CN107540587B - 帕立骨化醇的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种帕立骨化醇的纯化方法，该方法不需要加入晶种，将帕立骨化醇粗品溶入丙酮、水的混合溶剂中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下冷却析晶；其中，帕立骨化醇和混合溶剂的用量比为1:20‑1:80(g/ml)。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种适于工业生产的帕立骨化醇的纯化方法。
背景技术
帕立骨化醇(Paricalcitol，化学名：19-去甲(nor)-1α，3β，25-三羟基-9，10-secoergosta-5(Z)，7(Z)，22(E)-三烯，又称为19-去甲-1，25-二羟基维生素D2)是一种合成的、生物活性的骨化三醇的维生素D类似物，其侧链(D2)和A(19-去甲)环进行了修饰。帕立骨化醇通过结合维生素D受体来抑制甲状旁腺激素(PTH)的分泌(D.M.Robinson，L.J.Scott，Drugs，2005，65(4)，559-576)，是用于预防和治疗继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)的药物，它对接受透析和移植手术前的III及IV期慢性肾脏疾病(CKD)患者的SHPT显示出预防及治疗疗效，已成为透析患者最广泛使用的SHPT预防及治疗药物。
帕立骨化醇的分子式为C27H44O3，相应的分子量为416.65。其为一种白色、晶体粉末，并且具有下列结构式：
帕立骨化醇的首次合成在WO9010620中披露，其以25-二羟基维生素D2为原料，首先转化成1α，25-二羟基-3，5-环维生素D2，再经过多步反应制得帕立骨化醇。
US5281731，US5086191采用了汇聚的策略对帕立骨化醇进行合成，该方法利用奎尼酸作为原料制备片段一，将VD2经过氧化制得片段二，最后将片段一与片段二的链接产物和侧链进行反应，从而制得帕立骨化醇，具体路线如下：
根据US5281731，US5086191提供的方法制备帕立骨化醇具有多个缺点：
(1)帕立骨化醇含有多种构型的异构体存在，其合成中间体片段一和中间体3都会产生差向异构化，而产生大量杂质，US5281731、US5086191和现有文献均未对此做出研究。
(2)US5281731，US5086191两篇专利中采用HPLC法来分离异构体和纯化最终化合物，但帕立骨化醇极性大，且反应产物中的异构体杂质的结构与帕立骨化醇的结构高度相似，因此难以使用HPLC进行纯化，并且HPLC作为制备型方法通常不适用在工业规模上应用。
(3)US5086191中没有公开制备帕立骨化醇的产率。
出于人用药安全考虑，在药物活性成分的产品商业化之前，国内和国际药品监管机构都会建立很低的未知杂质质控限度。通常已知杂质的质控限度为0.15％，但未知杂质的质控限度通常会小于0.10％.因此在原料药的制备过程中产品的纯度非常重要。
众所周知，原料药中的杂质可能来自于原料药的制备过程和原料药的自身降解，因此控制原料药的制备工艺，使杂质尽可能少的引入，是控制杂质含量的重要方面。另外，我们还可以通过合适的纯化手段来去除原料药中的杂质。例如，ICH Q7A指南要求原料药生产企业在原料药的制备过程中可通过采用高纯度的的原材料，控制工艺参数，如温度，压力，时间、化学计量比等，以及采用纯化步骤，如结晶，蒸馏和液-液萃取，来使原料药中的杂质含量低于质控限度。
中国专利申请CN200680026018.2中公开了在不同的溶剂中对帕立骨化醇进行超声溶解，对所得帕立骨化醇溶液进行蒸发浓缩，然后加入晶种或直接进行冷却析晶，以达到纯化的目的，并给出了最优选溶剂为丙酮。但该方法溶解后要经过蒸发浓缩步骤，有的技术方案中还需要加入晶种，操作繁琐；且该方法使用的有机溶剂量大，环境不友好，成本高，不适合工业化大生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种适用于工业生产的帕立骨化醇的纯化方法，该方法通过在混合溶剂中热溶帕立骨化醇，在不加晶种的情况下，缓慢冷却析晶，得到帕立骨化醇固体，所得的帕立骨化醇晶型好、纯度高；该方法操作简便、有机溶解使用量小，环境友好，成本低，适于工业生产。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
本发明提供一种帕立骨化醇的纯化方法，该方法不需要加入晶种，将帕立骨化醇粗品溶入丙酮、水的混合溶剂中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下冷却析晶。
其中，帕立骨化醇和混合溶剂的用量比为1:20-1:80(g/ml)，进一步优选为1:40-1:60(g/ml)。
其中，所述混合溶剂中丙酮与水的体积比为10:1-3:1，进一步优选为10:1-6:1。
该方法中，所述帕立骨化醇粗品可以是市售的产品，也可以是本发明人制备得到的粗品，优选以下方法得到的帕立骨化醇粗品。
一种帕立骨化醇粗品的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将化合物1溶于有机溶剂中，加入强碱，室温搅拌，反应结束后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得化合物2；
(2)取化合物2溶于二氯甲烷中，氩气氛围下加入戴斯-马丁氧化剂
(Dess-Martin-periodinane，DMP)，室温搅拌反应，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠水溶液和饱和亚硫酸钠溶液，分层，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3；
(3)取化合物3溶于无水四氢呋喃，氩气氛围冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液，向上述反应液中加入化合物4的四氢呋喃溶液，搅拌至反应结束，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5；
(4)取化合物5溶于四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵三水合物，回流反应至反应基本结束，加入纯化水，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品。
上述帕立骨化醇制备方法的反应路线，具体如下：
上述制备方法中，TBDMS为叔丁基二甲基硅烷基；TES为三乙基硅烷基；Ac为乙酰基。
前述的帕立骨化醇的制备方法，其中，步骤(1)中所述有机溶剂为甲醇、乙醇；强碱为甲醇钠、氢氧化锂、氢氧化钠；化合物1与强碱摩尔比为1:2-1:8。
前述的帕立骨化醇的制备方法，其中，步骤(2)中还可以加入碱性催化剂，碱性催化剂可以是K2CO3，KHCO3，Na2CO3，NaHCO3等无机碱，也可以是三乙胺、吡啶等有机碱，优选K2CO3，KHCO3，Na2CO3，NaHCO3；化合物2：DMP：碱性催化剂的摩尔比为1:1.5:2-1:8:16。
前述的帕立骨化醇的制备方法，其中，步骤(3)中加入化合物4的四氢呋喃溶液后，搅拌反应的反应温度为-78℃-0℃，进一步优选为-50℃--10℃。
前述的帕立骨化醇的制备方法，其中，步骤(4)中化合物5与四丁基氟化铵三水合物(TBAF)的摩尔比为1:1.5-1:7。
本发明还提供一种高纯度的帕立骨化醇的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将化合物1溶于有机溶剂中，加入强碱，室温搅拌，反应结束后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得化合物2；
(2)取化合物2溶于二氯甲烷中，氩气氛围下加入戴斯-马丁氧化剂
(Dess-Martin-periodinane，DMP)，室温搅拌反应，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠水溶液和饱和亚硫酸钠溶液，分层，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3；
(3)取化合物3溶于无水四氢呋喃，氩气氛围冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液，向上述反应液中加入化合物4的四氢呋喃溶液，搅拌至反应结束，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5；
(4)取化合物5溶于四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵三水合物，回流反应至反应基本结束，加入纯化水，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品；
(5)将帕立骨化醇粗品加入丙酮、水的混合溶剂中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下冷却析晶。
上述制备方法中，TBDMS为叔丁基二甲基硅烷基；TES为三乙基硅烷基；Ac为乙酰基。
其中，步骤(1)中所述有机溶剂为甲醇、乙醇；强碱为甲醇钠、氢氧化锂、氢氧化钠；化合物1与强碱摩尔比为1:2-1:8。
其中，步骤(2)中还可以加入碱性催化剂，碱性催化剂可以是K2CO3，KHCO3，Na2CO3，NaHCO3等无机碱，也可以是三乙胺、吡啶等有机碱，优选K2CO3，KHCO3，Na2CO3，NaHCO3；化合物2：DMP：碱性催化剂的摩尔比为1:1.5:2-1:8:16。
其中，步骤(3)中加入化合物4的四氢呋喃溶液后，搅拌反应的反应温度为-78℃-0℃，进一步优选为-50℃--10℃。
其中，步骤(4)中化合物5与四丁基氟化铵三水合物(TBAF)的摩尔比为1:1.5-1:7。
其中，步骤(5)中混合溶剂中丙酮与水的体积比为10:1-3:1，优选为10:1-6:1；帕立骨化醇和混合溶剂的用量比为1:20-1:80帕立骨化醇/溶剂(g/ml)，进一步优选为1:40-1:60帕立骨化醇/溶剂(g/ml)。
发明人在实验过程中发现，在实验过程中会产生大量的帕立骨化醇异构体杂质B，其结构式如下式所示：
由于杂质B几乎具有与最终产物帕立骨化醇相同的结构，且其极性也近似，所以很难使用一般纯化手段来去除。另外，帕立骨化醇的高极性使得其难以使用HPLC法进行纯化并制备得到固体。因此，发明人思考是否可以通过控制反应条件，来降低杂质B的产生，然后通过重结晶手段即能得到高纯度的帕立骨化醇。
经过研究发现，化合物2氧化成醛的步骤、化合物3与侧链4反应制备化合物5的步骤，是关键的质控步骤，通过控制该两步反应的反应条件，可以明显降低终产物帕立骨化醇粗品中杂质B的含量。
虽然，选择性氧化伯醇成醛，存在各种方法，例如基于铬的氧化、基于高价有机碘的氧化、基于DMSO或DMS的氧化以及含TEMPO的组合试剂的氧化(参见CN102131773A说明书第52页)，但化合物2氧化成醛的方法主要是通过swern氧化来进行的。例如，CN102131773A说明书第52页[0578]段，New approach to paricalcitol synthesis，Chinese ScienceBulletin,2012,57:1616-1619中所公开的方法。
发明人经过深入的实验研究发现，在氧化制备化合物3的过程中会产生化合物3的差向异构体杂质3b，且使用不同的氧化试剂对化合物2进行氧化时，得到化合物3的收率和差向异构体杂质3b的含量会有很大差别。
实验条件探索的开始阶段，发明人采用了已有文献报道的swern氧化方法来制备化合物3(参见CN102131773A说明书第52页[0578]段)，将化合物2溶于二氯甲烷中，在-78℃加入DMSO和草酰氯的混合物。搅拌30min后，加入三乙胺，继续搅拌至反应完全。发明人发现，该方法不仅需要在-78℃下反应，其不利于工艺生产，而且利用该方法制备得到的化合物3含有大量的差向异构体3b。经过HPLC分析发现，差向异构体3b占反应产物的30％左右。差向异构体3b经过进一步的反应，可以产生帕立骨化醇异构体杂质B。
接下来，发明人利用PCC(氯铬酸吡啶鎓盐)作为氧化剂，在二氯甲烷中对化合物2进行氧化反应，在TLC点板时，发明人发现原料化合物2能够基本反应完全，但是在实际后处理中，铬的副产物(H2CrO3)会和吡啶一起形成粘稠状沉淀，包裹产物，使得产物的分离产率只有30％～60％，即使加入大量的硅藻土也无法提高产物的分离产率。
接着，发明人尝试用TEMPO/NaClO4/NaBr对化合物2进行氧化，该反应能够在室温下进行，且该氧化剂价格相对较低，应该是一个良好的适应于工业生产的试剂。但遗憾的是，经过大量实验，发明人最终发现TEMPO/NaClO4/NaBr无法氧化化合物2以得到化合物3的醛。
最后，发明人尝试了高价有机碘化合物戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin-periodinane，DMP)来氧化化合物2。将化合物2溶于二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP，室温搅拌至反应结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液和饱和亚硫酸钠溶液，分层，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3，经过HPLC分析得到的油状物3中差向异构体杂质3b的含量低于1.0％。另外发明人发现利用DMP作为氧化剂时，反应进行不完全，反应速率慢，所以发明人尝试了加入碱作为催化剂，发明人发现加入有机碱或者无机碱均可以加快反应进程，但是加入含N的有机碱如三乙胺、吡啶等，会使反应产物中差向异构体杂质3b的含量上升。因此，优选加入K2CO3、KHCO3、Na2CO3、NaHCO3等无机碱，可以加快反应进程、提高反应产率，但不会增加差向异构体杂质3b的产生。
发明人发现，利用高纯度的化合物3与高纯度的侧链4反应，还是会产生含量较高的差向异构体杂质B。经过研究发现，在化合物3与侧链4反应会产生异构体杂质5b，5b经过进一步的水解，进而得到差向异构体杂质B。
为了尽可能降低化合物5中5b的含量，发明人对反应的实验条件进行了大量的筛选，最终发现步骤(3)中反应温度对5b的产生影响较大，化合物3与化合物4的反应温度应控制在-78～0℃时，才能保证异构体杂质5b基本不产生。
本发明的优点在于：本发明选用一定比例的丙酮和水的混合溶剂作为帕立骨化醇的重结晶溶剂，得到的帕立骨化醇纯度高、性状好。与中国专利申请CN200680026018.2相比，本发明的方法在溶解后不需要经过浓缩、加晶种步骤，操作简便，且有机溶剂使用量小，环境友好，生产成本低，适于工业化生产。另外，该方法克服了帕立骨化醇不适宜用制备高效液相进行纯化的问题，同时也解决了纯化帕立骨化醇的成本高、不适用于工业化生产的问题。
另外，本发明提供的高纯度的帕立骨化醇的制备方法，在反应步骤(2)中选用DMP作为氧化剂来制备化合物3，大大减少了化合物3差向异构体3b的生成；在反应步骤(3)中通过控制反应温度，大大降低了反应产物中差向异构体5b的含量，通过控制反应步骤(2)和反应步骤(3)中的催化剂、反应温度来从源头上控制帕立骨化醇杂质B的产生，降低了帕立骨化醇粗品中差向异构体杂质B的含量。再结合上述纯化方法，通过从源头上控制帕立骨化醇杂质B的产生和上述纯化方法的结合，从而能够得到更高纯度的帕立骨化醇，更适用于工业生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但本发明绝不局限于这些实施例。
HPLC方法
柱：Hypersyl Gold(250×4.6 5μm)
流动相：(A)水(95％)
(B)乙腈(5％)
梯度：0-10min(A)等梯度
10-30min(B)从0增加到55％
30-40min(A)等梯度
30-40min(B)从55％增加到100％
检测：252nm
流速：2mL/min
检测极限：0.02％
化合物2的制备
实施例1
取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml甲醇，加入氢氧化锂(33mg，1.38mmol)，室温搅拌5h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(352mg)，收率90.6％。
实施例2
取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml乙醇，加入氢氧化钠(110.4mg，2.76mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(373.7mg)，收率96.2％。
实施例3
取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml乙醇，加入氢氧化锂(132mg，5.52mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(372.2mg)，收率95.8％。
实施例4
取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml甲醇，加入甲醇钠(223.7mg，4.14mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(365.2mg)，收率94.0％。
化合物3的制备
实施例5
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)，室温搅拌2小时后，TLC点板检测，反应16h后，有部分原料仍未反应完全，停止反应进程。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(271.3mg)，收率78％，经过HPLC检测，化合物3的含量为98.9％，差向异构体3b含量为0.4％。
实施例6
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)、Et3N(125.5mg，1.24mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌6小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(295.6mg)，收率85％，经过HPLC检测，化合物3的含量为98.1％，差向异构体3b含量为1.2％。
实施例7
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)、NaHCO3(104.2，1.24mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌6小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(306.1mg)，收率88％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.4％，差向异构体3b含量为0.3％。
实施例8
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(1.04g，2.48mmol)、Na2CO3(788.6mg，7.44mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(313.0mg)，收率90％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.1％，差向异构体3b含量为0.4％。
实施例9
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(1.04g，2.48mmol)、KHCO3(496.5mg，4.96mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(320.0mg)，收率92％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.6％，差向异构体3b含量为0.2％。
实施例10
取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(2.09g，4.96mmol)、K2CO3(1.37g，9.92mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(316.5mg)，收率91％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.1％，差向异构体3b含量为0.3％。
化合物5的制备
实施例11
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌18小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(89.6mg)，收率20％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.5％，差向异构体5b含量为0.3％。
实施例12
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-50℃，-50℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(179.2mg)，收率40％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.6％，差向异构体5b含量为0.3％。
实施例13
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-20℃，-20℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(313.7mg)，收率70％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.3％，差向异构体5b含量为0.4％。
实施例14
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-10℃，-10℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(322.6mg)，收率72％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.0％，差向异构体5b含量为0.8％。
实施例15
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至0℃，0℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(331.6mg)，收率74％，经过HPLC检测，化合物5的含量为98.1％，差向异构体5b含量为1.5％。
帕立骨化醇粗品的制备
实施例16
取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.105g，0.35mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(76.6mg)，收率79.9％。
实施例17
取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.483g，1.61mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(74.8mg)，收率78.1％。
实施例18
取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.330g，1.1mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(80.0mg)，收率83.5％。
帕立骨化醇粗品的重结晶
实施例19
将500mg帕立骨化醇粗品溶入10ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，趁热过滤，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇444.5mg，收率为88.9％，纯度为99.75％，异构体杂质B含量为0.12％。
实施例20
将500mg帕立骨化醇粗品溶入15ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝9：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇421.0mg，收率为84.2％，纯度为99.82％，异构体杂质B含量0.10％。
实施例21
将500mg帕立骨化醇粗品溶入20ml(1：40)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇416.0mg，收率为83.2％，纯度为99.95％，异构体杂质B含量0.03％。
实施例22
将500mg帕立骨化醇粗品溶入25ml(1：50)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝9：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇412.5mg，收率为82.5％，纯度为99.97％，异构体杂质B含量0.01％。
实施例23
将500mg帕立骨化醇粗品溶入30ml(1：60)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇411.5mg，收率为82.3％，纯度为99.99％，异构体杂质B含量0.009％。
实施例24
将500mg帕立骨化醇粗品溶入20ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝8：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇417.5mg，收率为83.5％，纯度为99.92％，异构体杂质B含量0.08％。
实施例25
将500mg帕立骨化醇粗品溶入25ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝7：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇146.2mg，收率为81.2％，纯度为99.93％，异构体杂质B含量0.05％。
实施例26
将500mg帕立骨化醇粗品溶入30ml(1：60)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝6：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇402.5mg，收率为80.5％，纯度为99.92％，异构体杂质B含量0.06％。
实施例27
将500mg帕立骨化醇粗品溶入35ml(1：70)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝3：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇391.0mg，收率为78.2％，纯度为99.93％，异构体杂质B含量0.04％。
实施例28
将500mg帕立骨化醇粗品溶入40ml(1：80)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇360.5mg，收率为72.1％，纯度为99.96％，异构体杂质B含量0.02％。
对比实施例
化合物3的制备
对比实施例1
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，降温至-78℃，氩气氛围下加入草酰氯(118.04mg，0.93mmol)，和DMSO(363.3mg，4.65mmol)的混合物，搅拌30min后，加入三乙胺(94.1mg，0.93mmol)，室温搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(306.1mg)，收率88％，经过HPLC检测，差向异构体3b含量为28.5％。
对比实施例2
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，降温至-78℃，氩气氛围下加入草酰氯(157.4mg，1.24mmol)，和DMSO(193.7g，2.48mmol)的混合物，搅拌30min后，加入三乙胺(1.25g，12.4mmol)，室温搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(316.5mg)，收率91％，经过HPLC检测，差向异构体3b含量为30.8％。
对比实施例3
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(200.5mg，0.93mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(175.3mg)，收率50.4％。
对比实施例4
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(267.3mg，1.24mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(194.4mg)，收率55.9％。
对比实施例5
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(401mg，1.86mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(134.3mg)，收率38.6％。
对比实施例6
取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入TEMPO(15.6mg，0.1mmol)，NaClO4(90.6mg，0.74mmol)，NaBr(0.39g，0.12mmol)室温搅拌2小时后，TLC点板检测，反应未发生，延长反应时间，16小时后，反应仍未发生。
化合物5的制备
对比实施例7
取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温，室温搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(313.7mg)，收率70％，经过HPLC检测，化合物5的含量为76.8％，差向异构体5b含量为23％。
帕立骨化醇粗品的重结晶
对比实施例8
在超声波发生器中在28℃下经15分钟的时间将540mg帕立骨化醇溶解于81ml丙酮中，经玻璃棉将澄清溶液过滤到另一烧瓶中，且加入8ml水。随后通过蒸发将溶液浓缩到丙酮体积为54ml(根据重量控制)。将溶液冷却到-18℃且维持所述温度16小时，将晶体过滤且用20ml冷(-18℃)丙酮洗涤，随后在烘箱中在28℃下真空干燥6小时，得到300mg帕立骨化醇，收率为55.6％，纯度为99.78％，异构体杂质B含量0.14％(CN200680026018.2实施例2)。
对比实施例9
在超声波发生器中在28℃下经15分钟的时间将500mg帕立骨化醇溶解于75ml丙酮中，经玻璃棉将澄清溶液过滤到另一烧瓶中，随后通过蒸发浓缩溶液，直到丙酮体积为57.5ml(根据重量控制)。将溶液冷却到-18℃，且维持温度在-18℃下20小时，将晶体过滤且用20ml冷(-18℃)丙酮洗涤，随后在烘箱中在28℃下真空干燥22小时，得到390mg帕立骨化醇，收率为78.0％，纯度为98.54％，异构体杂质B含量1.26％(CN200680026018.2实施例1)。
Claims (6)
1.一种帕立骨化醇的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将化合物1溶于有机溶剂中，加入强碱，室温搅拌，反应结束后，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得化合物2；
(2)取化合物2溶于二氯甲烷中，氩气氛围下加入戴斯-马丁氧化剂，室温搅拌反应，反应结束后，加入饱和碳酸氢钠水溶液和饱和亚硫酸钠溶液，分层，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3；
(3)取化合物3溶于无水四氢呋喃，氩气氛围冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液，向上述反应液中加入化合物4的四氢呋喃溶液，搅拌至反应结束，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5；
(4)取化合物5溶于四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵三水合物，回流反应至反应基本结束，加入纯化水，乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品；
(5)将帕立骨化醇粗品加入丙酮、水的混合溶剂中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下冷却析晶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(3)中加入化合物4的四氢呋喃溶液后，搅拌反应的反应温度为-78℃-0℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(5)中帕立骨化醇和混合溶剂的用量比为1:20-1:80(g/ml)。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，帕立骨化醇和混合溶剂的用量比为1:40-1:60(g/ml)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(5)中混合溶剂中丙酮与水的体积比为10:1-3:1。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述混合溶剂中丙酮与水的体积比为10:1-6:1。
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