CN107449840A - 一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，首先利用酶解法实现对低聚果糖的酶解处理，在此基础上，通过选择特定的色谱条件，采用通用的高效液相色谱法—蒸发光检测器实现了配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测，优点在于克服了现有国标方法《GB5009.88‑2016》需用离子色谱脉冲专用安培检测器的困扰，设备成本低，通用性强，推广性高。通过与《GB5009.88‑2016》方法使用的离子色谱脉冲专用安培检测器的检测结果进行比较，误差小于5％。

Description

一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法
技术领域
本发明涉及低聚果糖总量的检测方法，尤其是涉及一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法。
背景技术
低聚果糖是一种天然活性物质，具有调节肠道菌群，增殖双歧杆菌，促进钙吸收，调节免疫，抗龋齿等功能，是可溶性膳食纤维的重要组成部分，由于其良好的性能被普遍添加于配方食品及辅助食品中。如作为营养强化剂，GB14880-2012标准中明确规定了其在婴幼儿配方食品中使用的最大限量不超过64.5g/kg。
目前的文献研究表明低聚果糖的检测手段主要为液相色谱法和离子色谱法。其大都采用了以蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖为低聚果糖的主要成分，采用外标法进行定量的方式。考虑到低聚果糖主要有两种来源，一种是以蔗糖为原料，利用果糖基转移酶的催化作用转化而成的，主要成分含蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。一种是以菊苣或菊芋为原料，经酶解或酸解而生成的聚合度为2-9的果聚糖。仅以三种低聚果糖的量来代表低聚果糖总量，这对于添加了以菊苣或菊粉为来源的低聚果糖的产品的检测显然是不合适的。
2017年3月1号实施的国标GB5009.255-2016标准是专门针对食品中果聚糖的检测方法，能够有效检测低聚果糖的总量，但该方法需要用离子色谱仪配以三元及以上梯度泵和脉冲安培检测器的进行检测，由于使用的设备价格昂贵达百万人民币以上，且三元及以上梯度泵和脉冲安培检测器专用性强，适用范围小，因此限制了该标准方法的推广应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够利用现有的通用设备，适于推广应用的配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，包括以下步骤：
1)制备果糖标准溶液并进行高效液相色谱法—蒸发光检测器检测，得到标准谱图；
2)将步骤1获得的标准谱图制作成果糖浓度与色谱峰面积关系曲线图；
3)对待检测的配方奶/乳粉样品进行预处理得到待测样液；
4)然后使用高效液相色谱法—蒸发光检测器对步骤3)得到的待测样液进行检测，测得色谱峰面积，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
5)根据步骤2)的关系曲线图，得到配方奶/乳粉样品的水解果糖含量；
6)根据以下换算公式得到配方奶/乳粉中低聚果糖的总量：
式中：
X—配方奶/乳粉中低聚果糖的总量，单位为克/每千克(g/kg)；
K1—对果聚糖水解过程中增加的水分子进行校正；
K2—对于Fn型果聚糖末端果糖基被还原和GFn型果聚糖末端葡萄糖不被检测进行校正；
C—待测样液中果糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)；
C0—未加样品的空白测定液中果糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)；
V—待测样液定容体积,单位为毫升(mL)；
V1—待测样液酶解液定容体积，单位为毫升(mL)；
m—待测样液质量，单位为克(g)；
0.2—用于酶解的样品溶液体积，单位为毫升(mL)；
1000—单位转换系数；
n—平均聚合度，对于低聚果糖，按照n＝4计算。
步骤1)和步骤2)的具体内容为：
称取低聚果糖标准品并用蒸馏水逐级稀释，分别稀释成至少5种不同浓度的标准溶液，将不同浓度的标准溶液进行高效液相色谱法—蒸发光检测器检测并得到标准谱图，测定相应的色谱峰面积值，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
以标准工作液中果糖的质量浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到果糖浓度与色谱峰面积关系曲线图，果糖浓度与色谱峰面积的对应函数关系。
步骤3)的具体内容为：
准确称取一定量的配方奶/乳粉于容器中，加入80℃热水约50mL，置于80℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇15min后,冷至室温转移定容至50mL容量瓶中，作为样液；
若配方奶/乳粉为含蔗糖配方奶/乳粉，取300μL样液，加入0.10-0.80mL蔗糖酶(5.0U/mL)溶液，旋涡振荡混匀，置于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇60min后，按照0.8-1.5倍将硼氢化钠溶液加入样液，继续振摇30min后取出，冷却至室温后按照2-3倍加入乙酸溶液，静置10min，随后加入0.5-1.5mL果聚糖酶溶液(500U/mL)，旋涡振荡混匀，于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇30min后，冷却至室温后定容至2.5ml，过0.22μm水相微孔滤膜待测；
若配方奶/乳粉为不含蔗糖配方奶/乳粉，取300μL样液于具塞玻璃试管中，加入0.5-1.5mL果聚糖酶酶解后定容至2.5ml待测。
优选地，蔗糖酶的加入量为0.5mL，果聚糖酶的加入量为1.0mL。
步骤4)中流动相为乙睛70～85：水30～15，增益值为5.0以上，优选流动相为乙睛85：水15，PMT增益值为8.0。
与现有技术相比，本发明的优点在于首先利用酶解法实现对低聚果糖的酶解处理，在此基础上，通过选择特定的色谱条件，采用通用的高效液相色谱法—蒸发光检测器实现了配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测，克服了现有国标方法《GB5009.88-2016》需用离子色谱脉冲专用安培检测器的困扰，设备成本低，通用性强，推广性高。通过与
《GB5009.88-2016》方法使用的离子色谱脉冲专用安培检测器的检测结果进行比较，绝对误差小于5％。
附图说明
图1为果糖标准溶液的色谱图；
图2为果糖标准溶液的高效液相色谱图的标准曲线图；
图3为本发明方法测得的奶粉样品色谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
待测样品为某公司送检的4批婴幼儿配方奶粉，其中标号为1和2的样品标注为含蔗糖，3和4标注为不含蔗糖。
低聚果糖总量的检测方法，包括以下步骤：
1)称取果糖标准品并用蒸馏水逐级稀释，分别稀释成6种不同浓度(50mg/L、80mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、300mg/L浓度)的标准溶液，将不同浓度的标准溶液在高效液相色谱法—蒸发光检测器(安捷仑1260Infinity)进行检测，测定相应的色谱峰面积值，得到标准谱图，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
2)以标准工作液中果糖的质量浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，将步骤1获得的标准谱图制作成果糖浓度与色谱峰面积关系曲线图，得到果糖浓度与色谱峰面积的对应函数关系；
3)准确称取5g样品于容器中，加入80℃热水约50mL，置于80℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇15min后,冷至室温转移定容至50mL容量瓶中，作为样液；
对于含蔗糖样品，取300μL样液，加入0.4mL蔗糖酶溶液(5.0U/mL)，旋涡振荡混匀，置于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇60min后,按照1:1倍比将硼氢化钠溶液加入样液，继续振摇30min后取出，冷却至室温后加入750μL乙酸溶液，静置10min，随后加入1.4mL果聚糖酶溶液(500U/mL)，旋涡振荡混匀，于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇30min后，冷却至室温后定容至2.5ml，过0.22μm水相微孔滤膜待测；
对于不含蔗糖样品，直接取300μL样液于具塞玻璃试管中，加入果聚糖酶酶解后定容至2.5ml待测；
4)使用高效液相色谱法—蒸发光检测器对步骤3)得到的待测样液进行检测，测得色谱峰面积，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
5)根据步骤2)果糖浓度与色谱峰面积的对应函数关系，得到4个批号的样品的水解果糖含量分别为：72.7，101.3，94.2和109.1mg/L；
6)根据以下换算公式得到样品中低聚果糖的总量X如表1所示：
式中：
X—配方奶/乳粉中低聚果糖的总量，单位为克/每千克(g/kg)；
K1—对果聚糖水解过程中增加的水分子进行校正；
K2—对于Fn型果聚糖末端果糖基被还原和GFn型果聚糖末端葡萄糖不被检测进行校正，；
C—待测样液中果糖的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)，4批样品对应的C值分别为：72.7，101.3，94.2和109.1mg/L；
C0—未加样品的空白测定液中果糖的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)，此处为0；
V—待测样液定容体积,单位为毫升(mL)，此处为50mL；
V1—待测样液酶解液定容体积，单位为毫升(mL)，此处为2.5mL；
m—待测样液质量，单位为克(g)，此处为5g；
0.2—用于酶解的样品溶液体积，单位为毫升(mL)；
1000—单位转换系数；
n—平均聚合度，对于低聚果糖，n＝4。
将上述的4个批号的样品分别根据国标的要求用离子色谱仪配以三元及以上梯度泵和脉冲安培检测器的进行检测，并与本发明的方法检测得到的数据进行比较，其结果如表1所示。
表1样品分析与国标对比
从表1中可以看出，本发明的方法与根据国标的要求用离子色谱仪配以三元及以上梯度泵和脉冲安培检测器的进行检测结果进行比较，绝对误差最高为4.4％，最小仅2.7％，均小于5％。

Claims (6)

1.一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)制备果糖标准溶液并进行高效液相色谱法—蒸发光检测器检测，得到标准谱图；
2)将步骤1获得的标准谱图制作成果糖浓度与色谱峰面积关系曲线图；
3)对待检测的配方奶/乳粉样品进行预处理得到待测样液；
4)然后使用高效液相色谱法—蒸发光检测器对步骤3)得到的待测样液进行检测，测得色谱峰面积，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
5)根据步骤2)的关系曲线图，得到配方奶/乳粉样品的水解果糖含量；
6)根据以下换算公式得到配方奶/乳粉中低聚果糖的总量：
式中：
X—配方奶/乳粉中低聚果糖的总量，单位为克/每千克(g/kg)；
K1—对果聚糖水解过程中增加的水分子进行校正；
K2—对于Fn型果聚糖末端果糖基被还原和GFn型果聚糖末端葡萄糖不被检测进行校正；
C—待测样液中果糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)；
C0—未加样品的空白测定液中果糖的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)；
V—待测样液定容体积,单位为毫升(mL)；
V1—待测样液酶解液定容体积，单位为毫升(mL)；
m—待测样液质量，单位为克(g)；
0.2—用于酶解的样品溶液体积，单位为毫升(mL)；
1000—单位转换系数；
n—平均聚合度，对于低聚果糖，按照n＝4计算。
2.如权利要求1所述的一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于步骤1)和步骤2)的具体内容为：
称取果糖标准品并用蒸馏水逐级稀释，分别稀释成至少6种不同浓度的标准溶液，将不同浓度的标准溶液进行高效液相色谱法—蒸发光检测器检测并得到标准谱图，测定相应的色谱峰面积值，其中色谱条件为：
a)色谱柱：安捷伦ZORBAX Carbohydrate糖分析柱，5.0μm，4.6×150mm；
b)进样量：20～50μL；
c)柱温：30～50℃；
d)流动相流速：0.8～1.0mL/min；
以标准工作液中果糖的质量浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到果糖浓度与色谱峰面积关系曲线图，果糖浓度与色谱峰面积的对应函数关系。
3.如权利要求1所述的一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于步骤3)的具体内容为：
准确称取一定量的配方奶/乳粉于容器中，加入80℃热水约50mL，置于80℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇15min后,冷至室温转移定容至50mL容量瓶中，作为样液；
若配方奶/乳粉为含蔗糖配方奶/乳粉，取300μL样液，加入0.10-0.80mL蔗糖酶(5.0U/mL)溶液，旋涡振荡混匀，置于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇60min后，按照0.8-1.5倍将硼氢化钠溶液加入样液，继续振摇30min后取出，冷却至室温后按照2-3倍加入乙酸溶液，静置10min，随后加入0.5-1.5mL果聚糖酶溶液(500U/mL)，旋涡振荡混匀，于40℃±1℃恒温水浴摇床中，150r/min振摇30min后，冷却至室温后定容至2.5ml，过0.22μm水相微孔滤膜待测；
若配方奶/乳粉为不含蔗糖配方奶/乳粉，取300μL样液于具塞玻璃试管中，加入0.5-1.5mL果聚糖酶酶解后定容至2.5ml待测。
4.如权利要求3所述的一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于蔗糖酶的加入量为0.5mL，果聚糖酶的加入量为1.0mL。
5.如权利要求1所述的一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于步骤4)中流动相为乙睛70～85：水30～15，增益值为5.0以上。
6.如权利要求5所述的一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法，其特征在于流动相为乙睛85：水15，PMT增益值为8.0。
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Application publication date: 20171208

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