌YS4按2％的接种量接种于含有质量比为0.0、0.3％、0.5％、1.0％的牛胆盐的MRS-THIO培养基，37℃培养24h，以未接种植物乳杆菌YS4的空白培养基为对照，在600nm处测定吸光度值，按公式计算植物乳杆菌YS4在胆盐中的生存率(％)＝含胆盐培养基OD600/空白培养基OD600×100。
结果如表2所示，植物乳杆菌YS4在pH 3.0人工胃液中和不同浓度胆盐中的生存率均高于保加利亚乳杆菌，且植物乳杆菌YS4在pH 3.0人工胃液中的生存率是保加利亚乳杆菌的约2.9倍，而在不同浓度胆盐中的生存率是保加利亚乳杆菌的约9-13倍，说明植物乳杆菌YS4具有比保加利亚乳杆菌更强的抗胃酸能力和胆盐耐受力。
表2植物乳杆菌YS4抗胃酸能力和胆盐耐受力检测
二、植物乳杆菌YS4对活性炭诱导小鼠便秘的预防作用
选取体重约25g的昆明小鼠100只，平均分为5组，分别是正常组、便秘对照组、保加利亚乳杆菌处理组、植物乳杆菌YS4低浓度处理组和高浓度处理组。适应饲养1周后，正常组和便秘对照组小鼠正常自由摄入饮食和饮水2周；在这2周中除了正常自由摄入饮食和饮水外，保加利亚乳杆菌处理组小鼠每日每只灌胃2mL的1.0×109CFU/mL的保加利亚乳杆菌，植物乳杆菌YS4低浓度处理组和高浓度处理组小鼠每日每只分别灌胃2mL的1×108CFU/mL的植物乳杆菌YS4和1×109CFU/mL的植物乳杆菌YS4。2周后除正常组小鼠外，其他4组小鼠每日灌胃2mL的活性炭水(温度为4℃，按质量比将10％的活性炭加入含10％阿拉伯树胶的水溶液中制成悬液)，同时乳酸菌处理各组继续灌胃乳酸菌，持续3天。
1、植物乳杆菌YS4对小鼠体重和粪便的影响
实验过程中每日上午定时测定所有小鼠的体重、膳食摄入量、饮水量、粪便重量和粪便湿度。
体重变化是小鼠发生便秘的重要指标。由图3可以看出，前2周中各组小鼠的体重都呈现出正常的增长状态，各组之间没有明显差异；活性炭诱导便秘后，没有经过活性炭处理的正常组小鼠体重继续增长，其余各组小鼠体重均出现下降，其中便秘对照组小鼠的体重下降最多，植物乳杆菌YS4高浓度处理组小鼠的体重最接近正常组，显著高于同浓度的保加利亚乳杆菌处理组，说明植物乳杆菌YS4能够抑制便秘造成的小鼠体重下降，且效果优于保加利亚乳杆菌。
排便状态可以最明显的体现便秘的程度，便秘状态中粪便重量、颗粒数和含水量均是重要的粪便状态指标，这些指数下降表现出便秘程度的加重。如表3所示，第1-14天各组小鼠的粪便重量、颗粒数和含水量没有显著差异；活性炭诱导便秘后，第15-17天正常组小鼠的粪便重量、颗粒数和含水量最高，便秘对照组最低，保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌YS4都可以显著缓解便秘造成的粪便重量、颗粒数和含水量下降(P＜0.05)，但植物乳杆菌YS4高浓度处理组小鼠的粪便重量、颗粒数和含水量最接近正常组，显著高于同浓度的保加利亚乳杆菌处理组，说明植物乳杆菌YS4能够抑制便秘造成的小鼠粪便重量、颗粒数和含水量下降，且效果优于保加利亚乳杆菌。
表3植物乳杆菌YS4对小鼠粪便的影响
注：字母不同表示组间差异显著(P＜0.05)。
2、植物乳杆菌YS4对活性炭推进率和首粒黑便排出时间的影响
第17天灌胃活性炭水后对包括正常组在内所有小鼠实施断食24h，但仍给予小鼠自由摄入饮水，24h后所有小鼠每只灌胃0.2mL的活性炭水；30min后每组一半小鼠(10只)实施断颈处死，取小鼠血浆备用，同时取小肠观察活性炭在小鼠小肠中的推进率，推进率(％)＝活性炭推进长度/小肠总长度×100；每组剩余10只小鼠继续观察其排出首粒黑便的时间。
便秘造成肠道蠕动频率降低，粪便停留在肠道的时间增加，造成有害细菌以粪便为食物连续繁殖，从而威胁肠道健康，加重便秘。活性炭诱导小鼠便秘后小肠中活性炭推进长度和活性炭推进率可以作为评价小肠活动和便秘程度的指标。由表4可以看出，活性炭诱导便秘后，保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌YS4都可以增进活性炭在小鼠小肠中的推进长度，但植物乳杆菌YS4高浓度处理组的活性炭推进率最高，显著高于植物乳杆菌YS4低浓度处理组和同浓度的保加利亚乳杆菌处理组(P＜0.05)，说明植物乳杆菌YS4可以提高活性炭在小鼠小肠中的推进率，且效果优于保加利亚乳杆菌。
表4植物乳杆菌YS4对便秘小鼠胃肠道推进的影响
注：字母不同表示组间差异显著(P＜0.05)。
便秘造成肠道运动减慢，粪便在肠道中滞留时间增加，使首粒黑便排出时间加长，越短的首粒黑便排出时间意味着肠道运动越正常。由图4可以看出，正常组的首粒黑便排出时间最短(81±10min)，便秘对照组的首粒黑便排出时间最长(202±31min)，植物乳杆菌YS4高浓度处理组的首粒黑便排出时间(120±15min)显著短于植物乳杆菌YS4低浓度处理组(155±22min)和同浓度的保加利亚乳杆菌处理组(175±25min)(P＜0.05)，说明植物乳杆菌YS4可以减少便秘小鼠的首粒黑便排出时间，具有良好的便秘缓解作用，且效果优于保加利亚乳杆菌。
3、植物乳杆菌YS4对小鼠血清MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP和VIP水平的影响
取收集的小鼠血浆，4500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒操作说明测定小鼠血清的MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP和VIP水平。MTL可以刺激胃蛋白酶的产生和促进肠道运动；Gas能促进胃肠分泌和胃肠运动，促进幽门松弛，起到缓解便秘的作用；ET在血管张力稳定性和维持基本心血管系统中起重要作用；SS可以刺激肠道运动；AChE可以调节肌肉收缩和粘液分泌，可以使肌肉放松从而推进粪便排出；SP是一种有助于肠道蠕动的物质；保持VIP在肠壁中的正常含量也是稳定肠道功能的重要手段。
由表5可以看出，正常组小鼠血清的MTL、Gas、ET、AChE、SP和VIP水平最高，SS水平最低；便秘对照组小鼠呈现出相反的趋势；保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌YS4都可以使上述物质的血清水平接近正常组水平，但植物乳杆菌YS4的作用更显著，说明植物乳杆菌YS4可以使便秘小鼠的血清MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP和VIP水平尽量保持正常，从而缓解便秘。
表5植物乳杆菌YS4对小鼠血清MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP和VIP水平的影响
注：字母不同表示组间差异显著(P＜0.05)。
4、植物乳杆菌YS4对小鼠小肠组织mRNA表达的影响
取小鼠的小肠组织，粉碎后用RNAzol提取结肠组织总RNA，稀释至1μg/μL；取2μL稀释后的总RNA提取液，依次加入1μL的oligodT18、RNase、dNTP、MLV酶和10μL的5×buffer，37℃120min、99℃4min、4℃3min合成cDNA；然后采用表6所述引物，RT-PCR扩增c-Kit、SCF、TRPV1、GDNF和NOS的mRNA表达，以持家基因GAPDH作为内参照；最后用含质量比为1％的溴化乙锭的琼脂电泳检查PCR扩增产物。
表6RT-PCR引物序列
便秘患者肠道内的ICC(Cajal间质细胞)较少，c-Kit是ICC的特异性标志物，是ICC增殖的关键。SCF浓度对ICC的增殖非常重要，SCF不存在的环境下ICC不能进行生长。文献报道，便秘小鼠结肠组织中的ICC含量较少，结肠组织中的c-Kit表达水平也下降。植物乳杆菌YS4对小鼠小肠组织c-Kit和SCF mRNA表达的影响见图5，便秘对照组小鼠小肠中c-Kit和SCF mRNA表达下降，植物乳杆菌YS4可以显著上调小鼠小肠中的c-Kit和SCF mRNA表达，且高浓度时作用更加明显。
TRPV1已经被证实与排便有密切关系，激活TRPV1可以触发神经递质的释放，从而导致小肠运动障碍。TRPV1表达增加是肠损伤的一个显著现象，由于肠胃紊乱造成肠道损伤，使便秘患者有更高的TRPV1表达。GDNF可以调节神经节细胞的功能，从而有助于修复受损的肠道，可防止便秘。NOS对调节胃肠运动起重要作用。NO的增加能造成更严重的结肠动力障碍，控制NOS可以降低NO的含量，是控制便秘的可行途径。植物乳杆菌YS4对小鼠小肠组织中TRPV1、GDNF和NOS mRNA表达的影响见图6，正常组小鼠具有最高的GDNF mRNA表达和最低的TRPV1、NOS mRNA表达，而便秘对照组小鼠的GDNF mRNA表达最低、TRPV1和NOS mRNA表达最高，相对于便秘对照组，保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌YS4都可以上调GDNF mRNA表达和下调TRPV1、NOS mRNA表达，但植物乳杆菌YS4的作用明显优于保加利亚乳杆菌。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
<110>重庆第二师范学院
<120>植物乳杆菌YS4及其在制备预防便秘的食品中的应用
<160>15
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物27F
<400>1
agagtttgat cctggctcag 20
<210>2
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物1492R
<400>2
ggctaccttg ttacgactt 19
<210>3
<211>1469
<212>DNA
<213>植物乳杆菌YS4（Lactobacillus plantarum YS4）
<220>
<223>16S rDNA基因片段
<400>3
catgatttac atttgaggga gtggcgaact ggtgagtaac acgtgggaaa cctgcccaga 60
agcggggaat aacacctgga aacagatgct ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc 120
cgagnttgaa agatggcttc ggctatcagt gcaatggcgg cttttggatg gtcccgcggc 180
gtattagcta gatggtgggg taacggctca ccatggcaat gatacgtagc cgacctgaga 240
gggtaatcgg ccacattggg actgactcac ggccaaactc ctacgggagg cagcagtagg 300
gaatcttcca caatggacga agtctgatgg agcaacgccg cgtgagtgaa aagggtttcg 360
gctcgtaaac tctgttgtta aagaagaaca tatctgagag taactgcaga aagccacggc 420
taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gatttattgg 480
gcgtaaagcg agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa 540
gaagtgcatc ggaaatggga aacttgagtg cagaagagga cagtggaact ccattgtagc 600
ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac cagtggcgaa ggcgctgtct ggtctgtaac 660
tgacgctgag gctcgaaagt atggtagcaa acaggattag ataccctggt atccataccg 720
taaacgatga atgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag ctaacgcatt 780
aagcattccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt acgggggccc 840
gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt 900
gacatactat gcaaatctaa gagattagac gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt 960
gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta gtcccgcacg agcgcaaccc 1020
ttattatcag ttgccagcat taagttgggc actctggtga gactgccggt gacaaacgga 1080
ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta 1140
caatggatgg tacaacagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct 1200
cagttcggat tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatccggat 1260
cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgacacac cgcccgtcac accatgagag 1320
tttgtaacac ccaaagtcgg tggggtaacc ttttaggaac cagccgccta agggggacag 1380
atgattaggg tgggtcttgc ctaatacatg caagtcgaac gaactctgga ttgattggtg 1440
cttgcatttc aggtattgac ggtatttaa 1469
<210>4
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增c-Kit mRNA表达的上游引物
<400>4
agaccgaacg caactt 16
<210>5
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增c-Kit mRNA表达的下游引物
<400>5
ggtgccatcc acttca 16
<210>6
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增SCF mRNA表达的上游引物
<400>6
aaactggtgg cgaatc 16
<210>7
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增SCF mRNA表达的下游引物
<400>7
cacgggtagc aagaac 16
<210>8
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增TRPV1 mRNA表达的上游引物
<400>8
agcgagttca aagacccaga 20
<210>9
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增TRPV1 mRNA表达的下游引物
<400>9
ttctccacca agagggtcac 20
<210>10
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增GDNF mRNA表达的上游引物
<400>10
ttttattcaa gccaccatc 19
<210>11
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增GDNF mRNA表达的下游引物
<400>11
agcccaaacc caagtca 17
<210>12
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增NOS mRNA表达的上游引物
<400>12
ccacatctgg caggatgaga a 21
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增NOS mRNA表达的下游引物
<400>13
aggcacagaa ctgagggtac a 21
<210>14
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增GAPDH mRNA表达的上游引物
<400>14
cggagtcaac ggatttggtc 20
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>RT-PCR扩增GAPDH mRNA表达的下游引物
<400>15
agccttctcc atggtcgtga 20
Claims (2)
1.植物乳杆菌YS4(Lactobacillus plantarum YS4)，保藏编号为CCTCC NO：M2016750。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌YS4在制备预防便秘的食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710542574.5A CN107099492B (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | 植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710542574.5A CN107099492B (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | 植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107099492A true CN107099492A (zh) | 2017-08-29 |
| CN107099492B CN107099492B (zh) | 2019-12-17 |
Family
ID=59663430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710542574.5A Active CN107099492B (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | 植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107099492B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109234182A (zh) * | 2017-12-22 | 2019-01-18 | 浙江大学 | 植物乳杆菌zjuf t34及其应用 |
| CN109700033A (zh) * | 2019-03-04 | 2019-05-03 | 山东环亿生物科技有限公司 | 一种调节肠道、预防便秘的益生菌组合物及其制备方法 |
| CN110692726A (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-17 | 重庆第二师范学院 | 植物乳杆菌cqpc01及其在制备改善便秘的食品中的应用 |
| CN110699271A (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-17 | 重庆第二师范学院 | 植物乳杆菌cqpc02及其在制备改善便秘的食品中的应用 |
| CN116803300A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-09-26 | 黑龙江飞鹤乳业有限公司 | 一种具有改善慢性便秘症状的合生元组合物及其制备方法与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1644681A (zh) * | 2004-12-17 | 2005-07-27 | 上海交大昂立股份有限公司 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
-
2017
- 2017-07-05 CN CN201710542574.5A patent/CN107099492B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1644681A (zh) * | 2004-12-17 | 2005-07-27 | 上海交大昂立股份有限公司 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李川: "植物乳杆菌NCU116的益生功能及其作用机制", 《中国博士学位论文全文数据库（工程科技Ⅰ辑）》 * |
| 王水泉等: "植物乳杆菌的生理功能及应用", 《中国农业科技导报》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109234182A (zh) * | 2017-12-22 | 2019-01-18 | 浙江大学 | 植物乳杆菌zjuf t34及其应用 |
| CN109234182B (zh) * | 2017-12-22 | 2020-08-04 | 浙江大学 | 植物乳杆菌zjuft34及其应用 |
| CN110692726A (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-17 | 重庆第二师范学院 | 植物乳杆菌cqpc01及其在制备改善便秘的食品中的应用 |
| CN110699271A (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-17 | 重庆第二师范学院 | 植物乳杆菌cqpc02及其在制备改善便秘的食品中的应用 |
| CN110699271B (zh) * | 2018-07-10 | 2022-11-01 | 善恩康生物科技（苏州）有限公司 | 植物乳杆菌cqpc02及其在制备改善便秘的食品中的应用 |
| CN109700033A (zh) * | 2019-03-04 | 2019-05-03 | 山东环亿生物科技有限公司 | 一种调节肠道、预防便秘的益生菌组合物及其制备方法 |
| CN109700033B (zh) * | 2019-03-04 | 2021-06-04 | 山东环亿生物科技有限公司 | 一种调节肠道、预防便秘的益生菌组合物及其制备方法 |
| CN116803300A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-09-26 | 黑龙江飞鹤乳业有限公司 | 一种具有改善慢性便秘症状的合生元组合物及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107099492B (zh) | 2019-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107099492A (zh) | 植物乳杆菌ys4及其在制备预防便秘的食品中的应用 | |
| CN113980878B (zh) | 一种抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN104232544B (zh) | 来自完全以母乳喂养的婴儿粪便的具有益生活性的菌株的分离、鉴定和表征 | |
| CN109182207B (zh) | 一株具有调节血糖和胆固醇水平等益生功能的嗜酸乳杆菌La-SJLH001及其应用 | |
| CN107893044A (zh) | 一株长双歧杆菌及其应用 | |
| US9540609B2 (en) | Lactobacillus rhamnosus food grade bacteria | |
| CN107619811A (zh) | 植物乳杆菌ccfm200菌株与应用 | |
| CN114480229B (zh) | 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株wkb148及其产品与应用 | |
| CN106906165A (zh) | 一种植物乳杆菌及其在制备预防便秘的食品中的应用 | |
| CN104805040B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌制剂及制备方法和应用 | |
| CN109628346B (zh) | 发酵乳杆菌cqpc04及其在制备发酵食品中的应用 | |
| CN112029674A (zh) | 改善肠道微生态缓解便秘的凝结芽孢杆菌bc01及应用 | |
| CN107475162A (zh) | 具有二肽基肽酶‑iv高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN109749957A (zh) | 一种具有水产病原菌拮抗特性的格氏乳杆菌制剂的制备及应用 | |
| CN105420150A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| CN107099491A (zh) | 植物乳杆菌ys3及其在制备预防便秘的食品中的应用 | |
| CN102008110B (zh) | 一种多菌种微生物复合饮料制剂及其制备方法 | |
| CN101851593B (zh) | 植物乳酸杆菌株lp28及其减缓过敏反应之用途 | |
| CN111635875A (zh) | 一种长双歧杆菌cz70及其制备活菌型黑莓果浆的方法 | |
| CN111528283A (zh) | 一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌x253的应用 | |
| CN107028988A (zh) | 植物乳杆菌ys1在制备预防溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用 | |
| CN100558883C (zh) | 具有产生谷氨酰胺的能力的双歧杆菌属的新菌株 | |
| CN107267416A (zh) | 植物乳杆菌ys2及其在制备预防便秘的食品中的应用 | |
| CN116445356B (zh) | 一种调节肠道菌群及增强免疫力的动物双歧杆菌乳亚种ba67及其应用 | |
| CN109362882B (zh) | 发酵乳杆菌cqpc07及其在制备食品或改善溃疡性结肠炎的药品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200730 Address after: Building C2, No.6 Dongsheng West Road, Jiangyin City, Wuxi City, Jiangsu Province Patentee after: Jiangsu Baiaoda Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 400067 No. 9, Xuefu Avenue, Nan'an District, Chongqing Patentee before: Chongqing Second Normal University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200924 Address after: 214400 No. 173 Chengjiang Middle Road, Jiangyin, Wuxi, Jiangsu. Patentee after: JIANGSU NEW-BIO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: Building C2, No.6 Dongsheng West Road, Jiangyin City, Wuxi City, Jiangsu Province Patentee before: Jiangsu Baiaoda Biotechnology Co.,Ltd. |