CN107412243A - 一种预防或治疗脂肪肝的药物及其应用 - Google Patents

Abstract

一种预防或治疗脂肪肝的药物及其应用，可有效预防或治疗非酒精性脂肪肝导致肝脏的脂肪化﹑修复肝组织的氧化损伤和维持肝脏的功能。该药物包含有效量的木蝴蝶苷A，可选地包含药学上可接受的载体和/或赋形剂，所述药物的剂型为片剂、口腔崩解片、缓释片、颗粒剂、胶囊剂、冻干粉针剂、丸剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。

Description

一种预防或治疗脂肪肝的药物及其应用

技术领域

本发明涉及一种预防或治疗脂肪肝的药物及其应用，可有效预防或治疗非酒精性脂肪肝 导致肝脏的脂肪化﹑修复肝组织的氧化损伤和维持肝脏的功能；属于医药生物领域。

背景技术

随着我国社会经济的发展和人民生活水平的提高，酗酒、不健康的饮食习惯以及缺乏运 动的生活方式对身体健康，尤其对肝脏的损害日益严重，使得脂肪性肝病(也称脂肪肝)的 发病率也明显增高，已成为仅次于病毒性肝炎的第2大高发性肝病，严重威胁着人类健康。 脂肪肝按病因在临床上可分为酒精性脂肪性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪性脂肪肝病(NAFLD) 两类，脂肪肝的病变主体在肝小叶，是常见的弥漫性肝病之一，以肝细胞内甘油三酯(TG) 蓄积过多和弥漫性肝细胞脂肪变性为主要病理特征。AFLD主要是由过量饮酒所致，而 NAFLD主要与胰岛素抵抗有关。酒精性脂肪肝(AFLD)包括酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和 酒精性肝硬化等一系列改变。非酒精性脂肪肝(NAFLD)包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性 肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)和肝硬化等一系列改变。原发性NAFLD多为肥胖、 高脂血症和糖尿病、胰岛素抵抗(IR)和代谢综合征(MS)等累及肝脏导致的病理学改变。IR可 能为联系NAFLD病因和临床特征之间的桥梁，而继发性NAFLD则由病毒性肝炎、药物空- 回肠短路等外科手术以及长期静脉内营养等多种原因引起。

NAFLD可能是普通成人和儿童最常见的慢性肝病之一。国内外大量的尸体解剖及肝活检 均证实消瘦者肝脂肪变和脂肪性肝炎检出率远低于肥胖者，NAFLD在肥胖者中更为常见，随 着体质指数和腰围的增加，NAFLD的患病率及其程度增加。NAFLD影响包括儿童在内的所 有年龄层次的个体，最常见于40～50岁，且无明显的性别差异。在不同种族人群中，NAFLD 的流行情况并不相同，提示NAFLD的发生涉及遗传和环境因素两方面。目前，有关NAFLD 遗传易患性的研究太少且缺乏说明力。

目前研究认为NAFLD的治疗包括非药物治疗(生活方式改变)和药物治疗两方面，前者可 用于轻度NAFLD患者，包括体育锻炼、减轻体重、控制饮食、去除病因等手段。然而中重 度NAFLD患者无法通过非药物疗法有效清除肝内沉积的脂肪，因而无法改变肝功能损害， 因此，使用药物治疗是减轻中重度NAFLD发展程度和改善肝功能的主要措施。目前治疗NAFLD的主要药物包括化学药物胰岛素增敏剂、抗氧化剂、微生态制剂、降脂药、减肥药、 保肝抗炎药物及中药。然而，大多数降脂药物对肝内脂肪消除作用有限，许多降脂药可导致肝细胞损伤，因此降脂药在脂肪肝治疗中的作用和地位尚有争论。由于化学药物的上述局限 性，目前越来越多的中药复方及单体被用来治疗非酒精性脂肪肝。中国专利申请CN102488798A公开了一种由生山楂﹑何首乌等为主要成份的中药复方可以有效减轻肝内脂肪沉淀程度；中国专利申请CN 105362882A公开了一种以垂盆草﹑墨旱莲等为主要成份的中药复方能防治单纯高脂引起的非酒精性脂肪肝。中国专利申请CN 101002857A公开了一种包括 黄芪、枸杞、葛根、白术的中药组合物可治疗或辅助治疗脂肪肝尤其是酒精性脂肪肝。然而， 上述治疗脂肪肝的中药药效较弱，且未达到理想的治疗效果。

木蝴蝶苷A(oroxin A，OA)，分离自中药木蝴蝶，其化学结构式如下：

木蝴蝶苷A被用于治疗胃肠疾病、百日咳、咳嗽、急性和慢性支气管炎等呼吸系统疾病， 也被证明具有抗氧化和抗肿瘤的活性。但在预防和治疗脂肪肝方面的作用尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预防和治疗脂肪肝，尤其是非酒精性脂肪肝的药物，以解决 现有现有技术中的药物难以控制﹑药效弱、副作用强等缺陷。

为了达到上述目的，本发明提供了以下技术方案：

木蝴蝶苷A在制备预防或治疗脂肪肝的药物中的应用。

本发明的一个方面是，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。所述非酒精性脂肪肝选自单纯性 脂肪肝、非酒精性脂肪肝导致的非酒精性脂肪性肝炎或肝硬化。

优选的，本发明的药物以木蝴蝶苷A为有效成份，指的是药物中木蝴蝶苷A的剂量可以 预防和治疗脂肪肝，尤其是非酒精性脂肪肝。

本发明的药物的用量可以随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，当本 发明的药物含量达到10-3000mg/kg、优选30-2500mg/kg、最优选40-2200mg/kg小鼠体重的 剂量每日给予时，能得到预防和治疗脂肪肝，尤其是非酒精性脂肪肝的效果，较佳地每天以 1-4次，例如每天1次、2次、3次或4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对于大部分 大型哺乳动物包括人而言，根据小鼠和人剂量换算值为9.1：1，人的体重为60kg计算，每天 的总剂量为65-19780mg，优选为197-16483mg，更优选为263-14505mg，可调节此剂量方案 以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的需要，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量 按比例地减少。按照每日给药3次计算，木蝴蝶苷A在药物中的单位剂量为22-1000mg，优 选66-800mg，更优选为88-500mg。

本发明所述的药物，还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。其在药学上可接受的载体 和/或赋形剂是一种或多种药剂学上常用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、 表面活性剂、吸附载体、润滑剂或矫味剂的载体。其中，填充剂可选自淀粉、蔗糖、乳糖或 微晶纤维素；粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂选自羧甲 基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠；表面活性剂可以是 十六烷醇或十二烷基硫酸钠；润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶或聚乙二醇等。

本发明进一步提供一种包含木蝴蝶苷A为有效成份的，预防或治疗脂肪肝的药物剂型， 包括片剂、胶囊剂、滴丸剂或颗粒剂。

本发明的药物的各种制药剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备所需要的制剂。例 如，片剂可为普通片、薄膜片、肠溶片等，可以用木蝴蝶苷A干粉，加入适量稀释剂选自淀 粉、糊精、甘露醇、微晶纤维素，适量的粘合剂选自水、乙醇、纤维素、淀粉、明胶，适量 的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、海藻酸钠，以及适当的润滑剂选自硬脂 酸镁、滑石粉、聚乙二醇，加入甜味剂，选自D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母，按常规湿法制粒，干燥后整粒或者干法制粒后压片，如为包薄膜衣片，用成膜材料选自纤维素类、聚乙二醇类，按常规包衣，分装入密闭瓶或者铝塑板中。胶囊剂可为普通胶囊剂、肠溶胶囊剂等，可将木蝴蝶苷A干粉加入适当辅料选自碳酸钙、甘露醇、氧化镁、微粉 硅胶等，适当润滑剂选自滑石粉、硬脂酸镁、乙二醇酯、聚硅酮类，以及适当的粘合剂选自 矿物油、食油，并加入适当甜味剂，选自D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母， 混合成干粉或者制成颗粒，填充入胶囊，分装在密闭瓶或者铝塑板中。

本发明药物的制剂形式是片剂、口腔崩解片﹑注射剂﹑冻干粉针剂﹑丸剂、颗粒或胶囊。 可通过口服的方式施用于需要预防或治疗脂肪肝的患者。

本发明的优点在于：可以有效预防和治疗脂肪肝、尤其是非酒精性脂肪肝导致肝脏的脂 肪化﹑修复肝组织的氧化损伤和维持肝脏的功能，其副作用较小并克服了中药复方药物成份 复杂、质量控制困难的不足。

附图说明

图1为实施例1中木蝴蝶苷A对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠肝脏结构和功能的 影响。图A：木蝴蝶苷A对肝脏结构的影响；图B：木蝴蝶苷A对肝脏组织液ALT水平的 影响；图C：木蝴蝶苷A对肝脏组织液AST水平的影响。其中图B和图C，数据显示法为平 均值±标准差，相同字母之间没有显著性差异，不同字母之间有显著性差异(p<0.05)。

图2为实施例4木蝴蝶苷A对HL7702细胞细胞活力的影响，数据取三次实验的平均值。

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方 式限制本发明。

本发明使用的材料

本发明所使用的木蝴蝶苷A﹑木蝴蝶苷B、黄芩苷元、槲皮素、白杨黄素和白杨黄素-二 葡萄糖苷购自南通飞宇公司，纯度大于95％。使用的昆明小鼠和基础饲料购自大连医科大学 购于SPF实验动物中心，人造黄油购自麦琪琳食品有限公司。谷丙转氨酶(ALT)、谷草转 氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)等检测试剂盒购自南京建成生物工 程研究所；H-E染色试剂盒购于北京索来宝生物试剂有限公司。

高脂高糖食物按照表1.配方配置：

表1.高脂高糖食物中各成份的百分含量(％)

实施例1：木蝴蝶苷A防治非酒精性脂肪肝的效果评价

取18～22g的昆明小鼠，连续喂养小鼠表1所示高脂高糖食物5周后，选取体重排名前 50％的小鼠作为模型小鼠，将模型小鼠和正常小鼠分雌雄随机分组，分为A-D组，共4组，每组10只，雌雄各半，分别标号，其中A组为正常小鼠，B-D为模型小鼠。A组喂食普通 饲料每天灌胃一次0.5％的羧甲基纤维素钠溶液；B组喂食高脂饲料每天灌胃一次0.5％的羧甲 基纤维素钠溶液；C组喂食高脂饲料每天灌胃一次200mg/kg的木蝴蝶苷A(溶于0.5％的羧甲基纤维素钠溶液)；D组喂食高脂饲料每天灌胃一次4mg/kg的罗格列酮(溶于0.5％的羧甲基纤维素钠溶液,4mg/kg为罗格列酮根据人临床使用剂量推算的小鼠给药剂量)。给药8周后结 束实验。测定肝脏的AST，ALT，MDA和T-SOD水平，并制作H-E染色病理切片。根据光 学显微镜下组织学变化，将肝脏脂肪变性程度分为6个等级。肝脏结构正常或者偶见脂肪空 泡(<10％)打分为1；肝脏内10％-25％左右组织脂肪变性打分为2；肝脏内25％-40％左右组织脂肪变性打分为3；肝脏内40％-55％组织脂肪变性打分为4；肝脏内55％-70％组织脂肪变性 打分为5；表示肝脏内大于70％组织脂肪变性打分为6。

表2.木蝴蝶苷A对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏组织病理学观察

肝脏组织切片显著反应了药物对非酒精性脂肪肝的治疗作用。如表2和图1A所示，A 组为正常肝组织，其肝细胞大小合适，没有出现异常和病变，10只小鼠均无显著肝脏病变， 总得分为10。而B组为模型组肝脏出现了严重的病变，其细胞肿大，脂肪化严重，甚至出现 大面积的细胞坏死和脂肪空泡等情况，其中5只小鼠肝脏脂肪化面积在55％-70％之间，5只 小鼠肝脏脂肪化面积在70％以上，总得分为55。C组为木蝴蝶苷A干预后的肝脏组织，肝脏 组织的细胞水肿减弱，脂肪化现象减少，其中2只小鼠肝脏脂肪化面积在25％-40％之间，4 只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％之间，4只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为18。 而D组对照药罗格列酮干预后的肝脏组织，罗格列酮无法干预血脂紊乱引起的非酒精性脂肪 肝。肝脏组织脂肪化没有得到明显改善，其中6只小鼠肝脏脂肪化面积在55％-70％之间，4 只小鼠肝脏脂肪化面积在70％以上，总等分为54。可以看出木蝴蝶苷A可以有效治疗非酒精 性脂肪肝，其效果好于罗格列酮。

肝脏组织液的ALT和AST的水平反应了肝脏的功能水平。如图1B所示，A组肝脏组织液中ALT和AST水平高于B组，其具有较强的肝脏功能。C组肝脏组织液的ALT和AST的 水平显著高于B组，说明木蝴蝶苷A具有保护肝脏，预防肝脏功能丧失的能力。D组的ALT 和AST水平低于C组，说明罗格列酮维持肝脏功能的能力弱于木蝴蝶苷A。

表3.木蝴蝶苷A对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠肝脏氧化应激的影响。

数据显示法为平均值±标准差，相同字母之间没有显著性差异，不同字母之间有显著性差 异(p<0.05)。

MDA和T-SOD，反应了肝脏组织氧化应激水平。如表3所示，A组肝脏组织液中MDA 水平低于B组，而T-SOD水平高于B组，说明模型组受到了较强的氧化应力，容易出现氧 化损伤。C组的MDA水平低于B组，T-SOD水平高于B组，说明木蝴蝶苷A有效改善了肝 脏的氧化应力水平，预防了氧化损伤。D组MDA水平高于C组而小于D组，D组的T-SOD 水平低于C组而高于B组，说明罗格列酮预防氧化损伤的能力弱于木蝴蝶苷A。

实施例2：不同剂量的木蝴蝶苷A防治非酒精性脂肪肝的效果评价

取18～22g的昆明小鼠，连续喂养小鼠表1所示高脂高糖食物5周后，选取体重排名前 50％的小鼠作为模型小鼠，将模型小鼠和正常小鼠分雌雄随机分组，分为A-E组，共4组，每组10只，雌雄各半，分别标号，其中A组为正常小鼠，B-D为模型小鼠。A组喂食普通 饲料每天灌胃一次0.5％的羧甲基纤维素钠溶液；B组喂食高脂饲料每天灌胃一次0.5％的羧甲 基纤维素钠溶液；C组喂食高脂饲料每天灌胃一次50mg/kg的木蝴蝶苷A(溶于0.5％的羧甲 基纤维素钠溶液)；D组喂食高脂饲料每天灌胃一次2000mg/kg的木蝴蝶苷A(溶于0.5％的羧甲基纤维素钠溶液)；E组喂食高脂饲料每天灌胃一次2000mg/kg的木蝴蝶苷A(溶于0.5％的羧甲基纤维素钠。给药8周后结束实验。测定制作肝脏H-E染色病理切片。根据光学显微镜下组织学变化，肝脏脂肪变性程度及打分依据同实施例1。

表4.不同剂量木蝴蝶苷A对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏组织的影响

肝脏组织切片显著反应了药物对非酒精性脂肪肝的治疗作用。如表4所示，A组为正常 肝组织，其肝细胞大小合适，没有出现异常和病变，10只小鼠均无显著肝脏病变，总得分为 10。而B组为模型组肝脏出现了严重的病变，其细胞肿大，脂肪化严重，甚至出现大面积的 细胞坏死和脂肪空泡等情况，其中5只小鼠肝脏脂肪化面积在55％-70％之间，5只小鼠肝脏 脂肪化面积在70％以上，总得分为55。C组为50mg/kg木蝴蝶苷A干预后的肝脏组织，与 B组相比，肝脏组织的细胞水肿减弱，脂肪化现象减少，其中4只小鼠肝脏脂肪化面积小于 10％，4只小鼠肝脏脂肪化面积在25％-40％之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％之间， 总得分为20。与低剂量木蝴蝶苷A(C组)相比，中、高剂量木蝴蝶苷A(D组和E组)改善肝 脏的脂肪化的效果更好。对于1000mg/kg木蝴蝶苷A组，3只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％ 之间，7只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为13。对于2000mg/kg木蝴蝶苷A组， 2只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％之间，8只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为 12。以上结果表明，木蝴蝶苷A在50-2000mg/kg的剂量下，均具有有效改善小鼠非酒精性脂 肪肝的作用，按照小鼠和人给药剂量比为9.1计算，人每天的给药剂量为5.5-219.8mg/kg,按 照人体重60kg计算，人每天给药剂量为329-13186mg木蝴蝶苷A在较宽的剂量范围内均有 防治非酒精性脂肪肝的作用。

实施例3：不同黄酮成份对非酒精性脂肪肝影响的比较

取18～22g的昆明小鼠，连续喂养小鼠表1所示高脂高糖食物5周后，选取体重排名前 50％的小鼠作为模型小鼠，将模型小鼠和正常小鼠分雌雄随机分组，分为A-H组，共8组，每组10只，雌雄各半，分别标号，其中A组为正常小鼠，B为模型小鼠，C-H组使用模型小 鼠给药各种黄酮成份，黄酮成份均溶于0.5％的羧甲基纤维素钠溶液。A组喂食普通饲料每天 灌胃一次0.5％的羧甲基纤维素钠溶液；B组喂食高脂饲料每天灌胃一次0.5％的羧甲基纤维素 钠溶液；C组喂食高脂饲料每天灌胃一次800mg/kg的木蝴蝶苷A；D组喂食高脂饲料每天灌胃一次800mg/kg的木蝴蝶苷B；E组喂食高脂饲料每天灌胃一次800mg/kg的黄芩苷元； F组喂食高脂饲料每天灌胃一次800mg/kg的槲皮素；G组喂食高脂饲料每天灌胃一次800 mg/kg的白杨黄素；H组喂食高脂饲料每天灌胃一次800mg/kg的白杨黄素-二葡萄糖苷。给 药8周后结束实验。测定制作各组肝脏染色病理切片。肝脏脂肪变性程度分级及打分标准如 实施例1。

表5.不同黄酮成份(800mg/kg)对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏组织影响

肝脏组织切片显著反应了药物对非酒精性脂肪肝的治疗作用。如表5所示，A组为正常 肝组织，其肝细胞大小合适，没有出现异常和病变，10只小鼠均无显著肝脏病变，总得分为 10。而B组为模型组肝脏出现了严重的病变，其细胞肿大，脂肪化严重，甚至出现大面积的 细胞坏死和脂肪空泡等情况，其中5只小鼠肝脏脂肪化面积在55％-70％之间，5只小鼠肝脏 脂肪化面积在70％以上，总得分为55。C组为木蝴蝶苷A干预后的肝脏组织，肝脏组织的细 胞水肿减弱，脂肪化现象减少，其中6只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％之间，4只小鼠肝 脏脂肪化面积在10％以内，总得分为14。其他黄酮成份(D-H组)改善肝脏的脂肪化的作用 均明显弱于木蝴蝶苷A。对于木蝴蝶苷B，4只小鼠肝脏脂肪化面积大于70％，2只小鼠肝脏 脂肪化面积在55％-70％之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在40％-55％之间，2只小鼠肝脏脂肪 化面积在25％-40％之间，总得分为48。对于黄芩苷元，2只小鼠肝脏脂肪化面积在40％-55％ 之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在25％-40％之间，5只小鼠肝脏脂肪化面积在10％-25％之间， 1只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为25。对于槲皮素，1只小鼠肝脏脂肪化面积 在40％-55％之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在25％-40％之间，5只小鼠肝脏脂肪化面积在 10％-25％之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为22。对于白杨黄素，1只小 鼠肝脏脂肪化面积在40％-55％之间，2只小鼠肝脏脂肪化面积在25％-40％之间，6只小鼠肝 脏脂肪化面积在10％-25％之间，1只小鼠肝脏脂肪化面积在10％以内，总得分为23。对于白 杨黄素-二葡萄糖苷，4只小鼠肝脏脂肪化面积大于70％，5只小鼠肝脏脂肪化面积在55％-70％ 之间，1只小鼠肝脏脂肪化面积在40％-55％之间，总得分为53。以上结果表明，木蝴蝶苷A 具有显著的防治非酒精性脂肪肝的效果，远优于木蝴蝶苷B、黄芩苷元、槲皮素、白杨黄素、 白杨黄素-二葡萄糖苷等黄酮成份，其中木蝴蝶苷B活性十分微弱，白杨黄素-二葡萄糖苷则 无治疗非酒精性脂肪肝的能力。

实施例4：木蝴蝶苷A对正常肝脏细胞HL7702的毒性。

使用MTT法测定木蝴蝶苷A对HL7002细胞毒性。当木蝴蝶苷A的浓度达到200μM时，HL7702细胞仍具有较强的细胞活性，其细胞活性大于95%，其毒性与公认的低毒物质DHA相近，结果证明木蝴蝶苷A是低毒性物质。

Claims (10)

1.木蝴蝶苷A在制备预防或治疗脂肪肝的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，所述脂肪肝为非酒精性脂肪肝。

3.根据权利要求2所述的应用，所述非酒精性脂肪肝选自单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪肝导致的非酒精性脂肪性肝炎或肝硬化。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的应用，所述药物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。

5.根据权利要求4所述的应用，所述药物的剂型为片剂、口腔崩解片、缓释片、颗粒剂、胶囊剂、冻干粉针剂、丸剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。

6.根据权利要求1-3中任意一项的应用，木蝴蝶苷A的每日给药剂量为65-19780mg，优选为197-16483mg，更优选为263-14505mg。

7.根据权利要求1-3中任意一项的应用，木蝴蝶苷A在药物中的单位剂量为22-1000mg，优选66-800mg，更优选为88-500mg。

8.一种预防或治疗脂肪肝的药物，包含有效量的木蝴蝶苷A。

9.根据权利要求8所述的药物，还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。

10.根据权利要求9所述的药物，所述药物的剂型为片剂、口腔崩解片、缓释片、颗粒剂、胶囊剂、冻干粉针剂、丸剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。