CN107427455A - 用于增加角质形成细胞的脂质含量的组合物 - Google Patents

用于增加角质形成细胞的脂质含量的组合物 Download PDF

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Abstract

考虑的是局部组合物，其包含印度没药的提取物、海枣的提取物和海藻提取物，其用于增加角质形成细胞的脂质含量。

Description

用于增加角质形成细胞的脂质含量的组合物
发明领域
本发明涉及用于治疗皮肤的皱纹的局部组合物。
背景
改善皱纹皮肤的外观的各种方法是已知的。这些包括通过增加皮肤的厚度来紧实(firm up)或收紧皮肤的那些。所谓的“膨胀(plumping)”组合物旨在通过增加皮肤的特定组分的体积来使皮肤更厚。例如，已知靶向真皮中的成纤维细胞、脂肪细胞、胶原蛋白、弹性蛋白和纤维外基质(extrafibrillar matrix)的一种或多种的产品。理念是，随着真皮体积增加，皮肤的表面被拉伸并变得更紧绷，并且这进而会引起皱纹的深度和外观减少。理想地，浅层皱纹和纹路甚至可能变得肉眼无法察觉。
印度没药(Commiphora mukul)是在印度和巴基斯坦地区常见的橄榄科的小树。植物质和植物产生的树脂的提取物已经用于阿育吠陀药物中。
US5,273,747公开了提取印度没药的各种级分的方法，并描述了它们在用于治疗前列腺问题、过敏性皮炎、牛皮癣和由于紫外线辐射引起的炎症的局部组合物中的用途。
WO96/03033公开了印度没药提取物作为用于促进毛发和皮肤色素沉着的组合物中的色素沉着剂的用途。
US5,690,948公开了印度没药的亲脂性乙酸乙酯提取物作为化妆品皮肤护理组合物中的抗皮脂和/或抗氧化剂活性剂的用途。据说该提取物能够为皮肤递送双重益处：控制或预防皮脂分泌，并保护皮肤免于自由基损伤。
US5,972,341和US 6,630,177公开了印度没药的某些提取物，其在培养物中，通过对真皮中的成纤维细胞的作用而加速细胞内甘油三酯类的产生。据报道，这些相同的提取物经由单独的机制抑制培养物中细胞内甘油三酯类的降解。所述参考文献表明，但未测量或验证，真皮的成纤维细胞(和成纤维细胞分化成的脂肪细胞)中脂质的增加引起细胞体积的增加，其导致真皮的张力增加和皱纹深度的减少。
US6,193,975和US2002/0098213将印度没药鉴定为促进皮肤的细胞外基质的合成的试剂。
US2004/0166178公开了用于局部施用于皮肤的包含印度没药提取物的组合物，所述印度没药提取物作为通过对肌肉神经支配的作用来软化纹路和/或松弛皮肤的试剂。
WO2013/045762公开了在用于使嘴唇富有弹性的组合物中水解的透明质酸、透明质酸钠和印度没药提取物的组合。
US2015/0010615涉及印度没药树脂的超临界二氧化碳提取物及其使用方法，其包括抑制前脂肪细胞向脂肪细胞的转化，并抑制甘油三酯储存。
就本发明人可以看出，印度没药提取物对角质形成细胞的中性脂质含量的影响尚未报道。与脂肪细胞和成纤维细胞不同，角质形成细胞存在于表皮（皮肤的最外层）中，而脂肪细胞和成纤维细胞在真皮中进一步下降，所述真皮通常不被局部施用的活性剂所达到。
枣椰树果实(海枣(Phoenix dactylifera))的提取物已知用于局部皮肤护理组合物，包括旨在治疗皱纹的那些。US2005/021751和US2010/0047361公开了包含海枣提取物的组合物，其用于增加皮肤中的活性TGFb1的浓度，用于促进皮肤中的成纤维细胞的增殖，用于增加皮肤中的细胞外基质(ECM)的成分的合成，用于抑制皮肤中的细胞外基质的细胞外蛋白质的降解，以及用于发挥皮肤的抗皱纹或抗老化作用。
US2009/0264291公开了海枣的水性提取物的抗增殖特性。
US2013/0011349公开了包含枣椰树(海枣(Phoenix dactylifera))花粉或其提取物的组合物。可以将组合物配制用于局部用于治疗或预防各种皮肤病况的方法或抵消皮肤老化(包括皱纹、纹路、皮肤干燥、深斑、皮肤弹性的下降、皮肤粗糙度的增加)的影响的方法。
就本发明人可以看出，海枣提取物对角质形成细胞的中性脂质含量的影响尚未报道。
藻类提取物是局部皮肤护理产品中的已知成分，其用作各种产品中的保湿剂，以及香料成分、润肤剂和皮肤调理剂。已报道了对皱纹的有益效果，但是就本发明人可以看出，藻类提取物对角质形成细胞的中性脂质含量的影响尚未报道。
概述
考虑的是组合物，其包含印度没药(Commiphora mukul)的提取物、海枣(Phoenix dactylifera)的提取物、海藻提取物和安全且稳定的美容上可接受的基料。所述组合物通常是水性的并且包含至少50％水。所述组合物可以包含不干扰角质形成细胞的中性脂滴中的中性脂质的产生或保留的任何其它成分。这些组合物，当局部施用时，被预期增加角质形成细胞中的脂滴的中性脂质含量，以及皮肤的细纹和皱纹的外观的相对快速改善。
详述
除非另有说明，所有浓度均以总组合物的重量计。
细胞培养和中性脂质检测
在许多细胞类型(包括角质形成细胞)中，中性脂质浓缩在中性脂滴中。在通过所研究的试剂处理角质形成细胞后，我们用对中性脂滴具有特异性亲和力的染料染色细胞样品，并测量其体积变化。
将新生儿人类表皮角质形成细胞与某些提取物一起孵育以确定那些提取物对角质形成细胞的脂质含量的影响。使用以下程序。
细胞培养 - 将玻璃底6孔板(MatTek, 产品号P06G-1.5-20-F, 批次TKO-520-337)用纤连蛋白(Sigma F-1141-2MG)在D-PBS中以25mg/ml包被1小时，然后用D-PBS冲洗两次。此后，将新生儿人类表皮角质形成细胞(Life Technologies, 批次1391145, 第4代)以25,000个细胞/cm2接种在孔中。将生长培养基(补充有HKGS (Life Technologies)的EpiLife®)添加至孔中。将孔在37℃、5% CO2下孵育过夜。
第二天，将角质形成细胞用一种或多种活性剂处理。所述活性剂包括：
Commipheroline -是印度没药树脂提取物的市售形式(90％辛酸/癸酸甘油三酯，10％印度没药树脂提取物)
Thallips - 海藻提取物的市售形式(99％辛酸/癸酸甘油三酯，1％藻类(海藻)提取物)
D’Orientine™ S – 枣椰树提取物的市售形式(95.9％辛酸/癸酸甘油三酯，3％海枣果实提取物，1％油菜籽甾醇，0.1％生育酚
将细胞样品用每种活性剂单独、两种的组合和所有三种一起进行测试。将活性剂以Commipheroline 2.0%、Thallips 10.0%、D’Orientine™ S 5.0%的浓度分散在DMSO中，并且然后将每种处理物100倍稀释在生长培养基中，使得每种活性剂的最终浓度为commipheroline 0.02%、Thallips 0.1%和D’Orientine™ S 0.05%。将角质形成细胞暴露于活性剂18小时，并且然后除去培养基。将角质形成细胞在3.7％甲醛中固定10-15分钟，并且然后在D-PBS中洗涤两次。
将固定的细胞使用HCS LipidTOX™ Red (Thermo Fisher Scientific, 目录号H34476, 批次1605881)以1:200在D-PBS中在室温下在黑暗中针对中性脂滴进行染色。HCSLipidTOX™ Red对中性脂滴具有特异性亲和力。在25分钟时，应用一滴NucBlue®固定细胞染色ReadyProbes™来定位细胞核。
在孵育结束时，将细胞在共聚焦显微镜(Nikon)上以60x油浸法成像用于中性脂滴检测。用NIS-Elements AR和NIS-Elements C (Nikon)进行图像处理。进行Z-堆叠成像，并且使用红色通道上的物体计数和体积测量来测量脂质含量。将脂质含量的体积针对如通过染色的蓝核数量所计数的细胞数进行归一化。运行两次试验。结果显示于下表中。
通过角质形成细胞中的中性脂质体积的增加，预期包含印度没药、海枣的提取物、海藻提取物中的一种或多种的局部组合物提供皮肤的快速膨胀(plumping)以及细纹和皱纹的外观的减少。因为它们更接近于皮肤表面，预期角质形成细胞中的中性脂滴的治疗比靶向真皮(这通常通过局部应用难以达到)的局部产品更有效。
考虑的是组合物，其包含印度没药树脂的提取物(0.001重量％-3.0重量％)、海枣的提取物(0.001重量% - 3重量%)、海藻提取物(0.001重量％-5.0重量％)和安全且稳定的美容上可接受的基料。所述组合物通常是水性的并且包含至少50％水。原则上，本发明的组合物可以是任何美容上可接受的形式，即乳液、悬浮液、溶液、凝胶、糊剂、棒、适于气溶胶化递送的液体等。
所述组合物可以包含不干扰角质形成细胞的中性脂滴中的中性脂质的产生或保留的任何其它成分。这包括大多数已知的水性相容的皮肤护理成分，其量对于给定试剂是典型的。此类成分包括但不限于旨在美化皮肤、使皮肤受益的那些，旨在改变或增强消费者对产品的感知的那些以及旨在维持产品的质量和完整性的那些。可能适当的皮肤护理成分的实例包括： 颜料，珍珠粉(pearls)和染料，反射和/或折射光以改变人的外观的材料，防晒剂，保湿剂，调理剂，去角质剂，DNA修复活性剂，皮肤屏障修复剂，抗氧化剂，蛋白质等和生物添加剂。小麦蛋白质、荷荷巴和精油仅仅是可以在本发明的组合物中递送至皮肤的成分的几个实例。倾向于瓦解或破坏皮肤的屏障层的成分在本发明的组合物中较不优选，并且优选完全避免。
旨在改变或增强消费者对产品的感知并且可适用于水相的成分的实例包括：香料，颜色改性剂，pH调节剂，粘度改性剂，粘合剂，聚合物，填充剂，成膜剂，增塑剂，溶剂，表面活性剂，悬浮剂和改变感知的其它众所周知的化妆品助剂。
旨在维持产品的质量和完整性并且可适用于水相的成分的实例包括：防腐剂，乳液稳定剂，颜色和气味稳定剂，缓冲剂，螯合剂，光稳定剂和维持产品完整性的其它众所周知的化妆品助剂。
在本发明的一些实施方案中，可以存在油相或硅氧烷相。当分散在根据本发明的商业组合物中时，所述油相或硅氧烷相可以任选地包括任何合适的皮肤有益剂、旨在改变或增强消费者对产品的感知的任何成分和/或旨在维持产品的质量和完整性的任何成分。
根据本发明的组合物的实例显示于下表中。将组合物以简单混合放在一起。
# 辛酸/癸酸甘油三酯(95.9%) /海枣(枣椰树)果实提取物(3.0%) /油菜(油菜籽)甾醇类(1.0%) /生育酚(0.1%)
## 辛酸/癸酸甘油三酯(99.0%) /藻类提取物(1.0%)
### 辛酸/癸酸甘油三酯(90.0%) / 印度没药树脂提取物(10.0%)。

Claims (1)

1.组合物，其包含0.001重量％-3.0重量％的印度没药（Commiphora mukul）树脂提取物、0.001重量％-3.0重量％的海枣（Phoenix dactylifera）提取物和0.001重量％-5.0重量％的海藻提取物。
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