CN107530305A - 粘膜免疫激活剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供含有选自由下述通式(1)表示的饱和脂肪酸、及其盐组成的组中的至少1种作为有效成分的粘膜免疫激活剂。通式(1)中，R表示被1个羟基取代的碳原子数7～11的烷基。R‑COOH (1)。

Description

粘膜免疫激活剂
技术领域
本发明涉及新型粘膜免疫激活剂。
背景技术
与外界接触的肠道及呼吸器官等的粘膜组织成为原发感染部位的情况较多，因此，从预防医学的观点考虑，增强粘膜免疫功能是重要的。作为感染防御机制的第一道防线，派尔集合淋巴结(Peyer'spatches)及鼻咽相关淋巴组织(NALT)在粘膜免疫应答的诱导及调控方面承担核心作用。微褶细胞(Microfold细胞或M细胞)见于派尔集合淋巴结等肠道相关淋巴组织、及覆盖NALT等的淋巴滤泡的滤泡相关上皮(FAE)。M细胞通过肠道内的抗原的摄入及转胞吞作用而参与粘膜免疫应答的引发(非专利文献1)。糖蛋白2(GP2)作为M细胞特异性标志物是已知的(非专利文献2)。
作为粘膜免疫激活剂，专利文献1中公开了含有选自蜂王浆、蜂胶、蜂花粉中的至少任意1种蜜蜂产品作为有效成分的粘膜免疫激活剂。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2011-84525号公报
非专利文献
非专利文献1：Bioscience of Microbiota，Food and Health，2014年，33卷(第3期)，pp.91-97
非专利文献2：Mucosal Immunology，2013年，6卷(第4期)，pp.666-677
发明内容
发明所要解决的课题
尽管已知有数种如专利文献1中公开的那样的粘膜免疫激活剂，但对于满足需求者的多种需求而言，尚不能说是存在充分的选项。因此，本发明的目的在于提供新型粘膜免疫激活剂。
用于解决课题的手段
本发明涉及粘膜免疫激活剂，其中，作为有效成分含有选自由下述通式(1)表示的饱和脂肪酸、及其盐组成的组中的至少1种。
R-COOH (1)
[通式(1)中，R表示被1个羟基取代的碳原子数7～11的烷基]
本发明的粘膜免疫激活剂中作为有效成分含有选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、及其盐组成的组中的至少1种，因此，能够激活粘膜免疫。
对于上述饱和脂肪酸而言，R优选为被1个羟基取代的壬基。另外，上述饱和脂肪酸更优选为3-羟基癸酸及10-羟基癸酸。由此，能够进一步激活粘膜免疫。
上述饱和脂肪酸进一步优选为10-羟基癸酸。10-羟基癸酸作为蜂王浆的构成成分也是已知的，其对于生物体的安全性高，可以长期持续性地进行摄取。
本发明的粘膜免疫激活剂以选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、及其盐组成的组中的至少1种作为有效成分，由此，能够诱导M细胞的分化。本发明的粘膜免疫激活剂的作用机制的至少一部分基于该M细胞的分化诱导。
本发明还涉及含有上述粘膜免疫激活剂的粘膜免疫激活用食品组合物。该食品组合物包括食品、健康食品、功能性食品、营养辅助食品、补充剂及特定保健用食品。
上述食品组合物由于含有本发明的粘膜免疫激活剂，因此，具有激活粘膜免疫的功能，适于用作粘膜免疫激活用途。
本发明还涉及含有上述粘膜免疫激活剂的佐剂。上述粘膜免疫激活剂能够诱导参与引发粘膜免疫应答的M细胞的分化，因此，适合作为佐剂使用。
此外，本发明还涉及包含上述佐剂的疫苗制剂。
本发明还涵盖用于粘膜免疫激活用途的上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐。此外，本发明还涵盖用于粘膜免疫激活用途的、其中作为有效成分含有选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐组成的组中的至少1种的试剂。
本发明还涵盖上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐在粘膜免疫激活剂的制造中的用途。
本发明还涵盖激活粘膜免疫的方法，所述方法包括将有效量的粘膜免疫激活剂施予至需要所述粘膜免疫激活剂的对象的步骤，所述粘膜免疫激活剂中，作为有效成分含有选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐组成的组中的至少1种。
发明效果
根据本发明，可以提供新型粘膜免疫激活剂。本发明的粘膜免疫激活剂能够诱导M细胞的分化，因此，也可以用作佐剂。
附图说明
[图1]为表示M细胞分化诱导试验的结果的FACS的直方图。
[图2]为示出了M细胞分化诱导试验的结果的电子显微镜照片。
[图3]为示出了M细胞分化诱导试验的结果的荧光免疫组织染色照片。
[图4]为示出了免疫激活试验的结果的荧光免疫组织染色照片。
[图5]为表示抗体效价的测定结果的图。
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式进行详细说明。但是，本发明不限于以下的实施方式。
本发明的粘膜免疫激活剂中，作为有效成分含有选自由通式(1)表示的饱和脂肪酸(以下简称为“饱和脂肪酸”)、及其盐组成的组中的至少1种。
R-COOH (1)
通式(1)中，R表示被1个羟基取代的碳原子数7～11的烷基。
作为R中的碳原子数7～11的烷基，可以举出庚基、辛基、壬基、癸基及十一烷基。R中的1个羟基可以针对这些烷基中的任意氢原子进行取代。
R优选为被1个羟基取代的壬基。作为这种情况下的饱和脂肪酸，可以举出2-羟基癸酸、3-羟基癸酸、4-羟基癸酸、5-羟基癸酸、6-羟基癸酸、7-羟基癸酸、8-羟基癸酸、9-羟基癸酸、10-羟基癸酸。
作为饱和脂肪酸，优选3-羟基癸酸及10-羟基癸酸，进一步优选10-羟基癸酸。
饱和脂肪酸存在光学异构体的情况下，可以是R体及S体中的任一者。
饱和脂肪酸可以是与食品用途或医药用途上允许的碱金属、碱土金属、其他金属、铵等形成的盐。具体而言，可以举出例如钾盐、钠盐、钙盐、镁盐。
上述的饱和脂肪酸及其盐可以依据对在蓖麻油(castor oil)中含有的蓖麻醇酸进行碱熔(alkali fusion)的方法(例如，Eur.J.LipidSci.Technol.，2010年，112(1)，pp.10-30；J.Am.Oil Chem.Soc.，1974年，51(3)，pp.65-71)等常规方法进行制造。另外，也可以使用市售的制品。
本发明的粘膜免疫激活剂可以单独含有1种上述的饱和脂肪酸及其盐，也可以组合含有2种以上。
本发明的粘膜免疫激活剂可以仅含有上述有效成分，在不损害本发明的效果的范围内，可以进一步含有其他成分。作为其他成分，例如，可以举出药学上允许的成分(例如，赋形剂、粘合材料、润滑剂、崩解剂、乳化剂、表面活性剂、基剂、助溶剂、悬浮剂)、作为食品而允许的成分(例如，矿物质类、维生素类、类黄酮类、醌类、多酚类、氨基酸、核酸、必需脂肪酸、清凉剂、粘合剂、甜味剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、香料、稳定剂、防腐剂、缓释调节剂、表面活性剂、溶解剂、湿润剂)。
对于本发明的粘膜免疫激活剂而言，以有效成分量换算计，对于体重为60kg的成人，可以以每天1mg以上且10g以下的用量使用，优选以5mg以上且8g以下的用量使用，更优选以10mg以上且3g以下的用量使用，进一步优选以15mg以上且1.5g以下的用量使用，进一步更优选以20mg以上且1g以下的用量使用，进一步更优选以22mg以上且500mg以下的用量使用，特别优选以24mg以上且250mg以下的用量使用。儿童使用本发明的粘膜免疫激活剂的用量可为如下：例如，6岁至不满13岁时为成人的3/5用量、1岁至不满6岁时为成人的2/5用量、不满1岁时为1/5用量。可以根据摄取的人的健康状态、施予方法及与其他制剂的组合等因素而在上述范围内对该用量进行适宜设定。
本发明的粘膜免疫激活剂可以口服施予(摄取)，也可以非口服施予(例如，鼻腔内施予)。对于本发明的粘膜免疫激活剂而言，每天的有效成分量在上述的范围内即可，可以一天施予一次，也可以分成一天两次、一天三次等多次进行施予。另外，本发明的粘膜免疫激活剂优选持续性地进行施予。通过持续性地进行施予，可以更显著地发挥粘膜免疫激活效果。
本发明的粘膜免疫激活剂可以是固体、液体、糊剂等任意的形状。本发明的粘膜免疫激活剂的形态可以是例如无包衣片、糖衣片、颗粒、粉末、片剂(tablet)、胶囊(硬胶囊、软胶囊、无缝胶囊)。本发明的粘膜免疫激活剂可以通过例如将作为有效成分的饱和脂肪酸、或其盐与根据需要而添加的其他成分混合、成形为上述剂型来制备。
本发明的粘膜免疫激活剂可作为医药品、准医药品(quasi drug，医薬部外品)及食品组合物本身来使用，以及可以添加在医药品、准医药品及食品组合物中而进行使用。作为食品组合物，优选为突出了食品的第三功能(即，调节身体状况的功能)的食品。作为突出了食品的第三功能的食品，可以举出例如健康食品、功能性食品、营养辅助食品、补充剂及特定保健用食品。
由本发明的粘膜免疫激活剂组成的医药品、准医药品或食品组合物、或者含有本发明的粘膜免疫激活剂的医药品、准医药品或食品组合物可以用于粘膜免疫激活用途，也可以附有以下标示：“提高免疫力”、“打造抵抗病毒的体质”、“保障免疫功能”、“有助于M细胞的增加”、“保持免疫力”、“维持免疫力”、“适合容易感冒的人”、“使免疫功能变得良好”“有助于防止脆弱的免疫系统衰退”“打造抵抗食物中毒细菌的体质”“保障粘膜的健康”、“保障粘膜免疫”、“保障鼻、咽喉的健康”、“有助于维持冬季的健康”、“有助于维持寒冷时期的健康”、“对抗寒冷季节”等。
可根据医药品、准医药品及食品组合物的种类等而对医药品、准医药品及食品组合物中的本发明的粘膜免疫激活剂的含量进行适宜设定，使每天摄取的有效成分量在上述的范围内即可。
将本发明的粘膜免疫激活剂作为食品组合物自身，或添加至食品组合物中而进行使用的情况下，食品组合物的形态不受特别限定，例如，可以为饮料类(咖啡、果汁、茶饮料等清凉饮料、乳饮料、乳酸菌饮料、酸奶饮料、碳酸饮料等)；涂抹酱类(卡士达酱(custardcream)等)；糊类(果泥等)；西点类(巧克力、面包圈、馅饼(pie)、泡芙、口香糖、果冻(jelly)、糖果、曲奇、蛋糕、布丁等)；日式点心类(糯米团、年糕、有馅面点(日文：饅頭)、长崎式蜂蜜蛋糕(日文：カステラ)、Anmitsu式甜点、羊羹等)；冰点类(冰淇淋、冰棒、冰霜(sherbet)等)；食品类(咖喱、牛肉饭、杂烩粥、味噌汤、汤、肉酱(meat sauce)、意大利面、腌菜、果酱等)；调味料类(调味汁、拌饭调味料(日文：ふりかけ)、鲜味调味料、汤料等)。
将本发明的粘膜免疫激活剂作为突出了食品的第三功能的食品(例如，健康食品、功能性食品、营养辅助食品、补充剂或特定保健用食品)本身来使用，或添加在突出了食品的第三功能的食品中进行使用的情况下，除了上述的食品的形态以外，突出了食品的第三功能的食品的形态还可以为例如无包衣片、糖衣片、颗粒、粉末、片剂、胶囊(硬胶囊、软胶囊、无缝胶囊)。
将本发明的粘膜免疫激活剂作为医药品或准医药品本身来使用，或添加在医药品或准医药品中进行使用的情况下，医药品或准医药品的形态不受特别限定，可以为例如无包衣片、糖衣片、颗粒、粉末、片剂、胶囊(硬胶囊、软胶囊、无缝胶囊)。
添加有本发明的粘膜免疫激活剂的医药品、准医药品或食品组合物的制法不受特别限定，可以基于适当的已知方法进行。例如，可以通过向医药品、准医药品或食品组合物的制造工序中的中间产品或最终产品中混合本发明的粘膜免疫激活剂等方式，来获得用于上述用途的医药品、准医药品或食品组合物。
上述的本发明还涵盖用于粘膜免疫激活用途的、上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐。此外，本发明还涵盖用于粘膜免疫激活用途的、其中作为有效成分含有选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐组成的组中的至少1种的试剂。进而，本发明还涵盖上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐在粘膜免疫激活剂的制造中的用途。
此外，上述的本发明还涵盖激活粘膜免疫的方法，所述方法包括将有效量的粘膜免疫激活剂施予至需要所述粘膜免疫激活剂的对象的步骤，所述粘膜免疫激活剂含有选自由上述通式(1)表示的饱和脂肪酸、或其盐组成的组中的至少1种作为有效成分。对象可以为啮齿类、有蹄类、食肉类、有袋类、及灵长类。对象优选为食蟹猴及人等哺乳动物，更优选为人。
〔疫苗制剂〕
本发明的粘膜免疫激活剂也可以作为佐剂使用。本发明的佐剂的作用机制的至少一部分基于对参与引发粘膜免疫应答的M细胞的分化进行诱导。本实施方式涉及的佐剂可以是含有上述粘膜免疫激活剂的佐剂，也可以是由上述粘膜免疫激活剂构成的佐剂。
本发明的疫苗制剂为包含上述佐剂的制剂。本发明的佐剂可以与各种免疫原进行组合而制成疫苗制剂。本发明的疫苗制剂可以是将佐剂与免疫原混合得到的疫苗制剂，也可以是将佐剂和免疫原各自分离，在施予时进行混合、或分别进行施予。本发明的疫苗制剂可以用于治疗用途，也可以用于预防用途。
作为与本发明的佐剂组合的免疫原，只要为对于人等哺乳动物引起免疫应答的抗原即可，没有特别限制。作为免疫原的具体例，可以举出选自由流感病毒、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、麻疹病毒、风疹病毒、腮腺炎病毒、艾滋病病毒、肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、百日咳菌、白喉杆菌、幽门螺旋杆菌、出血性大肠杆菌(EHEC)、衣原体病原虫、支原体病原虫、疟疾病原虫、球虫病原虫、及住血吸虫组成的组中的一种或二种以上的病原微生物及源于它们的抗原、朊蛋白等。这些免疫原可以经过灭活，也可以不经过灭活。
本发明的疫苗制剂中的免疫原与佐剂的量之比可以根据使用的免疫原的种类、疫苗制剂的目的等而进行适宜设定，例如，可以设定为1∶0.0001～1∶10000(重量比)，优选为1∶0.1～1∶10(重量比)。
本发明的疫苗制剂的形状可以为液状，也可以为粉末状。本发明的疫苗制剂的形态不受特别限定，例如，可以为无包衣片、糖衣片、颗粒、粉末、片剂、胶囊(硬胶囊、软胶囊、无缝胶囊)。
本发明的疫苗制剂中可以含有已知的稳定剂及防腐剂等。本发明的疫苗制剂可以利用已知的方法进行制造。本发明的疫苗制剂可以进行口服接种，也可以经鼻摄取。
本发明的疫苗制剂也可以通过包括向对象施予佐剂的步骤、和向该对象施予免疫原的步骤的方法而进行施予。佐剂的施予和免疫原的施予可以同时进行，也可以分别进行。另外，例如，可以先进行佐剂的施予，再进行免疫原的施予。此外，可以在持续性地施予佐剂的同时，适时地进行免疫原的施予。对于本发明的疫苗制剂而言，优选的是，例如以在已持续性地施予了佐剂之后施予免疫原的方式而使用。由此，能够进一步增强免疫应答的诱导。作为持续性地施予佐剂的方式的具体例，例如可以举出：将一日一次的有效量的施予持续3日以上、优选7日以上、更优选14日以上、进一步优选21日以上。另外，可以在每日的有效量的范围内分成一日二次、一日三次等多次进行施予。
对于佐剂的有效量而言，以有效成分量换算计，对于体重为60kg的成人，为每日1mg以上且10g以下的用量，优选为5mg以上且8g以下的用量，更优选为10mg以上且3g以下的用量，进一步优选为15mg以上且1.5g以下的用量，进一步更优选为20mg以上且1g以下的用量，进一步更优选为22mg以上且500mg以下的用量，特别优选为24mg以上且250mg以下的用量。另外，儿童使用时的有效量可为如下：例如，6岁至不满13岁时为成人的3/5用量、1岁至不满6岁时为成人的2/5用量、不满1岁时为1/5用量。可以根据摄取的人的健康状态、施予方法及与其他制剂的组合等因素而在上述范围内对该用量进行适宜设定。
实施例
以下，基于实施例对本发明更具体地进行说明。但是，本发明不限于以下的实施例。
[试验例1：M细胞分化诱导试验-体外试验]
〔细胞培养〕
作为体外M细胞模型，使用了源于人肠道上皮细胞的Caco-2细胞。对于Caco-2细胞，使用对于EMEM培养基(日水制药株式会社制)补充了2％胎牛血清(FCS：CANSERAINTERNATIONAL公司制)、2mM谷氨酰胺(和光纯药株式会社制)、及0.1mM非必需氨基酸(Gibco公司制)而得到的培养基，在37℃、5％CO2的存在下进行培养。细胞在对数增殖的范围内(2.0×105～1.0×106个细胞/mL)进行传代培养。需要说明的是，细胞浓度利用台盼蓝染色法对活细胞数和死细胞数进行计数而求出。
〔荧光激活细胞分类(FACS)分析〕
以GP2作为指标，利用FACS对各种脂肪酸(10-羟基癸酸、(+/-)-3-羟基癸酸、(9R)-9，10-二羟基癸酸、10-羟基-2-(E)-癸烯酸)引起的M细胞的分化诱导进行了分析。10-羟基癸酸(10HDAA)使用了SIGMA-ALDRICH公司制的制品，(+/-)-3-羟基癸酸(3HDAA)使用了SIGMA-ALDRICH公司制的制品，10-羟基-2-(E)-癸烯酸(10-HDA)使用了和光纯药工业株式会社制的制品。(9R)-9，10-二羟基癸酸(DDA-11)使用了通过以下方法合成的产物：基于Tetrahedron：Asymmetry，2009年，20，pp457-460的方法，将(4R)-4-(2-羟基乙基)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷进行甲苯磺酰化，经由格氏反应(Grignard反应)、利用5-溴-1-戊烯将链延长后，经过臭氧分解、与二乙基膦酸乙酯(diethyl phosphonoic acid ethylester)的Wittig反应、通过接触氢化反应而加氢、利用乙酸处理除去丙酮化合物、利用氢氧化钾处理除去乙基，合成(9R)-9，10-二羟基癸酸。
将上述各脂肪酸制成DMSO溶液(10mM)的形式。在6孔培养板中接种Caco-2细胞，使细胞形成单层膜后，添加上述各脂肪酸，使得它们的最终浓度为100μM。另外，作为对照，添加了等量的DMSO。培养基如上所述。添加后，在37℃、5％CO2的存在下培养3日。培养后，使用1mM的EDTA·2Na/PBS(-)(pH7.2)回收细胞，使用兔抗GP2抗体(IMGENEX公司制)及Alexa488标记抗兔抗体(Molecularprobes公司制)进行染色。使用FACS(BECKMAN COULTER公司制)对经染色的细胞进行分析，确定GP2表达量。
将FACS的直方图示于图1。如图1所示，10-羟基癸酸(图1(a))及(+/-)-3-羟基癸酸(图1(b))诱导了GP2的表达。另外，10-羟基癸酸更强地诱导了GP2的表达。另一方面，(9R)-9，10-二羟基癸酸(图1(c))及10-羟基-2-(E)-癸烯酸(图1(d))不诱导GP2的表达。
〔形态分析〕
在迁移小室(transwell insert)(6.5mm Transwell，Corning公司制)中接种Caco-2细胞(2×105个细胞)，形成单层膜后，从单层膜的顶端侧使10-羟基癸酸(最终浓度为100μM)作用于单层膜，在37℃、5％CO2的存在下培养3日。培养后，分别切割迁移小室的膜，用电子显微镜(JEOL公司制)观察细胞形态。
将电子显微镜照片示于图2。通常，M细胞在形态学上具有顶端侧的微绒毛(microvilli)比附近的上皮细胞更短的特征。如图2中以箭头示出的那样，通过使10-羟基癸酸作用于细胞，观察到了微绒毛短的细胞。认为该结果表明，由于10-羟基癸酸的作用，Caco-2细胞在形态上变化为M细胞样细胞。
[试验例2：M细胞分化诱导试验-体内试验]
〔试验方法〕
将10-羟基癸酸的DMSO溶液(10mM)用PBS(-)稀释100倍，制备试验液。将3只雄性食蟹猴(Macaca fascicularis)(试验开始时为3～4岁，试验开始时的体重为3.53～4.36kg)作为受试动物。使用精细喷雾器(fine atomizer)(Nasal)(商品编号：FAN020，制造销售商：吉川化成株式会社)，向食蟹猴的左右鼻腔分别喷射约0.1mL的上述试验液。作为对照，使用PBS(-)进行了同样的操作。1日1次、重复3日该操作后，在第4日解剖食蟹猴，采集咽扁桃体部位的鼻咽粘膜。利用Alexa555标记抗GP2抗体(I MGENEX公司制)或Alexa555标记抗GP2抗体(Abcam公司制)，对采集的鼻咽粘膜进行荧光免疫组织染色，使用一体式荧光显微镜BZ-9000(KEYENCE公司制)观察荧光图像。需要说明的是，在进行荧光图像的观察时，也使用了DAPI染色。
荧光免疫组织染色照片示于图3。需要说明的是，图3中为了提高视觉辨认度而对明暗进行了反转。如图3所示，通过使10-羟基癸酸在鼻腔内暴露3天，在鼻咽粘膜上观察到了GP2阳性细胞(图3中，以箭头例示的黑色部位)。另一方面，对照中，未观察到这样的GP2阳性细胞的增加。
[试验例3：免疫激活试验-体内试验]
〔试验方法〕
(胶囊剂的制备)
向肠溶胶囊中仅填充2.4mg的10-羟基癸酸，制备装有10-羟基癸酸的胶囊剂(胶囊A)。除了10-羟基癸酸2.4mg以外，作为抗原，将胎球蛋白(Fetuin)(3mg)、灭活脊髓灰质炎病毒抗原(106TCID50)及灭活流感病毒抗原(220_HA Units)填充至肠溶胶囊中，制备含有10-羟基癸酸和上述3种抗原的胶囊剂(胶囊B)。另外，作为抗原，将胎球蛋白(3mg)、灭活脊髓灰质炎病毒抗原(106TCID50)及灭活流感病毒抗原(220_HA Units)填充至肠溶胶囊中，制备含有上述3种抗原的胶囊剂(胶囊C)。
(胶囊剂的施予)
将3只雄性食蟹猴(Macaca fascicularis)(试验开始时为3～6岁，试验开始时的体重为3.0～6.0kg)作为受试动物，按照下述表1所示的日程经口施予上述胶囊A及胶囊B(1日1次1粒)(以下为试验组)。作为对照，按照下述表1所示的日程，向3只雄性食蟹猴(试验开始时为3～6岁，试验开始时的体重为3.0～6.0kg)仅经口施予胶囊C(不施予胶囊A及胶囊B)(以下为对象组)。在第22日解剖食蟹猴，采集肠道粘膜。利用Alexa555标记抗GP2抗体(IMGENEX公司制)或Alexa555标记抗GP2抗体(Abcam公司制)，对采集的肠道粘膜进行荧光免疫组织染色，使用一体式荧光显微镜BZ-9000(KEYENCE公司制)观察荧光图像。需要说明的是，在进行荧光图像的观察时，也使用了DAPI染色。
荧光免疫组织染色照片的一例示于图4。需要说明的是，图4中为了提高视觉辨认度而对明暗进行了反转。如图4所示，在一日一次地持续摄取10-羟基癸酸的同时、每隔约3日使用抗原致敏的试验组中，在肠道粘膜上观察到了GP2阳性细胞(图4中，以箭头例示的黑色部位)。另一方面，仅每隔约3日使用抗原致敏的对照组中，未观察到这样的GP2阳性细胞的增加。
[试验例4：抗体效价的测定]
〔试验方法〕
采集试验例3中饲育的食蟹猴的粪便，通过ELISA对粪便中的抗胎球蛋白IgA抗体效价、抗脊髓灰质炎病毒IgA抗体效价、抗流感病毒IgA抗体效价进行了测定。
胎球蛋白抗原(Sigma公司制)以成为100μg/mL的方式溶解于抗原缓冲液(50mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，10mmol/L MgCl2，0.1％吐温80)中。将该抗原加入Nunc MaxiSorp(注册商标)平底96孔培板中，制作抗原板。将流感病毒H1N1抗原(11000HA Unit)及III型脊髓灰质炎病毒抗原(0.67×108TCID50)在25mL的抗原缓冲液中稀释，同样地制作了抗原板。需要说明的是，掩蔽(masking)是以200μl/孔、于4℃过夜反应。
相对于粪便试样，以重量比为1∶4的方式添加样品缓冲液(0.1％叠氮钠，1mmol/LEDTA·2Na，0.05％吐温20，5％脱脂乳(nonfat skim milk)，1mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)的PBS(-)(pH7.2)溶液)。将其以13000×g、5分钟、4℃的条件离心分离，然后回收上清液作为ELISA用样品。ELISA用样品保存于冰感冰箱中。在测定时用PBS(-)将ELISA用样品稀释为10倍及100倍。
分别向抗原板的各孔中添加50μl制备的样品，在低温室中使其震荡1.5小时。之后，用洗涤缓冲液(0.1％吐温80(MilliQ水中)：200μl/孔)洗涤4次。
对于二抗而言，将BSA以成为1％的方式溶解于二抗缓冲液(0.5M的Tris-HCl，1.75％NaCl)中，使用该缓冲液将以下的抗体(a)及(b)稀释为5000倍，由此制备二抗。
(a)过氧化物酶标记的亲和纯化猴IgA抗体(alpha)(Cat.No.074-11-011，KPL)
(b)山羊抗猴IgA(alpha链特异)-过氧化物酶(亲和纯化)(Cat.No.70041，Alphadiagnostic international)
向各孔中分别添加50μl二抗的溶液，使其反应0.75小时。反应后，用洗涤缓冲液(0.1％吐温80(MilliQ水中)：200μl/孔)洗涤4次。
向各孔中分别添加50μl底物溶液(2.68mg的TMBZ，1.05μl的35％过氧化氢水溶液，7mL的EDTA·2Na(2mM))。最后，向各孔中分别添加50μl的0.3N H2SO4，终止反应。然后，测定吸光度(450nm/630nm)。
将粪便中的抗胎球蛋白IgA抗体效价、抗脊髓灰质炎病毒IgA抗体效价、及抗流感病毒IgA抗体效价示于图5。如图5所示，在一日一次地持续摄取10-羟基癸酸的同时、每隔约3日使用抗原致敏的试验组中，观察到了抗胎球蛋白IgA抗体效价、抗脊髓灰质炎病毒IgA抗体效价、及抗流感病毒IgA抗体效价的上升。另一方面，仅每隔约3日使用抗原致敏的对照组中，未观察到这样的抗体效价的增加。认为该结果表明，通过持续性地施予10-羟基癸酸，得以诱导出免疫应答。另外，还表明10-羟基癸酸对于免疫应答的诱导并不依赖于抗原的种类，使用灭活抗原时也观察到对免疫应答的诱导。此外，还表明，即使在同时使用多种抗原致敏的情况下，仍然能够诱导出免疫应答。

Claims (8)

1.粘膜免疫激活剂，所述粘膜免疫激活剂中，作为有效成分含有选自由下述通式(1)表示的饱和脂肪酸、及其盐组成的组中的至少1种，
R-COOH (1)
通式(1)中，R表示被1个羟基取代的碳原子数7～11的烷基。
2.如权利要求1所述的粘膜免疫激活剂，其中，所述R为被1个羟基取代的壬基。
3.如权利要求1所述的粘膜免疫激活剂，其中，所述饱和脂肪酸为3-羟基癸酸及10-羟基癸酸。
4.如权利要求1所述的粘膜免疫激活剂，其中，所述饱和脂肪酸为10-羟基癸酸。
5.如权利要求1～4中任一项所述的粘膜免疫激活剂，其中，所述粘膜免疫激活剂是基于对M细胞的分化的诱导的粘膜免疫激活剂。
6.粘膜免疫激活用食品组合物，其含有权利要求1～5中任一项所述的粘膜免疫激活剂。
7.佐剂，其含有权利要求1～5中任一项所述的粘膜免疫激活剂。
8.疫苗制剂，其包含权利要求7所述的佐剂。
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