CN107561206A - 一种＂妇炎灵＂洗剂的薄层层析检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用薄层色谱鉴别方法对妇炎灵洗剂(由山银花、连翘、黄芩、黄柏、白花蛇舌草、大血藤、三棱、莪术、丹参、赤芍等十味药材经科学方法提取配制而成)进行定性鉴别的技术。属医药技术领域，其包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、色谱条件等步骤。本发明的方法是：采用本文建立的薄层色谱鉴别方法和材料，对妇炎灵洗剂进行定性鉴别，专属性强，稳定性好，可以用于妇炎灵洗剂产品的质量控制。
Description
技术领域
本发明属一种妇炎灵洗剂(由山银花、连翘、黄芩、黄柏、白花蛇舌草、大血藤、三棱、莪术、丹参、赤芍等十味药材经科学方法提取配制而成)的质量控制方法。
背景技术
妇科疾病特严重危害妇女的身心健康，是我国面临的重要公共卫生安全问题。妇科疾病并未随着我国生产力的发展和科技进步得到有效控制。卫生部基层卫生与妇幼保健司和北京大学第一医院联合在15个省、市的100个社区抽取已婚妇女9951例开展检查，结果妇科常见病患病率顺序依次为生殖道感染42.9％、月经紊乱34.5％(未绝经者中)和痛经15.5％(未绝经者中)、盆腔肿物3.9％、子宫脱垂/阴道壁膨出1.1％。现代临床医学认为，对于妇科炎症的治疗应多应用抗生素药物。但是在各类抗生素药物的应用中，存在着极大的局限性，且耐药菌株正在逐渐增多，出现副作用的概率越来越大，无法满足现今的炎症治疗需求，人们开始将目光放置于中医学之上，中药治疗不仅能够获取到极佳的疗效，且无明显的副作用，安全性极高。通过近10年的应用发展，中成药洗液已成为重要的医院妇科炎症外用治疗制剂。
妇炎灵洗剂是上世纪90年代，广西妇幼保健院医药工作人员在收集壮族民间验方和整理临床用药经验的基础上，创制出来的中药外用洗剂。该外用液体制剂是由山银花、连翘、黄芩、黄柏、白花蛇舌草、大血藤、三棱、莪术、丹参、赤芍等十味药材经科学搭配组成，具清热解毒、通络活血之功效，主要用于妇女盆腔炎，附件炎，子宫颈炎，霉菌，滴虫，真菌性阴道炎，外阴瘙痒以及男女溃疡性化脓性生殖器炎症等。目前该外用液体制剂未作质量控制标准，因此我们建立了本发明的质量检测方法，包括妇炎灵洗剂中连翘、黄芩和赤芍的薄层色谱鉴别方法。方法简便、准确度高、专属性强，采用本方法可以准确的把握有关药品质量，降低用药风险，提高产品质量。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种妇炎灵洗剂的薄层层析检测方法。
本发明以如下技术方案解决上述技术问题
本发明包括妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法、妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法、妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法。
具体方法为：
1.妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法
连翘苷对照溶液的配制：精密称取连翘苷对照品，加甲醇制成浓度为0.1～0.25mg/ml连翘苷对照品溶液；
连翘对照药材溶液的制备：取连翘对照药材粉末1g，加石油醚(30～60℃)20mL，超声处理15分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚，加甲醇20mL，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品20mL，用三氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并三次三氯甲烷萃取液，水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕褐色的斑点。
2.妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法
黄芩素对照品溶液的制备：精密称取黄芩素对照品，加甲醇制成浓度为0.5～0.8mg/ml的黄芩素对照品溶液；
汉黄芩素对照品溶液的制备：精密称取汉黄芩素对照品，加甲醇制成浓度为0.5～0.8mg/ml的汉黄芩素对照品溶液；
黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品10ml，用乙酸乙酯萃取3次，每次15ml，合并三次萃取液，水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶2∶2)为展开剂，预饱和30分后展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法
芍药苷对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为1～2mg/ml的芍药苷对照品溶液；
赤芍对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材粉末0.5g，加乙醇10mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品20ml，用乙酸乙酯萃取3次，每次30ml，合并三次乙酸乙酯萃取液，水浴蒸干，残渣用4ml甲醇溶解，作为妇炎灵供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
附图说明
图1是070201、070301、070302批妇炎灵连翘薄层色谱结果图。其中1.中检院连翘苷对照品；2.中检院连翘对照药材；3.070201批妇炎灵；4.070301批妇炎灵；5.070302批妇炎灵。
图2是070201、070301、070302批妇炎灵黄芩薄层色谱结果图。其中1.中检院黄芩素对照品；2.中检院汉黄芩素对照品；3.中检院黄芩对照药材；4.070201批妇炎灵；5.070301批妇炎灵；6.070302批妇炎灵。
图3是是070201、070301、070302批妇炎灵赤芍薄层色谱结果图。其中1.中检院芍药苷对照品；2.中检院赤芍对照药材；3.070201批妇炎灵；4.070301批妇炎灵；5.070302批妇炎灵。
具体实施方式
下面将结合实施例，进一步阐明本发明，所举实例只用于解释本发明，但不限定本发明的范围。
利用TLC法对妇炎灵洗剂进行定性鉴别，按照以下步骤进行：
1.仪器与材料
1.1仪器与试药
仪器：万分之一电子分析天平(型号为CP114，奥豪斯仪器上海有限公司)；暗箱式四用紫外分析仪(型号为ZF-8，上海嘉鹏科技有限公司)；硅胶G薄层板(批号为20160920，规格100×200mm，青岛海洋化工有限公司)；聚酰胺薄膜(规格10×20cm，购于浙江台州市路桥四甲生化塑料厂)。
试剂：薄层色谱用试剂均为分析纯；水为超纯水。
连翘苷对照品(批号为110821-201615)、黄芩素对照品(批号为111595-201607)、汉黄芩素对照品(批号为111514-201605)、芍药苷对照品(批号为110736-201035)均由中国食品药品检定研究院提供。
1.2供试样品
妇炎灵洗剂，广西妇幼保健院提供，批号：170201、170301、170302；
2.方法与结果
2.1.妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法
连翘苷对照溶液的配制：精密称取连翘苷对照品0.0025g，加甲醇10ml，制成浓度为0.25mgg/ml连翘苷对照品溶液。
连翘对照药材溶液的制备：取连翘对照药材粉末1g，加石油醚(30～60℃)20mL，密塞，超声处理15分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚，加甲醇20mL，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为对照药材溶液。
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取三个批次的妇炎灵洗剂(批号：170201、170301、170302)各20mL，用氯仿萃取3次，每次30mL，合并三次萃取液，85℃水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试品溶液。
薄层层析检查：照《中国药典》2015年版第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，结果见图1，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.2妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法
黄芩素对照品溶液的制备：精密称取黄芩素对照品0.0005g，加甲醇1ml制成浓度为0.5mg/ml的黄芩素对照品溶液。
汉黄芩素对照品溶液的制备：精密称取汉黄芩素对照品0.0005g，加甲醇1m制成浓度为0.5mg/ml的汉黄芩素对照品溶液。
黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为对照药材溶液。
妇炎灵供试品溶液的制备：取三个批次的妇炎灵洗剂(批号：170201、170301、170302)各10mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次15mL，合并三次萃取液，85℃水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试品溶液。
薄层层析检查：照《中国药典》2015年版第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶2∶2)为展开剂，预饱和30分后展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图2，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.3.妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法
赤芍对照品溶液的制备：称取芍药苷对照品0.0020g，加甲醇1ml，制成浓度为2mg/ml的芍药苷对照品溶液。
赤芍对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材粉末0.5g，加乙醇10mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。
妇炎灵供试品溶液的制备：取三个批次的妇炎灵洗剂(批号：170201、170301、170302)各20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次30mL，合并三次萃取液，85℃水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试品溶液。
薄层层析检查：照《中国药典》2015年版第四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，结果见图3，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
结论
本专利提出的薄层层析检查方法，可以对妇炎灵洗剂中连翘、黄芩和赤芍药材进行鉴别检查，可为产品提供可靠、准确且操作简单的质量控制方法，确保产品的质量和疗效，保证患者用药安全。
Claims (2)
1.一种用于妇炎灵洗剂(由山银花、连翘、黄芩、黄柏、白花蛇舌草、大血藤、三棱、莪术、丹参、赤芍等十味药材经科学方法提取配制而成)的薄层层析检测方法，其特征在于该方法包括：
(1)妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法；
(2)妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法；
(3)妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法。
2.如权利1所述的妇炎灵洗剂的薄层层析检测方法，其特征在于妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法、妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法、妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法如下：
(1)妇炎灵洗剂中连翘的薄层色谱鉴别方法：
连翘苷对照溶液的配制：精密称取连翘苷对照品，加甲醇制成浓度为0.1～0.25mg/ml连翘苷对照品溶液；
连翘对照药材溶液的制备：取连翘对照药材粉末1g，加石油醚(30～60℃)20mL，超声处理15分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚，加甲醇20mL，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品20mL，用三氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并三次三氯甲烷萃取液，水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕褐色的斑点；
(2)妇炎灵洗剂中黄芩的薄层色谱鉴别方法
黄芩素对照品溶液的制备：精密称取黄芩素对照品，加甲醇制成浓度为0.5～0.8mg/ml的黄芩素对照品溶液；
汉黄芩素对照品溶液的制备：精密称取汉黄芩素对照品，加甲醇制成浓度为0.5～0.8mg/ml的汉黄芩素对照品溶液；
黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品10ml，用乙酸乙酯萃取3次，每次15ml，合并三次萃取液，水浴蒸干，残渣用4mL甲醇溶解，作为供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶2∶2)为展开剂，预饱和30分后展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)妇炎灵洗剂中赤芍的薄层色谱鉴别方法
芍药苷对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为1～2mg/ml的芍药苷对照品溶液；
赤芍对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材粉末0.5g，加乙醇10mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；
妇炎灵洗剂供试样液的配制：取本品20ml，用乙酸乙酯萃取3次，每次30ml，合并三次乙酸乙酯萃取液，水浴蒸干，残渣用4ml甲醇溶解，作为妇炎灵供试样液；
薄层层析检查：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Jiu Jianhua Inventor after: Zhao Gan Inventor after: Wang Shaojun Inventor after: Chen Lu Inventor after: Song Zhijun Inventor after: Yan Bingxiong Inventor after: Wu Wuwei Inventor after: Liu Xihui Inventor after: Liu Yu Inventor after: Lan Mingsheng Inventor after: Wang Xijun Inventor before: Yan Bingxiong Inventor before: Jiu Jianhua Inventor before: Wang Xijun Inventor before: Chen Lu Inventor before: Liu Xihui Inventor before: Liu Yu Inventor before: Wu Wuwei Inventor before: Lan Mingsheng Inventor before: Song Zhijun Inventor before: Zhao Gan Inventor before: Wang Shaojun |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180109 |