CN107523550A - 一种针对小细胞肺癌的Car‑T细胞制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种针对小细胞肺癌的Car‑T细胞制备方法，该方法包括如下步骤：采集患者外周血并加入至Ficoll淋巴细胞分离液中；吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤，离心得到T细胞；T细胞体外扩增；将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR‑T细胞；将CAR‑T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。本发明公开了一种针对小细胞肺癌的Car‑T细胞制备方法，通过采集患者外周血提取T细胞的方法，本发明成分明确，制作简单，有效降低小细胞肺癌患者的病症的复发，并提高治疗效果，为Car‑T细胞的临床推广应用提供了一种行之有效的途径。

Description

一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法
技术领域
本发明属于生物医学领域，特别是涉及一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法。
背景技术
小细胞肺癌约占肺癌的20％，恶性程度高，倍增时间短，转移早而广泛，对化疗、放疗敏感，初治缓解率高，但极易发生继发性耐药，容易复发，治疗以全身化疗为主。病理组织学上SCLC可分为：小细胞肺癌(包括以往的燕麦细胞癌)、混合性癌(即小细胞癌与鳞或腺癌的混合型)。
目前SCLC治疗领域最常用的分期系统为美国退伍军人医院肺癌研究小组制定的SCLC分期系统：如果肿瘤局限于一侧胸腔(包括其引流的区域淋巴结，如同侧肺门、纵隔或锁骨上淋巴结)且能被纳入一个放射治疗野即为局限期，如果肿瘤超出局限期范围即为广泛期，其中前者约占1/3，后者占2/3。这种分期方法简单、易行，与治疗疗效及预后相关。TNM分期目前也用于SCLC的分期
发明内容
本发明的目的在于提供一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，成分明确，制作简单，有效降低小细胞肺癌患者的病症的复发，并提高治疗效果，为Car-T细胞的临床推广应用提供了一种行之有效的途径。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，该方法包括如下步骤:S1、采集患者外周血并加入至Ficoll淋巴细胞分离液中；
S2、吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤，离心得到T细胞；
S3、T细胞体外扩增；
S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；
S6、将CAR-T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。
进一步地，所述S1中的具体步骤为，采集患者外周血100mL至管壁覆盖有抗凝剂的采血管中，加入100mL生理盐水稀释；将稀释后的外周血缓慢加入至Ficoll淋巴细胞分离液中，体积比为1：2，震荡均匀后1500-2000r/min离心20min。
进一步地，所述S3中的具体步骤为，将S2中得到的T细胞以1x106个/孔接种于24孔板中，每孔加入常规培养液2mL，置于37℃，5％ CO2培养箱中培养，每天换液一次，20天后得到扩增的T细胞。
进一步地，所述常规培养液为RPMI1640中加入10％FBS、60U/mL IL-2、100U/mLIL-1β。
本发明具有以下有益效果：
本发明公开了一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，通过采集患者外周血提取T细胞的方法，本发明成分明确，制作简单，有效降低小细胞肺癌患者的病症的复发，并提高治疗效果，为Car-T细胞的临床推广应用提供了一种行之有效的途径。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
具体实施方式
本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明为一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，该方法具体步骤如下：
实施例1
S1、采集患者外周血100mL至管壁覆盖有抗凝剂的采血管中，加入100mL生理盐水稀释；
S2、将稀释后的外周血缓慢加入至Ficoll淋巴细胞分离液中，体积比为1：2，震荡均匀后1500r/min离心20min；
S3、吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤两次，500r/min离心10min得到T细胞；
S4、将S3中得到的T细胞以1x106个/孔接种于24孔板中，每孔加入常规培养液2mL，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每天换液一次，20天后得到扩增的T细胞；
其中，所述常规培养液为RPMI1640中加入10％FBS、60U/mL IL-2、100U/mLIL-1β；
S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；
S6、将CAR-T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。
实施例2
S1、采集患者外周血100mL至管壁覆盖有抗凝剂的采血管中，加入100mL生理盐水稀释；
S2、将稀释后的外周血缓慢加入至Ficoll淋巴细胞分离液中，体积比为1：2，震荡均匀后2000r/min离心20min；
S3、吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤两次，1000r/min离心20min得到T细胞；
S4、将S3中得到的T细胞以1x106个/孔接种于24孔板中，每孔加入常规培养液2mL，置于37℃，5％ CO2培养箱中培养，每天换液一次，20天后得到扩增的T细胞；
其中，所述常规培养液为RPMI1640中加入10％FBS、60U/mL IL-2、100U/mL IL-1β；
S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；
S6、将CAR-T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。
实施例3
S1、采集患者外周血100mL至管壁覆盖有抗凝剂的采血管中，加入100mL生理盐水稀释；
S2、将稀释后的外周血缓慢加入至Ficoll淋巴细胞分离液中，体积比为1：2，震荡均匀后1800r/min离心20min；
S3、吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤两次，800r/min离心10-20min得到T细胞；
S4、将S3中得到的T细胞以1x106个/孔接种于24孔板中，每孔加入常规培养液2mL，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每天换液一次，20天后得到扩增的T细胞；
其中，所述常规培养液为RPMI1640中加入10％FBS、60U/mL IL-2、100U/mL IL-1β；
S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；
S6、将CAR-T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。
以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
S1、采集患者外周血并加入至Ficoll淋巴细胞分离液中；
S2、吸取离心液中两液面交界处的细胞层至离心管中，加入生理盐水洗涤，离心得到T细胞；
S3、T细胞体外扩增；
S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；
S6、将CAR-T细胞与人血白蛋白，并加入生理盐水，制备成小细胞肺癌细胞制剂。
2.根据权利要求1所述的一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：所述S1中的具体步骤为，采集患者外周血100mL至管壁覆盖有抗凝剂的采血管中，加入100mL生理盐水稀释；将稀释后的外周血缓慢加入至Ficoll淋巴细胞分离液中，体积比为1：2，震荡均匀后1500-2000r/min离心20min。
3.根据权利要求1所述的一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：所述S3中的具体步骤为，将S2中得到的T细胞以1x106个/孔接种于24孔板中，每孔加入常规培养液2mL，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每天换液一次，20天后得到扩增的T细胞。
4.根据权利要求3所述的一种针对小细胞肺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：所述常规培养液为RPMI1640中加入10％FBS、60U/mL IL-2、100U/mL IL-1β。
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