CN107569689A - 包含金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种包含药学上可以接受的金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物及其在预防和治疗哺乳动物局部病变相关疾病中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种包含药学上可接受的金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物及其在防治哺乳动物局部病变相关疾病中的应用。
背景技术
药物是指药学上可接受的、具有一定疗效的活性物质。在本发明中,具有抗肿瘤活性的物质被简称为抗肿瘤物质。
以卫生当局批准的抗癌化疗药(有效抗肿瘤物质)为例,如阿霉素、顺铂、紫衫醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶等,它们用于肿瘤治疗时,在全身用药时显示出可以接受的有效性的同时、大剂量长时间的使用也产生安全性、抗药性问题。局部给药虽可以把有效性进一步提高(在30%以内),但伴随的局部副反应也是很严重的。此外,它们除了抗肿瘤(主活性)之外,都还有其它未被同等重视的治疗作用(次活性),例如对肿瘤以外的其它局部病变相关疾病有抗局部炎症、抗非瘤肿大、抗微生物感染等的报道,也存在类似安全性担忧。
抗癌化疗药以外的若干活性物质,也有报道其抗肿瘤活性的,但因未能满足临床有效性要求而未能得到广泛应用。例如,喹啉类化合物和青蒿素衍生物在临床上被用作抗疟药(主活性),非甾体抗炎化合物在临床上多被用作抗炎全身用药(主活性),活性色素在临床上被用作染色剂或光敏剂(主活性),然而它们虽不及上述抗癌化疗药、也有一定的抗肿瘤活性(次活性)。就这些次活性而言,它们又是低效药物。在其主活性的临床应用中的,这些药物通常有效性较高。而其次活性的临床应用没有被真正开发出来,要么是有效性根本提不高,要么是在提高剂量以提高有效性时副作用也明显增大,使得药效(有效性和安全性)不能达到与这些应用的现有临床药物有竞争优势的水平。
如何做到减量增效,是医药界一直在研究、然而成果不多的重大问题。一类研究致力于开发这些药物更高效或/和低毒的衍生物,例如多聚体、不同衍生物结合物、金属配(螯)合物等。另一类研究则致力于开发这些药物与其它化合物的组合物。
如同抗癌药的研究催生出很多抗肿瘤物质的报道,解偶联剂抗的研究也催生出很多解偶联活性物质的报道。目前以知的解偶联活性物质包括:酚类化合物、水杨酸类化合物、苯并咪唑类化合物、苯腙类化合物、和芳香胺类化合物。这些物质除了解偶联活性之外,通常还对多个靶点有医疗活性。
在临床上,金属化合物例如金属盐主要用于补充营养金属,例如含铁盐主要用于治疗缺铁性贫血。金属化合物对于局部病灶(例如肿瘤)的活动的影响较为复杂。以铁为例,当铁缺乏时,caspase信号通道被激活。但铁聚积过多时,又可导致ROS增加,可能造成细胞损害的后果。同时铁又与自由基的消除有关,有助于保护细胞免受过氧化物损伤。众多研究结果显示,机体中铁的储量与很多肿瘤的风险正相关,如直肠癌、肝癌、肾癌、肺癌及胃癌。
绝大多数药物均是以全身用药的形态开发出来的。当其被应用、犹其是局部给药应用时,不仅可能表现出完全不同的药效,而且金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的共用作用也髙度不确定,可能是拮抗作用、加和作用、增效作用。
目前局部病变相关疾病的治疗,主要是手术、放射线治疗和化疗。手术对身体造成伤害,对某些影响美观的分泌腺(例如乳腺和甲状腺)的伤害尤其让人沮丧。放射线治疗的副作用也非常明显。现有化疗基本上是全身用药,有很高的全身性副作用风险。例如,现有抗癌药在大范围内杀伤癌细胞的同时,也杀伤了大量正常细胞。一些用于局部处理的化疗剂正在发展之中。某些硬化剂(例如无水乙醇、尿素等)的使用多了起来。然而,这些硬化剂具有很高的局部刺激性且疗效不高。
发明内容
本发明的发明目的是开发一种与现有技术相比更为安全有效的药物组合物及其在治疗肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常中的应用。
根据本发明的一个方面,其提供一种包含药学上可以接受的金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物,其中所述金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质在该药物组合物中的相对量(w:w:w)为(0.02-2):(0.1-15):(0.1-15),优选为(0.1-2):(0.1-10):(0.1-12);所述抗肿瘤物质选自有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质及其组合。
在一个实施方案中,所述金属化合物是选自以下之一种或多种的金属盐:铁盐、铜盐、锌盐、锰盐、铝盐,优选为铁盐和铜盐,更优选为选自以下之一种或多种的亚铁盐:二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁。
在一个实施方案中,所述解偶联活性物质选自以下组之一种或多种:酚类化合物、水杨酸类化合物、苯并咪唑类化合物、苯腙类化合物、和芳香胺类化合物;优选为选自以下组之一种或多种:硝基酚化合物、氨基酚化合物和水杨酸类化合物;更优选为选自以下之一种或多种:2,4-二硝基苯酚、对乙酰氨基酚、水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、双香豆素及其衍生物。
在一个实施方案中,所述有效抗肿瘤物质是指在安全剂量内全身用药时可显示出有效抗肿瘤活性的物质,优选为选自以下的一种或多种:阿霉素、顺铂、紫衫醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟脲嘧啶及其衍生物。
在一个实施方案中,所述低效抗肿瘤物质是指在安全剂量内全身用药时未显示出有效抗肿瘤活性、但仍有一定活性的物质,优选选自以下组之一种或多种物质:喹啉类化合物、青蒿素衍生物和活性色素。
在一个实施方案中,所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种:奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物,优选为选自奎宁和奎宁衍生物,更优选为以下化合物之一种或多种:奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁。
在进一步的实施方案中,所述活性色素为选自以下之一种或多种:活体染料、光敏剂和有色化疗药物,优选为活体染料,更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。
在进一步的实施方案中,所述青蒿素衍生物包括青蒿素的酯类衍生物、醚类衍生物、肽类衍生物、二聚体衍生物、及多聚体衍生物等,优选青蒿琥酯(Artesμnate,ATS)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)、蒿甲醚(artemether)、蒿乙醚。
在进一步的实施方案中,所述药物组合物还可包含硬化剂和/或止痛剂。
在一个实施方案中,根据本发明的药物组合物为局部给药剂型,优选为以下剂型:靶区注射和/或灌注剂型、呼吸道给药剂型、表面给药剂型、粘膜给药剂型和腔道给药剂型。
在进一步的实施方案中,根据本发明的局部给药剂型为液体制剂、半固体制剂或者气体制剂的液体原液,其中所述金属化合物(例如铁盐,尤其是亚铁盐)的浓度为0.02-2%w/v,优选为0.05-1.5%w/v,更优选为0.1-1.2%w/v或0.1-1.6%w/v;解偶联活性物质的浓度为0.1-15%w/v,优选为0.1-1%w/v、0.1-8%w/v或2-10%w/v;而所述抗肿瘤物质中有效抗肿瘤物质的浓度为0.1-10%w/v,优选为0.2-6%w/v,低效抗肿瘤物质的浓度为1-15%w/v,优选为2-12%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述硝基酚化合物的浓度为0.1-1%w/v,优选0.3-1%w/v;所述水杨酸类化合物的浓度为1.5-15%w/v,优选3-15%w/v,更优选5-12%;和所述氨基酚化合物的浓度为2-10%w/v,优选4-8%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10%w/v、优选2-10%w/v、更优选3-8%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述活性色素的浓度可以为1-8%w/v、优选1.5-7%w/v、更优选2-6%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述青蒿素衍生物的浓度为1-6%w/v、优选2-5%w/v、更优选3-5%w/v。
在进一步的实施方案中,所述硬化剂优选为液体硬化剂,更优选醇类液体硬化剂,例如乙醇、丙二醇、液体PEG、丙三醇、异丙醇等,优选为选自以下组之一种或多种:乙醇、丙二醇、液体PEG。此时,这些醇类化合物既作为硬化剂,也可起到溶剂的作用,其浓度可以是55-95%v/v、优选60-80%v/v。如乙醇、丙二醇、液体PEG共用时,三者之间的浓度比(v/v:v/v:v/v)优选为(0.5-1):(0.5-1):(0.5-1)。
根据本发明的另一个方面,其还提供本发明的药物组合物在制备用于治疗局部病变相关疾病的药物中的应用,该局部病变例如包括肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常。
根据本发明的另一个方面,其还提供一种治疗局部病变相关疾病的方法,该局部病变例如包括肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常,该方法包括向由此需要的个体局部给药根据本发明的药物组合物。
根据本发明的实施方案与现有技术相比具有以下优点:与现有的手术和放射线治疗相比,显示出同样髙效却更加友好的“治疗-患者身体”关系(对身体扰动更小);与现有的全身化疗用药相比,可以在最小化的毒副作用下,显著性地提高疗效;与现有的局部化疗用药、尤其是硬化剂(例如无水乙醇)治疗相比,与病变周围组织间的相容性更高,且疗效更好;与现有技术中的金属盐和抗肿瘤物质的组合物相比,其不含药学上难以接受的物质,且通过使用最佳组合剂量使非甾体抗炎类物质的药效最大化、副作用最小化。此外,通过不同药理的药物的引入也产生了额外的协同作用(例如难能可贵的长效性),从而可以进一步提高治疗的安全性和有效性。此外,该组合物制作方便、成本便宜,有助于使难以承受高额费用的广大人群也享受到有效治疗。
以下将参考附图对本发明进行更为详细的说明。
附图说明
图1给出一个以人肝癌细胞HepG2抑制为模型的细胞实验结果,其中曲线A、曲线B和曲线C分别显示二氯化铁/二盐酸奎宁组合物组(A组)、二氯化铁/乙酰水杨酸组合物组(B组)和二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁组合物组(C组)的细胞增殖抑制。
图2给出以荷胰腺癌细胞裸鼠为模型的一个治疗实验结果,其中4条相对肿瘤增殖率曲线分别为瘤区注射0.6%二氯化铁/3.7%DNP(E组)、0.4%DNP/3%二盐酸奎宁组合物(F组)、0.6%二氯化铁/80mM二盐酸奎宁组合物(G组)、和0.6二氯化铁/0.4%DNP/3%二盐酸奎宁组合物(H组)。
图3给出一个以荷肝癌细胞裸鼠为模型的一个治疗实验结果,显示二氯化铁浓度和DNP浓度分别固定为0.6%和0.4%、而亚甲蓝浓度分别为0、0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%时所获得的抑瘤率曲线。
具体实施方式
在本发明中,除非另有说明,在室温下的液相化合物浓度以体积/体积百分比浓度(V/V%)表示,固相化合物浓度以重量/体积百分比浓度(W/V%)表示。
本发明的包含金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物,在以下叙述中也被简写为金属盐/解偶联活性物质/抗肿瘤物质组合物(书写次序可有不同)。组合物中各组分的浓度,也可以被冠在组分之前。例如0.4%二氯化铁/5%水扬酸/3%二盐酸奎宁是指一个三组分组合物,其中二氯化铁、水扬酸和二盐酸奎宁的浓度分别为0.4%、5%和3%。其它多组分组合物的简写方式以此类推。
根据本发明的一个方面,其提供一种包含药学上可以接受的金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物,其中所述金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质在该药物组合物中的相对量(w:w:w)为(0.02-2):(0.1-15):(0.1-15),优选为(0.1-2):(0.1-10):(0.1-12);所述抗肿瘤物质选自有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质及其组合。本发明的发明人对于包含上述三种组份的药物组合物进行了深入的研究,惊奇地发现具有上述比例的药物组合物能够在抑制肿瘤方面具有出人意料的协同作用。
在本发明的范围中,术语“金属化合物”包括包含相应金属的金属盐和有机金属化合物(其不包括金属与有机酸形成的盐),其中所述金属例如可以是铁、铜、镁、锌、锰、铝和钙中的一种或多种。该金属化合物优选为选自以下之一种或多种的金属盐:铁盐、铜盐、镁盐、锌盐、锰盐、铝盐和钙盐,优选为铁盐和铜盐。
所述盐可以是所述金属与无机酸或有机酸形成的盐。所述无机酸和有机酸例如包括硫酸、硝酸、磷酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、乙酸、苯甲酸、苯磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、环己氨磺酸、乙磺酸盐、甲酸、琥珀酸、蛋白琥珀酸、胆酸、延胡索酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、羟乙基磺酸、乳酸、富马酸、苹果酸、顺丁烯二酸、丙二酸、甲磺酸、甲基硫酸、烟酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、焦谷氨酸、糖二酸、硬脂酸、丁二酸、单宁酸、酒石酸、甲苯磺酸和三氟乙酸等。
具体对于铁盐而言,其包括铁(III)离子盐和亚铁(II)离子盐,其总称为铁盐。铁盐包括任何药物学上可以接受的铁盐,可以是铁离子或亚铁离子与上述无机酸或有机酸形成的盐。例如,亚铁离子盐包括二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁等。铁(III)离子盐包括例如枸橼酸铁铵、右旋糖酐铁、蛋白琥珀酸铁。在根据本发明的药物组合物中,所述金属化合物优选为亚铁离子盐,更优选为选自以下之一种或多种的亚铁盐:二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁。
所述金属化合物还包括金属有机化合物,例如转铁蛋白、含铁血红素、氨基酸络合铁、多糖铁等。
在本发明的范围中,术语“解偶联活性物质”是指具有解偶联活性的化合物。所述解偶联活性是指一种抑制偶联磷酸化反应的活性。当其解偶联活性足够高时,体现为可解除氧化和磷酸化的偶联作用,或可解除跨线粒体内膜或叶绿体类囊体膜的质子动力。解偶联活性物质可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括酚类化合物、水杨酸类化合物、苯并咪唑类化合物、苯腙类化合物、芳香胺类化合物等,优选酚类化合物和水杨酸类化合物。
在本发明的范围中,术语“酚类化合物”是指其化学结构中含有酚基团的化合物。所述酚类化合物可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可以是包括例如硝基酚化合物、氯酚化合物和氨基酚化合物。所述硝基酚化合物可以包括例如2,4-二硝基苯酚(dinitrophenol,本发明中简记作DNP)、间硝基苯酚、邻硝基苯酚、等和它们的衍生物。DNP衍生物可以是包括例如2,4-二硝基-1-萘酚(玛蒂乌斯黄)、4,6-二硝基-邻-甲酚(维多利亚黄)、酚类氟姜黄色素衍生物等。所述氯酚类解偶联剂可以是包括例如2,4,5-三氯苯酚、3,3’,4’,5-四氯水杨酰苯胺(TCS)等和它们的衍生物。所述氨基酚类解偶联剂可以是包括例如对乙酰氨基酚及其衍生物。
在根据本发明的药物组合物中,所述酚类化合物优选为选自硝基酚化合物和氨基酚化合物,更优选为选自以下化合物之一种或多种:2,4-二硝基苯酚、间硝基苯酚、对乙酰氨基酚及其衍生物。
在本发明的范围中,术语“水杨酸类化合物”是指水杨酸及其衍生物。所述水杨酸(Salicylic acid)的化学名为2-羟基苯甲酸。所述水杨酸衍生物可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可以是包括例如含金属化合物的水杨酸衍生物和不含金属化合物的水杨酸衍生物。前者可以是包括例如水杨酸钠、水杨酸镁、水杨酸锌、金属元素络合物(例如阿斯匹林铜)等,后者可以是包括例如乙酰水杨酸(Aspirin阿斯匹林)、赖氨匹林、二氟苯水杨酸、氨基水杨酸、对氨基水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸、水杨酰苯胺、邻乙氧基苯酰胺、水杨酸苯酯、水杨酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、双水杨酸酯、双香豆素和它们的药物学上可接受的衍生物。以其中的阿斯匹林为例,水杨酸衍生物可以是包括例如其单一衍生物(例如一氧化氮阿司匹林、硫化氢阿司匹林等)、两种衍生物形成的衍生物(例如一氧化氮阿司匹林和硫化氢阿司匹林形成的一氧化氮硫化氢(NOSH)阿司匹林)。
本发明的组合物中,解偶联活性物质优选为选自以下组之一种或多种:硝基酚化合物、氨基酚化合物和水杨酸类化合物,更优选为选自以下之一种或多种:2,4-二硝基苯酚、对乙酰氨基酚、水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、双香豆素及其衍生物。
在本发明的范围中,“有效抗肿瘤物质”是指在安全剂量内全身用药时可显示出有效抗肿瘤活性(例如动物实验中的抑瘤率在40%以上)的物质,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如包括以下之一种或多种:阿霉素、顺铂、紫衫醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶及其衍生物。
术语“低效抗肿瘤物质”是指在安全剂量内全身用药时未显示出有效抗肿瘤活性、但仍有一定活性(例如动物实验中的抑瘤率在5-40%)的物质。在本发明的一个实施方案中,该低效抗肿瘤物质为选自以下组之一种或多种物质:喹啉类化合物、青蒿素衍生物和活性色素。
在本发明的范围中,术语“喹啉类化合物”是指药学上可以接受的含有喹啉环的喹啉衍生物,例如包括氯喹(chloroquine)、羟氯喹啉、氨甲喹、氨酚喹、奎宁、硝喹、哌喹、伯氨喹(primaquine)、扑疟喹、戊烷喹及其异构体和药物学上可接受的盐,其中优选为奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和药物学上可接受的盐,尤其是奎宁及其异构体和药物学上可接受的盐。
喹啉类化合物的药物学上可接受的盐包括酸加成盐,如无机酸加成盐和有机酸加成盐。无机酸加成盐的例子包括但不限于:氢卤酸盐(如盐酸盐,例如盐酸奎宁)、氢溴酸盐、氢碘酸盐、二盐酸盐(例如二盐酸奎宁)、二氢溴酸盐、二氢碘酸盐)、硫酸氢盐、硫酸盐、磷酸盐(例如磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸伯氨喹)等。有机酸加成盐的例子包括但不限于:碳酸氢盐或碳酸盐、乙基碳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、枸缘酸盐或单宁酸盐。
对于奎宁而言,其异构体例如可以是奎尼丁、辛可宁及辛可尼丁,其盐例如可以是盐酸奎宁、二盐酸奎宁、硫酸奎宁等。
上述喹啉类化合物可单独使用,也可组合使用,例如盐酸奎宁和其它喹啉衍生物的组合、二盐酸奎宁和其它喹啉衍生物的组合物、伯氨喹和其它喹啉衍生物的组合物、氯喹和其它喹啉衍生物的组合物。
根据本发明,所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种:奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物,优选为选自奎宁和奎宁衍生物,更优选为以下化合物之一种或多种:奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁。
在本发明的范围中,术语“青蒿素衍生物”是指青蒿素的衍生物。青蒿素(artemisinin,ART)是从菊科植物黄花蒿中提取的一种含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物,其分子式为C15H22O5。所述青蒿素衍生物可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可以是包括青蒿素的酯类衍生物、醚类衍生物、肽类衍生物、二聚体衍生物、及多聚体衍生物等,优选青蒿琥酯(Artesμnate,ATS)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)、蒿甲醚(artemether)、蒿乙醚等。
在本发明的范围中,术语“活体染料”是指局部给药时能够使靶区内的结构上色、但其副作用又在药学上可以接受的范围之内的有机物。所述活体染料可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以包括以下之一种或多种有机染料及其衍生物:亚甲蓝(包括其水合物)、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、台盼蓝、碱性蓝、伊红、碱性品红、结晶紫、龙胆紫、中性红、詹纳斯绿B、番红等。以亚甲蓝为例,其衍生物通常也是染料,例如1,9-二甲基亚甲蓝、1-甲基亚甲蓝等。
在本发明的范围中,术语“光敏剂”是指在一定波长的光作用下可产生光动力效应而形成治疗作用的物质,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括以下之一种或多种:混合卟啉类光敏剂、卟啉类化合物(例如卟啉、卟吩、红紫素、内源性卟啉)及其衍生物、酞菁类化合物、菌绿素类化合物、稠环醌类化合物、苯并卟啉衍生物、5-氨基酮戊酸、二氢卟吩类化合物等。
在本发明的范围中,术语“有色化疗药物”是指可被用作化疗药物的有色物质,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括以下之一种或多种:硝基酚化合物、黄酮类化合物(例如花青素、染料木黄酮等)、姜黄素衍生物、异己烯基萘醌类化合物(例如紫草素类)等。
有的活性色素,例如亚甲兰,既是活体染料、光敏剂,又是有色化疗药物。
在根据本发明的药物组合物中,所述活性色素优选为选自活体染料,更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。
在进一步的实施方案中,根据本发明的药物组合物还可包含硬化剂和/或止痛剂。
在本发明的范围中,术语“硬化剂”是指可引起局部组织产生无菌性炎症,致炎组织在生理修复的过程中不断被纤维化,最终使局部病变组织坏死、缩小和纤维化的化学制剂。其例如可以是液体硬化剂和固体硬化剂,后者例如包括以下之一种或多种:聚桂醇、鱼肝油酸钠、乙醇胺油酸酯、聚多卡醇、尿素、硫酸钠、平阳霉素、博来霉素等。
在本发明的范围内,术语“醇类液体硬化剂”是指在常温下处于液态的具有硬化剂性质的醇类化合物。众所周知,很多醇类物质都具有硬化剂的性质。醇类液体硬化剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如包括以下之一种或多种:乙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、液体聚乙二醇(本发明中简称PEG),优选为选自以下組之一种或多种:乙醇、丙二醇、液体聚乙二醇。醇类液体硬化剂在很多情况下可以起到溶剂的作用,但在局部给药和高浓度的条件下,其硬化剂作用对药理的影响更大。例如,乙醇正在成为肿瘤、尤其是非恶性肿瘤治疗中最常用的硬化剂之一。
在根据本发明的药物组合物中,醇类液体硬化剂的含量例如可以是55-95%v/v,优选60-80%v/v,而聚桂醇、鱼肝油酸钠、乙醇胺油酸酯、聚多卡醇、平阳霉素和博来霉素的浓度可以分别为0.5-3.0%,硫酸钠的浓度为5-30%,尿素的浓度为10-40%。
所述止痛剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,以减轻患者的疼痛感,例如苯甲醇、盐酸普鲁卡因、三氯叔丁醇、盐酸利多卡等。如果存在,止痛剂的浓度例如可以是0.1-3%(重量)。例如苯甲醇的浓度可以为0.1-3%,盐酸普鲁卡因、三氯叔丁醇、盐酸利多卡的浓度可以分别为0.1-2%。
在进一步的实施方案中,根据本发明的药物组合物还可包含用以增加药物活性成分药效的免疫佐剂。所述免疫佐剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,加入它以促进患病区内相关的有益于治疗肿瘤的抗原的活动,其例如可以是无机佐剂,如氢氧化铝、明矾等;微生物及其产物如分枝杆菌(结核杆菌、卡介苗)、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物(胞壁酰二肽)等;合成佐剂,如人工合成的双链多聚核苷酸(双链多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、异丙肌苷等;油剂,如费氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等;免疫刺激剂(卡介苗、棒状杆菌、内毒素、海藻糖、胸腺肽、OK432等);细胞因子,如干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、集落刺激因子、趋化因子、胸腺素等;异种抗原,如灭活链球菌、人红细胞膜抗原、肿瘤浸润淋巴细胞、肿瘤疫苗等。如果存在,免疫佐剂的浓度例如为0.01-1%(重量)。
本发明的组合物,还可以任选包含其他治疗药物。所述其他治疗药物可以是本领域技术人员已知的任意合适者,加入它有利于进一步提高人或动物患者的治疗水平,例如提高药效、或者改善这些其他治疗药物的抗药性等。
在根据本发明的药物组合物中,其包含药物学上可接受的载体或赋形剂。所述载体或赋形剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可例如包括以下之一种或多种:分散介质、防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、增粘剂、用于调节渗透压的盐和缓冲剂。所述增粘剂例如为羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯毗咯烷酮或明胶。所述增溶剂例如为葡甲胺、二甲基亚砜、甲酰胺、Tween80。所述防腐剂是例如抗氧化剂例(如抗坏血酸)或杀微生物剂(如山梨酸或苯甲酸)。
根据本发明的药物组合物可以是固体制剂、半固体制剂、液体制剂和气态制剂的剂型。所述制剂或剂型包括但不限于粉末剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、混悬剂、溶液剂、酏剂、糖浆剂。本领域技术人员会理解,根据所需剂量和药代动力学参数,可将本发明的化合物制成不同的制剂。更具体而言,本发明的药物组合物可以是注射剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片、贴膜剂、栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂。
根据本发明的药物组合物优选为局部给药剂型,优选为通过靶区注射给药的剂型。
在进一步的实施方案中,根据本发明的局部给药剂型为液体制剂、半固体制剂或者气体制剂的液体原液,其中所述金属化合物(例如铁盐,尤其是亚铁盐)的浓度为0.02-2%w/v,优选为0.05-1.5%w/v,更优选为0.1-1.2%w/v或0.1-1.6%w/v;解偶联活性物质的浓度为0.1-15%w/v,优选为0.1-1%w/v、0.1-8%w/v或2-10%w/v;而所述抗肿瘤物质中有效抗肿瘤物质的浓度为0.1-10%w/v,优选为0.2-6%w/v,低效抗肿瘤物质的浓度为1-15%w/v,优选为2-12%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述硝基酚化合物的浓度为0.1-1%w/v,优选0.3-1%w/v;所述水杨酸类化合物的浓度为1.5-15%w/v,优选3-15%w/v,更优选5-12%;和所述氨基酚化合物的浓度为2-10%w/v,优选4-8%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10%w/v、优选2-10%w/v、更优选3-8%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述活性色素的浓度可以为1-8%w/v、优选1.5-7%w/v、更优选2-6%w/v。
在进一步的实施方案中,在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中,所述青蒿素衍生物的浓度为1-6%w/v、优选2-5%w/v、更优选3-5%w/v。
在进一步的实施方案中,所述硬化剂优选为液体硬化剂,更优选醇类液体硬化剂,例如乙醇、丙二醇、液体PEG、丙三醇、异丙醇等,优选为选自以下组之一种或多种:乙醇、丙二醇、液体PEG。此时,这些醇类化合物既作为硬化剂,也可起到溶剂的作用,其浓度可以是55-95%v/v、优选60-80%v/v。如乙醇、丙二醇、液体PEG共用时,三者之间的浓度比(v/v:v/v:v/v)优选为(0.5-1):(0.5-1):(0.5-1)。
根据本发明的一个实施方案,本发明的组合物为溶液剂。该溶液剂可以是通过将组合物成分溶解在分散介质中而形成的,也可以是单独地将上述成分溶解在分散介质、然后混合而形成的。所述溶液的分散介质包括溶媒,优选在药学上适宜的亲水溶媒。术语“亲水溶媒”是指具有亲水性的溶媒,其包括例如水、水可混溶性有机溶剂、或者包含水和水可混溶性有机溶剂的溶媒系统。
根据本发明的一个实施方案,本发明的组合物为混悬剂。该混悬剂可以是通过将组合物成分悬浮于分散介质中而形成的混悬剂,也可以是单独地将上述成分悬浮于分散介质中、然后混合而形成的。所述悬浮液的分散介质可以本领域技术人员已知的任意合适者,例如常用于注射目的植物油、合成油或半合成油作为油组。植物油可以是例如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油和花生油。
以组合物溶液剂(例如注射剂)为例,其可按照以下方法来制备。
方法一:如果组合物中所含金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质、以及任选存在的其他成分(例如硬化剂、止痛剂、赋形剂等)的所需浓度均在水溶浓度范围内时,则将这些原料直接加入注射用水即可获得相应的注射剂。
方法二:如果组合物中所含金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质、以及任选存在的其他添加剂(例如硬化剂、止痛剂、赋形剂等)的所需浓度有不在水溶浓度范围内者,则将这些原料溶于所有组合物组分均可在所需浓度下溶解的溶媒(例如含水可混溶有机溶剂的水溶液)中。
方法三:首先制备(例如通过上述方法)含全部组份的溶液,再将其制备(例如通过冻干工艺)为干粉,使用前将该干粉与不含任何组份的溶媒(例如注射用水或含水可混溶有机溶剂的溶媒)混合形成组合物溶液。
方法四:首先制备(例如通过上述方法)含部份组份的溶液,再将其制备(例如通过冻干工艺)为干粉,使用前将该干粉与含有另外部份组份的溶液(例如水溶液或含水可混溶有机溶剂的溶液)混合形成组合物溶液。
以呼吸道给药剂型(例如喷雾剂)为例,其可在金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的组合物之外加入以下一种或多种赋形剂来制备其液体原液:甘油、聚山梨酯-80、苯扎氯铵、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠等。其制备方法可参考上述组合物溶液制备方法。
以腔道给药剂型(例如栓剂)为例,其可在金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的组合物之外加入以下一种或多种赋形剂来制备:棉籽油、杏仁油、橄榄油、青篙油、薄荷脑、冰片、增溶乳化剂、甘油等。其制备方法可参考上述组合物溶液制备方法。
按上述这些方法的原则,本领域技术人员可以采用任意合适的具体方法制备多种包含本发明金属盐、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的局部给药制剂。例如,本发明的医用制剂中的变化包括:含不同种类和浓度的物质,含不同种类和浓度的金属盐,含不同种类和浓度的其他成分(例如止痛剂、硬化剂等)。
在本发明的范围内,为增加本发明药物组合物在给药处的有效作用时间、提高其生物利用度,其例如可以以缓释剂型用药。本领域技术人员可以采用任意合适的具体方法制备多种包含本发明组合物的缓释剂型制剂。例如,本发明药物组合物的缓释剂型,可以通过在金属化合物、解偶联活性物质、抗肿瘤物质之外加入作为缓释载体或基质的微米粒子、纳米粒子、胶束和原位凝胶基质来制备。
众所周知,缓释制剂的初始释放量为20-50%。因而,本领域技术人员应当知道,缓释剂型通常以常规剂型的2-5倍剂量或浓度给药。例如,在本发明组合物的缓释剂型中,金属化合物的浓度可以为0.04-10%w/v,其优选为0.1-7.5%w/v,更优选为0.2-6%w/v,解偶联活性物质的浓度可以为0.1-45%w/v,优选为0.1-30%w/v,抗肿瘤物质的浓度可以为2-60%w/v,优选为4-50%w/v、更优选为4-40%w/v。
根据本发明的另一个方面,其还提供本发明的药物组合物在制备用于治疗局部病变相关疾病的药物中的应用,该局部病变例如包括肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常。
根据本发明的另一个方面,其还提供一种治疗局部病变相关疾病的方法,该局部病变例如包括肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常,该方法包括向由此需要的个体局部给药根据本发明的药物组合物。
在本发明的范围内,术语“局部病变”是指身体局部部位的细胞、组织或器官原生或继生出现的功能、代谢和/或形态结构的病理改变,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括以下一种或多种:肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常。术语“局部部位”包括以下器官中的局部:肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常。心血管器官病的一个例子是血管瘤。
在本发明的范围内,“局部用药”是指其药物组成(活性组分及其浓度)可通过局部手段给用给靶区、且药物组成也适合于该靶区环境的要求从而产生疗效的药物。术语“靶”是指局部病变,“靶区”是指局部病变所在的区域。例如,当病变为肿瘤时,靶为肿瘤,靶区为瘤区(例如瘤体或/和药物可达瘤体的周边);当病变为非瘤肿大时,靶为肿块,靶区为肿大区(例如增生、囊肿、结节等病变处或/和周边);当病变为局部炎症时,靶区为发炎区(例如发炎肿块或/和药物可达肿块的周边);当病变为分泌异常组织时,靶为分泌异常的分泌腺,靶区则为包含这些异常分泌腺的组织或器官或/及其周边。例如,胰岛素分泌异常时,靶即为胰岛,靶区则为胰岛或/和周边。当疾病为皮肤病时,靶即为皮肤或皮肤附属器官的病变,靶区则为该病变区或/和周边。
在本发明的范围内,术语“分泌器官病”是指原生或继生在分泌腺或分泌腺所在的组织、器官的病变,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括以下一种或多种:肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染和组织功能异常。组织功能异常的症状例如分泌腺功能异常。
在本发明的范围内,术语“分泌腺”是指由腺细胞或腺细胞群组成的、执行分泌功能(secretion)的结构,其包括外分泌腺和内分泌腺。外分泌腺是一类有导管的分泌腺,包括胰腺、小肠腺、汗腺、皮脂腺、大肠腺、大汗腺、腮腺、下颌下腺、乳腺、胃腺、肝等。内分泌腺是人体内一些无输出导管的分泌腺,包括甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、垂体、松果体、胰岛、胸腺和性腺等。
在本发明的范围内,术语“皮肤病”是指原生或继生在皮肤或皮肤附属器官的病变,其可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是包括肿瘤、非瘤肿大、局部发炎、微生物感染。
在本发明的范围内,术语“肿瘤”包括恶性肿瘤和非恶性肿瘤。所述恶性肿瘤包括例如乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、等等。所述非恶性瘤包括例如乳腺瘤、胰腺瘤、甲状腺瘤、前列腺瘤、肝瘤、肺瘤、肠瘤、口腔瘤、食道瘤、胃瘤、鼻咽瘤、喉瘤、睾丸瘤、阴道瘤、子宫瘤、输卵管瘤、卵巢瘤等。所述肿瘤除以上实体瘤以外,还包括血管瘤。
在本发明的范围内,术语“非瘤肿大”包括例如非炎症性和非瘤性肿大,包括例如增生(例如乳腺、胰腺、甲状腺、甲状旁腺、前列腺等的增生)、囊肿(例如乳腺、甲状腺、甲状旁腺等的囊肿)、结节(例如乳腺、甲状腺、甲状旁腺等的结节)、异常静脉团(例如痔疮等)。所述痔疮包括内痔、外痔、混合痔。
在本发明的范围内,术语“局部发炎”是指局部部位的非瘤性发炎,包括例如变质性炎(alterative inflammation)、渗出性炎(exudative inflammation)和增生性炎。分泌腺器官的发炎包括例如乳腺炎、胰腺炎、甲状腺炎、前列腺炎、肝炎、肺炎、肠炎、口腔炎、咽炎、食道炎、胃炎、胃溃疡、鼻炎、鼻窦炎、喉炎、气管炎、支气管炎、阴道炎、子宫炎、输卵管炎、卵巢炎、等等。
在本发明的范围内,皮肤病包括皮肤癌、皮肤非恶性肿瘤、发炎、非瘤肿大等。具体而言,除皮肤癌和皮肤非恶性肿瘤之外的皮肤病包括:病毒性皮肤病(例如疱疹、疣、风疹、手足口病)、细菌性皮肤病(例如脓疱病、疖、麻风)、真菌性皮肤病(例如各种癣)、动物引起的皮肤病(例如疥疮、螨皮炎、隐翅虫皮炎、虱病、虫螯伤或咬伤)、性传播疾病(例如梅毒、淋病及尖锐湿疣)、过敏性与自身免疫性皮肤病(例如接触性皮炎、湿疹、荨麻疹)、物理性皮肤病(例如日光性皮肤病、冻疮、鸡眼、手足皲裂、压疮)、结缔组织疾病(例如红斑狼疮)、色素障碍性皮肤病(例如文身、雀斑、色素痣、各种斑)、皮肤附属器疾病(例如痤疮、酒渣鼻、脂溢性皮炎、斑秃、秃发、多汗症及臭汗症)。
在本发明的范围内,术语“功能的病理改变”是指由病因引起的局部部位的细胞、组织或器官的功能异常,包括例如分泌腺的分泌功能异常。所述分泌功能异常包括分泌腺功能亢进症和分泌腺功能减退症。术语“分泌腺功能亢进症”是指分泌细胞功能过分活跃则激素合成增加分泌也增加,例如甲状腺功能亢进症。所述“分泌腺功能减退症”是指分泌细胞功能下降或某种特有的酶缺少使激素合成减少并分泌减少,例如甲状腺功能減退症、胰岛功能減退症(糖尿病之一种)等。术语“激素”是指内分泌细胞合成并直接分泌入体液的化学信息物质,其包括类固醇激素(例如肾上腺皮质激素、性激素等)、氨基酸衍生物激素(例如甲状腺素、肾上腺髓质激素、松果体激素等)、肽与蛋白质激素(例如下丘脑激素、垂体激素、胃肠激素、胰岛素、降钙素等)、脂肪酸衍生物激素(例如前列腺素)。
在本发明的范围内,“局部用药”是指其药物组成(活性组分及其浓度)可通过局部手段给用给靶区、且药物组成也适合于该靶区环境的要求从而产生疗效的药物。术语“靶”是指局部病变,“靶区”是指局部病变所在的区域。例如,当病变为肿瘤时,靶为肿瘤,靶区为瘤区(例如瘤体或/和药物可达瘤体的周边)。
在本发明中,所述肿瘤包括在以下一种或多种器官或组织中的肿瘤:乳腺、胰腺、胰岛、甲状腺、甲状旁腺、前列腺、肝、肺、肠、胃、睾丸、阴道、子宫、输卵管、卵巢、口腔、口咽、食道、头颈、鼻腔、鼻咽、喉、气管、支气管、汗腺、头发、皮肤、肛肠。
在本发明的范围内,术语“肿瘤”包括恶性肿瘤和非恶性肿瘤。所述恶性肿瘤包括例如乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、头颈癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、等等。所述非恶性瘤包括例如乳腺瘤、胰腺瘤、甲状腺瘤、前列腺瘤、肝瘤、肺瘤、肠瘤、口腔瘤、食道瘤、胃瘤、鼻咽瘤、喉瘤、睾丸瘤、阴道瘤、子宫瘤、输卵管瘤、卵巢瘤等。所述肿瘤除以上实体瘤以外,还包括血管瘤。
本发明的组合物以及该组合物的医用制剂还可与其它介入疗法、全身化疗、免疫疗法、光动力疗法、声动力疗法、手术干预或此类疗法的组合相组合施用以进一步提高疗效。
在本发明中,药物共用的组成-药效关系用Loewe等效应法原理进行考察。其以相加作用(additivism)为分界线,凡作用大于相加作用的定义为协同作用(synergism),作用小于相加作用的定义为拮抗作用(antagonism)。在本发明的范围内,组合物的相加作用定义如下:其为该组合物中被增效的物质(水杨酸类化合物单药、或水杨酸类化合物和含铁化合物共用)的疗效(例如抑瘤率)的115%。发明人发现根据本发明的药物组合物在上述治疗方法中都具有此等协同作用。
基于在下文中更详细描述的研究,尽管具体机理尚待进一步研究,本发明的组合物显示出促进哺乳动物肿瘤中的相关结构(例如病变组织、病变细胞及参与构成它们的任一结构)的有效破坏(例如有效促进病变细胞凋亡、坏死、自噬等有利于其消失的活性),从而达到治疗疾病的药学性质。
实施例
通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明,但不作为对本发明的限制。在以下实施例中,所有的实验均依照相关规定在细胞或实验动物上进行。如无特殊说明,所有实验均按常规方法进行。
以下具体实施例所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。以下实施例中所用的部分试剂列于表1中。
表1
名称 | CAS号 |
一盐酸奎宁(盐酸奎宁) | 6119-47-7 |
二盐酸奎宁 | 60-93-5 |
磷酸哌喹 | 4085-31-8 |
伯氨喹 | 90-34-6 |
乙酰水杨酸 | 50-78-2 |
水杨酸 | 69-72-7 |
氟苯水杨酸 | 22494-42-4 |
布洛芬 | 15687-27-1 |
蒿甲醚 | 71963-77-4 |
青蒿琥酯 | 88495-63-0 |
2,4-二硝基苯酚(DNP) | 51-28-5 |
硫酸亚铁 | 7782-63-0 |
氯化亚铁(四水) | 231-843-4 |
葡萄糖酸亚铁 | 299-29-6 |
氯化铜 | 10125-13-0 |
亚甲基蓝(碱性蓝9) | 61-73-4 |
亚甲基蓝(水合物) | 7220-79-3 |
结晶紫 | 548-62-9 |
中性红 | 553-24-2 |
专利蓝V | 3536-49-0 |
番红花红T | 477-73-6 |
伊红Y | 17372-87-1 |
在以下实施例中,受试肿瘤细胞包括:人肝癌细胞(HepG2)、人乳腺癌细胞(MDA-MB231)、人肺癌细胞(A549)、人甲状腺癌细胞(SW579)、人前列腺癌细胞(LNCaP/AR)、人胰腺癌细胞(PANC-1)、人结肠癌细胞(COLO205)、人头颈癌细胞(Fμda)、人鼻咽癌细胞(CNE1)、人胃癌细胞(BGC823)、卵巢癌(PA1)、皮肤癌细胞(A341)等。本发明的实施例的研究方法和结果也适用于其它肿瘤细胞。
在以下实施例中,除非另有说明,皮下移植瘤动物试验按药管当局颁发的试验指南进行。动物为6~8周龄、体重17.5-20.5g的雌性裸鼠(BALB/C-Nμde)。将上述受试肿瘤细胞皮下接种于裸鼠,待肿瘤长至所需体积(例如70-100mm3左右),采用PEMS 3.2软件(四川大学华西公共卫生学院编制)随机区组为阴性对照组、阳性对照组和若干个研究组,每组8只裸鼠。
分组当日开始给药。试验设阴性对照组、阳性对照组和若干个研究组,分别加入阴性对照物、阳性对照物和若干个研究药物。阴性对照物为组合物溶媒,其给药方式和体积均与研究组相同。阳性对照物选自上述现有抗瘤药物,其给药方式为腹腔注射给药,其日给药剂量均按所选药物的惯例进行(例如5-氟尿嘧啶25mg/kg)。除另有说明,研究组均为瘤区注射研究药物,注射量由剂量和浓度确定。试验观察、测量和分析的项目,包括一般状态、体重、摄食量、肿瘤体积、瘤重等。
肿瘤体积计算公式如下:
TV=l/2×a×b2,式中a表示肿瘤长度,b表示肿瘤宽度。
相对肿瘤体积计算公式如下:
RTV=Vt/V0,式中V0为分组给药当天(即第一天)测量所得的肿瘤体积,Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率计算公式如下:
T/C(%)=TRTV/CRTV×100,式中TRTV为阳性对照组或研究组的RTV,CRTV为阴性对照组的RTV。
肿瘤生长抑制率(本发明中简记为抑瘤率)计算公式如下:
抑瘤率(%)=(TW-CW)/CW×100%,其中TW为阳性对照组或研究组的平均瘤重;CW为阴性对照组的平均瘤重。
研究组的基于相对肿瘤增殖率的药效评价标准为:T/C(%)>40为无效活性,T/C(%)≤40(但是>15%)并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有效活性(无优选药学活性),T/C(%)≤20并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为优选活性。
研究组的基于抑瘤率的药效评价标准为:抑瘤率<40%为无效活性,抑瘤率≥40%(但是<75%)并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有效活性,抑瘤率≥75%并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为优选活性。
在以下实施例中,实验均采用重复测量方差分析(Repeated Measμres ANOVA)分别对指标均数的组别差异进行统计学检验。组别差异有统计学意义时(P≤0.05),采用最小显著差异法对各组与阴性对照组间差异进行比较。定量指标采用均数±标准误(X±SEM)描述。当LEVENE方差齐性检验提示方差不齐时(P≤0.05),采用Mann-Whitney Μ秩和检验(M-W法)比较组间差异。所有的统计分析,均在SPSS for Windows 13.0软件下完成。
实施例1:组合物的制备
本实施例中,本发明的组合物的制备使用前述制备方法,所制得的部分组合物溶液列于表2。表中所列的百分数是指相应成分在组合物溶液中的浓度。
表2
*:在本发明所有实施例中,除非另有说明,所用醇类液体硬化剂为乙醇、PEG300和丙二醇的共用,它们的浓度比(%浓度:%浓度:%浓度)为1:1:1。例如,一个含75%醇类液体硬化剂的溶液中,乙醇、PEG300和丙二醇的浓度可以分别是25%、25%和25%,等等。
具体而言,例如,以最终10ml组合物溶液体积计,在室温下,按照表2所示的量量取相应的金属盐、解偶联活性物质、第三组分以及任选存在的其他成分干粉加入8.5ml适当溶媒(如注射用水、含醇类液体硬化剂的溶媒、等)中溶解,再加入其它液态添加剂(例如苯甲醇,0.2ml)和溶媒使总体积达到10ml,混合均匀后分装为2ml/瓶备用,便制得组合物溶液。
其它剂型可参照上述方法制备。例如,喷雾剂的原液制备可从在以上组合物溶液中加入本行业专业人员公知的辅料制得,如加入以下辅料:甘油(2.5%)、聚山梨酯-80(1.5%)、苯扎氯铵(0.02%)、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠(1.5%)。
为了保证组合物的组成稳定性,除可以加入相关稳定剂以外,还可将各组分以及任选存在的其他成分以固态(例如冻干粉)或/和液态形式分别储放,在应用前混合均匀使用。
实施例2:药效的细胞实验
在以下实施例中,除非另有说明,体外抗肿瘤细胞试验使用四氮唑盐MTT还原法,其按本行业技术人员公知的方法进行,简述如下。
实验中,将实验细胞用胰酶消化后加培养基液配制成所需细胞浓度的悬浮液,成功接种在96孔培养板中后分组,每组设5个平行孔。试验设阴性对照组、阳性对照组和若干个研究组,分别加入阴性对照物、设定浓度的阳性对照物和若干浓度的研究药物。阴性对照物为生理盐水,阳性对照物选自上述常规化疗药物。将板孵育所需的时间(例如24或48小时),加入MTT反应。在酶标仪上以试验波长为570nm,参比波长为450nm测定反应产物的光密度值(OD)。按下式计算药物对细胞增殖的抑制:
细胞增殖抑制率%=(1-研究组OD/阴性对照组OD)×100%
以同一药物不同浓度对细胞增殖抑制率作图可得到剂量-效应曲线(细胞增殖抑制曲线)。此外,细胞试验中习惯使用摩尔浓度。在本实施例中,摩尔浓度(M)与重量/体积百分比浓度(w/v%)的换算关系如下:1M=1克摩尔/升=[分子量(克)/1000(ml)]X100%。以二氯化铁为例,1M相当于19.9%w/v。以二盐酸奎宁为例,1M相当于39.7%w/v。
图1给出一个以人肝癌细胞HepG2抑制为模型的细胞实验结果,曲线A、曲线B和曲线C分别显示二氯化铁/二盐酸奎宁组合物组(A组)、二氯化铁/乙酰水杨酸组合物组(B组)和二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁组合物组(C组)的细胞增殖抑制。各组受试药物均为含不同浓度二氯化铁(10、25、50、75、100、150、200μM)和固定浓度其它组分的水溶液。其中,A组8个药物中二盐酸奎宁浓度均为60μM,B组8个药物中乙酰水杨酸浓度均为2500μM,C组8个药物中二盐酸奎宁浓度均为60μM、而乙酰水杨酸浓度均为2500μM。
二氯化铁单药在10-200μM之间的细胞增殖抑制率均小于11%,50μM二氯化铁/60μM二盐酸奎宁组合物、50μM二氯化铁/2500μM乙酰水杨酸组合物、50μM二氯化铁/2500μM乙酰水杨酸/60μM二盐酸奎宁组合物的细胞增殖抑制率分别为41%、52%和61%。
在更多的HepG2细胞试验中,当二氯化铁/乙酰水杨酸有以下剂量关係时二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁组合物显示出与上类似的协同作用:25μM/2500μM、75μM/2500μM、150μM/2500μM、200μM/2500μM、1000μM/1250μM、500μM/1250μM、250μM/1250μM、625μM/625μM。而以下剂量关係的二氯化铁/乙酰水杨酸组合物未显示出协同作用:625μM/250μM、500μM/313μM、12μM/2500μM。
在更多的HepG2细胞试验中,当二氯化铁/二盐酸奎宁有以下剂量关係时二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁组合物显示出与上类似的协同作用:50μM/60μM、25μM/60μM、0.8μM/60μM、50μM/50μM、25μM/50μM、100μM/100μM、25μM/100μM。
HepG2细胞实验时的显微镜观察发现,50μM二氯化铁/2500μM乙酰水杨酸/60μM二盐酸奎宁组合物与50μM二氯化铁/60μM二盐酸奎宁组合物、50μM二氯化铁/2500μM乙酰水杨酸组合物相比较,反应结朿后HepG2细胞出现死亡(皱缩变圆,呈漂浮状)的比例增大25%以上。而在相同实验条件下,这些组合物对正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLFI的抑制率和细胞致死率的差异不明显。这些实验说明,组合物中的二氯化铁和乙酰水杨酸能显著增强受试病变细胞对二盐酸奎宁的敏感性,且它们的协同增效作用具有一定的特异性。
使用一系列其它人癌细胞系重复上述实验,包括人肺癌细胞(A549)、卵巢癌细胞(PA1),都证实二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁组合物的上述协同作用。实施例3:用药方式研究
针对荷胰腺癌细胞裸鼠(瘤体体积65-100mm3)的动物实验。阳性对照组腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)(A组),每日一次,连续10日。2个灌服研究组分别给药含24%醇类液体硬化剂的0.16%二氯化铁/1.2%乙酰水杨酸组合物溶液(B组)和0.16%二氯化铁/1.2%乙酰水杨酸/0.4%亚甲蓝组合物溶液(C组),每次灌服250μl,隔天一次,给药5次。阴性对照组瘤内注射生理盐水,2个瘤区注射研究组瘤内注射分别给药含60%醇类液体硬化剂的0.4%二氯化铁/3%乙酰水杨酸组合物溶液(D组)和0.4%二氯化铁//3%乙酰水杨酸/1%亚甲蓝水溶液(E组),每次注射100μl,隔天一次,给药5次。停药后次日,对动物进行安乐死,解剖后测定抑瘤率。结果如下:A、B、C、D、E组的抑瘤率分别为61%、8%、13%、43%和58%。
使用实施例1中制备的其它组合物,也可以获得类似结果。这些实验也显示,金属盐和解偶联活性物质对活性物质的增效作用,在局部给药中明显高于全身用药中。
实施例4:局部给药研究
针对荷胰腺癌细胞裸鼠(瘤体体积100-150mm3)的动物实验。阳性对照组腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)(A组),每日一次,连续10日。2个灌服研究组分别给药0.6%二盐酸奎宁水溶液(B组)和0.08%二氯化铁/0.6%二盐酸奎宁水溶液(C组),每次灌服250μl,隔天一次,给药5次。研究药物溶液均含75%醇类液体硬化剂,故以75%醇类液体硬化剂水溶液为阴性对照物。阴性对照组和研究组瘤内注射75-100μl。
在一个实验中,隔日用药一次,一共五次。给药至停药后15天的相对肿瘤增殖率曲线给出在图2中。4条曲线分别为瘤区注射0.6%二氯化铁/3.7%DNP(E组)、0.4%DNP/3%二盐酸奎宁组合物(F组)、0.6%二氯化铁/80mM二盐酸奎宁组合物(G组)、和0.6二氯化铁/0.4%DNP/3%二盐酸奎宁组合物(H组)。结果显示在图2中。
在图2中,在停药当日至其后21天时,三组分组合物组的相对肿瘤增殖率一直在非常低的水平(<13%),而二组分组合物组的相对肿瘤体积在停药后12天出现反弹。在停药后21天的解剖实验中,上述4个组合物的抑瘤率分别为:46%、47%、75%和92%。
在另一个实验中,瘤内给药1次,停药后3日测定抑瘤率。
当固定组合物中的二氯化铁和乙酰水杨酸浓度(分别为0.4%和3%)并在0.5-4%变化亚甲蓝浓度(0.5%、1%、1.5%、2%、4%)时,二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/乙酰水杨酸和亚甲蓝/乙酰水杨酸相比较,抑瘤率高出115%以上。
当固定组合物中的二氯化铁和亚甲蓝浓度(分别为0.4%和1%)并在1.5-10%变化乙酰水杨酸浓度(1.5%、3%、5%、7%、10%)时,二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/乙酰水杨酸和亚甲蓝/乙酰水杨酸相比较,抑瘤率高出115%以上。
当固定组合物中的亚甲蓝和乙酰水杨酸浓度浓度(分别为1%和3%)并在0.02-2%变化二氯化铁浓度(0.02%、0.05%、0.1%、1%、2%)时,二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/二盐酸奎宁和亚甲蓝/二盐酸奎宁相比较,抑瘤率高出115%以上。
以以下组为例,0.4%二氯化铁/3%乙酰水杨酸/1%亚甲蓝、0.4%二氯化铁/3%乙酰水杨酸、1%亚甲蓝/3%乙酰水杨酸、0.4%二氯化铁/1%亚甲蓝的抑瘤率分别为84%、46%、55%、58%。
在另一个实验中,隔天给药1次,给药3次,停药后次日测定抑瘤率。
当固定组合物中的二氯化铁和二盐酸奎宁浓度(分别为0.4%和3%)并在1.5-10%变化乙酰水杨酸浓度1.5%、3%、5%、7%、10%)时,二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁与相同组分浓度的二氯化铁/乙酰水杨酸、二氯化铁/二盐酸奎宁和乙酰水杨酸/二盐酸奎宁相比较,抑瘤率高出115%以上。
当固定组合物中的二氯化铁和乙酰水杨酸浓度(分别为0.4%和3%)并在1-10%变化二盐酸奎宁浓度(1%、3%、5%、7%、10%)时,二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁与相同组分浓度的二氯化铁/乙酰水杨酸、二氯化铁/二盐酸奎宁和乙酰水杨酸/二盐酸奎宁相比较,抑瘤率高出115%以上。
当固定组合物中的乙酰水杨酸和二盐酸奎宁浓度(分别为3%和3%)、而在0.02-2%变化二氯化铁浓度(0.02%、0.05%、0.1%、1%、2%)时,二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁与相同组分浓度的二氯化铁/乙酰水杨酸、二氯化铁/二盐酸奎宁和乙酰水杨酸/二盐酸奎宁相比较,抑瘤率高出115%以上。
以以下组为例,0.6%二氯化铁/5%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁、0.6%二氯化铁/3%二盐酸奎宁、0.6%二氯化铁/5%乙酰水杨酸、和5%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁的抑瘤率分别为91%、71%、69%和73%。
实施例5:优选浓度研究
针对荷肝腺癌细胞裸鼠(瘤体100-150mm3)的实验,阳性对照组(A组)经口灌胃给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)。研究药物溶液均含75%醇类液体硬化剂,故以75%醇类液体硬化剂水溶液为阴性对照物。A组每次灌服250μl,每天一次,给药10次。阴性对照组和研究组瘤内注射75-100μl。
在一个实验中,研究金属盐、硝基酚和活体染料组合物(二氯化铁/DNP/亚甲蓝),用药一次,停药后15天对动物进行解剖,测出抑瘤率。6个研究药物溶液中,二氯化铁浓度和DNP浓度分别固定为0.6%和0.4%、而亚甲蓝浓度分别为0、0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%。所获得的抑瘤率曲线给出在图3中。
图3中,当组合物中的亚甲蓝浓度达到一个临界浓度(0.5%)后,更显示出药效对浓度的高度敏感,其抑瘤率迅速提高。亚甲蓝浓度大于1%后,其抑瘤率大于阳性对照物。采用相同的研究方法,组合物中的二氯化铁和DNP的临界浓度分别为0.1%和0.1%。
在另一个实验中,研究金属盐、水杨酸类化合物和喹啉类化合物组合物(二氯化铁/乙酰水杨酸/二盐酸奎宁),用药5次,隔天一次,停药后15天对动物进行解剖,测出抑瘤率。采用相同的研究方法,组合物中的二氯化铁、乙酰水杨酸和二盐酸奎宁的临界浓度分别为0.1%、3%和1.5%。
在上述实验中,还观察了本发明组合物的高浓度二盐酸奎宁、亚甲蓝、乙酰水杨酸共用(浓度分别在3%以上、2%以上和5%及以上)的安全性。在安全剂量范围内,局部给药特别要关注局部刺激性。在瘤体注射时,上述高浓度组合物组均在注射部位出现明显的色泽变化和轻度的肌肉变性。在另一个相同的验证实验中,对给药停止后30天剖杀的裸鼠的注射部位进行了病理切片检查,结果显示三组分研究组和其它研究组与阴性对照组的注射部位的差别不明显。
在其它荷瘤动物试验、以及使用实施例1制备的其它类似组合物(例如表2中的组合物)实验时,也可以观察到类似有效性和安全性结果。
实施例7:抗瘤研究
针对多种荷癌细胞裸鼠(癌细胞如前所述,瘤体85-165mm3)的实验,阳性对照组(A组)腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次),每天一次,给药10次。
一个研究中,药物分别为按前述方法配制的含以下组分的药物溶液:5%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/5%乙酰水杨酸(C组)、和0.7%二氯化铁/5%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁(D组)。研究药物溶液均含75%醇类液体硬化剂,故以75%醇类液体硬化剂水溶液为阴性对照物。阴性对照组和研究组瘤内每次注射75-100μl,隔天一次,给药5次。停药后15日对动物进行安乐死和解剖,测定抑瘤率。结果如下。
针对荷甲状腺癌细胞裸鼠进行的一个实验,从试验第5天起,与阴性对照组相比,阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低,差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示,A、B、C、D组的抑瘤率分别为64%、38%、78%和93%。
针对荷乳腺癌细胞裸鼠进行的一个实验,从试验第5天起,与阴性对照组相比,阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低,差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示,A、B、C、D组的抑瘤率分别为63%、31%、74%和95%。
针对荷鼻咽癌细胞裸鼠进行的一个实验,从试验第5天起,与阴性对照组相比,阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低,差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示,A、B、C、D组的抑瘤率分别为57%、43%、79%和96%。
针对荷皮肤癌细胞裸鼠进行的一个实验,从试验第5天起,与阴性对照组相比,阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低,差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示,A、B、C、D组的抑瘤率分别为68%、41%、81%和96%。
在另一个系列的荷癌细胞裸鼠实验中,阳性对照物、阴性对照物与上相同。研究药物分别为按前述方法配制的含以下组分的药物溶液(含75%醇类液体硬化剂):5%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/5%乙酰水杨酸(C组)、和0.7%二氯化铁/5%乙酰水杨酸/2%亚甲蓝(D组)。所获结果与上述结果类似。
在其它荷瘤裸鼠(接种肿瘤细胞分别为人肺癌细胞(A549)、人前列腺癌细胞(LNCaP/AR)、卵巢癌细胞(PA1)、头颈癌细胞(FADΜ))实验中,以及在使用实施1制备的其它组合物(例如表2)时,也可以观察到类似的结果。
此外,我们还研究了在本发明的组合物用于抗不同发育的肿瘤。在本发明的实施例中,除非另有说明,抗不同发育的肿瘤实验的研究方法如下。
裸鼠分为先接种鼠群和后接种鼠群。先接种鼠群先于后接种鼠群9天接种人肝癌细胞。在后接种鼠群接种后7天,进行裸鼠分组(每组8只)。先接种鼠群(瘤体体积85-150mm3)分为阴性对照组(A组)和研究组(B组),后接种鼠群(瘤体体积35-65mm3)分为阴性对照组(C组)和研究组(D组)。A、B组瘤内注射给药70-100μl,C、D组瘤内注射给药30-70μl。
本实施例中,阴性对照物为生理盐水,研究药物为0.4%二氯化铁组合/5%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁。给药3次,隔为:1次。停药后10日解剖,D组和B组的抑瘤率分别为95%和76%。本发明的组合物不仅可应用于恶性肿瘤治疗,甚至于可用于完全去除有一定致癌风险的肿瘤,以防止其发展为恶性肿瘤。
实施例8:抗非瘤肿大研究
本发明的组合物的抗非瘤肿大作用,首先以乳腺增生为模型进行了研究,试验方法如下:
所用动物为体重150-180g的未孕雌性大鼠。肌注苯甲酸雌二醇(0.5mg/kg,1次/天,连续20天)、继而肌注黄体酮(5mg/kg,1次/天,连续5天)进行动物建模。经取样活检验证造模成功后,采用PEMS 3.2软件进行随机分组。实验动物分为空白对照组(末建模动物)和以下造模组:阳性对照组、阴性对照组、3个研究组,每组6只动物。分组当日开始给药。阳性对照物为乳增宁片(灌服,每天一次,每次1g/kg,给药27次)。阴性对照物为研究药物的溶媒。研究组和阴性对照组在肿大区注射100μl。给药频率为隔天一次,一共5次。
实验中观察、测量和分析的项目,除了常规的摄食量、体重、一般状态以外,还包括相对乳头增大率(T/C%)和乳腺组织病理改变。
相对乳头直径计算公式为:
RTD=Dt/D0,式中D0为分组第一次给药测量所得乳头直径,Dt为每一次测量时的乳头直径。
相对乳头增大率计算公式为:
T/C(%)=TRTD/CRTD×100,式中TRTD为阳性对照组或研究组RTD,CRTD为阴性对照组RTD。
研究组的相对乳头增大率药效评价标准为:
T/C(%)>50为无活性,T/C(%)≤50(但是>25%)并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有活性,T/C(%)≤25并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有优选增效。
乳腺组织病理分析如下:末次给药后第4天安乐死动物,摘取大鼠第二对乳腺,石蜡切片,HE染色后在光镜下观察乳腺组织病理形态的改变。通过观察小叶及腺泡的形态,对各组大鼠乳腺组织病理进行积分,其中:乳腺小叶不增生,腺体数量极少,腺泡不扩张,记0分;乳腺小叶无明显增生,个别腺泡有轻度增生,但无扩张,记1分;乳腺小叶大部分增生,部分腺泡明显扩张,记2分;乳腺小叶明显增生,腺泡处于极度扩张状态,腺上皮细胞呈扁平状,腺泡内及导管内有大量的分泌物,记3分;乳腺腺泡、导管、小叶的病理性增生明显,记4分。
研究组的病理分析药效评价标准为:病理积分≥3为无活性,1<病理积分<3并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有活性,病理积分≤1并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有优选增效。
在一个实验中,3个研究组分别注射按前述方法配制的以下溶液(含65%液体醇类硬化剂):7%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/7%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/7%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁组合物溶液(D组)。
从用药后第7天起,C、D组乳头直径与阴性对照组相比均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在用药后第10天,C、D组相对乳头增大率(T/C)小于50%;在用药后第25天,D、C、B组和阳性对照组的相对乳头增大率分别为11%、23%、37%和39%。在用药后第25天的病理积分,D组≤1与阴性对照组接近,C组和阳性对照组大于2,B组大于3。药物的安全性观察结果基本相同。
在另一个实验中,3个研究组分别注射按前述方法配制的以下溶液(含65%液体醇类硬化剂):7%水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/7%水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/7%水杨酸组合物/2%亚甲蓝组合物(D组)。实验结果与上一实验类似。
使用本发明实施1制备的其它组合物(例如表2中的组合物)时,也可以观察到类似的结果。
本发明的组合物的抗非瘤肿大作用也用非炎性甲状腺肿为模型进行研究。本发明的组合物的抗非瘤肿大作用,以非炎性甲状腺肿为模型进行了研究。单纯甲状腺肿(simplegoiter)又称非炎性甲状腺肿,是由非炎性或肿瘤性原因引起甲状腺素合成障碍而导致的甲状腺代偿性肿大。甲状腺肿治疗的试验方法如下:
实验动物为体重150-180g的成年大鼠。大鼠在低碘饲料喂养的环境下饲养3个月以上。以尿碘明显下降、甲状腺明显肿大为建模成功。采用PEMS 3.2软件对动物进行随机区组,分为空白对照组(末建模动物)和以下造模组:阳性对照组、阴性对照组(A组)、研究组,每组6只。选用肿块体积小于100mm3的裸鼠,分组当日开始给药。阳性对照物为碘酸钾(KIO3,灌服,给药次数为27次,给药频率为每天一次,剂量为每次0.4μg/kg)。阴性对照物为研究药物的溶媒。研究组和阴性对照组在肿大区注射100μl。给药频率为隔天一次,一共5次。
实验中观察、测量和分析的项目,除了常规的摄食量、体重、一般状态以外,还包括甲状腺肿大、24h碘排出量和甲状腺病理学检查。
在一个实验中,3个研究组分别注射按前述方法配制的以下溶液(含65%液体醇类硬化剂):7%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/7%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/7%乙酰水杨酸/3%二盐酸奎宁组合物溶液(D组)。
从试验第10天起,C、D组甲状腺肿大与阴性对照组相比明显改善,碘排出量与空白对照组趋于一致(差别<25%),效果与阳性对照组相当。病理学检查中,阴性对照组可观察到甲状腺明显肿大,滤泡密集,上皮细胞增生肥大呈高柱状,可见增生的细胞团索,滤泡间的血管明显增多,管腔扩张充血,小叶间纤维组织增多。
在用药后第25天,D组在甲状腺大小、滤泡形态大小、上皮细胞、小叶间纤维组织等方面与空白对照组的差异小于13%。C组与阳性对照组接近,与空白对照组的差异小于28%。B组与空白对照组的差异为41%。各组的药物的安全性观察结果基本相同。
在另一个实验中,3个研究组分别注射按前述方法配制的以下溶液(含65%液体醇类硬化剂):7%水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/7%水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/7%水杨酸/2%亚甲蓝组合物(D组)。实验结果与上一实验类似。
使用本发明实施1制备的其它组合物(例如表2中的组合物)时,也可以观察到类似的结果。
实施例10:抗局部发炎的研究
本发明的组合物的抗局部发炎作用,以变应性鼻炎为模型进行了研究,动物试验方法如下。
实验动物为体重约150-180g的成年雄性大鼠,随机分为空白对照组和造模组。造模组以卵清白蛋白(OVA)致敏液(每毫升含0.5mgOVA和30mg Al(OH)3)作为变应原通过腹腔注射(每日一次,共7次)致敏,然后以卵清白蛋白造模液(3%OVA)滴鼻(每日一次,共7次)造模。造模成功后,采用PEMS 3.2软件随机区组,分为以下造模组:阳性对照组、阴性对照组(A组)、研究组,每组6只。分组当日开始给药。阳性对照物为市售糠酸莫米松鼻喷雾剂(比利时先灵葆雅)。
各组每日鼻腔喷射给药一次,共7次。以给药30分钟后3分钟内大鼠抓挠、打喷嚏次数为观察指标。以与空白对照组的比较判断药效。如造模组的抓挠和喷嚏次数分别达到空白对照组的7倍以上和1倍以上,则造模成功。如药物组的抓挠和喷嚏次数分别达到与阳性对照组相近的水平,则药物有效。
在一个实验中,阴性对照物和研究药物均为喷雾剂,在使用之前以喷雾剂液体原液貯存于喷雾装置的容器中。喷雾剂的制备方法如实施例1所示。所述液体原液均含75%醇类液体硬化剂和以下辅料:甘油(2.5%)、聚山梨酯-80(1.5%)、苯扎氯铵(0.02%)、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠(1.5%)。3个研究药物的液体原液还分别含以下组分:10%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/10%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/10%乙酰水杨酸/5%二盐酸奎宁组合物(D组)。
在用药后第15天的抓挠与喷嚏次数,D、C、B组和阳性对照组与空白对照组的数字差异分别为11%、18%、36%和25%。在实验过程中,各组均未见明显的粘膜刺激作用,也未引起过敏反应。
在另一个实验中,3个研究喷雾剂液体原液分别含以下组分:10%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/10%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/10%乙酰水杨酸/3%亚甲蓝组合物(D组)。实验结果与上一实验类似。
使用与实施1制备的其它组合物(例如表2)的相同组成的喷雾剂也获得类似结果。
实施例11:抗微生物感染的研究
本发明的组合物的抗微生物感染作用,以真菌性皮肤病(脚癣)为模型进行了研究,试验方法如下。
阳性对照物为达克宁霜(西安杨森制药有限公司),阴性对照物和研究药物均为喷雾剂,在使用之前以喷雾剂液体原液貯存于喷雾装置的容器中。喷雾剂的制备方法如实施例1所示。所述液体原液均含75%醇类液体硬化剂和以下辅料:甘油(2.5%)、聚山梨酯-80(1.5%)、苯扎氯铵(0.02%)、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠(1.5%)。3个研究喷雾剂的液体原液分别含以下组分:13%水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/13%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/13%水杨酸/5%二盐酸奎宁组合物(D组)。
参加试验的患有脚癣的志愿者50人分为5组,每组10人。阳性对照组在患部涂抹达克宁霜,每天一次,连续7次。阴性对照组和3个研究组在患部喷洒相应喷雾剂,每天一次,连续7次。
疗效判断标准为:冶愈:皮损消退>90%,有效:皮损消退>50%,无效:皮损消退<50%。
在用药后7天,与阴性对照组相比,阳性对照组和4个研究组均出现明显更大的皮损消退。用药后10天的结果如下表所示。
表3
组别 | 病例数 | 冶愈数 | 有效数 | 无效数 | 无效率(%) |
阴性对照组 | 10 | 0 | 0 | 10 | 100 |
阳性对照组 | 10 | 0 | 4 | 6 | 60 |
B组 | 10 | 0 | 3 | 7 | 70 |
C组 | 10 | 2 | 5 | 3 | 30 |
D组 | 10 | 4 | 6 | 0 | 0 |
在另一个实验中,3个研究喷雾剂的液体原液分别含以下组分:13%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/13%乙酰水杨酸组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/13%乙酰水杨酸/3%青蒿琥脂组合物(D组)。实验结果与上一实验类似。
实施例11:抗分泌腺分泌异常的研究
本发明的组合物的抗分泌腺分泌异常作用,以甲亢为模型进行了研究,试验方法如下。
实验动物为体重约150-180g的成年雄性大鼠。甲亢建模药物为左旋甲状腺素(腹腔注射,剂量50μg/100g体重,连续注射10天)。血清学检查和病理学检查证实建模成功后,采用PEMS 3.2软件随机区组,分为空白对照组(末建模动物)和以下造模组:阳性对照组、阴性对照组(A组)、3个研究组,每组6只。分组当日开始给药。阳性对照物为他巴唑(灌服,给药次数为27次,给药频率为每天一次,剂量为每次2mg/kg)。阴性对照物为研究药物的溶媒。研究组和阴性对照组在肿大区注射100μl。给药频率为隔天一次,一共8次。
实验中观察、测量和分析的项目,除了常规的摄食量、体重、一般状态以外,还包括给药当天和给药后第16天的血清学检查和甲状腺病理学检查。血清学检查采用放免法(RIA)测定其血清T3、T4及促甲状腺激素(TSH)浓度值。病理学检查观察甲状腺形态、滤泡形态、上皮细胞形态、小叶间纤维组织形态。试验结果如下。
在一个实验中,3个研究组分别甲状腺体内注射以下含80%液体醇类硬化剂溶液:10%水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/10%水杨酸组合物(C组)、0.7%二氯化铁/10%水杨酸/6%二盐酸奎宁组合物(D组)。阴性对照组瘤区注射含80%液体醇类硬化剂水溶液。
在给药后第25天的血清学检查中,C、D组血清T3、T4与阴性对照组相比T3、T4升高趋缓,TSH下降趋于改善。就血清学检查结果而言,D、C、B组和阳性对照组与未建模动物的血清值差别分别为13%、31%、41%和35%。
病理学检查中,阴性对照组可观察到甲状腺呈弥漫性增大,滤泡上皮增生呈高柱状并有小滤泡形成,滤泡周边出现许多大小不一的上皮细胞吸收空泡,间质血管丰富、充血,淋巴组织增生。与阴性对照组相比,C、D组的甲状腺弥漫性有所减退,滤泡上皮增生及小滤泡形成的情况明显减少;滤泡周边出现的上皮细胞吸收空泡、间质血管的数目和充血及淋巴组织增生均有所减弱。C、D组与未建模动物空白对照组的病理学检查结果接近,明显比阳性对照组和其它研究组好。各组均未观察到不可逆的局部损害和明显的体重减轻。
在另一个实验中,3个研究组分别注射按前述方法配制的以下溶液(含75%液体醇类硬化剂):10%乙酰水杨酸(B组)、0.7%二氯化铁/0.4%DNP组合物(C组)、和0.7%二氯化铁/0.4%DNP/6%二盐酸奎宁组合物(D组)。实验结果与上一实验类似。
Claims (11)
1.一种包含药学上可以接受的金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质的药物组合物,其中所述金属化合物、解偶联活性物质和抗肿瘤物质在该药物组合物中的相对量(w:w:w)为(0.02-2):(0.1-15):(0.1-15),优选为(0.1-2):(0.1-10):(0.1-10);所述抗肿瘤物质选自有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质及其组合。
2.根据权利要求1的药物组合物,其中所述金属化合物是选自以下之一种或多种的金属盐:铁盐、铜盐、锌盐、锰盐、铝盐,优选为铁盐和铜盐,更优选为选自以下之一种或多种的亚铁盐:二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁。
3.根据权利要求1或2的药物组合物,其中所述解偶联活性物质选自以下组之一种或多种:酚类化合物、水杨酸类化合物、苯并咪唑类化合物、苯腙类化合物、和芳香胺类化合物;优选为选自以下组之一种或多种:硝基酚化合物、氨基酚化合物和水杨酸类化合物;更优选为选自以下之一种或多种:2,4-二硝基苯酚、对乙酰氨基酚、水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、双香豆素及其衍生物。
4.根据权利要求1-3之一的药物组合物,其中所述有效抗肿瘤物质是指在安全剂量内全身用药时可显示出有效抗肿瘤活性的物质,优选为选自以下的一种或多种:阿霉素、顺铂、紫衫醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟脲嘧啶及其衍生物;以及
所述低效抗肿瘤物质是指在安全剂量内全身用药时未显示出有效抗肿瘤活性、但仍有一定活性的物质,优选选自以下组之一种或多种物质:喹啉类化合物、青蒿素衍生物和活性色素。
5.根据权利要求1-4之一的药物组合物,其中所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种:奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物,优选为选自奎宁和奎宁衍生物,更优选为以下化合物之一种或多种:奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁;
所述青蒿素衍生物选自以下之一种或多种:青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚及其衍生物;以及
所述活性色素为选自以下之一种或多种:活体染料、光敏剂和有色化疗药物,优选为活体染料,更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。
6.根据权利要求1-5之一的药物组合物,其中所述药物组合物还可包含硬化剂和/或止痛剂。
7.根据权利要求1-6之一的药物组合物,其中该药物组合物为局部给药剂型,优选为以下剂型:靶区注射和/或灌注剂型、呼吸道给药剂型、表面给药剂型、粘膜给药剂型和腔道给药剂型。
8.根据权利要求1-7之一的药物组合物,其中所述局部给药剂型为液体制剂、半固体制剂或者气体制剂的液体原液,其中所述金属化合物的浓度为0.02-2%w/v,优选为0.05-1.5%w/v,更优选为0.1-1.2%w/v或0.1-1.6%w/v;解偶联活性物质的浓度为0.1-15%w/v,优选为0.1-1%w/v、0.1-8%w/v或2-10%w/v;而所述抗肿瘤物质中有效抗肿瘤物质的浓度为0.1-10%w/v,优选为0.2-6%w/v,低效抗肿瘤物质的浓度为1-15%w/v,优选为2-12%w/v。
9.根据权利要求1-8之一的药物组合物,其中所述硝基酚化合物的浓度为0.1-1%w/v,优选0.3-1%w/v;所述水杨酸类化合物的浓度为1.5-15%w/v,优选3-15%w/v,更优选5-12%;和所述氨基酚化合物的浓度为2-10%w/v,优选4-8%w/v。
10.根据权利要求1-9之一的药物组合物,其中所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10%w/v、优选2-10%w/v、更优选3-8%w/v;和/或
所述青蒿素衍生物的浓度为1-6%w/v、优选2-5%w/v、更优选3-5%w/v;和/或
所述活性色素的浓度可以为1-8%w/v、优选1.5-7%w/v、更优选2-6%w/v。
11.根据权利要求1-8之一的药物组合物,其中所述硬化剂为液体硬化剂,更优选醇类液体硬化剂,例如乙醇、丙二醇、液体PEG、丙三醇、异丙醇,优选为选自以下组之一种或多种:乙醇、丙二醇、液体PEG,其浓度可以是55-95%v/v、优选60-80%v/v。
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