CN107496207A - 一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用，包含以下步骤：1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入发酵菌菌悬液混匀，进行发酵，收集发酵产物；3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的有机溶剂，摇匀，室内室温暗处(20～25℃)浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收有机溶剂，得桂枝挥发油。本发明具有抑菌、抗炎、抗氧化、改善微循环的功效。

Description

一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用。
背景技术
中药桂枝，别名柳桂、嫩桂枝、桂枝尖，系樟科植物肉桂的干燥嫩枝。药理研究表明桂枝具有缓和肠胃刺激、强心、改善微循环、抗炎、抗血小板凝集等多种生理活性。现代研究亦表明桂枝中主要活性物质为挥发油类，其中主要成分为桂皮醛；尚含有有机酸类、多糖类、香豆素类及鞣质类成分。桂枝挥发油对急性、慢性和免疫损伤性炎症均有显著的拮抗作用，其作用与抑制花生四烯酸代谢、影响炎症介质生成及抗氧化等有关。桂枝挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌具有较好的抑菌效果，最低抑菌浓度为2.08％。桂皮醛体外对黄曲霉、烟曲霉、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌、粪肠球菌、及牙周常见菌牙卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌、微荣球菌、丙酸杆菌、颊纤毛菌、变形链球菌、黏性放线菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌及炭疽杆菌等均有较好的抑制作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入发酵菌菌悬液混匀，进行发酵，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的有机溶剂，摇匀，室内室温暗处(20～25℃)浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收有机溶剂，得桂枝挥发油。
在其中一些实施例中，所述桂枝醇提取物残渣为桂枝经过醇提取后剩余的残渣。
在其中一些实施例中，所述步骤2)中的发酵参数是，使用植物乳酸菌作为发酵菌，固态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天。
在其中一些实施例中，所述步骤3)中的发酵桂枝村提取物残渣粉末需过40～60目筛后方可使用。
在其中一些实施例中，所述步骤4)中的有机溶剂为正己烷。
本发明还提供了根据上述制备方法所制得的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油。
本发明还提供了上述具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油在制备化妆品中的应用。
在其中一些实施例中，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
本发明还提供了一种化妆品，包括如前所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油。
本发明还提供了一种祛痘洗面奶，包含如下质量百分比成分：如前所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油0.5～5％、月桂醇磺基琥珀酸酯二钠0.3～0.5％、椰油酰胺丙基甜菜碱5～10％、椰油酰胺DEA3～4％、氯化钠1～5％、甲基聚硅氧烷2～5％、甜菜碱1～5％、水杨酸1.5～1.7％、黄原胶3～5％、支链淀粉1～5％、PEG-150二硬脂酸酯0.1～0.5％、DMDM乙内酰脲0.1～0.5％、柠檬酸0.01～0.5％、甲基氯异噻唑啉酮0.0008～0.0013％、甲基异噻唑啉酮0.0002～0.0008％、去离子水余量。
本发明具有的有益效果如下：本发明桂枝挥发油，主要是将桂枝醇提取剩下的残渣，再次提取制得，加入植物乳酸菌作为菌种，有助于桂枝醇提取物残渣的有效发酵，增加提取桂枝挥发油的含量；采用固态发酵，使原料之间有空隙，能与菌悬液均匀接触，充足的氧气有利于原料的充分发酵，使其最后得到的挥发油含量有效增加。可将桂枝挥发油添加在多种护肤产品中，如膏霜、乳液、水剂等，本发明具有抑菌、抗炎、抗氧化、改善微循环的功效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述：
文中所出现的所有成分均为INCI(International Nomenclature CosmeticIngredient)，即国际化妆品原料明明说对其规定的名称。
实施例1
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入植物乳酸菌作为发酵菌，在固态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成50目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处22.5℃浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
实施例2
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入植物乳酸菌作为发酵菌，在固态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成40目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处20℃浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
实施例3
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入植物乳酸菌作为发酵菌，在固态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成60目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处25℃浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
对比例1
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于90℃高温灭菌25min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入植物乳酸菌作为发酵菌，在固态好氧的方式下接种2.5mL/100g菌种，在25℃发酵3天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成80目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入10倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处30℃浸泡5d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
对比例2
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在33℃发酵5天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成50目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处22.5℃浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
对比例3
一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入植物乳酸菌作为发酵菌，在液态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎成50目，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的正丁烷，摇匀，室内室温暗处22.5℃浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收正丁烷，得桂枝挥发油。
结果分析：实施例1-3和对比例1-3的制备条件具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的含量如下表1。
表1
由表1数据分析可知：实施例1-3的制备条件下得到的桂枝挥发油的含量明显比对比例1-3的制备条件下得到的桂枝挥发油的含量明显要高；对比例1改变了制备工艺的所有参数，结果对比例1得到桂枝挥发油的含量明显低于实施例1；对比例2中除了没有加入植物乳酸菌作为发酵菌外，其它制备条件和实施例1相同，但是对比例2的桂枝挥发油的提取量比实施例1明显少，说明植物乳酸菌起到了增加桂枝挥发油提取量的作用；对比例3中除了用液态好氧的发酵方式，其它的制备工艺与实施例1相同，但是桂枝挥发油比实施例1低，说明了固态好氧的发酵方式在本发明中有提高桂枝挥发油提取率的作用。将实施例1-3制备得到的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油应用在制备祛痘洗面奶中，具体如下表2。
表2
原料 质量百分比％
桂枝挥发油 2.5
月桂醇磺基琥珀酸酯二钠 0.4
椰油酰胺丙基甜菜碱 7.5
椰油酰胺DEA 3.5
氯化钠 3
甲基聚硅氧烷 3.5
甜菜碱 3
水杨酸 1.6
黄原胶 4
支链淀粉 3.5
PEG-150二硬脂酸酯 0.3
DMDM乙内酰脲 0.3
柠檬酸 0.25
甲基氯异噻唑啉酮 0.0010
甲基异噻唑啉酮 0.0005
去离子水 66.6485
抑菌功效验证：
供试菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌
培养基与培养条件：普通营养琼脂培养基(37℃、48h培养，用于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌培养)、疱肉培养基(用于痤疮丙酸杆菌培养)。
试验方法：参照中华人民共和国国家标准GB15797-2002“一次性使用卫生用品卫生标准”中附录C4“溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能试验方法”。
操作步骤：
(1)试验菌24h培养物用0.03mol/L PBS洗下，制成106cfu/mL菌悬液。
(2)取桂枝挥发油和祛痘洗面奶各1g加入上述菌悬液0.1mL均匀涂布混合，开始计时20min后，加入9mL 0.03mol/L PBS充分混匀，作适当稀释后，取其中2-3个稀释度，分别取1mL置于两个平行平皿内，再加入相应培养基分别混菌培养。作菌落记数。以上试验重复3次，取其平均数，同时设空白对照。
计算：X＝(A-B)/A×100％
式中:X———抑菌率，％
A———对照样品平均回收菌落；
B———试验样品平均回收菌落。
抑菌功效评价：功效评价分三级:显效、有效和无效，如下表3。
表3
按照上述试验方法，进行20min的抑菌试验，结果见表4。
表4
痤疮丙酸杆菌的含量是治疗痤疮治疗效果的重要评价标准之一，因此，对痤疮丙酸杆菌的抑菌效果即为祛痘效果，由表4抑菌效果可知，桂枝挥发油具有显著的抑菌功效，将其应用在洗面奶中，能达到良好去祛痘目的。
抗炎功效验证：
主要材料：小鼠巨噬细胞系RAW264.7(来源于中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心)、实施例提取得到的桂枝挥发油、小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA检测试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)ELISA检测试剂盒、脂多糖(LPS)。
方法：(1)用MTT法检测桂枝挥发油对RAW264.7细胞生长的影响，调整RAW264.7细胞密度至5x104/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔1000μL，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24h。培养结束后吸出细胞板中的培养基，处理组中分别加入浓度为500μg/mL生物200μL含桂枝挥发油培养基、祛痘洗面奶稀释液，空白对照组加入等体积的无血清培养基，继续培育24h，每组3个复孔。24h后，每组加入20μL的MTT溶液，继续培育4h后，取出96孔板，吸出孔内液体，加入150μL的DMSO，震荡5min后于490nm处测定吸光度(A)值，计算细胞的存活率。存活率＝药物组平均A值/空白对照组平均A值。
(2)对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞释放PGE2的影响，分别为对照组(无血清培养基)，桂枝挥发油给药组(100μg/mL的桂枝挥发油及1μg/mL的LPS)，祛痘洗面奶组(100μg/mL的洗面奶及1μg/mL的LPS)，细胞培养和方法与(1)同，于LPS刺激18h后收集细胞上清液，按照ELISA试剂盒说明书要求进行PGE2检测，计算抑制率，记为抑制率1。
(3)对LPS刺激RAW264.7细胞释放TNF-a的影响，分别为对照组(无血清培养基)，桂枝挥发油给药组(100μg/mL的桂枝挥发油及1μg/mL的LPS)，祛痘洗面奶组(100μg/mL的洗面奶及1μg/mL的LPS)，LPS刺激18h后收集细胞上清，按ELISA试剂盒说明书操作要求进行TNF-a检测，计算抑制率，记为抑制率2。
实验结果如下表5。
表5
成分 桂枝挥发油 祛痘洗面奶 空白对照
存活率(％) 105.1 100.01 103.2
抑制率1(％) 90.1 85.4 25.9
抑制率2(％) 89.8 80.4 31.2
由表5中存活率的数据分析可知，桂枝挥发油和祛痘洗面奶无细胞毒作用，成分温和、不刺激；从抑制率1和抑制率2的数据分析可知，说明了桂枝挥发油能有效抑制细胞炎症因子的释放，将其应用在化妆品中，能赋予化妆品良好的抗炎功效。
以上实施例仅表明本发明的几种实施例，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利的限制范围。应当指出的是：任何从事本专业的技术人员，都有能力利用已揭示的技术内容，对其作出一些更动或修饰，成为等同变化的等效实施例。根据本发明技术实质，对本发明进行简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)将桂枝醇提取物残渣置于121℃高温灭菌30min，然后冷却，取出；
2)将灭菌冷却后的桂枝醇提取物残渣，在通风需氧条件下加入发酵菌菌悬液混匀，进行发酵，收集发酵产物；
3)取出发酵结束后的发酵产物，烘干后粉碎，得到发酵桂枝醇提取物残渣粉末。
4)将发酵桂枝醇提取物残渣粉末，加入5倍重量份的有机溶剂，摇匀，室内室温暗处(20～25℃)浸泡3d，过滤，旋转薄膜减压法回收有机溶剂，得桂枝挥发油。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，桂枝醇提取物残渣为桂枝经过醇提取后剩余的残渣。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，发酵参数是，使用植物乳酸菌作为发酵菌，固态好氧的方式下接种3.2mL/100g菌种，在33℃发酵5天。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，发酵桂枝村提取物残渣粉末需过40～60目筛后方可使用。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，加入的有机溶剂为正己烷。
6.根据权利要求1～5任一项所述制备方法所制得的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油。
7.根据权利要求6所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油在制备化妆品中的应用。
8.根据权利要求7所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油在制备化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
9.一种化妆品，其特征在于，包括有权利要求6所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油。
10.一种祛痘洗面奶，其特征在于，所述祛痘洗面奶包含如下质量百分比成分：权利要求6所述的具有抑菌抗炎活性的桂枝挥发油0.5～5％、月桂醇磺基琥珀酸酯二钠0.3～0.5％、椰油酰胺丙基甜菜碱5～10％、椰油酰胺DEA 3～4％、氯化钠1～5％、甲基聚硅氧烷2～5％、甜菜碱1～5％、水杨酸1.5～1.7％、黄原胶3～5％、支链淀粉1～5％、PEG-150二硬脂酸酯0.1～0.5％、DMDM乙内酰脲0.1～0.5％、柠檬酸0.01～0.5％、甲基氯异噻唑啉酮0.0008～0.0013％、甲基异噻唑啉酮0.0002～0.0008％、去离子水余量。
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