CN107455614A - 一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法及其所制得的鱼饲料与投喂方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法及其所制得的鱼饲料与投喂方法,饲喂齐口裂腹鱼后,血清IgM活性增强、ACH50与溶菌酶含量显著提高、超氧化物歧化酶酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活力提高,丙二醛含量降低,齐口裂腹鱼前中后肠嗜水气单胞菌和芽孢杆菌相对总菌的含量显著增加。表明齐口裂腹鱼在食用该饲料后,免疫性能明显增强,存活率显著提高,从而提高了经济效益,降低了养殖成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物饲料技术领域,具体涉及一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法及其所制得的鱼饲料与投喂方法。
背景技术
齐口裂腹鱼免疫力较低,对外界刺激较敏感,近年来由于环境污染等原因使得鱼类资源量急剧减少,导致渔民经济受损,鱼肉市场价格急剧上涨。因此,急需开发一种能提高齐口裂腹类免疫性能的饲料。
魔芋葡甘露聚糖又称魔芋多糖,由D-甘露糖与D-葡萄糖按1.6:1的比例以β-1,4糖苷键连接,是已知的黏度最大的一种天然高分子杂多糖,魔芋葡甘露聚糖是一种免疫调节剂,具有提高免疫能力的作用,主要通过以下两种途径来实现:一是通过与分布在肠绒毛的细胞表面蛋白受体之间的相互作用发挥免疫作用;二是通过对分布在肠道黏膜上的某些细胞信号进行干预调节机体免疫。另外,魔芋葡甘露聚糖还可作为一种外源性益生元促进肠道内有益微生物如双歧杆菌的生长和繁殖,从而抑制病原菌的生长繁殖,间接起到提高机体免疫力的作用。魔芋葡甘露聚糖进入肠道后会在肠道表面形成孔径大小不等的膜附着于肠壁,阻碍有害物质的侵入,从而增强抵抗力。
目前一种能提高齐口裂腹鱼免疫性能的低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖在目前市场上鱼饲料中的应用几乎没有,因此,通过添加低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖到鱼饲料中饲养齐口裂腹鱼,对开发能提高鱼类免疫性能的饲料具有广阔的前景。
导致齐口裂腹鱼类资源量急剧减少的另一个原因在于投喂方法不当,因此,急需一种规范投喂方法来提高齐口裂腹鱼的养殖效益。
发明内容
(一)要解决的技术问题
为了克服现有技术不足,现提出一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法及其所制得的鱼饲料与投喂方法。
(二)技术方案
本发明通过如下技术方案实现:本发明提出了一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法,包括如下几个步骤:
A.称取100g魔芋粉溶于预先配置好的25ml50%的乙醇溶液并搅拌均匀,形成混合物A;
B.用保鲜膜将盛放混合物A的容器进行封口,再用磁力搅拌器将混合物A进行搅拌35分钟,在搅拌过程的第10分钟、第20分钟、第30分钟分别加入30%H2O27ml、7ml、3.5ml,加入30%H2O2时需要揭开保鲜膜,加入完毕后再盖上,总共加入17.5ml30%H2O2,得到混合物B;
C.将混合物B连同盛放容器一同放入恒温水浴锅中,温度为40℃,水位高度刚好没过混合物B在盛放容器中的高度,盛放容器用保鲜膜进行封口,水浴时间为4h,得到混合物C;
D.水浴结束后,将混合物C用过滤装置进行过滤,然后将布氏漏斗中的白色固体粉末物质放入50%的乙醇溶液中洗涤,这里50%的乙醇用量为混合物C体积的2倍,用磁力搅拌器进行搅拌1分钟,再将混合物过滤;
E.重复D的操作步骤2次,得到白色固体粉末物质D;
F.将白色固体粉末物质D放入干净烧杯中,加入5L柠檬酸,50g复合氨基酸,用玻璃棒搅拌均匀后,在电炉上加热搅拌10min,得到白色略微透明的混合物E;
G.将混合物E平均倒入20个500ml的锥形瓶中,然后用棉塞封口,接着将锥形瓶放入高压锅中,温度为115℃,反应时间为15~25分钟,取出得到混合物F;
H.在无菌室中,用0.5mol/L的NaOH将混合物F的PH值调到4.5~5.0,然后冷却到28~30℃时,每个锥形瓶中接种0.75g~1g高活性干酵母,摇床培养48h,培养温度为28~30℃,转速为180~200r/min。培养结束,将培养物放入离心机中离心除去菌体,离心机转速为5000~6000r/min,离心时间6~8min,得到混合物G;
I.向混合物G中倒入两倍体积的95%浓度乙醇进行搅拌沉淀,得到白色沉淀物H,过滤收集H到干净烧杯中,继续加入两倍体积的95%浓度乙醇进行搅拌,过滤,;
J.将白色沉淀物H用两倍体积的95%浓度乙醇洗涤过滤5次后,即可得到样品;
K.将步骤J中所得样品放在洁净瓷盘中,样品堆放厚度为0.3~0.5厘米,先置于60℃鼓风干燥箱中干燥8h,干燥过程中每隔半小时,用玻璃棒将样品I进行上下翻一次,最后得高纯度的低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖。
一种由低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖所制得的鱼饲料,制备所述鱼饲料包括如下步骤:
a)预先备好鱼饲料的所有原料,鱼粉,面粉,豆粕,淀粉,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖,菜油,麸皮,磷酸二氢钙,矿物质,多维+胆碱;
b)将豆粕、麸皮进行粉碎,然后将鱼粉,面粉,豆粕粉,淀粉,麸皮粉进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物1,然后再将低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖,磷酸二氢钙,矿物质,多维+胆碱进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物2;
c)接着将粉料混合物1分成3份,分批次加入粉料混合物2中,加入一份粉料混合物1,就对其进行充分搅拌,使其混合均匀,最终制得混合均匀的粉料混合物3;
d)然后再向粉料混合物3中加入菜油充分搅拌混匀,最后加入适量的水搅拌,使得呈现质地均匀,软硬适宜,手捏成团后不易散开的混合物即可,然后将混合物放入制备鱼饲料的机器中,制成颗粒状饲料;
e)最后将颗粒状饲料放入饲料烘箱中进行烘干即可能制得提高齐口裂腹鱼免疫性能的鱼饲料。
一种鱼饲料的投喂方法,每天以齐口裂腹鱼体重2.5%的量进行投喂,将每日需要投喂的饲料均分为3份,分别在早上8点-9点,中午1点-2点,晚上7点-8点进行投喂,水温控制在15—22℃,水质PH为:6.8-7.5,水体溶氧量在3.5mg/L以上,透明度为35cm以上,养殖池具有一定的微流水,流水量为每天下午5点-6点进行养殖池排污1次,换水1次,水体为养殖密度为40尾/m2—50尾/m2
进一步的,所述齐口裂腹鱼饲料的颗粒粒径为2-3mm。
(三)有益效果
本发明相对于现有技术,具有以下有益效果:
本发明提到的一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法与投喂方法,饲喂齐口裂腹鱼后,血清IgM活性增强、ACH50与溶菌酶含量显著提高、超氧化物歧化酶酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活力提高,丙二醛含量降低。齐口裂腹鱼前中后肠嗜水气单胞菌和芽孢杆菌相对总菌的含量显著增加。表明齐口裂腹鱼在食用该饲料后,免疫性能明显增强,存活率显著提高,从而提高了经济效益,降低了养殖成本,本发明所选用的低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖具有分子量小、易吸收等特点,具有抗病毒、抗氧化、免疫调节等多种生物活性,具有很好的生物相溶性且副作用较小。将低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖添加到饲料中能够很好的发挥其免疫效果,符合新型绿色添加剂的要求。齐口裂腹鱼类长期食用该饲料可提高免疫性能,减少药物用量,改善鱼肉品质,从而提高了鱼肉安全性,增加养殖效益。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例
低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖制备:一、称取100g魔芋粉溶于预先配置好的25ml50%的乙醇溶液并搅拌均匀,形成混合物A;二、用保鲜膜将盛放混合物A的容器进行封口,再用磁力搅拌器将混合物A进行搅拌35分钟,在搅拌过程的第10分钟、第20分钟、第30分钟分别加入30%H2O27ml、7ml、3.5ml,加入30%H2O2时需要揭开保鲜膜,加入完毕后再盖上,总共加入17.5ml 30%H2O2,得到混合物B;三、将混合物B连同盛放容器一同放入恒温水浴锅中,温度为40℃,水位高度刚好没过混合物B在盛放容器中的高度,盛放容器用保鲜膜进行封口,水浴时间为4h,得到混合物C;四、水浴结束后,将混合物C用过滤装置进行过滤,然后将布氏漏斗中的白色固体粉末物质放入50%的乙醇溶液中洗涤,这里50%的乙醇用量为混合物C体积的2倍,用磁力搅拌器进行搅拌1分钟,再将混合物过滤。五、重复四的操作步骤2次,得到白色固体粉末物质D。六、将白色固体粉末物质D放入干净烧杯中,加入5L柠檬酸(1%),50g复合氨基酸,用玻璃棒搅拌均匀后,在电炉上加热搅拌10min,得到白色略微透明的混合物E;七、将混合物E平均倒入20个500ml的锥形瓶中,然后用棉塞封口,接着将锥形瓶放入高压锅中,温度为115℃,反应时间为20分钟,取出得到混合物F;八、在无菌室中,用0.5mol/L的NaOH将混合物F的PH值调到4.5,然后冷却到30℃时,每个锥形瓶中接种0.8g高活性干酵母,摇床培养48h,培养温度为29℃,转速为180r/min。培养结束,将培养物放入离心机(6000r/min,8min)中离心除去菌体,得到混合物G。九、然后向混合物G中倒入两倍体积的乙醇(95%)进行搅拌沉淀,得到白色沉淀物H,过滤收集H到干净烧杯中,继续加入两倍体积的乙醇(95%)进行搅拌,过滤。十、将白色沉淀物H用两倍体积的乙醇(95%)洗涤过滤5次后,即可得到样品I。十一、将样品I放在洁净瓷盘中,样品堆放厚度为0.3厘米,先置于60℃鼓风干燥箱中干燥8h,干燥过程中每隔半小时,用玻璃棒将样品I进行上下翻一次,最后得高纯度的低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖(LOKGM)。
鱼饲料的配制步骤为:称取齐口裂腹鱼饲料原料:(1)基础组(Control)饲料原料:鱼粉43份,面粉20份,豆粕20份,菜油2份,麸皮1份,磷酸二氢钙1.2份,矿物质0.8份,多维+胆碱0.4份,淀粉11.6份,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖0份。(2)实验组1(LOKGM0.4)饲料原料:鱼粉43份,面粉20份,豆粕20份,菜油2份,麸皮1份,磷酸二氢钙1.2份,矿物质0.8份,多维+胆碱0.4份,淀粉11.2份,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖0.4份。(3)实验组2(LOKGM0.8)饲料原料:鱼粉43份,面粉20份,豆粕20份,菜油2份,麸皮1份,磷酸二氢钙1.2份,矿物质0.8份,多维+胆碱0.4份,淀粉10.8份,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖0.8份。(4)实验组3(LOKGM1.6)饲料原料:鱼粉43份,面粉20份,豆粕20份,菜油2份,麸皮1份,磷酸二氢钙1.2份,矿物质0.8份,多维+胆碱0.4份,淀粉10份,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖1.6份。称取上述质量份数的基础组饲料原料,将豆粕、麸皮进行粉碎,然后将鱼粉,面粉,豆粕粉,淀粉,麸皮粉进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物1,然后再将低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖(此处原料中低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖0份即不添加),磷酸二氢钙,矿物质,多维+胆碱进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物2,接着将,粉料混合物1分成3份,分批次加入粉料混合物2中,加入一份粉料混合物1,就对其进行充分搅拌,使其混合均匀,最终制得混合均匀的粉料混合物3。然后再向粉料混合物3中加入菜油充分搅拌混匀,最后加入适量的水搅拌,使得呈现质地均匀,软硬适宜,手捏成团后不易散开的混合物即可,然后将混合物放入制备鱼饲料的机器中,制成颗粒状饲料,最后将颗粒状饲料放入饲料烘箱中进行烘干即可能制得提高齐口裂腹鱼免疫性能的鱼饲料。然后按上述配制步骤配制加工分别制得:实验组1饲料,实验组2饲料,实验组3饲料。
实验鱼的选择:随机选取400尾平均体重为81±2.64g的体质健康齐口裂腹鱼进行饲养。
投喂方法包括:(1)饲养齐口裂腹鱼的水质要求:水温控制在15—22℃,水质PH为:6.8-7.5,水体溶氧量在3.5mg/L以上,透明度为35cm以上,养殖池具有一定的微流水,流水量为每天下午5点-6点进行养殖池排污1次,换水1次,水体为养殖密度为40尾/m2—50尾/m2。(2)齐口裂腹鱼购回后,所有鱼饲喂基础组饲料,先驯养15d。然后将齐口裂腹鱼随机分为4组,分别饲喂基础组饲料、实验组1饲料,实验组2饲料,实验组3饲料饲养70天;饲养齐口裂腹鱼的饲料量:每天以齐口裂腹鱼体重2.5%的量进行投喂,将每日需要投喂的饲料均分为3份,分别在早上8点-9点,中午1点-2点,晚上7点-8点进行投喂。
饲养70天结束后,分别对基础组(Control)、实验组1(LOKGM0.4),实验组2(LOKGM0.8),实验组3(LOKGM1.6)的齐口裂腹鱼进行采样,实验测得如下指标:
表1 LOKGM对齐口裂腹鱼免疫及抗氧化指标的影响
LOKGM对齐口裂腹鱼血清免疫及抗氧化指标的影响结果如表1所示,不同剂量LOKGM均可提高齐口裂腹鱼血清中IgM活性、ACH50含量和溶菌酶含量,说明LOKGM能提高齐口裂腹鱼的免疫性能。同时,不同剂量LOKGM均提高血清中SOD活性、GSH-PX含量,降低MDA的含量,说明LOKGM能提高齐口裂腹鱼的抗氧化性能。
表2:齐口裂腹鱼肠道嗜水气单胞菌相对总菌的含量
表3:齐口裂腹鱼肠道芽孢杆菌相对总菌的含量
由表2和表3可知,与对照组相比,不同剂量LOKGM均能提高齐口裂腹鱼前中后肠中嗜水气单胞菌和芽孢杆菌相对含量,说明LOKGM能通过肠道简接提高齐口裂腹鱼免疫力,保持肠黏膜完整性。
上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的构思和范围进行限定。在不脱离本发明设计构思的前提下,本领域普通人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进,均应落入到本发明的保护范围,本发明请求保护的技术内容,已经全部记载在权利要求书中。
Claims (4)
1.一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖的制备方法,其特征在于:包括如下几个步骤:
A.称取100g魔芋粉溶于预先配置好的25ml50%的乙醇溶液并搅拌均匀,形成混合物A;
B.用保鲜膜将盛放混合物A的容器进行封口,再用磁力搅拌器将混合物A进行搅拌35分钟,在搅拌过程的第10分钟、第20分钟、第30分钟分别加入30%H2O27ml、7ml、3.5ml,加入30%H2O2时需要揭开保鲜膜,加入完毕后再盖上,总共加入17.5ml30%H2O2,得到混合物B;
C.将混合物B连同盛放容器一同放入恒温水浴锅中,温度为40℃,水位高度刚好没过混合物B在盛放容器中的高度,盛放容器用保鲜膜进行封口,水浴时间为4h,得到混合物C;
D.水浴结束后,将混合物C用过滤装置进行过滤,然后将布氏漏斗中的白色固体粉末物质放入50%的乙醇溶液中洗涤,这里50%的乙醇用量为混合物C体积的2倍,用磁力搅拌器进行搅拌1分钟,再将混合物过滤;
E.重复D的操作步骤2次,得到白色固体粉末物质D;
F.将白色固体粉末物质D放入干净烧杯中,加入5L柠檬酸,50g复合氨基酸,用玻璃棒搅拌均匀后,在电炉上加热搅拌10min,得到白色略微透明的混合物E;
G.将混合物E平均倒入20个500ml的锥形瓶中,然后用棉塞封口,接着将锥形瓶放入高压锅中,温度为115℃,反应时间为15~25分钟,取出得到混合物F;
H.在无菌室中,用0.5mol/L的NaOH将混合物F的PH值调到4.5~5.0,然后冷却到28~30℃时,每个锥形瓶中接种0.75g~1g高活性干酵母,摇床培养48h,培养温度为28~30℃,转速为180~200r/min。培养结束,将培养物放入离心机中离心除去菌体,离心机转速为5000~6000r/min,离心时间6~8min,得到混合物G;
I.向混合物G中倒入两倍体积的95%浓度乙醇进行搅拌沉淀,得到白色沉淀物H,过滤收集H到干净烧杯中,继续加入两倍体积的95%浓度乙醇进行搅拌,过滤,;
J.将白色沉淀物H用两倍体积的95%浓度乙醇洗涤过滤5次后,即可得到样品;
K.将步骤J中所得样品放在洁净瓷盘中,样品堆放厚度为0.3~0.5厘米,先置于60℃鼓风干燥箱中干燥8h,干燥过程中每隔半小时,用玻璃棒将样品I进行上下翻一次,最后得高纯度的低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖。
2.一种由权利要求1所述的一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖所制得的鱼饲料,其特征在于:制备所述鱼饲料包括如下步骤:
a)预先备好鱼饲料的所有原料,鱼粉,面粉,豆粕,淀粉,低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖,菜油,麸皮,磷酸二氢钙,矿物质,多维+胆碱;
b)将豆粕、麸皮进行粉碎,然后将鱼粉,面粉,豆粕粉,淀粉,麸皮粉进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物1,然后再将低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖,磷酸二氢钙,矿物质,多维+胆碱进行充分混匀,制得均匀的粉料混合物2;
c)接着将粉料混合物1分成3份,分批次加入粉料混合物2中,加入一份粉料混合物1,就对其进行充分搅拌,使其混合均匀,最终制得混合均匀的粉料混合物3;
d)然后再向粉料混合物3中加入菜油充分搅拌混匀,最后加入适量的水搅拌,使得呈现质地均匀,软硬适宜,手捏成团后不易散开的混合物即可,然后将混合物放入制备鱼饲料的机器中,制成颗粒状饲料;
e)最后将颗粒状饲料放入饲料烘箱中进行烘干即可能制得提高齐口裂腹鱼免疫性能的鱼饲料。
3.一种如权利要求2所述的鱼饲料的投喂方法,其特征在于:每天以齐口裂腹鱼体重2.5%的量进行投喂,将每日需要投喂的饲料均分为3份,分别在早上8点-9点,中午1点-2点,晚上7点-8点进行投喂,水温控制在15—22℃,水质PH为:6.8-7.5,水体溶氧量在3.5mg/L以上,透明度为35cm以上,养殖池具有一定的微流水,流水量为每天下午5点-6点进行养殖池排污1次,换水1次,水体为养殖密度为40尾/m2—50尾/m2。
4.根据权利要求2所述的一种低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖所制得的鱼饲料,其特征在于:所述齐口裂腹鱼饲料的颗粒粒径为2-3mm。
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