CN107406479A - 预防、减轻或治疗黄斑变性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了选择性腺苷A1激动剂化合物、包含此类化合物的药物组合物,以及使用此类化合物治疗、减轻或预防年龄相关性黄斑变性的方法。
Description
相关申请的交叉引用
本专利申请要求于2014年12月3日提交的美国专利申请No.62/087,080的优先权及权益。前述专利申请的内容以引用方式并入本文。
技术领域
本发明提供了在有需要的一个或多个受试者中预防或治疗黄斑变性,具体为年龄相关性黄斑变性的方法。更具体地,本发明提供了预防或治疗干性年龄相关性黄斑变性的方法。本发明还提供了在受试者中使用某些化合物预防、减轻或治疗与年龄相关性黄斑变性相关联的视网膜色素上皮损伤和感光细胞损伤。本发明还提供了预防、减轻或治疗视网膜色素上皮损伤和/或感光细胞损伤的方法。
背景技术
视网膜色素上皮(RPE)处于神经视网膜和脉络膜之间,并且通过形成外部血-视网膜屏障和支撑相邻组织的结构及生理完整性而在视网膜生理学中发挥核心作用。例如,视网膜色素上皮为感光细胞提供营养支持,并且参与代谢废物从光感受器跨布鲁赫膜到脉络膜的处理和运送。
视网膜色素上皮附近的玻璃疣的积聚是由布鲁赫膜(脉络膜(为视网膜供血的血管网络)的膜)和眼视网膜色素上皮之间微小的黄色或白色细胞外物质的累积引起的。随着年龄的增长,存在少数小(“硬”)玻璃疣是正常的,大多数40岁以上的人都有一些硬玻璃疣。然而,存在较大且较多的玻璃疣是年龄相关性黄斑变性(AMD)的常见早期征兆。
AMD始于在视网膜色素上皮和下面的脉络膜之间的黄斑中的特有的黄色沉积物(玻璃疣)。大多数产生这些早期变化(称为年龄相关性黄斑病)的人仍具有良好的视力。患有玻璃疣的人可能发展为AMD,也可能不发展为AMD,事实上,大多数患有玻璃疣的55岁以上的人均不受负面影响。当玻璃疣大且数量多并且与黄斑下的色素细胞层紊乱相关联时,出现症状的风险较高。大且软的玻璃疣被认为与胆固醇沉积物增高有关。
有两种类型的AMD。一种被称作干性AMD,另一种被称作湿性AMD。
“湿性”或渗出型AMD更严重,其发生在血管从视网膜后的脉络膜中形成时,并且可以使视网膜分离。湿性AMD可通过激光凝固术以及通过停止并且有时逆转血管生长的药物来进行治疗。
“干性”型AMD是由RPE细胞损失导致的视网膜色素上皮层萎缩引起的,其在晚期通过患者的眼的中间部分的视网膜色素上皮支撑的光感受器(视杆细胞和视锥细胞)的损失而导致视力丧失。
干性(萎缩性)AMD影响大约80-90%的患有AMD的受试者。其病因未知,它往往比湿性AMD发展得更慢,并且至今尚不存在获得批准的治疗或治愈手段。
因此,需要可(i)预防黄斑变性和/或(ii)停止或减缓黄斑变性的发展和/或(iii)治疗或逆转黄斑变性尤其是干性年龄相关性黄斑变性的其它治疗剂。
发明内容
本发明提供了选择性腺苷A1激动剂化合物、包含此类化合物的药物组合物以及使用此类化合物治疗、减轻或预防年龄相关性黄斑变性的方法。
因此,在第一方面,提供了在受试者中预防年龄相关性黄斑变性的方法,该方法包括将有效量的包含选择性腺苷A1激动剂的眼科药物组合物施用于受试者的眼部。
在第二方面,本发明提供了通过向受试者的受影响的眼施用有效量的包含选择性A1激动剂的眼科药物组合物来减轻受试者的年龄相关性黄斑变性的方法。
在第三方面,本发明提供了治疗患有年龄相关性黄斑变性的有需要的受试者的方法,该方法包括以下步骤:将包含有效量的选择性A1激动剂的药物组合物施用于受试者的眼部。
在第四方面,本发明提供了通过向受试者的受影响的眼施用有效量的包含选择性A1激动剂的眼科药物组合物来预防、减轻或治疗受试者的视网膜色素上皮损伤的方法。
在第五方面,本发明提供了通过向受试者的受影响的眼施用有效量的包含选择性A1激动剂的眼科药物组合物来预防、减轻或治疗受试者的感光细胞损伤的方法。
在一些实施方案中,本发明的方法预防或减轻视网膜色素上皮(RPE)的萎缩。在一些实施方案中,本发明的方法预防或减轻感光细胞的损失。
在一个实施方案中,年龄相关性黄斑变性为干性年龄相关性黄斑变性。
在某些实施方案中,方法包括施用有效量的由式I表示的选择性腺苷A1激动剂化合物,
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;并且
D是
在本发明的方法的某些实施方案中,腺苷A1激动剂为化合物A:
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯。
本发明的方法可用于在患有干性年龄相关性黄斑变性或具有发展为干性年龄相关性黄斑变性的风险的受试者中预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性。在一些实施方案中,本发明的方法用于在患有干性年龄相关性黄斑变性或具有发展为干性年龄相关性黄斑变性的风险的受试者中预防或减轻视网膜上皮细胞损伤和/或感光细胞的损失。
在一个实施方案中,导致年龄相关性黄斑变性的疾病或病况并非仅仅由眼内压升高引起。
在实践本发明的方法时,选择性腺苷A1激动剂可逐滴施用,例如施用1滴至2滴。
在本发明所述的方法的一些实施方案中,施用于眼部的选择性腺苷A1激动剂的有效量为约20μg至约7.0mg。在一些实施方案中,选择性腺苷A1激动剂的有效量为约30μg至1mg。在一些实施方案中,选择性腺苷A1激动剂的有效量为至少20μg。在一些实施方案中,选择性腺苷A1激动剂的有效量介于60μg和1500μg之间;为约100μg、约200μg、约250μg、约300μg、约350μg、约400μg、约450μg、约500μg、约550μg或约600μg或约500μg至1500μg。在某些实施方案中,选择性腺苷A1激动剂的有效量为约500μg。
在一个实施方案中,选择性腺苷A1激动剂以约0.1%至约5.0%(w/v)的有效剂量施用。在一个实施方案中,选择性腺苷A1激动剂以约0.5%至约1.5%(w/v)的有效剂量施用。在一个实施方案中,选择性腺苷A1激动剂以约1.0%至约3.0%(w/v)的有效剂量施用。在一个实施方案中,选择性腺苷A1激动剂以约3.0%(w/v)的有效剂量施用。
在一个实施方案中,有效量的选择性腺苷A1激动剂以单剂量施用。在另一个实施方案中,有效量的选择性腺苷A1激动剂以每日两次剂量施用。在另一个实施方案中,选择性腺苷A1激动剂以每日1次至4次的方式施用。
在某些实施方案中,施用的选择性腺苷A1激动剂选自:
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠;
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;环己基腺苷(CHA)和2-氯环戊基腺苷(CCPA)以及环戊基腺苷(CPA)。
在一个实施方案中,施用的化合物选自:((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;和
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯。
另外,应当理解,如上文所定义的式I的化合物可用于制造用于预防、减轻或治疗受试者的受影响的眼的年龄相关性黄斑变性的药物。
前述发明内容概括地描述了本发明某些实施方案的特征和技术优点。更多的技术优点将在下面的具体实施方式中予以描述。当结合任何附图和实施例予以考虑时,将通过本发明的具体实施方式更好地理解被认为是本发明的特性的新特征。然而,本发明提供的附图和实施例旨在帮助说明本发明或帮助理解本发明,而并非旨在限定本发明的范围。
附图说明
图1示出大鼠视网膜的视网膜截面。P指示光感受器层;O指示外核层,并且RPE指示视网膜色素上皮。HE,400x。
图2示出实施例1的视网膜电图的摘要图-暗视单次闪光0dB-A-波-雄性。
图3示出实施例1的视网膜电图的摘要图-暗视单次闪光0dB-B-波-雄性。
图4示出实施例2的视网膜电图的摘要图-暗视闪光刺激0dB-B-波。
图5示出在实施例2的各种治疗组中就细胞数而言的外核层(ONL)厚度的图。
具体实施方式
本发明的实施方案提供了用于预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性,尤其是干性年龄相关性黄斑变性的化合物。例如,本发明所提供的化合物可用于预防或减轻与年龄相关性RPE功能衰退相关联的RPE细胞和光感受器的损失。
在发育过程中,视网膜形成被称为视神经囊泡的间脑突出,其经过内陷而形成视杯。视杯的内壁形成视网膜,而外壁形成视网膜色素上皮,该视网膜色素上皮作为包含黑色素的结构,减少了进入眼睛的光的后向散射,这对于维持光感受器、更新光色素和吞噬光感受器盘具有重要作用,其高速转换对于视力至关重要。视网膜还包括复杂的神经回路,其中从感光细胞到二极细胞到神经节细胞的三神经元链是从光感受器到视神经的信息传递的主要途径。
腺苷是调节许多生理过程的嘌呤核苷。腺苷的细胞信号转导通过四种腺苷受体亚型发生:A1、A2A、A2B和A3,如Ralevic和Burnstock(Pharmacol Rev.(《药理学评论》),第50卷,第413-492页,1988年)和Fredholm BB等人(Pharmacol Rev.(《药理学评论》),第53卷,第527-552页,2001年)所报道。视网膜色素上皮存在的A1受体亚型如Collison DJ等人(ExpEye Res(《实验眼科研究》),4月刊,第80卷第4期,第465-475页,2005年)所报道。急性和慢性动物模型的视神经退变已表明α2肾上腺素激动剂溴莫尼定的神经保护潜能。这些模型包括视神经的直接损伤(神经损伤)以及急性和慢性高眼压症的模型(Yoles等人,1999年;Donello等人,2001年;WoldeMussie等人,2001年;Mayor-Torroglosa等人,2005年;Lambert等人,2011年)。在低压青光眼患者的临床研究中,0.2%溴莫尼定还表现出减缓视野丧失(Krupin等人,Am J Ophthalmol(《美国眼科学杂志》),2011年;第151卷,第671-681页)。
用作选择性腺苷A1激动剂的化合物是已知的并且具有多种用途。如PCT/US2010/033112所公开,在临床研究中已发现选择性腺苷A1激动剂能够减轻人的IOP。
具体地,本发明描述了式I的化合物(例如,化合物A、B、C、D、E、F、G、H、I、J或K)可预防、治疗或减轻有需要的受试者(例如人类)的年龄相关性黄斑变性。
式I的化合物具有下列结构:
或其药学可接受的盐,以及药学可接受的媒介物,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或者-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH、或者-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);并且
各个n独立地为1至5的整数。
在另一个实施例中,本发明所用化合物为具有以下式的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-C3-C8单环环烷基、3-7元单环杂环或-C8-C12二环环烷基;并且
R2是-H或-卤素。
在另一个实施例中,本发明所用化合物为具有以下式的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-C3-C8单环环烷基、3-7元单环杂环或-C8-C12二环环烷基;并且
R2是-H或-卤素。
在另一个实施例中,式I的化合物为以下化合物之一:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物B
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物C
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物D
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物E
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物F
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物G
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物H
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,和
化合物I
化合物J
化合物K
或其药学可接受的盐。
若某一化合物的名称与其结构有偏差,则以化学结构为准。
年龄相关性黄斑变性的最常见的早期体征之一是存在玻璃疣、视网膜下的微小黄色沉积物或色素成块。这些可在眼常规检查(如扩瞳)中检测到,且可通过眼底摄影观察。用于检测年龄相关性黄斑变性的其它检查包括阿姆斯勒方格表、斯内伦视力图和对比灵敏度检查(如测量人目视轮廓、影子和色彩的能力)、光学相干层析成像术、结构照明光学显微术。对于湿性黄斑变性而言,血管造影术(如荧光素血管造影术)允许鉴定和定位异常血管过程,包括黄斑后的血管渗漏。
有很多方法可用于测量感光细胞的功能。比如,感光细胞的损害可用视网膜电图(ERG)或视网膜电图描记术来测量。视网膜电图描记术测量的是,一定光源刺激人眼时,视网膜中的感光细胞产生的电活性。由眼前表面(如角膜)和眼附近皮肤上的电极采集测量值,并产生一个被称为视网膜电图(ERG)的图形记录。视网膜电图描记术用于诊断视网膜的数种遗传性障碍和获得性障碍,诸如但不限于视网膜色素变性、视网膜脱落或由动脉粥样硬化或糖尿病引起的功能变化。
一个实施方案中所给出的是预防年龄相关性黄斑变性的方法,其包括向受试者的眼施用有效量的式I的化合物。
另一个实施方案中所给出的是减轻或治疗年龄相关性黄斑变性的方法,其包括向受试者的受影响的眼施用有效量的式I的化合物。
另一个实施方案中所给出的是预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性的方法,其包括向受试者的眼施用有效量的式I的化合物。另一个实施方案中,向受试者的眼施用约0.1%至3.0%(w/v)的式I的化合物,每日1-4次。一个实施方案中,向人的眼施用约0.5%至约1.5%(w/v)的式I的化合物,每日1-4次。另一个实施方案中,向人的眼施用约1.5%(w/v)的式I的化合物,每日1-4次。一个实施方案中,施用式I的化合物,每日两次。一个实施方案中,施用式I的化合物,每日一次。可逐滴施用式I的化合物,如1至2滴。
另一个实施方案中所给出的是用于预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性的方法,其包括向受试者施用有效量的化合物A。另一个实施方案中所给出的是用于预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性的方法,其包括向受试者的眼施用有效量的化合物A。一个实施方案中,向受试者的眼施用约0.5%至约1.5%(w/v)的化合物A,每日1至4次。另一个实施方案中,向受试者的眼施用约0.5%至约1.5%(w/v)的化合物A,每日1至4次。另一个实施方案中,向受试者的眼施用约1.5%(w/v)的化合物A,每日1至4次。一个实施方案中,施用式I的化合物,每日两次。一个实施方案中,施用式I的化合物,每日一次。可逐滴施用化合物A,如1至2滴。
另一个实施方案中所给出的是式I的化合物在制造用于预防、减轻或治疗受试者的年龄相关性黄斑变性的药物中的用途。另一个实施方案中所给出的是式I的化合物在制造用于减轻受试者的年龄相关性黄斑变性的药物中的用途。另一个实施方案中所给出的是式I的化合物在制造用于治疗受试者的年龄相关性黄斑变性的药物中的用途。
另一个实施方案中所给出的是式I的化合物用于预防受试者的年龄相关性黄斑变性的用途。
另一个实施方案中所给出的是式I的化合物用于减轻或治疗受试者的年龄相关性黄斑变性的用途。
另一个实施方案中所给出的是化合物A用于预防受试者的年龄相关性黄斑变性的用途。另一个实施方案中所给出的是化合物A用于减轻受试者的年龄相关性黄斑变性的用途。另一个实施方案中所给出的是化合物A用于治疗受试者的年龄相关性黄斑变性的用途。
可以认为,式I的化合物可含有一个或多个手性中心。本发明考虑了式I的所有对映异构体、非对映异构体及其混合物。
此外,本发明的某些实施方案包括如式I所述的化合物的药学可接受的盐。
药学可接受的盐包括但不限于如式I所述的化合物的可溶性或可分散性形式,其适合于治疗疾病,而无过度不适作用,如变态反应或毒性。
代表性药学可接受的盐包括但不限于酸加成盐,如乙酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐或磷酸盐等,以及碱加成盐,如锂盐、钠盐、钾盐或铝盐等。
定义
除非本发明说明书中另有注明或与语境明显矛盾,在本发明的描述语境中(尤其是在以下权利要求的语境中),“a(一)”、“an(一)”和“the(该)”等词及类似的指称对象的使用均应被理解为同时涵盖其单数和复数。除非另有注释,“comprising(包含)”、“having(有)”、“including(包括)”和“containing(含有)”等词均应被理解为开放式术语(即“包括但不限于”)。本发明说明书中如无另外注明,则对值域的叙述仅旨在作为一种单指位于该值域的每一单独值的速记法,且每一单独值以单独叙述的形式被纳入本发明说明书。
本说明书所用的术语“选择性腺苷A1激动剂”是指一种A1激动剂,其对A1受体有高亲和力,而同时对A2A和A3腺苷受体有较低的亲和力。前述式I的化合物(如化合物A至化合物K)对A1受体的亲和力远高于它们分别对A2A和A3受体的亲和力。化合物A至化合物K的A1选择性数据汇总于下表。
本发明说明书中所用的术语“烷基”是指完全饱和的分支或未分支的烃部分。优选地,烷基包括1至20个碳原子,更优选1至16个碳原子、1至10个碳原子、1至7个碳原子或1至4个碳原子。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。此外,“Cx-Cy烷基”中,x为1-5且y为2-15,此表明特定范围的碳的特定烷基基团(直链或支链)。比如,C1-C4烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、叔丁基和异丁基。术语烷基包括但不限于C1-C15烷基、C1-C10烷基和C1-C6烷基。
本发明说明书中所用的术语“C1-C15烷基”是指具有1-15个碳原子的直链或支链的饱和烃。代表性C1-C15烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、新己基、庚基、异庚基、新庚基、辛基、异辛基、新辛基、壬基、异壬基、新壬基、癸基、异癸基、新癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基和十五烷基。一个实施方案中,C1-C15烷基被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,C1-C15烷基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“C1-C10烷基”是指具有1至10个碳原子的直链或支链的饱和烃。代表性C1-C10烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、新己基、庚基、异庚基、新庚基、辛基、异辛基、新辛基、壬基、异壬基、新壬基、癸基、异癸基和新癸基。一个实施方案中,C1-C10烷基被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,C1-C10烷基是未取代的。C1-C10烷基包括但不限于C1-C6烷基。
本发明说明书中所用的术语“C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃。代表性C1-C6烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基和新己基。除非另外注明,C1-C6烷基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“芳基”是指苯基或萘基。一个实施方案中,芳基被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,芳基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“C3-C8单环环烷基”表示3、4、5、6、7或8元饱和非芳香性单环环烷基环。代表性C3-C8单环环烷基基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。一个实施方案中,C3-C8单环环烷基基团被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,C3-C8单环环烷基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“C3-C8单环环烯基”表示具有至少一个内环双键但并非芳香性的3、4、5、6、7或8元非芳香性单环碳环。需理解的是,当任两个基团与其连接的碳原子一起形成C3-C8单环环烯基时,这两个基团所连接的碳原子仍为四价。代表性C3-C8单环环烯基基团包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、1,3-环丁二烯基、环戊烯基、1,3-环戊二烯基、环己烯基、1,3-环己二烯基、环庚烯基、1,3-环庚二烯基、1,4-环庚二烯基、1,3,5-环庚三烯基、环辛烯基、1,3-环辛二烯基、1,4-环辛二烯基、1,3,5-环辛三烯基。一个实施方案中,C3-C8单环环烯基基团被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,C3-C8单环环烯基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“C8-C12二环环烷基”是8、9、10、11或12元饱和非芳香性二环环烷基环体系。代表性C8-C12二环环烷基基团包括但不限于十氢萘、八氢茚、十氢苯并环庚烯和十二氢庚搭烯。一个实施方案中,C8-C12二环环烷基基团被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,该C8-C12二环环烷基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“C8-C12二环环烯基”是具有至少一个内环双键的8、9、10、11或12元非芳香性二环环烷基环体系。需理解的是,当任两个基团与其连接的碳原子一起形成C8-C12二环环烯基时,这两个基团所连接的碳原子仍为四价。代表性C8-C12二环环烯基包括但不限于八氢萘、六氢萘、六氢茚、四氢茚、八氢苯并环庚烯、六氢苯并环庚烯、四氢苯并环庚烯、十氢庚搭烯、八氢庚搭烯、六氢庚搭烯和四氢庚搭烯。一个实施方案中,C8-C12二环环烷基基团被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,C8-C12二环环烯基是未取代的。
本发明说明书中所用的术语“卤素”是指-F、-Cl、-Br或-I。
术语“3-7元单环杂环”是指:(i)3或4元非芳香性单环环烷基,其中1个环碳原子已被N、O或S原子取代;或(ii)5、6或7元芳香性或非芳香性单环环烷基,其中1-4个环碳原子独立地被N、O或S原子取代。非芳香性3-7元单环杂环可通过环氮、硫或碳原子连接。芳香性3-7元单环杂环通过环碳原子连接。3-7元单环杂环基团的代表性实例包括但不限于呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异恶唑基、吗啉基、恶二唑基、恶唑基、恶唑烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基,哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、噻二嗪基、噻二唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、硫代吗啉基、苯硫基、三嗪基、三唑基。一个实施方案中,3-7元单环杂环基团被以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,3-7元单环杂环是未取代的。
术语“8-12元二环杂环”是指二环8-12元芳香性或非芳香性二环环烷基,其中二环体系的一个或两个环中有1-4个环碳原子独立地被N、O或S原子取代。归于此类的是稠合有苯环的3-7元单环杂环。8-12元单环杂环的非芳香性环通过环氮、硫或碳原子连接。芳香性8-12元单环杂环通过环碳原子连接。8-12元二环杂环的实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并苯硫基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、噌啉基、十氢喹啉基、lH-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、异苯并呋喃基、异吲唑基、异吲哚基、异吲哚啉基、异喹啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、喹恶啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基及氧杂蒽基。一个实施方案中,8-12元二环杂环基团的每一环均可用以下一个或多个基团取代:卤素、-O-(C1-C6烷基)、-OH、-CN、-COOR'、-OC(O)R'、-N(R')2、-NHC(O)R'或-C(O)NHR'基团,其中各R'独自为-H或未取代的C1-C6烷基。除非另外注明,8-12元二环杂环是未取代的。下文描述了“苯撑基”的代表性实例:
本发明说明书中所用的短语“药学可接受的盐”是酸与嘌呤化合物的碱性氮原子的盐。示例性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖酮酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲基磺酸盐、乙基磺酸盐、苯基磺酸盐、对甲苯基磺酸盐及双羟萘酸盐(即l,l'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘酸盐))。药学可接受的盐也可以是樟脑磺酸盐。术语“药学可接受的盐”还是指具有酸性官能团(如羧酸官能团)的嘌呤化合物与碱的盐。合适的碱包括但不限于如钠、钾和锂的碱金属的氢氧化物;如钙和镁的碱土金属的氢氧化物;如铝和锌的其它金属的氢氧化物;氨以及有机胺,如未取代或羟基取代的单、二或三烷基胺、二环己胺;三丁胺;吡啶;N-甲胺,N-乙胺;二乙胺;三乙胺;单、双或三-(2-OH-低级烷基胺),如单、双或三-(2-羟乙基)胺,2-羟基-叔丁胺,或三-(羟甲基)甲胺,N,N-二-低级烷基-N-(羟基-低级烷基)-胺,如N,N-二甲基-N-(2-羟乙基)胺或三-(2-羟乙基)胺;N-甲基-D-葡萄糖胺;以及氨基酸,如精氨酸、赖氨酸等。术语“药学可接受的盐”还包括嘌呤化合物的水合物。
本发明说明书中的一些化学结构是用粗线和虚线描绘的,以表示化学键。这些粗线和虚线描绘了绝对的立体化学组成。粗线说明取代基位于其连接的碳原子的平面上方,而虚线说明取代基位于其连接的碳原子的平面下方。
本发明说明书中所用的术语“有效量”是指选择性腺苷A1激动剂的量,其在以下方面有效:(i)预防年龄相关性黄斑变性;(ii)减轻或减慢年龄相关性黄斑变性的进展;或(iii)治疗受试者的年龄相关性黄斑变性;或(iv)预防RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤;或者(v)减轻或减慢RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤;或(vi)治疗因RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤而引起的病况或疾病。术语“受试者”旨在包括有风险患上或患有与年龄相关性黄斑变性相关的疾病、障碍或病况的生物体。受试者的实例包括哺乳动物,如人、狗、奶牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠以及转基因的非人类动物。一些实施方案中,受试者是人,如患有、有风险患上或潜在可能患有年龄相关性黄斑变性的人。
术语“治疗(treat)”、“治疗(treated)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括由被治疗的状态、障碍或疾病相关或引起的至少一个症状的缓解或减轻。例如,术语“治疗”可意味着减少或防止进一步的损伤或损失(如RPE和/或感光细胞的损伤或损失),诸如由年龄相关性黄斑变性但不限于年龄相关性黄斑变性所引起的损伤或损失。比如,治疗可以是障碍的一个或数个症状的缓解,或障碍的完全消失。比如,年龄相关性黄斑变性的症状包括玻璃疣的出现、RPE细胞的损失或损伤、感光细胞的损失或损伤、对比灵敏度的损失、视野中心的模糊或失明斑点及中心视力或整体视力的朦胧。
本发明说明书中,术语“保护”或“预防”是可以互换的,用于延迟发生(即在疾病的临床表现前的时段)和/或用于降低受试者患病(如受试者有风险患上疾病)或病情恶化(如通过中止或减慢患病受试者的疾病进展)的可能性。比如,本发明的方法可用于预防、减轻或治疗RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤,诸如年龄相关性黄斑变性中所见的损失或损伤但不限于年龄相关性黄斑变性。
术语“用途”分别包括本发明的下列实施方案中的任何的一个或多个:用于治疗、预防或减轻RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤,诸如年龄相关性黄斑变性中所见的损失或损伤但不限于年龄相关性黄斑变性的用途;用于制造药物组合物的用途,所述药物组合物用于治疗由RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤,诸如年龄相关性黄斑变性中所见的损失或损伤但不限于年龄相关性黄斑变性所导致的疾病或病况,例如在制造药品中的用途;在治疗此类疾病或病况中使用本发明化合物的方法;具有本发明化合物的药物制剂用于治疗RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤,诸如年龄相关性黄斑变性中所见的损失或损伤但不限于年龄相关性黄斑变性;以及本发明化合物用于治疗RPE细胞的损失或损伤或者感光细胞的损失或损伤,诸如年龄相关性黄斑变性中所见的损失或损伤但不限于年龄相关性黄斑变性;如无另外陈述,则以上表述是适当和权宜的。
术语“约”或“大约”通常意味着位于给定值或范围的20%以内,更优选位于该值或范围的10%以内,最优选位于该值或范围的5%以内。或者,尤其在生物系统中,术语“约”意味着约位于一个对数(即一个数量级)内,优选位于给定值的两倍范围内。
本发明说明书中所用的术语“滴”是指类似于液滴的可眼用流体的量。一个实施方案中,一滴是指相当于约5μl至约200μl的液体体积,如约30μl至约80μl的液体体积。
以下缩写词用于本发明说明书,且具有所指明的定义:CCPA是2-氯-N6-环戊基腺苷;CPA是N6-环戊基腺苷;NECA是腺苷-5'-(N-乙基)碳氧杂酰胺;NMR是核磁共振;R-PIA是N6-(2-苯基-异丙基)腺苷的R-异构体;HPβCD是羟丙基β-环糊精。
合成方法
如式I的化合物可采用美国专利7,423,144中所述的合成步骤制备,该专利的全部公开内容及其它公开方法被并入本发明说明书(参见Cristalli等人,J.Med.Chem(药物化学期刊)35:第2363-2369页,1992年;Cristalli等人,J.Med.Chem(药物化学期刊)37:第1720-1726页,1994年;Cristalli等人J.Med.Chem(药物化学期刊)38:第1462-1472页,1995年;Camaioni等人,Bioorg.Med.Chem(生物有机药物化学)5:第2267-2275页,1997年),或通过采用下文概括的合成步骤制备。
方案1展示的是制造核苷中间体的方法,该中间体用于制造本发明化合物。
方案1
其中R2如上文所定义。
可以使用六甲基二硅烷叠氮化锂和三氟甲磺酸三甲硅酯将式1的受保护的核糖化合物与式2的嘌呤化合物偶合,然后用三氟乙酸除去丙酮缩合物,以提供式3的核苷中间体及其对应的式4的其它端基差向异构体。类似地,可以使用六甲基二硅烷叠氮化锂和三氟甲磺酸三甲硅酯将式5的核糖二乙酸酯与式2的化合物偶合,以提供丙酮缩合物保护的式6的核苷中间体及其对应的式7的其它端基差向异构体。
方案2展示的是用于制造式8的腺苷中间体的方法,该中间体用于制造本发明化合物。
方案2
其中R1和R2如上文所定义。
在存在樟脑磺酸的条件下,采用丙酮和2,2-二甲氧基丙烷将式3a的6-氯代腺苷衍生物转化成其2',3'-丙酮缩合物。在存在碱的条件下,采用式R1-NH2的胺可进一步将该丙酮缩合物衍生化,以提供式8的化合物。
用于制造本发明其它化合物的方法描述于方案4。
方案4
其中R1和R2如上文所定义。
在存在乙酸酐或诸如MsCl/ONO3或亚硝翁四氟硼酸盐等其它硝化剂的条件下,采用硝酸可将式8的腺苷中间体转化成其5'-硝酸酯类似物。采用TFA/水除去丙酮缩合物,提供本发明的化合物。
方案6概括了用于制造式(Id)的嘌呤衍生物的方法,式中R3为-CH2OSO3H。
方案6
其中R1和R2如上文所定义。
可以使用三氧化硫-吡啶络合物处理式8的腺苷中间体,以提供对应的5'-磺酸吡啶盐中间体。然后可用NaOH或KOH中和该吡啶盐中间体,接着用TFA/水除去丙酮缩合物,分别提供对应的式(Id)的嘌呤衍生物的钠盐或钾盐,其中A为-CH2OSO3H。用水溶性强酸,如硫酸或盐酸,处理钠盐或钾盐,提供本发明的化合物,其中A为-CH2OSO3H。
递送模式
如式I的化合物可掺入到各种类型的用于递送的眼科组合物或制剂中。采用本领域普通技术人员所熟知的技术,可将式I化合物直接递送至眼部(比如,外用滴眼液或软膏;缓释装置,如植入内囊管或植入巩膜附近或眼内的药物递送海绵;眼周、结膜、眼球筋膜囊下、前房内、玻璃体内或泪小管内注射),或全身递送(比如,口服、静脉注射、皮下注射或肌内注射;肠道外、皮下或经鼻递送)。进一步可预期,本发明的试剂可配制成用于眼内插入或植入装置。
优选将式I的化合物掺入到pH值约为4-8的局部眼科制剂中用于递送至眼部。化合物A的各种制剂,尤其是题为“眼科制剂”的PCT/US2010/033112、PCT/US2010/054040和PCT/US2014/152723中所述的制剂,其内容如同单独列出一样,将其并入本发明说明书。
化合物可与眼科可用的防腐剂、表面活性剂、增粘剂、渗透促进剂、颗粒稳定剂、缓冲剂、氯化钠及水组合,形成一种水溶性无菌眼用悬浮液或溶液。通过将化合物溶解在生理上可接受的水溶性等渗缓冲液中,可制备眼用溶液制剂。此外,眼用溶液还可包括眼科可用的表面活性剂以帮助溶解化合物。此外,眼用溶液可包含增粘或增溶的试剂,如羟丙基β-环糊精(HPβCD)、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或类似物,改善制剂在结膜囊内的留存。也可使用胶化剂,包括但不限于结冷胶和黄原胶。为了制备无菌眼用软膏制剂,活性成分可与防腐剂在适当的介质(矿物油、液态羊毛脂或白凡士林)中组合。按照公开的类似眼用制剂的配方,将化合物悬浮于由例如Carbopol-974或类似物的组合制备的亲水性碱中来制备无菌眼用凝胶制剂;可掺入防腐剂和渗透剂。
在优选实施方案中组合物所包含的化合物的量足以预防、减轻或治疗易患或患有年龄相关性黄斑变性的受试者的年龄相关性黄斑变性。本发明说明书中,此类量被称为“有效预防、减轻或治疗年龄相关性黄斑变性的量”或简称为“有效量”。这些制剂中一般含有化合物的量介于约0.1%和3.0%(w/v)之间或约0.5%至约1.5%(w/v)之间。因此,局部用时,1-2滴的这些制剂将被递送至眼表面,每日1-4次,由临床医生酌情决定。
通过以下实施例将进一步说明本发明。
实施例1-Balb/C小鼠的蓝光损害模型
进行小鼠蓝光损害研究以评价Trabodenoson(化合物A)(一种选择性腺苷-A1受体激动剂)的功效,对视网膜损害的小鼠模型进行局部眼部滴注7日,每日两次。鼠类视网膜广泛用于研究视网膜疾病及中枢神经系统神经元对损伤的反应。光诱导视网膜损害(光毒性)选择性地导致感光细胞的死亡。因此,本模型适用于研究感光细胞死亡和后续视网膜变性作用所蕴含的潜在机制,因为它模拟了构成年龄相关性黄斑变性的主要特点的感光细胞变性。
本研究设计如下:
BDNF:脑源性神经营养因子;IVT:玻璃体内注射
剂量配制如下:
将测试物,1.5%或3.0%的化合物A(trabodenoson),和安慰剂施用给小鼠。从冰箱中取出等分试样,在投药前至少等30分钟,使等分试样温暖至室温。使用USP级0.9%氯化钠注射液,将阳性对照BDNF复原为1μg/μL的浓度。弃去任何残留量。
从Charles River,St Constant接收到三十四(34)只雄性BALB/c小鼠。这些动物为8周龄,开始投药时的体重介于21.7克和23.9克之间。
这些动物一到达即被分组圈养(2只/笼),随机化后被单独圈养。动物被圈养在丝网铺底的笼或有适当垫料的聚碳酸酯笼里。保持温度在19℃-25℃,相对湿度为30%-70%。保持昼夜各12小时明暗交替循环,除非被指定程序中断。圈养区的光强<200勒克斯。
整个研究期间,不限量供应PMI营养国际有限公司认证的5CR4号啮齿动物食料(14%蛋白质),指定程序期间除外。反向渗透和紫外线辐照处理后的城市自来水通过自动给水系统自由供给各个动物(指定程序期间除外)。
从第1日至第7日,通过局部眼部滴注,每日两次施用测试物和安慰剂,两次之间至少相隔8小时。每眼/剂的剂量体积为10μL。给药过程中,不断搅拌制剂,并在投药间隙,将制剂保留在湿冰上。
在第1日,通过单次双侧玻璃体内(IVT)注射,向第4组动物施用阳性对照BDNF。剂量体积为1μL/眼。采用异氟醚/氧混合物和/或镇静剂混合物(氯胺酮100mg/kg;甲苯噻嗪10mg/kg;腹腔注射,必要时,采用一半或四分之一剂量),将动物麻醉用以投药。使用与Hamilton注射器相连的玻璃微针,通过由30G针形成的巩膜先导孔进行注射。投药后,将温和的润滑膏施用于眼部。
第2日,将动物转移至蓝光箱(单独圈养)。将配有发蓝光的灯泡的灯具(460-490nm;飞利浦F40/BB专用蓝F40T12/BB)连接到笼正上方的单独圈养架上,使得所有动物接收到类似的光曝露量。用照度计测量箱里的光强;平均光强为550勒克斯。箱里不提供躲避装置/管和垫料。在将动物放回至其圈养笼中后,所有动物在环境照度下的曝露期为7.75小时。
整个研究期间,每日两次进行死亡率/濒死率检查,一次在上午,一次在下午。每周进行详细检查。测量个体体重两次,一次在治疗前,一次在剖检时。
治疗前和过夜暗光适应后的第1周结束时,各进行一次视网膜电图(ERG)。所用麻醉剂是氯胺酮(100mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)。每次ERG检查由以下内容组成:适应暗光的单闪0dB刺激,平均为2次单闪,间隔最小为120秒。
第8日,二氧化碳窒息后,将全部动物安乐死并从腹腔动脉放血。未进行剖检。将每只动物的双眼在Davidson固定液中至少固定24小时;转至70%乙醇中,至少放置18小时,直至加工制样和/或贮存于10%中性福尔马林缓冲液中。
将每只动物的一只眼包埋在石蜡中,切片,封固在玻片上,并用苏木精和伊红染色。留存另一只眼。
由经认证的动物病理学家或在实验室动物病理方面受过培训且有经验的动物病理学家进行组织病理学评价。统计视网膜中的4个位置处的外核层(ONL)的厚度(细胞层数),并进行视网膜(含视网膜有色上皮细胞)微观评价。出于讨论和举例说明的目的,采集了代表性图像。
结果
投药期间,未见动物的总体外观或状况有异常。蓝光曝露后一周的各治疗组的ERG参数相当,包括安慰剂对照组。图2和图3。在300μg/眼/日时,记录到视网膜的细胞结构有极小至中度下降(8只动物中的7只)。这一结果的发生率和严重程度与安慰剂对照(8只动物中的6只)所观察的结果相近。视网膜中细胞结构下降显著影响了外核细胞层的核心区,外部丛状层和感光细胞层的厚度均减少。在少量受影响最大的动物中,这一变化与嗜碱性色素在外核层中的沉积相关,可能与细胞变性和损失有关。在600μg/眼/日时,视网膜的细胞结构下降极少(2/8)或完全不受影响,与BDNF处理的动物相似。
就视网膜外核层的细胞层数的分组均值而言,相比于安慰剂组和300μg/眼/日的组(分别为7.22层和7.28层),600μg/眼/日的组和BDNF组的分组均值稍高(分别为8.56层和8.75层);然而,组内单只动物观察到大范围,如下表所示。
单个眼视网膜外核层细胞结构
*:每个视网膜4次测量的平均值
#:在左眼进行测量
单个眼视网膜外核层细胞结构
*:每个视网膜4次测量的平均值
#:在左眼进行测量
基于在安慰剂动物的视网膜中没有任何ERG变化以及有限的微观变化,在本研究中,蓝光曝露(550勒克斯,7.75小时)没有有效地诱导外核层视网膜中的细胞损失。然而,降低的视网膜细胞结构的发生率和严重程度的降低指示了通过局部眼部滴注施加600μg/眼/日的化合物A(trabodenoson)(每日两次)7日后,起到保护作用。
实施例2-Balb/C小鼠的蓝光损害模型
进行第二次小鼠蓝光损害研究以进一步评价Trabodenoson(化合物A)(一种选择性腺苷-A1受体激动剂)的功效,对视网膜损害的小鼠模型进行局部眼部滴注7日,每日两次或三次。鼠类视网膜广泛用于研究视网膜疾病及中枢神经系统神经元对损伤的反应。光诱导视网膜损害(光毒性)选择性地导致感光细胞的死亡。因此,本模型适用于研究感光细胞死亡和后续视网膜变性作用所蕴含的潜在机制,因为它模拟了构成年龄相关性黄斑变性的主要特点的感光细胞变性。
本研究设计如下:
BDNF:脑源性神经营养因子;IVT:玻璃体内注射
剂量配制如下:
将测试物,3.0%的化合物A(trabodenoson),和安慰剂施用给小鼠。从冰箱中取出等分试样,在投药前至少等30分钟,使等分试样温暖至室温。使用USP级0.9%氯化钠注射液,将阳性对照BDNF复原为1μg/μL的浓度。弃去任何残留量。
从Charles River,St Constant接收到三十四(34)只雄性BALB/c小鼠。这些动物为9周龄,开始投药时的体重介于21.8克和26.4克之间。
这些动物一到达即被分组圈养(2只/笼),随机化后被单独圈养。动物被圈养在丝网铺底的笼或有适当垫料的聚碳酸酯笼里。保持温度在19℃-25℃,相对湿度为30%-70%。保持昼夜各12小时明暗交替循环,除非被指定程序中断。圈养区的光强<200勒克斯。
整个研究期间,不限量供应PMI营养国际有限公司认证的5CR4号啮齿动物食料(14%蛋白质),指定程序期间除外。反向渗透和紫外线辐照处理后的城市自来水通过自动给水系统自由供给各个动物(指定程序期间除外)。
从第1日至第8日,通过局部眼部滴注,每日两次施用测试物和安慰剂,两次之间至少相隔8小时。对第1组和第2组每日投药2次,对第3组每日投药3次,第1次和最后一次投药之间最少8小时。将投药期从1日延长至8日,以允许进行视网膜电图(ERG),通过动物室内自动开启的灯光中断在第7日之前的连夜暗光适应。每眼/剂的剂量体积为10μL。给药过程中,不断搅拌制剂,并在投药间隙,将制剂保留在湿冰上。
在第1日,通过单次双侧玻璃体内(IVT)注射,向第4组动物施用阳性对照BDNF。剂量体积为1μL/眼。采用异氟醚/氧混合物和/或镇静剂混合物(氯胺酮100mg/kg;甲苯噻嗪10mg/kg;腹腔注射,必要时,采用一半或四分之一剂量),将动物麻醉用以投药。使用与Hamilton注射器相连的玻璃微针,通过由30G针形成的巩膜先导孔进行注射。投药后,将温和的润滑膏施用于眼部。
第2日,将动物转移至蓝光箱(单独圈养)。将配有发蓝光的灯泡的灯具(460-490nm;飞利浦F40/BB专用蓝F40T12/BB)连接到笼正上方的单独圈养架上,使得所有动物接收到类似的光曝露量。用照度计测量箱里的光强;平均光强为1100勒克斯。箱里不提供躲避装置/管和垫料。在将动物放回至其圈养笼中后,所有动物在环境照度下的曝露期为6小时。
整个研究期间,每日两次进行死亡率/濒死率检查,一次在上午,一次在下午。每周进行详细检查。治疗前测量个体体重一次。
治疗前和过夜暗光适应后的8日治疗期间结束时,各进行一次视网膜电图(ERG)。所用麻醉剂是氯胺酮(100mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)。每次ERG检查由以下内容组成:适应暗光的单闪0dB刺激,平均为2次单闪,间隔最小为120秒。ERG的结果
第8日,二氧化碳窒息后,将全部动物安乐死并从腹腔动脉放血。收集每只动物的双眼并将其在Davidson固定液中至少固定24小时;转至70%乙醇中,至少放置18小时,直至加工制样和/或贮存于10%中性福尔马林缓冲液中。
将每只动物的一只眼包埋在石蜡中,切片,封固在玻片上,并用苏木精和伊红染色。
由经认证的动物病理学家或动物病理学家进行组织病理学评价。统计视网膜中的4个位置处的外核层(ONL)的厚度(细胞层数),并进行视网膜(含视网膜有色上皮细胞)微观评价。
结果
蓝光曝露一周后,ERG结果暗示出对蓝光损害的保护作用。
化合物A组(600或900μg/眼/日)中的0dB暗视闪光刺激后的B波振幅高于安慰剂对照,并与BDNF阳性对照组相当-参见图4。
进行显微镜检查时,当与600或900μg化合物A/眼/日组和BDNF对照组相比,安慰剂组中的ONL中细胞层的平均数降低-参见图5。总之,基于平均ONL厚度计数,化合物A-低剂量组在ONL中保留了最大数目的核体。ONL细胞数目的变化与ERG结果相关。在安慰剂对照组中,更频繁地观察到角膜和/或巩膜中的其它显微观察。
总之,通过局部眼部滴注7日,以600或900μg/眼/日的剂量,每日两次或三次施用化合物A,导致在第2日蓝光曝露(1100勒克斯,6小时)后,在视网膜的ONL层中的ERG功能和细胞结构的保留。这些结果表明化合物A在视网膜损害的小鼠模型中的保护作用。
实施例3-化合物合成
2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷:将溶于乙醇(20ml)的6-氯腺苷(2.58g)和环己胺(5g)的溶液回流加热6小时,然后冷却至室温。将反应混合物真空浓缩并用水(50ml)和乙酸乙酯(300ml)稀释所得残余物。分离有机层,用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水层。用水(1×30ml)洗涤合并的有机层,用硫酸钠干燥,真空浓缩并真空干燥,得到白色固体状的N6-环己基腺苷(2.600g)。用丙酮(30ml)稀释N6-环己基腺苷(2.6g),并向所得溶液加入2,2-二甲氧基丙烷(12ml),然后加入D-樟脑磺酸(3.01g),并在室温下搅拌混合物18小时。将反应混合物真空浓缩并用乙酸乙酯(150ml)稀释所得残余物,然后用饱和NaHCO3水溶液中和至pH8.0。分离有机层,用硫酸钠干燥,真空浓缩。使用MeOH-CH2Cl2(4:96)作为洗脱剂,将残余物在硅胶柱上纯化两次,得到2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷(3.16g)。1H NMR(CDCl3):δ1.23-1.47(m,9H)、1.38(s,3H)、1.64(s,3H)、1.79-1.81(m,1H)、2.04-2.06(m,1H)、3.80(d,J=12Hz,1H)、3.96(d,J=12Hz,1H)、4.53(s,1H)、5.09-5.16(m,2H)、5.80-5.92(m,2H)、7.79(s,1H)、8.24(s,1H)、8.22-8.38(m,1H)。
N6-环己基腺苷-5’-氧-硝酸盐(化合物E):在-25℃(CCl4-CO2浴,用于冷却)下将乙酸酐(6ml)缓慢加入到搅拌的硝酸溶液(2g,63%)中,并在额外1小时中将反应温度保持在-7.5至0℃。缓慢加入溶于乙酸酐(3mL)的2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷(1.0g)的溶液。在0至-5℃下将所得反应物搅拌2小时,将混合物缓慢倒入冰冷的NaHCO3(40mL)和乙酸乙酯(150mL)水溶液中,并搅拌5分钟。分离有机层并用水洗涤,用硫酸钠干燥,并真空浓缩。用TFA(16mL)和水(4mL)的混合物将残余物稀释,并将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物真空浓缩,并用水(10mL)稀释所得残余物,并真空浓缩。用乙酸乙酯稀释所得残余物,并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,用硫酸钠干燥有机层,并真空浓缩。在硅胶柱上使用乙酸乙酯己烷(40:60至20:80梯度)纯化残余物,得到N6-环己基腺苷-5’-氧-硝酸盐(0.150gm)。1HNMR(DMSO-D6):δ1.08-1.13(m,1H)、1.27-1.41(m,4H)、1.57-1.83(m.6H)、4.12-4.17(m,2H)、4.30-4.33(m,1H)、5.48(d,J=5.4Hz,1H)、5.60(d,J=5.7Hz,1H)、5.90(d,J=4.8Hz,1H)、7.59(d,J=8.1Hz,1H)、8.16(s,1H)、8.29(s,1H)。
N6-(外型-2-降冰片基)腺苷-5’-氧-硝酸盐(化合物F):按照2',3'-异亚丙基-N6-环己基腺苷的方法制备2’,3’-异亚丙基-N6-外型-降冰片基腺苷并用于随后的反应。在-25℃(CCl4-CO2浴,用于冷却)下将乙酸酐(6ml)缓慢加入到搅拌的硝酸溶液(2g,63%)中,并在额外1小时中将反应温度保持在-7.5至0℃。缓慢加入溶于乙酸酐(3mL)的2’,3’-异亚丙基-N6-外型-降冰片基腺苷(1.2g)的溶液。在0至-5℃下将混合物搅拌40分钟,将混合物缓慢倒入冰冷的NaHCO3(40mL)水溶液中。在二氯甲烷中萃取溶液。分离有机层并用浓盐水洗涤,用硫酸钠干燥,并在真空下浓缩。在硅胶柱上用乙酸乙酯-己烷(1:1)纯化残余物,得到所需产物(0.245g)和起始化合物(1.0g)。在TFA(15mL)和水(5mL)的混合物中稀释硝基产物(0.245g),并将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物在真空下浓缩,并用水(10mL)稀释,然后真空浓缩。用乙酸乙酯稀释所得残余物,并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用硫酸钠干燥有机层,并真空浓缩。残余物从乙酸乙酯和己烷的混合物中重结晶,得到N6-外型-2-降冰片基腺苷-5’-氧-硝酸盐(0.123gm)。1H NMR(DMSO-D6):δ1.03-1.21(m,3H)、1.40-1.56(m,3H)、1.58-1.64(m.4H)、3.94(bs,1H)、4.13-4.17(m,1H)、4.30(bs,1H)、4.66-4.87(m,3H)、5.49(d,J=5.4Hz,1H)、5.62(d,J=5.4Hz,1H)、5.91(d,J=4.8Hz,1H)、7.60(d,J=6.6Hz,1H)、8.20(s,1H)、8.31(s,1H)。
2-氯-N6-环己基腺苷:将溶于乙醇(30ml)的2,6-二氯腺苷(1.0g)和环己胺(0.926g)的混合物回流加热6小时,然后冷却至室温。将混合物在真空下浓缩。使用MeOH-CH2Cl2(1:6至1:5)在硅胶柱上纯化残余物。将合并的级分浓缩并在真空下干燥,得到2-氯-N6-环己基腺苷,其为白色固体(2.600g)。1H NMR(DMSO-D6):δ1.12-1.21(m,2H)、1.33-1.43(m,3H)、1.63-1.86(m,6H)、3.57-3.62(m,1H)、3.66-3.69(m,1H)、3.97(d,J=3Hz,1H)、4.16(d,J=3.3Hz,1H)、4.54(d,J=5.4Hz,1H)、5.08-5.11(m,1H)、5.24(d,J=4.8Hz,1H)、5.51(d,J=5.7Hz,1H)、5.85(d,J=5.7Hz,1H)、8.26(d,J=8.4Hz,1H)、8.41(s,1H)。
2-氯-2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷:用丙酮(30ml)稀释2-氯-N6-环己基腺苷(0.5g),向该混合物加入2,2-二甲氧基丙烷(2.04g),然后加入D-樟脑磺酸(CSA,0.272g)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的CSA(0.2g)并搅拌2小时。将混合物真空浓缩并用乙酸乙酯稀释所得残余物,然后用浓缩的NaHCO3水溶液中和至pH 8.0。分离有机层,用硫酸钠干燥,在真空下浓缩,得到2-氯-2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷(0.378g)。1HNMR(CDCl3):δ1.23-1.30(m,3H)、1.36-1.44(m,1H)、1.63(s,3H)、1.68-1.79(m,5H)、2.04-2.08(m,2H)、3.81(d,J=5Hz,1H)、3.99(d,J=12.9Hz,1H)、4.51(s,1H)、5.11(d,J=5.7Hz,1H)、5.15-5.18(m,1H)、5.75(bs,1H)、5.78(d,J=4.5Hz,1H)、5.96(bs,1H)、7.76(s,1H)。
2-氯-N6-环己基腺苷-5’-氧-硫酸钠盐(化合物G):将2-氯-2’,3’-异亚丙基-N6-环己基腺苷(0.540g)溶于DMF(6ml)中,并缓慢加入到溶于DMF(3ml)的三氧化硫(0.302g)的溶液中。将混合物在室温下搅拌过夜。将其在旋转蒸发器上浓缩,并用水(8ml)稀释残余物。用NaOH(0.1N)将水溶液缓慢中和至pH 7.0。将其在乙酸乙酯中萃取,然后将水层浓缩。将所得白色固体如此用于下一步骤。用TFA-水(16:4ml)的混合物处理受保护的硫酸钠盐,并搅拌30分钟。将反应混合物浓缩,残余物从丙酮中结晶,得到2-氯-N6-环己基腺苷-5’-氧-硫酸钠盐(0.150g)。1H NMR(DMSO-D6):δ1.10-1.13(m,1H)、1.25-1.41(m,4H)、1.57-1.83(m.6H)、3.72-4.08(m,4H)、4.47(s,1H)、5.81(s,1H)、8.14(d,J=6.0Hz,1H)、8.43(s,1H)。
2-氯-N6-环己基腺苷-5’-氧-硝酸盐(化合物H):在硝化和TFA水脱保护反应后,从2-氯-2',3'-异亚丙基-N6-环己基腺苷制备2-氯-N6-环己基腺苷-5’-氧-硝酸盐。1H NMR(CDCl3):δ1.06-1.42(m,4H)、1.64-1.88(m,5H)、4.08(bs,1H)、4.21(s,1H)、4.30(d,J=4.2Hz,1H)、4.41(s,1H)、4.83-4.88(m,2H)、5.57(d,J=5.4Hz,1H)、5.70(d,J=4.5Hz,1H)、5.90(d,J=5.1Hz,1H)、8.26(d,J=8.7Hz,1H)、8.38(s,1H)。
化合物A的合成
N6-环戊基腺苷(化合物I):将溶于乙醇(50当量)的6-氯腺苷(43g)和环戊胺(5当量)的溶液回流加热3小时,然后冷却至室温。将反应混合物真空浓缩并用水(400ml)和乙酸乙酯(400ml)稀释所得残余物。分离有机层,将水层萃取入乙酸乙酯(2×400ml)。用水(2×200ml)洗涤合并的有机层,用硫酸钠干燥,真空浓缩并在真空下干燥,得到固体,将其悬浮在MeOH(400mL)中,过滤并干燥得到N6-环戊基腺苷(43.8g)。
2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷:用丙酮(75当量)稀释N6-环戊基腺苷(43g),并向所得溶液加入2,2-二甲氧基丙烷(5当量),然后加入D-樟脑磺酸(1当量),并在室温下搅拌所得反应物3小时。将所得反应混合物真空浓缩并用乙酸乙酯稀释所得残余物,然后用饱和NaHCO3水溶液中和至pH 7.0。分离有机层,用硫酸钠干燥,真空浓缩并在真空下干燥,得到固体,将其悬浮在己烷(250mL)中,过滤、用己烷洗涤干燥并在真空下干燥,得到2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷(43g)。
2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷-5’-硝酸盐:在-10℃(乙腈-CO2浴,用于冷却)下将乙酸酐(22当量)经过4小时缓慢加入到搅拌的硝酸溶液(5当量,63%)中,在添加过程中将反应温度保持在-5至5℃。将所得溶液冷却至-20℃,缓慢加入溶于乙酸酐(37mL,8当量)的2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷(18.250gm,0.048mol)的溶液。在-15至-5℃下将所得反应物搅拌1小时,将所得反应物混合物缓慢倒入冰冷的NaHCO3(168gm在800mL水中)和乙酸乙酯(350mL)水溶液中,并将所得溶液搅拌5分钟。分离有机层,用乙酸乙酯(350mL)萃取水层。用水洗涤合并的有机层,用硫酸钠干燥,真空浓缩,并使用快速柱色谱在硅胶上纯化,使用70%乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂,得到2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷-5’-硝酸盐(14.9g)。
化合物A:用TFA(20mL)和水(5mL)的混合物将2’,3’-异亚丙基-N6-环戊基腺苷-5’-硝酸盐(4.8g)稀释,并将所得反应物在室温下搅拌30分钟。将所得反应混合物真空浓缩,并用水(10mL)稀释所得残余物,并真空浓缩。用乙酸乙酯稀释所得残余物,并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,用硫酸钠干燥有机层,并真空浓缩,得到白色固体残余物,将其在真空下干燥,然后从冷乙醇中重结晶,得到化合物A(3.1gm)。1H-NMR(DMSO-d6):δ1.49-1.58(m,4H)、1.66-1.72(m,2H)、1.89-1.94(m,2H)、4.12-4.17(m,1H)、4.28-4.33(m,1H)、4.48(bs,1H)、4.65-4.87(m,3H)、5.5(d,J=5.1Hz,1H)、5.63(d,J=5.7Hz,1H)、5.91(d,J=5.1Hz,1H)、7,75(d,J=7.5Hz,1H)、8.17(bs,1H)、8.30(s,1H);MS(ES+):m/z 381.35(M+1);C15H20N6O6的分析计算值:C,47.37;H,5.30;N,22.10;实测值:C,47.49;H,5.12,N,21.96。
化合物B的合成
2-氯-N6-环戊基腺苷-用乙醇(50当量)稀释2’,3’,5′-三乙酰氧基-2,6-二氯腺苷(1.5g)和环戊胺(8当量),将所得溶液加热回流约15小时,然后冷却至室温并真空浓缩,得到粗残余物,将其用乙酸乙酯和水的混合物稀释并转移至分液漏斗中。分离有机层,用硫酸钠干燥,并真空浓缩,得到粗残余物,使用快速柱色谱在硅胶上进行纯化(8%MeOH-二氯甲烷作为洗脱剂),得到2-氯-N6-环戊基腺苷(0.948g)。MS m/z 370.32[M+H]+。
2’,3’-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷:用丙酮(15mL)稀释2-氯-N6-环戊基腺苷(900mg,如前面步骤所制备)和2,2-二甲氧基丙烷(10当量),向所得溶液加入D-樟脑磺酸(1当量),将所得反应物在室温下搅拌2小时。将所得反应混合物真空浓缩,用饱和NaHCO3水溶液和乙酸乙酯的混合物稀释,并转移至分液漏斗中。分离有机层,用硫酸钠干燥,并真空浓缩,得到粗残余物,使用快速柱色谱在硅胶上进行纯化(使用5%MeOH-二氯甲烷作为洗脱剂),得到2',3'-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷(0.905g)。1H NMR(CDCl3,300MHz):δ1.36(s,3H)、1.62(s,3H)、1.66-2.16(m,9H)、3.78(d,J=12.9Hz,1H)、3.98(d,J=12.9Hz,1H)、4.51(bs,1H)、4.55-4.60(m,1H)、5.09-5.17(m,2H)、5.81(bs,1H)、7.25(s,1H)、7.89(s,1H)。
2’,3’-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷-5’-硝酸盐:在-10至10℃(使用乙腈-CO2冷却浴)下,经过30分钟将硝酸(2.0mL,60%)的溶液缓慢加入到乙酸酐(16.0mL),将反应混合物-10至10℃下搅拌10分钟。然后将反应混合物冷却至-30℃,然后缓慢添加溶于乙酸酸酐(8.0mL)的2',3'-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷(655mg,0.0016mol,如前述步骤中所制备)的溶液。当添加完成时,将所得反应物温热至-5℃,并使用TLC(溶剂5%MeOH-CH2Cl2或70%EtOAc-己烷)监测。当反应完成时,将反应混合物缓慢倒入饱和NaHCO3水溶液(300当量,在75mL水中)和乙酸乙酯(60mL)的冰冷混合物中。分离有机层,用乙酸乙酯反萃取水层。用水洗涤合并的有机层,用硫酸钠干燥,并真空浓缩,得到粗残余物。使用快速柱(5%甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂)纯化粗残余物,得到2',3'-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷-5'-硝酸盐(0.435g)。1H NMR(CDCl3,300MHz):δ1.38(s,3H)、1.59(s,3H)、1.66-2.13(m,9H)、4.50-4.55(m,1H)、4.71-4.83(m,2H)、5.14-5.17(m,1H)、5.31(d,J=5.7Hz,1H)、6.04(s,1H)、7.24(s,1H)、7.81(s,1H)。MS m/z 455.44[M+H]+。
化合物B:用TFA(20mL)和水(5mL)稀释2',3'-异亚丙基-2-氯-N6-环戊基腺苷-5'-硝酸盐(0.435g,如前面步骤中所制备),并将所得溶液搅拌30分钟。将所得反应混合物真空浓缩,并用水(10mL)稀释所得残余物,并将所得溶液真空浓缩。用乙酸乙酯稀释所得粗残余物,转移至分液漏斗中,用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,用硫酸钠干燥并真空浓缩。使用快速柱色谱在硅胶上(使用10%甲醇-二氯甲烷作为洗脱剂)纯化所得粗残余物,得到化合物16(0.250g)。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ1.52-1.95(m,9H)、4.13-4.24(m,2H)、4.55-4.58(m,1H)、4.73-4.85(m,2H)、5.50(bs,1H)、5.61(bs,1H)、5.84(d,J=5.1Hz,1H)、8.33(bs,2H)、MS m/z 414.85[M+H]+。
化合物C(钠盐)的合成
将2',3'-异亚丙基-N6-环戊基腺苷(1g,0.0026mol,如实施例1所述制备)和三氧化硫-吡啶络合物(0.0039mol)的混合物在DMF(17mL)中于室温下搅拌约18小时。真空去除DMF,所得残余物真空干燥。将干燥的残余物用水(25mL)稀释,使用NaOH(1N)中和至pH为7.0,真空浓缩,得到粗残余物,将其用TFA(80%水溶液,50mL)溶液稀释。将所得溶液在25℃下搅拌30分钟,并将反应混合物真空浓缩,得到粗残余物,将其用水(10mL)稀释并真空浓缩。将得到的粗制化合物从丙酮-水中重结晶,得到化合物C(钠盐)(805mg)。1HMNR(DMSO-d6,300MHz):1.53-1.96(m,9H)、3.78-4.10(m,4H)、4.43-4.54(m,2H)、5.90(d,J=5.1Hz,1H)、8.23(s,1H)、8.46(s,1H)。MSm/z 416.20[M+H]+。
实施例4-结合研究
细胞培养和膜制备
将稳定转染有人腺苷A1受体的CHO细胞培养并保持于含有营养混合物F12(DMEM/F12)、无核苷的Dulbecco's Modified Eagles培养基中,该培养基含有10%胎牛血清、青霉素(100U/mL)、链霉素(100μg/mL)、L-谷氨酰胺(2mM)和遗传霉素(G-418,0.2mg/mL;A2B,0.5mg/mL),维持于37℃、5%CO2/95%空气中。然后将细胞以1:5至1:20的比例每周分离2次或3次。
用于放射性配体结合实验的膜,如Klotz等人,Naunyn-Schmiedeberg’sArch.Pharmacol.,357:1-9(1998)中所述,用新鲜或冷冻的细胞进行制备。然后将细胞悬浮液在冰冷的低渗缓冲液(5mM Tris/HCl,2mM EDTA,pH 7.4)中匀化,并将匀浆在1,000g下旋转10分钟(4℃)。然后以100,000g的转速维持30分钟,将膜从上清液中沉淀下来,并于pH7.4的50mM Tris/HCl缓冲液中重悬(对于A3腺苷受体:50mM Tris/HCl,10mM MgCl2,1mMEDTA,pH 8.25),以1-3mg/mL的蛋白浓度冷冻在液氮中,储存温度为-80℃。
腺苷受体结合研究
可以通过测量稳定转染人重组A1腺苷受体的CHO细胞中特异性[3H]2-氯-N6-环戊基腺苷结合的取代来确定所选择的嘌呤化合物对腺苷A1受体的亲和力,以Ki(nM)表示。
使用A1选择性激动剂2-氯-N6-[3H]环戊基腺苷([3H]CCPA,1nM)在96孔微孔板的竞争实验中确定未标记化合物的解离常数(Ki值),用于表征A1受体结合。在100μM R-PIA和1mM茶碱存在下,分别确定非特异性结合。详见Klotz等人,Naunyn-Schmiedeberg’sArch.Pharmacol.,357:1-9,1998。结合数据可以使用程序SCTFIT(De Lean等人Mol.Pharm.1982,21:5-16)通过非线性曲线拟合计算。
功能表征
在稳定转染有人A1和A3腺苷受体的CHO细胞所制备的膜中测试A1和A3受体介导的毛喉素刺激的腺苷酸环化酶活性抑制。在稳定转染有人A2a和A3腺苷受体的CHO细胞所制备的膜中测试A2a和A2b受体介导的基础环化酶活性的刺激。
经人腺苷A1和A3受体的腺苷酸环化酶抑制
A1(EC50nM) | A3(EC50nM) | |
化合物A | 17 | >100,000 |
化合物B | 20 | >100,000 |
化合物E | 29 | >100,000 |
化合物G | 19 | >100,000 |
已详细描述了本发明及其实施例。然而,本发明的范围并非旨在被说明书中描述的任何过程、制造、物质组成、化合物、手段、方法和/或步骤的具体实施方案所限定。在不脱离本发明的精神和/或本质特征的情况下,可以对所公开的材料进行各种修改、替换和变化。因此,本领域普通技术人员将从本公开内容容易地明白,可以根据本发明的这些相关实施例,执行基本上相同功能或实现与本文所描述的实施例基本相同的结果的后续修改、替换和/或变化。因此,以下权利要求旨在在其保护范围内包括对本文公开的过程、制造、物质组成、化合物、手段、方法和/或步骤进行的修改、替换和变化。
Claims (26)
1.在有需要的受试者中预防年龄相关性黄斑变性的方法,其包括以下步骤:将有效量的包含如式I的化合物
或其药学可接受的盐以及药学可接受的媒介物的眼科药物组合物施用于受试者的眼,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH,-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12的二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12的二环环烯基)或-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)基或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH、或者-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);
并且各个n独立地为1至5的整数。
2.在有需要的受试者中减轻年龄相关性黄斑变性的方法,其包括以下步骤:将有效的包含有效量的如式I的化合物
或其药学可接受的盐以及药物可接受的媒介物的眼科药物组合物施用于受试者的受影响的眼,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH-或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH或-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);
并且各个n独立地为1至5的整数。
3.在有需要的受试者中治疗年龄相关性黄斑变性的方法,其包括以下步骤:将有效的包含有效量的式I的化合物
或其药学可接受的盐以及药学可接受的媒介物的药物组合物施用于受试者的受影响的眼,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH-或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH或-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);
并且各个n独立地为1至5的整数。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述式I的化合物具有以下式:
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-C3-C8单环环烷基、3-7元单环杂环或-C8-C12二环环烷基;并且
R2是-H或卤素。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述式I的化合物选自:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物B
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物C
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物D
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物E
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物F
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物G
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物H
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,和
化合物I
环戊基腺苷(CPA),
化合物J
2-氯环戊基腺苷(CCPA),
化合物K
环己基腺苷(CHA),
或其药学可接受的盐。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述化合物选自
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠;
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠;
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;环己基腺苷(CHA);2-氯环戊基腺苷(CCPA);和环戊基腺苷(CPA)。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述化合物为化合物A((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其包括每日施加包含约0.1%至约5.0%(w/v)的选择性A1激动剂的药物组合物1次至4次的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法,其包括每日施加包含约1.0%至约3.0%(w/v)的选择性A1激动剂的药物组合物1次至4次的步骤。
10.根据权利要求8所述的方法,其包括每日施加包含约0.5%至约1.5%(w/v)的选择性A1激动剂的药物组合物1次至4次的步骤。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述药物组合物逐滴施用。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述药物组合物施用1滴至2滴。
13.通过向受试者的眼施用包含有效量的选择性腺苷A1激动剂的药物组合物来预防、减轻或者治疗受试者的视网膜色素上皮损伤的方法。
14.根据权利要求13所述的方法,其中所述受试者患有年龄相关性黄斑变性或具有发展为年龄相关性黄斑变性的风险。
15.根据权利要求13所述的方法,其中所述受试者患有干性年龄相关性黄斑变性或具有发展为干性年龄相关性黄斑变性的风险。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的方法,其中所述选择性腺苷A1激动剂为式I的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2,-CH2OH-或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH、或者-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);各个n独立地为1至5的整数。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的方法,其中所述选择性A1激动剂为下式的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-C3-C8单环环烷基、3-7元单环杂环或-C8-C12二环环烷基;并且
R2是-H或卤素。
18.根据权利要求17所述的方法,其中所述式I的化合物选自:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物B
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物C
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物D
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物E
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物F
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物G
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物H
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,和
化合物I
环戊基腺苷(CPA),
化合物J
2-氯环戊基腺苷(CCPA),
化合物K
环己基腺苷(CHA),
或其药学可接受的盐。
19.根据权利要求18所述的方法,其中所选的式I的化合物是:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;或其药学可接受的盐。
20.通过向受试者的眼施用包含有效量的选择性腺苷A1激动剂的药物组合物来预防、减轻或者治疗受试者的感光细胞损伤的方法。
21.根据权利要求20所述的方法,其中所述受试者患有年龄相关性黄斑变性或具有发展为年龄相关性黄斑变性的风险。
22.根据权利要求21所述的方法,其中所述受试者患有干性年龄相关性黄斑变性或具有发展为干性年龄相关性黄斑变性的风险。
23.根据权利要求20-22中任一项所述的方法,其中所述选择性腺苷A1激动剂为式I的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2、-CH2OH-或-CH2OSO3H;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-H、-C1-C10烷基、芳基、3-7元单环杂环、8-12元二环杂环、-C3-C8单环环烷基、-C3-C8单环环烯基、-C8-C12二环环烷基、-C8-C12二环环烯基、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-芳基;
R2是-H、卤素、-CN、-NHR4、-NHC(O)R4、-NHC(O)OR4、-NHC(O)NHR4、-NHNHC(O)R4、-NHNHC(O)OR4、-NHNHC(O)NHR4或-NH-N=C(R6)R7;
R4是-C1-C15烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-C≡C-(C1-C10烷基)或-C≡C-芳基;
R6是-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-亚苯基-(CH2)nCOOH或-亚苯基-(CH2)nCOO-(C1-C10烷基);
R7是-H、-C1-C10烷基、芳基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(3-7元单环杂环)、-(CH2)n-(8-12元二环杂环)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烷基)、-(CH2)n-(C3-C8单环环烯基)、-(CH2)n-(C8-C12二环环烯基)或-(CH2)n-(C8-C12二环环烷基);各个n独立地为1至5的整数。
24.根据权利要求20-23中任一项所述的方法,其中所述选择性A1激动剂为下式的化合物
或其药学可接受的盐,
其中,
A是-CH2ONO2;
B和C是-OH;
D是
A和B相对于彼此是反式结构;
B和C相对于彼此是顺式结构;
C和D相对于彼此是顺式或反式结构;
R1是-C3-C8单环环烷基、3-7元单环杂环或-C8-C12二环环烷基;并且
R2是-H或卤素。
25.根据权利要求24所述的方法,其中所述式I的化合物选自:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物B
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物C
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物D
((2R,3S,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(6-(四氢呋喃-3-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物E
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物F
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(二环-[2.2.1]-庚烷-2-基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,
化合物G
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硫酸钠,
化合物H
((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环己基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯,和
化合物I
环戊基腺苷(CPA),
化合物J
2-氯环戊基腺苷(CCPA),
化合物K
环己基腺苷(CHA),
或其药学可接受的盐。
26.根据权利要求25所述的方法,其中所选的式I的化合物是:
化合物A
((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)硝酸甲酯;或其药学可接受的盐。
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