CN107569496A - 包含水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的抗肿瘤药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种包含药学上可接受的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的药物组合物。

Description

包含水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的抗肿瘤药物组合物 及其应用

技术领域

本发明涉及一种包含药学上可接受的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的抗肿瘤药物组合物及其在防治哺乳动物肿瘤疾病中的应用。

背景技术

大量研究显示水杨酸类化合物对多个靶点有医疗活性，例如解热、镇痛、抗风湿性和类风湿性关节炎、抗肿瘤等。其多个活性往往有不同的有效性。它们在临床上主要被用作口服或静注抗炎剂(主活性)。抗肿瘤仅为其次活性。

在其主活性的临床应用中，水杨酸类化合物通常有效性较高而不良反应较少。尽管现有技术对于水杨酸类化合物单独或联合应用抗肿瘤(次活性)的药物种类进行了广泛研究。然而，在现有技术中水杨酸类化合物的抑瘤率不高，一般都小于30％，最高者也小于40％，并没有显示出可与现有抗肿瘤药(抑瘤率可达75％以上)相比较的优势。无论如何，在未确定有效、甚至是高效抗肿瘤活性的浓度前，用于治疗肿瘤的水杨酸类化合物组成仍处于不确定状态。

活性提高的最简单办法是药物的大剂量或/和长期使用。水杨酸类化合物大剂量使用易引起较严重的胃肠道反应，如恶心呕吐等，甚至可引起胃出血，还可出现皮疹、荨麻疹、紫癜等过敏反应。长期应用还可出现中毒性肝损害、慢性间质性肾炎、血管神经性水肿等。

为了将其抗肿瘤活性转变为有临床竞争力的药效(例如较低副作用而抑瘤率达到75％以上)，全球范围内以经进行了长期的研究。一类研究致力于开发这些化合物更高效或/和低毒的衍生物，例如多聚体、不同衍生物结合物、金属配(螯)合物等。另一类研究，则致力于开发这些化合物与其它化合物的组合物。

液体醇类物质常被作为药物的溶剂使用。然而，在局部给药的条件下，它们还被用作硬化剂(醇类液体硬化剂)参与抗肿瘤作用。例如，乙醇以经在临床上用于肿瘤治疗。醇类液体硬化剂在这些临床应用中往往局部刺激作用强而有效性不高。如何降低其副作用和提高其疗效，是一个急需解决的问题。

绝大多数药物均是以全身用药的形态开发出来的。当其被应用、犹其是局部给药应用时，不仅可能表现出完全不同的药效，而且醇类液体硬化剂与水杨酸类化合物的共用也髙度不确定，其抗肿瘤作用可能是拮抗作用、加和作用、增效作用。

目前对肿瘤的治疗，主要是手术、放射线治疗和化疗。手术对身体造成伤害，对某些影响美观的分泌腺(例如乳腺和甲状腺)的伤害尤其让人沮丧。放射线治疗的副作用也非常明显。现有化疗基本上是全身用药，有很高的全身性副作用风险。例如，现有抗瘤药物在大范围内杀伤癌细胞的同时，也杀伤了大量正常细胞。一些用于局部处理的化疗剂正在发展之中。某些硬化剂(例如无水乙醇、尿素、等)的使用多了起来。然而，这些硬化剂具有很高的局部刺激性且疗效不高。

发明内容

本发明的发明目的是开发一种与现有技术相比更为安全有效的含水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的抗肿瘤组合物、包含该组合物的药物制剂及其用于治疗哺乳动物肿瘤中的应用。

根据本发明的一个方面，其提供一种包含药学上可接受的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的药物组合物，其中在该药物组合物中为所述水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的相对量(w:v)为(1-15):(55-95)，优选为(3-12):(60-90)，更优选为(5-10):(60-80)。

在进一步的实施方案中，所述水杨酸类化合物为选自以下的一种或多种：水杨酸、含金属盐的水杨酸衍生物和不含金属盐的水杨酸衍生物，优选为选自水杨酸和不含金属盐的水杨酸衍生物，更优选为选自水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、对氨基水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸、双香豆素中的一种或多种。

在进一步的实施方案中，所述水杨酸类化合物可以是局部有效的水杨酸类化合物，其中所述局部有效是指局部化疗指数(Q)大于2.0、优选大于3.0，所述Q的计算公式为：Q＝LC₅₀/IC₅₀，式中LC₅₀为水杨酸类化合物在哺乳动物局部给药时的半数损害浓度，而IC₅₀为水杨酸类化合物在哺乳动物局部给药时抗肿瘤半数有效浓度。

在进一步的实施方案中，所述水杨酸类化合物可以为低水溶性水杨酸类化合物，其中所述低水溶性水杨酸类化合物为水溶解度低于2％的水杨酸类化合物。

在进一步的实施方案中，所述醇类液体硬化剂包括在常温下处于液态的具有硬化剂性质的醇类物质，优选为以下之一种或多种：乙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、液体聚乙二醇(本发明中简称PEG)，更优选为选自以下组之一种或多种：乙醇、丙二醇、液体聚乙二醇。

在一个实施方案中，所述药物组合物还可包含一种或多种有效抗肿瘤物质，优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种：阿霉素、顺铂、紫杉醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶。

在进一步的实施方案中，所述药物组合物还可包含一种或多种低效抗肿瘤物质，其优选选自以下之一种或多种：活性色素、喹啉类化合物、青蒿素衍生物、酚类化合物。

在进一步的实施方案中，所述活性色素为选自以下之一种或多种：活体染料、光敏剂和有色化疗药物，优选为活体染料，更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种：亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。

在一个实施方案中，所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种：奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物，优选为选自奎宁和奎宁衍生物，更优选为以下化合物之一种或多种：奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁。

在进一步的实施方案中，所述青蒿素衍生物包括青蒿素的酯类衍生物、醚类衍生物、肽类衍生物、二聚体衍生物、及多聚体衍生物等，优选青蒿琥酯(Artesμnate，ATS)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)、蒿甲醚(artemether)、蒿乙醚。

在进一步的实施方案中，所述酚类化合物为选自以下之一种或多种：硝基酚化合物、氯酚化合物和氨基酚化合物，优选为选自硝基酚化合物和氨基酚化合物，更优选为选自以下化合物之一种或多种：2,4-二硝基苯酚、间硝基苯酚、对乙酰氨基酚及其衍生物。

在进一步的实施方案中，所述药物组合物还可包含一种或多种所述金属化合物，该金属化合物优选是选自以下之一种或多种的金属盐：铁盐、铜盐、锌盐、锰盐、铝盐，优选为铁盐和铜盐，更优选为选自以下之一种或多种的亚铁盐：二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁。

在进一步的实施方案中，所述药物组合物还可包含硬化剂和/或止痛剂。

在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物为局部给药剂型，优选为靶区注射和/或灌注剂型。其可以是溶液剂、混悬剂或者乳剂(如水包油或者油包水型乳剂)。

在进一步的实施方案中，根据本发明的局部给药剂型为液体制剂，其中所述水杨酸类化合物的浓度为1-15％w/v或2-15％w/v，优选为1-10％w/v、1.5-10％w/v或2-12％w/v，更优选为2-8％w/v、3-8％w/v或5-10％w/v；所述醇类硬化剂的浓度可以是55-95％v/v，优选60-80％v/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述有效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-10％w/v，而所述低效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-15％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述活性色素的浓度可以为1-8％w/v、优选1.5-7％w/v、更优选2-6％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10％w/v、优选2-10％w/v、更优选3-8％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，所述青蒿素衍生物的浓度为1-6％w/v、优选2-5％w/v、更优选3-5％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述酚类化合物的浓度可以为0.1-10％w/v、优选0.1-8％w/v，其中所述硝基酚化合物的浓度可以为0.1-1％w/v，而所述氨基酚化合物的浓度可以为2-10％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，所述金属化合物(例如铁盐或铜盐，尤其是亚铁盐)的浓度为0.02-2％w/v，其优选为0.05-1.5％w/v，更优选为0.1-1.2％w/v或0.1-1.6％w/v。

根据本发明的再一个方面，其还提供一种抑制肿瘤的方法，该方法包括向由此需要的个体局部给药根据本发明的药物组合物。

根据本发明的实施方案与现有技术相比具有以下优点：与现有的手术和放射线治疗相比，显示出同样髙效却更加友好的“治疗-患者身体”关系(对身体扰动更小)；与现有的全身化疗用药相比，可以在最小化的毒副作用下，显著性地提高疗效；与现有的局部化疗用药、尤其是硬化剂(例如无水乙醇)治疗相比，与病变周围组织间的相容性更高，且疗效更好；与现有技术中的含水杨酸类化合物的组合物相比，其不含药学上难以接受的物质，且通过使用最佳组合剂量使水杨酸类化合物的药效最大化、副作用最小化。此外，通过不同药理的药物(例如醇类液体硬化剂、抗肿瘤物质等)的引入也产生了额外的协同作用，从而可以进一步提高治疗的安全性和有效性。此外，该组合物制作方便、成本便宜，有助于使难以承受高额费用的广大人群也享受到有效治疗。

以下将参考附图对本发明进行更为详细的说明。

附图说明

图1给出一个以荷胰腺癌细胞裸鼠为模型的治疗实验结果，显示瘤区注射含固定浓度醇类液体硬化剂(75％)在0-15％变化乙酰水杨酸浓度时的抑瘤率曲线。

图2给出以荷肝癌细胞裸鼠为模型的一个治疗实验结果，其中图2A显示二氯化铁浓度固定在0.4％和在0-10％变化乙酰水杨酸浓度时的抑瘤率曲线，而图2B显示乙酰水杨酸浓度固定在3％和在0-1％变化二氯化铁浓度时的抑瘤率曲线。

具体实施方式

在本发明中，除非另有说明，在室温下的液相化合物浓度以体积/体积百分比浓度(V/V％)表示，固相化合物浓度以重量/体积百分比浓度(W/V％)表示。

本发明的组合物，在以下叙述中也被简写为组分1/组分2、或组分1/组分2/组分3。组合物中各组分的浓度，也可以被冠在组分之前。例如65％醇类液体硬化剂/10％水扬酸是指一个醇类液体硬化剂和水扬酸的组合物，其中醇类液体硬化剂的浓度为65％，水扬酸的浓度为10％。其它多组分组合物的简写方式以此类推。

根据本发明的一个方面，其提供一种包含药学上可接受的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的药物组合物，其中在该药物组合物中为所述水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的相对量(w:v)为(1-15):(55-95)，优选为(3-12):(60-90)，更优选为(5-10):(60-80)。本发明的发明人对于水杨酸类化合物进行了深入的研究，惊奇地发现具有上述比例的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的药物组合物能够在治疗或者抑制肿瘤方面具有出人意料的协同作用。

在本发明的范围中，术语“水杨酸类化合物”是指水杨酸及其衍生物。所述水杨酸(Salicylic acid)的化学名为2-羟基苯甲酸。所述水杨酸衍生物可以是本领域技术人员已知的任意合适者，其可以是包括例如含金属盐的水杨酸衍生物和不含金属盐的水杨酸衍生物。前者可以是包括例如水杨酸钠、水杨酸镁、水杨酸锌、金属元素络合物(例如阿斯匹林铜)等，后者可以是包括例如乙酰水杨酸(Aspirin阿斯匹林)、赖氨匹林、二氟苯水杨酸、氨基水杨酸、对氨基水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸、水杨酰苯胺、邻乙氧基苯酰胺、水杨酸苯酯、水杨酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、双水杨酸酯、双香豆素和它们的药物学上可接受的衍生物。以其中的阿斯匹林为例，水杨酸衍生物可以是包括例如其单一衍生物(例如一氧化氮阿司匹林、硫化氢阿司匹林等)、两种衍生物形成的衍生物(例如一氧化氮阿司匹林和硫化氢阿司匹林形成的一氧化氮硫化氢(NOSH)阿司匹林)。在根据本发明的药物组合物中，所述水杨酸类化合物更优选为选自水杨酸和以下化合物及其衍生物之一种或多种：乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、双香豆素。

根据本发明的一个实施方案，所述水杨酸类化合物优选为局部有效的水杨酸类化合物。在本发明的范围中，术语“局部有效”是指局部化疗指数(Q)大于2.0、优选大于3.0，其中Q＝LC₅₀/IC₅₀，式中LC₅₀为水杨酸类化合物在哺乳动物局部给药时的半数损害浓度，而IC₅₀为其在哺乳动物局部给药时半数有效浓度。局部有效的水杨酸类化合物例如包括水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、对氨基水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸等。

根据本发明的一个实施方案，所述水杨酸类化合物优选为低水溶性水杨酸类化合物，其中所述低水溶性水杨酸类化合物是指水溶解度低于2％的水杨酸类化合物。更优选的水杨酸类化合物为低水溶性但高醇溶性的水杨酸类化合物，其水溶解度低于2％而醇溶解度大于5％。这类水杨酸类化合物例如包括水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸等。

在本发明的范围内，术语“醇类液体硬化剂”是指在常温下处于液态的具有硬化剂性质的醇类化合物。众所周知,很多醇类物质都具有硬化剂的性质。醇类液体硬化剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者，例如包括以下之一种或多种：乙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、液体聚乙二醇(本发明中简称PEG)，优选为选自以下組之一种或多种：乙醇、丙二醇、液体聚乙二醇。醇类液体硬化剂在很多情况下可以起到溶剂的作用，但在局部给药和高浓度的条件下，其硬化剂作用对药理的影响更大。例如，乙醇正在成为肿瘤、尤其是非恶性肿瘤治疗中最常用的硬化剂之一。

根据本发明的一个实施方案中，所述药物组合物还可包含一种或多种有助于增强抑瘤效果的有效抗肿瘤物质。所述有效抗肿瘤物质包括在安全剂量内全身用药时可显示出有效抗肿瘤活性的活性物质，优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种：阿霉素、顺铂、紫杉醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶。

根据本发明的一个实施方案中，所述药物组合物还可包含在安全剂量内全身用药时未显示出有效抗肿瘤活性、但仍有一定抗肿瘤活性的低效抗肿瘤物质，优选选自以下之一种或多种：活性色素、喹啉类化合物、青蒿素衍生物、酚类化合物。

在本发明的范围中，术语“活性色素”是指药学上可以接受的能够使靶区有选择性的将特定波长的光吸收或反射的物质。所述活性色素可以是本领域技术人员已知的任意合适者，其可以例如包括活体染料、光敏剂和有色化疗药物。

在本发明的范围中，术语“活体染料”是指局部给药时能够使靶区内的结构上色、但其副作用又在药学上可以接受的范围之内的有机物。所述活体染料可以是本领域技术人员已知的任意合适者，例如可以包括以下之一种或多种有机染料及其衍生物：亚甲蓝(包括其水合物)、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、台盼蓝、碱性蓝、伊红、碱性品红、结晶紫、龙胆紫、中性红、詹纳斯绿B、番红等。以亚甲蓝为例，其衍生物通常也是染料，例如1，9-二甲基亚甲蓝、1-甲基亚甲蓝等。

在本发明的范围中，术语“光敏剂”是指在一定波长的光作用下可产生光动力效应而形成治疗作用的物质，其可以是本领域技术人员已知的任意合适者，例如可以是包括以下之一种或多种：混合卟啉类光敏剂、卟啉类化合物(例如卟啉、卟吩、红紫素、内源性卟啉)及其衍生物、酞菁类化合物、菌绿素类化合物、稠环醌类化合物、苯并卟啉衍生物、5-氨基酮戊酸、二氢卟吩类化合物等。

在本发明的范围中，术语“有色化疗药物”是指可被用作化疗药物的有色物质，其可以是本领域技术人员已知的任意合适者，例如可以是包括以下之一种或多种：硝基酚化合物、黄酮类化合物(例如花青素、染料木黄酮等)、姜黄素衍生物、异己烯基萘醌类化合物(例如紫草素类)等。

有的活性色素，例如亚甲兰，既是活体染料、光敏剂，又是有色化疗药物。

在根据本发明的药物组合物中，所述活性色素优选为选自活体染料，更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种：亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。

在本发明的范围中，术语“喹啉类化合物”是指药学上可以接受的含有喹啉环的喹啉衍生物，例如包括氯喹(chloroquine)、羟氯喹啉、氨甲喹、氨酚喹、奎宁、硝喹、哌喹、伯氨喹(primaquine)、扑疟喹、戊烷喹及其异构体和药物学上可接受的盐，其中优选为奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和药物学上可接受的盐，尤其是奎宁及其异构体和药物学上可接受的盐。

喹啉类化合物的药物学上可接受的盐包括酸加成盐，如无机酸加成盐和有机酸加成盐。无机酸加成盐的例子包括但不限于：氢卤酸盐(如盐酸盐，例如盐酸奎宁)、氢溴酸盐、氢碘酸盐、二盐酸盐(例如二盐酸奎宁)、二氢溴酸盐、二氢碘酸盐)、硫酸氢盐、硫酸盐、磷酸盐(例如磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸伯氨喹)等。有机酸加成盐的例子包括但不限于：碳酸氢盐或碳酸盐、乙基碳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、枸缘酸盐或单宁酸盐。

对于奎宁而言，其异构体例如可以是奎尼丁、辛可宁及辛可尼丁，其盐例如可以是盐酸奎宁、二盐酸奎宁、硫酸奎宁等。

上述喹啉类化合物可单独使用，也可组合使用，例如盐酸奎宁和其它喹啉衍生物的组合、二盐酸奎宁和其它喹啉衍生物的组合物、伯氨喹和其它喹啉衍生物的组合物、氯喹和其它喹啉衍生物的组合物。

根据本发明，所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种：奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物，优选为选自奎宁和奎宁衍生物，更优选为以下化合物之一种或多种：奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁。

在本发明的范围中，术语“青蒿素衍生物”是指青蒿素的衍生物。青蒿素(artemisinin，ART)是从菊科植物黄花蒿中提取的一种含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物，其分子式为C₁₅H₂₂O₅。所述青蒿素衍生物可以是本领域技术人员已知的任意合适者，其可以是包括青蒿素的酯类衍生物、醚类衍生物、肽类衍生物、二聚体衍生物、及多聚体衍生物等，优选青蒿琥酯(Artesμnate，ATS)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)、蒿甲醚(artemether)、蒿乙醚等。

在本发明的范围中，术语“酚类化合物”是指其化学结构中含有酚基团的化合物。所述酚类化合物可以是本领域技术人员已知的任意合适者，其可以是包括例如硝基酚化合物、氯酚化合物和氨基酚化合物。

所述硝基酚化合物可以包括例如2,4-二硝基苯酚(dinitrophenol，本发明中简记作DNP)、间硝基苯酚、邻硝基苯酚等和它们的衍生物。DNP衍生物可以包括例如2,4-二硝基-1-萘酚(玛蒂乌斯黄)、4,6-二硝基-邻甲酚(维多利亚黄)、酚类氟姜黄色素衍生物等。所述氯酚化合物可以包括例如2,4,5-三氯苯酚、3,3’,4’,5-四氯水杨酰苯胺(TCS)等和它们的衍生物。所述氨基酚化合物可以包括例如对乙酰氨基酚及其衍生物。

在根据本发明的药物组合物中，所述酚类化合物优选为选自硝基酚化合物和氨基酚化合物，更优选为选自以下化合物之一种或多种：2,4-二硝基苯酚、间硝基苯酚、对乙酰氨基酚及其衍生物。

在进一步的实施方案中，根据本发明的药物组合物还可包含除醇类液体硬化剂以外的其他硬化剂和/或止痛剂。

在本发明的范围中，术语“硬化剂”是指可引起局部组织产生无菌性炎症，致炎组织在生理修复的过程中不断被纤维化，最终使局部病变组织坏死、缩小和纤维化的化学制剂。该其他硬化剂例如可以是聚桂醇、鱼肝油酸钠、乙醇胺油酸酯、聚多卡醇、尿素、硫酸钠、平阳霉素、博来霉素等。

在根据本发明的药物组合物中，聚桂醇、鱼肝油酸钠、乙醇胺油酸酯、聚多卡醇、平阳霉素和博来霉素的浓度可以分别为0.5-3.0％，硫酸钠的浓度为5-30％，尿素的浓度为10-40％。

所述止痛剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者，以减轻患者的疼痛感，例如苯甲醇、盐酸普鲁卡因、三氯叔丁醇、盐酸利多卡等。如果存在，止痛剂的浓度例如可以是0.1-3％(重量)。例如苯甲醇的浓度可以为0.1-3％，盐酸普鲁卡因、三氯叔丁醇、盐酸利多卡的浓度可以分别为0.1-2％。

在本发明的范围中，术语“金属化合物”包括包含相应金属的金属盐和有机金属化合物(其不包括金属与有机酸形成的盐)，其中所述金属例如可以是铁、铜、镁、锌、锰、铝和钙中的一种或多种。该金属化合物优选为选自以下之一种或多种的金属盐：铁盐、铜盐、镁盐、锌盐、锰盐、铝盐和钙盐，优选为铁盐和铜盐。

所述盐可以是所述金属与无机酸或有机酸形成的盐。所述无机酸和有机酸例如包括硫酸、硝酸、磷酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、乙酸、苯甲酸、苯磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、环己氨磺酸、乙磺酸盐、甲酸、琥珀酸、蛋白琥珀酸、胆酸、延胡索酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、羟乙基磺酸、乳酸、富马酸、苹果酸、顺丁烯二酸、丙二酸、甲磺酸、甲基硫酸、烟酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、焦谷氨酸、糖二酸、硬脂酸、丁二酸、单宁酸、酒石酸、甲苯磺酸和三氟乙酸等。

具体对于铁盐而言，其包括铁(III)离子盐和亚铁(II)离子盐，其总称为铁盐。铁盐包括任何药物学上可以接受的铁盐，可以是铁离子或亚铁离子与上述无机酸或有机酸形成的盐。例如，亚铁离子盐包括二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁等。铁(I II)离子盐包括例如枸橼酸铁铵、右旋糖酐铁、蛋白琥珀酸铁。在根据本发明的药物组合物中，所述金属化合物优选为亚铁离子盐，更优选为选自以下之一种或多种的亚铁盐：二氯化铁、硫酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁。

所述金属化合物还包括金属有机化合物，例如转铁蛋白、含铁血红素、氨基酸络合铁、多糖铁等。

在进一步的实施方案中，根据本发明的药物组合物还可包含用以增加药物活性成分药效的免疫佐剂。所述免疫佐剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者，加入它以促进患病区内相关的有益于治疗肿瘤的抗原的活动，其例如可以是无机佐剂，如氢氧化铝、明矾等；微生物及其产物如分枝杆菌(结核杆菌、卡介苗)、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物(胞壁酰二肽)等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸(双链多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、异丙肌苷等；油剂，如费氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等；免疫刺激剂(卡介苗、棒状杆菌、内毒素、海藻糖、胸腺肽、OK432等)；细胞因子，如干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、集落刺激因子、趋化因子、胸腺素等；异种抗原，如灭活链球菌、人红细胞膜抗原、肿瘤浸润淋巴细胞、肿瘤疫苗等。如果存在，免疫佐剂的浓度例如为0.01-1％(重量)。

本发明的组合物，还可以任选包含其他治疗药物。所述其他治疗药物可以是本领域技术人员已知的任意合适者，加入它有利于进一步提高人或动物患者的治疗水平，例如提高药效、或者改善这些其他治疗药物的抗药性等。

在根据本发明的药物组合物中，其包含药物学上可接受的载体或赋形剂。所述载体或赋形剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者，其可例如包括以下之一种或多种：分散介质、防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、增粘剂、用于调节渗透压的盐和缓冲剂。所述增粘剂例如为羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯毗咯烷酮或明胶。所述增溶剂例如为葡甲胺、二甲基亚砜、甲酰胺、Tween80。所述防腐剂是例如抗氧化剂例(如抗坏血酸)或杀微生物剂(如山梨酸或苯甲酸)。

根据本发明的药物组合物可以是固体制剂、半固体制剂、液体制剂和气态制剂的剂型。所述制剂或剂型包括但不限于粉末剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、混悬剂、溶液剂、酏剂、糖浆剂。本领域技术人员会理解，根据所需剂量和药代动力学参数，可将本发明的化合物制成不同的制剂。更具体而言，本发明的药物组合物可以是注射剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片、贴膜剂、栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂。

根据本发明的药物组合物优选为局部给药剂型，优选为通过靶区注射给药的剂型。其可以是溶液剂、混悬剂或者乳剂(如水包油或者油包水型乳剂)。

在进一步的实施方案中，根据本发明的局部给药剂型为液体制剂，其中所述水杨酸类化合物的浓度为1-15％w/v或2-15％w/v，优选为1-10％w/v、1.5-10％w/v或2-12％w/v，更优选为2-8％w/v、3-8％w/v或5-10％w/v；所述醇类硬化剂的浓度可以是55-95％v/v，优选60-80％v/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述有效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-10％w/v，而所述低效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-15％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述活性色素的浓度可以为1-8％w/v、优选1.5-7％w/v、更优选2-6％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10％w/v、优选2-10％w/v、更优选3-8％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，所述青蒿素衍生物的浓度为1-6％w/v、优选2-5％w/v、更优选3-5％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，如果存在，所述酚类化合物的浓度可以为0.1-10％w/v、优选0.1-8％w/v，其中所述硝基酚化合物的浓度可以为0.1-1％w/v，而所述氨基酚化合物的浓度可以为2-10％w/v。

在进一步的实施方案中，在局部给药剂型的根据本发明的药物组合物中，所述金属化合物(例如铁盐或铜盐，尤其是亚铁盐)的浓度为0.02-2％w/v，其优选为0.05-1.5％w/v，更优选为0.1-1.2％w/v或0.1-1.6％w/v。

根据本发明的一个实施方案，本发明的组合物为溶液剂。该溶液剂可以是通过将组合物成分溶解在分散介质中而形成的，也可以是单独地将上述成分溶解在分散介质、然后混合而形成的。所述溶液的分散介质包括溶媒，优选在药学上适宜的亲水溶媒。术语“亲水溶媒”是指具有亲水性的溶媒，其包括例如水、水可混溶性有机溶剂、或者包含水和水可混溶性有机溶剂的溶媒系统。

根据本发明的一个实施方案，本发明的组合物为混悬剂。该混悬剂可以是通过将组合物成分悬浮于分散介质中而形成的混悬剂，也可以是单独地将上述成分悬浮于分散介质中、然后混合而形成的。所述悬浮液的分散介质可以本领域技术人员已知的任意合适者，例如常用于注射目的植物油、合成油或半合成油作为油组。植物油可以是例如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油和花生油。

以组合物溶液剂(例如注射剂)为例，其可按照以下方法来制备。

方法一：如果组合物中所含水杨酸类化合物、以及任选存在的其他成分(例如有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质、金属盐、其它硬化剂、止痛剂、赋形剂等)的所需浓度均在水溶浓度范围内时，则将这些原料直接加入注射用水和所需浓度的液体醇类硬化剂即可获得相应的注射剂。

方法二：如果组合物中所含水杨酸类化合物、以及任选存在的其他成分(例如金属盐、有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质、其它硬化剂、止痛剂、赋形剂等)的所需浓度有不在水溶浓度范围内者，则将这些原料溶于液体醇类硬化剂，再用水稀释至所需浓度即可获得相应的注射剂。

方法三：首先制备(例如通过上述方法)含全部组份的溶液，再将其制备(例如通过冻干工艺)为干粉，使用前将该干粉与含所需浓度的液体醇类硬化剂的溶媒混合形成组合物溶液。

方法四:首先制备(例如通过上述方法)含部份组份的溶液，再将其制备(例如通过冻干工艺)为干粉，使用前将该干粉与含有另外部份组份的溶液(例如含所需浓度的液体醇类硬化剂的溶液)混合形成组合物溶液。

以呼吸道给药剂型(例如喷雾剂)为例，其可在水杨酸类化合物、液体醇类硬化剂之外加入以下一种或多种赋形剂来制备其液体原液：聚山梨酯-80、苯扎氯铵、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠等。其制备方法可参考上述组合物溶液制备方法。

以腔道给药剂型(例如栓剂)为例，其可在水杨酸类化合物、液体醇类硬化剂之外加入以下一种或多种赋形剂来制备：棉籽油、杏仁油、橄榄油、青篙油、薄荷脑、冰片、增溶乳化剂等。其制备方法可参考上述组合物溶液制备方法。

按上述这些方法的原则，本领域技术人员可以采用任意合适的具体方法制备多种包含本发明组合物的局部给药制剂。例如，本发明的医用制剂中的变化包括：含不同种类和浓度的水杨酸类化合物和液体醇类硬化剂、含不同种类和浓度的物质，含不同种类和浓度的金属盐，含不同种类和浓度的其他成分(例如有效抗肿瘤物质、低效抗肿瘤物质、止痛剂、其他硬化剂等)。

在本发明的范围内，为增加本发明药物组合物在给药处的有效作用时间、提高其生物利用度，其例如可以以缓释剂型用药。本领域技术人员可以采用任意合适的具体方法制备多种包含本发明组合物的缓释剂型制剂。例如，本发明药物组合物的缓释剂型,可以通过在水杨酸类化合物和液体醇类硬化剂之外加入作为缓释载体或基质的微米粒子、纳米粒子、胶束和原位凝胶基质来制备。

众所周知,缓释制剂的初始释放量为20-50％。因而，本领域技术人员应当知道，缓释剂型通常以常规剂型的2-5倍剂量或浓度给药。例如，在本发明组合物的缓释剂型中，水杨酸类化合物的浓度可以为3-60％w/v，优选为5-50％w/v、更优选为5-40％w/v。

根据本发明的再一个方面，其还提供一种治疗肿瘤的方法，该方法包括向由此需要的个体局部给药根据本发明的药物组合物。

在本发明的范围内，“局部用药”是指其药物组成(活性组分及其浓度)可通过局部手段给用给靶区、且药物组成也适合于该靶区环境的要求从而产生疗效的药物。术语“靶”是指局部病变，“靶区”是指局部病变所在的区域。例如，当病变为肿瘤时，靶为肿瘤，靶区为瘤区(例如瘤体或/和药物可达瘤体的周边)。

在本发明中，所述肿瘤包括在以下一种或多种器官或组织中的肿瘤:乳腺、胰腺、胰岛、甲状腺、甲状旁腺、前列腺、肝、肺、肠、胃、睾丸、阴道、子宫、输卵管、卵巢、口腔、口咽、食道、头颈、鼻腔、鼻咽、喉、气管、支气管、汗腺、头发、皮肤、肛肠。

在本发明的范围内，术语“肿瘤”包括恶性肿瘤和非恶性肿瘤。所述恶性肿瘤包括例如乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、头颈癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、等等。所述非恶性瘤包括例如乳腺瘤、胰腺瘤、甲状腺瘤、前列腺瘤、肝瘤、肺瘤、肠瘤、口腔瘤、食道瘤、胃瘤、鼻咽瘤、喉瘤、睾丸瘤、阴道瘤、子宫瘤、输卵管瘤、卵巢瘤等。所述肿瘤除以上实体瘤以外，还包括血管瘤。

本发明的组合物以及该组合物的医用制剂还可与其它介入疗法、全身化疗、免疫疗法、光动力疗法、声动力疗法、手术干预或此类疗法的组合相组合施用以进一步提高疗效。

在本发明中，药物共用的组成-药效关系用Loewe等效应法原理进行考察。其以相加作用(additivism)为分界线，凡作用大于相加作用的定义为协同作用(synergism)，作用小于相加作用的定义为拮抗作用(antagonism)。在本发明的范围内，组合物的相加作用定义如下：其为该组合物中被增效的活性物质(水杨酸类化合物单药、或水杨酸类化合物和含铁化合物共用)的疗效(例如抑瘤率)的115％。发明人发现根据本发明的药物组合物在上述治疗方法中都具有此等协同作用。

基于在下文中更详细描述的研究，尽管具体机理尚待进一步研究，本发明的组合物显示出促进哺乳动物肿瘤中的相关结构(例如病变组织、病变细胞及参与构成它们的任一结构)的有效破坏(例如有效促进病变细胞凋亡、坏死、自噬等有利于其消失的活性)、从而达到治疗疾病的药学性质。

实施例

通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明，但不作为对本发明的限制。在以下实施例中，所有的实验均依照相关规定在细胞或实验动物上进行。如无特殊说明，所有实验均按常规方法进行。

以下具体实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中所用的部分试剂列于表1中。

表1

名称	CAS号
		一盐酸奎宁(盐酸奎宁)	6119-47-7
二盐酸奎宁	60-93-5
		磷酸哌喹	4085-31-8
伯氨喹	90-34-6
		乙酰水杨酸	50-78-2
水杨酸	69-72-7
		氟苯水杨酸	22494-42-4
布洛芬	15687-27-1
		蒿甲醚	71963-77-4
青蒿琥酯	88495-63-0
		2，4-二硝基苯酚	51-28-5
硫酸亚铁	7782-63-0
		氯化亚铁(四水)	231-843-4
葡萄糖酸亚铁	299-29-6
		氯化铜	10125-13-0
亚甲基蓝(碱性蓝9)	61-73-4
		亚甲基蓝(水合物)	7220-79-3
结晶紫	548-62-9
		中性红	553-24-2
专利蓝V	3536-49-0
		番红花红T	477-73-6
伊红Y	17372-87-1

在以下实施例中，受试肿瘤细胞包括：人肝癌细胞(HepG2)、人乳腺癌细胞(MDA-MB231)、人肺癌细胞(A549)、人甲状腺癌细胞(SW579)、人前列腺癌细胞(LNCaP/AR)、人胰腺癌细胞(PANC-1)、人结肠癌细胞(COLO205)、人头颈癌细胞(Fμda)、人鼻咽癌细胞(CNE1)、人胃癌细胞(BGC823)、卵巢癌(PA1)、皮肤癌细胞(A341)等。本发明的实施例的研究方法和结果也适用于其它肿瘤细胞。

在以下实施例中，除非另有说明，皮下移植瘤动物试验按药管当局颁发的试验指南进行。动物为6～8周龄、体重17.5-20.5g的雌性裸鼠(BALB/C-Nμde)。将上述受试肿瘤细胞皮下接种于裸鼠，待肿瘤长至所需体积(例如70-100mm³左右)，采用PEMS 3.2软件(四川大学华西公共卫生学院编制)随机区组为阴性对照组、阳性对照组和若干个研究组，每组8只裸鼠。

分组当日开始给药。试验设阴性对照组、阳性对照组和若干个研究组，分别加入阴性对照物、阳性对照物和若干个研究药物。阴性对照物为组合物溶媒，其给药方式和体积均与研究组相同。阳性对照物选自上述现有抗瘤药物，其给药方式为腹腔注射给药，其日给药剂量均按所选药物的惯例进行(例如5-氟尿嘧啶25mg/kg)。除另有说明，研究组均为瘤区注射研究药物，注射量由剂量和浓度确定。试验观察、测量和分析的项目，包括一般状态、体重、摄食量、肿瘤体积、瘤重等。

肿瘤体积计算公式如下：

TV＝l/2×a×b²，式中a表示肿瘤长度，b表示肿瘤宽度。

相对肿瘤体积计算公式如下：

RTV＝Vt/V₀，式中V₀为分组给药当天(即第一天)测量所得的肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。

相对肿瘤增殖率计算公式如下：

T/C(％)＝TRTV/CRTV×100，式中TRTV为阳性对照组或研究组的RTV，CRTV为阴性对照组的RTV。

肿瘤生长抑制率(本发明中简记为抑瘤率)计算公式如下：

抑瘤率(％)＝(TW-CW)/CW×100％，其中TW为阳性对照组或研究组的平均瘤重；CW为阴性对照组的平均瘤重。

研究组的基于相对肿瘤增殖率的药效评价标准为：T/C(％)>40为无效活性，T/C(％)≤40(但是>15％)并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有效活性(无优选药学活性)，T/C(％)≤20并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为优选活性。

研究组的基于抑瘤率的药效评价标准为：抑瘤率<40％为无效活性，抑瘤率≥40％(但是<75％)并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为有效活性，抑瘤率≥75％并经方差分析与阴性对照组相比P<0.05为优选活性。

在以下实施例中，实验均采用重复测量方差分析(Repeated Measμres ANOVA)分别对指标均数的组别差异进行统计学检验。组别差异有统计学意义时(P≤0.05)，采用最小显著差异法对各组与阴性对照组间差异进行比较。定量指标采用均数±标准误(X±SEM)描述。当LEVENE方差齐性检验提示方差不齐时(P≤0.05)，采用Mann-WhitneyΜ秩和检验(M-W法)比较组间差异。所有的统计分析，均在SPSS for Windows 13.0软件下完成。

实施例1：组合物的制备

使用前述制备方法，本实施例制备的部分组合物溶液列于表2。在本发明中，除非另有说明，组合物溶液中的各组分，在室温下的液体化合物浓度以体积百分比浓度(％)表示，固体化合物浓度以毫摩尔浓度(mM)表示。

表2

^*:在本发明所有实施例中，除非另有说明，所用醇类液体硬化剂为乙醇、PEG300和丙二醇的共用，它们的浓度比(％浓度:％浓度:％浓度)为1:1:1。例如，一个含75％醇类液体硬化剂的溶液中，乙醇、PEG300和丙二醇的浓度可以分别是25％、25％和25％，等等。

具体而言，例如，以最终10ml组合物溶液体积计，在室温下，按照表2所示的量量取相应的水杨酸类化合物、以及任选存在的其他成分(如含铁化合物二氯化铁、活体染料例如亚甲蓝，以及其它金属盐例如CμCl₂)的干粉加入8.5ml含所需量醇类液体硬化剂、或包含它们的水溶液中溶解，再加入其它液态添加剂(例如0.2ml苯甲醇)和注射用水使总体积达到10ml，混合均匀后分装为2ml/瓶备用，便制得组合物溶液。

其它剂型可参照上述方法制备。例如，喷雾剂的原液制备可从以上组合物溶液中加入本行业专业人员公知的辅料制得，如加入以下辅料：甘油(2.5％)、聚山梨酯-80(1.5％)、苯扎氯铵(0.02％)、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠(1.5％)。

为了保证组合物的组成稳定性，除可以加入相关稳定剂以外，还可将组合物中各成分以固态(例如冻干粉)或/和液态形式分别储放，在应用前混合均匀使用。

实施例2：用药方式对比研究

针对荷胰腺癌细胞裸鼠(瘤体体积65-100mm³)的动物实验。阳性对照组腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)(A组),每日一次,连续10日。2个灌服研究组分别给药4％赖氨匹林水溶液(B组)和4％赖氨匹林/24％醇类液体硬化剂组合物溶液(C组),每次灌服250μl，隔天一次，给药5次。阴性对照组瘤内注射生理盐水，2个瘤区注射研究组瘤内注射分别给药10％赖氨匹林水溶液(D组)和10％赖氨匹林/60％醇类液体硬化剂组合物溶液(E组),每次注射100μl，隔天一次，给药5次。停药后次日，对动物进行安乐死，解剖后测定抑瘤率。结果如下：A、B、C、D、E组的抑瘤率分别为61％、11％、13％、28％和49％。

使用实施例1中制备的其它组合物(例如表2中的组合物1-4)，也有类似结果。这些实验显示，醇类液体硬化剂对水杨酸类化合物的增效作用，在局部给药中明显高于全身用药中。

实施例3：醇类液体硬化剂/水杨酸类化合物组合物研究

针对荷肝癌细胞裸鼠(瘤体85-135mm³)的实验，阳性对照组(A组)腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)，每天注射一次，给药10次。阴性对照组瘤内注射生理盐水，研究组瘤内注射药物溶液(50-100μl),隔天一次，给药5次。停药后次日对动物进行处死和解剖，测定抑瘤率。

在一个实验中，4个研究组分别于瘤区注射以下研究药物：5％赖氨匹林水溶液(B组)、10％mM赖氨匹林水溶液(C组)、5％赖氨匹林/60％醇类液体硬化剂组合物(D组)、和10％赖氨匹林/60％醇类液体硬化剂组合物(E组)。在组合物中，60％醇类液体硬化剂中含1/3乙醇、1/3丙二醇和1/3PEG300。结果如下:A、B、C、D组的抑瘤率分别为68％、13％、11％、25％和43％，证实了该组合物的协同作用。

更多的动物试验显示，当赖氨匹林浓度在3-15％之间和醇类液体硬化剂浓度在50％-95％之间时，均可观察到醇类液体硬化剂对赖氨匹林的协同增效。当使用的醇类液体硬化剂为乙醇、PEG300、丙二醇之一种、二种混合物、或三种混合物时，在50％-95％浓度范围内也可以观察到类似的协同作用。

在另一个实验中，醇类液体硬化剂的浓度固定为70％，3个赖氨匹林/醇类液体硬化剂组合物(B、C、D组)中赖氨匹林浓度分别为4％、7％、10％，3个乙酰水杨酸/醇类液体硬化剂组合物(E、F、G组)中乙酰水杨酸浓度分别为2％、4％、10％。

当组合物中赖氨匹林和乙酰水杨酸的浓度分别为10％时，50％左右的动物分别出现明显的局部刺激反应。而当组合物中赖氨匹林和乙酰水杨酸的浓度分别为4％和2％时，50％左右的动物分别显示出有效抑瘤(前者平均抑瘤率20％、后者平均抑瘤率大于20％)。可见，在醇类液体硬化剂增效的条件下，乙酰水杨酸的局部化疗指数(Q)大于5.0，显然高于赖氨匹林的Q(2.5)。

就醇类液体硬化剂的增效作用而言，B、C、D、E、F、G组的抑瘤率分别为:20％、32％、49％、23％、53％、83％。醇类液体硬化剂对水杨酸类化合物的增效作用，对局部化疗指数(Q)大于3.0者明显高于Q小于3.0者。

更多的实验显示，水杨酸、二氟苯水杨酸等的Q均大于3.0。它们都是局部给药中的原药，而非前药。

在另一个实验中，4个研究组分别瘤区注射10％赖氨匹林/70％醇类液体硬化剂组合物(B组)、10％水杨酸镁/70％醇类液体硬化剂组合物(C组)、10％水杨酸/70％醇类液体硬化剂组合物(D组)和10％乙酰水杨酸/70％醇类液体硬化剂组合物(E组)。结果如下:B、C、D、E组的抑瘤率分别为49％、55％、85％和81％。

其中，赖氨匹林和水杨酸镁为水溶性水杨酸类化合物(溶解度大于2％)，而水杨酸和乙酰水杨酸为低水溶性水杨酸类化合物(溶解度小于2％)。这些实验也显示，醇类液体硬化剂对水杨酸类化合物的增效作用，对低水溶性水杨酸类化合物(例如水杨酸、乙酰水杨酸等)明显高于水溶性水杨酸类化合物(例如赖氨匹林、水杨酸镁等)。

茌另一个实殓中，5个研究组动物分别于瘤区注射利用前述制备方法配制的5个研究药物溶液。其中，醇类液体硬化剂浓度均为80％，而乙酰水杨酸浓度分别为1.5％、3％、5％、10％、15％。其结果示于图1。

图1中，最低浓度的组合物组(1.5％乙酰水杨酸/75％醇类液体硬化剂组合物)的抑瘤率为21％。当组合物中的乙酰水杨酸的瘤体注射浓度达到某一临界值(3％)以后，才显示出药效对其浓度的高度敏感，其抑瘤率迅速提高直至大于阳性对照物，出现优选疗效。

在另一个实验中，在醇类液体硬化剂的局部给药浓度为75％时，水杨酸的安全且被优选增效的浓度为3％-15％mM。

在上述实验及本发明以下实验中，还观察了本发明组合物的高浓度水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂(浓度分别在2-15％及以上和50-95％)的安全性。在安全剂量范围内，局部给药特别要关注局部刺激性。在瘤体注射时，上述高浓度组合物组均在注射部位出现明显的色泽变化和轻度的肌肉变性。在另一个相同的验证实验中，对给药停止后30天剖杀的裸鼠的注射部位进行了病理切片检查，结果显示研究组和阴性对照组的注射部位的差别不明显。

此外，另一组试验显示，通过靶区给药时，本发明的药物组合物在同样组合浓度下，一个较大的给药体积显示出更好的药学效果。如果靶区体积太大，为控制给药剂量，可以对其进行分部处理。注射剂的每次给药体积必须为欲处理部份体积的50％以上。当肿瘤足够小时，欲处理部份体积即为单个肿瘤体积。

此外，我们还研究了在本发明的组合物用于抗不同发育的肿瘤。在本发明的实施例中，除非另有说明，抗不同发育的肿瘤实验的研究方法如下。

裸鼠分为先接种鼠群和后接种鼠群。先接种鼠群先于后接种鼠群7天接种人肝癌细胞。在后接种鼠群接种后7天，进行裸鼠分组(每组8只)。先接种鼠群(瘤体体积70-135mm³)分为阴性对照组(A组)和研究组(B组)，后接种鼠群(瘤体体积35-65mm³)分为阴性对照组(C组)和研究组(D组)。A、B组瘤内注射给药70-100μl，C、D组瘤内注射给药30-70μl。

本实施例中，阴性对照物为生理盐水，研究药物为5％乙酰水杨酸/70％醇类液体硬化剂组合物。给药3次，隔为:1次。停药后10日解剖，D组和B组的抑瘤率分别为89％和42％。本发明的组合物不仅可应用于恶性肿瘤治疗，甚至于可用于完全去除有一定致癌风险的肿瘤，以防止其发展为恶性肿瘤。

在其它荷瘤动物试验、以及使用本发明的其它类似组合物(例如实施例1制备的组合物1-4)实验时，也可以观察到类似有效性和安全性结果。

实施例5：醇类液体硬化剂、水杨酸类化合物与含铁化合物的组合物研究

针对荷肝癌细胞裸鼠(瘤体85-135mm³)的实验，阳性对照组(A组)腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)，每天注射一次，给药10次。研究药物溶液均含75％醇类液体硬化剂，故以75％醇类液体硬化剂水溶液为阴性对照物。阴性对照组和研究组瘤内注射75-100μl，隔天给药1次，一共给药5次。停药后15日对动物进行安乐死和解剖，测定抑瘤率。

在一个实验中，在3个研究药物系列中，第一系列为乙酰水杨酸组，浓度分别为1.5％、3％、5％、7％、10％；第二系列组合物中的二氯化铁浓度均为0.4％，而乙酰水杨酸浓度分别为1.5％、3％、5％、7％、10％；第三系列组合物中的乙酰水杨酸浓度均为3％，二氯化铁浓度分别为0.02％、0.05％、0.1％、1％、2％。其结果示于图2，其中图2A显示的第二系列的抑瘤率曲线，而图2B显示的是第三系列的抑瘤率曲线。

在图2中，0.4％二氯化铁/1.5％乙酰水杨酸组和0.02％二氯化铁/3％乙酰水杨酸组的抑瘤率分别为27％和25％，分别高1.5％乙酰水杨酸组和3％乙酰水杨酸组疗效(抑瘤率17％和21％)115％以上，显示出协同增效作用。然而，这两个协同增效组合物的疗效却仍然明显低于阳性对照物(抑瘤率72％)。

在图2中，当组合物中的二氯化铁和乙酰水杨酸的瘤体注射浓度达到某一临界值(分别为0.05％和3％)后，才显示出药效对浓度的高度敏感，其抑瘤率迅速提高直至大于阳性对照物，出现优选疗效。

在另一个实验中，当固定组合物中的二氯化铁浓度为0.1％并在1.5-10％变化水杨酸浓度(1.5％、3％、5％、7％、10％)时，二氯化铁/水杨酸组合物与相同浓度的水杨酸单药相比较，抑瘤率高出115％以上。而当固定组合物中的水杨酸浓度为3％、在0.02-2％变化二氯化铁浓度(0.02％、0.05％、0.1％、1％、2％)时，二氯化铁/水杨酸组合物/醇类液体硬化剂与相同浓度的水杨酸/醇类液体硬化剂相比较，抑瘤率高出115％以上。该结果与上述二氯化铁/乙酰水杨酸组合物/醇类液体硬化剂的结果相似。

在其它荷瘤动物试验、以及使用本发明的其它水杨酸类化合物/含铁化合物组合物(例如实施例1制备的组合物5-7)实验时，也可以观察到类似有效性和安全性结果。

实施例5：醇类液体硬化剂、水杨酸类化合物与其它抗肿瘤物质的组合物研究

针对荷肝癌细胞裸鼠(瘤体85-135mm³)的实验，阳性对照组(A组)腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)，每天注射一次，给药10次。研究药物溶液均含75％醇类液体硬化剂，故以75％醇类液体硬化剂水溶液为阴性对照物。阴性对照组和研究组瘤内注射75-100μl。

在一个实验中，瘤内给药1次，停药后3日测定抑瘤率。

当固定组合物中的二氯化铁和亚甲蓝浓度(分别为0.4％和1％)并在1.5-10％变化乙酰水杨酸浓度(1.5％、3％、5％、7％、10％)时，二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/乙酰水杨酸和亚甲蓝/乙酰水杨酸相比较，抑瘤率高出115％以上。

当固定组合物中的二氯化铁和乙酰水杨酸浓度(分别为0.4％和3％)并在0.5-4％变化亚甲蓝浓度(0.5％、1％、1.5％、2％、4％)时，二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/乙酰水杨酸和亚甲蓝/乙酰水杨酸相比较，抑瘤率高出115％以上。

当固定组合物中的亚甲蓝和乙酰水杨酸浓度浓度(分别为1％和3％)并在0.02-2％变化二氯化铁浓度(0.02％、0.05％、0.1％、1％、2％)时，二氯化铁/亚甲蓝/乙酰水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/亚甲蓝、二氯化铁/二盐酸奎宁和亚甲蓝/二盐酸奎宁相比较，抑瘤率高出115％以上。

以以下组为例，0.4％二氯化铁/1％亚甲蓝/3％乙酰水杨酸、0.4％二氯化铁/3％乙酰水杨酸、1％亚甲蓝/3％乙酰水杨酸、0.4％二氯化铁/1％亚甲蓝的抑瘤率分别为84％、46％、55％、58％。

在另一个实验中，瘤内给药1次，停药后3日测定抑瘤率。当固定组合物中的二氯化铁和二盐酸奎宁浓度(分别为0.4％和3％)并在1.5-15％变化水杨酸浓度(1.5％、3％、5％、7％、10％)时，二氯化铁/二盐酸奎宁/水杨酸与相同组分浓度的二氯化铁/水杨酸、二氯化铁/二盐酸奎宁和二盐酸奎宁/水杨酸相比较，抑瘤率高出115％以上。

以以下组为例，0.4％二氯化铁/3％水杨酸和0.4％二氯化铁/3％二盐酸奎宁/3％水杨酸的抑瘤率分别为52％和87％。

在上述实验及本发明以下实验中，还观察了本发明的组合物中高浓度水杨酸类化合物和高浓度其它抗肿瘤物质(浓度分别在1.5-15％和0.5-6％)的安全性。在安全剂量范围内，局部给药特别要关注局部刺激性。在瘤体注射时，上述高浓度组合物组均在注射部位出现明显的色泽变化和轻度的肌肉变性。在另一个相同的验证实验中，对给药停止后30天剖杀的裸鼠的注射部位进行了病理切片检查，结果显示研究组的注射部位与正常的未注射部位的差别以经不明显。

在其它荷瘤动物试验、以及使用本发明的其它类似组合物(例如实施例1制备的组合物8-21)实验时，也可以观察到类似有效性和安全性结果。

实施例6：更多的肿瘤治疗研究

针对多种荷癌细胞裸鼠(癌细胞如前所述,瘤体85-165mm³)的实验，阳性对照组(A组)腹腔注射给药5-氟尿嘧啶水溶液(25mg/kg/次)，每天一次，给药10次。阴性对照物为生理盐水。研究药物分别为按前述方法配制的含以下组分的药物溶液(含75％醇类液体硬化剂):10％乙酰水杨酸/70％醇类液体硬化剂(B组)、10％水杨酸/70％醇类液体硬化剂(C组)。阴性对照组和研究组瘤内每次注射75-100μl，隔天一次，给药5次。停药后15日对动物进行安乐死和解剖，测定抑瘤率。结果如下。

针对荷甲状腺癌细胞裸鼠进行的一个实验，从试验第5天起，与阴性对照组相比，阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低，差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示，A、B、C组的抑瘤率分别为68％、81％、和83％。

针对荷乳腺癌细胞裸鼠进行的一个实验，从试验第5天起，与阴性对照组相比，阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低，差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示，A、B、C组的抑瘤率分别为63％、77％和85％。

针对荷鼻咽癌细胞裸鼠进行的一个实验，从试验第5天起，与阴性对照组相比，阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低，差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示，A、B、C组的抑瘤率分别为65％、81％和83％。

针对荷皮肤癌细胞裸鼠进行的一个实验，从试验第5天起，与阴性对照组相比，阳性对照组和研究组的肿瘤体积都降低，差异有统计学意义(P<0.05)。解剖结果显示，A、B、C组的抑瘤率分别为73％、87％和81％。

在另一个系列的荷癌细胞裸鼠实验中，阳性对照物、阴性对照物与上相同。研究药物分别为按前述方法配制的含以下组分的药物溶液(含75％醇类液体硬化剂):5％乙酰水杨酸(B组)、0.5％二氯化铁/5％乙酰水杨酸(C组)、和0.5％二氯化铁/2％亚甲蓝/5％乙酰水杨酸(D组)。解剖的抑瘤率结果与上述实验类似，显示出的有效性次序如下:D组>C组>B组>A。

在其它荷瘤裸鼠(接种肿瘤细胞分别为人肺癌细胞(A549)、人前列腺癌细胞(LNCaP/AR)、卵巢癌细胞(PA1)、头颈癌细胞(FADΜ))实验中，以及在使用实施1制备的组合物(例如表2中的组合物)时，也可以观察到类似的结果。

Claims (10)

1.一种包含药学上可接受的水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的抗肿瘤药物组合物，其中在该药物组合物中为所述水杨酸类化合物和醇类液体硬化剂的相对量(w:v)为(1-15):(55-95)，优选为(3-12):(60-90)，更优选为(5-10):(60-80)；且该药物组合物为适合于局部给药的剂型。

2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述水杨酸类化合物为选自以下的一种或多种：水杨酸、含金属盐的水杨酸衍生物和不含金属盐的水杨酸衍生物，优选为选自水杨酸和不含金属盐的水杨酸衍生物，更优选为选自水杨酸、乙酰水杨酸、二氟苯水杨酸、双水杨酸酯、对氨基水杨酸、N-苯基邻氨基苯甲酸、双香豆素中的一种或多种。

3.根据权利要求1或2的药物组合物，其中所述醇类液体硬化剂包括在常温下处于液态的具有硬化剂性质的醇类物质，优选为以下之一种或多种：乙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、液体聚乙二醇，更优选为选自以下组之一种或多种：乙醇、丙二醇、液体聚乙二醇。

4.根据权利要求1-3之一的药物组合物，其还包含有效抗肿瘤物质，优选为选自以下的一种或多种：阿霉素、顺铂、紫衫醇、长春新碱、环磷酰胺、5-氟脲嘧啶及其衍生物；和/或

在安全剂量内全身用药时未显示出有效抗肿瘤活性、但仍有一定活性的低效抗肿瘤物质，优选选自以下组之一种或多种物质：活性色素、喹啉类化合物、青蒿素衍生物、酚类化合物。

5.根据权利要求1-4之一的药物组合物，其中所述活性色素为选自以下之一种或多种：活体染料、光敏剂和有色化疗药物，优选为活体染料，更优选为选自以下化合物及其衍生物之一种或多种：亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、甲苯胺蓝、碱性蓝、伊红、结晶紫、中性红、詹纳斯绿B、番红；

所述喹啉类化合物选自以下之一种或多种：奎宁、氯喹、伯氨喹及其异构体和衍生物，优选为选自奎宁和奎宁衍生物，更优选为以下化合物之一种或多种：奎宁、一盐酸奎宁和二盐酸奎宁；

所述青蒿素衍生物包括青蒿素的酯类衍生物、醚类衍生物、肽类衍生物、二聚体衍生物、及多聚体衍生物，优选青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚；

所述酚类化合物为选自以下之一种或多种：硝基酚化合物、氯酚化合物和氨基酚化合物，优选为选自硝基酚化合物和氨基酚化合物，更优选为选自以下化合物之一种或多种：2，4-二硝基苯酚、间硝基苯酚、对乙酰氨基酚及其衍生物。

6.根据权利要求1-4之一的药物组合物，其中所述药物组合物还可包含硬化剂和/或止痛剂。

7.根据权利要求1-5之一的药物组合物，其中该药物组合物为靶区注射和/或灌注剂型。

8.根据权利要求1-7之一的药物组合物，其中所述水杨酸类化合物的浓度为1-15％w/v或2-15％w/v，优选为1-10％w/v、1.5-10％w/v或2-12％w/v，更优选为2-8％w/v、3-8％w/v或5-10％w/v；所述醇类硬化剂的浓度可以是55-95％v/v，优选60-80％v/v。

9.根据权利要求1-8之一的药物组合物，所述有效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-10％w/v，而所述低效抗肿瘤物质的浓度可以为0.1-15％w/v。

10.根据权利要求1-9之一的药物组合物，其中所述活性色素的浓度可以为1-8％w/v、优选1.5-7％w/v、更优选2-6％w/v；和/或

所述喹啉类化合物的浓度为1.5-10％w/v、优选2-10％w/v、更优选3-8％w/v；和/或

所述青蒿素衍生物的浓度为1-6％w/v、优选2-5％w/v、更优选3-5％w/v；和/或

所述酚类化合物的浓度可以为0.1-10％w/v、优选0.1-8％w/v，其中所述硝基酚化合物的浓度可以为0.1-1％w/v，而所述氨基酚化合物的浓度可以为2-10％w/v。