CN107586339B

CN107586339B - 一种BLyS抗体及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN107586339B
Application number: CN201710543744.1A
Authority: CN
Inventors: 曹晓丹; 胡颖莹; 任芳; 宫世勇; 公静; 吕强; 顾红专; 施蓓蕾; 邵小慧; 吕晓芬; 梁绍勤; 刘礼乐
Original assignee: Shanghua Kechuang Investment Management Jiangsu Co ltd
Current assignee: Shanghua Kechuang Investment Management Jiangsu Co ltd
Priority date: 2016-07-06
Filing date: 2017-07-05
Publication date: 2023-01-20
Anticipated expiration: 2037-07-05
Also published as: CN109311988A; US20210347873A1; CN107586339A; EP3483181A1; EP3483181A4; JP2019533423A; WO2018006824A1

Abstract

本发明公开了一种BLyS抗体及其制备方法和应用。所述BLyS抗体包括BLyS抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或BLyS抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，其氨基酸序列分别如本发明中所述。所述BLyS具有高亲和力，能明显在蛋白水平和细胞水平有效封闭BLyS蛋白，阻止BLyS蛋白与受体的结合。所述的BLyS抗体缺乏与人APRIL等同类蛋白抗原的交叉反应，并且具有良好的生物活性，其能抑制人BLyS诱导的小鼠B细胞的增殖。因此运用于预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物的制备中。

Description

一种BLyS抗体及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于抗体领域，具体地涉及一种BLyS抗体及其制备方法和应用。

背景技术

自体免疫疾病(Autoimmune disease)为一种人体自身的免疫系统会攻击自己正常的器官、组织和细胞的疾病。它属于慢性病，一旦患上身体就会变得很虚弱，且无法治愈，只能控制。这导致患者需要承担高额的医疗费用并且生活质量急剧降低，从而对病人和他们的家庭甚至社会造成沉重的负担。大众比较熟悉的自体免疫疾病有系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)或类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)等多种疾病。SLE可能影响各种器官，目前无法预测其何时发病，其自然病程多表现为病情的加重和缓解交替。SLE的全球平均患病率为每10万人中有12-39人，我国人群患病率为每10万人中有30-70人，仅次于黑人(100/10万)，位居全球第二位。SLE通常发生于年轻女性，有90％的患者是女性。RA是一个主要影响关节的长期持续性疾病，它通常导致关节发热、肿胀和疼痛，严重时会导致关节表面侵蚀及破坏，甚至造成肢体畸形。据统计，类风湿性关节炎的发病率为0.3％左右。近年来，我国乃至全球的自体免疫疾病发病率呈逐渐上升趋势。由于我国幅员辽阔、人口众多，因此按此发病率计算出的病人数量相当巨大。然而，目前仍然缺乏非常有效、副作用小、特异性强的干预治疗手段来早期阻断靶器官的损伤进而改善病人的预后。

研究表明，在自体免疫疾病和B细胞肿瘤的病人中能检测到B淋巴细胞刺激因子(Blymphocyte stimulator,BLyS)表达水平的提高。例如，在系统性红斑狼疮(SLE)的多组病人中都发现血清中BLyS的表达水平增加，并且这和自体免疫抗体的产生及疾病活动指数相关[参见Stohl et al.2003,Arthritis Rheum,48(12):3475；Petri et al.2008,Arthritis Rheum,58(8):2453]。在类风湿性关节炎(RA)病人的关节滑液(Synovialfluid)中也发现高水平的BLyS[参见Tan et al.2003,Arthritis Rheum,48(4):982]。BLyS的过表达和这些自体免疫疾病临床表现的相关性表明，调节BLyS的表达水平可以成为治疗这些疾病的新方法。

BLyS，也被称为BAFF、THANK、TALL-1、TNFSF13B或zTNF4，是肿瘤坏死因子(TNF)配体超家族的一员[参见Baker et al.2003,Arthritis Rheum,48(11):3253]。BLyS是由285个氨基酸组成的II型跨膜蛋白，有膜结合型和切割后具有152个氨基酸的可溶型两种形态。BLyS在单核细胞、巨噬细胞和树突细胞上都有表达并且在干扰素γ和白介素10刺激下表达水平上调。在体外，重组人BLyS可以通过与B细胞表面主要的受体结合，增强B细胞增殖和抗体分泌。在体内，重组人BLyS会导致小鼠的脾增生，这主要归因于成熟B细胞数目的增加。将BLyS注射到小鼠体内也会导致血清中抗体浓度的增加，以及针对T细胞依赖和非依赖抗原的体液免疫的增强。BLyS的过表达会产生表达水平异常高的抗体，从而导致SLE、RA及其它自体免疫疾病。

近几年来，单克隆抗体药物由于其具有特异性强、疗效好、副作用小等优点，被越来越广泛地应用于对肿瘤、自体免疫疾病等的治疗中。单克隆抗体药物的全球年销售额从1997年的3亿美元发展到2012年的663亿美元，已经成为生物医药产业中发展速度最快、盈利能力最强的领域之一，具有广阔的发展空间。目前，针对BLyS的单克隆抗体Belimumab作为半个世纪以来第一个获得FDA批准的治疗SLE的单克隆抗体，具有非常重要的意义。

尽管治疗SLE的单克隆抗体Belimumab还存在一些问题，但是与环磷酰胺和激素类等免疫抑制剂相比，单克隆抗体具有靶向性特点，副作用明显减少。预计到2022年，治疗SLE药物的销售额将达到39亿美元，市场潜力巨大。因此亟待获得全新的、更安全和更有效的针对BLyS的抗体来治疗SLE等自体免疫疾病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服目前缺少有效和安全的BLyS抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的人源化或全人源的BLyS抗体及其制备方法和应用。本发明所述的BLyS抗体，与BLyS具有高度亲和力；能够抑制BLyS与其受体的结合；能够抑制人BLyS诱导的小鼠B细胞的增殖；并且缺乏与人APRIL等BLyS同族蛋白抗原的交叉反应，因此能够运用于制备治疗或预防自身免疫性疾病或肿瘤等与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中。

本发明人采用噬菌体展示和杂交瘤技术，获得BLyS抗体的先导抗体。再通过对先导抗体的初步生产、纯化和鉴定，获得具备抗体亲和力高(亲和力KD＜5×10^-9M)、能够有效封闭BLyS与受体的结合、与人ARRIL等同类蛋白抗原缺乏交叉反应等优异的生物活性的BLyS抗体。然后通过分子生物学方法测序获知BLyS抗体的重链可变区和BLyS抗体的轻链可变区的氨基酸序列。

本发明提供一种分离的蛋白质，其包括BLyS抗体的互补决定区(CDR或CDRs)：重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，BLyS抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2、SEQ IDNo.10、SEQ ID No.18、SEQ ID No.26、SEQ ID No.34、SEQ ID No.42、SEQ ID No.50、SEQ IDNo.58、SEQ ID No.66、SEQ ID No.74、SEQ ID No.82、SEQ ID No.90或SEQ ID No.98所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19、SEQ IDNo.27、SEQ ID No.35、SEQ ID No.43、SEQ ID No.51、SEQ ID No.59、SEQ ID No.67、SEQ IDNo.75、SEQ ID No.83、SEQ ID No.91所示或SEQ ID No.99；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20、SEQ ID No.28、SEQ ID No.36、SEQID No.44、SEQ ID No.52、SEQ ID No.60、SEQ ID No.68、SEQ ID No.76、SEQ ID No.84、SEQID No.92或SEQ ID No.100所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.6、SEQID No.14、SEQ ID No.22、SEQ ID No.30、SEQ ID No.38、SEQ ID No.46、SEQ ID No.54、SEQID No.62、SEQ ID No.70、SEQ ID No.78、SEQ ID No.86、SEQ ID No.94或SEQ ID No.102所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31、SEQ ID No.39、SEQ ID No.47、SEQ ID No.55、SEQ ID No.63、SEQ IDNo.71、SEQ ID No.79、SEQ ID No.87、SEQ ID No.95或SEQ ID No.103所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQ ID No.24、SEQ ID No.32、SEQID No.40、SEQ ID No.48、SEQ ID No.56、SEQ ID No.64、SEQ ID No.72、SEQ ID No.80、SEQID No.88、SEQ ID No.96或SEQ ID No.104所示；

或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10、SEQID No.18、SEQ ID No.26、SEQ ID No.34、SEQ ID No.42、SEQ ID No.50、SEQ ID No.58、SEQID No.66、SEQ ID No.74、SEQ ID No.82、SEQ ID No.90或SEQ ID No.98所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19、SEQ ID No.27、SEQ ID No.35、SEQ ID No.43、SEQ ID No.51、SEQ ID No.59、SEQ ID No.67、SEQ ID No.75、SEQ ID No.83、SEQ ID No.91所示或SEQ ID No.99所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20、SEQ IDNo.28、SEQ ID No.36、SEQ ID No.44、SEQ ID No.52、SEQ ID No.60、SEQ ID No.68、SEQ IDNo.76、SEQ ID No.84、SEQ ID No.92或SEQ ID No.100所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.6、SEQID No.14、SEQ ID No.22、SEQ ID No.30、SEQ ID No.38、SEQ ID No.46、SEQ ID No.54、SEQID No.62、SEQ ID No.70、SEQ ID No.78、SEQ ID No.86、SEQ ID No.94或SEQ ID No.102所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31、SEQ ID No.39、SEQ ID No.47、SEQ ID No.55、SEQ ID No.63、SEQ ID No.71、SEQ ID No.79、SEQ IDNo.87、SEQ ID No.95或SEQ ID No.103所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQID No.24、SEQ ID No.32、SEQ ID No.40、SEQ ID No.48、SEQ ID No.56、SEQ ID No.64、SEQID No.72、SEQ ID No.80、SEQ ID No.88、SEQ ID No.96或SEQ ID No.104所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。

较佳地，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ IDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.11所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.19所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.20所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.26所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.27所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.28所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.34所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.35所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.36所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.42所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.43所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.44所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.50所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQID No.51所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.52所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.58所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ IDNo.59所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.60所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.66所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.67所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.68所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.74所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.75所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.76所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.82所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.83所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.84所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.90所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.91所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.92所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.98所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.99所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.100所示；

所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.7所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.8所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.14所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.15所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.16所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.22所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.23所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.24所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.30所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.31所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.32所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.38所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQID No.39所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.40所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.46所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ IDNo.47所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.48所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.54所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.55所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.56所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.62所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.63所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.64所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.70所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.71所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.72所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.78所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.79所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.80所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.86所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.87所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.88所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.94所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.95所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.96所示；或者，所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.102所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.103所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.104所示。较佳地，上述蛋白质包括由上述CDR区和构架区组成的BLyS抗体的重链可变区和/或BLyS抗体的轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1、SEQ ID No.9、SEQ ID No.17、SEQ ID No.25、SEQID No.33、SEQ ID No.41、SEQ ID No.49、SEQ ID No.57、SEQ ID No.65、SEQ ID No.73、SEQID No.81、SEQ ID No.89或SEQ ID No.97所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.5、SEQ ID No.13、SEQ ID No.21、SEQ ID No.29、SEQ ID No.37、SEQ ID No.45、SEQ ID No.53、SEQ ID No.61、SEQ ID No.69、SEQ ID No.77、SEQ ID No.85、SEQ ID No.93或SEQ ID No.101所示。

本发明还提供一种分离的蛋白质，其包括BLyS抗体的重链可变区和/或BLyS抗体的轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1、SEQ ID No.9、SEQID No.17、SEQ ID No.25、SEQ ID No.33、SEQ ID No.41、SEQ ID No.49、SEQ ID No.57、SEQID No.65、SEQ ID No.73、SEQ ID No.81、SEQ ID No.89或SEQ ID No.97所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.5、SEQ ID No.13、SEQ ID No.21、SEQ ID No.29、SEQ ID No.37、SEQ ID No.45、SEQ ID No.53、SEQ ID No.61、SEQ ID No.69、SEQ IDNo.77、SEQ ID No.85、SEQ ID No.93或SEQ ID No.101所示。

较佳地，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.5所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQID No.9所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.13所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.17所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.21所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.25所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.29所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.33所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.37所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.41所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.45所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.49所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.53所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.57所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.61所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.65所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.69所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.73所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.77所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.81所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ IDNo.85所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.89所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.93所示；或者，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.97所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.101所示。

本领域中，抗体和抗原的结合区均含有一条轻链可变区和一条重链可变区，每一个可变区均含有CDR1、CDR2和CDR3三个结构域。

综上所述，上述氨基酸序列的编号如表1所示：

表1 BLyS抗体氨基酸序列编号

其中，表1中的数字即为序列表中序列号，如2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1，而2-1G11的重链蛋白可变区中CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明的分离的蛋白质还可以包括BLyS抗体的构架区(或称框架区或骨架区)，所述构架区包括重链构架区和/或轻链构架区；较佳地，所述重链构架区为人或鼠抗体重链构架区，和/或，所述轻链构架区为人或鼠抗体轻链构架区。

更佳地，当本发明分离的蛋白质为人源化抗体或全人源抗体时，所述重链构架区为人抗体重链构架区，人抗体重链构架区残基可以包含种系DP4、DP7、DP8、DP9、DP10、DP14(V_H1-18)、DP31、DP33、DP35(V_H3-11)、DP45、DP46、DP47、DP48、DP49(V_H3-30)、DP50、DP51(V_H3-48)、DP53、DP54(V_H3-7)、DP65、DP66、DP67、DP68和DP69，特别是这些种系的FR1、FR2、FR3；以及JH片段J_H-1、J_H-2、J_H-3、J_H-4、J_H-4b、JH-5和J_H-6，特别是这些种系的FR4编码的序列，或重链构架区的共有序列。所述轻链构架区为人抗体轻链构架区，人抗体轻链构架区残基可以包含种系O2、O12、DPK1(O18)、DPK2、DPK3、DPK4、DPK5、DPK6、DPK7、DPK8、DPK9、DPK10、DPK12(A2)、DPK13、DPK15、DPK16、DPKI8、DPK19、DPK20、DPK21、DPK22、DPK23、DPK24(B3)、DPK25、DPK26(A10)和DPK 28，特别是这些种系的FR1、FR2、FR3；以及由Jk片段Jk1、Jk2、Jk3、Jk4和JK5，特别是这些种系的FR4编码的序列。此类构架区序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在"VBase"人种系序列数据库(http://www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/vbase/)获得，以及在Kabat(E.A等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版)中找到。在本发明人源化抗体的一较佳实施例中，重链构架区残基优选人种系抗体重链V_H外显子的V_H1-18、V_H外显子的V_H3-7或者J_H外显子的J_H-6，轻链构架区残基优选为人种系抗体轻链V_K外显子的B3、J_K外显子的J_K-4或者V_K外显子的A10。

较佳地，所述的蛋白质还包括抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区，所述的抗体重链恒定区为本领域常规，较佳地为小鼠源抗体重链恒定区或人源抗体重链恒定区，更佳地为人源抗体重链恒定区。所述的抗体轻链恒定区为本领域常规，较佳地为小鼠源轻链抗体恒定区或人源抗体轻链恒定区，更佳地为人源抗体轻链恒定区。

其中，氨基酸序列如SEQ ID NO.25、33、41、49、57、65、73、81、89或者97所示的重链可变区以及序列如SEQ ID NO.29、37、45、53、61、69、77、85、93或者101所示的轻链可变区可与鼠源重链恒定区以及鼠源轻链恒定区构成鼠源化BLyS抗体、可与人源重链恒定区以及人源轻链恒定区构成BLyS嵌合抗体。

进一步地，将上述嵌合抗体中氨基酸序列如SEQ ID NO.25、33、41、49、57、65、73、81、89或者97所示的重链可变区中根据Kabat定义确定的序列如SEQ ID NO.26-28、34-36、42-44、50-52、58-60、66-68、74-76、82-84、90-92或者98-100所示的重链CDR以及上述序列如SEQ ID NO.29、37、45、53、61、69、77、85、93或者101的轻链可变区中根据Kabat定义确定的序列如SEQ ID NO.30-32、38-40、46-48、54-56、62-64、70-72、78-80、86-88、94-96或者102-104所示的轻链CDR分别移植到所选人种系模板中，替换人种系模板的CDR区，即得人源化的抗体；所述种系模板中的轻链构架区和重链构架区如上所述，优选地分别选自人种系抗体重链V_H外显子的V_H1-18、V_H外显子的V_H3-7和J_H外显子的J_H-6，以及人种系抗体轻链V_K外显子的B3、J_K外显子的J_K-4和V_K外显子的A10。选择性地，为了保证抗体活性，以鼠源抗体的三维结构为基础，对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基，以及对V_H和V_L构象有重要影响的构架区残基进行回复突变。

较佳地，上述CDR区被移植到所选人种系模板中且构架区残基经过回复突变后的重链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.140、SEQ ID NO.141、SEQ ID NO.142、SEQ IDNO.143、SEQ ID NO.144、SEQ ID NO.145、SEQ ID NO.146、SEQ ID NO.149、SEQ ID NO.150、SEQ ID NO.151或SEQ ID NO.152所示；轻链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID No.147、SEQ ID No.148、SEQ ID No.153、SEQ ID No.154、SEQ ID No.155、SEQ ID No.156、或SEQID No.157所示。

序列如SEQ ID NO.1、9或者17所示的重链可变区以及序列如SEQ ID NO.5、13或者21所示的轻链可变区可与人源抗体重链恒定区以及人源抗体轻链恒定区构成全人源BLyS抗体。

所述的蛋白质是指抗体蛋白质，较佳地，其为抗体全长蛋白、抗原抗体结合域蛋白质片段、双特异性抗体、多特异性抗体、单链抗体(single chain antibody fragment，scFv)、单域抗体(single domain antibody，sdAb)和单区抗体(Signle-domain antibody)中的一种或多种，以及上述抗体所制得的单克隆抗体或多克隆抗体。所述单克隆抗体可以由多种途径和技术进行研制，包括杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术等，主流是通过杂交瘤技术从野生型或转基因小鼠制备单克隆抗体。

所述的抗体全长蛋白为本领域常规的抗体全长蛋白，其包括重链可变区、轻链可变区、重链恒定区和轻链恒定区。所述的蛋白质的重链可变区和轻链可变区与人源重链恒定区和人源轻链恒定区构成全人源抗体全长蛋白。较佳地，所述的抗体全长蛋白为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

所述的单链抗体为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。

所述的抗原抗体结合域蛋白质片段为本领域常规的抗原抗体结合域蛋白质片段，其包括轻链可变区、轻链恒定区和重链恒定区的Fd段。较佳地，所述的抗原抗体结合域蛋白质片段为Fab和F(ab’)2。

所述的单域抗体为本领域常规的单域抗体，其包括重链可变区和重链恒定区。

所述的单区抗体为本领域常规的单区抗体，其仅包括重链可变区。

其中，所述蛋白质的制备方法为本领域常规的制备方法。所述制备方法较佳地为：从重组表达该蛋白质的表达转化体中分离获得或者通过人工合成蛋白质序列获得。所述的从重组表达该蛋白质的表达转化体中分离获得优选如下方法：将编码所述蛋白质并且带有点突变的核酸分子克隆到重组载体中，将所得重组载体转化到转化体中，得到重组表达转化体，通过培养所得重组表达转化体，即可分离纯化获得所述蛋白质。

本发明还提供一种核酸，其编码上述的蛋白质。

较佳地，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.105、SEQID No.107、SEQ ID No.109、SEQ ID No.111、SEQ ID No.113、SEQ ID No.115、SEQ IDNo.117、SEQ ID No.119、SEQ ID No.121、SEQ ID No.123、SEQ ID No.125、SEQ ID No.127或SEQ ID No.129所示；和/或，编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.106、SEQ ID No.108、SEQ ID No.110、SEQ ID No.112、SEQ ID No.114、SEQ ID No.116、SEQ ID No.118、SEQ ID No.120、SEQ ID No.122、SEQ ID No.124、SEQ ID No.126、SEQ IDNo.128或SEQ ID No.130所示。

更佳地，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.105所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.106所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.107所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.108所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.109所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.110所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.111所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.112所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.113所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.114所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.115所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.116所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.117所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.118所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.119所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.120所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.121所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.122所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.123所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.124所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.125所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.126所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.127所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.128所示；或者，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.129所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.130所示。

综上所述，上述核苷酸序列的编号如表2所示：

表2 BLyS抗体基因核苷酸序列编号

克隆号	重链蛋白可变区	轻链蛋白可变区
			2-1G11	105	106
L9G7	107	108
			L1D12	109	110
35E6F7C3	111	112
			8E7D9C7F5	113	114
20D1B6E9E5	115	116
			78C11D2D12	117	118
89A2G5E7	119	120
			97E7B3F2	121	122
97A3C2H4	123	124
			67A2E1D10	125	126
111D10D6G3	127	128
			93C6F10D3	129	130

其中，表2中的数字即为序列表中序列号，如编码2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID No.105，而编码2-1G11的轻链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID No.106。

编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.105中的第76位至第105位；

编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.105中的第148位至第198位；

编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.105中的第295位至第342位；

编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.106中的第70位至第102位；

编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.106中的第148位至第168位；

编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.106中的第265位至第291位；

编码L9G7的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.107中的第76位至第105位；

编码L9G7的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.107中的第148位至第198位；

编码L9G7的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.107中的第295位至第342位；

编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.108中的第70位至第102位；

编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.108中的第148位至第168位；

编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.108中的第265位至第291位；

编码L1D12的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.109中的第76位至第105位；

编码L1D12的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.109中的第148位至第195位；

编码L1D12的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.109中的第292位至第330位；

编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.110中的第67位至第99位；

编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.110中的第145位至第165位；

编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.110中的第262位至第297位；

编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.111中的第76位至第105位；

编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.111中的第148位至第198位；

编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.111中的第295位至第321位；

编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.112中的第70位至第99位；

编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.112中的第145位至第165位；

编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.112中的第262位至第288位；

编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.113中的第76位至第105位；

编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.113中的第148位至第198位；

编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.113中的第295位至第342位；

编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.114中的第70位至第114位；

编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.114中的第160位至第180位；

编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.114中的第277位至第303位；

编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.115中的第76位至第105位；

编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.115中的第148位至第198位；

编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.115中的第295位至第339位；

编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.116中的第70位至第117位；

编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.116中的第163位至第183位；

编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.116中的第280位至第306位。

编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.117中的第76位至第105位；

编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.117中的第148位至第198位；

编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.117中的第295位至第315位；

编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.118中的第70位至第99位；

编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.118中的第145位至第165位；

编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.118中的第262位至第288位；

编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.119中的第76位至第105位；

编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.119中的第148位至第195位；

编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.119中的第292位至第327位；

编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.120中的第70位至第105位；

编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.120中的第151位至第171位；

编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.120中的第268位至第294位。

编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.121中的第76位至第105位；

编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.121中的第148位至第198位；

编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.121中的第295位至第321位；

编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.122中的第70位至第117位；

编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.122中的第163位至第183位；

编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.122中的第280位至第306位。

编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.123中的第76位至第105位；

编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.123中的第148位至第198位；

编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.123中的第295位至第327位；

编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.124中的第70位至第102位；

编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.124中的第148位至第168位；

编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.124中的第265位至第291位；

编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.125中的第76位至第105位；

编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.125中的第148位至第198位；

编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.125中的第295位至第333位；

编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.126中的第70位至第102位；

编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.126中的第148位至第168位；

编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.126中的第265位至第291位。

编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.127中的第76位至第105位；

编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.127中的第148位至第198位；

编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.127中的第295位至第309位；

编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.128中的第70位至第102位；

编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.128中的第148位至第168位；

编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.128中的第265位至第291位；

编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.129中的第76位至第105位；

编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.129中的第148位至第198位；

编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.129中的第295位至第336位；

编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDR1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.130中的第70位至第102位；

编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.130中的第148位至第168位；

编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.130中的第265位至第291位。

在本发明较佳实施例中，编码上述经人构架区改造的本发明人源化抗体的所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.158、SEQ ID NO.159、SEQ ID NO.160、SEQ ID NO.161、SEQ ID NO.162、SEQ ID NO.163、SEQ ID NO.164、SEQ ID NO.167、SEQ IDNO.168、SEQ ID NO.169或SEQ ID NO.170所示；和/或，编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.165、SEQ ID No.166、SEQ ID No.171、SEQ ID No.172、SEQ IDNo.173、SEQ ID No.174、或SEQ ID No.175所示。

所述核酸的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地，包括以下的步骤：通过基因克隆技术获得编码上述蛋白质的核酸分子，或者通过人工全序列合成的方法得到编码上述蛋白质的核酸分子。

本领域技术人员知晓，编码上述蛋白质的氨基酸序列的碱基序列可以适当引入替换、缺失、改变、插入或增加来提供一个多聚核苷酸的同系物。本发明中多聚核苷酸的同系物可以通过对编码该蛋白序列基因的一个或多个碱基在保持抗体活性范围内进行替换、缺失或增加来制得。

本发明还提供一种包含所述核酸的重组表达载体。

其中所述重组表达载体可通过本领域常规方法获得，即：将本发明所述的核酸分子连接于各种表达载体上构建而成。所述的表达载体为本领域常规的各种载体，只要其能够容载前述核酸分子即可。所述载体较佳地包括：各种质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体等。

本发明还提供一种包含上述重组表达载体的重组表达转化体。

其中，所述重组表达转化体的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地为：将上述重组表达载体转化至宿主细胞中制得。所述的宿主细胞为本领域常规的各种宿主细胞，只要能满足使上述重组表达载体稳定地自行复制，且所携带所述的核酸可被有效表达即可。较佳地，所述宿主细胞为E.coli TG1或E.coli BL21细胞(表达单链抗体或Fab抗体)，或者HEK293或CHO-K1细胞(表达全长IgG抗体)。将前述重组表达质粒转化至宿主细胞中，即可得本发明优选的重组表达转化体。其中所述转化方法为本领域常规转化方法，较佳地为化学转化法，热激法或电转法。

本发明还提供一种BLyS抗体的制备方法，其包括如下步骤：培养上述的重组表达转化体，从培养物中获得BLyS抗体。

本发明还提供一种检测过表达BLyS蛋白的细胞的方法，包括如下的步骤：上述的蛋白质与待检样品在体外接触，检测上述的蛋白质与所述待检样品的结合即可。

所述的过表达的含义为本领域常规，指BLyS蛋白在待检样品中的RNA或蛋白质的过表达(由于转录增加、转录后加工、翻译、翻译后加工以及蛋白质降解改变)，以及由于蛋白质运送模式改变(核定位增加)而导致的局部过表达和功能活性提高(如在底物的酶水解作用增加的情况下)。

本发明中，上述结合的检测方式是本领域常规的检测方式，较佳地为流式细胞实验(FACS)检测。

本发明提供一种检测过表达BLyS蛋白的细胞的组合物，其包括上述的蛋白质作为活性成分。较佳地，其还包括上述的蛋白质的功能片段组成的化合物作为活性成分。

本发明提供上述蛋白质在制备药物中的应用。

较佳地，所述的药物是用于预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物。

本发明中，所述与BLyS表达或功能异常相关的疾病是本领域常规的与BLyS表达或功能异常相关的疾病。较佳地，为自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。本发明中，所述自体免疫疾病为本领域常规的自体免疫疾病，较佳地为红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、干燥综合症(SS)、多发性硬化(MS)、重症肌无力(MG)、慢性甲状腺炎或免疫缺陷综合症。本发明中，所述炎症性疾病为本领域常规的炎症性疾病，较佳地为哮喘或过敏性疾病。本发明中，所述感染性疾病为本领域常规的感染性疾病。较佳地，为获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。本发明中，所述增殖性疾病为本领域常规的增殖性疾病，较佳地为白血病、肿瘤或淋巴瘤。

本发明还提供一种药物组合物，其活性成分包括上述的蛋白质。

较佳地，所述的药物组合物是用于预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物组合物。

本发明所述的药物组合物的给药途径较佳地为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳地包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。所述的药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳地为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂等。

本发明中，较佳地，本发明所述的药物组合物还包括一种或多种药用载体。所述的药用载体为本领域常规药用载体，所述的药用载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳的包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的上述蛋白质和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

本发明中，较佳地，所述的药物组合物的施用量为有效量，所述有效量为能够缓解或延迟疾病、退化性或损伤性病症进展的量。所述有效量可以以个体基础来测定，并将部分基于待治疗症状和所寻求结果的考虑。本领域技术人员可以通过使用个体基础等上述因素和使用不超过常规的实验来确定有效量。

本发明提供上述蛋白质在制备预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中的应用。较佳地，所述与BLyS表达或功能异常相关的疾病为自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。

本发明提供上述药物组合物在制备预防或治疗BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中的应用。较佳地，所述与BLyS表达或功能异常相关的疾病为自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明所述的蛋白质是一种人源化或全人源BLyS抗体，其与BLyS蛋白具有高度亲和力(亲和力KD＜5*10^-9M)，能够在蛋白水平和细胞水平有效封闭BLyS蛋白，阻止BLyS蛋白与受体的结合。所述的BLyS抗体缺乏与人APRIL等同类蛋白抗原的交叉反应。B细胞增殖实验证明，所述的BLyS抗体具有良好的生物活性，其能抑制人BLyS诱导的小鼠B细胞的增殖。小鼠体内检测证明，所述的BLyS抗体能够降低由BLyS蛋白引起的小鼠脾细胞中B细胞比例的增加。因此所述的BLyS抗体单独或与其它药物联合能够用于检测、诊断、治疗或筛查与BLyS表达或功能异常相关的疾病，如自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。

附图说明

以下结合附图说明本发明的特征和有益效果。

图1为纯化的hBLyS-ECD的生物活性检测的结果图。其中，RLU表示相对光单位。

图2A和图2B为流式细胞分析方法检测CHO-K1重组细胞系BLyS蛋白的表达水平的结果图。其中，2C4表示克隆号；4C4表示克隆号；抗体指BLyS抗体(购自eBioscience)；阴性对照指同型抗体对照。

图3为ELISA检测免疫原免疫后BALB/c和SJL小鼠血清抗体效价的结果图。

图4为酶联免疫吸附检测生物素化的hBLyS-ECD的活性的结果图。

图5A和图5B为酶联免疫吸附实验中BLyS纯化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的反应活性的结果图。

图6A和图6B为酶联免疫吸附实验检测BLyS纯化抗体与BLyS同家族APRIL蛋白的反应的结果图。

图7为流式细胞分析实验检测BLyS纯化抗体与人BLyS重组细胞反应活性的结果图。

图8为流式细胞分析实验检测BLyS纯化抗体与猴BLyS重组细胞反应活性的结果图。

图9A和图9B为BLyS纯化抗体封闭BLyS受体BAFF R与生物素化的hBLyS-ECD的结合活性的结果图。

图10为BLyS纯化抗体对由hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制作用的结果图。

图11为BLyS纯化抗体对由鼠BLyS刺激的小鼠B细胞增殖的抑制作用的结果图。

图12为酶联免疫吸附实验中BLyS嵌合抗体与生物素化的hBLyS-ECD的反应活性的结果图。

图13为BLyS嵌合抗体封闭BLyS受体BAFF R与生物素化的hBLyS-ECD的结合活性的结果图。

图14为BLyS嵌合抗体对由hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制作用的结果图。

图15A～图15C为BLyS嵌合抗体及全人源抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响的结果图。

图16为酶联免疫吸附实验中BLyS人源化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的反应活性的结果图。

图17为BLyS人源化抗体封闭BLyS受体BAFF R与生物素化的hBLyS-ECD的结合活性的结果图。

图18为BLyS人源化抗体对由hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制作用的结果图。

图19A～图19B为BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例以及血清中IgA水平的影响的结果图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例中所述的“室温”是指进行试验的操作间的温度，一般为15～30℃。

实施例1杂交瘤技术制备BLyS抗体

(一)、免疫原的制备

将含有编码人源BLyS蛋白胞外区(BLyS-ECD)中Ala134-Leu285的氨基酸序列的核苷酸序列(如序列表SEQ ID No.131所示)克隆到带有His标签的pCPC载体(购自Invitrogen，V044-50)并按已建立的标准分子生物学方法制备质粒，具体方法参见[Sambrook,J.,Fritsch,E.F.,and Maniatis,T.(1989).Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Second Edition(Plainview,New York:Cold Spring HarborLaboratory Press)]。对HEK293细胞(购自Invitrogen)进行瞬时转染(PEI，Polysciences)并使用FreeStyle ^TM 293(购自Invitrogen)在37℃下进行扩大培养。7天后收集细胞培养液，离心去除细胞成分，得含人源BLyS蛋白胞外区的培养上清液。将培养上清液上样到Ni亲和层析柱(购自GE Healthcare)，同时用紫外(UV)检测仪监测紫外吸收值(A_280nm)的变化。上样后用含有5％(v/v)蔗糖和0.01％(v/v)Tween-80的磷酸缓冲液(pH7.4)清洗Ni亲和层析柱，直到紫外吸收值回到基线，然后用0-500mM的咪唑进行梯度洗脱。收集从Ni亲和层析柱上洗脱下来的带His标签的人源BLyS蛋白胞外区，使用含有5％(v/v)蔗糖和0.01％(v/v)Tween-80的磷酸缓冲液(pH7.4)在超滤管进行4℃下透析和浓缩蛋白。透析后的蛋白经0.22μm无菌过滤后分装于-80℃保存，获得纯化的人源BLyS蛋白胞外区，作为免疫原(即hBLyS-ECD)。该免疫原在使用前进行一系列质控检测，如检测其蛋白浓度、纯度、分子量、生物活性等。

其中，免疫原的生物活性采用B细胞增殖实验检测(方法参见实施例5)。结果如图1和表3所示，该免疫原可以刺激小鼠B细胞的增殖。

表3免疫原的生物活性检测

(二)、表达人或猴BLyS的稳转细胞株的构建

将人或猴的BLyS(即hBLyS或cyno BLyS)的氨基酸序列(NCBI中的基因登陆号分别为Q9Y275、EHH58704.1)的第132位从精氨酸突变为组氨酸，使构建的稳转细胞株表达完整的人或猴的BLyS而不进行切割。将突变后的人或猴的BLyS全长氨基酸序列的核苷酸序列(如序列表SEQ ID No.132和SEQ ID No.133所示)克隆到pLVX载体(购自Clontech)中，由上海吉玛制药技术有限公司进行慢病毒包装，随后感染CHO-K1细胞系(购自Invitrogen)，得转染后的细胞。72个小时后，用已知的BLyS抗体(购自eBioscience)经流式细胞分析法进行检测[参见Manetta J et al.,2014,J Inflamm Res,20(7):121-131]。当确定转染后的细胞开始表达人或猴的BLyS，用有限稀释法在96孔培养板中进行亚克隆，并置于37℃、5％(v/v)CO₂条件下培养，大约2周后选择部分单克隆孔扩增到6孔板中。对扩增后的克隆再用已知的BLyS抗体(购自eBioscience)经流式细胞分析法进行筛选。选择长势较好、荧光强度较高、单克隆的细胞系继续扩大培养并液氮冻存，即获得表达人或猴BLyS的稳转细胞株。具体选择结果如表4和图2A～图2B所示，表4中阳性细胞(％)指阳性细胞占总细胞数目的百分比。表4说明，已经制得一系列BLyS阳性表达的CHO-K1细胞系。

表4表达人或猴BLyS蛋白的CHO-K1细胞FACS筛选检测结果

(三)、杂交瘤细胞的制备和抗体筛选

A、采用6～8周龄雌性BALB/c和SJL小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限责任公司)，小鼠在SPF条件下饲养。初次免疫时，将步骤(一)获得的免疫原(即hBLyS-ECD)用弗氏完全佐剂乳化后腹腔注射0.2mL，即每只小鼠注射100μg免疫原。加强免疫时，免疫原用弗氏不完全佐剂乳化后腹腔注射0.2mL，即每只小鼠注射50μg免疫原。初次免疫与第一次加强免疫之间间隔2周，以后每次加强免疫之间间隔3周。每次加强免疫1周后采血，用ELISA检测血清中免疫原的抗体效价和特异性，结果如图3和表5所示。表5说明，经免疫原免疫后的小鼠的血清对免疫原均有不同程度的结合，呈现抗原抗体反应，其中最高稀释度在一百万左右。其中空白对照为1％(w/w)BSA，其中批次指第二次加强免疫后第七天的小鼠血清，表中的数据为OD_450nm值。

表5 ELISA检测免疫原免疫后BALB/c和SJL小鼠血清抗体效价

B、采用6～8周龄雌性BALB/c和SJL小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限责任公司)，小鼠在SPF条件下饲养。初次免疫时，免疫原(hBLyS-ECD)、寡核苷酸(CpG)和GERBU佐剂混合后小鼠跗关节注射25μL，即每只小鼠注射10μg免疫原。加强免疫时，免疫原和GERBU佐剂混合后跗关节注射25μL，即每只小鼠注射5μg免疫原。初次免疫与加强免疫之间间隔3-4天。第二次加强免疫1周后采血，用ELISA检测血清中免疫原的抗体效价和特异性。在第二次加强免疫后，ELISA检测血清抗体效价达到1:10000以上。

步骤A和B完成前，向每只所选择的、最后一次免疫的小鼠的腹腔或者跗关节分别注射50μg或5μg免疫原，5天后处死小鼠，收集脾细胞。加入NH₄OH至终浓度1％(w/w)，裂解脾细胞中参杂的红细胞，获得脾细胞悬液。用DMEM基础培养基(购自invitrogen)1000转每分钟离心清洗细胞3次，然后按活细胞数目5:1比率与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0(购自ATCC)混合，采用高效电融合方法(参见METHODS IN ENZYMOLOGY,VOL.220)进行细胞融合。融合后的细胞稀释到含20％(w/w)胎牛血清和1╳HAT的DMEM培养基中。然后按1╳10⁵个/200μL每孔加入到96孔细胞培养板中，放入5％(v/v)CO₂、37℃培养箱中。14天后用间接ELISA筛选细胞融合板上清，将ELISA中OD_450nm>1.0的阳性克隆扩增到24孔板，在含10％(w/w)HT胎牛血清的DMEM在37℃、5％(v/v)CO₂条件下扩大培养。培养3天后取24孔板中扩大培养的培养液进行离心，收集上清液，对上清液进行抗体亚型分析。其中，用ELISA确定对hBLyS-ECD的结合活性(结合活性的检测方法请分别参见实施例3A和实施例3B)，配体受体结合实验确定抗体样品对BLyS受体的封闭活性(封闭活性的检测方法请分别参见实施例4)。

根据24孔板筛选结果，挑选ELISA实验中OD_450nm>1.0和配体受体结合实验中杂交瘤细胞培养上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60％的杂交瘤细胞为符合条件的阳性克隆，选择符合条件的杂交瘤细胞用有限稀释法在96孔板进行亚克隆，在含10％(w/w)FBS的DMEM培养基中(购自invitrogen)37℃、5％(v/v)CO₂条件下培养。亚克隆后10天用ELISA进行初步筛选，挑选单个阳性单克隆扩增到24孔板继续培养。3天后用受体配体结合实验评估生物活性。其中，评估标准为ELISA实验中OD_450nm>1.0，且配体受体结合实验中杂交瘤细胞培养上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60％。

根据24孔板样品检测结果，挑选出最优的克隆，并于含10％(w/w)FBS的DMEM培养基中(购自invitrogen)在37℃、5％(v/v)CO₂条件下将该最优的克隆进行扩大培养，液氮冻存即得最优的杂交瘤细胞，并可用于后续的抗体生产和纯化。

(四)、先导抗体的生产和纯化

由于杂交瘤细胞产生的抗体浓度较低，仅约1～10μg/mL且所得的抗体浓度变化较大；此外，培养基中细胞培养所产生的多种蛋白和培养基所含胎牛血清成分对很多生物活性分析方法都有不同程度的干扰，因此需要进行小规模(1～5mg)的抗体生产纯化。

将步骤(三)所得的杂交瘤细胞接种到T-75细胞培养瓶并用生产培养基(Hybridoma serum free medium，购自Invitrogen公司)驯化传代3代。待其生长状态良好，接种细胞培养转瓶。每个2升的培养转瓶中加入500mL生产培养基，接种细胞密度为1.0╳10⁵个/mL。盖紧瓶盖，将转瓶置于37℃培养箱中的转瓶机上，转速3转/分钟。连续旋转培养14天后，收集细胞培养液，过滤去除细胞，并用0.45μm的滤膜过滤至培养上清液澄清。澄清的培养上清液可马上进行纯化或置于-30℃冻存。

用2mL蛋白G柱(购自GE Healthcare)纯化300mL杂交瘤细胞的澄清的培养上清液中的单克隆抗体。蛋白G柱先用平衡缓冲液(PBS磷酸缓冲液，pH7.2)平衡，然后将澄清的培养上清液上样到蛋白G柱，控制流速在3mL/分钟。上样完毕后用平衡缓冲液清洗蛋白G柱，平衡缓冲液的体积为蛋白G柱的柱床体积的4倍。用洗脱液(0.1M甘氨盐酸缓冲液，pH2.5)洗脱结合在蛋白G柱上的单克隆抗体，用紫外检测器监测洗脱情况(A280紫外吸收峰)。收集洗脱的单克隆抗体，加入10％(v/v)1.0M Tris-HCl缓冲液中和pH。然后立即用PBS磷酸缓冲液透析过夜，第二天换液1次并继续透析3小时。收集透析后的单克隆抗体，用0.22μm的滤器进行无菌过滤，无菌保存，即得纯化的BLyS抗体作为先导抗体。

将纯化的BLyS抗体进行蛋白浓度(A280/1.4)、纯度、内毒(Lonza试剂盒)等检测分析，结果如表6所示。结果发现，先导抗体的内毒素浓度在1.0EU/mg以内。

表6纯化的BLyS抗体检测分析

实施例2噬菌体展示技术制备BLyS抗体

(一)、BLyS蛋白的生物素化

将Biotin-X-X-NHS(购自Sigma Aldrich)和实施例1制备的免疫原(hBLyS-ECD)按摩尔比7:1的比例混合，室温放置30分钟后，加入终浓度为50mM的1M NH₄Cl终止反应。然后用PBS磷酸缓冲液透析过夜来去除游离的生物素，得生物素化的免疫原(即生物素化的hBLyS-ECD)。用BCA蛋白浓度测定试剂盒(购自Pierce)测定生物素化的hBLyS-ECD的浓度。

生物素化的hBLyS-ECD的活性采用ELISA方法测定。将BLyS抗体(购自GSK)用PBS稀释至1μg/mL，以50μL/孔加入ELISA微孔板，4℃孵育过夜；用ELISA封闭液[含1％(w/v)BSA和0.05％(v/v)Tween-20的PBS磷酸缓冲液，pH7.4]37℃封闭2小时后，再加入梯度稀释的生物素化的hBLyS-ECD，37℃温育1小时。加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(购自Sigma，商品号S5512)，室温孵育30分钟。加入100μL/孔TMB显色液，室温孵育15分钟后，加入5μL 1N盐酸终止显色反应，用ELISA读板机读取OD_450nm读数。结果如图4和表7所示，结果说明，生物素化的hBLyS-ECD可以结合BLyS抗体。

表7 ELISA检测生物素化的免疫原与BLyS抗体的结合

(二)、噬菌体展示技术筛选BLyS抗体

利用天然人的单链抗体(ScFv)噬菌体展示库(由上海睿智化学研究有限公司构建)筛选先导抗体。通过四轮生物淘选得到与BLyS结合的抗体。具体过程如下：

将链霉亲和素用PBS稀释至12.5μg/mL，以1mL每管加入到免疫管中，4℃孵育过夜。用PBS洗涤免疫管3次后，在一半的免疫管中，每管加入50μg的步骤(一)制得的生物素化的hBLyS-ECD，室温振荡1小时。PBS缓冲液洗涤3次之后，免疫管用10mL2％(w/v)的封闭液[含有2％(w/v)脱脂奶粉的PBS缓冲液]室温封闭2小时。同时，在另一半免疫管中，加入1mL噬菌体ScFv抗体库和封闭液，室温振荡2小时。并且设置对照管，加入同溶液体积的封闭液。将加入生物素化的hBLyS-ECD的免疫管和对照管中的封闭液倒掉，加入已经封闭好的噬菌体ScFv抗体库，室温振荡2小时。免疫管和对照管先用PBST[含有0.1％(v/v)Tween-20的PBS缓冲液]洗涤5次，再用PBS缓冲液洗涤5次。其中，洗涤次数每一轮多增5次。洗涤后，每管加入1mL的10μg/mL胰酶，37℃孵育30分钟来洗脱与生物素化的hBLyS-ECD结合的噬菌体。将1mL的胰酶溶液加到4mL处于对数生长期的大肠杆菌TG1(购自LUCIGEN)中，37℃孵育30分钟，得TG1的培养液。将TG1的培养液梯度稀释，涂布平板，37℃培养过夜。计算所得的与生物素化的hBLyS-ECD结合的免疫管和对照管的克隆数，并挑选20～30个克隆测序。

同时，将平板上的克隆用2YT培养基(2YT培养基的配制方法为：将10g酵母提取物、16g胰蛋白胨和5g NaCl加入1L水中，再用NaOH调pH至7.0，高压灭菌)洗涤、收集，并接种到新鲜培养基中，37℃培养至对数期。加入辅助噬菌体M13KO7(购自NEB，货号N0315S)，混匀，37℃静置30分钟。然后37℃振荡培养30分钟，4000rpm离心10分钟后收集细胞，加入新鲜培养基，30℃振荡培养4小时。4000rpm离心30分钟，收集上清，加入上清体积的1/4体积的含有5×PEG的2.5M的NaCl溶液，放置冰上过夜。4000rpm，4℃离心30分钟，收集噬菌体沉淀，溶解在PBS缓冲液中。10000rpm离心10分钟去除残留的细胞碎片，收集上清用于下一轮的生物淘选。

用ELISA方法确定筛选得到的scFv抗体具有与BLyS蛋白的结合活性。将OD_450nm>1.0的克隆挑选出来进行测序，得到具有不同HCDR3序列的克隆。然后再通过FACS和配体受体结合实验，选择FACS实验中MFI值>30并且在配体受体结合实验中细胞裂解上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60％的克隆作为符合条件的阳性克隆。

(三)、抗体的生产和纯化

根据阳性克隆的测序结果(具体参见下述实施例7)，设计引物(具体引物序列如表8所示)通过PCR方法分别扩增轻链和重链可变区。配置50μL反应体系，包括0.5μL含有转染阳性克隆大肠杆菌TG1中提取的质粒)、每种引物10pmol、0.5μL DNA聚合酶以及相配的缓冲体系。设置PCR程序，预变性95℃2分钟，变性95℃15秒，退火55℃30秒，延伸68℃45秒，30个循环后再额外于68℃延伸10分钟，得PCR产物。其中PCR所用的DNA聚合酶，购自Invitrogen，货号12344；缓冲体系为该DNA聚合酶配套购买使用的缓冲体系。取5μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将检测阳性样品使用柱回收试剂盒纯化，其中回收试剂盒为

Gel&PCR Clean-up，购自MACHEREY-NAGEL，货号740609。进行连接反应：插入片段3μL，酶切过的表达载体0.5μL，重组酶Exnase 0.5μL，缓冲液2μL，反应体系10μL，于37℃反应半小时得连接产物，即构建好的重组载体。其中，重组酶购自Vazyme，货号C112-01/02；缓冲液为该重组酶配套购买使用的重组酶；将重链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgG1恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)，将轻链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa或lambda(仅针对下述L1D12抗体的轻链)恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)中。将10μL连接产物加入50μL的感受态细胞(Ecos101competent cells，购自Yeastern，货号FYE607)中，冰浴30分钟。再于42℃水浴热激1分钟，放回冰上2分钟后加入500μL无抗生素的2YT培养基，于37℃摇床上以200RPM的速度复苏45分钟，取出200μL涂布于含100μg/mL氨苄青霉素的LB固体培养基上于37℃孵箱过夜培养。次日，使用表达载体上引物pTT-EF1a-F和pSV40(其核苷酸序列分别为序列表SEQID No.134～135所示)，配置30μL PCR体系，进行菌落PCR。菌落PCR的体系为：引物各1μL，10μL的PCR预混液(购自Novoprotein)，用水补足到20μL。用移液器枪头蘸取菌落于PCR反应体系中吹吸，并吸出0.5μL点于另一块含100μg/mL氨苄青霉素的LB固体培养皿上以保存菌株。PCR反应结束后，取出5μL进行琼脂糖凝胶电泳检测，将阳性样品进行测序和分析[参见Kabat,“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”National Institutesof Health,Bethesda,Md.(1991)]。

表8阳性克隆的引物序列编号

经过菌落PCR验证，将上述序列正确的重组抗体轻、重链的表达载体瞬时转染到FreeStyle^TM 293-F细胞(购自Invitrogen)中来生产抗体。在转染的时候，293-F细胞的密度应为1-1.5×10⁶个/mL，并且100mL细胞需要100μg上述已构建好的载体DNA(其中，重组轻链载体和重链载体的质量比为3:2)和200μg的转染试剂聚乙烯亚胺(PEI)。将载体DNA和PEI分别加入到培养基中，室温静置5分钟，0.22μm滤膜过滤后，将载体DNA和PEI混合得混合物，室温静置15分钟。然后将上述混合物缓慢地加入到细胞中，在37℃、8％(v/v)CO₂培养箱中以120rpm的转速培养。转染后的第二天，加入0.5％(v/v)蛋白胨到细胞的培养液中。6-7天后，3500g离心细胞的培养液30分钟，收集上清液，0.22μm滤器过滤。

200mL澄清的上清液中的单克隆抗体用1mL蛋白A柱(购自GE Healthcare)纯化。蛋白A柱先用平衡缓冲液(PBS磷酸缓冲液，pH7.2)平衡，然后将上清液上样到蛋白A柱，控制流速在3mL/分钟。上样完毕后用平衡缓冲液清洗蛋白A柱，平衡缓冲液的体积为蛋白A柱的柱床体积的5倍。用洗脱液(0.1M甘氨盐酸缓冲液，pH3.0)洗脱结合在蛋白A柱上的BLyS抗体，用紫外检测器监测洗脱情况(A280紫外吸收峰)。收集洗脱的抗体，加入10％(v/v)1.0MTris-HCl缓冲液中和pH，然后立即用PBS磷酸缓冲液透析过夜，第二天换液1次并继续透析3小时。收集透析后的BLyS抗体，用0.22μm的滤器进行无菌过滤，无菌保存，即得纯化的BLyS抗体作为先导抗体。

将先导抗体进行蛋白浓度(A280/1.4)、纯度、内毒(Lonza试剂盒)等检测分析。结果如表9所示，结果显示，先导抗体内毒素浓度在1.0EU/mg以内。

表9纯化的BLyS抗体检测分析

实施例3先导抗体的检定

A、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体与BLyS蛋白的结合

将实施例1和2所得的先导抗体进行与人BLyS蛋白和BLyS蛋白所在家族的人APRIL蛋白分别进行交叉反应。

先将链霉亲和素用PBS稀释到终浓度1.0μg/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4℃孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05％(v/v)Tween20和1％(w/w)BSA的PBS缓冲液]，37℃封闭2小时。倒掉封闭液，将实施例2获得的生物素化的hBLyS-ECD用PBS稀释到终浓度50ng/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板，37℃孵育1小时。用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次后，每孔加入实施例1和2所得的纯化的先导抗体100μL。37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的二抗(购自Sigma)，37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入100μL TMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入100μL终止液(1.0NHCl)。用ELISA读板机(SpectraMax M5e，购自Molecular Device)读取A_450nm数值，结果如图5A～图5B和表10所示，表10说明，纯化后的抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为OD_450nm值。

表10 ELISA检测BLyS纯化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应

检测BLyS抗体是否与人APRIL蛋白有交叉反应时，先将APRIL蛋白(购自R&DSystems)用PBS稀释到终浓度1.0μg/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4℃孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05％(v/v)Tween20和1％(w/w)BSA的PBS缓冲液]，37℃封闭2小时。倒掉封闭液，加入实施例1和2所得的先导抗体100μL每孔。37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的二抗(购自Sigma)，37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入100μL TMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入100μL终止液(1.0N HCl)。用ELISA读板机(SpectraMax M5e，购自Molecular Device)读取A_450nm数值，结果如图6A～图6B和表11所示，表11说明，先导抗体与BLyS蛋白同家族的APRIL重组蛋白在ELISA水平不结合。其中IgG对照为人IgG，表中的数据为OD_450nm值。

表11-1 ELISA检测BLyS抗体与APRIL蛋白的结合反应

表11-2 ELISA检测BLyS抗体与APRIL蛋白的结合反应

B、流式细胞实验(FACS)检测抗体与BLyS表达细胞的结合

将实施例1步骤(二)获得的CHO-K1hBLyS稳定细胞株和CHO-K1cynoBLyS稳定细胞株在T-175细胞培养瓶中扩大培养至90％汇合度。吸尽培养基，用PBS缓冲液(购自Invitrogen)洗涤1次，然后用细胞解离液(TrypLE^TM Express Enzyme，购自Lifetechnology公司)处理和收集细胞。具体步骤为：用PBS缓冲液洗涤细胞1次，进行细胞计数后将细胞用PBS缓冲液稀释至2╳10⁶个细胞每毫升，加入2％(w/w)胎牛血清封闭液，冰上孵育30分钟。按每孔200μL加入到96孔FACS反应板中，4℃离心2000rpm后，每孔加入100μL实施例1和2所得的先导抗体，冰上孵育1小时。用FACS缓冲液[含有2％(w/w)FBS的PBS缓冲液]离心洗涤2次，加入每孔100μL荧光(Alexa 488)标记的二抗(购自Invitrogen)，冰上孵育1小时。用FACS缓冲液离心洗涤3次。用200μL FACS缓冲液悬浮细胞，用FACS(FACS Calibur，购自BD公司)检测和分析结果。结果如图7～8和表12～13所示，表12～13说明，先导抗体可结合细胞表面的人BLyS蛋白，且先导抗体和猴BLyS存在交叉反应。其中表中的数据为MFI所测细胞群的平均荧光强度值。

表12流式细胞分析实验检测BLyS抗体与人BLyS重组细胞(CHO-K1hBLyS)的结合反应

表13流式细胞分析实验检测BLyS抗体与猴BLyS重组细胞(CHO-K1 cynoBLyS)的结合反应

C.BLyS抗体亲和常数的测定

使用Biacore X100仪器(购自GE Healthcare)进行亲和常数的测定。具体操作和方法根据仪器说明书和厂家提供的详细方法。具体为：用CM5芯片(Sensor Chip CM5，购自GE Healthcare)进行亲和力测定。首先将CM5芯片依次用50mM的NaOH和按体积比1:1混合的50mM NHS及200mM EDC活化，然后将抗人Fc片段抗体(购自Genway)用10mM的醋酸钠缓冲液(pH5.0)稀释至16.4μg/ml，与CM5芯片进行偶联反应。随后注入1M乙醇胺对剩余的活化位点进行封闭。待测抗体(即实施例2制备的全人源BLyS抗体)被芯片捕获后，注入7个不同浓度梯度稀释的实施例1制备的免疫原(即hBLyS-ECD)，通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。然后用Biacore X100Evaluation Software 2.0软件拟合得到解离常数与结合常数，亲和力常数为解离常数与结合常数的比值。结果如表14所示，说明BLyS抗体对hBLyS-ECD具有高亲和力。

表14 BLyS抗体对hBLyS-ECD的亲和常数

实施例4检测BLyS纯化抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合

通过BLyS蛋白的受体配体结合试验检测BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合。

将BAFF R(购自R&D Systems)以50ng每孔加到96孔ELISA板中，塑料膜封好4℃孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05％(v/v)Tween20和2％(w/w)BSA的PBS缓冲液]室温封闭1小时。倒掉封闭液，每孔先加入50μL实施例1和2所得的先导抗体，后加入实施例2制备的生物素化的hBLyS-ECD每孔50μL，混匀后37℃孵育1小时。用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的亲和素(购自Sigma)稀释液每孔100μL，37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入100μL TMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入100μL终止液(1.0N HCl)。用ELISA读板机(SpectraMax 384plus,Molecular Device)读取A_450nm数值，结果如图9A～图9B和表15所示。表15说明，BLyS抗体能封闭BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合。

表15-1 BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合

表15-2 BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合

实施例5小鼠B细胞增殖实验检测BLyS纯化抗体阻断人或鼠BLyS蛋白对B细胞增殖的作用

(一)小鼠脾脏分离B细胞

将新鲜获取的小鼠脾脏研磨后，用含有10％(w/w)胎牛血清的RPMI1640培养基(购自Invitrogen，货号：A10491)重悬，70μm细胞滤网(购自BD)过滤后，以1,500rpm转速4℃离心5分钟。弃上清，将细胞沉淀漩涡振荡15秒，加入红细胞裂解缓冲液(购自Sigma)，室温静置5分钟。用含有10％(w/w)胎牛血清的RPMI1640培养基补足到15mL，1500rpm转速4℃离心5分钟，得上清。上清用40μm细胞滤网(购自BD)过滤，得过滤后的上清，然后进行细胞计数。小鼠B细胞分离采用试剂盒(购自Miltenyi Biotec)，实验操作严格按照试剂盒说明书要求。具体实验简述如下：将过滤后的上清以300g转速4℃下离心10分钟，弃上清。每10⁷个细胞中加入40μL缓冲液[含有0.5％(w/v)BSA和2mM EDTA的PBS缓冲液]和10μL该试剂盒中的结合非B细胞的生物素化的抗体混合物，混合后4℃孵育5分钟。每10⁷个细胞中继续加入30μL缓冲液[含有0.5％(w/v)BSA和2mM EDTA的PBS缓冲液]和20μL抗生物素标记的磁珠(购自Miltenyi Biotec)，混合之后再4℃孵育10分钟，得细胞悬液。用缓冲液将体积补足到500μL。将LS分离柱(购自Miltenyi Biotec)放置在磁力架上，先加入3mL缓冲液润洗，再加入细胞悬液，收集流穿液，即未被标记的被富集的B细胞悬液。再加入3mL缓冲液，收集流穿液，并与上一步的流穿液合并，即得分离自小鼠脾脏的B细胞。

(二)小鼠B细胞增殖实验

将实施例5步骤(一)获得的B细胞以5╳10⁴个细胞50μL每孔铺至96孔细胞培养板，加入2μg/ml的F(ab’)2片段化山羊抗小鼠IgM二抗(购自Jackson ImmunoResearch)、10ng/ml的实施例1制备的免疫原(hBLyS-ECD)或鼠BLyS蛋白(购自R&D Systems)和不同浓度的实施例1或2制备的先导抗体的溶液，保证每个反应孔100μL体积。将反应板于37℃、5％(v/v)CO₂培养箱培养72小时后检测活细胞数。活细胞数目测定采用

LuminescentCell Viability Assay试剂盒(购自Promega)，实验操作严格按照试剂盒说明书要求。具体实验简述如下：在测定前将96孔板放在室温平衡30分钟，加入与细胞培养基等体积的

试剂，放置在摇床2分钟以诱导细胞裂解，再将孔板放置在室温10分钟来稳定发光信号，最后用读板机(SpectraMax 384plus,Molecular Device)读取数值。

检测BLyS抗体在实施例5步骤(二)所述实验中对小鼠B细胞增殖的影响。结果如图10～11和表16～17所示，图10说明，待测抗体可抑制hBLyS-ECD刺激引起的小鼠B细胞增殖。图11说明，待测抗体除L9G7可以抑制鼠BLyS诱导的小鼠B细胞增殖以外，与鼠BLyS无交叉反应。

表16 BLyS抗体对hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制

表17 BLyS抗体对鼠BLyS刺激的小鼠B细胞增殖的抑制

实施例6 BLyS抗体结合抗原表位的鉴定

将纯化的全人源BLyS抗体和杂交瘤抗体进行竞争性酶联免疫吸附实验，分析不同抗体所结合的抗原表位。

先将纯化的BLyS抗体用PBS稀释到终浓度1.0μg/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4℃孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05％(v/v)Tween20和1％(w/w)BSA的PBS缓冲液]，37℃封闭1小时。倒掉封闭液，将竞争性的抗体及IgG对照用PBS稀释到终浓度40μg/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板。再将生物素化的hBLyS-ECD用PBS稀释到终浓度2ng/mL，然后以50μL每孔加到96孔ELISA板。保证竞争性抗体以及hBLyS-ECD的终浓度分别为20μg/mL，1ng/mL。37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的链霉亲和素(购自Sigma)，每孔100μL。37℃孵育1小时后，用洗板液[含有0.05％(v/v)Tween20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入100μL TMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入100μL终止液(1.0N HCl)。用ELISA读板机(SpectraMax M5e，购自Molecular Device)读取A_450nm数值。结果如表18A～表18B所示，说明BLyS抗体之间存在不同程度的竞争性，即结合不同的抗原表位。其中表中的数据为加入竞争性抗体后，对原抗体与hBLyS-ECD结合水平的抑制率(％)。

表18A BLyS全人源抗体竞争与hBLyS-ECD的结合

克隆号	2-1G11	L1D12	L9G7
				2-1G11	82	91	79
L1D12	94	94	90
				L9G7	96	97	95

表18B BLyS纯化抗体竞争与hBLyS-ECD的结合

实施例7轻重链可变区氨基酸序列测定及鼠-人嵌合抗体的制备

总RNA分离：将实施例1所选的先导抗体所对应的亚克隆培养所得的上清液检验过抗原结合后(即经过实施例3～5的检定和活性测定后)，通过离心搜集5×10⁷个杂交瘤细胞，加入1mL Trizol混匀并转移到1.5mL离心管中，室温静置5分钟；加0.2mL氯仿，振荡15秒，静置2分钟后于4℃，12000g离心5分钟，取上清转移到新的1.5mL离心管中；加入0.5mL异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10分钟后于4℃，12000g离心15分钟，弃上清；加入1mL75％(v/v)乙醇，轻轻洗涤沉淀，4℃，12000g离心5分钟后弃上清，将沉淀物晾干，加入DEPC处理过的H₂O溶解(55℃水浴促进溶剂10分钟)，即得总RNA。

逆转录与PCR：取1μg总RNA，配置20μl体系，加入逆转录酶后于42℃反应60分钟，于85℃反应10分钟终止反应。配置50μL PCR体系，包括1μL cDNA、每种引物25pmol、1μL DNA聚合酶以及相配的缓冲体系、250μmol dNTPs；设置PCR程序，95℃预变性3分钟，95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸35秒，35个循环后再额外于72℃延伸5分钟，得PCR产物。其中逆转录所用的试剂盒为PrimeScript RT Master Mix，购自Takara，货号RR036；PCR所用的试剂盒包括Q5超保真酶，购自NEB，货号M0492。

克隆与测序：取5μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将检测阳性样品使用柱回收试剂盒纯化，其中回收试剂盒为

Gel&PCR Clean-up，购自MACHEREY-NAGEL，货号740609。进行连接反应：样品50ng，T载体50ng，连接酶0.5μL，缓冲液1μL，反应体系10μL，于16℃反应半小时得连接产物，其中连接的试剂盒为T4DNA连接酶，购自NEB，货号M0402；取5μL连接产物加入100μL的感受态细胞(Ecos 101competent cells,购自Yeastern，货号FYE607)中，冰浴5分钟，而后于42℃水浴热激1分钟，放回冰上1分钟后加入650μL无抗生素SOC培养基，于37℃摇床上以200RPM的速度复苏30分钟，取出200μL涂布于含抗生素的LB固体培养基上于37℃孵箱过夜培养；次日，使用T载体上引物M13F和M13R配置30μL PCR体系，进行菌落PCR，用移液器枪头蘸取菌落于PCR反应体系中吹吸，并吸出0.5μL点于另一块含100μg/mL氨苄青霉素的LB固体培养皿上以保存菌株；PCR反应结束后，取出5μL进行琼脂糖凝胶电泳检测，将阳性样品进行测序和分析[参见Kabat，“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)]。测序结果如表19～20所示。

本发明噬菌体制备的全人源BLyS抗体的克隆和测序请参见实施例2第(三)部分，表19、20也包含了这部分测序结果。

表19 BLyS抗体氨基酸序列编号

其中，表19中的数字即为序列表中序列号，如2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1，而2-1G11的重链蛋白可变区中CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.2。

表20 BLyS抗体基因核苷酸序列编号

其中，表20中的数字即为序列表中序列号，如编码2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID No.105，而编码2-1G11的轻链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID No.106。

编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.110中的第262位至第297位。

编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.112中的第262位至第288位。

编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.114中的第277位至第303位。

编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.118中的第262位至第288位。

编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.124中的第265位至第291位。

小鼠-人嵌合BLyS抗体的制备：根据上步的测序结果得到了抗体重链可变区和轻链可变区序列。小鼠-人嵌合BLyS抗体的生产和制备参考实施例2中的第(三)步骤，即；

1、重组载体制备：将重链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgG1恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)，将轻链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)；2、细胞转染；3、抗体纯化。并对所获BLyS嵌合抗体进行特性鉴定(方法参见实施例3～5)。制得的各嵌合抗体命名在对应的先导抗体克隆号前加上首字符“c”，例如嵌合抗体c8E7D9C7F5对应的先导抗体克隆号为8E7D9C7F5。

结果如图12和表21所示，表21说明，嵌合抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为OD_450nm值。

表21 ELISA检测BLyS嵌合抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应

通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。结果如表22所示，说明BLyS嵌合抗体对hBLyS-ECD具有高亲和力。

表22 BLyS嵌合抗体对hBLyS-ECD的亲和常数

结果如图13和表23所示。表23说明，BLyS嵌合抗体能封闭BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合。其中表中的数据为OD_450nm值。

表23 BLyS嵌合抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合

结果如图14和表24所示。表24说明，BLyS嵌合抗体可以抑制hBLyS-ECD刺激引起的小鼠B细胞增殖。

表24 BLyS嵌合抗体对hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制

实施例8小鼠体内检测BLyS抗体的中和活性

雌性BALB/c小鼠(8-9周龄，购自上海灵畅生物科技有限公司)接收后在SPF级饲养，适应1周后，开始实验。小鼠在第一天及第三天静脉注射实施例2和6制备的全人源或人鼠嵌合BLyS单克隆抗体(在免疫原注射1小时前)，克隆号分别为2-1G11、L1D12、c8E7D9C7F5、c20D1B6E9E5、c35E6F7C3、c97A3C2H4、c93C6F10D3和c111D10D6G3，剂量为3mg/kg。第一天到第四天每天通过皮下注射实施例1制备的免疫原(hBLyS-ECD)进行刺激诱导，剂量为0.3mg/kg。第五天将所有动物杀死，测量小鼠脾脏重量、B细胞在脾细胞中所占的比例和血清中IgA的的浓度。

部分实验结果见图15A～图15C和表25。IgG对照为人IgG。实验结果表明BLyS抗体能降低由hBLyS-ECD刺激所引起的小鼠脾细胞中B细胞比例的增加。

表25-1 BLyS抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响

克隆号	B细胞在脾细胞中所占比例(％)
		c8E7D9C7F5	34.80
c20D1B6E9E5	35.36
		人IgG对照	51.05

表25-2 BLyS抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响

克隆号	B细胞在脾细胞中所占比例(％)
		2-1G11	25.64
c35E6F7C3	30.51
		c97A3C2H4	24.10
人IgG对照	39.36

表25-3 BLyS抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响

克隆号	B细胞在脾细胞中所占比例(％)
		L1D12	26.75
c93C6F10D3	27.11
		c111D10D6G3	33.24
c97A3C2H4	28.19
		人IgG对照	38.29

实施例9人源化BLyS抗体的制备及鉴定

在Germline数据库中选取与上述嵌合抗体c8E7D9C7F5或c97A3C2H4的非CDR区匹配最好的人种系抗体重链和轻链可变区模板。人源化BLyS抗体的序列选自人种系外显子V_H、J_H、V_k和J_k序列。其中c8E7D9C7F5抗体重链可变区的模板为人种系抗体重链V_H外显子的V_H1-18，J_H外显子的J_H-6，轻链可变区的模板为人种系抗体轻链V_K外显子的B3，J_K外显子的J_K-4。其中c97A3C2H4抗体重链可变区的模板为人种系抗体重链V_H外显子的V_H3-7，J_H外显子的J_H-6，轻链可变区的模板为人种系抗体轻链V_K外显子的A10，J_K外显子的J_K-4。

根据Kabat定义确定的嵌合抗体c8E7D9C7F5或c97A3C2H4的重链和轻链CDR分别移植到所选人种系模板中，替换人种系模板的CDR区，得到人源化的抗体。然后，以鼠源抗体的三维结构为基础，对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基，以及对V_H和V_L的构象有重要影响的构架区的残基进行回复突变，得到人源化之后的抗体。

人源化BLyS抗体变体的重链和轻链可变区与嵌合抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列比对如表26所示。其中人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5变体的重链可变区序列分别为SEQ ID No.140，SEQ ID No.141，SEQ ID No.142，SEQ ID No.143，SEQ ID No.144，SEQ IDNo.145，SEQ ID No.146，轻链可变区序列分别为SEQ ID No.147，SEQ ID No.148。人源化BLyS抗体h97A3C2H4变体的重链可变区序列分别为SEQ ID No.149，SEQ ID No.150，SEQ IDNo.151，SEQ ID No.152，轻链可变区序列分别为SEQ ID No.153，SEQ ID No.154，SEQ IDNo.155，SEQ ID No.156，SEQ ID No.157。

人种系重链可变区模板V_H1-18/J_H6(SEQ ID NO.136)

V_H1-18：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR；

J_H6：WGQGTTVTVSS。

人种系轻链可变区模板B3/J_K4(SEQ ID NO.137)

B3：

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC；

J_K4：FGGGTKVEIK。

人种系重链可变区模板V_H3-7/J_H6(SEQ ID NO.138)

V_H3-7：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR；

J_H6：WGQGTTVTVSS。

人种系轻链可变区模板A10/J_K4(SEQ ID NO.139)

A10：

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYC；

J_K4：FGGGTKVEIK。

表26-1人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5与嵌合抗体c8E7D9C7F5可变区的序列比对

表26-2人源化BLyS抗体h97A3C2H4与嵌合抗体c97A3C2H4可变区的序列比对

人源化BLyS抗体变体的重链和轻链可变区的核苷酸序列如表27所示。其中人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5变体的重链可变区核苷酸序列分别为SEQ ID No.158，SEQ IDNo.159，SEQ ID No.160，SEQ ID No.161，SEQ ID No.162，SEQ ID No.163，SEQ ID No.164，轻链可变区核苷酸序列分别为SEQ ID No.165，SEQ ID No.166。人源化BLyS抗体h97A3C2H4变体的重链可变区核苷酸序列分别为SEQ ID No.167，SEQ ID No.168，SEQ ID No.169，SEQID No.170，轻链可变区核苷酸序列分别为SEQ ID No.171，SEQ ID No.172，SEQ IDNo.173，SEQ ID No.174，SEQ ID No.175。

表27-1人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5可变区核苷酸的序列编号

抗体名称	重链可变区	轻链可变区
			h8E7D9C7F5-1	158	165
h8E7D9C7F5-2	158	166
			h8E7D9C7F5-3	159	165
h8E7D9C7F5-4	159	166
			h8E7D9C7F5-5	160	165
h8E7D9C7F5-6	160	166
			h8E7D9C7F5-7	161	165
h8E7D9C7F5-8	161	166
			h8E7D9C7F5-9	162	165
h8E7D9C7F5-10	162	166
			h8E7D9C7F5-11	163	165
h8E7D9C7F5-12	163	166
			h8E7D9C7F5-13	164	165
h8E7D9C7F5-14	164	166

表27-2人源化BLyS抗体h97A3C2H4可变区核苷酸的序列编号

抗体名称	重链可变区	轻链可变区
			h97A3C2H4-1	167	171
h97A3C2H4-2	167	172
			h97A3C2H4-3	168	171
h97A3C2H4-4	168	172
			h97A3C2H4-5	169	171
h97A3C2H4-6	169	172
			h97A3C2H4-7	169	173
h97A3C2H4-8	169	174
			h97A3C2H4-9	169	175
h97A3C2H4-10	170	173
			h97A3C2H4-11	170	174
h97A3C2H4-12	170	175

根据人源化V_H或V_L结构域合成的重叠寡核苷酸，利用PCR重叠延伸来组装各结构域。利用掺入PCR产物的限制性位点将V_H结构域定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgG1恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)，将V_L结构域定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa恒定区的表达载体(其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成)中，得到的重组质粒经过测序验证，抽提高纯度的重组质粒，经0.22μm滤膜过滤，供转染使用。人源化BLyS抗体的生产和制备参考实施例2中的第(三)步骤，并对所获BLyS抗体进行特性鉴定(见实施例3～5，7)。

结果如图16和表28所示，表28说明，人源化抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为OD_450nm值。

表28 ELISA检测人源化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应

通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。结果如表29所示，说明BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD具有高亲和力。

表29 BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD的亲和常数

结果如图17和表30所示。表30说明，BLyS人源化抗体能封闭BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合。其中表中的数据为OD_450nm值。

表30 BLyS人源化抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFF R的结合

结果如图18和表31所示。表31说明，BLyS人源化抗体可以抑制hBLyS-ECD刺激引起的小鼠B细胞增殖。

表31 BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制

同时，在小鼠体内检测BLyS人源化抗体的中和活性。实验结果见图19A～19B和表32。实验结果表明BLyS人源化抗体能降低由hBLyS-ECD刺激所引起的小鼠脾细胞中B细胞比例的增加，同时有效抑制血清中IgA水平。

表32-1 BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响

克隆号	B细胞在脾细胞中所占比例(％)
		h8E7D9C7F5-1	28.29
h97A3C2H4-9	28.98
		人IgG对照	39.74

表32-2 BLyS人源化抗体对小鼠血清中IgA浓度的影响

克隆号	IgA浓度(μg/mL)
		h8E7D9C7F5-1	80.89
h97A3C2H4-9	121.33
		人IgG对照	387.02

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

<110> 上海开拓者生物医药有限公司

<120> 一种BLyS抗体及其制备方法和应用

<130> P1710608C

<150> 201610527996.0

<151> 2016-07-06

<160> 187

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Val Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ile Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Asp Arg Val Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ile Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 5

<211> 107

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Lys Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Asp Ala Ser Lys Arg Ala Thr

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr

1 5

<210> 9

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 9

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 10

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 10

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 11

Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 12

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 12

Thr Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 13

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Val Asp Thr Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

Arg Thr Ser Gln Ser Val Asp Thr Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 15

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr

1 5

<210> 17

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Phe His Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 18

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr Met Ser

1 5 10

<210> 19

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 19

Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 20

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 20

Gly Phe His Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 21

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 21

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30

Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Asn Ser Gly Thr His

85 90 95

Leu Val Glu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 22

Gln Gly Asp Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Gly

1 5 10

<210> 23

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 23

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 24

Ser Ser Arg Asp Asn Ser Gly Thr His Leu Val Glu

1 5 10

<210> 25

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 25

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ala Gly Phe Asn Ile Gln Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Val Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Val Ile Thr Ala Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 26

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 26

Gly Phe Asn Ile Gln Asp Thr Tyr Ile His

1 5 10

<210> 27

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 27

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 28

Pro Val Ile Thr Ala Gly Phe Ala Tyr

1 5

<210> 29

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 29

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Gly Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Arg Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys

100 105

<210> 30

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 30

Gly Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Val His

1 5 10

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 31

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 32

Gln Gln Trp Thr Arg Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 33

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 33

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Val Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Ala Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 34

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 34

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 35

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 35

Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 36

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 36

Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 37

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 37

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Lys Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 38

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 38

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His

1 5 10 15

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 39

Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 40

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 40

Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 41

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 41

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Asp Phe Asn Ile Lys Asn Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Val Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Lys Ala Thr Ile Ile Val Asp Thr Tyr Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Pro Ile Thr Thr Ile Val Ala Thr Asp Trp Tyr Phe Asp

100 105 110

Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 42

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 42

Asp Phe Asn Ile Lys Asn Thr Tyr Ile His

1 5 10

<210> 43

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 43

Arg Ile Asp Pro Val Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 44

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 44

Trp Pro Ile Thr Thr Ile Val Ala Thr Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 45

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 45

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Gln Leu Ala Leu Pro Val Arg Leu Gly

1 5 10 15

Glu Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asn Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 46

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 46

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 47

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 48

Phe Gln Gly Ser His Val Pro

1 5

<210> 49

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 49

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Phe Cys

85 90 95

Ala Ala Tyr Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 50

Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 51

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 51

Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 52

Tyr Leu Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 53

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 53

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Ser Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Gly Ser Tyr Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 54

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 54

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His

1 5 10

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 55

Ser Ala Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 56

Gln Gln Arg Gly Ser Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 57

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 57

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Asn Ser His

20 25 30

Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Phe Met

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu His Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Arg Thr Pro Ser Met Ile Thr Tyr Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 58

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 58

Gly Leu Ser Leu Asn Ser His Asp Ile Ser

1 5 10

<210> 59

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 59

Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Phe Met Ser

1 5 10 15

<210> 60

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 60

Thr Pro Ser Met Ile Thr Tyr Ser Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 61

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 61

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Arg

20 25 30

Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gln Thr Ser Pro Lys Ala Trp

35 40 45

Ile His Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 62

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 62

Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Arg Asn Leu His

1 5 10

<210> 63

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 63

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 64

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 64

Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 65

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 65

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Ser Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His

20 25 30

Lys Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Val Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Gly Phe Tyr Asp Val Met Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 66

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 66

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Lys Met His

1 5 10

<210> 67

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 67

Tyr Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 68

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 68

Trp Gly Phe Tyr Asp Val Met Asp Ser

1 5

<210> 69

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 69

Asp Val Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ile

20 25 30

Ile Gly Asp Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 70

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 70

Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ile Ile Gly Asp Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 71

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 72

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 72

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Arg Thr

1 5

<210> 73

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 73

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 74

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 74

Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Thr Met Ser

1 5 10

<210> 75

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 75

Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 76

His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 77

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 77

Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 78

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 78

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His

1 5 10

<210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 79

Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser

1 5

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 80

Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp Thr

1 5

<210> 81

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 81

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Thr Glu Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Ala Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 82

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 82

Gly Phe Asn Ile Lys Asn Tyr Tyr Met His

1 5 10

<210> 83

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 83

Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Ala

<210> 84

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 84

Lys Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 85

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 85

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Leu Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Phe Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 86

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 86

Arg Ala Ser Glu Asp Leu Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 87

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 87

Ala Ala Thr Phe Leu Ala Asp

1 5

<210> 88

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 88

Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Pro Thr

1 5

<210> 89

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 89

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His

20 25 30

Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Val Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 90

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 90

Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His

1 5

<210> 91

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 91

Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 92

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 92

Gly Asp Val Asp Val

1 5

<210> 93

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 93

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Arg Gly Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asn Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Ala

50 55 60

Thr Arg Ser Gly Ser Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 94

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 94

Arg Ala Ser Gln Glu Ile Arg Gly Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 95

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 95

Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser

1 5

<210> 96

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 96

Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 97

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ile Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr His Cys

85 90 95

Thr Arg His Pro Asp Leu Leu Leu Arg Tyr Asp Tyr Ala Leu Asp His

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 98

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 98

Gly Phe Ala Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 99

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 99

Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 100

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 100

His Pro Asp Leu Leu Leu Arg Tyr Asp Tyr Ala Leu Asp His

1 5 10

<210> 101

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 101

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile His Ile Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Gly Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Thr Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asn Ser Thr Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 102

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 102

Arg Ala Ser Glu Asn Ile His Ile Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 103

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 103

Asn Gly Lys Thr Leu Ala Asp

1 5

<210> 104

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 104

Gln His Phe Trp Asn Ser Thr Trp Thr

1 5

<210> 105

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 105

gaggtgcagc tggtggagtc ccggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac gcggccgtgt attactgtgc gagagatcgg 300

gtagatattt tgactggtta ttctatctac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360

gtcaccgtct cctca 375

<210> 106

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 106

gaaattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaga gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 107

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 107

caaatccagc tggtacaatc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180

gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240

atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaacgtat 300

tacgatattt tgactggtta ttactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360

gtcaccgtct cctca 375

<210> 108

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 108

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga gagagccacc 60

ctctcctgca ggaccagtca gagtgttgac acctacttgg cctggtacca acagaagcct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccactcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 109

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 109

caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180

gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 240

caaatgaaca gcctgagagc tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggtttccac 300

gatattttga ctggttacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360

tca 363

<210> 110

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 110

tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60

acatgccaag gagacagcct cagaaactat tatgcaggct ggtaccaaca gaagccagga 120

caggcccctg tacttgtcat ctatggaaag aacaaccggc cctcaggaat cccagaccga 180

ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactgggac tcaggcggaa 240

gatgaggctg actattactg tagctcccgg gacaacagtg gtacccatct cgtggaattc 300

ggcggaggga ccaagttgac cgtccta 327

<210> 111

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 111

gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60

tcctgcacag ctgctggctt caacattcaa gacacctata ttcattgggt gaagcagagg 120

cctgagcagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatgctaa cactgtatat 180

gacccgaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240

ctgcaggtca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc cagtcccgtt 300

attactgcgg gatttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354

<210> 112

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 112

caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgctt ctccagggga gaaggtcacc 60

atgacctgcg gtgccagctc aagtgtaaat tacgtgcact ggtaccagca gaagtcaggg 120

acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaattgg cttctggagt ccctgctcgc 180

ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240

gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg actagatccc cgctcacgtt cggtgctggg 300

accaaggtgg agctgaaa 318

<210> 113

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 113

caggttcagc tgcagcagtc tggagttgag ctggcgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60

tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatggta taagctgggt gaagcagaga 120

actggacagg cccttgagtg gattggagag atttatccta gaagtggtaa tacttactac 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcgtac 240

atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagatcgggg 300

cctattacta cgttagtagc tacggactat ggtatggact actggggtca aggaacctca 360

gtcaccgtct cctca 375

<210> 114

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 114

gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60

atctcctgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctagct atagttacat gcactggtac 120

caacagaaac caggacagcc gcccaaactc ctcatcaagt ttgcatccaa cctagaatct 180

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacatat tactgtcagc acagtaggga gtttccgtac 300

acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 333

<210> 115

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 115

gaggttcagc tgcagcagtc tgtggcagag cttgtgaggc caggggcctc agtcaagttg 60

tcctgcacag cttctgactt caatattaaa aacacctata ttcactgggt gaaacagagg 120

cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg tgaatggtaa tactaaatat 180

gccccgaagt tccaggacaa ggccactata attgtagaca catattccaa cacagcctat 240

ctgcagctca gcagcctggc atctgaggac actgccgtct attactgtgc tagatggccc 300

ataactacga ttgtagccac ggactggtac ttcgatgtct ggggcacagg gaccacggtc 360

accgtctcct ca 372

<210> 116

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 116

gatgttttga tgacccaaac tcaactcgcc ctgcctgtca ggcttggaga gcaagcctcc 60

atttcttgca gatctagtca gagcattgta aatagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagattttac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210> 117

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 117

caggtccagt tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaagata 60

tcctgcaagg cttctggata cgccttcact aactactggc taggttgggt aaagcagagg 120

cctggacatg gacttgagtg gattggagat atttaccctg gaagtggtaa tacttactac 180

aatgagaagt tcaagggcaa agccacactg actgcagaca aatcctcgag cacagcctat 240

atgcagctca gtagcctgac atctgaggac tctgctgtct ttttctgtgc agcttacctc 300

tatgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca 348

<210> 118

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 118

caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60

ataacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggttccagca gaagccaggc 120

acttctccca aactctggat ttatagcgca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180

ttcagtggca gtggatctgg gacctcttac tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa 240

gatgctgcca cttattactg ccagcaaagg ggtagttacc cattcacgtt cggctcgggg 300

acaaagttgg aaataaaa 318

<210> 119

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 119

caggtgcaat tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcgcagag cctgtccatt 60

acctgcactg tctctgggct ctcattaaac agccatgata taagctggat tcgccagcca 120

ccaggaaagg gtctggagtg gcttggagta atatggagtg gtggaggcac aaaatataat 180

tcagctttca tgtccagact gagcatcagc aaggacaact ccaagagcca agtgttctta 240

aaaatgaaca gtctgcacac tgatgacaca gccatatatt actgtgtaag aaccccctct 300

atgattactt actctgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360

<210> 120

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 120

gaaattgtac tcacccagtc tccagcactc atggctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60

atcacctgca gtgtcagctc aagtataagt tcccgcaact tacactggta ccagcagaag 120

tcacaaacct cccccaaagc ctggattcat gccacatcca acctggcttc tggagtccct 180

gttcgcttca gtggcagtgg atctgggacc tcttattctc tcacaatcag cagcatggag 240

gctgaagatg ctgccactta ttactgtcaa cagtggagta gttacccact cacgttcggc 300

tcggggacaa agttggaaat aaaa 324

<210> 121

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 121

gaggtccagc ttcagcagtc aggacctgag ctggtgaaat ccggggcctc agtgaagata 60

tcctgcaagg cttctggata cacattcact gaccacaaaa tgcactgggt gaagcagagc 120

catggaaaga gccttgagtg gattggatat atttctcctt acaatggtgg cactggctac 180

aatcagaagt tcaagagcaa ggtcacattg actgtagaca tatcctccag tacagcctat 240

atggaactcc gcagcctgac atctgaagac tctgcagtct attactgtgc aagatggggt 300

ttctacgatg taatggactc ctggggtcaa gggacctcag tcaccgtctc ctca 354

<210> 122

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 122

gatgttttgt tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gaccattgtt catattattg gagacaccta tttagagtgg 120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggagcaggga cagatttcac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300

cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210> 123

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 123

gaagtgaaac tggtggagtc tgggggaggt ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacttttagt acttatacca tgtcttgggt tcgccagact 120

ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg gtggtggtag cacctcctat 180

ccagacactg taaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctttac 240

ctacaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acggccattt attattgtac aagacacgtt 300

acggtagttg agaattctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360

<210> 124

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 124

gacatcttgc tgactcagtc tccagacatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60

ttctcctgca gggccagcca gagcattggc acaagcatac actggtatca gcaaagaacg 120

aatggttctc caaggcttct cataaaatat gtttctgagt ctttctctgg gaccccttcc 180

agatttagtg gcagtggatc agggacagct tttactctta ccatcaacag tgtggagtct 240

gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa actcatagct ggccgtggac gttcggtgga 300

ggcaccaagc tggagatcaa a 321

<210> 125

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 125

gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60

tcctgcacag cttctggctt caacattaaa aactactata tgcactgggt gaagcagagg 120

actgaagagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg aggatggtga aactaaatat 180

gccccgaaat tccaggccaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240

ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct atttctgtgc tagaaagggc 300

tactatggta actacggggc ctggtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360

tctgca 366

<210> 126

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 126

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 60

atcacatgtc gagcaagtga agatctttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacattct tagcagatgg tgtgccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct 240

gaagattttg ggaattatta ctgtcaacat ttttggggta ctcctccgac gttcggtgga 300

ggcaccaagc tggaaatcaa a 321

<210> 127

<211> 342

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 127

caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag cttgtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aggcactgga taacctgggt gaagcagagg 120

cctggacaag gccttgagtg gattggagat atttttcctg gtagtggtag tattaactac 180

aatgagaagt tcaagagcga ggccacactg actgtagaaa aatcctccag cacagcctac 240

atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaggggac 300

gtcgatgtct ggggcacagg gaccacggtc accgtctcct ca 342

<210> 128

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 128

gacatccaga tgacccagtc tccatcgtcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60

ctcacttgtc gggcaagtca ggaaattcgt ggttacttaa gctggcttca gcagaaacca 120

aatggaacta ttaaacgcct gatctacgcc gcatccactt tagattctgg tgtcccaaaa 180

aggttcagtg ccactaggtc tgggtcagat ttttctctca ccatcagcag ccttgagtct 240

gaagattttg cagactatta ctgtctccaa tatgctagtt atccattcac gttcggctcg 300

gggacaaagt tggaaataaa a 321

<210> 129

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 129

gaagtgcagt tggtggagtc tgggggaggc ttagtgacgc ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgtcg cctctggatt cgctttcagt acctatggca tgtcttgggt tcgccagact 120

ccggagagga ggctggagtg ggtcgcatat attagtggtg gtggtggaag tatctactat 180

ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa catcctgtac 240

cttcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt atcactgtac cagacacccc 300

gatttattac tacggtatga ttatgcattg gaccactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 360

gtctcctca 369

<210> 130

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 130

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60

atcacatgtc gagcaagtga aaatattcac atttatttag catggtatca gcagaaacag 120

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat ggaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaatac cctgcagcct 240

gaagattttg ggaattatta ctgtcaacat ttttggaata gtacgtggac gttcggtgga 300

ggcaccaagc tggaaatcaa a 321

<210> 131

<211> 456

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 131

gccgtccagg gccccgagga gaccgtgacc caggactgtc tccagctcat cgctgactcc 60

gaaaccccca ccatccagaa gggcagctac accttcgtgc cttggctgct gagcttcaag 120

agaggcagcg ccctggagga gaaggagaac aagattctcg tgaaggagac cggctacttc 180

ttcatctacg gccaggtgct ctacaccgac aagacctatg ccatgggaca cctcatccag 240

aggaagaagg tccacgtctt cggcgacgag ctcagcctgg tcaccctgtt caggtgcatc 300

cagaatatgc ccgagaccct gcccaataac agctgctaca gcgctggcat tgccaaactg 360

gaggagggcg acgaactgca gctcgccatc cccagggaga acgcccagat cagcctcgac 420

ggcgatgtga ccttcttcgg cgccctcaag ctcctg 456

<210> 132

<211> 858

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 132

atggacgact ctacagagcg cgagcagtct aggctcacat catgtctcaa gaagcgggaa 60

gagatgaagc tcaaagaatg cgtcagcatc ctgcctagaa aggaatcacc ttccgtccgg 120

tcttccaagg atggaaagct gctcgccgct acactgctcc tcgcactcct gtcttgttgc 180

ctcacagtcg tgtcatttta ccaggtggcc gcactacagg gcgatctggc atcactgcgc 240

gcagagctac aaggccacca cgctgagaag ctcccagccg gggctggggc accaaaggcc 300

ggactcgaag aggcacccgc agtgaccgcc ggactgaaaa tttttgagcc acccgccccc 360

ggcgagggca attctagcca gaactcacac aacaagagag cagtgcaggg ccccgaggaa 420

accgtgacac aggattgtct ccagctgatt gccgatagcg agaccccaac tattcagaag 480

ggatcataca catttgtgcc ttggctcctg agcttcaagc gcgggtccgc cttagaggaa 540

aaggaaaata agattctggt caaagaaacc gggtacttct ttatctacgg acaggtcctg 600

tacaccgata agacatacgc tatgggacac ctgatccagc ggaagaaggt gcacgtcttc 660

ggcgatgagc tatctctggt gactctgttt cggtgtattc agaatatgcc tgagaccctc 720

cctaacaatt catgttactc cgctggaatt gctaagctcg aagaggggga tgaactacag 780

ctggctatcc cacgcgagaa cgcacagatt agcctcgacg gcgacgtgac tttcttcggc 840

gccctcaagc tgctgtga 858

<210> 133

<211> 858

<212> DNA

<213> Macaca fascicularis

<400> 133

atggacgact ctacagagcg cgagcagtca cggctgacat catgtctcaa gaagagagaa 60

gagatgaagc tgaaagaatg cgtctcaatt ctgccacaga aggaatcccc atccgtgcgg 120

tctagcaagg atagaaagct cctcgcagcc gccctgctgc tcgccctgct gtcatgttgc 180

ctgatggtcg tgtccttcta ccaggtggcc gctctccagg gcgatctggc atcactgcgc 240

gccgagttgc agtcccacca cgcagagaag ctcccagccc gagcacgggc cccaaaggca 300

ggcctcggcg aggcacccgc agtgaccgcc ggactcaaaa tctttgagcc acccgcacct 360

ggcgagggaa attctagcca gtcttcacac aataagcgcg ctatccaggg ggccgacgag 420

accgtgattc aggattgtct ccagctgatt gccgatagcg agaccccaac tattcagaag 480

ggatcataca catttgtgcc ttggctcctg agcttcaagc gcgggtccgc cttagaggaa 540

aaggaaaata agattctggt caaagaaacc gggtacttct ttatctacgg acaggtcctg 600

tacaccgata agacatacgc tatgggacac ctgatccagc ggaagaaggt gcacgtcttc 660

ggcgatgagc tatctctggt gactctgttt cggtgtattc agaatatgcc tgagaccctc 720

cctaacaatt catgttactc cgctggaatt gctaagctcg aagaggggga tgaactacag 780

ctggctatcc cacgcgagaa cgcacagatt agcctcgacg gcgacgtgac tttcttcggc 840

gccctcaagc tgctgtga 858

<210> 134

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> pTT-EF1a-F

<400> 134

gccctttttg agtttgga 18

<210> 135

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> pSV40

<400> 135

cactgcattc tagttgtg 18

<210> 136

<211> 109

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> VH1-18

<400> 136

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

100 105

<210> 137

<211> 104

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> B3

<400> 137

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100

<210> 138

<211> 109

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> VH3-7

<400> 138

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

100 105

<210> 139

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> A10

<400> 139

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu

85 90 95

Ile Lys

<210> 140

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 140

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 141

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 141

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 142

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 142

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 143

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 143

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 144

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 144

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 145

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 145

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 146

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 146

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Ile Thr Thr Leu Val Ala Thr Asp Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 147

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 147

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Lys Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 148

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 148

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Lys Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 149

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 149

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 150

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 150

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 151

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 151

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 152

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 152

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Tyr Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg His Val Thr Val Val Glu Asn Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 153

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 153

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 154

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 154

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 155

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 155

Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 156

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 156

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 157

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 157

Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Glu Ser Phe Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 158

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 158

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gcggcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatgggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggccg cgtgaccatg acaaccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 159

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 159

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gcggcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatgggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggccg cgtgaccatg acagccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 160

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 160

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gcggcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatgggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggccg cgtgaccctg acagccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 161

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 161

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gcggcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatcggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggccg cgtgaccctg acagccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 162

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 162

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gaagcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatcggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggccg cgtgaccctg acagccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 163

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 163

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gaagcaggcc 120

ccaggacagg gactcgagtg gatcggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagccgata caagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt actattgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 164

<211> 375

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 164

gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc caggcgcaag cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcacc agctacggca tctcttgggt gaagcaggcc 120

ccaggacagg cactcgagtg gatcggagaa atctaccccc ggagcggcaa cacctactac 180

aacgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg acagccgata agagcaccag caccgcctac 240

atggagctga gaagcctgag gagcgacgac acagccgtgt acttttgcgc caggagcgga 300

cctatcacca cactggtggc caccgactac ggcatggact attggggcca gggaaccaca 360

gtgaccgtgt ctagc 375

<210> 165

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 165

gacatcgtga tgacccagag cccagacagc ctggcagtgt ctctgggaga gagagccaca 60

atcaattgcc gggccagcaa gagcgtgtcc accagcagct acagctacat gcattggtat 120

cagcagaaac caggccagcc tcctaagctg ctgatcaagt tcgccagcaa cctggagagc 180

ggcgtgccag atagattcag cggaagcgga agcggcaccg atttcaccct gaccatcagc 240

tctctgcagg ccgaagacgt ggccgtgtat tattgccagc acagccggga gttcccctac 300

acatttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aag 333

<210> 166

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 166

gacatcgtgc tgacccagag cccagacagc ctggcagtgt ctctgggaga gagagccaca 60

atcaattgcc gggccagcaa gagcgtgtcc accagcagct acagctacat gcattggtat 120

cagcagaaac caggccagcc tcctaagctg ctgatcaagt tcgccagcaa cctggagagc 180

ggcgtgccag atagattcag cggaagcgga agcggcaccg atttcaccct gaccatcagc 240

tctctgcagg ccgaagacgt ggccgtgtat tattgccagc acagccggga gttcccctac 300

acatttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aag 333

<210> 167

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 167

<400> 16

gaggtgcagc tggtggaatc aggaggagga ctggtgcagc caggaggatc tctgagactg 60

tcttgcgccg ccagcggctt tacattcagc acctacacca tgtcttgggt ccggcaggct 120

ccaggcaaag gactcgagtg ggtggcctac atcagctacg gcggcggctc tacaagctac 180

ccagacaccg tgaagggcag gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actattgcgc taggcacgtg 300

accgtggtgg agaacagcat ggactattgg ggccagggaa ccaccgtgac agtgtcttct 360

<210> 168

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 168

gaggtgcagc tggtggaatc aggaggagga ctggtgcagc caggaggatc tctgagactg 60

tcttgcgccg ccagcggctt tacattcagc acctacacca tgtcttgggt ccggcaggct 120

ccaggcaaag gactcgagtg ggtggcctac atcagctacg gcggcggctc tacaagctac 180

ccagacaccg tgaagggcag gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actattgcac caggcacgtg 300

accgtggtgg agaacagcat ggactattgg ggccagggaa ccaccgtgac agtgtcttct 360

<210> 169

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 169

gaggtgcagc tggtggaatc aggaggagga ctggtgcagc caggaggatc tctgagactg 60

tcttgcgccg ccagcggctt tacattcagc acctacacca tgtcttgggt ccggcaggct 120

ccaggcaaaa gactcgagtg ggtggcctac atcagctacg gcggcggctc tacaagctac 180

ccagacaccg tgaagggcag gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actattgcac caggcacgtg 300

accgtggtgg agaacagcat ggactattgg ggccagggaa ccaccgtgac agtgtcttct 360

<210> 170

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 170

gaggtgcagc tggtggaatc aggaggagga ctggtgcagc caggaggatc tctgagactg 60

tcttgcgccg ccagcggctt tacattcagc acctacacca tgtcttgggt ccggcaggct 120

ccagagaaga ggctcgagtg ggtggcctac atcagctacg gcggcggctc tacaagctac 180

ccagacaccg tgaagggcag gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actattgcac aaggcacgtg 300

accgtggtgg agaacagcat ggactattgg ggccagggaa ccaccgtgac agtgtcttct 360

<210> 171

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 171

gagatcgtgc tgacccagag cccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaggtcacc 60

atcacttgca gagccagcca gagcatcggc accagcatcc attggtatca gcagaagccc 120

gaccagagcc ctaagctgct gatcaagtac gtgtccgaga gctttagcgg cgtgcctagc 180

agattcagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggca 240

gaggacgcag ccacctacta ttgccagcag acccactctt ggccttggac cttcggagga 300

ggcaccaagg tggagatcaa g 321

<210> 172

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 172

gagatcgtgc tgacccagag cccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaggtcacc 60

atcacttgca gagccagcca gagcatcggc accagcatcc attggtatca gcagaagccc 120

gaccagagcc ctaagctgct gatcaagtac gtgtccgaga gctttagcgg cacacctagc 180

agattcagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggca 240

gaggacgcag ccacctacta ttgccagcag acccactctt ggccttggac cttcggagga 300

ggcaccaagg tggagatcaa g 321

<210> 173

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 173

gacatcttgc tgacccagag cccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaggtcacc 60

atcacttgca gagccagcca gagcatcggc accagcatcc attggtatca gcagaagccc 120

gaccagagcc ctaagctgct gatcaagtac gtgtccgaga gctttagcgg cacccctagc 180

agattcagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggca 240

gaggacgcag ccacctacta ttgccagcag acccactctt ggccttggac cttcggagga 300

ggcaccaagg tggagatcaa g 321

<210> 174

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 174

gagatcgtgc tgacccagag cccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaggtcacc 60

atcacttgca gagccagcca gagcatcggc accagcatcc attggtatca gcagaagacc 120

gaccagagcc ctaagctgct gatcaagtac gtgtccgaga gctttagcgg cacccctagc 180

agattcagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggca 240

gaggacgcag ccacctacta ttgccagcag acccactctt ggccttggac cttcggagga 300

ggcaccaagg tggagatcaa g 321

<210> 175

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 175

gacatcttgc tgacccagag cccagacttc cagtcagtga cccccaagga gaaggtcacc 60

atcacttgca gagccagcca gagcatcggc accagcatcc attggtatca gcagaagacc 120

gaccagagcc ctaagctgct gatcaagtac gtgtccgaga gctttagcgg cacccctagc 180

agattcagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcaacag cctggaggca 240

gaggacgcag ccacctacta ttgccagcag acccactctt ggccttggac cttcggagga 300

ggcaccaagg tggagatcaa g 321

<210> 176

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-1G11-VH-正向引物

<400> 176

gattcttaag ggtgtccagt gcgaggtgca gctggtggag tc 42

<210> 177

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-1G11-VH-反向引物

<400> 177

gatgggccct tggtcgaagc tgaggagacg gtgaccgtgg t 41

<210> 178

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-1G11-VL-正向引物

<400> 178

tggttccccg gctcgcgatg cgaaattgtg atgactcagt ctc 43

<210> 179

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-1G11-VL-反向引物

<400> 179

cagatggtgc agccaccgta cgtttgatct ccaccttggt ccctc 45

<210> 180

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L9G7-VH-正向引物

<400> 180

gattcttaag ggtgtccagt gccaaatcca gctggtacaa tctg 44

<210> 181

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L9G7-VH-反向引物

<400> 181

gatgggccct tggtcgaagc tgaggagacg gtgaccgtgg tc 42

<210> 182

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L9G7-VL-正向引物

<400> 182

tggttccccg gctcgcgatg cgaaattgtg ttgacgcagt ctcca 45

<210> 183

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L9G7-VL-反向引物

<400> 183

cagatggtgc agccaccgta cgtttgatct ccaccttggt ccctc 45

<210> 184

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L1D12-VH-正向引物

<400> 184

gattcttaag ggtgtccagt gccaggtcca gctggtgcag tctg 44

<210> 185

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L1D12-VH-反向引物

<400> 185

gatgggccct tggtcgaagc tgaggagacg gtgaccgtgg tc 42

<210> 186

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L1D12-VL-正向引物

<400> 186

actgcacagg gtctctctcc tcttctgagc tgactcagga c 41

<210> 187

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> L1D12-VL-反向引物

<400> 187

gagggggcag ccttgggttg acctaggacg gtcaacttgg tccct 45

Claims

1.一种BLyS抗体，其特征在于，其包括以下互补决定区CDR：重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:34所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:35所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:36所示；

所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:38所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:39所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:40所示。

2.如权利要求1所述的BLyS抗体，其特征在于，其还包括构架区，所述构架区包括重链构架区和轻链构架区。

3.如权利要求2所述的BLyS抗体，其特征在于，所述重链构架区为人或鼠抗体重链构架区，所述轻链构架区为人或鼠抗体轻链构架区。

4.如权利要求3所述的BLyS抗体，其特征在于，所述重链构架区为人抗体重链构架区，且所述轻链构架区为人抗体轻链构架区。

5.如权利要求4所述的BLyS抗体，其特征在于，所述重链架构区为人种系抗体重链V_H外显子的V_H1-18、V_H外显子的V_H3-7或者J_H外显子的J_H-6，且所述轻链架构区为人种系抗体轻链V_K外显子的B3、J_K外显子的J_K-4或者V_K外显子的A10。

6.如权利要求2所述的BLyS抗体，其特征在于，其包括所述CDR和构架区组成的BLyS抗体的重链可变区和BLyS抗体的轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQID NO:33所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:37所示。

7.如权利要求1所述的BLyS抗体，其特征在于，所述的BLyS抗体还包括抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区。

8.如权利要求7所述的BLyS抗体，其特征在于，所述的抗体重链恒定区为人源或小鼠源抗体重链恒定区；所述的抗体轻链恒定区为人源或小鼠源抗体轻链恒定区。

9.如权利要求8所述的BLyS抗体，其特征在于，所述的抗体重链恒定区为人源抗体重链恒定区；所述的抗体轻链恒定区为人源抗体轻链恒定区。

10.如权利要求1～6任一项所述的BLyS抗体，其特征在于，所述的BLyS抗体为单克隆抗体、抗原抗体结合域蛋白质片段、多特异性抗体或单链抗体。

11.如权利要求10所述的BLyS抗体，其特征在于，所述的BLyS抗体是BLyS抗体的抗体全长蛋白或双特异性抗体。

12.一种核酸，其特征在于，其编码如权利要求1～11中任一项所述的BLyS抗体。

13.如权利要求12所述的核酸，其特征在于，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:113所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQID NO:114所示。

14.一种包含如权利要求12或13中所述的核酸的重组表达载体。

15.一种包含如权利要求14所述的重组表达载体的重组表达转化体。

16.一种BLyS抗体的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：培养如权利要求15所述的重组表达转化体，从培养物中获得BLyS抗体。

17.一种检测过表达BLyS蛋白的细胞的组合物，其特征在于，其包括如权利要求1～11中任一项所述的BLyS抗体作为活性成分。

18.一种药物组合物，其特征在于，其包括如权利要求1～11中任一项所述的BLyS抗体作为活性成分和药学可接受的载体。

19.如权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的如权利要求1～11中任一项所述的BLyS抗体和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

20.一种如权利要求1～11中任一项所述的BLyS抗体或者如权利要求18或19所述的药物组合物在制备治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中的应用；所述的与BLyS表达或功能异常相关的疾病为自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。