CN107536869A - 一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物，具体涉及一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物及其制备方法，本发明所提供的药物组合物以维生素E与青风藤醇提物作为药物活性成分，两者质量配比为1:1～10，制成片剂，或软胶囊，或注射剂。本发明提供预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物，将具有抗氧化、抗凋亡作用的维生素E与抗氧化、抗炎作用的青风藤醇提物组成高效低毒的预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的药物组合物，利用两个药物的作用环节不同，多作用靶点，使疗效更显著，同时减少单独大剂量用药副作用，如青风藤具有活血化瘀功能，可减少因大剂量服用维生素E所致的副作用。

Description

一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物及其制 备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，具体涉及一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物及其制备方法。

背景技术

随着人民生活方式和饮食结构的改变，心血管疾病已成威胁人类健康的主要杀手。2014年5月WHO关于全球疾病状况的评估报告显示，过去10年，缺血性心脏病、脑卒中、下呼吸道感染和慢性阻塞性肺疾病是人类致死的四大主要疾病。其中冠心病是常见多发的缺血性心脏病，其中心肌梗死的致死率占第二位，研究显示在全球范围内，每年约有2350万人死于冠心病，而冠心病的主要致死病因为急性心肌梗死。心肌梗死是主要由于冠状动脉由于动脉粥样硬化、血栓等原因引起血流减少或中断、营养物质供应不足及组织内代谢产物清除减少等，导致心肌细胞缺血缺氧，最终引起心肌细胞变性坏死的一种症状。因此，快速恢复缺血心肌的血流，增加血流量，改善微循环等以挽救濒死的心肌细胞是治疗急性心肌梗死的唯一有效途径。目前临床上治疗心肌梗死的主要途径有介入治疗(经皮冠脉介入治疗)、手术治疗(心脏手术)、药物治疗(药物溶栓)、基因治疗等方法。虽然以上方法一定程度上缓解了心肌细胞的缺氧状况，但随后发现其预后临床效果不佳。然而大量研究发现缺血心肌再灌注本身也会诱发一系列新的病理生理变化，会进一步加重心肌组织的损伤，如出现再灌注后心率失常、心肌舒缩功能障碍、代谢异常及心肌超微结构改变，这种在心肌缺血基础上恢复血流供应后组织损伤加重甚至发生不可逆性损伤的现象称为心肌缺血再灌注损(Myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI)。其发生机制异常复杂，目前尚未完全阐明，可能与炎症反应、氧化损伤、能量代谢障碍、血管内皮细胞功能障碍及心肌细胞凋亡等因素密切相关。目前国内临床上应用抗氧化治疗、钙拮抗剂、他汀类等探索性治疗MIRI，但临床疗效不佳。国外使用阿昔单抗、环孢素A、艾塞那肽等药物进入二期临床治疗MIRI，虽有一定疗效，但效果有限。综上所述，目前临床上缺乏相应的特效药物，故寻找安全有效的防治心肌缺血再灌注损伤新药是当前科研工作的重中之重。

维生素E是一种脂溶性维生素，自然界共有8种，分为4种三烯生育酚和4种生育酚。日常说的维生素E是指α-生育酚，为微黄绿色透明黏稠液体，易溶于有机溶剂，不溶于水，对热稳定，易被氧化。早在上世纪20年代，科学家们发现缺乏维生素E的小鼠不能繁衍后代，而补充维生素E后的小鼠恢复生育功能，因维生素E在生育方面有着特殊的作用，因而被称为生育酚，也因其生理功能众多而被称为“护卫大使”。随着研究的深入，发现维生素E不仅在促进生育有效果，而且具有抗氧化、抗凋亡、抗衰老、增强免疫等作用。研究发现维生素E对大鼠心肌缺血再灌注具有一定的保护作用。普遍认为维生素E的人体日需要量为15～25mg，一般服用维生素E安全有效，副作用小，但是长期、大剂量服用维生素E也可引起多种不良反应。

青风藤(Cauli s sinomenii)为防己科植物青藤及毛青藤的干燥藤茎，其性味苦、辛、平、归肝、脾经，在《本草纳目》中首先记录，主要有效成分为青藤碱、双青藤碱、木兰花碱、尖防己碱等，具有抗炎、抗氧化损伤、免疫调节、降血压、止痛、镇咳、通经络等多种药理作用，临床主要用于治疗类风湿关节炎和红斑狼疮等免疫系统疾病，在戒毒复方中已获得较好的临床效果。近几年来，国内外对青风藤的研究越来越深入，其防治病种范围不断扩大，疗效也不断地突出，作用机制的探讨也进一步加深。研究发现青风藤中不仅仅是青藤碱发挥发挥抗炎抗骨破坏的作用，可能也含有其他与青藤碱类似的成分协同或类似地发挥其抗炎抗骨破坏的作用。

发明内容

本发明提供一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物及其制备方法，以及该药物组合物在预防和治疗心肌缺血再灌注相关疾病的应用，将具有抗氧化、抗凋亡作用的维生素E与抗氧化、抗炎作用的青风藤醇提物组成高效低毒的预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的药物组合物，利用两个药物的作用环节不同，多作用靶点，使疗效更显著，同时减少单独大剂量用药副作用，如青风藤具有活血化瘀功能，可减少因大剂量服用维生素E所致的副作用。

为达到上述目的，本发明所采取的方案如下：

一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物，其特征在于，以维生素E与青风藤醇提物作为药物活性成分，两者质量配比为1:1～10，制成片剂，或软胶囊，或注射剂。

进一步地，所述青风藤醇提物的提取方法如下：以青风藤干燥藤茎为原料，用植物粉碎机进行粉碎，分别采用乙醇作为溶剂对不同浓度(30％-90％)、不同用量(2倍-8倍体积)、不同回流提取时间(2h-8h)，按3因素正交实验法设计优选出最佳提取工艺。回收乙醇得青风藤醇提取物浸膏，高效液相色谱法测定青风藤洗脱物的青藤碱的含量，以平均青藤碱的含量(mg/ml)为考察指标筛选最佳提取条件。色谱条件为色谱性为ODS-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为水(三乙胺和磷酸调整pH为8.0)-甲醇(35：65)，柱温:28℃，流速为1ml/min，检测波长为262mn，研究发现以60％乙醇，4倍体积，回流提取4h，效果最佳。

进一步地，所述片剂包括如下成分：维生素E100mg，青风藤醇提物500mg，磷酸氢钙190g，淀粉100g，95％乙醇400ml，18％淀粉浆适量，5％三硅酸镁7g，2.5％微晶纤维8g。

更进一步地，所述的片剂药物组合物的制备方法，步骤如下：按配比将维生素E与青风藤醇提物溶于95％乙醇中，按等量递增法与磷酸氢钙充分混匀，加入淀粉搅拌均匀，用18％淀粉浆适量制软材，14目筛网制粒，40℃通风干燥，12目筛网整粒，再与5％三硅酸镁、2.5％微晶纤维混匀后压片即可。

进一步地，所述软胶囊包括如下成分：维生素E100mg，青风藤醇提物500mg，明胶480g，甘油190ml，姜黄素3.8g，水350ml，大豆油450ml，蜂蜡25g，卵磷脂3.8g。

更进一步地，所述软胶囊药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

S1.将蜂蜡加入大豆油中，加热融化，稍冷，加入卵磷脂，把维生素E、青风藤醇提物与上述大豆油充分搅拌混合均匀，于真空度为-0.5Mpa和温度95℃进行3小时脱气；

S2.称取明胶，先用水浸泡充分溶胀，然后将水与甘油置于煮胶锅中加热70℃，于锅中加入明胶液搅拌熔融均匀，加入姜黄素，搅拌均匀，放冷至60℃，除去上浮泡沫，过滤；

S3.将上述胶液放于85-90℃保温箱，机压制胶片；

S4.将合格胶片与药液通过自动旋转制囊机压制软胶囊，将压制好的软胶囊于18℃下吹风定行，于3小时后整形，再用乙醇洗去胶囊表面油层，于18℃下吹风吹干。

进一步地，步骤S4中压制条件为压丸温度为38℃，滚膜转速为3转/分，控制室温为25℃，空气相对湿度为35％以下。

进一步地，所述注射剂包括如下成分：生素E10mg，青风藤醇提物50mg，大豆磷脂2.5g，乳化剂F68 8.5g，注射用大豆油35ml，1,2-丙二醇80ml，注射用水250ml。

更进一步地，所述注射剂药物组合物的制备方法，包括如下步骤：按配比将维生素E、青风藤醇提物、大豆磷脂和乳化剂F68放入干燥乳钵，充分研磨均匀，制成油相；将1,2-丙二醇和注射用水混合均匀，制得水相；将水相缓缓加入油相中，高速搅拌1h制得初乳，400W超声3min，纳米机循环5次，从氮气熔封于安瓿，100℃灭菌15min。

本发明利用具有抗氧化、抗凋亡作用等药理作用的维生素E与抗氧化、抗炎等药理作用的青风藤醇提物组成高效低毒的预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的药物组合物，由于两个药物的作用环节不同，合用具有多作用靶点，使疗效更显著，同时减少单独用药副作用，并且维生素E与青风藤醇提物组成的复方制剂药物质量配比为1:10时，疗效最好。

附图说明

图1为各组大鼠心脏梗死面积观察图，其中A为假手术组，B为模型组，C为DEX组，D为SY-L组，E为SY-M组，F为SY-H组，NBT染色。

图2为各组大鼠心肌组织凋亡蛋白表达Western blot图，其中DEX为地塞米松阳性对照组，SY-L为实验-低剂量组，SY-M为实验-中剂量组，SY-H为实验-高剂量组,westernblot。

图3为各组大鼠心肌组织凋亡蛋白表达Western blot半定量分析柱状图，其中，与假手术组比较，^*p<0.05,^**p<0.01，与模型组比较，^#p<0.05,^##p<0.01，与DEX组比较，^p<0.05,^^p<0.01,与SY-L组比较，^&p<0.05,^&&p<0.01。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但并不对本发明做任何形式的限定，凡在发明精神和原则之内做任何修改、等同替换和改进，均应包含在本发明的保护范围之内。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所使用试剂和材料均为市购。实施例1实验-对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

1.材料与方法

1.1药物与试剂

维生素E：大连水产药业有限公司；地塞米松片：规格0.75mg/片，广东华南药业集团有限公司；青风藤：广州市璟弘贸易有限公司；肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测试剂盒、Bax、Bcl-2、p53、survivin单抗：南京建成股份有限公司；肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)ELISA检测试剂盒：博士德生物技术有限公司；氯化硝基四氮唑蓝(NBT)：Sigma-Aldrich

1.2实验动物及分组

SD大鼠60只，雌雄各半，体重180-220g，由山东省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(鲁)20160006。随机分为6组，分别为假手术组、模型组、地塞米松阳性对照组(DEX组)，实验-低剂量组(SY-L组)，实验-中剂量组(SY-M组)，实验-高剂量组(SY-H组)，每组10只。其中实验-低、中、高剂量组于造模前7d分别连续灌胃给药(维生素E100mg+青风藤醇提物100mg).kg^-1.d^-1、(维生素E100mg+青风藤醇提物500mg).kg^-1.d^-1、(维生素E100mg+青风藤醇提物1000mg).kg^-1.d^-1,地塞米松阳性对照组于造模前7d连续灌胃给药0.8mg.kg^-1.d^-1，假手术组和模型组连续7d灌胃给予等量生理盐水。

2.方法

2.1青风藤醇提物的提取

称取具有可靠来源、质量保证的青风藤干燥藤茎，使用植物粉碎机粉碎成微细粉，分别采用乙醇作为溶剂对不同浓度(30％、60％、90％)、不同用量(2倍、4倍、8倍体积)、不同回流提取时间(2h、4h、8h)，按这三个因素正交实验法设计优选出最佳提取工艺。回收乙醇得青风藤醇提取物浸膏，高效液相色谱法测定青风藤洗脱物的青藤碱的含量，以平均青藤碱的含量(mg/ml)为考察指标筛选最佳提取条件。色谱条件为色谱性为ODS-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为水(三乙胺和磷酸调整pH为8.0)-甲醇(35：65)，柱温:28℃，流速为1ml/min，检测波长为262mn。

2.2大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立

使用心脏冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌缺血再灌注模型，具体方法如下：各组大鼠连续灌胃给药1周，末次给药后30min进行手术，腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉大鼠，麻醉后仰卧固定于温控手术台上，连接小动物呼吸机，(频率为75～85次/min，潮气量为1.5mL/100g，呼、吸比为3∶2)，维持呼吸。剪去大鼠胸部毛发、碘伏消毒，在胸骨正中偏左侧切口，逐层分离肌肉，沿胸骨左侧3-4肋间开胸，开胸器撑开心脏，找到于左心耳和肺动脉圆锥之间的冠状动脉左前降支，于肺动脉圆椎与左心耳下1-2mm处进针,进针深度为0.3mm-0.5mm，结扎时用一小乳胶管垫于结扎线与血管之间，假手术组仅穿线但不结扎。如心电图Ⅱ导联ST段向上抬高，心脏表面相应区域颜色变白提示大鼠心肌缺血成功，然后用医用棉花吸干胸腔血液，关闭胸腔，挤出胸腔内气体。缺血30min后松解结扎线进行心肌再灌注，如心肌再灌注时局部心肌出现组织充血，ST段回落，提示再灌注成功。再灌注时间为24h。

2.3取材

再灌注24h后，4％异戊巴比妥钠麻醉大鼠，颈总动脉取血，室温静置1h，3000r/min离心15min，分离血清，-20℃保存，待测。剖开胸腔，摘取心脏，用生理盐水冲洗干净，-20℃冰箱冰冻30min,于结扎线下切取2mm心肌组织，在37℃孵箱，0.05％NBT染液中染色30min,扫描。应用Image-Pro Plus图像分析处理软件计算大鼠心脏梗死率，梗死率＝梗死面积/总面积×100％。

2.4指标检测

采用酶动力学法检测血浆CK、LDH活性；采用ELISA双抗体夹心法检测血浆中TNF-α、IL-1β含量；WST-1法检测SOD活性，TBA法检测MDA含量，Western blot法检测心肌组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax、survivin和p53表达。实验操作均按照试剂盒说明书进行。

2.5统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料用x±s表示。数据进行方差齐性和正态性检验，若均符合者，采用单因素方差分析；若不符合正态分布或方差不齐者，则采用非参数秩和检验。检验水准α＝0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

3.结果

3.1不同提取条件对青风藤提取的影响

表1不同提取条件对青风藤提取的影响

从表1结果可见：青风藤最佳提取工艺:称取风藤干燥藤茎，使用植物粉碎机粉碎成微细粉,采用60％乙醇作为溶剂，按4倍溶剂体积加入，回流提取时间4h，获得青藤碱含量最高。

3.2实验-对大鼠MIRI模型心脏梗死率的影响

表2各组大鼠心脏梗死率变化

注：与假手术组比较，*p<0.05,**p<0.01，与模型组比较，^#p<0.05,^##p<0.01，与DEX组比较，^{^}p<0.05,^{^^}p<0.01,与SY-L组比较，&p<0.05,&&p<0.01

从图1和表2结果可见：与假手术组比较，各组大鼠心脏梗死率均明显升高(P<0.05)。与模型组比较，地塞米松组、实验-低、中、高剂量组大鼠心脏梗死率均显著降低(P<0.05)。与地塞米松组比较，实验-高剂量组大鼠心脏梗死率显著降低(P<0.05)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠心脏梗死率显著降低(P<0.05)。

3.3对大鼠MIRI模型血清CK、LDH活性的影响

表3各组大鼠血清CK和LDH活性变化

注：与假手术组比较，^*p<0.05,^**p<0.01，与模型组比较，^#p<0.05,^##p<0.01，与DEX组比较，与SY-L组比较，&p<0.05,&&p<0.01

从表3结果可见：与假手术组比较，模型组、地塞米松阳性对照组、实验-低、中剂量组血清CK和LDH活性均显著增加(P<0.01)。与模型组比较，地塞米松组、实验-低、中、高剂量组大鼠血清CK和LDH活性均显著降低(P<0.05)。与地塞米松组比较，实验-高剂量组大鼠血清CK和LDH活性均显著降低(P<0.01)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠血清CK和LDH活性均显著降低(P<0.05)。

3.4对大鼠MIRI模型血清SOD、MDA的影响

表4各组大鼠血清SOD活性和MDA含量变化

注：与假手术组比较，^*p<0.05,^**p<0.01，与模型组比较，^#p<0.05,^##p<0.01，与DEX组比较，^p<0.05,^{^^}p<0.01,与SY-L组比较，^&p<0.05,^&&p<0.01

从表4结果可见：与假手术组比较，模型组、地塞米松阳性对照组、实验-低、中剂量组大鼠血清SOD活性显著降低(P<0.01)，MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较，地塞米松阳性对照组、实验-低、中、高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)。与地塞米松阳性对照组比较，实验-高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。

3.5对大鼠MIRI模型血清TNF-α、IL-1β的影响

表5各组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量变化

注：与假手术组比较，^*p<0.05,^**p<0.01，与模型组比较，^#p<0.05,^##p<0.01，与DEX组比较，^p<0.05,^{^^}p<0.01,与SY-L组比较，^&p<0.05,^&&p<0.01

从表5结果可见：与假手术组比较，模型组、地塞米松阳性对照组、实验-低、中剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均明显升高(P<0.01)。与模型组比较，地塞米松阳性对照组、实验-低、中、高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.05)。与地塞米松阳性对照组比较，实验-高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.01)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.01)。

3.5对大鼠MIRI模型心肌组织Bcl-2、Bax、survivin和p53表达的影响

从图2和图3结果可见：与假手术组比较，模型组心肌组织Bcl-2和survivin表达明显减少(p<0.01)，Bax和p53表达明显增多(p<0.01)。与模型组比较，地塞米松阳性对照组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.05)，Bax表达减少(p<0.05)。实验-给药组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.05)，Bax和p53表达减少(p<0.05)，呈剂量依赖性。与地塞米松阳性对照组比较，实验-中、高剂量组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.05)，Bax和p53表达减少(p<0.05)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.01)，Bax和p53表达减少(p<0.05)。

4.讨论

4.1青风藤醇提物最优提取条件

本实验参考2015版药典及相关文献，分别采用乙醇作为溶剂，对不同浓度(30％、60％、90％)、不同用量(2倍、4倍、8倍体积)及不同回流提取时间(2h、4h、8h)，按3因素正交实验法设计优选出最佳提取工艺。本研究发现青风藤最佳提取工艺：称取风藤干燥藤茎，使用植物粉碎机粉碎成微细粉,采用60％乙醇作为溶剂，按4倍溶剂体积加入，回流提取时间4h，所获得青藤碱含量最高。

4.2实验-明显改善心肌细胞损伤

心肌缺血再灌注使心肌梗死面积进一步扩大，而梗死面积的大小是评价药物效果最直接的观察指标。CK和LDH是普遍存在于心肌细胞浆中的酶，称为心肌酶，当心肌细胞受到损伤或坏死时，它们被大量释放到血液中，出现血清心肌酶升高，是评价和诊断心肌梗死、心肌细胞受损程度的实验室指标。再灌注过程中，随着炎症及氧化损伤等作用增加，使细胞膜的损伤进一步加重，最终导致细胞内CK、LDH的释放量进一步增加。故衡量CK和LDH水平与心肌细胞坏死呈正相关，也可作为心肌功能恢复评估。本研究发现与模型组比较，实验-给药组可明显降低大鼠心脏梗死率、血清CK和LDH活性(P<0.05)，且呈剂量依赖性。与地塞米松组比较，实验-高剂量组大鼠心脏梗死率、CK和LDH活性也显著降低(P<0.05)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠心脏梗死率、血清CK和LDH活性显著降低(P<0.05)。综上所述，实验-明显改善心肌细胞损伤，且呈剂量依赖性，实验-中、高剂量组效果比地塞米松阳性对照组好。

4.3明显改善抗氧化指标

在心肌缺血再灌注损伤的发生过程中，氧化应激反应全程参与。心肌缺血再灌注损伤时，大量氧自由基大量产生。氧自由基过氧化生物膜的多价不饱和脂肪酸，生成脂质过氧化产物并损伤细胞膜，导致心肌细胞死亡。SOD是抗氧化酶系统关键的抗氧化酶，它广泛存在于需氧代谢的细胞中，能够迅速有效地清除自由基，使机体免于自由基的损伤。它把·O₂催化歧化为H₂O₂，在GSH-Px或CAT作用下降解为O₂。SOD活力的变化可直接关系到体内氧自由基浓度。故SOD水平可以间接反映机体清除氧自由基的能力，进而间接反映心肌抗氧化损伤的能力。MDA是体内氧自由基攻击生物膜中的多价不饱和脂肪酸易发生脂质过氧化的终产物，既能反映脂质过氧化的程度，也能反映自由基的生成量，故MDA可以较好的评价心肌缺血再灌注的氧化损伤。本研究发现与模型组比较，实验-给药组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)。与地塞米松阳性对照组比较，实验-高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。综上所述，提示了实验-明显改善心肌缺血再灌注的抗氧化损伤，实验-中、高剂量组效果比地塞米松阳性对照组好。

4.4明显改善炎症指标

TNF-α和IL-1β是一种具有多种生物效应的细胞因子，与多种组织再灌注损伤密切相关。TNF-α主要由单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞等产生，能激活一系列级联反应，诱导中性粒细胞和血管内皮细胞表达表面黏附因子，促使中性粒细胞聚集，促进多种促炎性因子释放，如IL-1β，也可促进氧化损伤的发生，加重再灌注期心肌组织的损伤。TNF-α与IL-1β互相影响，促进炎症的发生发展。它们可以较好的评价心肌缺血再灌注的炎症损伤。本研究发现与模型组比较，实验-给药组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.05)。与地塞米松阳性对照组比较，实验-高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.01)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.01)。综上所述，提示了实验-明显减轻心肌缺血再灌注的炎症，实验-中、高剂量组效果比地塞米松阳性对照组好。

4.5明显改善心脏组织凋亡指标

细胞凋亡是由基因调控的程序性死亡过程，是心肌缺血再灌注损伤的典型表现和重要病理机制之一。细胞凋亡由促凋亡基因和抗凋亡基因共同参与，其中Bc1-2与survivin是抗凋亡蛋白，可抑制细胞凋亡。Bax和p53为促凋亡蛋白，可引起细胞凋亡。它们可以较好的评价心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡情况。本研究发现与模型组比较，实验-给药组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.05)，Bax和p53表达减少(p<0.05)，呈剂量依赖性。与地塞米松阳性对照组比较，实验-中、高剂量组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.05)，Bax和p53表达减少(p<0.05)。与实验-低剂量组比较，实验-高剂量组Bcl-2和survivin表达增多(p<0.01)，Bax和p53表达减少(p<0.05)。综上所述，提示了实验-明显抑制心肌细胞的凋亡，实验-中、高剂量组效果比地塞米松阳性对照组好。

5.结论

本发明所提供的药物组合物对心肌缺血再灌注损伤具有较好的保护作用，其中灌胃给予(维生素E100mg+青风藤醇提物1000mg).kg^-1.d^-1效果最好，其作用机制可能是通过减轻炎症、抗过氧化损伤以及抗凋亡有关，其可作为药物应用于预防或治疗心肌缺血再灌注损伤相关疾病。

Claims (10)

1.一种预防心肌缺血再灌注损伤相关疾病的药物组合物，其特征在于，以维生素E与青风藤醇提物作为药物活性成分，两者质量配比为1:1～10，制成片剂，或软胶囊，或注射剂。

2.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述青风藤醇提物的提取方法如下：以青风藤干燥藤茎为原料，用植物粉碎机进行粉碎，采用乙醇作为溶剂提取。

3.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述片剂包括如下成分：维生素E100mg，青风藤醇提物500mg，磷酸氢钙190g，淀粉100g，95%乙醇400ml，18%淀粉浆适量，5%三硅酸镁7g，2.5%微晶纤维8g。

4.权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：按配比将维生素E与青风藤醇提物溶于95%乙醇中，按等量递增法与磷酸氢钙充分混匀，加入淀粉搅拌均匀，用18%淀粉浆适量制软材，14目筛网制粒，40℃通风干燥，12目筛网整粒，再与5%三硅酸镁、2.5%微晶纤维混匀后压片即可。

5.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述软胶囊包括如下成分：维生素E100mg，青风藤醇提物500mg，明胶480g，甘油190ml，姜黄素3.8g，水350ml，大豆油450ml，蜂蜡25g，卵磷脂3.8g。

6.权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将蜂蜡加入大豆油中，加热融化，稍冷，加入卵磷脂，把维生素E、青风藤醇提物与上述大豆油充分搅拌混合均匀，于真空度为-0.5Mpa和温度95℃进行3小时脱气；

S2.称取明胶，先用水浸泡充分溶胀，然后将水与甘油置于煮胶锅中加热70℃，于锅中加入明胶液搅拌熔融均匀，加入姜黄素，搅拌均匀，放冷至60℃，除去上浮泡沫，过滤；

S3.将上述胶液放于85-90℃保温箱，机压制胶片；

S4.将合格胶片与药液通过自动旋转制囊机压制软胶囊，将压制好的软胶囊于18℃下吹风定行，于3小时后整形，再用乙醇洗去胶囊表面油层，于18℃下吹风吹干。

7.根据权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，步骤S4中压制条件为压丸温度为38℃，滚膜转速为3转/分，控制室温为25℃，空气相对湿度为35%以下。

8.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述注射剂包括如下成分：生素E10mg，青风藤醇提物50mg，大豆磷脂2.5g，乳化剂F68 8.5g，注射用大豆油35ml，1,2-丙二醇80ml，注射用水250ml。

9.权利要求8所述的注射剂药物组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：按配比将维生素E、青风藤醇提物、大豆磷脂和乳化剂F68放入干燥乳钵，充分研磨均匀，制成油相；将1,2-丙二醇和注射用水混合均匀，制得水相；将水相缓缓加入油相中，高速搅拌1h制得初乳，400W超声3min，纳米机循环5次，从氮气熔封于安瓿，100℃灭菌15min。

10.权利要求1所述药物组合物在预防及治疗心肌缺血再灌注损伤相关疾病中的应用。