CN107404924B - 氧化的右旋糖酐 - Google Patents

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Abstract

本文中披露了包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物。氧化的右旋糖酐化合物是通过在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N‑氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触来产生的。

Description

氧化的右旋糖酐
本申请要求(2015年4月3日提交的)美国临时申请号62/142,649的权益，该申请通过引用以其全文结合在此。
发明领域
本披露属于多糖衍生物领域。例如，本披露涉及氧化的右旋糖酐化合物及其制备方法。
以电子方式提交的序列表的引用
该序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交，文件名为“20160317_CL6422WOPCT_SequenceListingST25.txt”，创建于2016年3月17日，且具有164千字节大小，并与本说明书同时提交。包括在该ASCII格式的文件中的序列表是本说明书的一部分并且以其全文通过引用结合在此。
背景
由使用酶促合成或微生物遗传工程寻找新的结构多糖的愿望驱使，研究人员已经发现了可生物降解的多糖，并且所述多糖可以从可再生来源的原料经济地制得。一个这样的多糖类家族是α-葡聚糖，该α-葡聚糖是包含通过α-配糖键连接的葡萄糖单体的聚合物。
右旋糖酐代表一系列复杂的支链α-葡聚糖，所述α-葡聚糖通常包含α-1，6-连接的葡萄糖单体的链，具有通过α-1，3-键与直链连接的周期性侧链(分支)(约安(Ioan)等人，大分子(Macromolecules)33：5730-5739)。典型地，右旋糖酐的生产通过使用细菌(例如明串珠菌属(Leuconostoc)或链球菌属(Streptococcus)物种)的蔗糖发酵来进行，其中蔗糖用作右旋糖酐聚合的葡萄糖来源(内森斯(Naessens)等人，化学技术与生物技术杂志(J.Chem.Technol.Biotechnol.)80：845-860；萨尔瓦特(Sarwat)等人，国际生物科学杂志(Int.J.Biol.Sci.)4：379-386；Onilude等人，国际食品研究杂志(Int.Food Res.J.)20：1645-1651)。尽管鉴于在水中的高溶解度右旋糖酐在几种应用中被使用(例如，佐剂、稳定剂)，但是这种高溶解度可以负面地影响右旋糖酐在水状胶质应用中作为增稠剂的一般用途。
因此，研发新的右旋糖酐聚合物及其衍生物意义重大。这些类型的化合物，例如本文披露的化合物，在各种应用中具有潜在的用途。
发明概述
在一个实施例中，本披露涉及包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物，其中所述氧化的右旋糖酐化合物通过在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触来产生，其中所述右旋糖酐包含：(i)约87wt％-93wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.1wt％-1.2wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.1wt％-0.7wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约7.7wt％-8.6wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.4wt％-1.7wt％在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6；并且其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为约5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为约200-280nm。
在另一个实施例中，该右旋糖酐包含：(i)约89.5wt％-90.5wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.4wt％-0.9wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.3wt％-0.5wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约8.0wt％-8.3wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.7wt％-1.4wt％在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6。
在另一个实施例中，该右旋糖酐包含在分支结构内连接在一起的链，其中所述链在长度上相似并且主要包含α-1，6-糖苷键。在另一个实施例中，链的平均长度为约10-50个单体单元。
在另一个实施例中，该右旋糖酐是葡萄糖基转移酶的产物，该葡萄糖基转移酶包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：17具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在另一个实施例中，将右旋糖酐与高碘酸盐化合物接触。
在另一个实施例中，将右旋糖酐首先与高碘酸盐化合物接触，然后与N-氧代铵盐接触。
在另一个实施例中，N-氧代铵盐包含TEMPO氧代铵盐。在另一个实施例中，N-氧代铵盐包含4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。
在另一个实施例中，右旋糖酐与过氧化物化合物接触。在另一个实施例中，过氧化物化合物可以是过氧化氢。
在另一个实施例中，该组合物是家用产品、个人护理产品、工业产品、药物产品、或食物产品。在另一个实施例中，该组合物是洗涤剂组合物。例如，洗涤剂组合物优选为家用产品。
在另一个实施例中，本披露涉及用于生产氧化的右旋糖酐化合物的方法。该方法包括：在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触，其中所述右旋糖酐由N-氧代铵盐、高碘酸盐化合物和/或过氧化物化合物氧化，从而产生氧化的右旋糖酐化合物。在这种方法中使用的右旋糖酐可以是如本文所披露的，例如是在上述实施例中所披露的。通过该方法生产的氧化的右旋糖酐化合物可以任选地被分离。
在该方法的另一个实施例中，将右旋糖酐与高碘酸盐接触。在另一个实施例中，右旋糖酐首先与高碘酸盐化合物接触，然后与N-氧代铵盐接触。
在该方法的另一个实施例中，N-氧代铵盐包含TEMPO氧代铵盐。在另一个实施例中，N-氧代铵盐包含4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。在另一个实施例中，通过在水性条件下氧化包含TEMPO的试剂，在该方法中提供TEMPO氧代铵盐或4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。在另一个实施例中，包含TEMPO的试剂为4-乙酰胺基-TEMPO。
在该方法的另一个实施例中，右旋糖酐与过氧化物化合物接触。在另一个实施例中，过氧化物化合物可以是过氧化氢。
在另一个实施例中，该方法的水性条件是酸性或碱性的。
在另一个实施例中，本披露涉及制备具有增加的助洗剂能力和/或抗再沉积能力的水性组合物的方法。该方法包括：使根据本披露生产的氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物接触，其中与接触步骤之前存在的水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力相比，氧化的右旋糖酐化合物增加了该水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力。
在另一个实施例中，本披露涉及一种处理材料的方法。该方法包括使材料与包含此处所披露的氧化的右旋糖酐化合物的水性组合物接触。
附图和序列的简述
图1：通过包含100g/L蔗糖和0768gtf(SEQ ID NO：1)的葡萄糖基转移酶反应对蔗糖消耗进行的HPLC分析。参考实例2。
图2A：用于在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中表达2919gtf(SEQ ID NO：5)的质粒pZZHB583的图谱。参考实例3。
图2B：用于在枯草芽孢杆菌中表达2918gtf(SEQ ID NO：9)的质粒pZZHB582的图谱。参考实例4。
图2C：用于在枯草芽孢杆菌中表达2920gtf(SEQ ID NO：13)的质粒pZZHB584的图谱。参考实例5。
图2D：用于在枯草芽孢杆菌中表达2921gtf(SEQ ID NO：17)的质粒pZZHB585的图谱。参考实例6。
图3：通过包括可商购的右旋糖酐蔗糖酶的反应对蔗糖消耗进行的HPLC分析。参考实例7。
表1.核酸和蛋白质SEQ ID号的总结
Figure BDA0001420912630000051
Figure BDA0001420912630000061
详细说明
在此引用的所有专利和非专利文献的披露内容以其全文通过引用结合在此。
除非另有披露，否则本文所使用的术语“一个/一种”(a和an)旨在涵盖引用特征的一个/种或多个/种(即至少一个/种)。
在存在的情况下，所有范围是包含性的和可组合的，除非另有说明。例如，当列举“1至5”的范围时，所列举的范围应解释为包括“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等范围。
本文中术语“葡聚糖”是指通过糖苷键(glucosidic linkage)连接的D-葡萄糖单体的多糖，糖苷键是配糖键(glycosidic linkage)的一种类型。本文中“α-葡聚糖”是指成分D-葡萄糖单体为α-D-葡萄糖单体的葡聚糖。
术语“右旋糖酐”、“右旋糖酐聚合物”、“右旋糖酐化合物”等在本文中可互换地使用，并且是指通常主要(大部分)包含α-1，6-连接的葡萄糖单体的链的复杂的、支链α-葡聚糖，其中侧链(分支)主要由α-1，3-键连接。本文中术语“凝胶化右旋糖酐”是指本文披露的一种或多种右旋糖酐(i)在酶促右旋糖酐合成过程中以及任选地(ii)当这种合成的右旋糖酐被分离(例如，＞90％纯度)然后被置于水性组合物中时形成粘稠溶液或凝胶样组合物的能力。
本文中右旋糖酐“长链”可以“主要[或大部分]包含α-1，6-糖苷键”，这意味着所述长链在一些方面可以具有至少约98.0％的α-1，6-糖苷键。本文中右旋糖酐可以在一些方面包含“分支结构”(支链结构)。预期在这种结构中，长链可能以迭代的方式从其他长链分支出(例如，长链可以是来自另一个长链的分支，其反过来可以本身是来自另一个长链的分支，等等)。预期在这种结构中的长链可以是“长度相似”，这意味着分支结构中所有长链的至少70％的长度(DP[聚合度])是在分支结构的所有长链的平均长度的正/负30％内。
在一些实施例中，右旋糖酐还可以包含从长链分支出的“短链”，典型地长度为一至三个葡萄糖单体，并且包含少于右旋糖酐聚合物的所有葡萄糖单体的约10％。典型地，这样的短链包含α-1，2-、α-1，3-和/或α-1，4-糖苷键(据信，在一些方面，也可以在长链中存在小百分比的这种非α-1，6键)。
术语“配糖键”(glycosidic linkage和glycosidic bond等)在本文可互换使用并且是指将碳水化合物分子彼此连接的共价键。术语“糖苷键”(glucosidic linkage和glucosidic bond等)在本文可互换使用并且是指两个葡萄糖分子之间的配糖键。如本文中所使用，术语“α-1，6-糖苷键”是指通过在相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和碳6将α-D-葡萄糖分子彼此连接的共价键。如本文中所使用，术语“α-1，3-糖苷键”是指通过在相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和碳3将α-D-葡萄糖分子彼此连接的共价键。如本文中所使用，术语“α-1，2-糖苷键”是指通过在相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和碳2将α-D-葡萄糖分子彼此连接的共价键。如本文中所使用，术语“α-1，4-糖苷键”是指通过在相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和碳4将α-D-葡萄糖分子彼此连接的共价键。本文中，“α-D-葡萄糖”将被称为“葡萄糖”。本文披露的所有糖苷键都是α-糖苷键，除了另有说明的情况。
本文中，“在位置1和6处连接的葡萄糖(葡萄糖单体)”是指其中只有葡萄糖单体的碳1和碳6涉及各自与两个相邻葡萄糖单体的糖苷键的右旋糖酐的葡萄糖单体。该定义同样适用于(i)“在位置1和3处连接的”、和(ii)“在位置1和4处连接的”葡萄糖，相应地，将在每个各自的键中涉及的不同碳位置考虑在内。
本文中，“在位置1、3和6处连接的葡萄糖(葡萄糖单体)”是指其中葡萄糖单体的碳1、碳3和碳6涉及各自与三个相邻葡萄糖单体的糖苷键的右旋糖酐的葡萄糖单体。仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖是分支点。该定义同样适用于(i)在位置1、2和6处、和(ii)在位置1、4和6处连接的葡萄糖，但因此将在每个各自的键中涉及的不同碳位置考虑在内。
本文中葡萄糖位置(葡萄糖碳位置)1、2、3、4和6在本领域中是已知的(在以下结构中描述)：
Figure BDA0001420912630000081
本文中右旋糖酐的配糖键谱图可以使用本领域已知的任何方法确定。例如，可以使用采用核磁共振(NMR)光谱(例如13C NMR或1H NNR)的方法确定键谱图。可以使用的这些和其他方法披露于食品碳水化合物：化学、物理性质和应用(崔(S.W.Cui)，编辑，第3章，崔(S.W.Cui)，多糖的结构分析(Structural Analysis of Polysaccharides)，泰勒与弗朗西斯基团有限公司(Taylor&Francis Group LLC)，佛罗里达州波卡拉顿(Boca Raton，FL)，2005)中，其通过引用结合在此。
本文中，术语“蔗糖”是指由α-1，2-配糖键连接的α-D-葡萄糖分子和β-D-果糖分子构成的非还原性二糖。通常，蔗糖被称为食用糖。
本文中右旋糖酐或氧化的右旋糖酐糖的“分子量”可以表示为数均分子量(Mn)或重均分子量(Mw)，其单位为道尔顿或克/摩尔。可替代地，分子量可以表示为DPw(重均聚合度)或DPn(数均聚合度)。用于计算这些分子量测量的各种方法在本领域中是已知的，例如采用高压液相色谱法(HPLC)、尺寸排阻色谱法(SEC)或凝胶渗透色谱法(GPC)。
本文中，术语“回转半径”(Rg)是指右旋糖酐的平均半径，并且将其计算为右旋糖酐分子的组分(原子)与分子重心的均方根距离。例如，Rg能以埃或纳米(nm)为单位提供。本文中，右旋糖酐的“z-平均回转半径”是指如使用光散射(例如MALS)测量的右旋糖酐的Rg。用于测量z-平均Rg的方法是已知的，并且相应地可以在本文中使用。例如，z-平均Rg可以如在以下文献中所披露的进行测量：美国专利号7531073、美国专利申请公开号2010/0003515和2009/0046274，怀亚特(Wyatt)(分析化学学报(Anal.Chim.Acta)272：1-40)，以及莫里(Mori)和巴斯(Barth)(尺寸排阻色谱法(Size Exclusion Chromatography)，施普林格出版社(Springer-Verlag)，柏林(Berlin)，1999)，其全部通过引用结合在此。
术语“葡萄糖基转移酶”、“gtf酶”、“gtf酶催化剂”、“gtf”、“葡聚糖蔗糖酶”等在本文中可互换地使用。本文中gtf酶的活性催化底物蔗糖的反应以制得产物葡聚糖和果糖。产生右旋糖酐(葡聚糖的一种类型)的gtf酶也可以称为右旋糖酐蔗糖酶。Gtf反应的其他产物(副产物)可以包括葡萄糖(其中葡萄糖从葡糖基-gtf酶中间体复合物水解)，并且各种可溶性寡糖(例如DP2-DP7)例如明串珠菌二糖、葡萄糖基转移酶的野生型形式通常含有(在N-末端至C-末端方向上)信号肽、可变结构域、催化结构域和葡聚糖结合结构域。根据CAZy(碳水化合物活性酶)数据库(康塔雷尔(Cantarel)等人，核酸研究(Nucleic Acids Res.)37：D233-238，2009)，将本文的gtf分类在糖苷水解酶家族70(GH70)下。
术语“葡萄糖基转移酶催化结构域”和“催化结构域”在本文中可互换地使用，并且是指向葡萄糖基转移酶提供葡聚糖生产活性的葡萄糖基转移酶的结构域。
术语“gtf反应”、“gtf反应溶液”、“葡萄糖基转移酶反应”、“酶促反应”、“右旋糖酐合成反应”、“右旋糖酐反应”等在本文可互换地使用，并且是指由葡萄糖基转移酶进行的反应。如本文中所使用，gtf反应通常是指最初包含至少一种活性葡萄糖基转移酶(在含蔗糖和水的溶液中)、以及任选地其他组分的反应。在其已经开始后可以存在于gtf反应中的其他组分包括果糖、葡萄糖、可溶性寡糖(例如DP2-DP7)例如明串珠菌二糖和右旋糖酐产物。在gtf反应中，进行了使水、蔗糖和葡萄糖基转移酶接触的步骤。如本文中所使用，术语“在合适的gtf反应条件下”是指支持经由葡萄糖基转移酶活性将蔗糖转化为右旋糖酐的gtf反应条件。本文的gtf反应不是天然发生的。
如本文中所使用，“对照”gtf反应可以是指使用葡萄糖基转移酶的反应，所述葡萄糖基转移酶不包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：17具有至少90％同一性的氨基酸序列。对照反应溶液的所有其他特征(例如，蔗糖浓度、温度、pH、时间)可以其与之进行比较的反应的那些相同。
gtf反应的“干固体百分比”是指gtf反应中所有糖的wt％。例如，可以基于用于制备反应物的蔗糖的量来计算gtf反应的干固体百分比。
由本文的gtf反应产生的右旋糖酐的“产率”表示在反应中转化的被表达为蔗糖底物的重量百分比的右旋糖酐产物的重量。例如，如果将反应溶液中的100g蔗糖转化成产物，并且10g产物是右旋糖酐，那么右旋糖酐的产率为10％。该产率计算可以被认为是反应对右旋糖酐的选择性的量度。
术语“多核苷酸”、“多核苷酸序列”和“核酸序列”在本文可互换地使用。这些术语涵盖核苷酸序列等。多核苷酸可以是单链或双链的DNA或RNA的聚合物，其任选地包含合成的、非天然的或改变的核苷酸碱基。多核苷酸可以由cDNA、基因组DNA、合成DNA或其混合物的一个或多个区段组成。
如本文中所使用，关于多核苷酸或多肽序列的术语“序列同一性”或“同一性”是指在两个序列中的核酸碱基或氨基酸残基当在指定的比较窗口上比对最大对应度时是相同的。如本文中所使用，“序列同一性百分比”或“百分比同一性”是指通过在比较窗口上比较两个最佳比对的序列所确定的值，其中与参比序列(其不包含添加或缺失)比较两个序列的最佳比对时，该多核苷酸或多肽序列在比较窗口中的部分可以包含添加或缺失(即空位)。通过以下方式计算该百分比：确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数目以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置的总数目，然后将该结果乘以100以产生序列同一性百分比。应当理解的是，当计算DNA序列和RNA序列之间的序列同一性时，DNA序列的T残基与RNA序列的U残基比对，并且可以被认为与其“一致”。出于确定第一和第二多核苷酸的百分比互补性的目的，可以通过确定(i)第一多核苷酸和第二多核苷酸的补体序列之间的百分比同一性(或反之亦然)，例如和/或(ii)将产生规范的沃森和克里克碱基对的第一和第二多核苷酸之间的碱基百分比来获得。
可以使用在美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站上在线获得的基本局部比对搜索工具(BLAST)，例如，来测量在两个或更多个多核苷酸序列(BLASTN算法)或多肽序列(BLASTP算法)之间的百分比同一性。可替代地，使用Clustal算法(例如，ClustalW、ClustalV或Clustal-欧米加)可以进行序列之间的百分比同一性比对。对于使用Clustal比对方法的多重比对，默认值可以对应于空位罚分(GAP PENALTY)＝10和空位长度罚分(GAPLENGTH PENALTY)＝10。使用Clustal方法进行逐对比对和蛋白质序列的百分比同一性计算的默认参数可以是KTUPLE＝1、空位罚分＝3、窗口(WINDOW)＝5、以及存储的对话框(DIAGONALS SAVED)＝5。对于核酸，这些参数可以是KTUPLE＝2、空位罚分＝5、窗口＝4、以及存储的对话框＝4。仍可替代地，序列之间的百分比同一性可以使用BLOSUM矩阵(例如，BLOSUM62)，使用具有参数例如空位开始(GAP OPEN)＝10、空位延伸(GAP EXTEND)＝0.5、最终空位罚分(END GAP PENALTY)＝错误(false)、最终空位开始(END GAP OPEN)＝10、最终空位延伸(END GAP EXTEND)＝0.5的EMBOSS算法(例如，needle)来执行。
作为某些实施例的特征，本文披露了各种多肽氨基酸序列和多核苷酸序列。可以使用与本文披露的序列具有至少约70％-85％、85％-90％、或90％-95％同一性的这些序列的变体。可替代地，变体氨基酸序列或多核苷酸序列可以与本文披露的序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。变体氨基酸序列或多核苷酸序列可以具有与所披露的序列的相同的功能/活性，或具有所披露的序列的功能/活性的至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％的功能/活性。
术语“氧化的右旋糖酐化合物”、“氧化的右旋糖酐衍生物”、“氧化的右旋糖酐”等在此可互换使用。本文中的氧化的右旋糖酐化合物是由右旋糖酐的葡萄糖单体单元的一个或多个羟基氧化而得到的化合物。这种氧化可以独立地将这些羟基中的每一个转化成醛、酮或羧基。例如，在本文中，在水性条件下，右旋糖酐可以通过与一种或多种氧化剂(oxidizing/oxidation agent)(例如，N-氧代铵盐、高碘酸盐化合物和/或过氧化物化合物)接触而被氧化。据信，如本文所披露的氧化的右旋糖酐，如果需要，也可以通过应用其他氧化方法来制备，例如加拿大专利公开号2028284和2038640，以及美国专利号4985553、2894945、5747658和7595392中所披露的方法，其全部内容通过引用结合在此。
本文所用的术语“氧化的”表征为其中电子已经被除去的化合物或化合物中的原子。本文中的右旋糖酐中的葡萄糖单体单元(位置6)中的伯醇基团(R-CH2-OH)的碳(例如，在其中葡萄糖可通过α-1，2-、α-1，3-或α-1，4-糖苷键连接的侧链中)可被氧化成醛(R-CHO)或羧酸(R-COOH)。本文中的右旋糖酐的葡萄糖单体单元中的仲醇基(R1R2CH-OH)的碳可被氧化成酮(R1R2CH＝OH)。可替代地，本文中的右旋糖酐的葡萄糖单体单元中的仲醇基团(R1R2CH-OH)可以被氧化成醛或羧酸基团，在这种情况下右旋糖酐的葡萄糖单体环单元打开(即不再为环状的)。
本文中的“用于氧化右旋糖酐的试剂”(和类似术语)可以包括例如N-氧代铵盐、高碘酸盐和/或过氧化物化合物。
术语“N-氧代铵盐”和“氧代铵盐”在本文中可互换使用。本文中的N-氧代铵盐是指以下结构：
Figure BDA0001420912630000131
其中R1和R2各自表示相同或不同的有机基团(例如直链或支链碳链)，并且X-是平衡离子。可替代地，R1和R2各自可以是与N+结合的相同基团的一部分，在这种情况下，N+是环结构的一部分。本文中具有环结构的N-氧代铵盐(即，“环状N-氧代铵盐”)的实例是TEMPO氧代铵盐。
本文中术语“TEMPO氧代铵盐”是指以下结构：
Figure BDA0001420912630000141
其中每个Me表示甲基，并且X-是平衡离子。包含TEMPO氧代铵盐的N-氧代铵盐的实例是4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。
术语“4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐”、“4-酰亚氨基-TEMPO氧代铵盐”等在本文中可互换使用。在本文中，4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐是指以下结构：
Figure BDA0001420912630000142
其中每个Me表示甲基，并且X-是平衡离子。
本文中“包含TEMPO的试剂”是指包含2，2，6，6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)的试剂/化合物。TEMPO具有以下结构：
Figure BDA0001420912630000143
包含TEMPO的试剂的实例是TEMPO本身和4-乙酰胺基-TEMPO。“4-乙酰胺基-TEMPO”(或可替代地称为“4-酰亚氨基-TEMPO”)具有以下结构：
Figure BDA0001420912630000151
包含TEMPO的试剂可被氧化成其相应的N-氧代铵盐。例如，TEMPO可被氧化成TEMPO氧代铵盐，并且4-乙酰胺基-TEMPO可被氧化成4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。因此，在如本文所披露的氧化反应中，可以使用“N-氧代铵盐的前体”如TEMPO或4-乙酰胺基-TEMPO来提供N-氧代铵盐。
术语“高碘酸盐”、“高碘酸盐化合物”等在本文中可互换使用，并且是指含有一价阴离子IO-的高碘酸的盐。本文中高碘酸盐的一个实例是高碘酸钠(例如，偏高碘酸钠[NaIO4])。
术语“过氧化物”、“过氧化物化合物”等在本文中可互换使用，并且是指含有氧-氧(O-O)单键或过氧化物阴离子(O2 -2)的化合物。O-O基团被称为过氧化物基团(过氧基)。过氧化氢(H2O2)是本文中的过氧化物化合物的实例。
术语“氧化反应”、“氧化反应制备”、“氧化反应组成”等在本文中可互换使用，并且是指至少包含右旋糖酐和N-氧代铵盐、高碘酸盐和/或过氧化物的在水性条件下的反应。鉴于本文披露的右旋糖酐和氧化的右旋糖酐化合物可溶于水性组合物中，本文的反应制备通常以溶液的形式开始和结束。氧化反应是在合适条件(例如时间、温度、pH)下针对N-氧代铵盐、高碘酸盐和/或过氧化物进行，以氧化右旋糖酐的葡萄糖单体单元的一个或多个羟基，从而产生氧化的右旋糖酐化合物。
术语“水性条件”、“水性反应条件”、“水性设置”、“水性体系”等在本文中可互换使用。本文中的水性条件是指其中溶剂为例如至少约60wt％的水的溶液或混合物。本文中的氧化反应可以在水性条件下进行。例如，水性条件可以是酸性或碱性的。
术语“酸性”、“酸性条件”、“酸性水性条件”等在本文中可互换使用。本文中的酸性条件可以指例如5.5或更低的pH的溶液或混合物。酸性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加乙酸和/或乙酸盐。
术语“碱的(basic)”、“碱性条件”、“碱性水性条件”、“碱性(alkaline)”等在本文中可互换使用。本文中的碱性条件可以指例如8.5或更高的pH的溶液或混合物。碱性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加氢氧化钠进行。
本文中“水性组合物”具有例如包含至少约10wt％的水的液体组分。水性组合物的实例包括例如混合物、溶液、分散体(例如胶体分散体)、悬浮液和乳液。某些实施例中的水性组合物包含(i)溶解在水性组合物中(即溶液中)的，或(ii)不溶于水性组合物(例如作为胶体分散体存在)的氧化的右旋糖酐。
如本文中所使用，术语“胶体分散体”是指具有分散相和分散介质的异相系统，即微观上分散的不溶性颗粒(例如本文中的氧化的右旋糖酐的一些形式)全部悬浮在另一种物质(例如水性组合物例如水或水性溶液)中。本文中胶体分散体的实例是水状胶体。胶体分散体例如水状胶体的全部或一部分微粒可以包含本披露的某些氧化的右旋糖酐化合物。术语“分散剂(dispersant)”和“分散药剂(dispersion agent)”在本文可互换地使用，是指促进分散体的形成和/或稳定的材料。
术语“水状胶体(hydrocolloid)”和“水凝胶(hydrogel)”在本文可互换地使用。水状胶体是指水或水溶液于其中是分散介质的胶体系统。
本文中，术语“水性溶液”是指其中溶剂包含水的溶液。在本文某些方面，水性溶液可以用作分散剂。在某些实施例中，氧化的右旋糖酐化合物可以溶解、分散或混合在水性溶液中。
如本文中所使用，术语“粘度”是指流体或水性组合物抵抗趋于导致其流动的力的程度的量度。本文中可以使用的各种粘度单位包括厘泊(cPs)和帕斯卡秒(Pa·s)。一泊等于0.100kg·m-1·s-1或1mPa·s。因此，如本文中所使用，术语“粘度调节剂”和“粘度改性剂”是指可以改变/改性流体或水性组合物的粘度的任何物质。
如本文中所使用，术语“剪切稀化行为”是指随着剪切速率增加水性组合物的粘度降低。如本文中所使用，术语“剪切增稠行为”是指随着剪切速率增加水性组合物的粘度增加。本文中“剪切速率”是指对水性组合物应用渐进剪切变形的速率。例如，可以旋转地应用剪切变形。
关于提高水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力的方法，本文所用的术语“接触”是指使水性组合物与至少一种在此处披露的氧化的右旋糖酐化合物结合在一起的任何作用。可以通过本领域已知的任何方式进行接触，例如像混合、振荡或均质化。
术语“织物”、“纺织品”、“布”等在本文可互换地使用，是指具有天然和/或人造纤维网络的编织材料。这种纤维可以是例如丝线或纱线的形式。
本文中“织物护理组合物”是适合用于以某种方式处理织物的任何组合物。这种组合物的实例包括衣物洗涤剂和织物柔软剂。
术语“重垢洗涤剂”、“通用洗涤剂”等在本文可互换地使用，是指可用于在任何温度下常规洗涤白色和有色纺织品的洗涤剂。术语“轻垢洗涤剂”、“细薄织物洗涤剂”等在本文可互换地使用，以指代可用于护理精细织物例如粘胶纤维、羊毛、丝绸、超细纤维或需要特别护理的其他织物的洗涤剂。“特别护理”可以包括例如使用过量水、低搅拌和/或不漂白的条件。
典型地，本文“洗涤剂组合物”包含至少一种表面活性剂(洗涤剂化合物)和/或至少一种助洗剂。本文中“表面活性剂”是指倾向于降低物质溶解的液体的表面张力的物质。表面活性剂可以用作例如洗涤剂、润湿剂、乳化剂、发泡剂和/或分散剂。
本文中的术语“助洗剂(builder)”、“助洗剂(builder agent)”等是指例如氧化的右旋糖酐的组合物，其例如可与硬水阳离子如钙和镁阳离子复合。据信，此类复合物形式可防止阳离子形成水不溶性盐。尽管不意图被认为适用于任何特定的理论，但据信，在本文中氧化的右旋糖酐通过阳离子螯合(螯合作用)或阳离子交换来调配助洗剂活性。在用于清洁应用的洗涤剂组合物的上下文中，添加到其中的助洗剂通常可以增强或保持洗涤剂组合物中存在的表面活性剂的清洁效率。术语“助洗剂能力”、“助洗剂活性”等在本文中可互换使用，并且是指水性组合物显示由水性组合物中存在的一种或多种助洗剂(例如氧化的右旋糖酐)赋予的特征的能力。
术语“抗再沉积剂”、“抗污垢再沉积剂”、“抗变灰剂”等是指在这些污垢被去除之后有助于阻止污垢重新沉积到在衣物洗涤水中的衣物上的试剂，因此防止衣物变灰/变色。抗再沉积剂可以通过帮助将污垢分散在洗涤水中和/或通过阻止污垢粘附在织物表面上起作用。
本文中“口腔护理组合物”是适合用于处理口腔中的软或硬表面(例如牙齿(dental或teeth)和/或牙龈表面)的任何组合物。
本文中术语“吸附”是指化合物(例如，本文的氧化的右旋糖酐)粘附到材料的表面上。
术语“纤维酶(cellulase)”、“纤维素酶(cellulase enzyme)”等在本文可互换地使用，是指水解纤维素中的β-1，4-D-糖苷键的酶，从而部分或完全降解纤维素。可替代地，纤维素酶可以是指例如“β-1，4-葡聚糖酶”，并且可以具有内切纤维素酶活性(EC3.2.1.4)、外切纤维素酶活性(EC 3.2.1.91)或纤维二糖酶活性(EC 3.2.1.21)。“纤维素”是指具有β-1，4-连接的D-葡萄糖单体单元的直链的不溶性多糖。
术语“体积百分比”(percent by volume和volume percent)、“vol％”、“v/v％”等在本文可互换地使用。在溶液中溶质的体积百分比可以使用以下公式确定：[(溶质体积)/(溶液体积)]×100％。
术语“重量百分比”、“重量百分数(weight percentage，wt％)”、“重量-重量百分数(weight-weight percentage，％w/w)”等在本文可互换地使用。按重量计百分比是指当材料被包含在组合物、混合物或溶液中时该材料在质量基础上的百分比。
如本文中所使用，术语“增加”可以是指比该增加的量或活性与之进行比较的量或活性多至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、50％、100％、或200％的量或活性。术语“增加的”、“提高的”、“增强的”、“大于”、“改进的”等在本文可互换地使用。
本文所用的术语“分离的”是指完全或部分纯化的材料(例如氧化的右旋糖酐)。本披露的氧化的右旋糖酐化合物是合成的人造化合物。据信，此类化合物(i)在自然界中不出现，和/或(ii)具有不会自然出现的性质。
研发新的右旋糖酐聚合物及其氧化的衍生物意义重大。这些类型的化合物，例如本文披露的化合物，在各种应用中具有潜在的用途。
本披露的实施例涉及包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物，该氧化的右旋糖酐化合物是通过在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物接触而产生的，其中所述右旋糖酐包含：
(i)约87wt％-93wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii)约0.1wt％-1.2wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii)约0.1wt％-0.7wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv)约7.7wt％-8.6wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；
(v)约0.4wt％-1.7wt％在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6；以及
(vi)具有约0.0025至约3.0的至少一个有机基团的取代度(DoS)；
其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为约5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为约200-280nm。
因此，披露了氧化的右旋糖酐。此类化合物通常可溶于水性组合物中，并且可以例如用于向洗涤剂组合物提供助洗剂活性和/或抗再沉积活性。
本文中的氧化的右旋糖酐化合物是由右旋糖酐的葡萄糖单体单元的一个或多个羟基氧化而得到的化合物。此类氧化可以例如在全部或至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％(或60％至100％之间的任意整数)的右旋糖酐的组成葡萄糖单体单元中发生。
据信，本文的右旋糖酐的葡萄糖单体单元的伯醇基团发生的氧化将羟基转化成醛或羧基。通常，增强的氧化条件(例如，增加的氧化反应时间和/或N-氧代铵盐的量)可能导致伯醇基团转化为羧基，而较弱的氧化条件可导致伯醇基团转化为醛基。鉴于当前披露的右旋糖酐的结构，可预期伯醇基团的氧化事件主要发生在侧链内，其可以包含α-1，2-、α-1，3-和/或α-1，4-糖苷键(此类连接的葡萄糖单元将具有代表伯醇基团的6位羟基。本文中右旋糖酐主链的葡萄糖单元大部分是α-1，6-连接的，因此在位置6处很少具有或不具有羟基(即，几乎没有或没有伯醇基团)。
据信，在本文中的右旋糖酐的葡萄糖单体单元的仲醇基团处发生的氧化将羟基转化为酮、醛或羧基。通常，增强的氧化条件(例如，增加的氧化反应时间和/或N-氧代铵盐的量)可导致仲醇基团转化为羧基。较弱的氧化条件可导致仲醇基团转化为醛基或酮基，其均比羧基氧化程度小。
将右旋糖酐的葡萄糖单体单元的仲醇基团氧化成醛基或羧酸基团将打开葡萄糖单体环(即，葡萄糖单元将不再是环状的)。此类开环可归因于碳-碳键的破坏。将右旋糖酐的仲醇基团氧化成醛和/或羧基可以产生氧化的右旋糖酐产物，其中例如全部或至少约50％、60％、70％、80％或90％(或在50％和100％之间的任意整数)的右旋糖酐的组成葡萄糖单体环单元已经打开。通常，当通过氧化打开更多的葡萄糖单体环单元时，氧化产物的分子量降低，因为开环事件带来的聚合物分裂(分解)的可能性增加。
本文的氧化的右旋糖酐化合物是，例如通过使此处披露的右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐接触产生的。在某些实施例中，N-氧代铵盐包含TEMPO氧代铵盐。此类N-氧代铵盐的实例包括TEMPO氧代铵盐本身(结构II)和4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐(结构III)。结构II包含在结构III中。
注意既然结构II和III是环状的，本文中的N-氧代铵盐可以是“环状N-氧代铵盐”(或“环状氧代铵盐”)。本文中的环状N-氧代铵盐可以由以下结构表示：
Figure BDA0001420912630000211
其中每个Me表示甲基基团，X-是平衡离子，并且R是氢(H)、乙酰胺基基团(-NH-CO-CH3)、羟基(-OH)、氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、甲氧基(-OCH3)、氰基(-CN)、氧代(＝O)、膦酰基氧基[-O-PO(OH)2]、乙酰氧基(-O-CO-CH3)、苯甲酸基、乙酰胺基、马来酰亚胺基或异硫氰酸基。可以理解的是，当结构VI中的R为H时，环状N-氧代铵盐为TEMPO氧代铵盐。其中R是除H之外的部分的结构VI的实例表示在碳位置4(其中结构VI中的N+在环中的位置为1)处发生了取代的TEMPO氧代铵盐。例如，当R为乙酰胺基时，结构VI的环状N-氧代铵盐为4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。因此，例如，本文中的N-氧代铵盐可以是在碳位置4(其中TEMPO氧代铵盐的环中的N+的位置为1)处具有取代的TEMPO氧代铵盐。
在某些实施例中可以通过在TEMPO氧代铵盐与右旋糖酐接触的水性条件下氧化包含TEMPO的试剂来提供TEMPO氧代铵盐。包含TEMPO的试剂是包含结构IV的试剂/化合物。包含TEMPO的试剂的实例是TEMPO本身(结构IV)和4-乙酰胺基-TEMPO(结构V)。包含TEMPO的试剂的其他实例可以由以下结构表示：
Figure BDA0001420912630000221
其中每个Me表示甲基基团，并且R是氢(H)、乙酰胺基基团(-NH-CO-CH3)、羟基(-OH)、氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、甲氧基(-OCH3)、氰基(-CN)、氧代(＝O)、膦酰基氧基[-O-PO(OH)2]、乙酰氧基(-O-CO-CH3)、苯甲酸基、乙酰胺基、马来酰亚胺基或异硫氰酸基。如结构VI所示，这些试剂中的每一种都可以通过在水性条件下与一种或多种氧化剂接触而转化成其相应的氧代铵盐。因此，结构VI也可以被认为是N-氧代铵盐的前体。TEMPO及其衍生物，例如上述(例如4-乙酰胺基-TEMPO)是环状硝酰基化合物的实例。因此，环状硝酰基化合物可用于提供本文中的TEMPO氧代铵盐。
通过使试剂与一种或多种“氧化剂(oxidation agents)”(或“氧化剂(oxidant)”)接触，包含TEMPO的试剂可以在本文的水性条件下被氧化成其相应的氧代铵盐。该接触可以在与右旋糖酐与N-氧代铵盐接触的相同水性条件下进行。在一些实施例中，本文中用于氧化右旋糖酐的反应最初可以制备成在水性条件下包含至少右旋糖酐、包含TEMPO(例如结构VII)的试剂和一种或多种氧化剂。该一种或多种氧化剂可以将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐(例如结构VI)，其反过来又可以氧化右旋糖酐。
氧化剂的非限制性实例包括一种或多种“无机氧化剂(inorganic oxidationagents)”(或“无机氧化剂(inorganic oxidant)”)。因为此类化合物含有有机成分(例如参照结构I-III)，本文中的无机氧化剂不是氧代铵盐，例如TEMPO氧代铵盐。可用于将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐的氧化剂的实例包括一种或多种岩盐(例如亚氯酸盐，像亚氯酸钠[NaClO2])或次卤酸盐(例如，次氯酸盐，像次氯酸钠[NaClO])。可用于将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐的氧化剂(无机或有机)的其他实例包括卤化物盐如KCl、KBr、NaCl、NaBr或NaI，次卤酸盐如NaOBr，金属如Fe(III)、Mn(II)、Mn(III)或Cu(II)，KMnO4，Mn(OAc)3，Mn2O3，MnO2，Mn(NO3)2，MgCl2，Mg(OAc)2或Cu(NO3)2，二乙酸碘苯[PhI(OAc)2]，Ca(ClO)2，t-BuOCl，CuCl-O2，NaBrO2，Cl2，Br2和三氯异氰尿酸中的一种或多种。
本文的氧化的右旋糖酐化合物是，例如通过使此处披露的右旋糖酐与至少一种高碘酸盐化合物接触产生的。高碘酸盐化合物可以是例如高碘酸金属盐(例如高碘酸钠或高碘酸钾)。在一些方面，高碘酸盐化合物可以是偏高碘酸盐(例如NaIO4)或原过碘酸盐。用高碘酸盐化合物氧化右旋糖酐的条件可以遵循美国专利号3086969、6800753、5747658和/或6635755中所披露的那些条件，这些专利全部在此通过引用并入本文；和/或遵循例如下文实例10和11中所披露的条件。
在本文的一些方面，氧化的右旋糖酐化合物是通过首先使右旋糖酐与高碘酸盐化合物接触，然后将高碘酸盐氧化的右旋糖酐与N-氧代铵盐接触来生产。这样一种顺序氧化处理可以遵循本文披露的任何方法，例如以下实例11。
例如，在本文中，右旋糖酐化合物可以通过使右旋糖酐与至少一种过氧化物化合物接触来生产。例如，过氧化物化合物可以是过氧化氢。在一些方面，过氧化物化合物可以是无机过氧化物化合物或有机过氧化物化合物。本文中合适的过氧化物化合物还包括例如过硼酸盐-一水合物、过硼酸盐-四水合物、过碳酸盐、碱性过硫酸盐、过硅酸盐和过柠檬酸盐(其中钠或钙是优选的阳离子)、以及脲或氧化胺的过氧化氢加合物。
在本文的一些方面，氧化的右旋糖酐化合物是通过首先使右旋糖酐与过氧化物化合物接触，然后将过氧化物氧化的右旋糖酐与N-氧代铵盐接触来生产。
在某些实施例中，在不存在螯合剂(例如EDTA)的情况下，右旋糖酐可以与过氧化物化合物接触，而在其他实施例中任选地可以螯合剂存在下进行该接触。
在本文披露的用于氧化右旋糖酐的反应中使用水性条件。本文中的水性条件是指其中溶剂为至少约60wt％的水的溶液或混合物。可替代地，本文的水性条件例如为至少约65wt％、70wt％、75wt％、80wt％、85wt％、90wt％或95wt％(或60wt％至95wt％之间的任何整数值)的水。本文中的水性条件可以包含在合适的浓度下的缓冲液，例如酸性、中性或碱性缓冲液，并且基于由缓冲液提供的pH范围进行选择。缓冲液的实例包括柠檬酸、乙酸、KH2PO4、CHES和硼酸盐。
本文中的水性条件可以是酸性的，例如具有5.5或更低的pH。可替代地，pH可为例如约2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0或5.5。酸性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加乙酸和/或乙酸盐。例如，乙酸钠缓冲液(乙酸盐缓冲液)(Ph4-5)(例如0.2-0.3M溶液)可提供酸性条件。
本文中的水性条件可以是碱性的，例如具有8.5或更高的pH。可替代地，pH可为例如约8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5或12。碱性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加碱性氢氧化物(例如氢氧化钠)。
例如，在氧化反应中，反应物可以包括例如约或至少约0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％或12wt％的本文的右旋糖酐。在将含有高碘酸盐化合物、过氧化物化合物、TEMPO和/或氧化剂(将包含TEMPO的试剂转化为其相应的氧代铵盐)的试剂添加到水性条件中之前或之后，可以在水性条件下将右旋糖酐混合或溶解。在这些具体实施例中，氧化剂可以是例如亚氯酸钠和/或次氯酸钠。
例如，在本文的氧化反应中，反应物可以包括约或至少约0.05wt％、0.075wt％、0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％或2wt％的试剂，该试剂包含TEMPO，例如TEMPO和/或4-乙酰胺基-TEMPO。在某些实施例中，可以将包含TEMPO的试剂添加到已经混合或溶解有右旋糖酐的反应中。此类添加可以在将氧化剂添加到反应中之前、之后或之时进行。
例如，在本文的反应中，反应物可以包括约或至少约0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％、40wt％、45wt％或50wt％的氧化剂，如亚氯酸钠、溴化钠和/或次氯酸钠。在某些实施例中，可将一种或多种氧化剂添加到已经混合或溶解有右旋糖酐的反应中。
某些实施例中的氧化反应初始可以含有溶解在缓冲液溶液(例如在pH约4-5的乙酸钠缓冲液)或其他溶液(例如在pH约10.5-11.5的氢氧化钠溶液)中的右旋糖酐、包含TEMPO(例如4-乙酰胺基-TEMPO)的试剂和一种或多种氧化剂(例如亚氯酸钠、溴化钠和/或次氯酸钠)。任选地，在制备该特定反应时不包括另外的组分。
在本文中可以被氧化以产生氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐可以包含(i)约87wt％-93wt％仅在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.1wt％-1.2wt％仅在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.1wt％-0.7wt％仅在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约7.7wt％-8.6wt％仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.4wt％-1.7wt％仅在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6。在某些实施例中，右旋糖酐可以包含(i)约89.5wt％-90.5wt％仅在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.4wt％-0.9wt％仅在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.3wt％-0.5wt％仅在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约8.0wt％-8.3wt％仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.7wt％-1.4wt％仅在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6。
在某些方面，右旋糖酐可以包含约87wt％、87.5wt％、88wt％、88.5wt％、89wt％、89.5wt％、90wt％、90.5wt％、91wt％、91.5wt％、92wt％、92.5wt％或93wt％的仅在位置1和6处连接的葡萄糖。在一些情况下，可以具有约87wt％-92.5wt％、87wt％-92wt％、87wt％-91.5wt％、87wt％-91wt％、87wt％-90.5wt％、87wt％-90wt％、87.5wt％-92.5wt％、87.5wt％-92wt％、87.5wt％-91.5wt％、87.5wt％-91wt％、87.5wt％-90.5wt％、87.5wt％-90wt％、88wt％-92.5wt％、88wt％-92wt％、88wt％-91.5wt％、88wt％-91wt％、88wt％-90.5wt％、88wt％-90wt％、88.5wt％-92.5wt％、88.5wt％-92wt％、88.5wt％-91.5wt％、88.5wt％-91wt％、88.5wt％-90.5wt％、88.5wt％-90wt％、89wt％-92.5wt％、89wt％-92wt％、89wt％-91.5wt％、89wt％-91wt％、89wt％-90.5wt％、89wt％-90wt％、89.5wt％-92.5wt％、89.5wt％-92wt％、89.5wt％-91.5wt％、89.5wt％-91wt％、或89.5wt％-90.5wt％仅在位置1和6处连接的葡萄糖。
在一些方面，右旋糖酐可以包含约0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.0wt％、1.1wt％、或1.2wt％仅在位置1和3处连接的葡萄糖。在一些情况下，可以具有约0.1wt％-1.2wt％、0.1wt％-1.0wt％、0.1wt％-0.8wt％、0.3wt％-1.2wt％、0.3wt％-1.0wt％、0.3wt％-0.8wt％、0.4wt％-1.2wt％、0.4wt％-1.0wt％、0.4wt％-0.8wt％、0.5wt％-1.2wt％、0.5wt％-1.0wt％、0.5wt％-0.8wt％、0.6wt％-1.2wt％、0.6wt％-1.0wt％、或0.6wt％-0.8wt％仅在位置1和3处连接的葡萄糖。
在一些方面，右旋糖酐可以包含约0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、或0.7wt％仅在位置1和4处连接的葡萄糖。在一些情况下，可以具有约0.1wt％-0.7wt％、0.1wt％-0.6wt％、0.1wt％-0.5wt％、0.1wt％-0.4wt％、0.2wt％-0.7wt％、0.2wt％-0.6wt％、0.2wt％-0.5wt％、0.2wt％-0.4wt％、0.3wt％-0.7wt％、0.3wt％-0.6wt％、0.3wt％-0.5wt％、或0.3wt％-0.4wt％仅在位置1和4处连接的葡萄糖。
在一些方面，右旋糖酐可以包含约7.7wt％、7.8wt％、7.9wt％、8.0wt％、8.1wt％、8.2wt％、8.3wt％、8.4wt％、8.5wt％、或8.6wt％仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖。在一些情况下，可以具有约7.7wt％-8.6wt％、7.7wt％-8.5wt％、7.7wt％-8.4wt％、7.7wt％-8.3wt％、7.7wt％-8.2wt％、7.8wt％-8.6wt％、7.8wt％-8.5wt％、7.8wt％-8.4wt％、7.8wt％-8.3wt％、7.8wt％-8.2wt％、7.9wt％-8.6wt％、7.9wt％-8.5wt％、7.9wt％-8.4wt％、7.9wt％-8.3wt％、7.9wt％-8.2wt％、8.0wt％-8.6wt％、8.0wt％-8.5wt％、8.0wt％-8.4wt％、8.0wt％-8.3wt％、8.0wt％-8.2wt％、8.1wt％-8.6wt％、8.1wt％-8.5wt％、8.1wt％-8.1wt％、8.1wt％-8.3wt％、或8.1wt％-8.2wt％的仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖。
在一些方面，右旋糖酐可以包含约0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.0wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、或1.7wt％仅在(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6处连接的葡萄糖。在一些情况下，可以具有约0.4wt％-1.7wt％、0.4wt％-1.6wt％、0.4wt％-1.5wt％、0.4wt％-1.4wt％、0.4wt％-1.3wt％、0.5wt％-1.7wt％、0.5wt％-1.6wt％、0.5wt％-1.5wt％、0.5wt％-1.4wt％、0.5wt％-1.3wt％、0.6wt％-1.7wt％、0.6wt％-1.6wt％、0.6wt％-1.5wt％、0.6wt％-1.4wt％、0.6wt％-1.3wt％、0.7wt％-1.7wt％、0.7wt％-1.6wt％、0.7wt％-1.5wt％、0.7wt％-1.4wt％、0.7wt％-1.3wt％、0.8wt％-1.7wt％、0.8wt％-1.6wt％、0.8wt％-1.5wt％、0.8wt％-1.4wt％、0.8wt％-1.3wt％的仅在(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6处连接的葡萄糖。
在一些方面，右旋糖酐的键谱图可以按照本文披露的任何方案来确定。合适的键确定方案的实例可以与实例9中披露的方案类似或相同：例如，将已经通过在约70℃-90℃(例如80℃)下将反应加热约5-30分钟(例如10分钟)而失活的0768gtf酶反应放入具有12-14kDa的MWCO的透析管(例如，用再生纤维素制成)(例如，
Figure BDA0001420912630000281
4透析管，料号132706，光谱实验室公司(Spectrum Laboratories，Inc.))。然后，经过约4-10天(例如7天)，在约20℃-25℃(室温)下将失活的反应相对于大量的水(例如3-5L)透析；在透析过程中这种水可以每天更换。然后，该右旋糖酐产物(i)通过将透析的失活反应与约1-2x(1.5x)反应体积的100％甲醇混合来沉淀，(ii)使用相同体积的100％甲醇洗涤至少两次，并且(iii)在约40℃-50℃(例如45℃)(任选地在真空下)干燥。将可溶解量的干右旋糖酐溶解在二甲亚砜(DMSO)或DMSO/5％LiCl中，其后所有游离羟基基团被甲基化(例如通过依次添加NaOH/DMSO浆液，随后是碘甲烷)。然后将甲基化右旋糖酐萃取出(例如，在二氯甲烷中)，并在约110℃-125℃(例如120℃)下用三氟乙酸(TFA)水溶液水解成单体单元。然后蒸发TFA，并且使用硼氘化钠进行还原性开环。然后，通过水解配糖键产生的羟基基团在约40℃-60℃(例如50℃)的温度下通过用乙酰氯和TFA处理来乙酰化。接下来，将衍生化试剂蒸发，得到的甲基化/乙酰化单体在乙腈中重构；然后通过GC/MS使用合适的柱(例如，双氰基丙基氰基丙基苯基聚硅氧烷)分析该制备物。甲基和乙酰基官能团的相对位置使得物质具有不同的保留时间指数和可与公开的数据库进行比较的质谱。以这种方式，单体单元的衍生物表明每个单体最初如何连接在右旋糖酐聚合物中。
用于产生本文的氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐被认为具有支链结构，其中存在相互重复分支的长链(包含大部分或全部α-1，6键)(例如，长链可以是来自另一个长链的分支，该长链又可以是另一个长链的分支，等等)。支链结构还可以包含来自长链的短分枝；这些短链被认为主要包括例如α-1，3键和-1，4键。右旋糖酐中的分支点，无论是来自从长链分支的另一个长链还是从长链分支的短链，似乎包含没有α-1，3键、-1，4键或-1，2键而涉及α-1，6键的葡萄糖。在一些实施例中，平均来说，右旋糖酐的所有分支点的约20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、15％-35％、15％-30％、15％-25％、15％-20％、20％-35％、20％-30％、20％-25％、25％-35％、或25％-30％分支成长链。大多数(＞98％或99％)或所有其他分支点分支成短链。
在一些方面，右旋糖酐分支结构的长链的长度可以相似。长度相似，这意味着分支结构中所有长链的至少70％、75％、80％、85％、或90％的长度(DP)是在分支结构的所有长链的平均长度的正/负15％(或10％、5％)之内。在一些方面，长链的平均长度(平均长度)为约10-50DP(即，10-50个葡萄糖单体)。例如，长链的平均个体长度可以是约10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、10-50、10-40、10-30、10-25、10-20、15-50、15-40、15-30、15-25、15-20、20-50、20-40、20-30、或20-25DP。
在某些实施例中，右旋糖酐长链可以主要包含α-1，6-糖苷键和少量包含(少于2.0％)α-1，3-糖苷键和/或α-1，4-糖苷键。例如，右旋糖酐长链可以包含约或至少约98％、98.25％、98.5％、98.75％、99％、99.25％、99.5％、99.75％、或99.9％的α-1，6-糖苷键。在某些实施例中，右旋糖酐长链不包含α-1，4-糖苷键(即，这样的长链主要具有α-1，6键和少量的α-1，3键)。相反，在一些实施例中，右旋糖酐长链不包含α-1，3-糖苷键(即，这样的长链主要具有α-1，6键和少量的α-1，4键)。上述实施例的任何右旋糖酐长链可以进一步不包括例如α-1，2-糖苷键。仍然在一些方面，右旋糖酐长链可以包含100％的α-1，6-糖苷键(除了被这样的长链用于从另一个链分支的键)。
在一些方面，右旋糖酐的短链是一至三个长度的葡萄糖单体，并且包含少于右旋糖酐聚合物的所有葡萄糖单体的约5％-10％。本文中至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或全部的短链的长度为1-3个葡萄糖单体。右旋糖酐的短链可以包含例如少于约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、或1％的右旋糖酐的全部葡萄糖单体。
在一些方面，右旋糖酐的短链可以包含α-1，2-糖苷键、α-1，3-糖苷键和/或α-1，4-糖苷键。短链，当全部一起(不是单独)被考虑时，可以包括例如(i)这些键中的全部三个，或(ii)α-1，3-糖苷键和α-1，4-糖苷键。据信，本文的右旋糖酐的短链相对于右旋糖酐的其他短链可以是异质的(即，显示键谱图的一些变化)或同质的(即共享相似或相同的键谱图)。
在某些实施例中，用于产生氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐可以具有约或至少约5000万、5500万、6000万、6500万、7000万、7500万、8000万、8500万、9000万、9500万、1亿、1.05亿、1.1亿、1.15亿、1.2亿、1.25亿、1.3亿、1.35亿、1.4亿、1.45亿、1.5亿、1.55亿、1.6亿、1.65亿、1.7亿、1.75亿、1.8亿、1.85亿、1.9亿、1.95亿、或2亿(或在5000万至2亿之间的任何整数)(或在这些值中的两个之间的任何范围)的Mw。右旋糖酐的Mw可以为例如约5000万-2亿、6000万-2亿、7000万-2亿、8000万-2亿、9000万-2亿、1亿-2亿、1.1亿-2亿、1.2亿-2亿、5000万-1.8亿、6000万-1.8亿、7000万-1.8亿、8000万-1.8亿、9000万-1.8亿、1亿-1.8亿、1.1亿-1.8亿、1.2亿-1.8亿、5000万-1.6亿、6000万-1.6亿、7000万-1.6亿、8000万-1.6亿、9000万-1.6亿、1亿-1.6亿、1.1亿-1.6亿、1.2亿-1.6亿、5000万-1.4亿、6000万-1.4亿、7000万-1.4亿、8000万-1.4亿、9000万-1.4亿、1亿-1.4亿、1.1亿-1.4亿、1.2亿-1.4亿、5000万-1.2亿、6000万-1.2亿、7000万-1.2亿、8000万-1.2亿、9000万-1.2亿、1亿-1.2亿、1.1亿-1.2亿、5000万-1.1亿、6000万-1.1亿、7000万-1.1亿、8000万-1.1亿、9000万-1.1亿、1亿-1.1亿、5000万-1亿、6000万-1亿、7000万-1亿、8000万-1亿、9000万-1亿、或9500万-1.05亿。
在某些实施例中，用于产生氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐可以具有约200nm-280nm的z-平均回转半径(Rg)。例如，z-平均Rg可以是约200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、或280nm(或在200-280nm之间的任何整数)。作为其他实例，z-平均Rg可以为约200-280、200-270、200-260、200-250、200-240、200-230、220-280、220-270、220-260、220-250、220-240、220-230、230-280、230-270、230-260、230-250、230-240、240-280、240-270、240-260、240-250、250-280、250-270、或250-260nm。
在一些方面，右旋糖酐的Mw和/或z-平均Rg可以按照与实例9中披露的方案类似或相同的方案来测量。例如，本文的Mw和/或z-平均Rg可以通过首先将由0768gtf产生的右旋糖酐以0.4-0.6mg/mL(例如约0.5mg/mL)溶解在具有150-250ppm(例如约200ppm)NaN3的0.05-1.0M(例如约0.075M)的三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液中。干右旋糖酐的溶解可以通过在45℃-55℃(例如约50℃)下振摇12-18小时来实现。所得到的右旋糖酐溶液可以进入合适的流动注射色谱装置，该装置包括与三台在线检测器相联接的分离模块(例如，来自马萨诸塞州米尔福德的沃特斯公司(Waters Corporation，Milford，MA)的厄莱恩斯(Alliance)TM2695分离模块)，该在线检测器为：差示折光计(例如沃特斯2414折射率检测器)、配备有准弹性光散射(QELS)检测器(例如，来自加利福尼亚州圣巴巴拉市的怀亚特技术公司(WyattTechnologies，Santa Barbara，CA)的QELS检测器)的多角光散射(MALS)光度计(例如，HeleosTM-218-角多角MALS光度计)、和差示毛细管粘度计(例如，来自怀亚特的ViscoStarTM差示毛细管粘度计)。两种合适的尺寸排阻柱(例如，来自加利福尼亚州圣克拉拉市的安捷伦科技公司(Agilent Technologies，Santa Clara，CA)的AQUAGEL-OH GUARD柱)可用于将右旋糖酐聚合物峰与注射峰分离，其中流动相可以与样品溶剂(上文)相同，流速可以为约0.2mL/min，注射体积可以为约0.1mL，并且柱温可以为约30℃。适合的软件可以用于数据采集(例如，来自沃特斯的EmpowerTM版本3软件)和用于多重检测器数据缩减(来自怀亚特的AstraTM版本6软件)。MALS数据可以提供Mw和z-平均值，并且QELS数据可以提供例如z-平均流体动力学半径。
本文的可以生产氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐可以是葡萄糖基转移酶的产物，该葡萄糖基转移酶包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQID NO：13、或SEQ ID NO：17具有100％同一性或至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列或由其组成(并且具有gtf活性)。包含SEQ IDNO：1(或相关序列)的葡萄糖基转移酶的非限制性实例包括含有与SEQ ID NO：2具有100％同一性或至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列或由其组成(并且具有gtf活性)的葡萄糖基转移酶。例如，如本文所披露的，可以使用gtf反应来实现右旋糖酐的生产。可以任选地将在马上详细描述的说明书中披露的右旋糖酐(例如分子量、键和分支谱图)表征为包含SEQ ID NO：1或2(或其具有至少90％同一性的相关序列[上文])或由其组成的葡萄糖基转移酶的产物。在一些其他的方面，葡萄糖基转移酶包含与SEQ ID NO：6、10、14、或18编码的氨基酸序列的分泌部分(即去除的信号肽)具有100％同一性或具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列或由其组成。
本文的葡萄糖基转移酶可以来自各种微生物来源，例如细菌或真菌。细菌葡萄糖基转移酶的实例是衍生自链球菌属物种、明串珠菌属物种、乳杆菌属物种或魏斯氏菌属(Weissella)物种的那些。链球菌属物种的实例包括表兄链球菌、汗毛链球菌、唾液链球菌(S.salivarius)、牙链球菌(S.dentirousetti)、变异链球菌(S.mutans)、口腔链球菌(S.oralis)、解没食子酸链球菌(S.gallolyticus)、和血链球菌(S.sanguinis)。明串珠菌属物种的实例包括假肠膜明串珠菌(L.pseudomesenteroides)、阿米巴氏明串珠菌(L.amelibiosum)、阿根廷明串珠菌(L.argentinum)、肉明串珠菌(L.carnosum)、柠檬明串珠菌(L.citreum)、乳脂明串珠菌(L.cremoris)、葡聚糖明串珠菌(L.dextranicum)和果糖明串珠菌(L.fructosum)。乳杆菌属物种的实例包括发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌(L.delbrueckii)、瑞士乳杆菌(L.helveticus)、唾液乳杆菌(L.salivarius)、干酪乳杆菌(L.casei)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、植物乳杆菌(L.plantarum)、清酒乳杆菌(L.sakei)、短乳杆菌(L.brevis)、布赫内氏乳杆菌(L.buchneri)和罗伊乳杆菌(L.reuteri)。魏斯氏菌属物种的实例包括食窦魏斯氏菌(W.cibaria)、融合魏斯氏菌(W.confusa)、耐盐魏斯氏菌(W.halotolerans)、赫伦魏斯氏菌(W.hellenica)、坎氏魏斯氏菌(W.kandleri)、泡菜魏斯氏菌(W.Kimchii)、高丽魏斯氏菌(W.Koreensis)、微小魏斯氏菌(W.minor)、类肠膜魏斯氏菌(W.paramesenteroides)、土壤魏斯氏菌(W.soli)和泰国魏斯氏菌(W.thailandensis)。在一些方面，葡萄糖基转移酶不是来自肠膜明串珠菌；因此在某些方面，用于产生氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐不是肠膜明串珠菌葡萄糖基转移酶的产物。
本文的葡萄糖基转移酶的实例可以是本文披露的任何氨基酸序列，并且进一步包括在N-末端和/或C-末端的1-300个(或其在[例如，10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、或50个]之间的任何整数个)残基。这样的另外的残基可以来自衍生出葡萄糖基转移酶的相应的野生型序列，或可以是异源序列例如像表位标签(在N-或C-末端)或异源信号肽(在N-末端)。
典型地，用于生产本文的右旋糖酐的葡萄糖基转移酶是缺乏N-末端信号肽的成熟形式。用于生产本文的成熟的葡萄糖基转移酶的表达系统可以使用编码酶的多核苷酸，该多核苷酸进一步包含编码N-末端信号肽的序列以指导细胞外分泌。在这样的实施例中，将信号肽在分泌过程中从酶上切割。信号肽可以是天然或异源的葡萄糖基转移酶。可用于本文的信号肽的实例是来自细菌(例如芽孢杆菌属物种例如枯草芽孢杆菌)或真菌物种的信号肽。细菌信号肽的实例是aprE信号肽，例如来自芽孢杆菌属(例如枯草芽孢杆菌，参见Vogtentanz等人，蛋白质表达与纯化(Protein Expr.Purif.)55：40-52，其通过引用结合在此)的信号肽。
SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：17是缺乏N-末端信号肽的成熟葡萄糖基转移酶的实例。由于这些和相关的氨基酸序列不以甲硫氨酸残基开始，所以应当理解，如果不使用信号肽表达任何这些酶(例如使用其中酶在细胞内表达并从细胞裂解物中获得的表达系统)，N-末端起始的甲硫氨酸优选添加被到序列中(直接或经由插入的异源氨基酸序列例如表位)。
在某些实施例中，葡萄糖基转移酶可以通过本领域已知的任何方法生产。例如，可以在异源表达系统例如微生物异源表达系统中重组生产葡萄糖基转移酶。异源表达系统的实例包括细菌(例如大肠杆菌例如TOP10、MG1655或BL21 DE3；芽孢杆菌属物种例如枯草芽孢杆菌)和真核生物(例如，酵母，例如毕赤酵母属物种和酵母属物种)表达系统。
本文披露的葡萄糖基转移酶能以任何纯化状态(例如，纯的或非纯的)使用。例如，葡萄糖基转移酶可以在其使用之前被纯化和/或分离。不纯的葡萄糖基转移酶的实例包括处于细胞裂解物形式的那些。可以从用于异源表达酶的细菌(例如，大肠杆菌)制备细胞裂解物或提取物。例如，可以使用弗氏压碎器使细菌经受破裂。在可替代的实施例中，细菌可以用均化器(例如APV、兰尼(Rannie)、戈兰(Gaulin))均化。典型地，葡萄糖基转移酶可溶于这些类型的制剂。本文的细菌细胞裂解物、提取物或匀浆物能以约0.15％-0.3％(v/v)用于从蔗糖生产右旋糖酐的反应中。
本文的葡萄糖基转移酶的活性可以使用本领域已知的任何方法确定。例如，葡萄糖基转移酶活性可以通过测量在包含蔗糖(约50g/L)、右旋糖酐T10(约1mg/mL)和磷酸钾缓冲液(约pH 6.5，50mM)的反应中还原糖(果糖和葡萄糖)的产生来测定，其中溶液在约22℃-25℃下保持约24-30小时。可以通过向含有约1N NaOH和约0.1％三苯基四氮唑氯化物的混合物中添加0.01mL的反应物，然后监测在OD480nm下持续约5分钟吸光度的增加来测量还原糖。而且，例如，本文的酶例如gtf 0768(包含SEQ ID NO：1)的单位可以被定义为在26℃、pH6.5下并且在100g/L蔗糖下在1小时内消耗1g蔗糖所需的酶量。
本文中的氧化的右旋糖酐化合物可以衍生自葡萄糖基转移酶反应中包含的葡萄糖基转移酶的产物的右旋糖酐。如果需要，可以控制本文的葡萄糖基转移酶反应的温度。在某些实施例中，温度在约5℃至约50℃之间。在某些其他实施例中，温度在约20℃至约40℃之间。可替代地，温度可以是约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、或40℃。本文中可以使用本领域已知的各种方法来维持葡萄糖基转移酶反应的温度。例如，可以通过将含有反应物的容器放置在设定在所希望的温度的空气或水浴培养箱中来维持温度。
蔗糖在本文的gtf反应中的初始浓度可以为约20g/L至900g/L、20g/L至400g/L、75g/L至175g/L、或50g/L至150g/L。例如，蔗糖的初始浓度可以为约20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L、100g/L、110g/L、120g/L、130g/L、140g/L、150g/L、160g/L、200g/L、300g/L、400g/L、500g/L、600g/L、700g/L、800g/L、900g/L、50-150g/L、75-125g/L、90-110g/L、50-500g/L、100-500g/L、200-500g/L、300-500g/L、400-500g/L、50-400g/L、100-400g/L、200-400g/L、300-400g/L、50-300g/L、100-300g/L、200-300g/L、50-200g/L、100-200g/L、或50-100g/L(或在20g/L和900g/L之间的任何整数)。“蔗糖的初始浓度”是指刚刚在已经添加所有反应组分(至少水、蔗糖、gtf酶)之后在gtf反应中的蔗糖浓度。
在某些实施例中，gtf反应的pH可以在约4.0至约8.0之间。可替代地，pH可以为约4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、或8.0。可以通过添加或掺入合适的缓冲液来调节或控制pH，包括但不限于：磷酸盐、Tris、柠檬酸盐或其组合。gtf反应中的缓冲液浓度可以为例如从0mM至约100mM、或约10mM、20mM或50mM。
任选地，可以经由例如搅拌或轨道振摇来搅拌本文的葡萄糖基转移酶反应。这样的搅拌可以为例如约50rpm、60rpm、70rpm、80rpm、90rpm、100rpm、110rpm、120rpm、130rpm、140rpm、150rpm、50-150rpm、60-140rpm、70-130rpm、80-120rpm、或90-110rpm。
gtf酶在反应中的浓度可以为例如至少约15U/L、20U/L、25U/L、30U/L、35U/L、或40U/L。在一些方面中，可以使用15-35U/L、15-30U/L、15-25U/L、20-35U/L、20-30U/L、20-25U/L、25-35U/L、25-30U/L、或30-35U/L的葡萄糖基转移酶。
本文的gtf反应可花费约2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、18、24、30、36、48、60、72、84、96、18-30、20-28、或22-26小时来完成。反应时间可以取决于例如某些参数，如反应中使用的蔗糖和gtf酶的量。
因此，可以组合所有本文中限定葡萄糖基转移酶反应的特征。仅作为实例，使用0768gtf酶(包含SEQ ID NO：1或其相关序列)的反应最初可以包含90-110g/L(例如约100g/L)蔗糖、10-30mM(例如约20mM)磷酸钠缓冲液(pH 6.0-7.0(例如约pH 6.5))、以及20-30U/L(例如约25U/L)酶。这样的反应可以在24℃-28℃(例如约26℃)下以50-150rpm(例如约100rpm)振摇保持约20-28小时(例如约24小时)。
仍然在另外的实施例中，用于进行如以下实例中所披露的gtf反应的条件可用于制备可从其衍生本文的氧化的右旋糖酐化合物的右旋糖酐。
包含本文的氧化的右旋糖酐化合物的组合物可以是非水性的(例如干组合物)。这样的实施例的实例包括粉末、颗粒、微胶囊、薄片或任何其他形式的颗粒物质。其他实例包括更大的组合物，例如靶丸、棒、核、珠粒、片剂、条棍或其他附聚物。本文的非水性组合物或干组合物典型地在其中包含有少于3wt％、2wt％、1wt％、0.5wt％、或0.1wt％的水。例如，非水性组合物或干组合物中的本文的氧化的右旋糖酐的量可以是约或至少约1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％、40wt％、41wt％、42wt％、43wt％、44wt％、45wt％、46wt％、47wt％、48wt％、49wt％、50wt％、51wt％、52wt％、53wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、87wt％、88wt％、89wt％、90wt％、91wt％、92wt％、93wt％、94wt％、95wt％、96wt％、97wt％、98wt％、99wt％、99.5wt％、或99.9wt％。例如，本文的非水性组合物可以呈家用产品、个人护理产品、药物产品、工业产品或食物产品的形式。
在某些实施例中，包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物可以是具有或不具有可检测量的粘度的水性组合物。据信，在一些方面，包含氧化的右旋糖酐的水性组合物可以具有约或至少约3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50cPs(或3到50cPs之间的任何整数)的粘度。本文中水性组合物的实例包括水性混合物、胶体分散体(例如，水胶体)和水溶液。
粘度可以用本文的水性组合物在约3℃至约110℃之间(或在3℃和110℃之间的任何整数)的任何温度下测量。可替代地，粘度可以在例如在约4℃至30℃、或约20℃至25℃之间的温度下测量。粘度可以在大气压(约760托)或任何其他更高或更低的压力下测量。
本文中的水性组合物的粘度可以使用粘度计或流变仪或使用本领域已知的任何其他方法来测量。在此类实施例中的粘度可以例如以约0.1rpm至1000rpm(每分钟转数)的旋转剪切速率测量。在其他的实例中，可以在约10rpm、60rpm、150rpm、250rpm或600rpm的旋转剪切速率下测量粘度。
本文中的水性组合物的pH可以例如在约2.0至约12.0之间。可替代地，pH可以为例如约2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0；或在5.0至约12.0之间；或在约4.0与8.0之间；或在约5.0与8.0之间。
本文的水性组合物可以包含具有至少约10wt％的水的溶剂。在其他实施例中，例如，溶剂是至少约20wt％、30wt％、40wt％、50wt％、60wt％、70wt％、80wt％、90wt％、或100wt％的水(或在10wt％与100wt％之间的任何整数)。
本文中的氧化的右旋糖酐能以约或至少约0.01wt％、0.05wt％、0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.0wt％、1.2wt％、1.4wt％、1.6wt％、1.8wt％、2.0wt％、2.5wt％、3.0wt％、3.5wt％、4.0wt％、4.5wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％、12wt％、13wt％、14wt％、15wt％、16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％、21wt％、22wt％、23wt％、24wt％、25wt％、26wt％、27wt％、28wt％、29wt％、30wt％、31wt％、32wt％、33wt％、34wt％、35wt％、36wt％、37wt％、38wt％、39wt％、40wt％、41wt％、42wt％、43wt％、44wt％、45wt％、46wt％、47wt％、48wt％、49wt％、50wt％、51wt％、52wt％、53wt％、55wt％、56wt％、57wt％、58wt％、59wt％、60wt％、61wt％、62wt％、63wt％、64wt％、65wt％、66wt％、67wt％、68wt％、69wt％、70wt％、71wt％、72wt％、73wt％、74wt％、75wt％、76wt％、77wt％、78wt％、79wt％、80wt％、81wt％、82wt％、83wt％、84wt％、85wt％、86wt％、87wt％、88wt％、89wt％、或90wt％的wt％存在于水性组合物中。
除了氧化的右旋糖酐化合物之外，本文的水性组合物可以包含其他组分。例如，水性组合物可以包含一种或多种盐，例如钠盐(例如NaCl、Na2SO4)。盐的其他非限制性实例包括具有(i)铝、铵、钡、钙、铬(II或III)、铜(I或II)、铁(II或III)、氢、铅(II)、锂、镁、锰(II或III)、汞(I或II)、钾、银、钠、锶、锡(II或IV)或锌阳离子，和(ii)乙酸盐、硼酸盐、溴酸盐、溴化物、碳酸盐、氯酸盐、氯化物、亚氯酸盐、铬酸盐、氨腈(cyanamide)、氰化物、重铬酸盐、磷酸二氢盐、铁氰化物、亚铁氰化物、氟化物、碳酸氢盐、磷酸氢盐、硫酸氢盐、硫化氢、亚硫酸氢盐、氢化物、氢氧化物、次氯酸盐、碘酸盐、碘化物、硝酸盐、氮化物、亚硝酸盐、草酸盐、氧化物、高氯酸盐、高锰酸盐、过氧化物、磷酸盐、磷化物、亚磷酸盐、硅酸盐、锡酸盐、亚锡酸盐、硫酸盐、硫化物、亚硫酸盐、酒石酸盐或硫氰酸盐阴离子的那些。因此，例如，具有上述(i)中的阳离子和上述(ii)中的阴离子的任何盐可以处于水性组合物中。例如，盐能以约0.01至约10.00(或在0.01至10.00之间的任何百分之一增量)的wt％存在于本文的水性组合物中。
本文的组合物可以任选地含有一种或多种活性酶。合适的酶的非限制性实例包括蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、过氧化物酶、脂肪分解酶(例如金属脂肪分解酶)、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶(例如芳基酯酶、聚酯酶)、过氧水解酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶(例如胆碱氧化酶)、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、苹果酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、金属蛋白酶、阿马多里酶(amadoriase)、葡糖淀粉酶、阿拉伯呋喃糖酶、肌醇六磷酸酶、异构酶、转移酶和淀粉酶。如果包括一种或多种酶，则其能以例如约0.0001wt％-0.1wt％(例如0.01wt％-0.03wt％)的活性酶(例如，以纯酶蛋白计算)包含在本文的组合物中。
本文的纤维素酶可以具有内切纤维素酶活性(EC 3.2.1.4)、外切纤维素酶活性(EC 3.2.1.91)或纤维二糖酶活性(EC 3.2.1.21)。本文的纤维素酶是在合适的条件下具有维持纤维素酶活性的活性的“活性纤维素酶”；确定这样的合适的条件在本领域技术范围内。除了能够降解纤维素之外，某些实施例中，纤维素酶也可以降解纤维素醚衍生物如羧甲基纤维素。在美国专利号7012053、7056880、6579840、7534759和7576048中披露了预期对纤维素酶不稳定的纤维素醚衍生物的实例。
本文的纤维素酶可以衍生自任何微生物来源，例如细菌或真菌。包括化学修饰的纤维素酶或蛋白质工程化的突变纤维素酶在内。合适的纤维素酶包括但不限于来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、链霉菌属、木霉属、腐质霉属、镰胞菌属、梭孢壳属(Thielavia)和支顶孢属的纤维素酶。作为其他实例，纤维素酶可以衍生自特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)或尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)；这些和其他纤维素酶被披露在美国专利号4435307、5648263、5691178、5776757和7604974中，其全部均通过引用结合在此。示例性里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶披露于美国专利号4689297、5814501、5324649和国际专利申请公开号WO 92/06221和WO 92/06165中，其全部通过引用结合在此。示例性芽孢杆菌属(Bacillus)纤维素酶披露于美国专利号6562612中，其通过引用结合在此。纤维素酶，例如前述任何一种，优选为缺乏N-末端信号肽的成熟形式。可用于本文的可商购的纤维素酶包括纤维素酶
Figure BDA0001420912630000414
和护理酶
Figure BDA0001420912630000415
(诺维信公司(Novozymes A/S))；
Figure BDA0001420912630000411
和
Figure BDA0001420912630000412
HA(杜邦工业生物科学公司(DuPont Industrial Biosciences))和
Figure BDA0001420912630000413
(花王公司(Kao Corporation))。
当制备本文披露的组合物时，可以直接添加一种或多种纤维素酶作为成分。可替代地，可以在所披露的组合物中间接地(非故意地)提供一种或多种纤维素酶。例如，可以通过存在于用于制备组合物的非纤维素酶制剂中而在本文的组合物中提供纤维素酶。间接地向其中提供纤维素酶的组合物中的纤维素酶能以例如约0.1-10ppb(例如，少于1ppm)存在。通过使用氧化的右旋糖酐化合物代替纤维素类化合物，本文组合物的预期益处是可以使用可能具有背景纤维素酶活性的非纤维素酶制剂，而不用担心氧化的右旋糖酐化合物的期望效果将被背景纤维素酶活性抵消。
在某些实施例中，纤维素酶可以是热稳定的。纤维素酶热稳定性是指酶在暴露于高温(例如约60℃-70℃)持续一段时间(例如约30-60分钟)后保留活性的能力。纤维素酶的热稳定性可以通过其以几分钟、几小时或几天给出的半衰期(t1/2)来测量，在该半衰期期间纤维素酶活性的一半在限定的条件下丧失。
在某些实施例中纤维素酶可以在宽范围的pH值(例如中性或碱性pH，例如约7.0至约11.0的pH)下稳定。这样的酶可以在这样的pH条件下保持稳定一段预定的时间(例如至少约15min、30min或1小时)。
至少一种、两种或更多种纤维素酶可以包括在本文的组合物中。纤维素酶在处理织物的水性组合物中的有效浓度可以由本领域技术人员容易地确定。在织物护理过程中，例如，纤维素酶能以最小约0.01-0.1ppm的总纤维素酶蛋白质的浓度、或约0.1-10ppb的总纤维素酶蛋白质的浓度(少于1ppm)至最约100ppm、200ppm、500ppm、1000ppm、2000ppm、3000ppm、4000ppm、或5000ppm的总纤维素酶蛋白质的浓度存在于处理织物的水性组合物(例如洗涤液)中。
本文的氧化的右旋糖酐化合物大部分或完全稳定(具有抗性)从而不会被纤维素酶降解。例如，一种或多种纤维素酶对氧化的右旋糖酐化合物的降解百分比少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、或1％、或是0％。例如，通过比较使用纤维素酶处理一段时间(例如约24小时)前后的氧化的右旋糖酐的分子量可以确定这样的降解百分比。
在某些实施例中，认为水性组合物具有剪切稀化行为或剪切增稠行为。剪切稀化行为被观测为随着剪切速率增加水性组合物的粘度降低，而剪切增稠行为被观测为随着剪切速率增加水性组合物的粘度增加。本文的水性组合物的剪切稀化行为或剪切增稠行为的改性可归因于氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物的混合。因此，在一些方面，可以将本文的一种或多种氧化的右旋糖酐化合物添加到水性组合物中以改变其流变特征(即，水性液体、溶液或混合物的流动特性被改变)。而且，在一些方面，可以将一种或多种氧化的右旋糖酐化合物添加到水性组合物中以改性其粘度。
通过在增加的旋转剪切速率(例如，从约0.1rpm至约1000rpm)下测量粘度可以观测到本文的水性组合物的流变特性。例如，水性组合物的剪切稀化行为可以被观测为随着旋转剪切速率从约10rpm增加至60rpm、从10rpm增加至150rpm、从10rpm增加至250rpm、从60rpm增加至150rpm、从60rpm增加至250rpm、或从150rpm增加至250rpm，粘度(cPs)降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％(或在5％与95％之间的任何整数)。作为另一个实例，水性组合物的剪切增稠行为可以被观测为随着旋转剪切速率从约10rpm增加至60rpm、从10rpm增加至150rpm、从10rpm增加至250rpm、从60rpm增加至150rpm、从60rpm增加至250rpm、或从150rpm增加至250rpm，粘度(cPs)增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％、或200％(或在5％至200％之间的任何整数)。
例如，本文披露的水性组合物可以呈家用产品、个人护理产品、工业产品、药物产品或食物产品的形式和/或包含于其中，例如下述这些产品中任一种。本文的氧化的右旋糖酐化合物可以任选地用作这些类型产品中的一种或多种中的助洗剂和/或抗再沉积剂-此类用途部分地取决于产品的应用，是本领域技术人员可以预期的，特别是鉴于本文披露的一些实施例。在其他实施例中，本文中氧化的右旋糖酐化合物被认为在这些产物的一种或多种中具有用作增稠剂的某些用途。如果需要，这样的增稠剂可以与一种或多种其他类型的增稠剂结合使用，例如在美国专利号8541041(其通过引用结合在此)中披露的那些增稠剂。
本文的个人护理产品没有特别限制，并且包括例如皮肤护理组合物、化妆品组合物、抗真菌组合物和抗细菌组合物。本文的个人护理产品可以呈例如洗剂、霜剂、糊剂、香脂、软膏、润发油、凝胶剂、液体、这些的组合等的形式。如果需要，本文披露的个人护理产品可以包括至少一种活性成分。活性成分通常被认为是引起预期的药理作用的成分。在某些实施例中，本文中的个人护理产品可用于个人护理清洁应用。
在某些实施例中，可以将皮肤护理产品应用于皮肤以解决与缺乏水分有关的皮肤损伤。也可以使用皮肤护理产品来解决皮肤的视觉外观(例如，减少片状，龟裂和/或红色皮肤的外观)和/或皮肤的触感(例如，减少皮肤的粗糙度和/或干燥度，同时改善皮肤的柔软度和微观细化)。典型地，皮肤护理产品可以包括用于治疗或预防皮肤疾病、提供美容效果、或为皮肤提供保湿益处的至少一种活性成分，例如氧化锌、凡士林、白凡士林、矿物油、鱼肝油、羊毛脂、二甲聚硅氧烷、硬脂、维生素A、尿囊素、炉甘石、高岭土、甘油或胶体燕麦片、以及这些的组合。皮肤护理产品可以包括一种或多种天然保湿因子，例如像神经酰胺、透明质酸、甘油、角鲨烷、氨基酸、胆固醇、脂肪酸、三酸甘油酯、磷脂质、鞘糖脂、尿素、亚油酸、葡糖氨基葡聚糖、黏多糖、乳酸钠、或吡咯烷酮羧酸钠。可以包括在皮肤护理产品中的其他成分包括但不限于甘油酯、杏仁油、卡诺拉油、角鲨烷、角鲨烯、椰子油、玉米油、荷荷芭油、荷荷芭蜡、卵磷脂、橄榄油、红花油、芝麻油、乳木果油、大豆油、甜杏仁油、向日葵油、茶树油、乳木果油、棕榈油、胆固醇、胆固醇酯、蜡酯、脂肪酸和橙皮油。
本文的个人护理产品也可以呈例如化妆品、唇膏、睫毛膏、胭脂、粉底、腮红、眼线膏、唇线笔、唇彩、其他化妆品、防晒霜、防晒乳、指甲油、指甲调理剂、沐浴露(bath gel)、淋浴凝胶(shower gel)、沐浴乳(body wash)、洗面奶、润唇膏、护肤霜、冷霜、润肤膏、身体喷雾剂、皂、身体磨砂膏、去角质剂(exfoliant)、收敛剂、颈背爽肤水(scruffing lotion)、脱毛剂、烫发溶液(permanent waving solution)、去头皮屑配制品、止汗组合物、除臭剂、剃须产品、剃须前产品、剃须后产品、清洁剂、皮肤凝胶、染发剂、洁牙剂组合物、牙膏、或漱口剂。
在某些方面，个人护理产品可以是头发护理产品。本文的头发护理产品的实例包括洗发精、护发素(免洗或漂洗型)、营养发水、染发剂、染发产品、头发光亮产品、护发精华、头发防毛躁产品、头发分叉修复产品、摩丝、喷发剂和发型啫哩。在一些实施例中，头发护理产品可以呈液体、糊剂、凝胶、固体或粉末的形式。典型地，如本文披露的头发护理产品包含一种或多种以下通常用于配制头发护理产品的成分：阴离子表面活性剂，例如聚氧乙烯月桂醚硫酸钠；阳离子表面活性剂，例如硬脂酰基三甲基氯化铵和/或二硬脂酰基二甲基氯化铵；非离子表面活性剂，例如单硬脂酸甘油酯、山梨糖醇酐单棕榈酸酯和/或聚氧乙烯鲸蜡醚；润湿剂，例如丙二醇、1，3-丁二醇、甘油、山梨糖醇、焦谷氨酸盐、氨基酸和/或三甲基甘氨酸；烃类，例如液体石蜡、凡士林油、固体石蜡、角鲨烷和/或烯烃低聚物；高级醇，例如硬脂醇和/或鲸蜡醇；富脂剂；去头皮屑剂；消毒剂；消炎剂；生药；水溶性聚合物，例如甲基纤维素、羟基纤维素和/或部分脱乙酰甲壳素；防腐剂，例如对羟基苯甲酸酯；紫外光吸收剂；珠光剂；pH调节剂；香料；以及颜料。
本文的药物产品可以呈例如乳剂、液体、酏剂、凝胶、悬浮液、溶液、霜剂或软膏剂的形式。而且，本文的药物产品可以呈本文披露的任何个人护理产品的形式，例如抗细菌或抗真菌组合物。药物产品可以进一步包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂和/或药学上可接受的盐。本文披露的氧化的右旋糖酐化合物也可以用于胶囊、封装剂、片剂包衣以及药剂和药物的赋形剂。
本文的食物产品的非限制性实例包括蔬菜、肉和大豆馅饼；改良海鲜；改良奶酪棒；奶油汤；肉汁和酱汁；沙拉酱；蛋黄酱；洋葱圈；果酱、果冻和糖浆；饼馅；马铃薯产品，例如炸薯条和膨化薯条；用于油炸食品、薄煎饼/华夫饼干和蛋糕的面糊；宠物食品；糕点糖果(糖果)；饮料；冷冻甜点；冰淇淋；培养的奶制品(cultured dairy products)，例如松软干酪、酸奶、奶酪和酸奶油；蛋糕糖霜和釉料；人造稠黄油；发酵和未发酵的烘焙食品；棒；等等。
在某些实施例中，氧化的右旋糖酐化合物能以提供所希望的程度的增稠和/或分散的量包含在食品或任何其他可吸收的材料(例如肠内药物制剂)中。例如，产品中的氧化的右旋糖酐化合物的浓度或量可以为约0.1wt％-3wt％、0.1wt％-4wt％、0.1wt％-5wt％、或0.1wt％-10wt％。
本文的家用和/或工业产品可以呈以下形式：例如，干壁胶带接合化合物；砂浆；水泥浆；石膏水泥灰浆(cement plaster)；喷雾灰泥；水泥灰泥(cement stucco)；粘合剂；糊剂；墙壁/天花板调质剂；用于带式浇注、挤压成型、喷射模塑和陶瓷的粘合剂和加工助剂；用于杀有害生物剂、除草剂和化肥的喷洒附着物和悬浮/分散助剂；织物护理产品，例如织物柔软剂和衣物洗涤剂；餐具洗涤剂；硬表面清洁剂：空气清新剂；聚合物乳液；凝胶例如水性凝胶；表面活性剂溶液；涂料如水性涂料；保护涂层；粘合剂；密封剂和填缝剂；油墨例如水性油墨；金属加工液；或用于电镀、磷化、镀锌和/或一般金属清洗操作中的乳液型金属清洗液。本文中的家用产品或工业产品可用于某些实施例中的清洁应用中，并且例如可以按原样包含在洗涤剂组合物中。
据信，本文披露的氧化的右旋糖酐化合物可用于向个人护理产品、药物产品、家用产品、工业产品或食物产品提供一种或多种以下物理特性：例如增稠、冷冻/解冻稳定性、润滑性、湿度保持和释放、质地、稠度、形状保持、乳化、粘合、悬浮、分散、凝胶化、矿物硬度降低。产物中氧化的右旋糖酐化合物的浓度或量的实例可以是例如上文提供的任何重量百分比。
本文的食物产品可以呈例如糕点糖果的形式。本文的糕点糖果可以含有一种或多种糖(例如蔗糖、果糖、葡萄糖)用于甜化，或相反不含糖。
糕点糖果的实例包括煮糖(硬煮糖[即，硬糖])、糖衣糖、果冻糖果、口香糖(gums)、甘草糖、求斯糖、焦糖、太妃糖、软糖、口香糖(chewing gums)、泡泡糖、牛轧糖、耐嚼膏、哈拉瓦(halawa)、片剂、糖锭、糖霜、霜状白糖、布丁和凝胶(例如、水果凝胶、明胶甜点)。糕点糖果的其他实例包括充气糖果，例如棉花糖和烘焙糖果。
本文的糕点糖果可以任选地使用巧克力，以任何形式(例如棒状、糖果、糖块、松露、扁豆)制备。例如，糕点糖果可以用巧克力、糖衣、糖果、釉面和/或薄膜包衣来进行包衣。薄膜包衣方法典型地包括向糖果的表面应用成膜液体组合物，该组合物在干燥后变成保护膜。例如，这种薄膜包衣用于保护糕点糖果中包含的有效成分；保护糕点糖果本身免于潮湿、冲击和/或易碎；和/或赋予糕点糖果有吸引力的视觉特性(例如，光泽、均匀的颜色、光滑的表面)。
在某些实施例中，糕点糖果可以用液体、糊状、固体或粉末状的填料进行填充。本文的氧化的右旋糖酐可以包含在这样的填料中，在这种情况下，在填充的糕点糖果组分中任选地还包含该化合物。
本文的糕点糖果任选地是无糖的、不包含糖，并且典型地相反具有一种或多种人造糖和/或非糖甜味剂(任选非热量型)(例如，阿斯巴甜、糖精、甜叶菊(STEVIA)、蔗糖素(SUCRALOSE))。在某些实施例中，无糖糕点糖果可以包含一种或多种多元醇(例如赤藓糖醇、甘油、乳糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、木糖醇)、可溶性纤维和/或代替糖的蛋白质。
本文的食物产品可以例如处于宠物食物的形式。本文的宠物食物可以是驯养动物例如狗或猫(或任何其他陪伴动物)的食物。在某些实施例中，宠物食物向家畜提供以下中的一种或多种：必需的饮食必需品、零食(例如狗饼干)、食品补充剂。宠物食物的实例包括干宠物食物(例如，核、粗粒食物)、半湿润组合物、湿宠物食物(例如罐头宠物食物)或其任何组合。湿宠物食物典型地具有超过65％的水分含量。半湿润宠物食物典型地具有20％-65％的水分含量，并且可以包括湿润剂例如丙二醇、山梨酸钾和防止微生物(细菌和霉菌)生长的成分。干宠物食物典型地具有低于20％的水分含量，并且其加工通常包括挤压、干燥和/或烘焙。宠物食物可以任选地处于肉汁、酸奶、粉末、悬浮液、咀嚼或零食(例如饼干)的形式；如果需要，所有这些组合物也可以用作宠物食品补充剂。宠物零食可以是例如半湿可咀嚼的零食；干燥零食；可咀嚼的骨头；烘焙的、挤压的或冲压的零食；或糖果零食。可以添加本文的氧化的右旋糖酐化合物的宠物食物组合物/配制品的实例包括美国专利申请公开号2013/0280352和2010/0159103和美国专利号6977084中披露的那些，其全部通过引用结合在此。
本文披露的组合物可以呈织物护理组合物的形式。例如，本文的织物护理组合物可用于手洗、机洗和/或其他目的，例如织物的浸泡和/或预处理。织物护理组合物可以采取例如衣物洗涤剂；织物调理剂；任何洗涤产品、漂洗产品或烘干机添加的产品；单位剂量或喷雾的形式。处于液体形式的织物护理组合物可以呈如本文披露的水性组合物的形式。在其他方面，织物护理组合物可以呈干燥形式，例如颗粒洗涤剂或烘干机添加的织物柔软剂片。本文的织物护理组合物的其他非限制性实例包括：颗粒或粉末形式的通用或重垢洗涤剂；液体、凝胶或糊状形式的通用或重垢洗涤剂；液体或干燥精细织物(例如精致衣物)洗涤剂；清洁助剂例如漂白添加剂、“去污棒”或预处理；含基底的产品，例如干和湿的抹布、衬垫或海绵；喷雾和雾。
本文的洗涤剂组合物可以呈任何有用的形式，例如粉末、颗粒、糊剂、棒、单位剂量或液体。液体洗涤剂可以是水性的，典型地包含多达约70wt％的水和0wt％至约30wt％的有机溶剂。它也可以呈仅含有约30wt％水的紧密凝胶类型的形式。
典型地本文的洗涤剂组合物包含一种或多种表面活性剂，其中所述表面活性剂选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、兼性离子表面活性剂、半极性非离子表面活性剂及其混合物。在一些实施例中，表面活性剂以从约0.1％至约60％的水平存在，而在可替代的实施例中，该水平为从约1％至约50％，而在又进一步的实施例中，该水平为从约5％至约40％，以洗涤剂组合物的重量计。通常，洗涤剂将含有0wt％至约50wt％的阴离子表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)(AS)、醇乙氧基硫酸盐(AEOS或AES)、仲型链烷磺酸盐(SAS)、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基-或烯基琥珀酸或皂。另外，洗涤剂组合物可任选地含有0wt％至约40wt％的非离子表面活性剂，例如醇乙氧基化物(AEO或AE)、羧化醇乙氧基化物、壬基苯酚乙氧基化物、烷基多糖苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、或多羟基烷基脂肪酸酰胺(如在WO 92/06154中所描述，其通过引用结合在此)。
本文的洗涤剂组合物典型地包含一种或多种洗涤剂助洗剂或助洗剂系统。例如，可以包括一种或多种氧化的右旋糖酐化合物作为助洗剂。在一些方面，可以包括氧化的右旋糖酐作为共助洗剂，其中它与一种或多种另外的助洗剂(例如本文披露的任何一种)一起使用。在掺入至少一种助洗剂的一些实施例中，清洁组合物包含以组合物的重量计至少约1％、从约3％至约60％、或甚至从约5％至约40％的助洗剂。助洗剂(除了氧化的右旋糖酐之外)包括但不限于，聚磷酸盐的碱金属、铵和链烷醇铵盐；碱金属硅酸盐、碱土金属和碱金属碳酸盐；铝硅酸盐；聚羧酸化合物；醚羟基聚羧酸酯；马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚、1，3，5-三羟基苯-2，4，6-三磺酸、和羧基甲基氧基琥珀酸的共聚物；聚乙酸的各种碱金属、铵和取代的铵盐，例如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸；连同聚羧酸酯，例如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧代二琥珀酸(oxydisuccinic acid)、聚马来酸、苯1，3，5-三羧酸、羧基甲基氧基琥珀酸及其可溶性盐。实际上，预期任何适合的助洗剂将可用于本披露的各种实施例中。洗涤剂助洗剂或络合剂的另外的实例包含沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状桂酸盐(如，来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)。
在一些实施例中，助洗剂形成水溶性硬离子络合物(例如螯合助洗剂)，例如柠檬酸盐和多磷酸盐(例如三聚磷酸钠和三聚磷酸钠六水合物、三聚磷酸钾、以及混合的三聚磷酸钠和三聚磷酸钾等)。预期任何适合的助洗剂将可用于本披露，包括本领域已知的那些(参见例如EP 2100949)。
在一些实施例中，适合的助洗剂可以包括磷酸盐助洗剂和非磷酸盐助洗剂。在一些实施例中，助洗剂是磷酸盐助洗剂。在一些实施例中，助洗剂是非磷酸盐助洗剂。助洗剂以按组合物的重量计从0.1％至80％、或从5％至60％、或从10％至50％的水平使用。在一些实施例中，产品包括磷酸盐和非磷酸盐助洗剂的混合物。适合的磷酸盐助洗剂包括单磷酸盐、二磷酸盐、三聚磷酸盐或低聚多磷酸盐，包括这些化合物的碱金属盐，包括钠盐。在一些实施例中，助洗剂可以是三聚磷酸钠(STPP)。另外，组合物可以包含有助于实现中性pH组合物的碳酸盐和/或柠檬酸盐，优选柠檬酸盐。其他适合的非磷酸盐助洗剂包括多羧酸及其部分或完全中和盐、单体型多羧酸和羟基羧酸及其盐的均聚物和共聚物。在一些实施例中，上述化合物的盐包含铵盐和/或碱金属盐，即锂盐、钠盐和钾盐，包括钠盐。适合的多元羧酸包括无环的、脂环族的、杂环的和芳香族的羧酸，其中在一些实施例中，它们可以包含至少两个羧基基团，这些羧基基团在每种情况下彼此分离，在某些情况下被不超过两个碳原子分离。
本文的洗涤剂组合物可包含至少一种螯合剂。适合的螯合剂包括但不限于铜、铁和/或锰螯合剂及其混合物。在使用至少一种螯合剂的实施例中，该组合物包含以该组合物的重量计从约0.1％至约15％或甚至从约3.0％至约10％的螯合剂。
本文的洗涤剂组合物可以包含至少一种沉积助剂。合适的沉积助剂包括但不限于聚乙二醇、聚丙二醇、聚羧酸盐、去污聚合物(例如聚对苯二甲酸)、粘土例如高岭土、蒙脱石、绿坡缕石、伊利石、膨润土、多水高岭土及其混合物。
本文的洗涤剂组合物可以包含一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮以及聚乙烯基咪唑或其混合物。另外的染料转移抑制剂包括锰酞菁、过氧化物酶、聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑和/或其混合物；螯合剂，其实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)；二亚乙基三胺五亚甲基膦酸(DTPMP)；羟基-乙烷二膦酸(HEDP)；乙二胺N，N′-二琥珀酸(EDDS)；甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)；二乙三胺五乙酸(DTPA)；丙二胺四乙酸(PDTA)；2-羟基吡啶-N-氧化物(HPNO)；或甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)；谷氨酸N，N-二乙酸(N，N-二羧基甲基谷氨酸四钠盐(GLDA)；次氮基三乙酸(NTA)；4，5-二羟基间苯二磺酸；柠檬酸及其任何盐；N-羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、N-羟基乙基亚氨基二乙酸(HEIDA)、二羟基乙基甘氨酸(DHEG)、乙二胺四丙酸(EDTP)及其衍生物，其可以单独使用或与以上任何一种组合使用。在使用至少一种染料转移抑制剂的实施例中，本文的组合物可以包含以该组合物的重量计从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％、或甚至从约0.1％至约3％的该至少一种染料转移抑制剂。
本文的洗涤剂组合物可以包含硅酸盐。在这些实施例中的一些，可使用硅酸钠(例如，二硅酸钠、偏硅酸钠和/或晶体硅酸盐)。在一些实施例中，硅酸盐以按该组合物的重量计从约1％至约20％的水平存在。在一些实施例中，硅酸盐以按该组合物的重量计从约5％至约15％的水平存在。
本文的洗涤剂组合物可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括但不限于均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括至少两个被不超过两个碳原子彼此分开的羧基自由基。
本文的洗涤剂组合物可以另外包含一种或多种酶。酶的实例包括处于任意组合的蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、过氧化物酶、脂肪分解酶(例如金属脂肪分解酶)、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶(例如芳基酯酶、聚酯酶)、过氧水解酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶(例如胆碱氧化酶、酚氧化酶)、酚氧化酶、脂肪氧合酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、苹果酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、金属蛋白酶、阿马多里酶、葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、半乳糖苷酶、半乳聚糖酶、过氧化氢酶、角叉菜胶酶、透明质酸酶、角蛋白酶、乳糖酶、木质酶、过氧化物酶、磷酸酶、聚半乳糖醛酸酶、支链淀粉酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、金属蛋白酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、植酸酶、异构酶、转移酶和/或淀粉酶。
在一些实施例中，洗涤剂组合物可以包含一种或多种酶(例如，本文披露的任何一种)，其每一种处于按该组合物的重量计从约0.00001％至约10％的水平，以及按该组合物的重量计的余量的清洁辅助材料。在一些其他实施例中，洗涤剂组合物还可以包含以按该组合物的重量计约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的水平的每一种酶。
可以包含在本文的洗涤剂组合物中的酶可以使用常规的稳定剂例如多元醇例如丙二醇或甘油；糖或糖醇；乳酸；硼酸或硼酸衍生物(例如芳香族硼酸酯)来稳定。
某些实施例中的洗涤剂组合物可包含一种或多种聚合物。合适的聚合物的实例包括羧基甲基纤维素(CMC)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚羧酸酯例如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物、和月桂酰甲基丙烯酸酯/丙烯酸共聚物。
本文的洗涤剂组合物可以包含漂白系统。例如，漂白系统可以包含H2O2源例如过硼酸或过碳酸，其可以与形成过酸的漂白活化剂(例如四乙酰基乙二胺(TAED)或壬酰基氧基苯磺酸酯(NOBS))组合。可替代地，漂白系统可以包含过氧酸(例如，酰胺、酰亚胺或砜类过氧酸等)。还可替代地，漂白系统可以是包含过水解酶的酶促漂白系统，例如向在WO 2005/056783中描述的系统。
本文的洗涤剂组合物还可以包含常规的洗涤剂成分，例如织物调理剂、粘土、泡沫促进剂、泡沫抑制剂、抗腐蚀剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀细菌剂、变色抑制剂、荧光增白剂或香料。本文的洗涤剂组合物的pH(在使用浓度的水溶液中测量)通常为中性或碱性(例如，pH为约7.0至约11.0)。
据信，如果需要，氧化的右旋糖酐可以作为抗再沉积剂和/或粘土污垢去除剂包含在洗涤剂组合物例如织物护理组合物中(在某些方面，可以任选地将这样的试剂表征为白度维持剂)。其他合适的抗再沉积和/或粘土污垢去除剂的实例包括聚乙氧基兼性离子表面活性剂、丙烯酸或甲基丙烯酸与丙烯酸或甲基丙烯酸-环氧乙烷缩合物的水溶性共聚物(例如，美国专利号3719647)、纤维素衍生物例如羧基甲基纤维素和羟基丙基纤维素(例如美国专利号3597416和3523088)、以及包含非离子烷基聚乙氧基表面活性剂、聚乙氧基烷基季阳离子表面活性剂和脂肪酰胺表面活性剂的混合物(例如美国专利号4228044)。其他适合的抗再沉积和粘土污垢去除剂的非限制性实例披露在美国专利号4597898和4891160，以及国际专利申请公开号WO 95/32272中，其全部通过引用结合在此。
可以适用于本文披露的目的的洗涤剂组合物的特定形式披露在例如US20090209445 A1、US 20100081598 A1、US 7001878 B2、EP 1504994 B1、WO 2001085888A2、WO 2003089562 A1、WO 2009098659 A1、WO 2009098660 A1、WO 2009112992 A1、WO2009124160 A1、WO 2009152031 A1、WO 2010059483 A1、WO 2010088112 A1、WO2010090915 A1、WO 2010135238 A1、WO 2011094687 A1、WO 2011094690 A1、WO2011127102 A1、WO 2011163428 A1、WO 2008000567 A1、WO 2006045391 A1、WO2006007911 A1、WO 2012027404 A1、EP 1740690 B1、WO 2012059336 A1、US 6730646 B1、WO 2008087426 A1、WO 2010116139 A1、和WO 2012104613 A1中，其全部通过引用结合在此。
本文的衣物洗涤剂组合物可以任选地是重垢(通用)衣物洗涤剂组合物。示例性重垢衣物洗涤剂组合物包含清洁表面活性剂(10％-40％wt/wt)，包括阴离子清洁表面活性剂(选自以下组：直链或支链或无规链、取代或未取代的烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基烷氧基化硫酸盐、烷基磷酸盐、烷基膦酸盐、烷基羧酸盐和/或其混合物)和任选地非离子表面活性剂(选自以下组：直链或支链或无规链、取代或未取代的烷基烷氧基化醇，例如C8-C18烷基乙氧基化醇和/或C6-C12烷基苯酚烷氧基化物)，其中阴离子清洁表面活性剂(具有从6.0至9的亲水指数(HIc))与非离子清洁表面活性剂的重量比大于1∶1。适合的清洁表面活性剂还包括阳离子清洁表面活性剂(选自以下组：烷基吡啶化合物、烷基季铵化合物、烷基季鏻化合物、烷基三元锍化合物和/或其混合物)；兼性离子和/或两性清洁表面活性剂(选自一组链烷醇胺磺基甜菜碱)；两性表面活性剂；半极性非离子表面活性剂；及其混合物。
本文的洗涤剂例如重垢衣物洗涤剂组合物可以任选地包含表面活性增强聚合物，该表面活性增强聚合物由以下各项组成：两亲烷氧基化油脂清洁聚合物(选自以下组：具有支链亲水和疏水特性的烷氧基化聚合物，例如在0.05wt％-10wt％范围内的烷氧基化聚亚烷基亚胺)和/或无规接枝聚合物(典型地由亲水主链和一个或多个疏水侧链构成，该亲水主链包含选自下组的单体，该组由以下各项组成：不饱和的C1-C6羧酸、醚、醇、醛、酮、酯、糖单元、烷氧基单元、马来酸酐、饱和的多元醇(例如甘油)及其混合物；该一个或多个疏水侧链选自下组，该组由以下各项组成：C4-C25烷基基团、聚丙烯、聚丁烯、饱和的C1-C6单羧酸的乙烯酯，丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯及其混合物)。
本文的洗涤剂例如重垢衣物洗涤剂组合物可以任选地包括另外的聚合物，例如去污聚合物(包括阴离子封端的聚酯(例如SRP1)；包含至少一种选自糖、二羧酸、多元醇及其组合的单体单元的处于无规或嵌段构型的聚合物；基于乙二醇对苯二甲酸酯的聚合物及其处于无规或嵌段构型的共聚物，例如REPEL-O-TEX SF、SF-2AND SRP6、TEXCARE SRA100、SRA300、SRN100、SRN1 70、SRN240、SRN300 AND SRN325、MARLOQUEST SL)；本文的一种或多种抗再沉积剂(0.1wt％至10wt％)，包括羧酸酯聚合物，例如包含至少一种选自丙烯酸、马来酸(或马来酸酐)、富马酸、衣康酸、乌头酸、中康酸、柠康酸、亚甲基丙二酸及其任何混合物的聚合物；乙烯基吡咯烷酮均聚物；和/或聚乙二醇，分子量范围为从500至100,000Da)；以及聚合羧酸酯(例如，马来酸酯/丙烯酸酯无规共聚物或聚丙烯酸酯均聚物)。
本文的洗涤剂例如重垢衣物洗涤剂组合物可以任选地进一步包括饱和或不饱和脂肪酸，优选饱和或不饱和的C12-C24脂肪酸(0wt％至10wt％)；本文披露的沉积助剂(其实例包括多糖；纤维素聚合物；聚联丙烯二甲基卤化铵(DADMAC))；和DAD MAC与乙烯基吡咯烷酮、丙烯酰胺、咪唑、咪唑啉卤化物及其混合物的共聚物(处于无规或嵌段构型)；阳离子瓜尔胶、阳离子淀粉、阳离子聚丙烯酰胺及其混合物)。
本文的洗涤剂例如重型衣物洗涤剂组合物可以任选地进一步包括染料转移抑制剂，其实例包括锰酞菁、过氧化物酶、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑和/或其混合物；螯合剂，其实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五亚甲基膦酸(DTPMP)、羟基乙烷二膦酸(HEDP)、乙二胺N，N′-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、丙二胺四乙酸(PDTA)、2-羟基吡啶-N-氧化物(HPNO)、或甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸N，N-二乙酸酸(N，N-二羧基甲基谷氨酸四钠盐(GLDA)、次氮基三乙酸(NTA)、4，5-二羟基间苯二磺酸、柠檬酸及其任何盐、N-羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、N-羟基乙基亚氨基二乙酸(HEIDA)、二羟基乙基甘氨酸(DHEG)、乙二胺四丙酸(EDTP)及其衍生物。
本文的洗涤剂例如重垢衣物洗涤剂组合物可以任选地包括基于硅酮或脂肪酸的泡沫抑制剂；调色染料、钙和镁阳离子、视觉信号传导成分、止泡剂(0.001wt％至约4.0wt％)、和/或结构剂/增稠剂(0.01wt％至5wt％)，该结构剂/增稠剂选自下组，该组由以下各项组成：甘油二酸酯和甘油三酸酯、乙烯乙二醇二硬脂酸酯、微晶纤维素、超细纤维素、生物聚合物、黄原胶、结冷胶及其混合物)。在某些实施例中，除了一种或多种氧化的右旋糖酐化合物之外，这样的结构剂/增稠剂将包含在洗涤剂中。结构剂(structurant)也可以称为结构试剂(structural agent)。
例如，本文的洗涤剂可以呈重垢干/固体衣物洗涤剂组合物的形式。这样的洗涤剂可以包括：(i)清洁表面活性剂，例如本文披露的任何阴离子清洁表面活性剂、本文披露的任何非离子清洁表面活性剂、本文披露的任何阳离子清洁表面活性剂、本文披露的任何兼性离子和/或两性清洁表面活性剂、任何两性表面活性剂、任何半极性非离子表面活性剂及其混合物；(ii)助洗剂，例如任何无磷酸盐助洗剂(例如，在0wt％至小于10wt％范围内的沸石助洗剂)、任何磷酸盐助洗剂(例如，在0wt％至小于10wt％范围内的三聚磷酸钠)、柠檬酸、柠檬酸盐和次氮基三乙酸、任何硅酸盐(例如，在0wt％至小于10wt％的范围内的硅酸钠或硅酸钾或偏硅酸钠)；任何碳酸盐(例如，在0wt％至小于80wt％的范围内的碳酸钠和/或碳酸氢钠)及其混合物；(iii)漂白剂，例如任何光漂白剂(例如磺化锌酞菁、磺化铝酞菁、呫吨染料及其混合物)；任何疏水或亲水性漂白活化剂(例如十二烷酰氧基苯磺酸盐、癸酰基氧基苯磺酸盐、癸酰基氧基苯甲酸或其盐、3，5，5-三甲基己酰基氧基苯磺酸盐、四乙酰基乙二胺-TAED、壬酰基氧基苯磺酸盐-NOBS、腈季铵盐及其混合物)；任何过氧化氢源(例如，无机过氧水合物盐，其实例包括过硼酸盐、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐或过硅酸盐的单或四水合钠盐)；任何预先形成的亲水和/或疏水过酸(例如过羧酸和盐、过碳酸和盐、过碘酸和盐，过氧单硫酸和盐、及其混合物)；和/或(iv)任何其他组分例如漂白催化剂(例如，亚胺漂白促进剂，其实例包括亚铵阳离子和聚阴离子、亚胺兼性离子、改性胺、改性氧化胺、N-磺酰基亚胺、N-膦酰基亚胺、N-酰基亚胺、噻二唑二氧化物、全氟亚胺、环状糖酮及其混合物)和含金属的漂白催化剂(例如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子以及辅助金属阳离子(例如锌或铝)和螯合(例如EDTA、乙二胺四(亚甲基膦酸))。
本文披露的组合物可以是处于餐具洗涤剂组合物的形式。餐具洗涤剂的实例包括自动餐具洗涤剂(典型地用于餐具洗涤机中)和洗手餐具洗涤剂。餐具洗涤剂组合物可以是例如处于本文披露的任何干或液体/水性形式。可以包括在餐具洗涤剂组合物的某些实施例中的组分包括例如一种或多种磷酸盐；基于氧或氯的漂白剂；非离子表面活性剂；碱性盐(例如偏硅酸盐、碱金属氢氧化物、碳酸钠)；本文披露的任何活性酶；抗腐蚀剂(如硅酸钠)；消泡剂；减缓陶瓷中釉和图案的脱去的添加剂；香料；抗结块剂(在颗粒洗涤剂中)；淀粉(在基于片剂的洗涤剂中)；凝胶化剂(在基于液体/凝胶洗涤剂中)；和/或砂(粉末洗涤剂)。
餐具洗涤剂例如自动餐具洗涤机洗涤剂或液体餐具洗涤剂可以包括(i)非离子表面活性剂，包括任何乙氧基化非离子表面活性剂、醇烷氧基化表面活性剂、环氧封端的聚(氧基烷基化)醇、或以0wt％至10wt％的量存在的氧化胺表面活性剂；(ii)约5wt％-60wt％范围内的助洗剂，包括氧化的右旋糖酐和任何磷酸盐助洗剂(例如单磷酸盐、二磷酸盐、三聚磷酸盐、其他低聚多磷酸盐、三聚磷酸钠-STPP)、任何无磷酸盐助洗剂(例如基于氨基酸的化合物，包括甲基-甘氨酸-二乙酸[MGDA]及其盐或衍生物、谷氨酸-N，N-二乙酸[GLDA]及其盐或衍生物、亚氨基二琥珀酸(IDS)及其盐或衍生物、羧基甲基菊粉及其盐或其衍生物、次氮基三乙酸[NTA]、二亚乙基三胺五乙酸[DTPA]、B-丙氨酸二乙酸[B-ADA]及其盐)、多元羧酸的均聚物和共聚物及其部分或完全中和的盐、在0.5wt％至50wt％范围内的单体多元羧酸和羟基羧酸及其盐、或在约0.1wt％至约50wt％范围内的磺化/羧化聚合物；(iii)在约0.1wt％至约10wt％范围内的干燥助剂(例如，聚酯，特别是阴离子聚酯(任选地与具有有利于缩聚的3至6个官能团-典型地酸、醇或酯官能团的另外的单体一起)，聚碳酸酯-、聚氯酯-和/或聚脲-聚有机硅氧烷化合物或其前体化合物，特别是反应性环状碳酸酯和尿素类型)；(iv)从约1wt％至约20wt％范围内的硅酸盐(例如硅酸钠或硅酸钾，例如二硅酸钠、偏硅酸钠和结晶页硅酸盐)；(v)无机漂白剂(例如，过氧水合物盐例如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐)和/或有机漂白剂(例如有机过氧酸例如二酰基-和四酰基过氧化物，特别是二过氧十二烷二酸、二过氧十四烷二酸和二过氧十六烷二酸)；(vi)漂白活化剂(例如，在从约0.1wt％至约10wt％范围内的有机过酸前体)和/或漂白催化剂(例如，锰三氮环壬烷及相关络合物；Co、Cu、Mn和Fe双吡啶胺及相关络合物；以及五胺乙酸钴(III)及相关络合物)；(vii)在从约0.1wt％至5wt％范围内的金属护理剂(例如苯并三唑、金属盐和络合物、和/或硅酸盐)；和/或(viii)本文披露的任何活性酶(范围为从约0.01mg至5.0mg活性酶/克自动餐具洗涤剂组合物)、和酶稳定剂组分(例如，寡糖、多糖和无机二价金属盐)。
据信，许多可商购的洗涤剂配制品可以适合于包含如本文披露的氧化的右旋糖酐化合物。实例包括
Figure BDA0001420912630000581
ULTRAPACKS(汉高公司(Henkel))、
Figure BDA0001420912630000582
QUANTUM(利洁时公司(Reckitt Benckiser))、CLOROXTM 2PACKS(可洛罗克斯公司(Clorox))、OXICLEAN MAXFORCE POWER PAKS(切迟杜威公司(Church&Dwight))、
Figure BDA0001420912630000583
STAIN RELEASE、
Figure BDA0001420912630000584
ACTIONPACS、和
Figure BDA0001420912630000585
PODSTM(宝洁公司(Procter&Gamble))。
本文披露的组合物可以是例如处于口腔护理组合物的形式。口腔护理组合物的实例包括提供某种形式的口腔护理(例如，治疗或预防空洞[龋齿]、牙龈炎、斑块、牙垢和/或牙周病)的洁牙剂、牙膏、漱口水、口腔清洗剂、口香糖、可食用条(edible strip)和牙霜(tooth cream)/牙凝胶。口腔护理组合物还可以用于治疗“口腔表面”，其涵盖口腔内的任何软或硬表面，包括以下表面：舌头、硬和软腭、颊粘膜、牙龈和牙齿表面的表面。本文的“牙齿表面”是天然牙齿的表面或人造牙列(包括例如牙冠、盖、填料、桥、义齿或牙科植入物)的硬表面。
本文的口腔护理组合物可以包含例如约0.01-15.0wt％(例如，约0.1wt％-10wt％或约0.1wt％-5.0wt％、约0.1wt％-2.0wt％)的一种或多种本文披露的氧化的右旋糖酐化合物。包含在口腔护理组合物中的一种或多种氧化的右旋糖酐化合物有时可以作为可用于赋予该组合物所希望的稠度和/或口感的增稠剂和/或分散剂在其中提供。还可以在本文的口腔护理组合物中提供一种或多种其他增稠剂或分散剂，例如像羧基乙烯聚合物、角叉菜胶(例如，L-角叉菜胶)、天然树胶(例如，梧桐树胶(karaya)、黄原胶、阿拉伯胶、黄芪胶)、胶体硅酸镁铝、或胶体二氧化硅。在一些实施例中，可以包含氧化的右旋糖酐作为助洗剂。
本文的口腔护理组合物可以是例如牙膏或其他洁牙剂。此类组合物以及本文的任何其他口腔护理组合物可以另外包含但不限于一种或多种防龋剂、抗微生物剂或抗细菌剂、抗结石或牙垢控制剂、表面活性剂、研磨料、pH调节剂、泡沫调节剂、湿润剂、食用香料、甜味剂、颜料/着色剂、增白剂和/或其他合适的组分。可以添加一种或多种氧化的右旋糖酐化合物的口腔护理组合物的实例披露于美国专利申请公开号2006/0134025、2002/0022006和2008/0057007中，其通过引用结合在此。
本文的防龋剂可以是口服可接受的氟离子源。氟离子的合适来源包括例如氟化物、单氟磷酸盐和氟硅酸盐以及胺氟化物，包括奥拉氟(N’-十八烷基三亚甲基二胺-N，N，N'-三(2-乙醇)-二氢氟化物)。例如，防龋剂能以向组合物提供总共约100-20000ppm、约200-5000ppm或约500-2500ppm氟离子的量存在。在氟化钠是氟离子的唯一来源的口腔护理组合物中，例如约0.01-5.0wt％、约0.05-1.0wt％或约0.1wt％-0.5wt％氟化钠的量可以存在于组合物中。
适合用于本文的口腔护理组合物的抗微生物剂或抗细菌剂包括例如酚类化合物(例如4-烯丙基儿茶酚；对羟基苯甲酸酯，例如对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯；2-苄基苯酚；丁基化羟基苯甲醚；丁基化羟基甲苯；辣椒素；香芹酚；木焦油醇；丁子香酚；愈创木酚；卤代双酚例如六氯苯酚(hexachlorophene)和溴氯苯酚(bromochlorophene)；4-己基间苯二酚；8-羟基喹啉及其盐；水杨酸酯例如水杨酸薄荷酯、水杨酸甲酯和水杨酸苯酯；苯酚；焦儿茶酚；N-水杨酰苯胺；百里酚；卤代二苯醚化合物，例如三氯生和三氯生单磷酸盐)；铜(II)化合物(例如铜(II)氯化物、氟化物、硫酸盐和氢氧化物)；锌离子源(例如锌乙酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、甘氨酸盐、氧化物和硫酸盐)；邻苯二甲酸及其盐(例如邻苯二甲酸镁单钾)；双辛氢啶；奥替尼淀；血根碱；苯扎氯铵；溴化度灭芬；烷基吡啶氯化物(例如十六烷基吡啶氯化物、十四烷基吡啶氯化物、N-十四烷基-4-乙基吡啶氯化物)；碘；磺酰胺类；二双胍类(例如，阿立西定、氯己定、氯己定二葡糖酸盐)；氮杂环己烷衍生物(例如，地莫匹醇、辛哌醇)；木兰提取物、葡萄籽提取物、迷迭香提取物、薄荷醇、香叶醇、柠檬醛、桉油精；抗生素(例如，沃格孟汀、阿莫西林、四环素、多西环素、米诺环素、甲硝哒唑、新霉素、卡那霉素、克林霉素)和/或美国专利5776435中披露的任何抗细菌剂，其为通过引用结合在此。一种或多种抗微生物剂可以任选地以约0.01-10wt％(例如，0.1wt％-3wt％)存在，例如在所披露的口腔护理组合物中。
适合用于本文的口腔护理组合物的抗结石或牙垢控制剂包括例如磷酸盐和多磷酸盐(例如焦磷酸盐)、聚氯基丙磺酸(AMPS)、柠檬酸锌三水合物、多肽(例如聚天冬氨酸和聚谷氨酸)、聚烯烃磺酸盐、聚烯烃磷酸盐、二膦酸盐(例如氮杂环烷-2，2-二膦酸盐，例如氮杂环庚烷-2，2-二膦酸)、N-甲基氮杂环戊烷-2，3-二膦酸、乙烷-1-羟基-1，1-二膦酸(EHDP)、乙烷-1-氨基-1，1-二膦酸盐和/或膦酰基链烷羧酸及其盐(例如，它们的碱金属盐和铵盐)。有用的无机磷酸盐和多磷酸盐包括例如一元、二元和三元磷酸钠；三聚磷酸钠；四聚磷酸盐；焦磷酸单钠、二钠、三钠和四钠；焦磷酸二氢二钠；三偏磷酸钠；六偏磷酸钠；或钠被钾或铵代替的这些中的任何一种。在某些实施例中，其他有用的抗结石剂包括阴离子多羧酸盐聚合物(例如丙烯酸、甲基丙烯酸和马来酸酐的聚合物或共聚物，例如聚乙烯基甲基醚/马来酸酐共聚物)。其他有用的抗结石剂包括螯合剂，例如羟基羧酸(例如，柠檬酸、富马酸、苹果酸、戊二酸、和草酸及其盐)和氨基多羧酸(例如，EDTA)。一种或多种抗结石或牙垢控制剂可以任选地以约0.01-50wt％(例如，约0.05-25wt％或约0.1wt％-15wt％)存在，例如在所披露的口腔护理组合物中。
适合用于本文的口腔护理组合物的表面活性剂可以是例如阴离子、非离子或两性的。适合的阴离子表面活性剂包括但不限于C8-20烷基硫酸盐的水溶性盐、C8-20脂肪酸磺化单酸甘油酯、肌氨酸盐和牛磺酸盐。阴离子表面活性剂的实例包括月桂基硫酸钠、椰子单甘油酯磺酸钠、月桂基肌氨酸钠、月桂基羟乙基磺酸钠、聚乙二醇单十二醚羧酸钠和十二烷基苯磺酸钠。适合的非离子表面活性剂包括但不限于泊洛沙姆、聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物、叔胺氧化物、叔膦氧化物和二烷基亚砜。适合的两性表面活性剂包括但不限于具有阴离子基团例如羧酸根、硫酸根、磺酸根、磷酸根或膦酸根的C8-20脂肪族仲胺和叔胺的衍生物。适合的两性表面活性剂的实例是椰油酰胺丙基甜菜碱。一种或多种表面活性剂任选地以约0.01-10wt％(例如，约0.05-5.0wt％或约0.1wt％-2.0wt％)的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。
适合用于本文的口腔护理组合物的研磨料可以包括例如二氧化硅(例如硅胶、水合二氧化硅、沉淀二氧化硅)、氧化铝、不溶性磷酸盐、碳酸钙和树脂研磨料(例如，脲-甲醛缩合物产品)。可用作研磨料的不溶性磷酸酯的实例是正磷酸盐、聚偏磷酸盐和焦磷酸盐，并且包括正磷酸二钙二水合物、焦磷酸钙、焦磷酸β-钙、磷酸三钙、聚偏磷酸钙和不溶性聚偏磷酸钠。一种或多种研磨料任选地以约5-70wt％(例如，约10-56wt％或约15-30wt％)的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。在某些实施例中，研磨料的平均粒径为约0.1-30微米(例如约1-20微米或约5-15微米)。
在某些实施例中，口腔护理组合物可以包含至少一种pH调节剂。可以选择这样的试剂将组合物的pH酸化、制成更碱性或缓冲至约2-10的pH范围(例如，pH范围为约2-8、3-9、4-8、5-7、6-10或7-9)。可用于本文的pH调节剂的实例包括但不限于羧酸、磷酸和磺酸；酸性盐(例如柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、苹果酸一钠)；碱金属氢氧化物(例如氢氧化钠、碳酸盐例如碳酸钠、碳酸氢盐、倍半碳酸钠)；硼酸盐；硅酸盐；磷酸盐(例如，磷酸一钠、磷酸三钠、焦磷酸盐)；以及咪唑。
适合用于本文的口腔护理组合物的泡沫调节剂可以是例如聚乙二醇(PEG)。高分子量PEG是适合的，包括例如平均分子量为约200000-7000000(例如约500000-5000000或约1000000-2500000)的那些。一种或多种PEG任选地以约0.1wt％-10wt％(例如，约0.2wt％-5.0wt％或约0.25wt％-2.0wt％)的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。
在某些实施例中，口腔护理组合物可以包含至少一种湿润剂。在某些实施例中，湿润剂可以是多元醇，例如甘油、山梨糖醇、木糖醇或低分子量PEG。最适合的湿润剂也可以用作本文的甜味剂。一种或多种湿润剂任选地以约1.0-70wt％(例如，约1.0-50wt％、约2-25wt％、或约5-15wt％)的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。
天然的或人造的甜味剂可以任选地包含在本文的口腔护理组合物中。适合的甜味剂的实例包括右旋糖、蔗糖、麦芽糖、糊精、转化糖、甘露糖、木糖、核糖、果糖、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆(例如高果糖玉米糖浆或玉米糖浆固体)、部分水解的淀粉、氢化淀粉水解产物、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、异麦芽糖醇、阿斯巴甜、纽甜、糖精及其盐、基于二肽的强甜味剂和环磺酸盐。一种或多种甜味剂任选地以约0.005-5.0wt％的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。
天然的或人造的食用香料可以任选地包含在本文的口腔护理组合物中。适合的食用香料的实例包括香草醛；鼠尾草；马郁兰；欧芹油；留兰香油；肉桂油；冬青油(水杨酸甲酯)；胡椒薄荷油；丁香油；月桂油；茴香油；桉树油；柑橘油；水果油；香精，例如源自于柠檬、橙子、酸橙、葡萄柚、杏、香蕉、葡萄、苹果、草莓、樱桃或菠萝的那些；源自于豆类和坚果的香料，如咖啡、可可豆、可乐、花生或杏仁；以及吸附和包封的食用香料。还涵盖在本文的食用香料中的是在口中提供香味和/或其他感官效果的成分，包括冷却或加温效果。此类成分包括但不限于薄荷醇、乙酸薄荷酯、乳酸薄荷酯、樟脑、桉树油、桉油精、茴香脑、丁子香酚、肉桂、噁烷酮(oxanone)、紫罗兰酮
Figure BDA0001420912630000631
羟甲基茴香脑、麝香草酚、芳樟醇、苯甲醛、肉桂醛、N-乙基-对薄荷烷-3-甲酰胺、N，2，3-三甲基-2-异丙基丁酰胺、3-(1-薄荷氧基)-丙烷-1，2-二醇、肉桂醛甘油缩醛(CGA)和薄荷酮甘油缩醛(MGA)。一种或多种食用香料任选地以约0.01-5.0wt％(例如，约0.1wt％-2.5wt％)的总量存在于例如所披露的口腔护理组合物中。
在某些实施例中，口腔护理组合物可以包含至少一种碳酸氢盐。可以使用任何口服可接受的碳酸氢盐，包括例如碱金属碳酸氢盐例如碳酸氢钠或碳酸氢钾、和碳酸氢铵。例如，一种或多种碳酸氢盐任选地以约0.1wt％-50wt％(例如，约1-20wt％)的总量存在于所披露的口腔护理组合物中。
在某些实施例中，口腔护理组合物可以包含至少一种增白剂和/或着色剂。适合的增白剂是过氧化物化合物，例如在美国专利号8540971中披露的任何一种，其通过引用结合在此。本文中，适合的着色剂包括例如赋予特定光泽或反射率的颜料、染料、色淀和试剂，例如珠光剂。用于本文的着色剂的具体实例包括滑石；云母；碳酸镁；碳酸钙；硅酸镁；硅酸铝镁；二氧化硅；二氧化钛；氧化锌；红色、黄色、棕色、黑色铁氧化物；亚铁氰化铁铵；锰紫；深蓝色；钛云母；以及氯氧化铋。例如，一种或多种着色剂任选地以约0.001-20wt％(例如，约0.01-10wt％或约0.1wt％-5.0wt％)的总量存在于所披露的口腔护理组合物中。
可任选地包括在本文的口腔组合物中的另外的组分包括例如一种或多种酶(上文)、维生素和抗粘结剂。可用于本文的维生素的实例包括维生素C、维生素E、维生素B5和叶酸。适合的抗粘结剂的实例包括对羟基苯甲酸甲酯(solbrol)、无花果蛋白酶和群体感应抑制剂。
本披露还涉及制备具有增加的助洗剂能力和/或抗再沉积能力的水性组合物的方法。该方法包括使本文所披露的至少一种氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物接触，其中与接触步骤之前存在的水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力相比，该化合物增加了所述水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力。在一些实施例中，抗再沉积能力的增加也可以指粘土去除能力的增加。
该方法中的水性组合物可以是本文披露的任何水性组合物，例如像家庭护理产品、个人护理产品、工业产品、药物产品或食物产品。合适的家庭护理产品的实例包括织物护理产品，例如衣物洗涤剂和织物柔软剂，以及餐具洗涤剂。合适的个人护理用品的实例包括护发产品(例如洗发剂、护发素)、洁牙剂组合物(例如牙膏、漱口剂)和护肤品(例如洗手皂或沐浴皂、洗剂、化妆品)。
在一些实施例中，该方法中的水性组合物是洗涤剂和/或表面活性剂组合物。本文中的此类组合物可以包括例如在约0.01-10wt％(例如约0.05-5.0wt％或约0.1-2.0wt％)下的至少一种洗涤剂/表面活性剂成分，例如任一本披露。本领域技术人员能识别出构成含洗涤剂/表面活性剂组合物的实例的本文披露的所有不同产品，例如某些家庭护理产品(例如衣物洗涤剂、餐具洗涤剂)和个人护理产品(例如，洗手皂/沐浴皂、洁牙剂)，特别是用于清洁应用的那些。
将水性组合物与本文中的一种或多种氧化的右旋糖酐化合物接触可以增加水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力。这种增加可以是与接触步骤之前的水性组合物的助洗剂和/或抗沉积能力相比，例如，至少约1％、5％、10％、25％、50％、100％、500％、或1000％(或在1％和1000％之间的任何整数)的增加。助洗剂能力和/或抗再沉积能力的增加可以例如通过比较通过本方法获得的水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力(例如在接触步骤之后)和在该方法之前存在的水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力(例如在接触步骤之前)来测定。可替代地，可以使用不与氧化的右旋糖酐接触但是却与测试组合物含有相同的含量的对照水性组合物。
使用本披露的主题实现的抗再沉积和/或粘土去除能力的程度可以根据例如美国专利号4597898的披露来测量，其通过引用结合在此。例如，可以在采用7谷硬度(grainhardness)水和95°F的温度，在5罐自动小型洗涤机(AMW)中进行抗再沉积比较。将测试样品洗涤10分钟，并在75°F下2次用水(7谷硬度)漂洗2分钟。每个AMW罐充满6升水，之后添加待测试的洗涤剂组合物(对照或进一步含有氧化的右旋糖酐[例如20ppm])并搅拌2分钟。然后添加背景污物混合物(200ppm人造身体污物，100ppm真空吸尘器污物和200ppm粘土污物)，并搅拌另外3分钟。然后添加三个5英寸方形测试样品(50％涤纶/50％棉T恤材料)，以及两个80％棉/20％涤纶毛圈布料和两个100％涤纶针织面料的11英寸方形样品。此时开始10分钟的洗涤周期。在漂洗循环之后，将测试样品在微型干燥器中干燥。然后测定三个测试样品的加德纳白度计读数(L、a和b)。然后根据以下等式计算抗再沉积性能(ARD)：ARD＝(7(L2)-40(L)(b))/700。然后对三个测试样本的ARD值进行平均。测量含有氧化的右旋糖酐的洗涤剂组合物的抗再沉积性能的改善作为ARD值相对于对照组合物的差值。作为测定抗再沉积程度的另一个例子，可以部分地根据以下实施例(吸附研究)中披露的方法对其进行测量。
使用本披露主题实现的增加的助洗剂能力的程度可以按照任何数量的方法来测量。例如，可以通过测定氧化的右旋糖酐化合物向水性组合物提供碱度或缓冲水性组合物以维持碱度的程度来估计由该化合物产生的增加的助洗剂能力。作为另一个实例，可以通过测定氧化的右旋糖酐化合物降低水性组合物硬度(据信，氧化的右旋糖酐可通过螯合(sequester or chelate)硬水阳离子来产生该特征)和/或有助于清除悬浮液中的污物的程度来估计由该化合物产生的增加的助洗剂能力(该特征通常适用于织物护理组合物)。作为另一个实例，可以通过以下实施例(钙分散能力)中披露的方法来测定增加的助洗剂能力。
用于增加水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力的方法中的接触步骤可以根据本领域已知的任何方法通过混合或溶解目前在水性组合物中披露的任何氧化的右旋糖酐化合物来进行。例如，可以手动或用机器(例如，工业混合器或搅拌器、轨道振摇器、搅拌金属板、均化器、超音波样品震碎机、珠磨机)进行混合或溶解。在某些实施例中，混合或溶解可以包括均化步骤。如果需要，均化(以及任何其他类型的混合)可以进行约5至60秒、5至30秒、10至60秒、10至30秒、5至15秒、或10至15秒(或在5秒和60秒之间的任何整数)或更长的时间段，以将氧化的右旋糖酐与水性组合物混合。例如，可以在约5000至30000rpm、10000至30000rpm、15000至30000rpm、15000至25000rpm、或20000rpm(或在5000rpm和30000rpm之间的任何整数)下使用均化器。
将本文的氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物混合或溶解于其中后，可以将所得水性组合物过滤、或不将其过滤。例如，可以将用均化步骤制备的水性组合物过滤或不过滤。
水性组合物的组分(包括氧化的右旋糖酐)组合在一起以形成水性组合物的顺序不被认为是重要的。例如，当添加一种或多种其他成分时，可以同时添加氧化的右旋糖酐(作为一种成分)。因此，将氧化的右旋糖酐与水性组合物接触的特征并不旨在仅指其中将氧化的右旋糖酐添加到最终或接近最终制备的水性组合物中的实施例。
本披露还涉及一种处理材料的方法。该方法包括使材料与包含本文所披露的至少一种氧化的右旋糖酐化合物的水性组合物接触。
在某些实施例中，在本文的接触方法中与水性组合物接触的材料可以包含织物。本文的织物可以包含天然纤维、合成纤维、半合成纤维或其任何组合。本文的半合成纤维使用已经化学衍生化的天然存在的材料生产，该材料的实例是人造丝。本文的织物类型的非限制性实例包括由以下制成的织物：(i)纤维质纤维例如棉花(例如、绒面呢、帆布、有条纹或格子花纹的布、雪尼尔、印花棉布、灯芯绒、大花帘布、锦缎、牛仔布、法兰绒、条纹棉布、提花织物、编织物、马特拉斯织物、牛津布、高级密织棉布、府绸、褶裥(plissé)、棉缎、泡泡纱、透明薄织物、毛巾布、斜纹织物、天鹅绒)、人造丝(例如粘胶、莫代尔、莱赛尔纤维)、亚麻布和
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；(ii)蛋白质纤维例如丝、羊毛和相关的哺乳动物纤维；(iii)合成纤维例如聚酯、丙烯酸、尼龙等；(iv)黄麻、亚麻、苎麻、椰壳纤维、木棉、剑麻、赫纳昆纤维、马尼拉麻、大麻和柽麻的长植物纤维；以及(v)(i)-(iv)的织物的任意组合。包含纤维类型(例如天然和合成)的组合的织物包括例如具有棉纤维和聚酯的那些。包含一种或多种本文的织物的材料/物品包括例如服装、窗帘、帷帘、室内装饰品、地毯、床上用品、浴室用单巾类织物、桌布、睡袋、帐篷、汽车内饰等。包括天然和/或合成纤维的其他材料包括例如无纺布、垫料、纸和泡沫。
与织物接触的水性组合物可以是例如织物护理组合物(例如衣物洗涤剂、织物柔软剂)。因此，如果在处理方法中使用织物护理组合物，则在某些实施例中该处理方法可以被认为是织物护理方法或洗衣方法。预期本文的织物护理组合物将影响以下织物护理益处(即，表面实质性效果)中的一种或多种：去皱、减皱、抗皱、织物磨损降低、织物耐磨性、织物起球减少、延长织物寿命、织物颜色维护、织物褪色减少、染料转移减少、织物颜色恢复、织物污渍减少、织物污垢释放、织物形状保持、织物光滑度增强、织物上污渍抗再沉积、衣物抗变灰、改进的织物手感(fabric hand)/质感(handle)和/或织物收缩减少。
本文中用于进行织物护理方法或洗衣方法的条件(例如，时间、温度、洗涤/漂洗体积)的实例披露于WO 1997/003161和美国专利号4794661、4580421和5945394中，其通过引用结合在此。在其他实例中，包含织物的材料可以与本文的水性组合物接触：(i)持续至少约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、或120分钟；(ii)在至少约10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、或95℃的温度下(例如，对于衣物洗涤或漂洗：约15℃-30℃的“冷”温度、约30℃-50℃的“温”温度、约50℃-95℃的“热”温度)；(iii)在约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12(例如约2-12或约3-11的pH范围)的pH下；(iv)在至少约0.5wt％、1.0wt％、1.5wt％、2.0wt％、2.5wt％、3.0wt％、3.5wt％、或4.0wt％的盐(例如NaCl)浓度下；或(i)-(iv)的任意组合。
例如，织物护理方法或洗衣方法中的接触步骤可以包括任何洗涤、浸泡和/或漂洗步骤。在又进一步的实施例中与材料或织物接触可以通过本领域已知的任何方法进行，例如溶解、混合、振摇、喷雾、处理、浸渍、冲洗、浇注或浇入、结合、涂色、涂覆、施加、粘贴和/或将本文的有效量的氧化的右旋糖酐化合物与织物或材料进行连通。在又进一步的实施例中，接触可以用于处理织物以提供表面实质性效果。如本文所使用的，术语“织物手感”(fabric hand)或“质感”(handle)是指个人对于织物的可能是身体、生理、心理、社会或其任何组合的触觉感觉反应。在一个实施例中，织物手感可以使用用于测量相对手感值的
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系统来测量(获自加利福尼亚州戴维斯的Nu Cybertek有限公司(NuCybertek，Inc.Davis，CA))(美国纺织化学家和染色家协会(American Association ofTextile Chemists and Colorists)(AATCC测试方法“202-2012，纺织品的相对手感值：仪器方法(202-2012，Relative Hand Value of Textiles：Instrumental Method)”))。
在处理包含织物的材料的某些实施例中，水性组合物的一种或多种氧化的右旋糖酐化合物组分吸附在织物上。据信，这种特征使得本文的氧化的右旋糖酐化合物可用作织物护理组合物中的抗再沉积剂和/或抗变灰剂(除了它们的污物分散作用)。本文的抗再沉积剂或抗变灰剂有助于防止污渍被去除后该污渍再沉积在洗涤水中的衣物上。进一步预期将一种或多种本文氧化的右旋糖酐化合物吸附到织物上增强了织物的机械性能。
将氧化的右旋糖酐化合物吸附到本文的织物上可以使用例如比色技术(例如，杜布瓦(Dubois)等人，1956，分析化学(Anal.Chem.)28：350-356；
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等人，2006，兰精报道(Lenzinger Berichte)85：68-76；两者都通过引用结合在此)，或本领域已知的任何其他方法来测量。
可以在上述处理方法中接触的其他材料包括可以用餐具洗涤剂(例如自动餐具洗涤剂或手洗餐具洗涤剂)处理的表面。此类材料的实例包括由陶瓷材料、瓷器、金属、玻璃、塑料(例如聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等)和木材制成的餐具、玻璃制品、盆、盘状器皿、烘烤盘、炊具和扁平的餐具(这里统称为“食具”(tableware))。因此，在某些实施例中，处理方法可以被认为是例如餐具洗涤方法或食具洗涤方法。在美国专利号8575083中披露了用于进行餐具洗涤或食具洗涤方法的条件(例如，时间、温度、洗涤体积)的实例，其通过引用结合在此。在其他实例中，食具物品可以在适当的一组条件下与本文的水性组合物接触，例如以上披露的关于与含织物材料接触的任何一种。
可以在上述处理方法中接触的其他材料包括口腔表面，例如在口腔内的任何软或硬表面，包括以下各项的表面：舌头、硬和软腭、颊粘膜、牙龈和牙齿表面(例如，天然牙齿或人造牙列(例如牙冠、盖、填料、桥、义齿或牙科植入物)的硬表面)。因此，在某些实施例中，处理方法可以被认为是例如口腔护理方法或牙齿护理方法。用于使口腔表面与本文的水性组合物接触的条件(例如时间、温度)应当适合于进行此类接触的预期目的。在处理方法中接触的其他表面还包括皮肤、毛发或指甲等皮肤系统的表面。
因此，本披露的某些实施例涉及包含本文的氧化的右旋糖酐化合物的材料(例如织物)。这样的材料可以按照例如本文披露的材料处理方法来制备。在某些实施例中，如果化合物被吸附到材料的表面或以其他方式与材料的表面接触，则材料可以包含氧化的右旋糖酐化合物。
本文处理材料的方法的某些实施例进一步包括干燥步骤，其中材料在与水性组合物接触后被干燥。干燥步骤可以在接触步骤之后直接进行，或者在可以紧跟在接触步骤之后的一个或多个附加步骤之后进行(例如，在本文的水性组合物中洗涤后，例如在水中漂洗之后干燥织物)。可以通过本领域已知的几种方法中的任何一种，例如空气干燥(例如约20℃-25℃)，或例如在至少约30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、120℃、140℃、160℃、170℃、175℃、180℃、或200℃的温度下进行干燥。本文中已经干燥的材料典型地含有包含在其中的少于3wt％、2wt％、1wt％、0.5wt％、或0.1wt％的水。织物是用于进行任选的干燥步骤的优选材料。
本文的处理方法中使用的水性组合物可以是本文披露的任何水性组合物。因此，水性组合物的一种或多种氧化的右旋糖酐组分可以是本文披露的任何一种或多种。水性组合物的实例包括洗涤剂(例如衣物洗涤剂或餐具洗涤剂)和含水的洁牙剂例如牙膏。
本披露还涉及用于生产氧化的右旋糖酐化合物的方法。该方法包括：在水性条件下使右旋糖酐与(i)至少一种N-氧代铵盐、(ii)至少一种高碘酸盐化合物和/或(iii)至少一种过氧化物化合物接触，其中所述右旋糖酐由N-氧代铵盐、高碘酸盐化合物和/或过氧化物化合物氧化，从而产生氧化的右旋糖酐化合物。在该方法中使用的右旋糖酐可以是如本文所披露的。通过该方法生产的氧化的右旋糖酐化合物可以任选地被分离。
在氧化方法的某些实施例中，N-氧代铵盐可以包含TEMPO氧代铵盐。此类N-氧代铵盐的实例包括TEMPO氧代铵盐本身(结构II)和4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐(结构III)。本文中的N-氧代铵盐可以是例如环状N-氧代铵盐。在某些实施例中，环状N-氧代铵盐由结构VI(上文)表示。所披露的方法中的N-氧代铵盐可以是在碳位置4(其中TEMPO氧代铵盐的环中的N+的位置为1)处具有取代的TEMPO氧代铵盐。
TEMPO氧代铵盐能以氧化方法提供，例如通过在TEMPO氧代铵盐与右旋糖酐接触的水性条件下氧化包含TEMPO的试剂来提供。包含TEMPO的试剂是包含结构IV的试剂/化合物。包含TEMPO的试剂的实例是TEMPO本身(结构IV)和4-乙酰胺基-TEMPO(结构V)。包含TEMPO的试剂的其他实例可以由结构VII(上文)表示。如结构VI所示，这些试剂中的每一种都可以通过在水性条件下与一种或多种氧化剂接触而转化成其相应的氧代铵盐。鉴于TEMPO及其衍生物，如上文的(4-乙酰胺基-TEMPO)是环状硝酰基化合物的实例，可以使用环状硝酰基化合物来提供本文中的TEMPO氧代铵盐。
通过使试剂与一种或多种“氧化剂(oxidation agents)”(或“氧化剂(oxidant)”)接触，包含TEMPO的试剂可以在氧化方法的水性条件下被氧化成其相应的氧代铵盐。该接触可以在与右旋糖酐与N-氧代铵盐接触的相同水性条件下进行。在一些实施例中，本文中用于氧化右旋糖酐的反应最初可以制备成在水性条件下包含至少右旋糖酐、包含TEMPO(例如结构VII)的试剂和一种或多种氧化剂。该一种或多种氧化剂可以将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐(例如结构VI)，进而氧化右旋糖酐。
氧化方法中披露的氧化剂的非限制性实例包括一种或多种“无机氧化剂(inorganic oxidation agents)”(或“无机氧化剂(inorganic oxidant)”)。可用于在本方法的水性条件下将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐的氧化剂的实例包括一种或多种岩盐(例如亚氯酸盐，像亚氯酸钠[NaClO2])或次卤酸盐(例如，次氯酸盐，像次氯酸钠[NaClO])。氧化剂(无机或有机)的其他实例包括卤化物盐如KCl、KBr、NaCl、NaBr或NaI，次卤酸盐如NaOBr，金属如Fe(III)、Mn(II)、Mn(III)或Cu(II)，KMnO4，Mn(OAc)3，Mn2O3，MnO2，Mn(NO3)2，MgCl2，Mg(OAc)2，Cu(NO3)2，二乙酸碘苯[PhI(OAc)2]，Ca(ClO)2，t-BuOCl，CuCl-O2，NaBrO2，Cl2，Br2和三氯异氰尿酸中的一种或多种。
在用于氧化右旋糖酐的方法中使用水性条件。该方法中的水性条件是指其中溶剂为例如至少约60wt％的水的溶液或混合物。可替代地，水性条件例如可以是至少约65wt％、70wt％、75wt％、80wt％、85wt％、90wt％或95wt％(或60wt％至95wt％之间的任何整数值)的水。本文中的水性条件可以包含在合适的浓度下的缓冲液，例如酸性、中性或碱性缓冲液，并且基于由缓冲液提供的pH范围进行选择。缓冲液的实例包括柠檬酸、乙酸、KH2PO4、CHES和硼酸盐。
本文氧化方法的水性条件可以是酸性的(例如，pH 5.5或更低)。可替代地，pH可为约2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0或5.5。酸性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加乙酸和/或乙酸盐。例如，乙酸钠缓冲液(乙酸盐缓冲液)(pH 4-5)(例如0.2-0.3M溶液)可提供酸性条件。
本文中的氧化方法的水性条件可以是碱性的，例如具有8.5或更高的pH。可替代地，pH可为例如约8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5或12。碱性条件可以通过本领域已知的任何方法制备，例如通过向溶液或混合物中添加碱性氢氧化物(例如氢氧化钠)。
在氧化方法中的某些实施例中的高碘酸盐化合物可以是例如高碘酸金属盐(例如高碘酸钠或高碘酸钾)。在一些方面，高碘酸盐化合物可以是偏高碘酸盐(例如NaIO4)或原过碘酸盐。用高碘酸盐化合物氧化右旋糖酐的条件可以遵循美国专利号3086969、6800753、5747658和/或6635755中所披露的那些条件，这些专利全部在此通过引用并入本文；和/或遵循例如下文实例10和11中所披露的条件。通常，使用高碘酸盐的反应包括在高碘酸盐水溶液中提供右旋糖酐。高碘酸盐在反应中的浓度可以为例如约1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％或10wt％。包含高碘酸盐的本文的反应温度可以在例如约18℃至约40℃之间(例如室温)。在某些实施例中，包含高碘酸盐的反应可进行约1-72小时(例如约5小时或约48小时)。
在本文的氧化方法的一些方面，氧化的右旋糖酐化合物是通过首先使右旋糖酐与高碘酸盐化合物接触，然后将右旋糖酐(例如，高碘酸盐氧化的右旋糖酐)与N-氧代铵盐接触来生产。这样一种顺序氧化处理可以遵循本文披露的任何方法，例如以下实例11。在将高碘酸盐氧化的右旋糖酐与N-氧代铵盐接触之前，可以任选地先将其从高碘酸盐反应中分离(例如通过醇沉淀)。
在本文氧化方法的某些实施例中，过氧化合物可以是例如过氧化氢(H2O2)。在一些方面，过氧化物化合物可以是无机过氧化物化合物或有机过氧化物化合物。本文中合适的过氧化物化合物还包括例如过硼酸盐-一水合物、过硼酸盐-四水合物、过碳酸盐、碱性过硫酸盐、过硅酸盐和过柠檬酸盐(其中钠或钙是优选的阳离子)、以及脲或氧化胺的过氧化氢加合物。
用过氧化物化合物氧化右旋糖酐的条件可以遵循例如以下实例14中所披露的那些。通常，使用过氧化物(例如H2O2)的反应包括在过氧化氢水溶液中提供右旋糖酐。例如，反应中过氧化物的量可以是约1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％或10wt％，其中此类wt％是相对于存在于反应中的右旋糖酐的量。在一些实施例中，使用本文中的过氧化物化合物的反应可以具有中性pH(例如，pH 6-8)。包含高碘酸盐的反应温度可以在例如约110℃至约140℃之间(例如约121℃)。应当理解，实现此类升高的反应温度可以包括施加压力，例如可以用高压釜或其他高压装置来提供。在某些实施例中，包含过氧化物的反应可进行约30分钟至约120分钟(例如约60分钟)。
在本文的氧化方法的一些方面，氧化的右旋糖酐化合物是通过首先使右旋糖酐与过氧化物化合物接触，然后将过氧化物氧化的右旋糖酐与N-氧代铵盐接触来生产。
在不存在螯合剂(例如EDTA)的情况下，此处披露的氧化方法的某些实施例中的右旋糖酐可以与过氧化物化合物接触，而在其他实施例中任选地可以螯合剂存在下进行该接触。
例如，在氧化方法的水性条件下可以包括约或至少约0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、11wt％或12wt％的右旋糖酐。在将高碘酸盐化合物、过氧化物化合物和/或包含TEMPO和/或氧化剂(将包含TEMPO的试剂转化成其相应的氧代铵盐)的试剂添加到水性条件中之前或之后，可以在水性条件下将右旋糖酐混合或溶解。这些具体实施例中的氧化剂可以是例如亚氯酸钠、溴化钠和/或次氯酸钠(或本文列出的任何其他氧化剂)。
例如，在该方法的水性条件下，可以包括约或至少约0.05wt％、0.075wt％、0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％或2wt％的试剂，该试剂包含TEMPO，例如TEMPO和/或4-乙酰胺基-TEMPO。在某些实施例中，可以将包含TEMPO的试剂添加到其中已经混合或溶解有右旋糖酐的水性条件中。此类添加可以在将氧化剂添加水性条件之前、之后或之时进行。
例如，在该方法的水性条件下，可以包括约或至少约0.1wt％、0.25wt％、0.5wt％、0.75wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％、35wt％、40wt％、45wt％、或50wt％的氧化剂，如亚氯酸钠、溴化钠和/或次氯酸钠(或本文列出的任何其他氧化剂)。在某些实施例中，可将氧化剂添加到其中已经混合或溶解有右旋糖酐的水性条件中。
所披露的氧化方法的某些实施例中的水性条件初始可以于缓冲液(例如，pH约4-5的乙酸钠缓冲液)中含有右旋糖酐、含有TEMPO(例如4-乙酰胺基-TEMPO)的试剂和一种或多种氧化剂(例如亚氯酸钠和/或次氯酸钠)。任选地，在制备该特定水性条件时不包括另外的组分。这些特定的水性条件可以在约18℃至约40℃(例如室温)的温度下保持约24-96小时(例如约48小时)。
所披露的方法的某些实施例中的水性条件初始可以于碱性溶液(例如，pH约10.5-11.5的氢氧化钠溶液)中含有右旋糖酐、含有TEMPO(例如4-乙酰胺基-TEMPO)的试剂和一种或多种氧化剂(例如溴化钠和/或次氯酸钠)。任选地，在制备该特定水性条件时不包括另外的组分。这些特定的水性条件可以在约18℃至约40℃(例如室温)的温度下保持约0.5-5小时(例如约1小时)。
例如，通过混合，可以在水性条件下将右旋糖酐与至少一种高碘酸盐化合物、过氧化物化合物和/或N-氧代铵盐接触。可以通过手动混合、使用顶置式混合器混合、使用磁力搅拌棒、或摇动来进行混合。这种混合可以在将右旋糖酐、包含TEMPO(和/或高碘酸盐化合物或过氧化物化合物)的试剂和一种或多种氧化剂中的每一种添加到水性条件期间和/或之后进行。如上所述此类水性条件允许包含TEMPO的试剂和一种或多种氧化剂之间的接触，从而将包含TEMPO的试剂转化成其相应的N-氧代铵盐。然后，该N-氧代铵盐可接触并氧化右旋糖酐。
水性条件下，本文中的右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、过氧化物和/或高碘酸盐接触的时间可以是例如至少约0.5、1、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、72或96小时(或1至96小时之间的任何整数值)。在某些实施例中，反应可保持约0.5-5小时(例如约1小时)或24-96小时(例如约48小时)。在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、过氧化物和/或高碘酸盐接触的时间可以例如从每个反应组分在水性条件下溶解和/或混合后的时间点来测量。
在某些实施例中(例如，当使用高碘酸盐和/或N-氧代铵盐时)，所披露方法的水性条件的温度可以为约18℃至约40℃(或18℃至40℃之间的任何整数值)。该方法的某些实施例中的水性条件可以保持在约20℃-25℃的温度下。可以从其中每个反应组分在水性条件下溶解和/或混合的时间开始保持水性条件的温度，直到反应完成。任选地，向其中添加每种反应组分的初始水性条件可以处于用于保持反应的温度。
任选地，在有或没有加热的情况下，本文的反应可以保持在惰性气体下。如本文所用，术语“惰性气体”是指在一组给定条件下不经历化学反应的气体，例如用于制备本文的反应所披露的那些。
在完成其中使用酸性或碱性水性条件的氧化反应后，反应的pH可任选地被中和。可以使用一种或多种碱(例如碱金属氢氧化物如氢氧化钠)进行酸性反应的中和。可以使用一种或多种酸(例如无机酸如盐酸)进行碱性反应的中和。本文所用的术语“中性pH”是指不是实质上的酸性或碱性的pH(例如，pH为约6-8，或约6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0)。
在本文氧化反应中产生的氧化的右旋糖酐化合物可以任选地被分离。此类产物可以首先从反应的水性条件中沉淀出来。可以通过向反应中添加过量(例如至少2-3倍反应体积的体积)的醇(例如，100％或95％浓度)如乙醇或异丙醇来进行沉淀。然后可以使用过滤漏斗、离心机、压滤机或本领域已知的允许从固体中除去液体的任何其他方法或设备来分离沉淀的产物。例如，可以使用真空过滤来分离氧化的右旋糖酐产物。可以使用本领域已知的任何方法干燥分离的化合物，例如真空干燥、空气干燥或冷冻干燥。
在本文氧化反应中生产的氧化的右旋糖酐化合物可以任选地在沉淀后用不容易溶解该化合物的液体洗涤一次或多次。例如，氧化的右旋糖酐可以用醇、丙酮、芳族化合物或这些的任意组合洗涤，这取决于其中氧化的化合物的溶解度(其中在洗涤时溶解性缺乏是需要的)。通常，优选用于洗涤氧化的右旋糖酐化合物的是包含有机溶剂(例如95％-100％)如醇的溶剂。氧化的右旋糖酐化合物可以用例如含有醇(例如甲醇或乙醇)的水溶液洗涤一次或多次。
可以使用本文生产的氧化的右旋糖酐化合物作为进一步改性的起始材料来重复上述任何氧化反应。例如，已经被高碘酸盐氧化的右旋糖酐可以进行另一轮高碘酸盐氧化，或用另一种试剂如N-氧代铵盐进行氧化。
根据本披露，本文中的右旋糖酐可以任选地以被氧化之前的预处理形式提供。预处理形式的实例是已经用除了该即时披露的主题的实施例中使用的氧化剂之外的氧化剂处理的右旋糖酐。因此，本文中某些方面的右旋糖酐能以预氧化形式提供。预期在某些实施例中，此类预氧化材料将包含一定量的未被氧化的完整右旋糖酐聚合物。据信，氧化前的右旋糖酐可以例如通过应用加拿大专利公开号2028284和2038640，以及美国专利号4985553、2894945、5747658和7595392中所披露的氧化方法来制备，其全部通过引用结合在此。
氧化的右旋糖酐产物的结构和分子量可以使用本领域已知的各种物理化学分析来确定，例如NMR光谱法和尺寸排阻色谱法(SEC)。
本文披露的右旋糖酐的任何实施例可用于例如氧化反应中。可以在制备氧化反应的一些方面中提供干燥形式(例如粉末、薄片)、湿形式(例如水溶液)或任何其他合适形式的右旋糖酐。作为另一个实例，右旋糖酐能以本文披露的右旋糖酐合成反应(gtf反应)的形式提供，该反应含有至少右旋糖酐、水、果糖和葡萄糖基转移酶。
本文披露的组合物和方法的非限制性实例包括：
1.一种包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物，其中所述氧化的右旋糖酐化合物通过在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触来产生，其中所述右旋糖酐包含：
(i)约87wt％-93wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii)约0.1wt％-1.2wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii)约0.1wt％-0.7wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv)约7.7wt％-8.6wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及
(v)约0.4wt％-1.7wt％在以下位置处连接的葡萄糖：
(a)位置1、2和6，或
(b)位置1、4和6；
并且其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为约5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为约200-280nm。
2.如实施例1所述的组合物，其中所述右旋糖酐包含：(i)约89.5wt％-90.5wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.4wt％-0.9wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.3wt％-0.5wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约8.0wt％-8.3wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.7wt％-1.4wt％在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6。
3.如实施例1或2所述的组合物，其中所述右旋糖酐包含在分支结构内连接在一起的链，其中这些链长度相似并且主要包含α-1，6-糖苷键。
4.如实施例3所述的组合物，其中所述链的平均长度为约10-50个单体单元。
5.如实施例1、2、3或4所述的组合物，其中所述右旋糖酐是葡萄糖基转移酶的产物，该葡萄糖基转移酶包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9、SEQID NO：13、或SEQ ID NO：17具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.实施例1、2、3、4或5的组合物，其中所述右旋糖酐与高碘酸盐化合物接触。
7.实施例1、2、3、4或5的组合物，其中所述右旋糖酐首先与高碘酸盐化合物接触，然后与N-氧代铵盐接触。
8.实施例1、2、3、4、5或7的组合物，其中所述N-氧代铵盐包含TEMPO氧代铵盐。
9.如实施例1-8中任一项所述的组合物，其中所述组合物是家用产品、个人护理产品、工业产品、药物产品或食物产品。
10.如实施例9所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物，并且另外其中所述组合物优选为家用产品。
11.一种产生氧化的右旋糖酐化合物的方法，该方法包括：(a)使右旋糖酐在水性条件下与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触，其中所述右旋糖酐包含：(i)约87wt％-93wt％在位置1和6处连接的葡萄糖；(ii)约0.1wt％-1.2wt％在位置1和3处连接的葡萄糖；(iii)约0.1wt％-0.7wt％在位置1和4处连接的葡萄糖；(iv)约7.7wt％-8.6wt％在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及(v)约0.4wt％-1.7wt％在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6；其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为约5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为约200-280nm；其中所述右旋糖酐被N-氧代铵盐、高碘酸盐化合物和/或过氧化物化合物氧化，从而产生氧化的右旋糖酐化合物，以及(b)任选地分离氧化的右旋糖酐化合物。
12.如实施例11所述的方法，其中：(I)所述右旋糖酐与高碘酸盐化合物接触；或者(II)所述右旋糖酐首先与高碘酸盐化合物接触，然后与N-氧代铵盐接触。
13.如实施例11或12的方法，其中所述N-氧代铵盐包含：(I)TEMPO氧代铵盐，或(II)4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐；任选地其中通过在水性条件下氧化包含TEMPO的试剂来提供TEMPO氧代铵盐或4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。
14.一种提高水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力的方法，其中所述方法包括：使根据实施例11-13中任一项是所述的方法生产的或如实施例1-8所述的氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物接触，其中与该接触步骤之前的水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力相比，该氧化的右旋糖酐化合物增加了该水性组合物的助洗剂能力和/或抗再沉积能力。
15.一种处理材料的方法，所述方法包括：使材料与包含(i)根据实施例11-13中任一项所述的方法生产的或(ii)如实施例1-8所述的氧化的右旋糖酐化合物的水性组合物接触。
实例
实例1-6和8-14对本披露做了进一步的举例说明。应该理解，这些实例尽管说明了本文的某些优选方面，但仅是以例证的方式给出的。从上述论述和这些实例中，本领域的技术人员可确定所披露的实施例的必要特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可进行各种变化和修改以使所披露的实施例适应多种用途和条件。
一般方法
在枯草芽孢杆菌中克隆和表达葡萄糖基转移酶
在实例3-6中使用的每种葡萄糖基转移酶如下进行制备。
编码gtf酶的质粒(pZZHB582、pZZHB583、pZZHB584、或pZZHB585，其允许gtf从枯草芽孢杆菌表达和分泌；参见图2A-D)使用Illustra
Figure BDA0001420912630000811
100扩增试剂盒(GE医疗集团生命科学部(GE Healthcare Life Sciences)，新泽西州)进行扩增。用扩增产物转化感受态枯草芽孢杆菌细胞(ΔspoIIE、ΔaprE、ΔnprE、degUHy32、ΔscoC、ΔnprB、Δvpr、Δepr、ΔwprA、Δmpr、ΔispA、Δbpr)。将细胞涂板在补充有5ppm氯霉素的卢里亚琼脂(LuriaAgar)平板上。将来自转化板的菌落接种到5mL LB培养基中，并在37℃下孵育过夜。然后将来自每个培养物的等分试样(25-50μL)转移到含有30mL补充有5ppm氯霉素的格兰特氏(Grant′s)II培养基的250mL摇瓶中，并在30℃下振摇(280rpm)孵育24小时。通过以14000rpm离心1小时收获细胞。通过SDS-PAGE针对分泌的gtf产物对上清液进行分析，并进一步对含有20mM Tris(pH 7.5)的溶液进行三次透析，持续共20小时。将透析的样品等分为25mL/50mL锥形离心管，并将这些管成一个角度在-80℃下放置约1小时。一旦样品被冷冻，移开管盖并且用封口膜(PARAFILM)代替，该封口膜用高规格针(high-gauge needle)刺穿5-10次。根据制造商的说明，在
Figure BDA0001420912630000812
冷冻干燥系统(拉布康科公司(LabconcoCorp.)，密苏里州堪萨斯市(Kansas City，MO))中冻干封口膜覆盖的冷冻样品。
葡萄糖基转移酶的储备溶液
通过将10mL的分子级H2O添加到各自含有冻干酶粉末的50mL锥形离心管中针对每种gtf制得酶储备溶液。
实例1
葡萄糖基转移酶(0768)在大肠杆菌中的表达和活性粗酶裂解物的生产
该实例描述了成熟的葡萄糖基转移酶(gtf)酶在大肠杆菌中的表达。产生大肠杆菌表达菌株的粗细胞裂解物，并且在蔗糖存在下显示凝胶产物形成活性。
通过全基因组鸟枪法测序，从假肠膜明串珠菌菌株KCTC3652中鉴定出具有1484个氨基酸的推定的含YG重复的水解酶(在基因库中归类于GI编号339480768，但现在具有GI编号497964659)。该推定的葡萄糖基转移酶(本文中称为gtf 0768)属于含有葡聚糖结合结构域的糖基水解酶的GH70家族。通过SIGNALP 4.0程序将gtf 0768的N-末端37个氨基酸区段推导为酶的信号肽(彼得森(Petersen)等人，自然方法(Nature Methods)8：785-786)。gtf0768的成熟形式由SEQ ID NO：1表示。
为了构建用于gtf 0768的细菌表达的质粒，由美国金斯瑞有限公司(GenScriptUSA Inc.)(新泽西州皮斯卡塔韦(Piscataway，NJ))合成编码gtf的没有信号肽的成熟形式的DNA序列。将合成的序列亚克隆到pET23D+载体的NheI和HindIII位点(
Figure BDA0001420912630000821
默克集团(Merck KGaA)，达姆施塔特，德国)。与野生型成熟(预测)形式的gtf0768(SEQ ID NO：1)相比，由该构建体编码的0768gtf(SEQ ID NO：2)包括N-末端处的起始甲硫氨酸和3个另外的氨基酸(Ala-Ser-Ala)和C-末端处的6个组氨酸残基(即，SEQ ID NO：1包含在SEQ IDNO：2中)。质粒构建体被测序确认，并且转化到含有氨苄青霉素选择的大肠杆菌BL21 DE3宿主细胞中，得到表达菌株EC0052。
将EC0052的细胞和仅含有空的pET23D+载体的对照菌株在含有100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中生长至OD600约0.5，然后在37℃下用1mM IPTG诱导3小时，或者可替代地在23℃下诱导过夜。在该诱导期后，细胞通过以4000xg离心10min收集并重悬于pH 6.8的PBS缓冲液中。然后将细胞通过以14,000psi(约96.53MPa)穿越弗细胞压碎器两次来裂解，其后通过以15,000xg离心20min沉淀细胞碎片。将每个粗细胞裂解物的上清液等分并在-80℃下冷冻。
通过与蔗糖反应来检查来自EC0052细胞的粗细胞裂解物的活性。使用从含有空载体的细胞制备的细胞裂解物类似地建立对照反应。使用10％(v/v)细胞裂解物，与100g/L蔗糖、10mM柠檬酸钠(pH 5)和1mM CaCl2一起建立每个蔗糖反应。在37℃下孵育反应数小时后，在已经添加了EC0052细胞裂解物的管中形成一种被认为是右旋糖酐的凝胶样产物。在对照反应中不形成凝胶样产物。HPLC分析证实了在含有EC0052细胞裂解物的反应中消耗了蔗糖，而在对照反应中没有。该结果表明EC0052粗细胞裂解物表达了活性gtf0768酶，并且该gtf产生了具有高粘度的右旋糖酐产物。
因此，包含水、蔗糖和含有SEQ ID NO：1的酶的反应合成了被认为是右旋糖酐的凝胶化产物。该结果表明，gtf 0768可能具有葡萄糖基转移酶活性。该产品可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。
实例2
蔗糖与Gtf 0768的反应和凝胶化右旋糖酐反应产物的分析
该实例描述了包含水、蔗糖和gtf 0768的另一个反应，补充了实例1中提供的结果。而且，该实例提供了由gtf 0768合成的凝胶化产物的配糖键分析，显示该产物是右旋糖酐的一种类型。
制备gtf反应的试剂：
-蔗糖(西格玛(Sigma)产品号S-9378)。
-磷酸钠缓冲液储备液(200mM)(pH 5.5)：相应地，使用磷酸二氢钠一水合物(西格玛(Sigma)产品号S9638)和磷酸氢二钠七水合物(西格玛(Sigma)产品号S9390)，在水中制备250mL。
-Gtf 0768酶溶液(如在实例1中制备的细胞裂解物)。
三种gtf反应条件：
制备含有2.72g磷酸钠缓冲液储备液(pH 5.5)、100g/L蔗糖和2mL的gtf0768酶溶液的1000mL反应。将反应在26℃下搅拌持续20小时，并使其变成粘性的。通过在80℃下加热该反应10分钟使gtf酶失活。然后将失活的粘性反应与3升的100％甲醇混合以沉淀粘性产物。形成白色沉淀，然后将其过滤，随后用120ml的100％甲醇洗涤4次。在烘箱中，将固体产物在室温下、真空中干燥72小时。
制备含有1.97g磷酸钠缓冲液、300g/L蔗糖和1.45mL的gtf 0768酶溶液的725mL反应物。将反应在26℃下搅拌持续20小时，并使其变成粘性的。通过向反应混合物中添加甲醇使gtf酶失活。然后将失活的反应物与3升的100％甲醇混合以沉淀粘性产物。形成白色沉淀，然后将其过滤，随后用120mL的100％甲醇洗涤4次。在烘箱中，将固体产物在室温下、真空中干燥72小时。
制备含有0.544g磷酸钠缓冲液、400g/L蔗糖和0.4mL的gtf 0768酶溶液的200mL反应物。将反应在26℃下搅拌持续20小时，并使其变成粘性的。通过向反应混合物中添加甲醇使gtf酶失活。然后将失活的反应物与3升的100％甲醇混合以沉淀粘性产物。形成白色沉淀，然后将其过滤，随后用120mL的100％甲醇洗涤4次。在烘箱中，将固体产物在室温下、真空中干燥72小时。
制备含有0.544g磷酸钠缓冲液、800g/L蔗糖和0.4mL的gtf 0768酶溶液的200mL反应物。将反应在26℃下搅拌持续20小时，并使其变成粘性的。通过向反应混合物中添加甲醇使gtf酶失活。然后将失活的反应物与3升的100％甲醇混合以沉淀粘性产物。形成白色沉淀，然后将其过滤，随后用120ml的100％甲醇洗涤4次。在烘箱中，将固体产物在室温下、真空中干燥72小时。
每个反应的样品(100μL)分别在0、2、4和18小时采集。通过在80℃下加热10分钟，在每个样品中使gtf酶失活。然后将每个样品用水稀释10倍，并以14,000rpm离心5分钟，其后将200μl上清液用于HPLC分析以测量反应期间的蔗糖消耗。应用以下HPLC条件分析每个样品：柱(AMINEX HPX-87C碳水化合物柱，300x 7.8mm，伯乐公司(Bio-Rad)，No.125-0095)；洗脱液(水)；流速(0.6mL/min)；温度(85℃)；折光率检测器。样品的HPLC分析显示在0768gtf反应期间大量的蔗糖消耗(图1，包含100g/L蔗糖的反应)(这个蔗糖消耗发生比使用从商业来源获得的右旋糖酐蔗糖酶在反应中观察到的蔗糖消耗显著更快-参考实例7)。
还使用HPLC来分析包含100g/L蔗糖的反应的其他产物。通过从起始蔗糖的量中减去反应中剩余的所有其他糖的量来反算聚合物产率。反算的数值与粘性产物干重分析一致。通过使用HPX-87C柱的HPLC(如上所述的HPLC条件)定量蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖和果糖。DP2-7二糖通过以下条件的HPLC定量：柱(AMINEXHPX-42A碳水化合物柱，300x 7.8mm，伯乐公司(Bio-Rad)，No.125-0097)；洗脱液(水)；流速(0.6mL/min)；温度(85℃)；折光率检测器。这些HPLC分析表明，0768gtf反应的含葡糖基的糖产物由91％聚合物产物、1％葡萄糖、6.5％明串珠菌二糖和1.5％DP2-7寡糖组成。
通过13C NMR测定包含100g/L蔗糖的反应的凝胶化聚合物产物的配糖键谱图。将如上述制备的干聚合物(25-30mg)在50℃伴随搅拌溶解于1mL的含3wt％LiCl的氘化的DMSO中。使用玻璃移液管，将0.8mL的制剂转移到5-mm NMR管中。使用配备有CPDul冷冻探针的布鲁克尔皇冠公司(Bruker Avance)(麻萨诸塞州比勒利卡(Billerica，MA))500MHz NMR光谱仪，在125.76MHz的光谱频率下，使用26041.7Hz的光谱窗口获得定量的13C NMR光谱。使用华尔兹解耦的逆门控去耦脉冲序列，其中收集时间为0.629秒，脉冲间延迟为5秒，其脉冲为6000。使用2.0Hz的指数乘法对时域数据进行转换。
NMR结果表明，凝胶化聚合物产物包含约90％的α-1，6-糖苷键、约4％-5％的α-1，3-糖苷键、以及约5％-6％的α-1，4-糖苷键和α-1，2-糖苷键。聚合物产物的一个或多个主链似乎主要包含α-1，6-糖苷键，而且还包含非常少量的α-1，3-糖苷键和α-1，4-糖苷键。其他α-1，3-糖苷键和α-1，4-糖苷键以及所有α-1，2-糖苷键都似乎处于一个或多个主链的分支中。因此，凝胶化产物似乎是凝胶化右旋糖酐。
目前本文推荐不同的方案(不是上述13C NMR程序)来确定由gtf 0768生产的右旋糖酐的键谱图。该方案在下面的实例9中披露，实例9显示与本实例中披露的类似的键谱图。
通过尺寸排阻色谱法(SEC)确定包含100g/L蔗糖的反应的凝胶化右旋糖酐产物的数均分子量(Mn)和重均分子量(Mw)。将如上述制备的干聚合物在100℃下振摇过夜以溶解于DMAc和5％LiCl(0.5mg/mL)中。所使用的色谱系统是来自沃特斯(Waters)公司(马萨诸塞州米尔福德(Milford，MA))的厄莱恩斯(Alliance)TM2695分离模块，该分离模块与以下三台在线检测器联接：来自沃特斯公司的差示折光计2410、来自怀亚特技术公司(WyattTechnologies)(加利福尼亚州圣巴巴拉市(Santa Barbara，CA))的HeleosTM 8+多角度光散射光度计、以及来自怀亚特的ViscoStarTM差示毛细管粘度计。用于SEC的柱是来自昭和公司(Shodex)(日本)的四个苯乙烯-二乙烯基苯柱和两个线性KD-806M、KD-802和KD-801柱，以改善聚合物分布在低分子量区域的分辨率。流动相为具有0.11％LiCl的DMAc。所使用的色谱条件为：在柱和检测器室中为50℃，样品和注射器室中为40℃，流速为0.5mL/min，注射体积为100μL。用于数据还原的软件包为来自沃特斯公司的因普奥尔(Empower)TM版本3(使用广泛的葡聚糖聚合物标准进行校准)和来自怀亚特公司的阿斯特拉
Figure BDA0001420912630000861
Figure BDA0001420912630000862
版本6(具有柱校准的三重检测方法)。从该程序确定凝胶化右旋糖酐产物的Mn为2229400，Mw为5365700。
目前本文推荐不同的方案(不是上述SEC程序)来确定由gtf 0768生产的右旋糖酐的分子量。该方案在下面的实例9中披露，表明分子量比本实例中披露的分子量大超过一个数量级。
因此，包含水、蔗糖和含有含SEQ ID NO：1的酶的反应合成凝胶化右旋糖酐产物，如通过产物的主要的α-1，6-糖苷键谱图确定的。下面的实例8披露了该产物的粘度与某些可商购的右旋糖酐的粘度的比较。实例9进一步披露了用包含SEQ ID NO：1的gtf酶生产右旋糖酐、以及右旋糖酐的产率、分子量和键分析。本实例中产生的右旋糖酐可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。
实例3
葡萄糖基转移酶(2919)的表达及其生产凝胶化右旋糖酐产物的用途
本实例描述了在枯草芽孢杆菌中成熟的食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)葡萄糖基转移酶(gtf)的表达。而且，该实例显示，当使用的是含有水和蔗糖的反应时，该酶生产可能是右旋糖酐的凝胶化产物。
从食窦魏斯氏菌KACC 11862鉴定出葡萄糖基转移酶基因WciGtfl。该基因的核酸序列(基因库登录号NZ_AEKT01000035.1的位置23315至27661)在SEQ ID NO：3中列出，并且编码SEQ ID NO：4的蛋白质序列(基因库登录号ZP_08417432)。WciGtf1蛋白质(SEQ ID NO：4)的N-末端是26个氨基酸的信号肽，如通过SIGNALP 4.0程序，Petersen等人，NatureMethods[自然方法]，8：785-786)预测的。这表明WciGtf1(SEQ ID NO：4)是分泌的蛋白质。WciGtf1蛋白质的成熟的分泌的形式在本文中被称为2919gtf，并且在SEQ ID NO：5中列出。
将编码2919gtf的核苷酸序列优化，以用于在枯草芽孢杆菌中表达。优化的序列(SEQ ID NO：6)由捷瑞公司(Generay)(中国上海)合成，并且插入到质粒p2JM103BBI中(Vogtentanz等人，蛋白质表达与纯化(Protein Expr.Purif.)55：40-52)，得到质粒pZZHB583(图2A)。质粒pZZHB583含有可操作地连接于编码以下各项的序列上的aprE启动子：(i)用于在枯草芽孢杆菌中引导异源蛋白(在这种情况下为2919gtf)分泌的aprE信号序列、(ii)促进分泌的Ala-Gly-Lys、和(iii)2919gtf(SEQ ID NO：5)(i-iii以氨基至羧基的方向融合)。
将质粒pZZHB583转化到枯草芽孢杆菌细胞中进行2919gtf表达和纯化(参见通用方法)。
在室温下在包含100g/L蔗糖、20mM磷酸钠缓冲液(pH 5.5)和6.25mL的酶储备液的250mL反应中确定2919gtf(SEQ ID NO：5)的活性。将反应在室温、振摇(150rpm)下进行48小时。
分别在0、1、3、5、24和48小时时间点从反应中取出样品(100μL)。通过在80℃下加热每个样品10分钟使酶失活。将样品用水稀释10倍，并以14000rpm离心5分钟。将上清液(200μL)用于HPLC分析。
使用HPLC确定在gtf反应中的明串珠菌二糖、葡萄糖和果糖的浓度，该HPLC使用配备有置于85℃的恒温柱室中的AMINEX HPX-87C柱(300x 7.8mm)的安捷伦公司(Agilent)1260色谱系统和折光率检测器进行。HPLC用
Figure BDA0001420912630000881
水以0.6mL/min进行洗脱。通过与相应的标准进行比较，鉴定出蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖和果糖。它们的浓度基于峰面积标准曲线进行计算。蔗糖在反应结束时几乎完全被消耗。除了粘的右旋糖酐产物外，2919gtf(SEQ ID NO：5)主要生产果糖(约50％)和少量的明串珠菌二糖(约5％)和葡萄糖(约1％)。
通过HPLC分析确定gtf反应中的寡糖(DP2-DP7)的浓度，该HPLC分析使用配备有置于85℃的恒温柱室中的AMINEX HPX-42A柱(300x 7.8mm)的安捷伦公司(Agilent)1260色谱系统和折光率检测器进行。HPLC用
Figure BDA0001420912630000882
水以0.6mL/min进行洗脱。通过与相应的标准比较鉴定出寡糖的形成。基于标准曲线从峰面积计算寡糖的浓度。2919gtf(SEQ ID NO：5)在反应结束时生产少量的DP2-DP7寡糖(约3％)。
因此，包含水、蔗糖和含有SEQ ID NO：5的酶的反应合成了被认为是右旋糖酐聚合物的凝胶化产物。该产品可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。实验结果表明，gtf2919可能具有葡萄糖基转移酶活性。
实例4
葡萄糖基转移酶(2918)的表达及其生产凝胶化右旋糖酐产物的用途
本施例描述了在枯草芽孢杆菌中成熟的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)葡萄糖基转移酶(gtf)的表达。而且，该实例显示，当使用的是含有水和蔗糖的反应时，该酶生产可能是右旋糖酐的凝胶化产物。
从发酵乳杆菌鉴定出葡萄糖基转移酶基因LfeGtf1。该基因的核酸序列(基因库登录号AY697433.1的位置618至5009)在SEQ ID NO：7中列出，并且编码SEQ ID NO：8的蛋白质序列(基因库登录号AAU08008)。在LfeGtf1蛋白质(SEQ ID NO：8)的N-末端是37个氨基酸的信号肽，如通过SIGNALP 4.0程序预测的。这表明LfeGtf1(SEQ ID NO：8)是分泌的蛋白质。LfeGtf1蛋白质的成熟的分泌的形式在本文中被称为2918gtf，并且在SEQ ID NO：9中列出。
将编码2918gtf的核苷酸序列优化，以用于在枯草芽孢杆菌中表达。优化的序列(SEQ ID NO：10)由捷瑞公司(Generay)(中国上海)合成，并且插入到质粒p2JM103BBI中，得到质粒pZZHB582(图2B)。质粒pZZHB582含有可操作地连接于编码以下各项的序列上的aprE启动子：编码(i)用于在枯草芽孢杆菌中引导异源蛋白(在这种情况下为2918gtf)分泌的aprE信号序列、(ii)促进分泌的Ala-Gly-Lys、和(iii)2918gtf(SEQ ID NO：9)(i-iii以氨基至羧基的方向融合)。
将质粒pZZHB582转化到枯草芽孢杆菌细胞中进行2918gtf表达和纯化(参见通用方法)。
在室温下在包含100g/L蔗糖、20mM磷酸钠缓冲液(pH 5.5)和6.25mL的酶储备液的250mL反应中确定2918gtf(SEQ ID NO：9)的活性。将反应在室温、振摇(150rpm)下进行6天。
分别在0、1、3、5、24、48和144小时时间点从反应中取出样品(100μL)。通过在80℃下加热每个样品10分钟使酶失活。将样品用水稀释10倍，并以14000rpm离心5分钟。将上清液(200μL)用于HPLC分析。
使用如实例3中所述的HPLC程序确定gtf反应中蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖、果糖和寡糖(DP2-DP7)的浓度。蔗糖在反应结束时几乎完全被消耗。除了粘的右旋糖酐产物外，2918gtf(SEQ ID NO：9)主要生产果糖(约50％)和少量的明串珠菌二糖(约5％)和葡萄糖(约1％)。2918gtf(SEQ ID NO：9)生产少量的DP2-DP7寡糖(约1％)。
因此，包含水、蔗糖和包含SEQ ID NO：9的酶的反应合成了被认为是右旋糖酐聚合物的凝胶化产物。该产品可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。实验结果表明，gtf2920可能具有葡萄糖基转移酶活性。
实例5
葡萄糖基转移酶(2920)的表达及其生产凝胶化右旋糖酐产物的用途
本施例描述了在枯草芽孢杆菌中成熟的表兄链球菌(Streptococcus sobrinus)葡萄糖基转移酶(gtf)的表达。而且，该实例显示，当使用的是含有水和蔗糖的反应时，该酶生产可能是右旋糖酐的凝胶化产物。
从表兄链球菌B13N鉴定出葡萄糖基转移酶基因SsoGtf4。该基因的核酸序列(基因库登录号AY966490的位置198至4718)在SEQ ID NO：11中列出，并且编码SEQ ID NO：12的蛋白质序列(基因库登录号AAX76986)。在SsoGtf4蛋白质(SEQ ID NO：12)的N-末端是41个氨基酸的信号肽，如通过SIGNALP 4.0程序预测的。这表明SsoGtf4(SEQ ID NO：12)是分泌的蛋白质。SsoGtf4蛋白质的成熟的分泌的形式在本文中被称为2920gtf，并且在SEQ ID NO：13中列出。
将编码2920gtf的核苷酸序列优化，以用于在枯草芽孢杆菌中表达。优化的序列(SEQ ID NO：14)由捷瑞公司(Generay)(中国上海)合成，并且插入到质粒p2JM103BBI中，得到质粒pZZHB584(图2C)。质粒pZZHB584含有可操作地连接于编码以下各项的序列上的aprE启动子：编码(i)用于在枯草芽孢杆菌中引导异源蛋白(在这种情况下为2920gtf)分泌的aprE信号序列、(ii)促进分泌的Ala-Gly-Lys、和(iii)2920gtf(SEQ ID NO：13)(i-iii以氨基至羧基的方向融合)。
将质粒pZZHB584转化到枯草芽孢杆菌细胞中进行2920gtf表达和纯化(参见通用方法)。
在室温下在包含100g/L蔗糖、20mM磷酸钠缓冲液(pH 5.5)和6.25mL的酶储备液的250mL反应中确定2920gtf(SEQ ID NO：13)的活性。将反应在室温、振摇(150rpm)下进行6天。
分别在0、1、3、5、24、48、72和144小时时间点从反应中取出样品(100μL)。通过在80℃下加热每个样品10分钟使酶失活。将样品用水稀释10倍，并以14000rpm离心5分钟。将上清液(200L)用于HPLC分析。
使用如实例3中所述的HPLC程序确定gtf反应中蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖、果糖和寡糖(DP2-DP7)的浓度。蔗糖在反应结束时几乎完全被消耗。除了粘的右旋糖酐产物外，2920gtf(SEQ ID NO：13)主要生产果糖(约50％)、明串珠菌二糖(约20％)和少量的葡萄糖(约3％)。2920gtf(SEQ ID NO：13)生产少量的DP2-DP7寡糖(约1％)。
因此，包含水、蔗糖和包含SEQ ID NO：13的酶的反应合成了被认为是右旋糖酐聚合物的凝胶化产物。该产品可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。实验结果表明，gtf2920可能具有葡萄糖基转移酶活性。
实例6
葡萄糖基转移酶(2921)的表达及其生产凝胶化右旋糖酐产物的用途
本施例描述了在枯草芽孢杆菌中成熟的汗毛链球菌(Streptococcus downei)葡萄糖基转移酶(gtf)的表达。而且，该实例显示，当使用的是含有水和蔗糖的反应时，该酶生产可能是右旋糖酐的凝胶化产物。
从汗毛链球菌MFe28鉴定出葡萄糖基转移酶基因SdoGtf7。该基因的核酸序列(基因库登录号AB476746的位置16至2375)在SEQ ID NO：15中列出，并且编码SEQ ID NO：16的蛋白质序列(基因库登录号ZP_08549987.1)。在SdoGtf7蛋白质(SEQ ID NO：16)的N-末端是44个氨基酸的信号肽，如通过SIGNALP 4.0程序预测的。这表明SdoGtf7蛋白质(SEQ ID NO：16)是分泌的蛋白质。SdoGtf7蛋白质的成熟的分泌的形式在本文中被称为2921gtf，并且在SEQ ID NO：17中列出。
将编码2921gtf的核苷酸序列优化，以用于在枯草芽孢杆菌中表达。优化的序列(SEQ ID NO：18)由捷瑞公司(Generay)(中国上海)合成，并且插入到质粒p2JM103BBI中，得到质粒pZZHB585(图2D)。质粒pZZHB585含有可操作地连接于编码以下各项的序列上的aprE启动子：编码(i)用于在枯草芽孢杆菌中引导异源蛋白(在这种情况下为2921gtf)分泌的aprE信号序列、(ii)促进分泌的Ala-Gly-Lys、和(iii)2921gtf(SEQ ID NO：17)(i-iii以氨基至羧基的方向融合)。
将质粒pZZHB585转化到枯草芽孢杆菌细胞中进行2921gtf表达和纯化(参见通用方法)。
在室温下在包含100g/L蔗糖、20mM磷酸钠缓冲液(pH 5.5)和6.25mL的酶储备液的250mL反应中确定2921gtf(SEQ ID NO：17)的活性。将反应在室温、振摇(150rpm)下进行8天。
在反应开始时和分别在1、2、3、6、7和8天时间点从反应中取出样品(100μL)。通过在80℃下加热每个样品10分钟使酶失活。将样品用水稀释10倍，并以14000rpm离心5分钟。将上清液(200μL)用于HPLC分析。
使用如实例3中所述的HPLC程序确定gtf反应中蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖、果糖和寡糖(DP2-DP7)的浓度。第8天，约43％蔗糖残留在反应中。除了粘的右旋糖酐产物外，2921gtf(SEQ ID NO：17)主要生产果糖(约31％)、明串珠菌二糖(约6％)和葡萄糖(约3％)。没有观测到DP2-DP7寡糖的明显生产。
因此，包含水、蔗糖和包含SEQ ID NO：17的酶的反应合成了被认为是右旋糖酐聚合物的凝胶化产物。该产品可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐。实验结果表明，gtf2921可能具有葡萄糖基转移酶活性。
实例7(比较例)
使用可商购的右旋糖酐蔗糖酶生产右旋糖酐
该实例描述了在包含水和蔗糖的反应中使用可商购的右旋糖酐蔗糖酶合成右旋糖酐。与实例1-6中合成的凝胶化右旋糖酐产物相比，在实例8中分析了在此生产的右旋糖酐。
制备右旋糖酐蔗糖酶反应的试剂：
-蔗糖(西格玛(Sigma)产品号S-9378)。制备了400g/L储备溶液。
-磷酸钠缓冲液储备液(200mM)(pH 5.5)：相应地，使用磷酸二氢钠一水合物(西格玛(Sigma)产品号S9638)和磷酸氢二钠七水合物(西格玛(Sigma)产品号S9390)，在水中制备250mL。
-右旋糖酐蔗糖酶，冻干粉末，≥100单位/mg蛋白质，来自肠膜明串珠菌(西格玛(Sigma)产品号D9909)。
制备了含有20mM磷酸钠(pH 5.5)、110g/L蔗糖和来自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)的10个单位的右旋糖酐蔗糖酶的50mL反应物。当制备反应物时最后添加右旋糖酐蔗糖酶。将该反应在125-mL加盖的摇瓶中在26℃、振摇(100rpm)下进行7天。反应的样品(100μL)分别在0、3、6、24、48和168小时采集。通过在80℃下加热10分钟，在每个样品中使右旋糖酐蔗糖酶失活。然后将每个样品用水稀释10倍，并以14,000rpm离心5分钟，其后将200μl上清液用于HPLC分析以测量反应期间的蔗糖消耗。
应用以下HPLC条件分析每个样品：柱(AMINEX HPX-87C碳水化合物柱，300x7.8mm，伯乐公司(Bio-Rad)，No.125-0095)；洗脱液(水)；流速(0.6mL/min)；温度(85℃)；折光率检测器。样品的HPLC分析表明在右旋糖酐蔗糖酶反应期间的蔗糖消耗(图3)。值得注意的是，商业右旋糖酐蔗糖酶的蔗糖消耗速率比gtf 0768的蔗糖消耗速率慢得多(实例2)。具体地说，尽管在约17-18小时的反应时间之后gtf 0768消耗大多数蔗糖(图1)，但是商业右旋糖酐蔗糖酶在这相同的时间段内仅消耗约20％的蔗糖，并且需要约168小时来消耗所有或大多数蔗糖。
还使用HPLC来分析反应的其他产物。通过从起始蔗糖的量中减去反应中剩余的所有其他糖的量来反算右旋糖酐产率。反算的数值与右旋糖酐干重分析一致。如在实例2中所述，通过HPLC定量蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖、果糖和DP2-7二糖。这些HPLC分析表明，商业右旋糖酐蔗糖酶反应的糖产物由49％右旋糖酐、0.3％蔗糖、44％果糖、1％葡萄糖、5％明串珠菌二糖和1％DP2-7寡糖组成。
与实例1-6中合成的凝胶化右旋糖酐产物相比，在实例8中分析了在这个实例中生产的右旋糖酐。
实例8
右旋糖酐样品的粘度
该实例描述了对在实例1-7中生产的右旋糖酐聚合物的粘度以及从商业来源获得的右旋糖酐的粘度进行测量。在各种剪切速率下进行粘度测量。
如在实例1-7中所述制备右旋糖酐聚合物样品。具体地，进行酶促反应，其后将聚合物用甲醇沉淀并且用甲醇(100％)洗涤四次，然后干燥。通过向去离子(DI)水中添加适量的聚合物来制备每个样品的溶液(2wt％和/或3wt％)。然后，使用台式涡旋器将每种制剂混合直到聚合物完全在溶解状态。这些样品中的每一个在表2和表3(下文)中称为“在PPT之后”(在沉淀之后)。类似地制备从美国TCI(奥勒冈州波特兰(Portland，OR)；目录号D0061)获得的右旋糖酐(Mw＝956978)的2wt％溶液；该右旋糖酐在下文中称为“商业右旋糖酐”。
为了确定每一种聚合物溶液在各种剪切速率下的粘度，使用粘度计使每一种溶液经受各种剪切速率，同时将温度在20℃下保持恒定。而且，使从实例1-7中所述的每个酶促反应中直接获得的没有沉淀的聚合物样品经受各种剪切速率(在表2和表3中称为“在PPT之前”)。使用从0-10rpm增加的梯度程序增加剪切速率，并且剪切速率每30秒增加0.17(1/s)。本实验的这些结果在表2中列出。
表2
某些右旋糖酐溶液在各种剪切速率下的粘度
Figure BDA0001420912630000951
Figure BDA0001420912630000961
a根据用于合成样品的各自的酶列出聚合物样品。
b测量值超出了粘度计的规格界限。
还使用粘度计使聚合物样品经受各种更高的剪切速率，同时使温度在20℃下保持恒定。使用从10-250rpm增加的梯度程序增加剪切速率，并且剪切速率每20秒增加7.36(l/s)。本实验的这些结果在表3中列出。
表3
某些右旋糖酐溶液在各种剪切速率下的粘度
Figure BDA0001420912630000962
Figure BDA0001420912630000971
a根据用于合成样品的各自的酶列出聚合物样品。可替代地，分析从商业来源获得的右旋糖酐(“商业右旋糖酐”)。
b测量值超出了粘度计的规格界限。
这些数据表明，与商业获得的右旋糖酐和商业获得的右旋糖酐蔗糖酶的右旋糖酐产物的粘度相比，包含SEQ ID NO：1的葡萄糖基转移酶的右旋糖酐产物的溶液在大多数情况下甚至在沉淀和重溶后表现出增加的粘度。该观察似乎也适用于包含SEQ ID NO：5、9、13或17的葡萄糖基转移酶的各自的聚合物产物。
还值得注意的是，基于表2-3，随着在gtf 0768反应中的蔗糖的量从800g/L降低至100g/L，右旋糖酐产物的粘度似乎增加。具体地，表3显示包含800g/L和400g/L蔗糖的反应的右旋糖酐产物的粘度分别为5.44cPs和49.89cPs(在14.11rpm/2wt％负载下)，并且表2(gtf 0768，2wt％负载)可能显示包含100g/L蔗糖的反应的右旋糖酐产物的粘度为约957cPs(在14.11rpm的旋转下外推的指数)。该结果表明右旋糖酐产物的粘度可以通过改变最初提供给反应的蔗糖水平来控制。
实例9
由Gtf 0768合成的右旋糖酐的进一步生产和分析
除了实例2之外，该实例描述了包含水、蔗糖和gtf 0768的另一个反应。而且，该实例提供了通过gtf 0768合成的凝胶化产物的另外的键和分子量分析，显示该产物是右旋糖酐的一种类型。
制备gtf反应的试剂：
-蔗糖(西格玛(Sigma)产品号S-9378)。
-磷酸钠缓冲液储备液(1M，pH 6.5，泰克诺瓦(Teknova)目录号：S0276)。
-Gtf 0768酶溶液(如在实例1中制备的细胞裂解物)。
Gtf反应条件：
制备含有20mM磷酸钠缓冲液(缓冲液从1M储备液(pH 6.5)用ddH2O稀释50倍)、100g/L蔗糖和0.1mL的gtf 0768酶溶液的50mL反应。将反应在26℃下在培养箱振摇器(英诺华公司(Innova)，型号4000)中以100rpm振摇43小时；在约24小时后反应变成粘的。
通过在80℃下加热该反应10分钟使gtf酶失活。然后将失活的粘性反应与75mL的100％甲醇混合以沉淀粘性产物。形成一份白色沉淀。在小心地倾析上清液后，将白色沉淀用75mL的100％甲醇洗涤两次。将固体产物在45℃下在真空中在烘箱中干燥48小时。
反应的样品(1mL)分别在0、0.5、1、2和24小时采集。
通过在80℃下加热10分钟，在每个样品中使gtf酶失活。
然后将每个样品用无菌水稀释10倍。将500μL的稀释样品转移到离心管过滤器(SPIN-X，0.45-μm尼龙，2.0mL聚丙烯管，科斯塔(Costar)#8170)中，并以12,000rpm在台式离心机中离心60分钟，其后将200μL的溢流液用于HPLC分析以测量反应期间的蔗糖消耗。应用以下HPLC条件分析每个样品：柱(AMINEX HPX-87C碳水化合物柱，300x 7.8mm，伯乐公司(Bio-Rad)，No.125-0095)；洗脱液(水)；流速(0.6mL/min)；温度(85℃)；折光率检测器。样品的HPLC分析显示在0768gtf反应期间显著的蔗糖消耗。
还使用HPLC来分析反应的其他产物。通过从起始蔗糖的量中减去反应中剩余的所有其他糖的量来反算聚合物产率。反算的数值与粘性产物干重分析一致。通过使用HPX-87C柱的HPLC(如上所述的HPLC条件)定量蔗糖、明串珠菌二糖、葡萄糖和果糖。DP2-7寡糖通过以下条件的HPLC定量：柱(AMINEX HPX-42A碳水化合物柱，300x 7.8mm，伯乐公司(Bio-Rad)，No.125-0097)；洗脱液(水)；流速(0.6mL/min)；温度(85℃)；折光率检测器。这些HPLC分析表明，0768gtf反应的含葡糖基的糖产物由92.3％聚合物产物、1.3％葡萄糖、5.0％明串珠菌二糖和1.4％DP2-7寡糖组成。
将上述反应的干右旋糖酐粉末产物(约0.2g)的样品用于分子量分析。分子量通过流动注射色谱法使用来自沃特斯(Waters)公司(马萨诸塞州米尔福德(Milford，MA))的厄莱恩斯(Alliance)TM2695分离模块来确定，该分离模块与以下三台在线检测器联接：来自沃特斯公司的差示折光计2414、来自怀亚特技术公司(Wyatt Technologies)(加利福尼亚州圣巴巴拉市(Santa Barbara，CA))的HeleosTM-218角多角度光散射(MALS)光度计、和来自怀亚特的ViscoStarTM差示毛细管粘度计。将干的右旋糖酐粉末以0.5mg/mL溶解于含有200ppmNaN3的水性Tris(三[羟基甲基]氨基甲烷)缓冲液(0.075M)中。通过在50℃下振摇过夜来实现右旋糖酐的溶解。使用来自安捷伦科技公司(Agilent Technologies)(加利福尼亚州圣克拉拉市(Santa Clara，CA))的两个AQUAGEL-OH GUARD柱将右旋糖酐聚合物峰与注射峰分离。该程序的流动基底(mobile base)与右旋糖酐溶剂相同，流速为0.2mL/min，注射体积为0.1mL，并且柱温为30℃。将来自沃特斯公司的因普奥尔(Empower)TM版本3软件用于数据收集，并且将来自怀亚特公司(Wyatt)的阿斯特拉(Astra)TM版本6软件用于多检测器数据缩减。从该工作确定，右旋糖酐聚合物产物的重均分子量(Mw)为1.022(+/-0.025)x 108g/mol(即概略地1亿道尔顿)(来自MALS分析)，z-平均回转半径为243.33(+/-0.42)nm(来自MALS分析)，并且z平均流体动力学半径为215nm(来自QELS分析)。从QELS分析还确定，右旋糖酐具有约0.259的粒度分布(PSD)的标准偏差，表明右旋糖酐在流体动力学尺寸方面可能是多分散的。
出于配糖键分析目的，除了反应时间为24小时(反应物变粘)之外，如本实例中所述制备50-mL gtf反应物。通过在80℃下加热该反应10分钟使gtf酶失活。然后，将失活的粘性反应置于具有12-14kDa分子量截留值(MWCO)的再生纤维素坚固的透析管(
Figure BDA0001420912630000991
4透析管，零件号132706，光谱实验室公司(Spectrum Laboratories，Inc.))中并且在室温下经4L过滤水透析一周以上。在此透析期间每天更换水。然后，如在本实例中所述将透析的粘性反应物沉淀并干燥。提交约0.2g的干燥粉末用于GC/MS键分析。
根据Pettolino等人(自然试验方案(Nature Protocols)7：1590-1607，其通过引用结合在此)描述的方法进行键分析。简言之，将干燥的右旋糖酐样品溶解于二甲亚砜(DMSO)或在DMSO中的5％氯化锂中，然后通过依次添加氢氧化钠/DMSO浆液，随后添加碘甲烷将所有游离的羟基甲基化。然后将甲基化聚合物萃取到二氯甲烷中，并在120℃下用水性三氟乙酸(TFA)水解成单体单元。然后从样品中蒸发出TFA，并使用硼氘化钠(其还用氘原子标记还原端)进行还原性开环。然后，通过水解配糖键产生的羟基基团在50℃的温度下通过用乙酰氯和TFA处理来乙酰化。最后，蒸发衍生试剂，将所得的甲基化/乙酰化单体重构在乙腈中，并且使用双氰基丙基氰基丙基苯基聚硅氧烷柱通过质谱气相色谱(GC/MS)进行分析。甲基和乙酰基官能团的相对位置、以及氘标记产生了具有可与已公开的数据库进行比较的独特的保留时间指数和质谱的物质。以这种方式，单体单元的衍生物表明每个单体最初如何连接在右旋糖酐聚合物中以及单体是否是分支点。将分析这些样品(最初溶解于DMSO或DMSO/5％LiCl中的右旋糖酐)的结果提供在表4中。
表4
Gtf 0768右旋糖酐产物的键谱图
Figure BDA0001420912630001001
a在碳位置1和3处连接的葡萄糖单体。
b在碳位置1和6处连接的葡萄糖单体。
c在碳位置1和4处连接的葡萄糖单体。
d在碳位置1、3和6处连接的葡萄糖单体。
e在碳位置1、2和6，或1、4和6处连接的葡萄糖单体。
一般来说，表4中的结果表明，上述分析的右旋糖酐产物包括：
(i)约87wt％-93wt％仅在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii)约0.1wt％-1.2wt％仅在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii)约0.1wt％-0.7wt％仅在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv)约7.7wt％-8.6wt％仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及
(v)约0.4wt％-1.7wt％仅在以下位置处连接的葡萄糖：(a)位置1、2和6，或(b)位置1、4和6。
基于该信息和一些其他研究(数据未显示)，预期该产物是支链结构，其中长度为约20DP(平均值)的长链(主要或全部包含α-1，6-键)彼此迭代分支(例如，一个长链可以是来自另一个长链的分支，该另一个长链反过来可以本身是来自另一个长链的分支，等等)。支链结构也似乎包含来自长链的短分支；这些短链被认为长度为1-3DP，并且主要包括例如α-1，3-键和α-1，4-键。右旋糖酐中的分支点，无论是来自从长链分支的另一个长链还是从长链分支的短链，似乎包含没有α-1，3键、-1，4键或-1，2键而涉及α-1，6键的葡萄糖。概略地，右旋糖酐的所有分支点中25％分支成长链。
因此，包含水、蔗糖和含有SEQ ID NO：1的酶的反应合成了非常大的凝胶化右旋糖酐产物，如通过产物的高Mw和主要的α-1，6-糖苷键谱图确定的。本实例中产生的右旋糖酐可用于制备在此处披露的氧化的右旋糖酐化合物。
实例10
在室温下制备氧化的右旋糖酐
该实例描述了在室温下使用高碘酸盐化合物进行的反应中产生氧化的右旋糖酐。虽然在本实例中使用了实例2中披露的右旋糖酐产物，但实例9的右旋糖酐产物可类似地用于以下氧化方法。
在装有用于温度监测的热电偶、橡胶塞和磁性搅拌棒的500-mL容量的锥形烧瓶中，使用磁力搅拌棒将3g在实例2中生产的右旋糖酐溶解在100ml去离子水(DI)中。向该制剂中添加6.9g高碘酸钠，然后在室温(20℃-25℃)下搅拌48小时。通过添加15g乙二醇淬灭反应。添加过量的甲醇以沉淀任何溶解的固体。然后通过真空过滤收集固体材料(高碘酸盐氧化的右旋糖酐，样品产物号编号240)，用95％乙醇洗涤，并且进行真空干燥。
因此，制备氧化的右旋糖酐并从在室温下保持的反应中分离该氧化的右旋糖酐。在这些反应中使用高碘酸盐化合物作为氧化剂。
实例11
使用两步反应法在室温下制备氧化的右旋糖酐
该实例描述了使用在室温下保持的两步反法来生产氧化的右旋糖酐。用高碘酸盐化合物进行第一次氧化，之后用N-氧代铵盐进行第二次氧化。虽然在本实例中使用了实例2中披露的右旋糖酐产物，但实例9的右旋糖酐产物可类似地用于以下氧化方法。
将4.7g高碘酸钠溶解在配备有用于温度监测的热电偶、橡胶塞和磁力搅拌棒的500mL容量的锥形烧瓶中的41.9g去离子水中。将5g实例2生产的右旋糖酐(溶于45g去离子水)添加到该制剂中，然后在室温(20℃-25℃)下搅拌5小时。通过添加11g乙二醇淬灭反应。添加过量的甲醇以沉淀任何溶解的固体。然后通过真空过滤收集固体材料(高碘酸盐氧化的右旋糖酐)，用95％乙醇洗涤，并且真空干燥。
将1g高碘酸盐氧化的右旋糖酐(制备如上)添加到配有用于温度监测的热电偶、橡胶塞和磁力搅拌棒的容量为500mL的锥形烧瓶中的100mL乙酸钠缓冲液(溶于100mL 5％乙酸中的1.64g乙酸钠，并用氢氧化钠调节至pH 4.6)。然后向该制剂中添加亚氯酸钠(0.68g)和4-乙酰胺基-TEMPO(0.096g，Sigma-Aldrich[西格玛奥德里奇公司]，St.Louis，MO[圣路易斯，密苏里州])。接着向制剂中添加次氯酸钠(0.74g)，然后在室温(20℃-25℃)下搅拌48小时。通过添加过量的乙醇淬灭反应，从而使固体氧化的右旋糖酐产物沉淀。通过真空过滤收集由此形成的固体(样品产物编号173)，用乙醇(95％)洗涤四次，并在20℃-25℃下真空干燥。
使用不同的反应条件在室温下进行另外的两步反应(表5)，从而制备样品产物245。
表5
通过两步反应制备氧化的右旋糖酐
Figure BDA0001420912630001031
a进入两步反应的右旋糖酐的起始量。
b 4-乙酰胺基-TEMPO。
因此，使用在室温下保持的两步氧化反应来制备和分离氧化的右旋糖酐。在这些反应中使用高碘酸盐化合物和N-氧代铵盐作为氧化剂。
实例12
氧化的右旋糖酐具有助洗剂活性
本实例披露了测试氧化的右旋糖酐是否具有助洗剂活性。该活性通过在水性条件下测量氧化的右旋糖酐材料的钙分散能力来确定。
对于每个测定，使用磁力搅拌棒在搅拌下将氧化的右旋糖酐(如实例10-11中制备的)溶解于100mL水中。记录溶解的氧化的右旋糖酐的精确质量，之后使用4.5％氢氧化钠将pH调节至8。向该溶液中添加10g 2％碳酸钠，然后使用氢氧化钠将pH调节至11(如果需要)。使用浊度计测量溶液的浊度。使用玻璃滴定管将4.4％乙酸钙溶液滴定到氧化的右旋糖酐溶液中，每次添加后取出样品进行浊度测量。当溶液的透光率降低时，这种降低表明氧化的右旋糖酐不再分散碳酸钙。使用测定期间添加的乙酸钙的量来确定氧化的右旋糖酐的钙分散能力。氧化的右旋糖酐的每个样品的钙分散能力列于表6中。
表6
氧化的右旋糖酐的钙分散能力
Figure BDA0001420912630001041
a CCDC，碳酸钙分散能力。
氧化的右旋糖酐的每个样品在该测定中表现出延迟碳酸钙沉淀的能力，由此表明氧化的右旋糖酐具有助洗剂活性。预期这种助洗剂活性可用于从使用助洗剂(例如织物护理组合物)中受益的各种应用中。
实例13
在各种织物上的氧化的右旋糖酐的吸附
该实例披露了如何在不同类型的织物上测试本文的氧化的右旋糖酐(例如如上制备的)的吸附程度。
首先，制备校准曲线，其可用于测定氧化的右旋糖酐在织物表面上的相对吸附水平。
使用直接红(Direct Red)80和甲苯胺蓝(Toluidine Blue)O染料制备已知浓度(ppm)的溶液。使用LAMOTTE[美国雷曼]SMART2色度计在520或620nm处测量这些溶液的吸光度。绘制吸附信息，以便其可用于测定暴露于织物样品上的溶液的染料浓度。表7和表8给出了各校准曲线的浓度和吸光度。
表7
直接红80染料校准曲线数据
Figure BDA0001420912630001042
Figure BDA0001420912630001051
表8
甲苯胺蓝O染料校准曲线数据
Figure BDA0001420912630001052
这些校准曲线可用于测定氧化的右旋糖酐在织物表面上的相对吸附水平，例如通过根据以下方法进行。
制备了氧化的右旋糖酐化合物在去离子水中的0.07wt％或0.25wt％的溶液。将每种溶液分成具有不同浓度化合物的几种等分试样(表9)。添加其他成分，如酸(稀盐酸)或碱(氢氧化钠)以改变pH值或NaCl盐。
表9
用于织物吸附研究的氧化的右旋糖酐化合物溶液
Figure BDA0001420912630001053
Figure BDA0001420912630001061
将四种不同的织物类型(印花棉布、聚酯、65：35聚酯/印花棉布、漂白棉)切成0.17g碎片。将每片置于48孔细胞培养板中的2mL孔中。将每个织物样品暴露于1mL上述各化合物溶液(表9)(对于每种织物测试，包括不含化合物的对照溶液)。使织物样品在化合物溶液中静置至少30分钟。将织物样品从化合物溶液中取出并在去离子水中冲洗至少1分钟，以除去任何未结合的化合物。然后将织物样品在60℃下干燥至少30分钟，直到达到恒定的干燥度。干燥后将织物样品称重，并将其单独置于干净的48孔细胞培养板中的2mL孔中。然后将织物样品暴露于1mL的250ppm直接红80染料溶液或250ppm甲苯胺蓝染料溶液中。将样品留在染料溶液中至少15分钟。将每个织物样品从染料溶液中除去，之后将染料溶液稀释10倍。
与对照样品相比，测量稀释溶液的吸光度。根据需要，基于上述针对直接红80和/或甲苯胺蓝染料建立的校准曲线，计算吸附到织物上的氧化的右旋糖酐化合物的相对量度。具体地说，与对照(未暴露于化合物的织物)相比，暴露于氧化的化合物中的织物样品的UV吸光度差值表示吸附在织物上的化合物的相对量度。UV吸光度的差值也可以表示为结合到织物上的染料的量(超过结合到对照上的染料的量)，其使用校准曲线(即UV吸光度被转换成ppm染料)计算。正值表示超过与对照织物结合的染料量的染料量，而负值表示小于与对照织物结合的染料量的染料量。正值将反映吸附到织物表面的氧化的右旋糖酐化合物。
据信该测定将证明氧化的右旋糖酐可以在不同的盐和pH条件下吸附到各种类型的织物上。这种吸附表明氧化的右旋糖酐化合物在用于织物护理的洗涤剂中是有用的(例如，作为抗再沉积剂)。
实例14
右旋糖酐的过氧化物氧化
该实例描述了如何在包含过氧化物化合物的反应中生产氧化的右旋糖酐。特别地，过氧化氢可用于氧化如当前披露的右旋糖酐。
向116.4mL去离子水中添加3.6g右旋糖酐，并在250mL玻璃反应容器中调节至pH7.0。接着，向该制剂中添加360mg 30％过氧化氢，以达到基于右旋糖酐含量的3％w/w的过氧化氢添加。将制剂充分混合，密封在玻璃反应容器中并在121℃下高压灭菌60分钟。在该处理之后将反应冷却至室温，并且预期包含氧化的右旋糖酐。
因此，可以从含有过氧化物化合物的反应制备和分离氧化的右旋糖酐。
序列表
<110> E.I.内穆尔杜邦公司（E. I. du Pont de Nemours and Company）
Nambiar, Rakesh
Paullin, Jayme
<120> 氧化的右旋糖酐
<130> CL6422
<150> US 62/142,649
<151> 2015-04-03
<160> 18
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 1447
<212> PRT
<213> 假肠膜明串珠菌
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1447)
<223> 成熟的0768 gtf
<400> 1
Asp Gln Asn Val Asn Asp Pro Ser Val Ala Thr Thr Thr Gln Asn Val
1 5 10 15
Val Thr Asp Gln Asp Thr Ser Ile Asp Ala Ser Val Ala Thr Thr Val
20 25 30
Asn Pro Asn Leu Asp Asp Thr Gln Ala Asp Asn Thr Asn Ile Gln Thr
35 40 45
Pro Thr Asp Gln Asn Asp Glu Ser Lys Asp Thr Thr Pro Lys Val Glu
50 55 60
Thr Gly Asp Thr Thr Asn Ser Gln Ser Thr Glu Ala Gln Glu Thr Thr
65 70 75 80
Ala Gln Thr Asn Asn Asp Val Glu Thr Pro Gln Asn Ser Asp Ala Ala
85 90 95
Ile Glu Thr Gly Leu Leu Thr Thr Asn Asn Gln Ile Arg Tyr Val Asn
100 105 110
Pro Asp Gly Thr Val Leu Thr Gly Ala Tyr Lys Thr Ile Asn Gly Asn
115 120 125
Thr Tyr Tyr Phe Asp Asp Asp Ser Gly Val Ala Leu Val Gly Leu His
130 135 140
Lys Ile Gly Asp Thr Leu Lys Gly Phe Ser Leu Asn Gly Val Gln Val
145 150 155 160
Lys Gly Asp Tyr Leu Thr Ala Ala Asn Gly Asp Lys Tyr Tyr Phe Asp
165 170 175
Ser Asn Gly Asn Ala Val Ser Gly Val Gln Gln Ile Asn Gly Lys Thr
180 185 190
Tyr Tyr Phe Asp Ser Thr Gly Lys Leu Met Lys Gly Tyr Thr Ala Val
195 200 205
Leu Asn Gly Val Val Thr Phe Phe Asn Ser Thr Thr Gly Glu Ala Asp
210 215 220
Asn Thr Asp Ala Ser Thr Ile Lys Thr Gly Val Thr Ile Asp Asn Ser
225 230 235 240
Asp Tyr Thr Val His Asn Ala Ala Tyr Asp Asn Thr Ala Ala Ser Phe
245 250 255
Asp Asn Ile Asn Gly Tyr Leu Thr Ala Glu Ser Trp Tyr Arg Pro Lys
260 265 270
Glu Ile Leu Glu Asn Gly Glu Ser Trp Arg Pro Ser Thr Ala Glu Asp
275 280 285
Lys Arg Pro Ile Leu Ile Thr Trp Gln Pro Asp Ile Val Thr Glu Val
290 295 300
Asn Tyr Leu Asn Met Met Ala Ala Asn Gly Leu Leu Ser Ile Asn Ala
305 310 315 320
Pro Phe Thr Thr Ala Ser Asp Leu Ala Ile Met Asn Asp Ala Val Arg
325 330 335
Ala Val Gln Lys Asn Ile Glu Met Arg Ile Ser Gln Glu Lys Ser Thr
340 345 350
Asp Trp Leu Lys Ala Leu Met Thr Gln Phe Ile Asn Thr Gln Pro Gln
355 360 365
Trp Asn Glu Val Ser Glu Ser Pro Ser Asn Asp His Leu Gln Gly Gly
370 375 380
Ala Leu Thr Tyr Val Asn Ser Pro Leu Thr Pro Asp Ala Asn Ser Asn
385 390 395 400
Phe Arg Leu Leu Asn Arg Thr Pro Thr Asn Gln Ser Gly Thr Thr Arg
405 410 415
Tyr Asp Thr Asp Lys Ser Lys Gly Gly Phe Glu Leu Leu Leu Ala Asn
420 425 430
Asp Val Asp Asn Ser Asn Pro Val Val Gln Ala Glu Gln Leu Asn Trp
435 440 445
Leu Tyr Tyr Leu Met Asn Phe Gly Ser Ile Thr Ala Asn Asp Pro Thr
450 455 460
Ala Asn Phe Asp Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Asp Asn Val Asp Ala
465 470 475 480
Asp Leu Leu Gln Ile Ala Ser Asp Tyr Phe Lys Leu Ala Tyr Gly Thr
485 490 495
Ser Leu Ser Asp Thr Asn Ala Asn Gln His Leu Ser Ile Leu Glu Asp
500 505 510
Trp Ser Ala Asn Asp Ala Glu Tyr Met Ser Lys Thr Gly Ser Asn Gln
515 520 525
Leu Thr Met Asp Thr Tyr Thr Gln Gln Gln Leu Leu Phe Ser Leu Thr
530 535 540
Lys Gln Val Gly Asn Arg Ala Asp Met Arg Arg Phe Leu Glu Tyr Phe
545 550 555 560
Met Ile Asn Arg Ala Asn Asp Ser Thr Glu Asn Val Ala Thr Pro Asn
565 570 575
Tyr Ser Phe Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val Ile Ala
580 585 590
Thr Ile Ile Lys Asp Leu His Pro Asp Val Val Asn Ser Leu Ala Pro
595 600 605
Thr Gln Ala Gln Leu Glu Glu Ala Phe Ala Val Tyr Asn Ala Asp Met
610 615 620
Asn Arg Val Asp Lys Gln Tyr Thr Gln Tyr Asn Met Pro Ser Ala Tyr
625 630 635 640
Ala Met Leu Leu Thr Asn Lys Asp Thr Ile Pro Arg Val Tyr Tyr Gly
645 650 655
Asp Leu Tyr Thr Asp Asp Gly Glu Tyr Met Gly Thr Gln Thr Pro Tyr
660 665 670
Tyr Asp Ala Ile Val Asn Leu Leu Gln Ser Arg Val Lys Tyr Val Ala
675 680 685
Gly Gly Gln Ser Met Ala Val Asp Gln His Asp Ile Leu Thr Ser Val
690 695 700
Arg Tyr Gly Lys Asn Leu Ala Asp Ala Asn Ala Thr Ser Asp Asp Leu
705 710 715 720
Thr Ser Ile Asn Ser Gly Ile Gly Val Ile Val Ser Asn Asn Pro Asn
725 730 735
Leu Ser Leu Ala Ser Gly Glu Thr Val Val Leu His Met Gly Ile Ala
740 745 750
His Ala Asn Gln Val Tyr Arg Glu Ile Leu Glu Thr Thr Asp Asn Gly
755 760 765
Ile Ala Asn Asn Thr Asp Ile Phe Lys Thr Thr Asp Ser Asn Gly Asp
770 775 780
Leu Ile Phe Thr Ala Ser Glu Ile His Gly Tyr Ser Asn Val Gln Val
785 790 795 800
Ser Gly Phe Leu Ser Val Trp Ala Pro Lys Asp Ala Thr Asp Asp Gln
805 810 815
Asp Val Arg Thr Ala Ala Ser Glu Ser Thr Ser Asn Asp Gly Asn Thr
820 825 830
Leu His Ser Asn Ala Ala Leu Asp Ser Asn Leu Ile Tyr Glu Gly Phe
835 840 845
Ser Asn Phe Gln Ser Thr Pro Gln Ser Glu Ser Glu Phe Ala Asn Val
850 855 860
Lys Ile Ala Ala Asn Val Asn Leu Phe Lys Ser Trp Gly Val Thr Ser
865 870 875 880
Phe Gln Met Ala Pro Gln Tyr Arg Ser Ser Thr Asp Thr Ser Phe Leu
885 890 895
Asp Ser Ile Ile Gln Asn Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Arg Tyr Asp Leu
900 905 910
Gly Phe Glu Thr Pro Thr Lys Tyr Gly Thr Asp Gln Gln Leu Arg Asp
915 920 925
Ala Ile Lys Ala Leu His Ala Asn Gly Ile Gln Ala Met Ala Asp Phe
930 935 940
Val Pro Asp Gln Ile Tyr Asn Leu Pro Gln Thr Glu Leu Val Ser Val
945 950 955 960
Ser Arg Thr Asp Ser Leu Gly Asn Gln Ser Ala Asn Ser Asn Ala Ala
965 970 975
Asn Val Leu Tyr Val Ser His Thr Val Gly Gly Gly Glu Tyr Gln Ser
980 985 990
Lys Tyr Gly Gly Glu Phe Leu Ala Ile Ile Lys Ser Lys Tyr Pro Ser
995 1000 1005
Leu Phe Lys Thr Ile Gln Val Ser Thr Gly Leu Pro Ile Asp Asp
1010 1015 1020
Ser Thr Lys Ile Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr Phe Asn Gly Ser
1025 1030 1035
Asn Ile Gln Gly Arg Gly Phe Gly Tyr Val Leu Ser Asp Gly Gly
1040 1045 1050
Thr Gln Asn Tyr Phe Lys Val Ile Ser Asn Ser Thr Asp Asp Asp
1055 1060 1065
Phe Leu Pro Asn Gln Leu Thr Gly Lys Pro Thr Met Thr Gly Phe
1070 1075 1080
Glu Gln Thr Ser Lys Gly Ile Val Tyr Tyr Ser Lys Ser Gly Ile
1085 1090 1095
Gln Ala Lys Asn Gln Phe Val Lys Asp Asp Val Ser Gly Asn Tyr
1100 1105 1110
Tyr Tyr Phe Asn Lys Asn Gly Leu Met Thr Val Gly Ser Lys Thr
1115 1120 1125
Ile Asn Gly Lys Asn Tyr Met Phe Leu Pro Asn Gly Val Glu Leu
1130 1135 1140
Arg Gly Ser Phe Leu Gln Thr Ala Asp Gly Thr Val Asn Tyr Tyr
1145 1150 1155
Ala Thr Asn Gly Ala Gln Val Gln Asp Ser Tyr Val Thr Asp Thr
1160 1165 1170
Glu Gly Asn Ser Tyr Tyr Phe Asp Gly Asp Gly Glu Met Val Thr
1175 1180 1185
Gly Thr Tyr Thr Val Asp Gly His Ala Gln Tyr Phe Asp Val Asn
1190 1195 1200
Gly Val Gln Thr Lys Gly Ala Ile Ile Thr Leu Gly Gly Val Gln
1205 1210 1215
Arg Tyr Tyr Gln Ala Gly Asn Gly Asn Leu Ala Thr Asn Gln Tyr
1220 1225 1230
Val Ser Tyr Asn Asn Ser Trp Tyr Tyr Ala Asn Thr Lys Gly Glu
1235 1240 1245
Leu Val Thr Gly Val Gln Ser Ile Asn Gly Asn Val Gln Tyr Phe
1250 1255 1260
Ala Ser Asn Gly Gln Gln Ile Lys Gly Gln Ile Val Val Thr Gly
1265 1270 1275
Asn Gln Lys Ser Tyr Tyr Asp Ala Asn Thr Gly Asn Leu Ile Lys
1280 1285 1290
Asn Asp Phe Leu Thr Pro Asp Gln Gly Lys Thr Trp Tyr Tyr Ala
1295 1300 1305
Asp Gln Asp Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Gln Glu Val Asn Gly
1310 1315 1320
His Lys Leu Tyr Phe Asp Asp Asn Gly Ile Gln Ile Lys Asp Gln
1325 1330 1335
Ile Ile Ser Asn Asp Gly Gln Gln Tyr Tyr Tyr Gln Gly Gly Asn
1340 1345 1350
Gly Asp Leu Val Thr Asn Arg Tyr Ile Ser Tyr Asn Asp Ser Trp
1355 1360 1365
Tyr Tyr Ala Asp Ala Thr Gly Val Leu Val Thr Gly Gln Gln Ile
1370 1375 1380
Ile Asn Gly Glu Thr Gln Tyr Phe Arg Thr Asp Gly Arg Gln Val
1385 1390 1395
Lys Gly Gln Ile Ile Ala Asp Gly Asp Lys Gln His Tyr Tyr Asp
1400 1405 1410
Ala Asp Ser Gly Asn Leu Val Lys Asn Asn Phe Val Thr Val Asp
1415 1420 1425
Gln Gly Lys Thr Trp Tyr Tyr Ala Asp Gln Asp Gly Asn Leu Ser
1430 1435 1440
Leu Val Asp Arg
1445
<210> 2
<211> 1457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有起始密码子和其他添加的序列的0768 gtf成熟蛋白质
<400> 2
Met Ala Ser Ala Asp Gln Asn Val Asn Asp Pro Ser Val Ala Thr Thr
1 5 10 15
Thr Gln Asn Val Val Thr Asp Gln Asp Thr Ser Ile Asp Ala Ser Val
20 25 30
Ala Thr Thr Val Asn Pro Asn Leu Asp Asp Thr Gln Ala Asp Asn Thr
35 40 45
Asn Ile Gln Thr Pro Thr Asp Gln Asn Asp Glu Ser Lys Asp Thr Thr
50 55 60
Pro Lys Val Glu Thr Gly Asp Thr Thr Asn Ser Gln Ser Thr Glu Ala
65 70 75 80
Gln Glu Thr Thr Ala Gln Thr Asn Asn Asp Val Glu Thr Pro Gln Asn
85 90 95
Ser Asp Ala Ala Ile Glu Thr Gly Leu Leu Thr Thr Asn Asn Gln Ile
100 105 110
Arg Tyr Val Asn Pro Asp Gly Thr Val Leu Thr Gly Ala Tyr Lys Thr
115 120 125
Ile Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Phe Asp Asp Asp Ser Gly Val Ala Leu
130 135 140
Val Gly Leu His Lys Ile Gly Asp Thr Leu Lys Gly Phe Ser Leu Asn
145 150 155 160
Gly Val Gln Val Lys Gly Asp Tyr Leu Thr Ala Ala Asn Gly Asp Lys
165 170 175
Tyr Tyr Phe Asp Ser Asn Gly Asn Ala Val Ser Gly Val Gln Gln Ile
180 185 190
Asn Gly Lys Thr Tyr Tyr Phe Asp Ser Thr Gly Lys Leu Met Lys Gly
195 200 205
Tyr Thr Ala Val Leu Asn Gly Val Val Thr Phe Phe Asn Ser Thr Thr
210 215 220
Gly Glu Ala Asp Asn Thr Asp Ala Ser Thr Ile Lys Thr Gly Val Thr
225 230 235 240
Ile Asp Asn Ser Asp Tyr Thr Val His Asn Ala Ala Tyr Asp Asn Thr
245 250 255
Ala Ala Ser Phe Asp Asn Ile Asn Gly Tyr Leu Thr Ala Glu Ser Trp
260 265 270
Tyr Arg Pro Lys Glu Ile Leu Glu Asn Gly Glu Ser Trp Arg Pro Ser
275 280 285
Thr Ala Glu Asp Lys Arg Pro Ile Leu Ile Thr Trp Gln Pro Asp Ile
290 295 300
Val Thr Glu Val Asn Tyr Leu Asn Met Met Ala Ala Asn Gly Leu Leu
305 310 315 320
Ser Ile Asn Ala Pro Phe Thr Thr Ala Ser Asp Leu Ala Ile Met Asn
325 330 335
Asp Ala Val Arg Ala Val Gln Lys Asn Ile Glu Met Arg Ile Ser Gln
340 345 350
Glu Lys Ser Thr Asp Trp Leu Lys Ala Leu Met Thr Gln Phe Ile Asn
355 360 365
Thr Gln Pro Gln Trp Asn Glu Val Ser Glu Ser Pro Ser Asn Asp His
370 375 380
Leu Gln Gly Gly Ala Leu Thr Tyr Val Asn Ser Pro Leu Thr Pro Asp
385 390 395 400
Ala Asn Ser Asn Phe Arg Leu Leu Asn Arg Thr Pro Thr Asn Gln Ser
405 410 415
Gly Thr Thr Arg Tyr Asp Thr Asp Lys Ser Lys Gly Gly Phe Glu Leu
420 425 430
Leu Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn Pro Val Val Gln Ala Glu
435 440 445
Gln Leu Asn Trp Leu Tyr Tyr Leu Met Asn Phe Gly Ser Ile Thr Ala
450 455 460
Asn Asp Pro Thr Ala Asn Phe Asp Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Asp
465 470 475 480
Asn Val Asp Ala Asp Leu Leu Gln Ile Ala Ser Asp Tyr Phe Lys Leu
485 490 495
Ala Tyr Gly Thr Ser Leu Ser Asp Thr Asn Ala Asn Gln His Leu Ser
500 505 510
Ile Leu Glu Asp Trp Ser Ala Asn Asp Ala Glu Tyr Met Ser Lys Thr
515 520 525
Gly Ser Asn Gln Leu Thr Met Asp Thr Tyr Thr Gln Gln Gln Leu Leu
530 535 540
Phe Ser Leu Thr Lys Gln Val Gly Asn Arg Ala Asp Met Arg Arg Phe
545 550 555 560
Leu Glu Tyr Phe Met Ile Asn Arg Ala Asn Asp Ser Thr Glu Asn Val
565 570 575
Ala Thr Pro Asn Tyr Ser Phe Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln
580 585 590
Thr Val Ile Ala Thr Ile Ile Lys Asp Leu His Pro Asp Val Val Asn
595 600 605
Ser Leu Ala Pro Thr Gln Ala Gln Leu Glu Glu Ala Phe Ala Val Tyr
610 615 620
Asn Ala Asp Met Asn Arg Val Asp Lys Gln Tyr Thr Gln Tyr Asn Met
625 630 635 640
Pro Ser Ala Tyr Ala Met Leu Leu Thr Asn Lys Asp Thr Ile Pro Arg
645 650 655
Val Tyr Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr Asp Asp Gly Glu Tyr Met Gly Thr
660 665 670
Gln Thr Pro Tyr Tyr Asp Ala Ile Val Asn Leu Leu Gln Ser Arg Val
675 680 685
Lys Tyr Val Ala Gly Gly Gln Ser Met Ala Val Asp Gln His Asp Ile
690 695 700
Leu Thr Ser Val Arg Tyr Gly Lys Asn Leu Ala Asp Ala Asn Ala Thr
705 710 715 720
Ser Asp Asp Leu Thr Ser Ile Asn Ser Gly Ile Gly Val Ile Val Ser
725 730 735
Asn Asn Pro Asn Leu Ser Leu Ala Ser Gly Glu Thr Val Val Leu His
740 745 750
Met Gly Ile Ala His Ala Asn Gln Val Tyr Arg Glu Ile Leu Glu Thr
755 760 765
Thr Asp Asn Gly Ile Ala Asn Asn Thr Asp Ile Phe Lys Thr Thr Asp
770 775 780
Ser Asn Gly Asp Leu Ile Phe Thr Ala Ser Glu Ile His Gly Tyr Ser
785 790 795 800
Asn Val Gln Val Ser Gly Phe Leu Ser Val Trp Ala Pro Lys Asp Ala
805 810 815
Thr Asp Asp Gln Asp Val Arg Thr Ala Ala Ser Glu Ser Thr Ser Asn
820 825 830
Asp Gly Asn Thr Leu His Ser Asn Ala Ala Leu Asp Ser Asn Leu Ile
835 840 845
Tyr Glu Gly Phe Ser Asn Phe Gln Ser Thr Pro Gln Ser Glu Ser Glu
850 855 860
Phe Ala Asn Val Lys Ile Ala Ala Asn Val Asn Leu Phe Lys Ser Trp
865 870 875 880
Gly Val Thr Ser Phe Gln Met Ala Pro Gln Tyr Arg Ser Ser Thr Asp
885 890 895
Thr Ser Phe Leu Asp Ser Ile Ile Gln Asn Gly Tyr Ala Phe Thr Asp
900 905 910
Arg Tyr Asp Leu Gly Phe Glu Thr Pro Thr Lys Tyr Gly Thr Asp Gln
915 920 925
Gln Leu Arg Asp Ala Ile Lys Ala Leu His Ala Asn Gly Ile Gln Ala
930 935 940
Met Ala Asp Phe Val Pro Asp Gln Ile Tyr Asn Leu Pro Gln Thr Glu
945 950 955 960
Leu Val Ser Val Ser Arg Thr Asp Ser Leu Gly Asn Gln Ser Ala Asn
965 970 975
Ser Asn Ala Ala Asn Val Leu Tyr Val Ser His Thr Val Gly Gly Gly
980 985 990
Glu Tyr Gln Ser Lys Tyr Gly Gly Glu Phe Leu Ala Ile Ile Lys Ser
995 1000 1005
Lys Tyr Pro Ser Leu Phe Lys Thr Ile Gln Val Ser Thr Gly Leu
1010 1015 1020
Pro Ile Asp Asp Ser Thr Lys Ile Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr
1025 1030 1035
Phe Asn Gly Ser Asn Ile Gln Gly Arg Gly Phe Gly Tyr Val Leu
1040 1045 1050
Ser Asp Gly Gly Thr Gln Asn Tyr Phe Lys Val Ile Ser Asn Ser
1055 1060 1065
Thr Asp Asp Asp Phe Leu Pro Asn Gln Leu Thr Gly Lys Pro Thr
1070 1075 1080
Met Thr Gly Phe Glu Gln Thr Ser Lys Gly Ile Val Tyr Tyr Ser
1085 1090 1095
Lys Ser Gly Ile Gln Ala Lys Asn Gln Phe Val Lys Asp Asp Val
1100 1105 1110
Ser Gly Asn Tyr Tyr Tyr Phe Asn Lys Asn Gly Leu Met Thr Val
1115 1120 1125
Gly Ser Lys Thr Ile Asn Gly Lys Asn Tyr Met Phe Leu Pro Asn
1130 1135 1140
Gly Val Glu Leu Arg Gly Ser Phe Leu Gln Thr Ala Asp Gly Thr
1145 1150 1155
Val Asn Tyr Tyr Ala Thr Asn Gly Ala Gln Val Gln Asp Ser Tyr
1160 1165 1170
Val Thr Asp Thr Glu Gly Asn Ser Tyr Tyr Phe Asp Gly Asp Gly
1175 1180 1185
Glu Met Val Thr Gly Thr Tyr Thr Val Asp Gly His Ala Gln Tyr
1190 1195 1200
Phe Asp Val Asn Gly Val Gln Thr Lys Gly Ala Ile Ile Thr Leu
1205 1210 1215
Gly Gly Val Gln Arg Tyr Tyr Gln Ala Gly Asn Gly Asn Leu Ala
1220 1225 1230
Thr Asn Gln Tyr Val Ser Tyr Asn Asn Ser Trp Tyr Tyr Ala Asn
1235 1240 1245
Thr Lys Gly Glu Leu Val Thr Gly Val Gln Ser Ile Asn Gly Asn
1250 1255 1260
Val Gln Tyr Phe Ala Ser Asn Gly Gln Gln Ile Lys Gly Gln Ile
1265 1270 1275
Val Val Thr Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Tyr Asp Ala Asn Thr Gly
1280 1285 1290
Asn Leu Ile Lys Asn Asp Phe Leu Thr Pro Asp Gln Gly Lys Thr
1295 1300 1305
Trp Tyr Tyr Ala Asp Gln Asp Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Gln
1310 1315 1320
Glu Val Asn Gly His Lys Leu Tyr Phe Asp Asp Asn Gly Ile Gln
1325 1330 1335
Ile Lys Asp Gln Ile Ile Ser Asn Asp Gly Gln Gln Tyr Tyr Tyr
1340 1345 1350
Gln Gly Gly Asn Gly Asp Leu Val Thr Asn Arg Tyr Ile Ser Tyr
1355 1360 1365
Asn Asp Ser Trp Tyr Tyr Ala Asp Ala Thr Gly Val Leu Val Thr
1370 1375 1380
Gly Gln Gln Ile Ile Asn Gly Glu Thr Gln Tyr Phe Arg Thr Asp
1385 1390 1395
Gly Arg Gln Val Lys Gly Gln Ile Ile Ala Asp Gly Asp Lys Gln
1400 1405 1410
His Tyr Tyr Asp Ala Asp Ser Gly Asn Leu Val Lys Asn Asn Phe
1415 1420 1425
Val Thr Val Asp Gln Gly Lys Thr Trp Tyr Tyr Ala Asp Gln Asp
1430 1435 1440
Gly Asn Leu Ser Leu Val Asp Arg His His His His His His
1445 1450 1455
<210> 3
<211> 4347
<212> DNA
<213> 食窦魏斯氏菌
<400> 3
atgtacaagt ccggaaagtt ttgggtagct gccggtgctt tgtttgttgg gctggcattc 60
gctggtaaca cgcaggctga tactgtatta ccaagtgaac aacgtgcaac ggagacgaca 120
cagacgacac agaccagtga agacacgtcc gccactaaga cgccggcatc ggcgtcgact 180
tcaagctcag tcaatgttga cacgagtgac ctgcctgaca gttcaagtac ggtagttgat 240
agtacaagtg caagtgcaag cgtagtgagt gatagcgtcg ctgtgccaga tactggatca 300
caatttacga gttcgtcagg gtcaatgtca tcatcatttg ttaagtcatc actagcggca 360
acaactagtg atgcttctgg cagtcagtcg gcggcggtga ctagcgcaac cgttagttcg 420
gtggccacga gtagttcagc atcttcagtg acaacagcca caagcgaatc agcagtgata 480
agcagcgccg tgtcagatgg ttaccatgat gaaggtggtg attgggtcta ttatcgagct 540
ggaaaaaagt tagtcggtcg acaaacgatt gatacgtttg cggtttactt tgacgccgat 600
ggcaaacaag tcaagggtga ttggcgtgaa agtgatggta accgtgcgta ttatgatgga 660
caagaaggac gagcattaac gcaaacgcaa gcagtcaatg gcgttatcta cggttttaat 720
caaagcggct atcaaatcaa gaatgatttc ggccaaacag cgaatcgaga tacgtattat 780
ttcgacgcac aaggtcatgt tgtcacggga atccaaacaa ttgcaaacaa ggtttatgat 840
tttgatgagc aaggtcgaat gctgaaaggc attgccacgt cagttgatga caagatgatg 900
tattttgatg atcaaacagg tgttggacaa ccggctgatc atcctgaatt caaccctgaa 960
acggaaccgg ttcctgacga caatatcaaa cataatgcag cacatggtac gacaccagca 1020
gattttgatt cgatggctgg ctacctgacg gctgatactt ggtatcgccc aaccgatatt 1080
ttggaaaatg gtgagacgtg gcgcgaatcg caaccaactg aatttcgacc actgttagca 1140
acttggtggc caacaaaaca aactcaggcc gattacgtga actacatgaa tcacgcatta 1200
gatatgtcaa atgcaagtgt gtcagctgcc gattcagaag ccacgctaac tgcggcaacc 1260
gatgctattc aagcggccgt tgagcaccaa attacggtgc gccaatcaac ggcctggtta 1320
cgtgaattaa tggccgcgtt tgttgtgaca cagccacagt ggaataaaac cagtgaagat 1380
gttaatgatg atcatttgca aggtggggcg ctaacatttg agaataacgg cgacacagac 1440
gctaattcgg attatcgcct catgaatcgc acgccaacaa atcagactgg tgaacgcttg 1500
tatcacattg atgactcgct tggcggttac gaattattgc tggcaaatga cgttgacaat 1560
tcaaatccac aagttcaggc agaacaattg aattggttgt actacttgat gcattttggg 1620
gatattacag ctgatgatcc ggatgcaaat tttgatgcca tacggattga tgcggtcgat 1680
aatgtcgatg ctgatttact tcaactagca gctcagtatt tccgtgatgc ctatggcatg 1740
gccacgactg acgcgacatc aaataagcat ctttcaatac ttgaggattg gagccataac 1800
gatccggcgt atatgcaagc acacggcaat gatcaattaa cgatggatga ttatatgcac 1860
acacagttga tttggtcatt aaccaagcca gaggcacaac gtggcaccat ggcacgcttt 1920
atggacttct atctcaccaa ccgtgctaat gatgatacag aaaacacggc gcaacctagt 1980
tactcgtttg tgcgtgccca tgatagcgaa gtgcaaacag tcattgctga aatcgtgacg 2040
aagctacatc cagaagcagg aaacgggtta atgcctacgg aagaacaaat ggcagaagcg 2100
tttaagattt acaatgcgga ccaaaagaag gccgttaaaa cttacacgca ctacaatatg 2160
ccatctgcat acgccatgct gttaacgaac aaggatgtta ttccacgaat ttactatggt 2220
gacttgtaca ctgacgatgg gcaattcatg gcgacaaaat caccctattt tgatgcgatt 2280
tcggctatgt tacaagcgcg cacgaagtat gtagctggtg gacaaacgat ggcggttgac 2340
cagcacgacg tcttgactag cgttcggttt ggtaagggtg ccatgacggc cagtgattta 2400
ggaaatgctg agactcggac tgagggtgtg ggattaatta ttagcaacaa cccaaagttg 2460
caattgggac aacaagataa cgtggtgtta cacatgggac ttgcgcacgc gaatcaagca 2520
ttccgagcag ttgtactaac gaccgcgacc ggattaacca tttataatga cgatgatgct 2580
ccaattcgtt ataccgataa taagggtgat ttaattttca ataaccatga cgtatatggc 2640
gtgttgaatc cacaagtgtc aggcttcttg gcaatgtggg tgccaactgg tgcaccagcg 2700
aaccaggatg cgcgatctac tgcgtcaacc aacagttcaa cggatggatc tgcctaccat 2760
tctaatgcgg ctttagatag tcaagtcatc tttgaatcat tttcgaattt ccaggctatg 2820
ccaacaagcc atgacacgta caccaacgtt gtgttagcca atcatgctga ccagttacac 2880
gattggggaa taacttcggt acagttagcg ccacaatacc ggtcttcaac cgacggaacc 2940
tttttggatg cgattattca aaatggctat gccttcactg accgttatga tttagggttt 3000
ggtacgccaa ctaagtatgg ggatgatacg gatttgcgga acgtcatcaa agcattgcat 3060
gcaaatggca tgcaagtaat ggctgatttt gtgccggatc aattgtatac attaccaggt 3120
aaggaattgg tacaagtcac ccgaacaaac aatatgggtg agccagatac acactctgac 3180
atccaacata ttttatatgt gacgagcact cggggtggcg gtgagtatca gaaacagtac 3240
ggtggtgagt tccttgagcg gttacgtgcg ctctaccctg atttatttac gacacgtcaa 3300
atttcaaccg gacaaaccat tgatgattca gtaaaaatta aagaatggtc agctaagtat 3360
ttgaatggta ccgcaattca aggccgtgga gctggctatg tgctacgtga taatggtaca 3420
aatgcttatt acaaggtgac ggcaaatgac ggtaatgtga acttaccaaa gcaattactc 3480
ggacaaccag tgatgaccgg attctatcac gaggcagatg gttatcattt tgaaacattg 3540
agtggtacgt cggccaaaga tgccttcatt atgggtgacg atggggcgct gtattatttt 3600
gatgatcagg gcgtcatggt aacgggtaag caacgtgtgc accaagacca gtatttcttc 3660
ctaccaaacg gtattgctct gacggatgcg tttgtacaaa gtgcggatgg tcaacgtcag 3720
tactatgata aaacaggtcg cctggtcatt aatcaatatg tgactgacca ccaagcaaat 3780
gcgttccggg ttgatgcaga cggtaacgtt gttcgtaacc aagctttgac tgttgacggc 3840
catgaacaat atttcggcac aaacggtgtc caagcgaaag cagtgctcat tcgaactgac 3900
gataatcagg cacggtacta cgaagccaat agtggtaatc tcgtgaagca acagtttatt 3960
cttgatacag atggacattg gttgtacgcc gatgctgcag gagacttggc acgcggacaa 4020
attacggttg gccaagacac gttgtatttt gatgataata atcatcaggt aaaagatgat 4080
tttgtctatg atactaacgg tgtgcattat tttaatggca caacaggcgc tgaaatcaaa 4140
caagattacg cgtttcatga tggcaaatgg tactattttg atgatttggg acgaatggta 4200
accggtttgc agcgtattaa tggtgagtat cgctattttg atgctaatgg tgtgcaacta 4260
aagggtggta ccgtgaccga tccactaacg caccaaacgt acacttttga tgcgcaaact 4320
ggtgttggta cgttggtgac gttttaa 4347
<210> 4
<211> 1448
<212> PRT
<213> 食窦魏斯氏菌
<400> 4
Met Tyr Lys Ser Gly Lys Phe Trp Val Ala Ala Gly Ala Leu Phe Val
1 5 10 15
Gly Leu Ala Phe Ala Gly Asn Thr Gln Ala Asp Thr Val Leu Pro Ser
20 25 30
Glu Gln Arg Ala Thr Glu Thr Thr Gln Thr Thr Gln Thr Ser Glu Asp
35 40 45
Thr Ser Ala Thr Lys Thr Pro Ala Ser Ala Ser Thr Ser Ser Ser Val
50 55 60
Asn Val Asp Thr Ser Asp Leu Pro Asp Ser Ser Ser Thr Val Val Asp
65 70 75 80
Ser Thr Ser Ala Ser Ala Ser Val Val Ser Asp Ser Val Ala Val Pro
85 90 95
Asp Thr Gly Ser Gln Phe Thr Ser Ser Ser Gly Ser Met Ser Ser Ser
100 105 110
Phe Val Lys Ser Ser Leu Ala Ala Thr Thr Ser Asp Ala Ser Gly Ser
115 120 125
Gln Ser Ala Ala Val Thr Ser Ala Thr Val Ser Ser Val Ala Thr Ser
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Ser Val Thr Thr Ala Thr Ser Glu Ser Ala Val Ile
145 150 155 160
Ser Ser Ala Val Ser Asp Gly Tyr His Asp Glu Gly Gly Asp Trp Val
165 170 175
Tyr Tyr Arg Ala Gly Lys Lys Leu Val Gly Arg Gln Thr Ile Asp Thr
180 185 190
Phe Ala Val Tyr Phe Asp Ala Asp Gly Lys Gln Val Lys Gly Asp Trp
195 200 205
Arg Glu Ser Asp Gly Asn Arg Ala Tyr Tyr Asp Gly Gln Glu Gly Arg
210 215 220
Ala Leu Thr Gln Thr Gln Ala Val Asn Gly Val Ile Tyr Gly Phe Asn
225 230 235 240
Gln Ser Gly Tyr Gln Ile Lys Asn Asp Phe Gly Gln Thr Ala Asn Arg
245 250 255
Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp Ala Gln Gly His Val Val Thr Gly Ile Gln
260 265 270
Thr Ile Ala Asn Lys Val Tyr Asp Phe Asp Glu Gln Gly Arg Met Leu
275 280 285
Lys Gly Ile Ala Thr Ser Val Asp Asp Lys Met Met Tyr Phe Asp Asp
290 295 300
Gln Thr Gly Val Gly Gln Pro Ala Asp His Pro Glu Phe Asn Pro Glu
305 310 315 320
Thr Glu Pro Val Pro Asp Asp Asn Ile Lys His Asn Ala Ala His Gly
325 330 335
Thr Thr Pro Ala Asp Phe Asp Ser Met Ala Gly Tyr Leu Thr Ala Asp
340 345 350
Thr Trp Tyr Arg Pro Thr Asp Ile Leu Glu Asn Gly Glu Thr Trp Arg
355 360 365
Glu Ser Gln Pro Thr Glu Phe Arg Pro Leu Leu Ala Thr Trp Trp Pro
370 375 380
Thr Lys Gln Thr Gln Ala Asp Tyr Val Asn Tyr Met Asn His Ala Leu
385 390 395 400
Asp Met Ser Asn Ala Ser Val Ser Ala Ala Asp Ser Glu Ala Thr Leu
405 410 415
Thr Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gln Ala Ala Val Glu His Gln Ile Thr
420 425 430
Val Arg Gln Ser Thr Ala Trp Leu Arg Glu Leu Met Ala Ala Phe Val
435 440 445
Val Thr Gln Pro Gln Trp Asn Lys Thr Ser Glu Asp Val Asn Asp Asp
450 455 460
His Leu Gln Gly Gly Ala Leu Thr Phe Glu Asn Asn Gly Asp Thr Asp
465 470 475 480
Ala Asn Ser Asp Tyr Arg Leu Met Asn Arg Thr Pro Thr Asn Gln Thr
485 490 495
Gly Glu Arg Leu Tyr His Ile Asp Asp Ser Leu Gly Gly Tyr Glu Leu
500 505 510
Leu Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn Pro Gln Val Gln Ala Glu
515 520 525
Gln Leu Asn Trp Leu Tyr Tyr Leu Met His Phe Gly Asp Ile Thr Ala
530 535 540
Asp Asp Pro Asp Ala Asn Phe Asp Ala Ile Arg Ile Asp Ala Val Asp
545 550 555 560
Asn Val Asp Ala Asp Leu Leu Gln Leu Ala Ala Gln Tyr Phe Arg Asp
565 570 575
Ala Tyr Gly Met Ala Thr Thr Asp Ala Thr Ser Asn Lys His Leu Ser
580 585 590
Ile Leu Glu Asp Trp Ser His Asn Asp Pro Ala Tyr Met Gln Ala His
595 600 605
Gly Asn Asp Gln Leu Thr Met Asp Asp Tyr Met His Thr Gln Leu Ile
610 615 620
Trp Ser Leu Thr Lys Pro Glu Ala Gln Arg Gly Thr Met Ala Arg Phe
625 630 635 640
Met Asp Phe Tyr Leu Thr Asn Arg Ala Asn Asp Asp Thr Glu Asn Thr
645 650 655
Ala Gln Pro Ser Tyr Ser Phe Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln
660 665 670
Thr Val Ile Ala Glu Ile Val Thr Lys Leu His Pro Glu Ala Gly Asn
675 680 685
Gly Leu Met Pro Thr Glu Glu Gln Met Ala Glu Ala Phe Lys Ile Tyr
690 695 700
Asn Ala Asp Gln Lys Lys Ala Val Lys Thr Tyr Thr His Tyr Asn Met
705 710 715 720
Pro Ser Ala Tyr Ala Met Leu Leu Thr Asn Lys Asp Val Ile Pro Arg
725 730 735
Ile Tyr Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr Asp Asp Gly Gln Phe Met Ala Thr
740 745 750
Lys Ser Pro Tyr Phe Asp Ala Ile Ser Ala Met Leu Gln Ala Arg Thr
755 760 765
Lys Tyr Val Ala Gly Gly Gln Thr Met Ala Val Asp Gln His Asp Val
770 775 780
Leu Thr Ser Val Arg Phe Gly Lys Gly Ala Met Thr Ala Ser Asp Leu
785 790 795 800
Gly Asn Ala Glu Thr Arg Thr Glu Gly Val Gly Leu Ile Ile Ser Asn
805 810 815
Asn Pro Lys Leu Gln Leu Gly Gln Gln Asp Asn Val Val Leu His Met
820 825 830
Gly Leu Ala His Ala Asn Gln Ala Phe Arg Ala Val Val Leu Thr Thr
835 840 845
Ala Thr Gly Leu Thr Ile Tyr Asn Asp Asp Asp Ala Pro Ile Arg Tyr
850 855 860
Thr Asp Asn Lys Gly Asp Leu Ile Phe Asn Asn His Asp Val Tyr Gly
865 870 875 880
Val Leu Asn Pro Gln Val Ser Gly Phe Leu Ala Met Trp Val Pro Thr
885 890 895
Gly Ala Pro Ala Asn Gln Asp Ala Arg Ser Thr Ala Ser Thr Asn Ser
900 905 910
Ser Thr Asp Gly Ser Ala Tyr His Ser Asn Ala Ala Leu Asp Ser Gln
915 920 925
Val Ile Phe Glu Ser Phe Ser Asn Phe Gln Ala Met Pro Thr Ser His
930 935 940
Asp Thr Tyr Thr Asn Val Val Leu Ala Asn His Ala Asp Gln Leu His
945 950 955 960
Asp Trp Gly Ile Thr Ser Val Gln Leu Ala Pro Gln Tyr Arg Ser Ser
965 970 975
Thr Asp Gly Thr Phe Leu Asp Ala Ile Ile Gln Asn Gly Tyr Ala Phe
980 985 990
Thr Asp Arg Tyr Asp Leu Gly Phe Gly Thr Pro Thr Lys Tyr Gly Asp
995 1000 1005
Asp Thr Asp Leu Arg Asn Val Ile Lys Ala Leu His Ala Asn Gly
1010 1015 1020
Met Gln Val Met Ala Asp Phe Val Pro Asp Gln Leu Tyr Thr Leu
1025 1030 1035
Pro Gly Lys Glu Leu Val Gln Val Thr Arg Thr Asn Asn Met Gly
1040 1045 1050
Glu Pro Asp Thr His Ser Asp Ile Gln His Ile Leu Tyr Val Thr
1055 1060 1065
Ser Thr Arg Gly Gly Gly Glu Tyr Gln Lys Gln Tyr Gly Gly Glu
1070 1075 1080
Phe Leu Glu Arg Leu Arg Ala Leu Tyr Pro Asp Leu Phe Thr Thr
1085 1090 1095
Arg Gln Ile Ser Thr Gly Gln Thr Ile Asp Asp Ser Val Lys Ile
1100 1105 1110
Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr Leu Asn Gly Thr Ala Ile Gln Gly
1115 1120 1125
Arg Gly Ala Gly Tyr Val Leu Arg Asp Asn Gly Thr Asn Ala Tyr
1130 1135 1140
Tyr Lys Val Thr Ala Asn Asp Gly Asn Val Asn Leu Pro Lys Gln
1145 1150 1155
Leu Leu Gly Gln Pro Val Met Thr Gly Phe Tyr His Glu Ala Asp
1160 1165 1170
Gly Tyr His Phe Glu Thr Leu Ser Gly Thr Ser Ala Lys Asp Ala
1175 1180 1185
Phe Ile Met Gly Asp Asp Gly Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Asp Gln
1190 1195 1200
Gly Val Met Val Thr Gly Lys Gln Arg Val His Gln Asp Gln Tyr
1205 1210 1215
Phe Phe Leu Pro Asn Gly Ile Ala Leu Thr Asp Ala Phe Val Gln
1220 1225 1230
Ser Ala Asp Gly Gln Arg Gln Tyr Tyr Asp Lys Thr Gly Arg Leu
1235 1240 1245
Val Ile Asn Gln Tyr Val Thr Asp His Gln Ala Asn Ala Phe Arg
1250 1255 1260
Val Asp Ala Asp Gly Asn Val Val Arg Asn Gln Ala Leu Thr Val
1265 1270 1275
Asp Gly His Glu Gln Tyr Phe Gly Thr Asn Gly Val Gln Ala Lys
1280 1285 1290
Ala Val Leu Ile Arg Thr Asp Asp Asn Gln Ala Arg Tyr Tyr Glu
1295 1300 1305
Ala Asn Ser Gly Asn Leu Val Lys Gln Gln Phe Ile Leu Asp Thr
1310 1315 1320
Asp Gly His Trp Leu Tyr Ala Asp Ala Ala Gly Asp Leu Ala Arg
1325 1330 1335
Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Asp Thr Leu Tyr Phe Asp Asp Asn
1340 1345 1350
Asn His Gln Val Lys Asp Asp Phe Val Tyr Asp Thr Asn Gly Val
1355 1360 1365
His Tyr Phe Asn Gly Thr Thr Gly Ala Glu Ile Lys Gln Asp Tyr
1370 1375 1380
Ala Phe His Asp Gly Lys Trp Tyr Tyr Phe Asp Asp Leu Gly Arg
1385 1390 1395
Met Val Thr Gly Leu Gln Arg Ile Asn Gly Glu Tyr Arg Tyr Phe
1400 1405 1410
Asp Ala Asn Gly Val Gln Leu Lys Gly Gly Thr Val Thr Asp Pro
1415 1420 1425
Leu Thr His Gln Thr Tyr Thr Phe Asp Ala Gln Thr Gly Val Gly
1430 1435 1440
Thr Leu Val Thr Phe
1445
<210> 5
<211> 1422
<212> PRT
<213> 食窦魏斯氏菌
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1422)
<223> 成熟的2919 gtf
<400> 5
Asp Thr Val Leu Pro Ser Glu Gln Arg Ala Thr Glu Thr Thr Gln Thr
1 5 10 15
Thr Gln Thr Ser Glu Asp Thr Ser Ala Thr Lys Thr Pro Ala Ser Ala
20 25 30
Ser Thr Ser Ser Ser Val Asn Val Asp Thr Ser Asp Leu Pro Asp Ser
35 40 45
Ser Ser Thr Val Val Asp Ser Thr Ser Ala Ser Ala Ser Val Val Ser
50 55 60
Asp Ser Val Ala Val Pro Asp Thr Gly Ser Gln Phe Thr Ser Ser Ser
65 70 75 80
Gly Ser Met Ser Ser Ser Phe Val Lys Ser Ser Leu Ala Ala Thr Thr
85 90 95
Ser Asp Ala Ser Gly Ser Gln Ser Ala Ala Val Thr Ser Ala Thr Val
100 105 110
Ser Ser Val Ala Thr Ser Ser Ser Ala Ser Ser Val Thr Thr Ala Thr
115 120 125
Ser Glu Ser Ala Val Ile Ser Ser Ala Val Ser Asp Gly Tyr His Asp
130 135 140
Glu Gly Gly Asp Trp Val Tyr Tyr Arg Ala Gly Lys Lys Leu Val Gly
145 150 155 160
Arg Gln Thr Ile Asp Thr Phe Ala Val Tyr Phe Asp Ala Asp Gly Lys
165 170 175
Gln Val Lys Gly Asp Trp Arg Glu Ser Asp Gly Asn Arg Ala Tyr Tyr
180 185 190
Asp Gly Gln Glu Gly Arg Ala Leu Thr Gln Thr Gln Ala Val Asn Gly
195 200 205
Val Ile Tyr Gly Phe Asn Gln Ser Gly Tyr Gln Ile Lys Asn Asp Phe
210 215 220
Gly Gln Thr Ala Asn Arg Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp Ala Gln Gly His
225 230 235 240
Val Val Thr Gly Ile Gln Thr Ile Ala Asn Lys Val Tyr Asp Phe Asp
245 250 255
Glu Gln Gly Arg Met Leu Lys Gly Ile Ala Thr Ser Val Asp Asp Lys
260 265 270
Met Met Tyr Phe Asp Asp Gln Thr Gly Val Gly Gln Pro Ala Asp His
275 280 285
Pro Glu Phe Asn Pro Glu Thr Glu Pro Val Pro Asp Asp Asn Ile Lys
290 295 300
His Asn Ala Ala His Gly Thr Thr Pro Ala Asp Phe Asp Ser Met Ala
305 310 315 320
Gly Tyr Leu Thr Ala Asp Thr Trp Tyr Arg Pro Thr Asp Ile Leu Glu
325 330 335
Asn Gly Glu Thr Trp Arg Glu Ser Gln Pro Thr Glu Phe Arg Pro Leu
340 345 350
Leu Ala Thr Trp Trp Pro Thr Lys Gln Thr Gln Ala Asp Tyr Val Asn
355 360 365
Tyr Met Asn His Ala Leu Asp Met Ser Asn Ala Ser Val Ser Ala Ala
370 375 380
Asp Ser Glu Ala Thr Leu Thr Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gln Ala Ala
385 390 395 400
Val Glu His Gln Ile Thr Val Arg Gln Ser Thr Ala Trp Leu Arg Glu
405 410 415
Leu Met Ala Ala Phe Val Val Thr Gln Pro Gln Trp Asn Lys Thr Ser
420 425 430
Glu Asp Val Asn Asp Asp His Leu Gln Gly Gly Ala Leu Thr Phe Glu
435 440 445
Asn Asn Gly Asp Thr Asp Ala Asn Ser Asp Tyr Arg Leu Met Asn Arg
450 455 460
Thr Pro Thr Asn Gln Thr Gly Glu Arg Leu Tyr His Ile Asp Asp Ser
465 470 475 480
Leu Gly Gly Tyr Glu Leu Leu Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn
485 490 495
Pro Gln Val Gln Ala Glu Gln Leu Asn Trp Leu Tyr Tyr Leu Met His
500 505 510
Phe Gly Asp Ile Thr Ala Asp Asp Pro Asp Ala Asn Phe Asp Ala Ile
515 520 525
Arg Ile Asp Ala Val Asp Asn Val Asp Ala Asp Leu Leu Gln Leu Ala
530 535 540
Ala Gln Tyr Phe Arg Asp Ala Tyr Gly Met Ala Thr Thr Asp Ala Thr
545 550 555 560
Ser Asn Lys His Leu Ser Ile Leu Glu Asp Trp Ser His Asn Asp Pro
565 570 575
Ala Tyr Met Gln Ala His Gly Asn Asp Gln Leu Thr Met Asp Asp Tyr
580 585 590
Met His Thr Gln Leu Ile Trp Ser Leu Thr Lys Pro Glu Ala Gln Arg
595 600 605
Gly Thr Met Ala Arg Phe Met Asp Phe Tyr Leu Thr Asn Arg Ala Asn
610 615 620
Asp Asp Thr Glu Asn Thr Ala Gln Pro Ser Tyr Ser Phe Val Arg Ala
625 630 635 640
His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val Ile Ala Glu Ile Val Thr Lys Leu
645 650 655
His Pro Glu Ala Gly Asn Gly Leu Met Pro Thr Glu Glu Gln Met Ala
660 665 670
Glu Ala Phe Lys Ile Tyr Asn Ala Asp Gln Lys Lys Ala Val Lys Thr
675 680 685
Tyr Thr His Tyr Asn Met Pro Ser Ala Tyr Ala Met Leu Leu Thr Asn
690 695 700
Lys Asp Val Ile Pro Arg Ile Tyr Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr Asp Asp
705 710 715 720
Gly Gln Phe Met Ala Thr Lys Ser Pro Tyr Phe Asp Ala Ile Ser Ala
725 730 735
Met Leu Gln Ala Arg Thr Lys Tyr Val Ala Gly Gly Gln Thr Met Ala
740 745 750
Val Asp Gln His Asp Val Leu Thr Ser Val Arg Phe Gly Lys Gly Ala
755 760 765
Met Thr Ala Ser Asp Leu Gly Asn Ala Glu Thr Arg Thr Glu Gly Val
770 775 780
Gly Leu Ile Ile Ser Asn Asn Pro Lys Leu Gln Leu Gly Gln Gln Asp
785 790 795 800
Asn Val Val Leu His Met Gly Leu Ala His Ala Asn Gln Ala Phe Arg
805 810 815
Ala Val Val Leu Thr Thr Ala Thr Gly Leu Thr Ile Tyr Asn Asp Asp
820 825 830
Asp Ala Pro Ile Arg Tyr Thr Asp Asn Lys Gly Asp Leu Ile Phe Asn
835 840 845
Asn His Asp Val Tyr Gly Val Leu Asn Pro Gln Val Ser Gly Phe Leu
850 855 860
Ala Met Trp Val Pro Thr Gly Ala Pro Ala Asn Gln Asp Ala Arg Ser
865 870 875 880
Thr Ala Ser Thr Asn Ser Ser Thr Asp Gly Ser Ala Tyr His Ser Asn
885 890 895
Ala Ala Leu Asp Ser Gln Val Ile Phe Glu Ser Phe Ser Asn Phe Gln
900 905 910
Ala Met Pro Thr Ser His Asp Thr Tyr Thr Asn Val Val Leu Ala Asn
915 920 925
His Ala Asp Gln Leu His Asp Trp Gly Ile Thr Ser Val Gln Leu Ala
930 935 940
Pro Gln Tyr Arg Ser Ser Thr Asp Gly Thr Phe Leu Asp Ala Ile Ile
945 950 955 960
Gln Asn Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Arg Tyr Asp Leu Gly Phe Gly Thr
965 970 975
Pro Thr Lys Tyr Gly Asp Asp Thr Asp Leu Arg Asn Val Ile Lys Ala
980 985 990
Leu His Ala Asn Gly Met Gln Val Met Ala Asp Phe Val Pro Asp Gln
995 1000 1005
Leu Tyr Thr Leu Pro Gly Lys Glu Leu Val Gln Val Thr Arg Thr
1010 1015 1020
Asn Asn Met Gly Glu Pro Asp Thr His Ser Asp Ile Gln His Ile
1025 1030 1035
Leu Tyr Val Thr Ser Thr Arg Gly Gly Gly Glu Tyr Gln Lys Gln
1040 1045 1050
Tyr Gly Gly Glu Phe Leu Glu Arg Leu Arg Ala Leu Tyr Pro Asp
1055 1060 1065
Leu Phe Thr Thr Arg Gln Ile Ser Thr Gly Gln Thr Ile Asp Asp
1070 1075 1080
Ser Val Lys Ile Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr Leu Asn Gly Thr
1085 1090 1095
Ala Ile Gln Gly Arg Gly Ala Gly Tyr Val Leu Arg Asp Asn Gly
1100 1105 1110
Thr Asn Ala Tyr Tyr Lys Val Thr Ala Asn Asp Gly Asn Val Asn
1115 1120 1125
Leu Pro Lys Gln Leu Leu Gly Gln Pro Val Met Thr Gly Phe Tyr
1130 1135 1140
His Glu Ala Asp Gly Tyr His Phe Glu Thr Leu Ser Gly Thr Ser
1145 1150 1155
Ala Lys Asp Ala Phe Ile Met Gly Asp Asp Gly Ala Leu Tyr Tyr
1160 1165 1170
Phe Asp Asp Gln Gly Val Met Val Thr Gly Lys Gln Arg Val His
1175 1180 1185
Gln Asp Gln Tyr Phe Phe Leu Pro Asn Gly Ile Ala Leu Thr Asp
1190 1195 1200
Ala Phe Val Gln Ser Ala Asp Gly Gln Arg Gln Tyr Tyr Asp Lys
1205 1210 1215
Thr Gly Arg Leu Val Ile Asn Gln Tyr Val Thr Asp His Gln Ala
1220 1225 1230
Asn Ala Phe Arg Val Asp Ala Asp Gly Asn Val Val Arg Asn Gln
1235 1240 1245
Ala Leu Thr Val Asp Gly His Glu Gln Tyr Phe Gly Thr Asn Gly
1250 1255 1260
Val Gln Ala Lys Ala Val Leu Ile Arg Thr Asp Asp Asn Gln Ala
1265 1270 1275
Arg Tyr Tyr Glu Ala Asn Ser Gly Asn Leu Val Lys Gln Gln Phe
1280 1285 1290
Ile Leu Asp Thr Asp Gly His Trp Leu Tyr Ala Asp Ala Ala Gly
1295 1300 1305
Asp Leu Ala Arg Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Asp Thr Leu Tyr
1310 1315 1320
Phe Asp Asp Asn Asn His Gln Val Lys Asp Asp Phe Val Tyr Asp
1325 1330 1335
Thr Asn Gly Val His Tyr Phe Asn Gly Thr Thr Gly Ala Glu Ile
1340 1345 1350
Lys Gln Asp Tyr Ala Phe His Asp Gly Lys Trp Tyr Tyr Phe Asp
1355 1360 1365
Asp Leu Gly Arg Met Val Thr Gly Leu Gln Arg Ile Asn Gly Glu
1370 1375 1380
Tyr Arg Tyr Phe Asp Ala Asn Gly Val Gln Leu Lys Gly Gly Thr
1385 1390 1395
Val Thr Asp Pro Leu Thr His Gln Thr Tyr Thr Phe Asp Ala Gln
1400 1405 1410
Thr Gly Val Gly Thr Leu Val Thr Phe
1415 1420
<210> 6
<211> 4269
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有异源信号序列的2919 gtf
<400> 6
gacacagtcc ttccgtcaga acaaagagcc acggagacga cacagacaac acaaacaagc 60
gaagacacaa gcgccacaaa gacgcctgct agcgcttcaa cgagcagctc agtgaacgtg 120
gacacatcag atcttccgga cagctcaagc acggtggtgg attcaacgtc agcctcagca 180
agcgtcgtgt cagactcagt cgctgtccct gatacgggat cacagttcac atcatcaagc 240
ggcagcatgt caagcagctt tgttaaaagc tcactggcag ctacgacgtc agatgcttca 300
ggctcacaaa gcgccgctgt gacatcagca acagtttcaa gcgtggcgac gagctcatca 360
gcgtcatcag ttacaacagc cacgagcgaa tcagcggtta ttagctcagc agttagcgat 420
ggctatcacg atgaaggagg cgattgggtt tactacagag ctggcaaaaa actggttggc 480
agacaaacga ttgatacatt tgccgtttac ttcgatgcag atggaaaaca ggttaaagga 540
gactggagag agtcagacgg aaacagagcg tactatgatg gccaagaagg cagagccctt 600
acgcaaacac aggcagttaa cggagtcatc tatggattta atcaatcagg atatcagatt 660
aagaacgatt tcggccagac ggctaacaga gacacgtatt actttgatgc tcaaggacat 720
gtggttacgg gcatccagac aattgcaaat aaagtttatg atttcgatga acaaggaaga 780
atgctgaaag gaattgccac gtcagtcgac gataaaatga tgtatttcga cgaccaaacg 840
ggcgtgggcc aacctgccga ccaccctgag tttaatccgg aaacggagcc ggtcccggat 900
gacaacatta aacataacgc tgcgcacgga acgacacctg ctgattttga tagcatggcc 960
ggatacctta cggcggatac atggtataga cctacagaca ttctggagaa tggcgaaaca 1020
tggagagaaa gccagcctac ggagttcaga ccgcttcttg ccacatggtg gcctacgaaa 1080
caaacgcaag cagattatgt taattacatg aaccatgctc tggatatgtc aaatgcgagc 1140
gtgagcgctg ccgatagcga ggcaacactt acagccgcga cggatgccat ccaagctgca 1200
gtcgaacatc aaattacagt gagacagtca acggcatggc ttagagaact tatggcggca 1260
tttgtcgtga cgcaaccgca gtggaataaa acatcagagg atgtcaacga cgatcacctg 1320
caaggaggag cgcttacatt cgaaaataac ggcgatacgg acgcaaatag cgattacaga 1380
cttatgaata gaacgcctac aaaccaaaca ggagaaagac tttaccacat tgacgactca 1440
cttggaggat acgaactgct tctggccaac gatgttgata acagcaatcc tcaagtgcag 1500
gctgagcaac ttaattggct ttattacctg atgcattttg gcgatattac agctgacgac 1560
cctgacgcca acttcgacgc gattagaatc gatgcggtcg ataatgtcga cgcagacctt 1620
cttcaactgg ctgctcaata tttcagagac gcatacggaa tggcaacaac agacgctaca 1680
agcaataaac atctgtcaat tcttgaagac tggtcacata atgatccggc gtacatgcaa 1740
gctcatggaa acgatcaact tacgatggat gactatatgc acacacaact tatttggtca 1800
ctgacaaaac cggaggctca aagaggaaca atggctagat ttatggactt ttatcttaca 1860
aatagagcga acgatgatac agaaaatacg gctcaacctt catattcatt cgttagagca 1920
catgattcag aagttcaaac agtgattgca gaaattgtta caaaactgca tcctgaggcg 1980
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gatcagaaaa aagcagtgaa aacatataca cactacaata tgccttcagc ttatgcaatg 2100
ctgcttacga ataaagacgt cattcctaga atttactatg gagatcttta tacagatgat 2160
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acaaatggag tccaggctaa agcggttctg attagaacag atgataatca agcgagatat 3840
tacgaagcta actcaggcaa tctggttaag caacaattca ttcttgacac agatggccac 3900
tggctgtacg ccgatgcagc cggagatctt gctagaggac agattacagt gggacaggat 3960
acactgtatt tcgacgataa taaccaccaa gttaaggatg attttgtcta tgatacaaac 4020
ggcgttcatt atttcaatgg aacgacagga gctgagatta aacaagatta cgcatttcac 4080
gacggcaaat ggtactactt cgatgatctg ggaagaatgg ttacaggact gcaaagaatt 4140
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acgttttga 4269
<210> 7
<211> 4392
<212> DNA
<213> 发酵乳杆菌
<400> 7
ttgcaagacg agtcacagaa gtttagaaaa aagatgtata agtccggaaa gttttgggta 60
gctgccggtg ctttgtttgt tgggctggca ttcgctggta acgcgcaggc agatactgta 120
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gacctgcctg acagtgcaag tgcggtggtt gatagtgcag ttacaagtac aagtacaagt 300
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tcagcgccag cgtcatcagc gtttgttaaa ccgtcactaa cgtcaacaac tagtggtgct 420
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tcagcatctt cagtgacaac agccacaagt gaatcggctg tggtaagcag cgccgtgtca 540
gatggttacc atgatgaagg tggtgattgg gtctattatc gagctgggaa aaagttactc 600
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caagcacacg gcaatgatca attaacgatg gatgattata tgcacacaca gttgatttgg 1920
tcattaacca agcccgaggc acaacgcggg accatggcac gctttatgga cttctatctc 1980
accaaccgtg ctaatgatga tacagaaaac acggcgcaac ctagttactc gtttgtgcgt 2040
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gacaacgtgg tgttacacat gggacttgcg cacgcgaatc aggcattccg cgcagtcgta 2580
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<211> 1463
<212> PRT
<213> 发酵乳杆菌
<400> 8
Met Gln Asp Glu Ser Gln Lys Phe Arg Lys Lys Met Tyr Lys Ser Gly
1 5 10 15
Lys Phe Trp Val Ala Ala Gly Ala Leu Phe Val Gly Leu Ala Phe Ala
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Gly Asn Ala Gln Ala Asp Thr Val Leu Pro Ser Glu Gln Arg Ala Thr
35 40 45
Gln Thr Thr Gln Thr Thr Gln Thr Ser Glu Asp Thr Ser Ala Thr Lys
50 55 60
Thr Pro Ala Ser Ala Ser Thr Ser Ser Ser Asp Asn Val Asp Thr Ser
65 70 75 80
Asp Leu Pro Asp Ser Ala Ser Ala Val Val Asp Ser Ala Val Thr Ser
85 90 95
Thr Ser Thr Ser Ala Ser Val Val Ser Asp Ser Val Ala Val Pro Asp
100 105 110
Thr Gly Ser Gln Phe Met Ser Ser Ser Ala Pro Ala Ser Ser Ala Phe
115 120 125
Val Lys Pro Ser Leu Thr Ser Thr Thr Ser Gly Ala Ser Gly Ser Gln
130 135 140
Ser Ser Ala Val Thr Ser Ala Asn Asp Ser Ser Val Ala Thr Ser Ser
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Ser Ala Ser Ser Val Thr Thr Ala Thr Ser Glu Ser Ala Val Val Ser
165 170 175
Ser Ala Val Ser Asp Gly Tyr His Asp Glu Gly Gly Asp Trp Val Tyr
180 185 190
Tyr Arg Ala Gly Lys Lys Leu Leu Gly Arg Gln Thr Ile Asp Thr Phe
195 200 205
Ala Val Tyr Phe Asp Ala Asp Gly Lys Gln Val Lys Gly Asp Trp Arg
210 215 220
Glu Ser Asp Gly Lys Arg Ala Tyr Tyr Asp Gly Gln Glu Gly Arg Ala
225 230 235 240
Leu Thr Gln Thr Gln Ala Val Asn Gly Val Ile Tyr Gly Phe Asn Gln
245 250 255
Ser Gly Tyr Gln Ile Lys Asn Asp Phe Gly Gln Thr Ala Asn Arg Asp
260 265 270
Thr Tyr Tyr Phe Asp Ala Gln Gly His Val Val Thr Gly Ile Gln Thr
275 280 285
Ile Ala Asn Lys Val Tyr Asp Phe Asp Glu Gln Gly Arg Met Leu Lys
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Gly Ile Ala Thr Ser Val Asp Asp Lys Met Met Tyr Phe Asp Asp Gln
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Glu Pro Val Pro Asp Asp Asn Ile Lys His Asn Ala Ala His Gly Thr
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Thr Pro Glu Asp Phe Asp Ser Met Ala Asp Tyr Leu Thr Ala Asp Thr
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435 440 445
Arg Gln Ser Thr Ala Trp Leu Arg Glu Leu Met Ala Ala Phe Val Val
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Thr Gln Pro Gln Trp Asn Lys Thr Ser Glu Asp Val Asn Asp Asp His
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Leu Gln Gly Gly Ala Leu Thr Phe Glu Asn Asn Gly Asp Thr Asp Ala
485 490 495
Asn Ser Asp Tyr Arg Leu Met Asn Arg Thr Pro Thr Asn Gln Thr Gly
500 505 510
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515 520 525
Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn Pro Gln Val Gln Ala Glu Gln
530 535 540
Leu Asn Trp Leu Tyr Tyr Leu Met His Phe Gly Asp Ile Thr Ala Asp
545 550 555 560
Asp Pro Asp Ala Asn Phe Asp Ala Ile Arg Ile Asp Ala Val Asp Asn
565 570 575
Val Asp Ala Asp Leu Leu Gln Leu Ala Ala Gln Tyr Phe Arg Asp Ala
580 585 590
Tyr Gly Met Ala Thr Thr Asp Ala Thr Ser Asn Lys His Leu Ser Ile
595 600 605
Leu Glu Asp Trp Ser His Asn Asp Pro Ala Tyr Met Gln Ala His Gly
610 615 620
Asn Asp Gln Leu Thr Met Asp Asp Tyr Met His Thr Gln Leu Ile Trp
625 630 635 640
Ser Leu Thr Lys Pro Glu Ala Gln Arg Gly Thr Met Ala Arg Phe Met
645 650 655
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675 680 685
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Tyr Tyr Gly Asp Leu Tyr Thr Asp Asp Gly Gln Phe Met Ala Thr Lys
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Ser Pro Tyr Phe Asp Ala Ile Ser Thr Met Leu Gln Ala Arg Thr Lys
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Thr Gly Leu Thr Ile Tyr Asn Asp Asp Asp Ala Pro Ile Arg Tyr Thr
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Asp Asn Lys Gly Asp Leu Ile Phe Thr Asn His Asp Val Tyr Gly Val
885 890 895
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Ala Pro Ala Asn Gln Asp Ala Arg Ser Thr Ala Ser Thr Asn Met Ser
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1025 1030 1035
Met Gln Val Met Ala Asp Phe Val Pro Asp Gln Leu Tyr Thr Leu
1040 1045 1050
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1055 1060 1065
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Ser Thr Arg Gly Gly Gly Asp Tyr Gln Lys Gln Tyr Gly Gly Glu
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Arg Gln Ile Ser Thr Gly Gln Thr Ile Asp Asp Ser Val Lys Ile
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1130 1135 1140
Arg Gly Ala Gly Tyr Val Leu Arg Asp Asn Gly Thr Asn Ala Tyr
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1175 1180 1185
Gly Tyr His Phe Glu Thr Leu Ser Gly Thr Ser Ala Lys Asp Ala
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Phe Ile Met Gly Asp Asp Gly Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Asp Gln
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Gly Val Met Val Thr Gly Lys Gln Arg Val His Gln Asp Gln Tyr
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Phe Phe Leu Pro Asn Gly Ile Ala Leu Thr Asp Ala Phe Val Gln
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Thr Ala Asp Gly Gln Arg Gln Tyr Tyr Asp Lys Thr Gly Arg Leu
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Val Ile Asn Gln Tyr Val Thr Asp His Gln Ala Asn Ala Phe Arg
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Asp Gly His Trp Leu Tyr Ala Asp Ala Ala Gly Asp Leu Ala Arg
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Gly Gln Ile Thr Ile Gly Gln Asp Thr Leu Tyr Phe Asp Asp Asn
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Leu Thr His Gln Thr Tyr Thr Phe Asp Ala Lys Thr Gly Ala Gly
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Thr Leu Val Thr Ile
1460
<210> 9
<211> 1426
<212> PRT
<213> 发酵乳杆菌
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1426)
<223> 成熟的2918 gtf
<400> 9
Asp Thr Val Leu Pro Ser Glu Gln Arg Ala Thr Gln Thr Thr Gln Thr
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Thr Gln Thr Ser Glu Asp Thr Ser Ala Thr Lys Thr Pro Ala Ser Ala
20 25 30
Ser Thr Ser Ser Ser Asp Asn Val Asp Thr Ser Asp Leu Pro Asp Ser
35 40 45
Ala Ser Ala Val Val Asp Ser Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ser Ala
50 55 60
Ser Val Val Ser Asp Ser Val Ala Val Pro Asp Thr Gly Ser Gln Phe
65 70 75 80
Met Ser Ser Ser Ala Pro Ala Ser Ser Ala Phe Val Lys Pro Ser Leu
85 90 95
Thr Ser Thr Thr Ser Gly Ala Ser Gly Ser Gln Ser Ser Ala Val Thr
100 105 110
Ser Ala Asn Asp Ser Ser Val Ala Thr Ser Ser Ser Ala Ser Ser Val
115 120 125
Thr Thr Ala Thr Ser Glu Ser Ala Val Val Ser Ser Ala Val Ser Asp
130 135 140
Gly Tyr His Asp Glu Gly Gly Asp Trp Val Tyr Tyr Arg Ala Gly Lys
145 150 155 160
Lys Leu Leu Gly Arg Gln Thr Ile Asp Thr Phe Ala Val Tyr Phe Asp
165 170 175
Ala Asp Gly Lys Gln Val Lys Gly Asp Trp Arg Glu Ser Asp Gly Lys
180 185 190
Arg Ala Tyr Tyr Asp Gly Gln Glu Gly Arg Ala Leu Thr Gln Thr Gln
195 200 205
Ala Val Asn Gly Val Ile Tyr Gly Phe Asn Gln Ser Gly Tyr Gln Ile
210 215 220
Lys Asn Asp Phe Gly Gln Thr Ala Asn Arg Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp
225 230 235 240
Ala Gln Gly His Val Val Thr Gly Ile Gln Thr Ile Ala Asn Lys Val
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Tyr Asp Phe Asp Glu Gln Gly Arg Met Leu Lys Gly Ile Ala Thr Ser
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Val Ser Ala Ala Asp Ser Glu Ala Thr Leu Thr Ala Ala Thr Asp Ala
385 390 395 400
Ile Gln Ala Val Val Glu His Gln Ile Thr Val Arg Gln Ser Thr Ala
405 410 415
Trp Leu Arg Glu Leu Met Ala Ala Phe Val Val Thr Gln Pro Gln Trp
420 425 430
Asn Lys Thr Ser Glu Asp Val Asn Asp Asp His Leu Gln Gly Gly Ala
435 440 445
Leu Thr Phe Glu Asn Asn Gly Asp Thr Asp Ala Asn Ser Asp Tyr Arg
450 455 460
Leu Met Asn Arg Thr Pro Thr Asn Gln Thr Gly Glu Arg Leu Tyr His
465 470 475 480
Ile Asp Asp Ser Leu Gly Gly Tyr Glu Leu Leu Leu Ala Asn Asp Val
485 490 495
Asp Asn Ser Asn Pro Gln Val Gln Ala Glu Gln Leu Asn Trp Leu Tyr
500 505 510
Tyr Leu Met His Phe Gly Asp Ile Thr Ala Asp Asp Pro Asp Ala Asn
515 520 525
Phe Asp Ala Ile Arg Ile Asp Ala Val Asp Asn Val Asp Ala Asp Leu
530 535 540
Leu Gln Leu Ala Ala Gln Tyr Phe Arg Asp Ala Tyr Gly Met Ala Thr
545 550 555 560
Thr Asp Ala Thr Ser Asn Lys His Leu Ser Ile Leu Glu Asp Trp Ser
565 570 575
His Asn Asp Pro Ala Tyr Met Gln Ala His Gly Asn Asp Gln Leu Thr
580 585 590
Met Asp Asp Tyr Met His Thr Gln Leu Ile Trp Ser Leu Thr Lys Pro
595 600 605
Glu Ala Gln Arg Gly Thr Met Ala Arg Phe Met Asp Phe Tyr Leu Thr
610 615 620
Asn Arg Ala Asn Asp Asp Thr Glu Asn Thr Ala Gln Pro Ser Tyr Ser
625 630 635 640
Phe Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val Ile Ala Glu Ile
645 650 655
Val Thr Lys Leu His Pro Glu Ala Gly Asn Gly Leu Met Pro Thr Glu
660 665 670
Glu Gln Met Ala Glu Ala Phe Lys Ile Tyr Asn Ala Asp Gln Lys Lys
675 680 685
Ala Val Lys Thr Tyr Thr His Tyr Asn Met Pro Ser Ala Tyr Ala Met
690 695 700
Leu Leu Thr Asn Lys Asp Val Ile Pro Arg Ile Tyr Tyr Gly Asp Leu
705 710 715 720
Tyr Thr Asp Asp Gly Gln Phe Met Ala Thr Lys Ser Pro Tyr Phe Asp
725 730 735
Ala Ile Ser Thr Met Leu Gln Ala Arg Thr Lys Tyr Val Ala Gly Gly
740 745 750
Gln Thr Met Ala Val Asp Gln His Asp Val Leu Thr Ser Val Arg Phe
755 760 765
Gly Lys Gly Ala Met Thr Ala Asn Asp Leu Gly Asp Ala Glu Thr Arg
770 775 780
Thr Glu Gly Val Gly Leu Ile Ile Ser Asn Asn Pro Lys Leu Gln Leu
785 790 795 800
Gly Gln Gln Asp Asn Val Val Leu His Met Gly Leu Ala His Ala Asn
805 810 815
Gln Ala Phe Arg Ala Val Val Leu Thr Thr Ala Thr Gly Leu Thr Ile
820 825 830
Tyr Asn Asp Asp Asp Ala Pro Ile Arg Tyr Thr Asp Asn Lys Gly Asp
835 840 845
Leu Ile Phe Thr Asn His Asp Val Tyr Gly Val Leu Asn Pro Gln Val
850 855 860
Ser Gly Phe Leu Ala Met Trp Val Pro Thr Gly Ala Pro Ala Asn Gln
865 870 875 880
Asp Ala Arg Ser Thr Ala Ser Thr Asn Met Ser Thr Asp Gly Ser Ala
885 890 895
Tyr His Ser Asn Ala Ala Leu Asp Ser Gln Val Ile Phe Glu Ser Phe
900 905 910
Ser Asn Phe Gln Ala Met Pro Thr Ser His Asp Thr Tyr Thr Asn Val
915 920 925
Val Leu Ala Asn His Ala Asp Gln Leu His Asp Trp Gly Ile Thr Ser
930 935 940
Val Gln Leu Ala Pro Gln Tyr Arg Ser Ser Thr Asp Gly Thr Phe Leu
945 950 955 960
Asp Ala Ile Ile Gln Asn Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Arg Tyr Asp Leu
965 970 975
Gly Phe Gly Thr Pro Thr Lys Tyr Gly Asp Asp Thr Asp Leu Arg Asn
980 985 990
Val Ile Lys Ala Leu His Ala Asn Gly Met Gln Val Met Ala Asp Phe
995 1000 1005
Val Pro Asp Gln Leu Tyr Thr Leu Pro Gly Lys Glu Leu Val Gln
1010 1015 1020
Val Thr Arg Thr Asn Asn Met Gly Glu Pro Asp Thr His Ser Asp
1025 1030 1035
Ile Gln His Ile Leu Tyr Val Thr Ser Thr Arg Gly Gly Gly Asp
1040 1045 1050
Tyr Gln Lys Gln Tyr Gly Gly Glu Phe Leu Ala Arg Leu Arg Glu
1055 1060 1065
Arg Tyr Pro Asp Leu Phe Thr Thr Arg Gln Ile Ser Thr Gly Gln
1070 1075 1080
Thr Ile Asp Asp Ser Val Lys Ile Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr
1085 1090 1095
Leu Asn Gly Thr Ala Ile Gln Gly Arg Gly Ala Gly Tyr Val Leu
1100 1105 1110
Arg Asp Asn Gly Thr Asn Ala Tyr Tyr Lys Val Thr Ala Asn Asp
1115 1120 1125
Gly Asn Val Asn Leu Pro Lys Gln Leu Leu Gly Gln Pro Val Met
1130 1135 1140
Thr Gly Phe Tyr His Glu Ala Asp Gly Tyr His Phe Glu Thr Leu
1145 1150 1155
Ser Gly Thr Ser Ala Lys Asp Ala Phe Ile Met Gly Asp Asp Gly
1160 1165 1170
Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Asp Gln Gly Val Met Val Thr Gly Lys
1175 1180 1185
Gln Arg Val His Gln Asp Gln Tyr Phe Phe Leu Pro Asn Gly Ile
1190 1195 1200
Ala Leu Thr Asp Ala Phe Val Gln Thr Ala Asp Gly Gln Arg Gln
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Tyr Tyr Asp Lys Thr Gly Arg Leu Val Ile Asn Gln Tyr Val Thr
1220 1225 1230
Asp His Gln Ala Asn Ala Phe Arg Val Asp Ala Asp Gly Asn Val
1235 1240 1245
Val Arg Asn Gln Ala Leu Thr Val Asp Gly His Glu Gln Tyr Phe
1250 1255 1260
Gly Thr Asn Gly Val Gln Ala Lys Ala Val Leu Ile Arg Thr Asp
1265 1270 1275
Asp Asn Gln Ala Arg Tyr Tyr Glu Ala Asn Ser Gly Asn Leu Val
1280 1285 1290
Lys Gln Gln Phe Ile Leu Asp Thr Asp Gly His Trp Leu Tyr Ala
1295 1300 1305
Asp Ala Ala Gly Asp Leu Ala Arg Gly Gln Ile Thr Ile Gly Gln
1310 1315 1320
Asp Thr Leu Tyr Phe Asp Asp Asn Asn His Gln Val Lys Asp Asp
1325 1330 1335
Phe Val Tyr Asp Thr Asn Gly Val His Tyr Phe Asn Gly Thr Thr
1340 1345 1350
Gly Ala Glu Ile Lys Gln Asp Tyr Ala Phe His Asp Gly Lys Trp
1355 1360 1365
Tyr Tyr Phe Asp Asp Leu Gly Arg Met Val Thr Gly Leu Gln Arg
1370 1375 1380
Ile Asn Gly Glu Tyr Arg Tyr Phe Asp Ala Asn Gly Val Gln Leu
1385 1390 1395
Lys Gly Gly Thr Val Thr Asp Pro Leu Thr His Gln Thr Tyr Thr
1400 1405 1410
Phe Asp Ala Lys Thr Gly Ala Gly Thr Leu Val Thr Ile
1415 1420 1425
<210> 10
<211> 4281
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有异源信号序列的2918 dtf
<400> 10
gatacagtgc tgcctagcga gcaaagagca acacagacga cacaaacaac gcagacatca 60
gaggatacga gcgcgacgaa gacaccggca agcgcatcaa cgtcaagcag cgataacgtg 120
gatacgtcag atcttccgga tagcgccagc gcagttgtcg attcagcggt tacatcaaca 180
agcacgtcag cctcagtggt gagcgatagc gttgcagtcc cggatacggg atcacaattt 240
atgtcatcat cagctcctgc gagcagcgcg tttgttaaac ctagccttac gtcaacgacg 300
tcaggagcga gcggctcaca gagctcagca gtgacaagcg ccaatgattc aagcgtcgct 360
acaagctcat cagcttcatc agttacgaca gcaacaagcg agtcagccgt tgtctcaagc 420
gcggtctcag acggctatca tgacgaagga ggagattggg tttactacag agcaggaaaa 480
aaactgcttg gaagacagac aattgatacg tttgctgttt actttgatgc tgacggaaaa 540
caagtgaaag gcgactggag agaatcagat ggaaagagag cgtattatga tggacaagaa 600
ggaagagccc ttacgcaaac gcaagccgtt aatggagtga tctatggatt caatcaatca 660
ggataccaga tcaaaaacga ttttggccag acagcgaaca gagatacata ctacttcgac 720
gcacaaggcc atgtggttac aggcatccaa acaatcgcga ataaagttta tgacttcgat 780
gaacaaggca gaatgcttaa aggaattgcc acatcagtcg atgacaagat gatgtatttt 840
gacgatcaaa caggcgtggg acaacctgca gatcaccctg agtttaaccc ggaaacagaa 900
ccggtgcctg acgataacat caagcataat gcagcccacg gcacaacacc tgaagatttt 960
gatagcatgg cggactatct gacagctgat acatggtata gacctacaga tattctggag 1020
aatggagaaa catggagaga gagccaaccg acggaattta gaccgctgct ggcaacgtgg 1080
tggcctacaa aacagacaca agcagattat gtgaactata tgaaccacgc acttgacatg 1140
gctaatgctg gcgttagcgc tgcggattca gaggcaacac ttacagcggc tacggatgcc 1200
attcaggctg ttgttgagca ccaaattacg gttagacaaa gcacggcctg gcttagagaa 1260
cttatggcgg cttttgttgt tacacaacct caatggaata agacgagcga agatgtcaat 1320
gatgatcacc ttcaaggagg cgcactgaca tttgagaata acggagacac agatgcaaat 1380
agcgattata gacttatgaa tagaacaccg acaaatcaaa cgggcgagag actttatcat 1440
attgatgact cactgggagg ctacgagctg cttcttgcaa acgatgtgga caactcaaac 1500
ccgcaggttc aggcggaaca acttaactgg ctttactatc ttatgcattt cggagatatt 1560
acagccgatg acccggatgc taactttgac gcgatcagaa ttgacgccgt tgataatgtc 1620
gacgctgacc tgcttcagct tgctgcccaa tactttagag atgcatatgg aatggccaca 1680
acagacgcca cgagcaataa acacctttca atccttgagg attggagcca taacgatcct 1740
gcttatatgc aggcacatgg aaatgaccag cttacaatgg atgactacat gcacacacaa 1800
ctgatttggt cactgacgaa accggaagca caaagaggaa cgatggcaag atttatggac 1860
ttttatctta caaatagagc taacgatgat acagaaaaca cagcgcaacc ttcatattca 1920
tttgttagag cacacgactc agaagtgcag acagttattg cagaaattgt tacgaaactt 1980
cacccggagg caggcaacgg ccttatgcct acggaggaac agatggcaga ggcgtttaag 2040
atctacaatg cagaccaaaa gaaagcggtg aaaacatata cacactataa catgccttca 2100
gcctacgcta tgctgctgac aaataaggat gtgattccta gaatctacta cggcgatctt 2160
tacacggacg acggccagtt catggcaaca aagtcaccgt atttcgatgc aatttcaaca 2220
atgctgcaag caagaacaaa atatgttgca ggcggacaaa cgatggcggt tgaccaacat 2280
gatgtcctga cgagcgtgag atttggcaaa ggcgcgatga cagcaaatga ccttggagac 2340
gcggaaacga gaacagaggg cgtgggactg atcatcagca acaaccctaa gctgcaactg 2400
ggacagcagg ataacgtggt ccttcatatg ggcctggcac acgcgaatca ggctttcaga 2460
gcagtcgtgc ttacaacagc cacaggactg acgatctaca acgacgatga cgctcctatt 2520
agatatacgg acaataaggg cgacctgatc tttacgaatc acgatgttta cggcgttctg 2580
aacccgcagg ttagcggctt ccttgctatg tgggttccga cgggcgcacc tgccaatcaa 2640
gacgcaagaa gcacggcttc aacgaatatg tcaacggatg gatcagctta tcattcaaac 2700
gcagctctgg attcacaagt tatctttgag tcatttagca actttcaagc aatgccgaca 2760
tcacacgata catacacgaa tgttgtcctt gcaaaccatg cagaccaact tcacgattgg 2820
ggaattacgt cagtgcaact tgcaccgcaa tatagatcaa gcacagacgg aacgtttctg 2880
gatgcaatta ttcaaaatgg atatgctttt acagatagat atgatcttgg ctttggaaca 2940
cctacgaagt acggcgacga cacggacctg agaaatgtga tcaaagccct tcatgcaaac 3000
ggcatgcaag tcatggcaga ttttgttcct gatcaactgt acacacttcc gggcaaagaa 3060
ctggttcaag tgacaagaac aaataacatg ggcgaaccgg atacacacag cgatattcaa 3120
cacatcctgt atgttacatc aacaagagga ggcggagact atcagaaaca atatggcggc 3180
gaatttctgg ctagacttag agaaagatac ccggaccttt ttacgacgag acaaattagc 3240
acaggccaaa caattgacga cagcgttaag attaaggagt ggtcagcgaa atatctgaac 3300
ggcacagcaa ttcaaggcag aggcgctggc tatgttctga gagataatgg aacgaatgca 3360
tactataaag ttacggccaa tgatggaaac gtcaatcttc ctaagcaact gctgggccag 3420
ccggttatga caggcttcta tcacgaagca gacggctacc acttcgagac actgtcaggc 3480
acatcagcca aggacgcatt tatcatggga gatgatggcg cactgtacta tttcgatgac 3540
caaggcgtga tggttacagg aaaacaaaga gttcatcagg atcaatactt ttttctgccg 3600
aatggcatcg ctctgacgga cgctttcgtt caaacagctg atggacagag acagtactac 3660
gataaaacag gcagactggt tattaaccaa tatgtgacag accatcaggc gaatgccttc 3720
agagttgatg cggacggaaa tgtcgttaga aaccaagcac ttacagtgga cggacatgaa 3780
cagtatttcg gcacgaacgg agtgcaggca aaagcagttc tgattagaac ggacgataat 3840
caagcgagat attatgaggc aaattcaggc aatctggtga aacaacaatt tatccttgac 3900
acagatggcc actggctgta cgcagacgca gcaggcgatc ttgctagagg ccagattaca 3960
atcggccagg atacgctgta ttttgatgat aacaatcacc aagttaaaga tgacttcgtt 4020
tatgatacga atggagtcca ttactttaat ggcacaacag gagcagagat taaacaagat 4080
tacgcattcc atgacggcaa atggtactac ttcgacgacc tgggaagaat ggtcacggga 4140
cttcaaagaa ttaatggaga gtatagatac tttgacgcga acggcgtcca actgaaagga 4200
ggcacagtga cggatcctct gacacatcaa acatatacat ttgatgcaaa aacgggagcc 4260
ggcacgcttg ttacaatttg a 4281
<210> 11
<211> 4521
<212> DNA
<213> 表兄链球菌
<400> 11
atggaaagaa aattgcatta caaattacac aaggtaaaaa aacagtgggt aacgattgcc 60
gttgcctctg ctggtttggc tagcattgtt ggtgctggtt cattaagcca aactgtttct 120
gccgatgact tagccaagga acaagctgcg gctagtcaac aaaaggcagc agccaatcag 180
aatgaggacg aagtggcttc tgatgcagct gatactgcta gtgcaaaagc gacttccgaa 240
aaagaagttg tccaatcttc tgatacaaat tcagaaacta accaagttga aactaaagat 300
caagctagcg ctaaggaaag tgctgacgca gtagccaagc aagcaccaca agctggccct 360
gcaaccacta gccaggttgc aagctcagaa agcagctctg tagcgcctag caaggaagct 420
gataaggcag ctgctggatc agttagccaa aatgaagaag aagcagccct atcgcttgcc 480
aatattaaaa agattgatgg taagtattac tatgttatgg cagacggttc ttataagaag 540
aactttgcca ttacagttga tggtcaaatg ctttactttg atgccaaaac aggtgccctg 600
tcttcaacct ctacctattc tttcagtcaa ggtttgacac caattgtttc tgatttctca 660
gtcaacaaca aggctttcga ttcttctgaa aagagttttg aattggttga tggctatttg 720
acagctgaaa gctggtaccg tcctgctaag attcttgaaa atggtaaaac ttgggttgat 780
tctaaagaaa ctgacctacg cccagttctg atgagctggt ggccaaacaa ggatacgcaa 840
gttgcctacc ttaactacat gagcaaggca cttggtggca aggaagaatt cacaactgaa 900
acctcccaat tgaccttgaa tacagccgct gagttgattc aagctaaaat tgaagctcgc 960
gtttctaaag aacaaggaac aaagtggttg cgtgaagcta tggcagcctt cgttgctacc 1020
caatctcgtt ggaataagga cagcgaacaa tacgataagg ctgaccacct gcaaggcgga 1080
gccctgctct ataccaataa caacttgaca gagtgggcaa attcaaactg gcgcctgctt 1140
aaccgtaccc caactcgtca agatggtaaa acccattact ctaaggctga caaatacggt 1200
ggttatgaat tcctcttggc caacgacgtg gataactcta acccagtcgt tcaagcggaa 1260
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gccaactttg atggtattcg tgtcgatgcc gtggataacg tcaatgcaga tactctgcaa 1380
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gctcacatct cagtcttgga agcatggtct tacaatgata atgactataa ccaagacacc 1500
aacggggctg ccctggctat ggacaatggt ctacgctttt ccctgcttta taccttgacc 1560
cgtccgatca atgaacggac acctggtatg tcaaccctga ttaaatcaga atatggtttg 1620
actgaccgga ctaagaatga taagtatgga gatacccaac catcttatgt ttttgttcgg 1680
gcgcatgact cagaagtgca aaccgttatt gcacaaatca tcaaggaaaa aattgatcca 1740
acaaccgatg gtttcacctt caccttggac caattgaaac aggcctttga aatctacaac 1800
aaggatatga atagtgttaa caagcactat acccactata atatcccagc agcctacgct 1860
gtcatgttgt ctaatatgga atccgtaacc cgggtttact atggtgacct cttcaccgat 1920
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gcagccatga aggcagctca tccagatgct ggtaatgtcc ttggtaacag cgaagtcttg 2100
gtatcggttc gtttcggtca agatgtcatg tctgccgatg atatgactgg tggtaagctg 2160
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cttttgacaa ctgataaggg tctgcaaaag tatctcaatg attctgatac caagttgacc 2340
aagattgctg acaaggatgg tttcattacc ttcaagggta gcgaaatcaa gggttacaaa 2400
caagtcgaag tcaatggtta cctctcagtt tgggtaccag ttggtgctaa ggctgaccaa 2460
gacattcgtg tggccccttc aacagcggct aagggtgaaa aggccaagac ttacacagct 2520
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ggtaaatact ttaccgtcaa tgaaaaaggt gacttcttac ctgcctcatt gactggtaat 3240
aaggatgcca agactggttt ctacaacgat ggtaagggca ttgtttacta cacaaccgcc 3300
ggtaacaagg ctagatcagc cttcgtaaca gaagcaggta atacctatta cttcgactac 3360
accggccata tggtaacagg ccctaacgtt attaacacta aattctatta cttcttgcca 3420
aatggtatca tgcttaagga tgctattaag caggatgaaa aaggtcgttc cgtatactac 3480
ggtaagactg gtgttatgta caagggtggc cgcgataatg aatggttcgc catgacagac 3540
tctaagggtc aaatgcgttt ccgtcacttt gacaggtacg gcttcatgtc tatcggtttg 3600
gtaaccatca accaaaatgt tcagtattat gatgaaaatg gtttccaagt taaaggtgaa 3660
tttgtaaccg atcaggatgg acaaacccgt tacttcgacc aaggttcagg taacttggtt 3720
aagggacaat tcctcaacaa ggatggcaac tggtactacc ttgatgacca agggctagtt 3780
gctaaaggag ctcagacaat taaaggtcaa aagctttact ttgacacaaa aaccggtgtc 3840
caagttaaag gggattttgt aacggataaa gatggcaata ccttctttta cagtggagat 3900
actggcgatt taatccttgg tcagttcttc tcaactggaa ataacgcttg gttctatgct 3960
gatgaaaatg gtcatgtcgc taagggagct aagactatca gaggtcagaa gctctacttt 4020
gatacaaaaa caggtcagca agctaaggga cgctttatcc gtgatgacaa gggggttcgt 4080
tactatgatg ctgacacagg taccttggta accaacgctt tccttgaaac taaggctggt 4140
tctaaccaat ggtattacat gggagcagat ggttatgctg tcaaggggaa ccagaccata 4200
aaaaatcagc acatgtattt tgatgctgaa actggccaac aagctaaggg aattatagtg 4260
acagatgcca atggtcgcaa gtatttctat gatactttta ctggcagtcg tgttgtaaac 4320
caatttgttt tggttaatgg aaattggtat ttctttggtt atgatggagc tgcagtaaca 4380
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<210> 12
<211> 1506
<212> PRT
<213> 表兄链球菌
<400> 12
Met Glu Arg Lys Leu His Tyr Lys Leu His Lys Val Lys Lys Gln Trp
1 5 10 15
Val Thr Ile Ala Val Ala Ser Ala Gly Leu Ala Ser Ile Val Gly Ala
20 25 30
Gly Ser Leu Ser Gln Thr Val Ser Ala Asp Asp Leu Ala Lys Glu Gln
35 40 45
Ala Ala Ala Ser Gln Gln Lys Ala Ala Ala Asn Gln Asn Glu Asp Glu
50 55 60
Val Ala Ser Asp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Ala Lys Ala Thr Ser Glu
65 70 75 80
Lys Glu Val Val Gln Ser Ser Asp Thr Asn Ser Glu Thr Asn Gln Val
85 90 95
Glu Thr Lys Asp Gln Ala Ser Ala Lys Glu Ser Ala Asp Ala Val Ala
100 105 110
Lys Gln Ala Pro Gln Ala Gly Pro Ala Thr Thr Ser Gln Val Ala Ser
115 120 125
Ser Glu Ser Ser Ser Val Ala Pro Ser Lys Glu Ala Asp Lys Ala Ala
130 135 140
Ala Gly Ser Val Ser Gln Asn Glu Glu Glu Ala Ala Leu Ser Leu Ala
145 150 155 160
Asn Ile Lys Lys Ile Asp Gly Lys Tyr Tyr Tyr Val Met Ala Asp Gly
165 170 175
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180 185 190
Phe Asp Ala Lys Thr Gly Ala Leu Ser Ser Thr Ser Thr Tyr Ser Phe
195 200 205
Ser Gln Gly Leu Thr Pro Ile Val Ser Asp Phe Ser Val Asn Asn Lys
210 215 220
Ala Phe Asp Ser Ser Glu Lys Ser Phe Glu Leu Val Asp Gly Tyr Leu
225 230 235 240
Thr Ala Glu Ser Trp Tyr Arg Pro Ala Lys Ile Leu Glu Asn Gly Lys
245 250 255
Thr Trp Val Asp Ser Lys Glu Thr Asp Leu Arg Pro Val Leu Met Ser
260 265 270
Trp Trp Pro Asn Lys Asp Thr Gln Val Ala Tyr Leu Asn Tyr Met Ser
275 280 285
Lys Ala Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe Thr Thr Glu Thr Ser Gln Leu
290 295 300
Thr Leu Asn Thr Ala Ala Glu Leu Ile Gln Ala Lys Ile Glu Ala Arg
305 310 315 320
Val Ser Lys Glu Gln Gly Thr Lys Trp Leu Arg Glu Ala Met Ala Ala
325 330 335
Phe Val Ala Thr Gln Ser Arg Trp Asn Lys Asp Ser Glu Gln Tyr Asp
340 345 350
Lys Ala Asp His Leu Gln Gly Gly Ala Leu Leu Tyr Thr Asn Asn Asn
355 360 365
Leu Thr Glu Trp Ala Asn Ser Asn Trp Arg Leu Leu Asn Arg Thr Pro
370 375 380
Thr Arg Gln Asp Gly Lys Thr His Tyr Ser Lys Ala Asp Lys Tyr Gly
385 390 395 400
Gly Tyr Glu Phe Leu Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn Pro Val
405 410 415
Val Gln Ala Glu Met Leu Asn Gln Ile His Tyr Leu Met Asn Trp Gly
420 425 430
Glu Ile Val Met Gly Asp Lys Asn Ala Asn Phe Asp Gly Ile Arg Val
435 440 445
Asp Ala Val Asp Asn Val Asn Ala Asp Thr Leu Gln Leu Tyr Thr Asn
450 455 460
Tyr Phe Asn Ser Val Tyr Gly Val Asn Lys Ser Glu Ala Gln Ala Leu
465 470 475 480
Ala His Ile Ser Val Leu Glu Ala Trp Ser Tyr Asn Asp Asn Asp Tyr
485 490 495
Asn Gln Asp Thr Asn Gly Ala Ala Leu Ala Met Asp Asn Gly Leu Arg
500 505 510
Phe Ser Leu Leu Tyr Thr Leu Thr Arg Pro Ile Asn Glu Arg Thr Pro
515 520 525
Gly Met Ser Thr Leu Ile Lys Ser Glu Tyr Gly Leu Thr Asp Arg Thr
530 535 540
Lys Asn Asp Lys Tyr Gly Asp Thr Gln Pro Ser Tyr Val Phe Val Arg
545 550 555 560
Ala His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val Ile Ala Gln Ile Ile Lys Glu
565 570 575
Lys Ile Asp Pro Thr Thr Asp Gly Phe Thr Phe Thr Leu Asp Gln Leu
580 585 590
Lys Gln Ala Phe Glu Ile Tyr Asn Lys Asp Met Asn Ser Val Asn Lys
595 600 605
His Tyr Thr His Tyr Asn Ile Pro Ala Ala Tyr Ala Val Met Leu Ser
610 615 620
Asn Met Glu Ser Val Thr Arg Val Tyr Tyr Gly Asp Leu Phe Thr Asp
625 630 635 640
Asp Gly Gln Tyr Met Ala Ser Lys Ser Pro Tyr Tyr Asp Ala Ile Asn
645 650 655
Thr Leu Leu Arg Ala Arg Ile Arg Tyr Ala Ala Gly Gly Gln Ile Met
660 665 670
Glu His Asn Ser Tyr Lys Pro Ser Ala Ala Met Lys Ala Ala His Pro
675 680 685
Asp Ala Gly Asn Val Leu Gly Asn Ser Glu Val Leu Val Ser Val Arg
690 695 700
Phe Gly Gln Asp Val Met Ser Ala Asp Asp Met Thr Gly Gly Lys Leu
705 710 715 720
Ala Lys Thr Ser Gly Met Phe Thr Leu Ile Ser Asn Asn Pro Glu Leu
725 730 735
Glu Leu Asp Val Asn Glu Glu Ile Lys Val Asn Val Gly Lys Ile His
740 745 750
Ala Gly Gln Ala Tyr Arg Pro Leu Leu Leu Thr Thr Asp Lys Gly Leu
755 760 765
Gln Lys Tyr Leu Asn Asp Ser Asp Thr Lys Leu Thr Lys Ile Ala Asp
770 775 780
Lys Asp Gly Phe Ile Thr Phe Lys Gly Ser Glu Ile Lys Gly Tyr Lys
785 790 795 800
Gln Val Glu Val Asn Gly Tyr Leu Ser Val Trp Val Pro Val Gly Ala
805 810 815
Lys Ala Asp Gln Asp Ile Arg Val Ala Pro Ser Thr Ala Ala Lys Gly
820 825 830
Glu Lys Ala Lys Thr Tyr Thr Ala Ser Gln Ala Leu Glu Ser Gln Leu
835 840 845
Ile Tyr Glu Gly Phe Ser Asn Phe Gln Asp Phe Val Gln Lys Asp Ser
850 855 860
Gln Tyr Thr Asn Lys Lys Ile Ala Glu Asn Thr Asp Leu Phe Lys Ala
865 870 875 880
Trp Gly Val Thr Ser Phe Glu Met Ala Pro Gln Tyr Val Ser Ala Thr
885 890 895
Asp Gly Thr Phe Leu Asp Ser Ile Ile Glu Asn Gly Tyr Ala Phe Thr
900 905 910
Asp Arg Tyr Asp Leu Ala Met Ser Lys Asn Asn Lys Tyr Gly Ser Lys
915 920 925
Glu Asp Leu Ala Asn Ala Leu Lys Ala Leu His Ala Ala Gly Ile Gln
930 935 940
Ala Ile Ala Asp Trp Val Pro Asp Gln Ile Tyr Gln Leu Pro Gly Lys
945 950 955 960
Glu Val Val Thr Ala Ser Arg Val Asp Asn Tyr Gly Arg Val Lys Val
965 970 975
Asp Gln Pro Leu Val Glu Lys Leu Tyr Leu Ala Asn Thr Lys Ser Ser
980 985 990
Gly Lys Asp Phe Gln Ala Lys Tyr Gly Gly Glu Phe Leu Ala Glu Leu
995 1000 1005
Gln Lys Lys Tyr Pro Glu Met Phe Thr Thr Lys Met Ile Ser Thr
1010 1015 1020
Gly Lys Thr Ile Asp Pro Ser Val Lys Leu Lys Glu Trp Ser Ala
1025 1030 1035
Lys Tyr Phe Asn Gly Thr Asn Val Leu Asp Arg Gly Thr Asp Tyr
1040 1045 1050
Ile Leu Ser Asp Glu Gly Thr Gly Lys Tyr Phe Thr Val Asn Glu
1055 1060 1065
Lys Gly Asp Phe Leu Pro Ala Ser Leu Thr Gly Asn Lys Asp Ala
1070 1075 1080
Lys Thr Gly Phe Tyr Asn Asp Gly Lys Gly Ile Val Tyr Tyr Thr
1085 1090 1095
Thr Ala Gly Asn Lys Ala Arg Ser Ala Phe Val Thr Glu Ala Gly
1100 1105 1110
Asn Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Thr Gly His Met Val Thr Gly Pro
1115 1120 1125
Asn Val Ile Asn Thr Lys Phe Tyr Tyr Phe Leu Pro Asn Gly Ile
1130 1135 1140
Met Leu Lys Asp Ala Ile Lys Gln Asp Glu Lys Gly Arg Ser Val
1145 1150 1155
Tyr Tyr Gly Lys Thr Gly Val Met Tyr Lys Gly Gly Arg Asp Asn
1160 1165 1170
Glu Trp Phe Ala Met Thr Asp Ser Lys Gly Gln Met Arg Phe Arg
1175 1180 1185
His Phe Asp Arg Tyr Gly Phe Met Ser Ile Gly Leu Val Thr Ile
1190 1195 1200
Asn Gln Asn Val Gln Tyr Tyr Asp Glu Asn Gly Phe Gln Val Lys
1205 1210 1215
Gly Glu Phe Val Thr Asp Gln Asp Gly Gln Thr Arg Tyr Phe Asp
1220 1225 1230
Gln Gly Ser Gly Asn Leu Val Lys Gly Gln Phe Leu Asn Lys Asp
1235 1240 1245
Gly Asn Trp Tyr Tyr Leu Asp Asp Gln Gly Leu Val Ala Lys Gly
1250 1255 1260
Ala Gln Thr Ile Lys Gly Gln Lys Leu Tyr Phe Asp Thr Lys Thr
1265 1270 1275
Gly Val Gln Val Lys Gly Asp Phe Val Thr Asp Lys Asp Gly Asn
1280 1285 1290
Thr Phe Phe Tyr Ser Gly Asp Thr Gly Asp Leu Ile Leu Gly Gln
1295 1300 1305
Phe Phe Ser Thr Gly Asn Asn Ala Trp Phe Tyr Ala Asp Glu Asn
1310 1315 1320
Gly His Val Ala Lys Gly Ala Lys Thr Ile Arg Gly Gln Lys Leu
1325 1330 1335
Tyr Phe Asp Thr Lys Thr Gly Gln Gln Ala Lys Gly Arg Phe Ile
1340 1345 1350
Arg Asp Asp Lys Gly Val Arg Tyr Tyr Asp Ala Asp Thr Gly Thr
1355 1360 1365
Leu Val Thr Asn Ala Phe Leu Glu Thr Lys Ala Gly Ser Asn Gln
1370 1375 1380
Trp Tyr Tyr Met Gly Ala Asp Gly Tyr Ala Val Lys Gly Asn Gln
1385 1390 1395
Thr Ile Lys Asn Gln His Met Tyr Phe Asp Ala Glu Thr Gly Gln
1400 1405 1410
Gln Ala Lys Gly Ile Ile Val Thr Asp Ala Asn Gly Arg Lys Tyr
1415 1420 1425
Phe Tyr Asp Thr Phe Thr Gly Ser Arg Val Val Asn Gln Phe Val
1430 1435 1440
Leu Val Asn Gly Asn Trp Tyr Phe Phe Gly Tyr Asp Gly Ala Ala
1445 1450 1455
Val Thr Gly Phe His Asp Ile Lys Gly Gln His Leu Tyr Phe Asn
1460 1465 1470
Ser Asp Gly Thr Gln Ala Lys Gly Thr Thr Val Lys Ile Gly Asn
1475 1480 1485
Arg Ser Tyr Thr Phe Asp Ala His Thr Gly Glu Leu Thr Ser Val
1490 1495 1500
His Tyr Gly
1505
<210> 13
<211> 1465
<212> PRT
<213> 表兄链球菌
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1465)
<223> 成熟的2920 gtf
<400> 13
Asp Asp Leu Ala Lys Glu Gln Ala Ala Ala Ser Gln Gln Lys Ala Ala
1 5 10 15
Ala Asn Gln Asn Glu Asp Glu Val Ala Ser Asp Ala Ala Asp Thr Ala
20 25 30
Ser Ala Lys Ala Thr Ser Glu Lys Glu Val Val Gln Ser Ser Asp Thr
35 40 45
Asn Ser Glu Thr Asn Gln Val Glu Thr Lys Asp Gln Ala Ser Ala Lys
50 55 60
Glu Ser Ala Asp Ala Val Ala Lys Gln Ala Pro Gln Ala Gly Pro Ala
65 70 75 80
Thr Thr Ser Gln Val Ala Ser Ser Glu Ser Ser Ser Val Ala Pro Ser
85 90 95
Lys Glu Ala Asp Lys Ala Ala Ala Gly Ser Val Ser Gln Asn Glu Glu
100 105 110
Glu Ala Ala Leu Ser Leu Ala Asn Ile Lys Lys Ile Asp Gly Lys Tyr
115 120 125
Tyr Tyr Val Met Ala Asp Gly Ser Tyr Lys Lys Asn Phe Ala Ile Thr
130 135 140
Val Asp Gly Gln Met Leu Tyr Phe Asp Ala Lys Thr Gly Ala Leu Ser
145 150 155 160
Ser Thr Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Gln Gly Leu Thr Pro Ile Val Ser
165 170 175
Asp Phe Ser Val Asn Asn Lys Ala Phe Asp Ser Ser Glu Lys Ser Phe
180 185 190
Glu Leu Val Asp Gly Tyr Leu Thr Ala Glu Ser Trp Tyr Arg Pro Ala
195 200 205
Lys Ile Leu Glu Asn Gly Lys Thr Trp Val Asp Ser Lys Glu Thr Asp
210 215 220
Leu Arg Pro Val Leu Met Ser Trp Trp Pro Asn Lys Asp Thr Gln Val
225 230 235 240
Ala Tyr Leu Asn Tyr Met Ser Lys Ala Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe
245 250 255
Thr Thr Glu Thr Ser Gln Leu Thr Leu Asn Thr Ala Ala Glu Leu Ile
260 265 270
Gln Ala Lys Ile Glu Ala Arg Val Ser Lys Glu Gln Gly Thr Lys Trp
275 280 285
Leu Arg Glu Ala Met Ala Ala Phe Val Ala Thr Gln Ser Arg Trp Asn
290 295 300
Lys Asp Ser Glu Gln Tyr Asp Lys Ala Asp His Leu Gln Gly Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Tyr Thr Asn Asn Asn Leu Thr Glu Trp Ala Asn Ser Asn Trp
325 330 335
Arg Leu Leu Asn Arg Thr Pro Thr Arg Gln Asp Gly Lys Thr His Tyr
340 345 350
Ser Lys Ala Asp Lys Tyr Gly Gly Tyr Glu Phe Leu Leu Ala Asn Asp
355 360 365
Val Asp Asn Ser Asn Pro Val Val Gln Ala Glu Met Leu Asn Gln Ile
370 375 380
His Tyr Leu Met Asn Trp Gly Glu Ile Val Met Gly Asp Lys Asn Ala
385 390 395 400
Asn Phe Asp Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Asp Asn Val Asn Ala Asp
405 410 415
Thr Leu Gln Leu Tyr Thr Asn Tyr Phe Asn Ser Val Tyr Gly Val Asn
420 425 430
Lys Ser Glu Ala Gln Ala Leu Ala His Ile Ser Val Leu Glu Ala Trp
435 440 445
Ser Tyr Asn Asp Asn Asp Tyr Asn Gln Asp Thr Asn Gly Ala Ala Leu
450 455 460
Ala Met Asp Asn Gly Leu Arg Phe Ser Leu Leu Tyr Thr Leu Thr Arg
465 470 475 480
Pro Ile Asn Glu Arg Thr Pro Gly Met Ser Thr Leu Ile Lys Ser Glu
485 490 495
Tyr Gly Leu Thr Asp Arg Thr Lys Asn Asp Lys Tyr Gly Asp Thr Gln
500 505 510
Pro Ser Tyr Val Phe Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val
515 520 525
Ile Ala Gln Ile Ile Lys Glu Lys Ile Asp Pro Thr Thr Asp Gly Phe
530 535 540
Thr Phe Thr Leu Asp Gln Leu Lys Gln Ala Phe Glu Ile Tyr Asn Lys
545 550 555 560
Asp Met Asn Ser Val Asn Lys His Tyr Thr His Tyr Asn Ile Pro Ala
565 570 575
Ala Tyr Ala Val Met Leu Ser Asn Met Glu Ser Val Thr Arg Val Tyr
580 585 590
Tyr Gly Asp Leu Phe Thr Asp Asp Gly Gln Tyr Met Ala Ser Lys Ser
595 600 605
Pro Tyr Tyr Asp Ala Ile Asn Thr Leu Leu Arg Ala Arg Ile Arg Tyr
610 615 620
Ala Ala Gly Gly Gln Ile Met Glu His Asn Ser Tyr Lys Pro Ser Ala
625 630 635 640
Ala Met Lys Ala Ala His Pro Asp Ala Gly Asn Val Leu Gly Asn Ser
645 650 655
Glu Val Leu Val Ser Val Arg Phe Gly Gln Asp Val Met Ser Ala Asp
660 665 670
Asp Met Thr Gly Gly Lys Leu Ala Lys Thr Ser Gly Met Phe Thr Leu
675 680 685
Ile Ser Asn Asn Pro Glu Leu Glu Leu Asp Val Asn Glu Glu Ile Lys
690 695 700
Val Asn Val Gly Lys Ile His Ala Gly Gln Ala Tyr Arg Pro Leu Leu
705 710 715 720
Leu Thr Thr Asp Lys Gly Leu Gln Lys Tyr Leu Asn Asp Ser Asp Thr
725 730 735
Lys Leu Thr Lys Ile Ala Asp Lys Asp Gly Phe Ile Thr Phe Lys Gly
740 745 750
Ser Glu Ile Lys Gly Tyr Lys Gln Val Glu Val Asn Gly Tyr Leu Ser
755 760 765
Val Trp Val Pro Val Gly Ala Lys Ala Asp Gln Asp Ile Arg Val Ala
770 775 780
Pro Ser Thr Ala Ala Lys Gly Glu Lys Ala Lys Thr Tyr Thr Ala Ser
785 790 795 800
Gln Ala Leu Glu Ser Gln Leu Ile Tyr Glu Gly Phe Ser Asn Phe Gln
805 810 815
Asp Phe Val Gln Lys Asp Ser Gln Tyr Thr Asn Lys Lys Ile Ala Glu
820 825 830
Asn Thr Asp Leu Phe Lys Ala Trp Gly Val Thr Ser Phe Glu Met Ala
835 840 845
Pro Gln Tyr Val Ser Ala Thr Asp Gly Thr Phe Leu Asp Ser Ile Ile
850 855 860
Glu Asn Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Arg Tyr Asp Leu Ala Met Ser Lys
865 870 875 880
Asn Asn Lys Tyr Gly Ser Lys Glu Asp Leu Ala Asn Ala Leu Lys Ala
885 890 895
Leu His Ala Ala Gly Ile Gln Ala Ile Ala Asp Trp Val Pro Asp Gln
900 905 910
Ile Tyr Gln Leu Pro Gly Lys Glu Val Val Thr Ala Ser Arg Val Asp
915 920 925
Asn Tyr Gly Arg Val Lys Val Asp Gln Pro Leu Val Glu Lys Leu Tyr
930 935 940
Leu Ala Asn Thr Lys Ser Ser Gly Lys Asp Phe Gln Ala Lys Tyr Gly
945 950 955 960
Gly Glu Phe Leu Ala Glu Leu Gln Lys Lys Tyr Pro Glu Met Phe Thr
965 970 975
Thr Lys Met Ile Ser Thr Gly Lys Thr Ile Asp Pro Ser Val Lys Leu
980 985 990
Lys Glu Trp Ser Ala Lys Tyr Phe Asn Gly Thr Asn Val Leu Asp Arg
995 1000 1005
Gly Thr Asp Tyr Ile Leu Ser Asp Glu Gly Thr Gly Lys Tyr Phe
1010 1015 1020
Thr Val Asn Glu Lys Gly Asp Phe Leu Pro Ala Ser Leu Thr Gly
1025 1030 1035
Asn Lys Asp Ala Lys Thr Gly Phe Tyr Asn Asp Gly Lys Gly Ile
1040 1045 1050
Val Tyr Tyr Thr Thr Ala Gly Asn Lys Ala Arg Ser Ala Phe Val
1055 1060 1065
Thr Glu Ala Gly Asn Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Thr Gly His Met
1070 1075 1080
Val Thr Gly Pro Asn Val Ile Asn Thr Lys Phe Tyr Tyr Phe Leu
1085 1090 1095
Pro Asn Gly Ile Met Leu Lys Asp Ala Ile Lys Gln Asp Glu Lys
1100 1105 1110
Gly Arg Ser Val Tyr Tyr Gly Lys Thr Gly Val Met Tyr Lys Gly
1115 1120 1125
Gly Arg Asp Asn Glu Trp Phe Ala Met Thr Asp Ser Lys Gly Gln
1130 1135 1140
Met Arg Phe Arg His Phe Asp Arg Tyr Gly Phe Met Ser Ile Gly
1145 1150 1155
Leu Val Thr Ile Asn Gln Asn Val Gln Tyr Tyr Asp Glu Asn Gly
1160 1165 1170
Phe Gln Val Lys Gly Glu Phe Val Thr Asp Gln Asp Gly Gln Thr
1175 1180 1185
Arg Tyr Phe Asp Gln Gly Ser Gly Asn Leu Val Lys Gly Gln Phe
1190 1195 1200
Leu Asn Lys Asp Gly Asn Trp Tyr Tyr Leu Asp Asp Gln Gly Leu
1205 1210 1215
Val Ala Lys Gly Ala Gln Thr Ile Lys Gly Gln Lys Leu Tyr Phe
1220 1225 1230
Asp Thr Lys Thr Gly Val Gln Val Lys Gly Asp Phe Val Thr Asp
1235 1240 1245
Lys Asp Gly Asn Thr Phe Phe Tyr Ser Gly Asp Thr Gly Asp Leu
1250 1255 1260
Ile Leu Gly Gln Phe Phe Ser Thr Gly Asn Asn Ala Trp Phe Tyr
1265 1270 1275
Ala Asp Glu Asn Gly His Val Ala Lys Gly Ala Lys Thr Ile Arg
1280 1285 1290
Gly Gln Lys Leu Tyr Phe Asp Thr Lys Thr Gly Gln Gln Ala Lys
1295 1300 1305
Gly Arg Phe Ile Arg Asp Asp Lys Gly Val Arg Tyr Tyr Asp Ala
1310 1315 1320
Asp Thr Gly Thr Leu Val Thr Asn Ala Phe Leu Glu Thr Lys Ala
1325 1330 1335
Gly Ser Asn Gln Trp Tyr Tyr Met Gly Ala Asp Gly Tyr Ala Val
1340 1345 1350
Lys Gly Asn Gln Thr Ile Lys Asn Gln His Met Tyr Phe Asp Ala
1355 1360 1365
Glu Thr Gly Gln Gln Ala Lys Gly Ile Ile Val Thr Asp Ala Asn
1370 1375 1380
Gly Arg Lys Tyr Phe Tyr Asp Thr Phe Thr Gly Ser Arg Val Val
1385 1390 1395
Asn Gln Phe Val Leu Val Asn Gly Asn Trp Tyr Phe Phe Gly Tyr
1400 1405 1410
Asp Gly Ala Ala Val Thr Gly Phe His Asp Ile Lys Gly Gln His
1415 1420 1425
Leu Tyr Phe Asn Ser Asp Gly Thr Gln Ala Lys Gly Thr Thr Val
1430 1435 1440
Lys Ile Gly Asn Arg Ser Tyr Thr Phe Asp Ala His Thr Gly Glu
1445 1450 1455
Leu Thr Ser Val His Tyr Gly
1460 1465
<210> 14
<211> 4398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有异源信号序列的2920 gtf
<400> 14
gatgacctgg cgaaggaaca agcagccgcc tcacagcaaa aagcagcggc taaccagaat 60
gaagacgaag ttgcatcaga tgcagccgat acagctagcg ccaaagccac gtcagagaaa 120
gaagtggttc agtcaagcga tacaaactca gaaacaaatc aggttgagac gaaagaccaa 180
gcatcagcta aggagagcgc agacgcagtc gcgaaacaag ctcctcaagc aggaccggca 240
acaacgtcac aggtcgccag ctcagagagc agcagcgtgg caccgagcaa ggaggctgac 300
aaggctgccg caggctcagt ctcacagaac gaggaggagg cagccctttc acttgccaac 360
atcaagaaga ttgacggaaa atactattac gttatggccg atggaagcta caagaaaaac 420
tttgcgatta cggttgatgg acagatgctt tactttgacg caaaaacagg cgcactttca 480
tcaacgagca cgtatagctt ttcacaaggc ctgacgccga ttgtctcaga ctttagcgtg 540
aacaataagg ctttcgattc atcagaaaag tcatttgaac ttgtggacgg ctacctgaca 600
gccgaaagct ggtacagacc ggccaaaatc ctggaaaacg gaaagacgtg ggtcgactca 660
aaagaaacag atcttagacc tgtcctgatg tcatggtggc cgaacaaaga cacacaagtc 720
gcatatctga attacatgtc aaaagctctg ggaggcaaag aagagtttac gacagagaca 780
tcacaactga cactgaatac agcggcagaa cttatccagg cgaagatcga agctagagtg 840
agcaaagagc agggcacaaa atggctgaga gaagcaatgg cagcatttgt ggcgacgcaa 900
tcaagatgga ataaagattc agagcaatat gataaagcag atcatcttca aggcggagct 960
ctgctgtaca caaacaacaa ccttacagaa tgggctaatt caaattggag actgcttaat 1020
agaacaccga cgagacagga tggaaaaaca cattactcaa aggcagataa gtatggcgga 1080
tatgagtttc tgctggctaa tgatgtcgat aactcaaatc cggttgtcca agctgaaatg 1140
cttaaccaaa ttcattatct tatgaattgg ggcgaaattg ttatgggcga taagaatgct 1200
aacttcgacg gaatcagagt tgatgcagtt gacaacgtta atgcagatac actgcagctt 1260
tatacaaatt actttaatag cgtttatgga gtcaacaagt cagaagcaca ggcccttgca 1320
catatttcag tccttgaggc atggtcatat aatgataacg actataatca ggatacgaat 1380
ggcgcagcac ttgcgatgga taatggcctg agattctcac ttctgtatac gcttacaaga 1440
ccgattaatg aaagaacgcc tggcatgagc acactgatta agagcgaata cggactgacg 1500
gatagaacga aaaacgacaa gtacggcgac acgcaaccta gctatgtctt cgttagagca 1560
catgatagcg aggttcaaac ggttattgcc caaattatca aggagaaaat cgatcctaca 1620
acagatggct ttacatttac gctggatcaa ctgaagcaag ccttcgaaat ctataacaag 1680
gacatgaact cagtgaataa gcactacacg cattacaata ttcctgctgc atacgctgtt 1740
atgctgagca acatggaaag cgtgacaaga gtgtactacg gcgacctttt tacggatgac 1800
ggccagtata tggcaagcaa gtcaccttat tatgatgcta tcaatacact tcttagagcg 1860
agaattagat acgccgctgg aggacaaatc atggaacata attcatataa gccgagcgcc 1920
gcaatgaaag ctgcacaccc ggacgccggc aacgtcctgg gcaattcaga ggtcctggtc 1980
tcagtgagat tcggccaaga cgtgatgtca gcagatgata tgacaggcgg aaaacttgcg 2040
aaaacatcag gcatgtttac gcttattagc aataacccgg aactggaact tgacgttaat 2100
gaggagatca aagtgaatgt gggcaaaatc catgctggac aagcttatag accgcttctg 2160
cttacaacag ataagggact tcagaagtac cttaatgatt cagacacaaa actgacgaag 2220
atcgctgaca aagacggatt cattacattc aaaggatcag aaattaaggg ctataaacaa 2280
gttgaggtta atggctacct ttcagtttgg gtcccggttg gcgctaaagc agaccaagat 2340
attagagttg ccccgagcac agccgcaaaa ggagaaaagg ctaaaacgta tacagcatca 2400
caggctctgg aatcacagct tatctatgaa ggcttctcaa actttcaaga ctttgttcaa 2460
aaagatagcc aatatacgaa taagaaaatt gcagagaaca cagacctgtt taaagcatgg 2520
ggagttacgt cattcgagat ggctcctcaa tatgttagcg caacggatgg cacattcctg 2580
gattcaatca ttgaaaacgg ctatgcattc acagacagat acgaccttgc tatgagcaag 2640
aataacaaat atggatcaaa agaggatctg gctaacgcac ttaaggcact tcacgcagct 2700
ggcattcaag ctattgcgga ttgggtgcct gaccaaatct accaactgcc gggcaaagag 2760
gttgtgacag ccagcagagt ggataactat ggcagagtta aggtggacca gccgcttgtc 2820
gagaagctgt atctggcgaa tacgaaatca tcaggaaaag atttccaggc taagtacggc 2880
ggagagttcc ttgcggagct gcagaagaaa tacccggaga tgttcacgac aaaaatgatc 2940
agcacaggaa agacaatcga cccgtcagtg aagctgaaag agtggtcagc caagtacttc 3000
aatggaacga acgtgctgga tagaggcaca gactatattc ttagcgatga gggaacggga 3060
aagtatttca cagtcaacga gaagggcgat ttcctgcctg cgagccttac aggcaacaag 3120
gatgccaaaa caggctttta caatgacgga aaaggaattg tttactacac aacagctgga 3180
aacaaggcta gaagcgcgtt cgtgacagag gctggcaaca catactattt cgactatacg 3240
ggccacatgg tgacaggacc gaatgttatc aacacgaagt tctattactt tcttcctaac 3300
ggcatcatgc tgaaggacgc aattaagcaa gatgaaaagg gaagaagcgt ttattacggc 3360
aagacaggag ttatgtacaa gggcggcaga gataacgaat ggtttgcaat gacagactca 3420
aagggacaga tgagatttag acatttcgat agatatggct tcatgtcaat tggacttgtt 3480
acaatcaacc agaatgttca atactatgat gagaatggct ttcaggtgaa aggcgaattt 3540
gtcacagatc aggatggaca aacgagatac ttcgaccaag gctcaggcaa tcttgttaaa 3600
ggacagtttc ttaacaaaga tggaaattgg tattatctgg atgatcaagg actggttgct 3660
aaaggagctc aaacgattaa aggccaaaaa ctgtattttg atacgaagac gggcgtgcag 3720
gttaagggag attttgtgac ggacaaggac ggcaatacat tcttctatag cggagatacg 3780
ggagatctga ttctgggaca attcttttca acgggcaata atgcatggtt ttatgcggac 3840
gagaacggac acgtcgccaa aggcgcaaaa acaatcagag gacagaagct ttacttcgat 3900
acaaaaacgg gacaacaagc caagggcaga ttcatcagag acgacaaggg agtcagatac 3960
tacgatgcag acacgggcac actggttaca aacgcatttc tggagacgaa ggcgggaagc 4020
aatcagtggt actacatggg cgctgatgga tatgccgtga agggaaacca gacgatcaag 4080
aaccagcata tgtactttga cgctgaaaca ggacagcaag ctaagggaat catcgttacg 4140
gacgcgaacg gcagaaaata cttctatgac acgtttacgg gctcaagagt tgttaatcaa 4200
ttcgttcttg tgaacggaaa ctggtacttt tttggatacg atggagcagc agttacagga 4260
ttccacgata tcaagggcca acatctttat ttcaactcag acggaacgca agcgaaaggc 4320
acgacagtta agatcggaaa tagaagctac acattcgacg cacacacagg cgagcttaca 4380
tcagtccatt acggatga 4398
<210> 15
<211> 4360
<212> DNA
<213> 汗毛链球菌
<400> 15
atgattttca tggaaagaaa attacattac aaattacaca aggtcaagaa gcagtgggtg 60
accatcgctg tcgcctctgc tggtttggcc agcgtagtcg gtgctggctc cttgagccaa 120
accgtttctg ctgacgatct tgctaaggac caagcggcag cgactgagca aaaggcatca 180
gccaatcagg aaaaagaaga agtagtttct gatcaggttg acacgaccag tgccaaagca 240
acctctgaga aggaagttgc tcaagcttcg gacactagtt cagaagccaa ccaagttcca 300
gcccaagaag aaaagaaggc tgaaaaggca gctgctcctg cgacagcgac accagctcca 360
cagactggtg caaaaaacag ccaaacagct agttcagaag caccagcgac aagcaatcaa 420
gcaagtgaga cagctgaaac tggtgcctta agccaaaaag aagaagcagc agttctttcg 480
cttgataata tcaagaagat tgatggaaag tattactatg ttatggcaga cggctcttat 540
aagaagaact ttgccattac tgttgatggg caaatgcttt actttgatgc caaaacaggt 600
gccctgtctt caacctctac ctattctttc agtcaaggtt tgacaccaat tgtttctgat 660
ttctcagtca acaataaggc tttcgattct tctgaaaaga gttttgaact ggtagatggt 720
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acccaagttg cctacctcaa ctatatgtcc aaggcgcttg gtggcaagga agagtttaca 900
acagaaacct ctcaaacaac cttgaataca gctgctgagt tgattcaaac caagattgaa 960
gctcgtattt ctaaggaaca agggaccaaa tggcttcgtg aagctatggc tgcttttgta 1020
gcgactcagt ctcgttggag ttacgctagt gagcaatttg ataaaaacga ccacttgcaa 1080
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ttgcttaacc gcacccctac ccgacaggat ggcaagcctc attattctaa agctgacgaa 1200
tacggtggtt acgaattcct cttggctaat gacgtggata actccaaccc agtcgttcaa 1260
gcggaaatgc tcaaccaaat ccactacctg atgaactggg gctctattgt catgaatgac 1320
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ctgcaactct acactaacta ttttaattcg gtttatggtg tcaacaagtc agaagcccaa 1440
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gatccaacga ctgatggctt taccttcacc ttggaccaat tgaaacaggc ctttgacatc 1800
tacaataagg atatgaatag tgttgataag cactataccc actacaatat tccagcagcc 1860
tacgctgtta tgttgtccaa catggaatca gtaactcggg tttactatgg agacctcttt 1920
accgatgatg gtcaatacat ggaaaccaag tctccttact acgatgctat caataccctc 1980
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gtaaaccaat ttgttttggt taatggaaat tggtatttct 4360
<210> 16
<211> 1453
<212> PRT
<213> 汗毛链球菌
<400> 16
Met Ile Phe Met Glu Arg Lys Leu His Tyr Lys Leu His Lys Val Lys
1 5 10 15
Lys Gln Trp Val Thr Ile Ala Val Ala Ser Ala Gly Leu Ala Ser Val
20 25 30
Val Gly Ala Gly Ser Leu Ser Gln Thr Val Ser Ala Asp Asp Leu Ala
35 40 45
Lys Asp Gln Ala Ala Ala Thr Glu Gln Lys Ala Ser Ala Asn Gln Glu
50 55 60
Lys Glu Glu Val Val Ser Asp Gln Val Asp Thr Thr Ser Ala Lys Ala
65 70 75 80
Thr Ser Glu Lys Glu Val Ala Gln Ala Ser Asp Thr Ser Ser Glu Ala
85 90 95
Asn Gln Val Pro Ala Gln Glu Glu Lys Lys Ala Glu Lys Ala Ala Ala
100 105 110
Pro Ala Thr Ala Thr Pro Ala Pro Gln Thr Gly Ala Lys Asn Ser Gln
115 120 125
Thr Ala Ser Ser Glu Ala Pro Ala Thr Ser Asn Gln Ala Ser Glu Thr
130 135 140
Ala Glu Thr Gly Ala Leu Ser Gln Lys Glu Glu Ala Ala Val Leu Ser
145 150 155 160
Leu Asp Asn Ile Lys Lys Ile Asp Gly Lys Tyr Tyr Tyr Val Met Ala
165 170 175
Asp Gly Ser Tyr Lys Lys Asn Phe Ala Ile Thr Val Asp Gly Gln Met
180 185 190
Leu Tyr Phe Asp Ala Lys Thr Gly Ala Leu Ser Ser Thr Ser Thr Tyr
195 200 205
Ser Phe Ser Gln Gly Leu Thr Pro Ile Val Ser Asp Phe Ser Val Asn
210 215 220
Asn Lys Ala Phe Asp Ser Ser Glu Lys Ser Phe Glu Leu Val Asp Gly
225 230 235 240
Tyr Leu Thr Ala Glu Ser Trp Tyr Arg Pro Ala Lys Ile Leu Glu Asn
245 250 255
Gly Lys Thr Trp Val Asp Ser Lys Glu Thr Asp Leu Arg Pro Val Leu
260 265 270
Met Ser Trp Trp Pro Asn Lys Asp Thr Gln Val Ala Tyr Leu Asn Tyr
275 280 285
Met Ser Lys Ala Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe Thr Thr Glu Thr Ser
290 295 300
Gln Thr Thr Leu Asn Thr Ala Ala Glu Leu Ile Gln Thr Lys Ile Glu
305 310 315 320
Ala Arg Ile Ser Lys Glu Gln Gly Thr Lys Trp Leu Arg Glu Ala Met
325 330 335
Ala Ala Phe Val Ala Thr Gln Ser Arg Trp Ser Tyr Ala Ser Glu Gln
340 345 350
Phe Asp Lys Asn Asp His Leu Gln Gly Gly Ala Leu Leu Tyr Thr Asn
355 360 365
Asn Lys Leu Thr Gln Trp Ala Asp Ser Asn Tyr Arg Leu Leu Asn Arg
370 375 380
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385 390 395 400
Tyr Gly Gly Tyr Glu Phe Leu Leu Ala Asn Asp Val Asp Asn Ser Asn
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Pro Val Val Gln Ala Glu Met Leu Asn Gln Ile His Tyr Leu Met Asn
420 425 430
Trp Gly Ser Ile Val Met Asn Asp Lys Asp Ala Asn Phe Asp Gly Ile
435 440 445
Arg Val Asp Ala Val Asp Asn Val Asn Ala Asp Thr Leu Gln Leu Tyr
450 455 460
Thr Asn Tyr Phe Asn Ser Val Tyr Gly Val Asn Lys Ser Glu Ala Gln
465 470 475 480
Ala Leu Ala His Ile Ser Val Leu Glu Ala Trp Ser Tyr Asn Asp Asn
485 490 495
Asp Tyr Asn Gln Asp Thr Asn Gly Ala Ala Leu Ala Met Asp Asn Gly
500 505 510
Leu Arg Phe Ser Leu Leu Tyr Thr Leu Thr Arg Pro Leu Asn Glu Arg
515 520 525
Thr Pro Gly Met Ser Thr Leu Ile Lys Ser Gln Tyr Gly Leu Thr Asp
530 535 540
Arg Thr Lys Asp Asp Lys Tyr Gly Asp Thr Gln Pro Ser Tyr Val Phe
545 550 555 560
Val Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln Thr Val Ile Ala Gln Ile Ile
565 570 575
Lys Lys Lys Ile Asp Pro Thr Thr Asp Gly Phe Thr Phe Thr Leu Asp
580 585 590
Gln Leu Lys Gln Ala Phe Asp Ile Tyr Asn Lys Asp Met Asn Ser Val
595 600 605
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610 615 620
Leu Ser Asn Met Glu Ser Val Thr Arg Val Tyr Tyr Gly Asp Leu Phe
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660 665 670
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675 680 685
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690 695 700
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705 710 715 720
Lys Leu Ala Lys Thr Ser Gly Met Phe Ser Leu Ile Ser Asn Asn Pro
725 730 735
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755 760 765
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805 810 815
Gly Ala Lys Ala Asp Gln Asp Ile Arg Val Ala Ala Ser Thr Lys Val
820 825 830
Asn Gly Lys Asp Asp Lys Thr Tyr Thr Ala Ser Gln Ala Leu Glu Ser
835 840 845
Gln Leu Ile Tyr Glu Gly Phe Ser Asn Phe Gln Asp Phe Val Lys Lys
850 855 860
Asp Ser Gln Tyr Thr Asn Lys Lys Ile Ala Glu Asn Thr Asp Leu Phe
865 870 875 880
Lys Ala Trp Gly Val Thr Ser Phe Glu Met Ala Pro Gln Tyr Val Ser
885 890 895
Ala Thr Asp Gly Thr Phe Leu Asp Ser Ile Ile Glu Asn Gly Tyr Ala
900 905 910
Phe Thr Asp Arg Tyr Asp Leu Ala Met Ser Lys Asn Asn Lys Tyr Gly
915 920 925
Ser Lys Glu Asp Leu Ala Asn Ala Leu Lys Ala Leu His Ala Ala Gly
930 935 940
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945 950 955 960
Gly Lys Glu Val Val Thr Ala Ser Arg Val Asp Asn Tyr Gly Arg Val
965 970 975
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980 985 990
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995 1000 1005
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035
Ser Ala Lys Tyr Leu Asn Gly Thr Asn Val Leu Gly Arg Gly Thr
1040 1045 1050
Asp Tyr Val Leu Ser Asp Glu Gly Thr Gly Lys Tyr Phe Thr Val
1055 1060 1065
Asn Glu Lys Gly Asp Phe Leu Pro Ala Ala Leu Thr Gly Asp Arg
1070 1075 1080
Glu Ala Lys Thr Gly Phe Tyr Asn Asp Gly Lys Gly Met Thr Tyr
1085 1090 1095
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1100 1105 1110
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Gly Val Met Leu Lys Asp Ala Ile Lys Gln Asp Glu Leu Gly Arg
1145 1150 1155
Ser Val Tyr Tyr Gly Lys Thr Gly Thr Met Tyr Lys Ala Thr Asp
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Lys Ser Gln Trp Phe Ala Met Thr Asp Ser Lys Gly Gln Gln Arg
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Phe Arg His Phe Asp Arg Phe Gly Ile Met Ser Val Gly Leu Val
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Thr Ile Asn Gly Ser Val Gln Tyr Tyr Asp Glu Glu Gly Phe Gln
1205 1210 1215
Val Lys Gly Glu Phe Val Thr Asp Lys Asp Gly Gln Thr Arg Tyr
1220 1225 1230
Phe Asp Glu Gly Ser Gly Asn Leu Val Lys Asp Arg Phe Leu Asn
1235 1240 1245
Lys Asp Gly Lys Trp Tyr Tyr Leu Asp Asp Lys Gly Leu Leu Val
1250 1255 1260
Lys Gly Ala Gln Thr Ile Lys Gly Gln Lys Leu Tyr Phe Asp Thr
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Lys Thr Gly Ala Gln Val Lys Gly Asp Phe Val Ala Asp Lys Asp
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Gly Asn Leu Thr Phe Tyr Ser Gly Asp Ser Gly Gln Met Val Gln
1295 1300 1305
Ser Asp Phe Phe Ser Thr Gly Asn Asn Ala Trp Phe Tyr Ala Asp
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Glu Asn Gly His Val Ala Lys Gly Ala Lys Thr Ile Arg Gly Gln
1325 1330 1335
Lys Leu Tyr Phe Asp Thr Lys Thr Gly Gln Gln Ala Lys Gly Arg
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Phe Ile Arg Asp Asp Lys Gly Val Arg Tyr Tyr Asp Ala Asp Thr
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Gly Ala Leu Val Thr Asn Ala Phe Leu Glu Thr Lys Ala Gly Ser
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Asn Gln Trp Tyr Tyr Met Gly Ala Asp Gly Tyr Ala Val Lys Gly
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Gly Gln Gln Ala Lys Gly Ile Ile Val Thr Asp Ala Asn Gly Arg
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Lys Tyr Phe Tyr Asp Thr Phe Thr Gly Ser Arg Val Val Asn Gln
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Phe Val Leu Val Asn Gly Asn Trp Tyr Phe
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<210> 17
<211> 1409
<212> PRT
<213> 汗毛链球菌
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1409)
<223> 成熟的2921 gtf
<400> 17
Asp Asp Leu Ala Lys Asp Gln Ala Ala Ala Thr Glu Gln Lys Ala Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gln Glu Lys Glu Glu Val Val Ser Asp Gln Val Asp Thr Thr
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Ser Ala Lys Ala Thr Ser Glu Lys Glu Val Ala Gln Ala Ser Asp Thr
35 40 45
Ser Ser Glu Ala Asn Gln Val Pro Ala Gln Glu Glu Lys Lys Ala Glu
50 55 60
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65 70 75 80
Lys Asn Ser Gln Thr Ala Ser Ser Glu Ala Pro Ala Thr Ser Asn Gln
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Ala Ser Glu Thr Ala Glu Thr Gly Ala Leu Ser Gln Lys Glu Glu Ala
100 105 110
Ala Val Leu Ser Leu Asp Asn Ile Lys Lys Ile Asp Gly Lys Tyr Tyr
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Phe Ser Val Asn Asn Lys Ala Phe Asp Ser Ser Glu Lys Ser Phe Glu
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195 200 205
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Tyr Leu Asn Tyr Met Ser Lys Ala Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe Thr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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355 360 365
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370 375 380
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Leu Gln Leu Tyr Thr Asn Tyr Phe Asn Ser Val Tyr Gly Val Asn Lys
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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595 600 605
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1130 1135 1140
Arg Phe Arg His Phe Asp Arg Phe Gly Ile Met Ser Val Gly Leu
1145 1150 1155
Val Thr Ile Asn Gly Ser Val Gln Tyr Tyr Asp Glu Glu Gly Phe
1160 1165 1170
Gln Val Lys Gly Glu Phe Val Thr Asp Lys Asp Gly Gln Thr Arg
1175 1180 1185
Tyr Phe Asp Glu Gly Ser Gly Asn Leu Val Lys Asp Arg Phe Leu
1190 1195 1200
Asn Lys Asp Gly Lys Trp Tyr Tyr Leu Asp Asp Lys Gly Leu Leu
1205 1210 1215
Val Lys Gly Ala Gln Thr Ile Lys Gly Gln Lys Leu Tyr Phe Asp
1220 1225 1230
Thr Lys Thr Gly Ala Gln Val Lys Gly Asp Phe Val Ala Asp Lys
1235 1240 1245
Asp Gly Asn Leu Thr Phe Tyr Ser Gly Asp Ser Gly Gln Met Val
1250 1255 1260
Gln Ser Asp Phe Phe Ser Thr Gly Asn Asn Ala Trp Phe Tyr Ala
1265 1270 1275
Asp Glu Asn Gly His Val Ala Lys Gly Ala Lys Thr Ile Arg Gly
1280 1285 1290
Gln Lys Leu Tyr Phe Asp Thr Lys Thr Gly Gln Gln Ala Lys Gly
1295 1300 1305
Arg Phe Ile Arg Asp Asp Lys Gly Val Arg Tyr Tyr Asp Ala Asp
1310 1315 1320
Thr Gly Ala Leu Val Thr Asn Ala Phe Leu Glu Thr Lys Ala Gly
1325 1330 1335
Ser Asn Gln Trp Tyr Tyr Met Gly Ala Asp Gly Tyr Ala Val Lys
1340 1345 1350
Gly Asn Gln Thr Ile Lys Asn Gln His Met Tyr Phe Asp Ala Glu
1355 1360 1365
Thr Gly Gln Gln Ala Lys Gly Ile Ile Val Thr Asp Ala Asn Gly
1370 1375 1380
Arg Lys Tyr Phe Tyr Asp Thr Phe Thr Gly Ser Arg Val Val Asn
1385 1390 1395
Gln Phe Val Leu Val Asn Gly Asn Trp Tyr Phe
1400 1405
<210> 18
<211> 4230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有异源信号序列的2921 gtf
<400> 18
gatgatctgg caaaggacca agcggctgcc acggaacaga aggcatcagc gaatcaagaa 60
aaggaggaag ttgtttcaga tcaagttgat acgacaagcg ccaaagcaac gtcagaaaaa 120
gaggtggcac aggctagcga tacatcatca gaggccaacc aggttccggc ccaagaggaa 180
aagaaagccg agaaggccgc agcacctgcg acagctacgc cggcaccgca aacgggagcc 240
aaaaatagcc aaacagcctc aagcgaggca ccggctacat caaatcaagc atcagaaacg 300
gcggaaacag gcgcactgtc acaaaaggaa gaagcagctg tcctttcact tgataatatc 360
aaaaagattg acggaaaata ctactatgtt atggctgatg gatcatataa gaaaaacttt 420
gcgattacag tcgatggcca aatgctgtat tttgatgcaa aaacaggagc tctttcaagc 480
acatcaacat attcattttc acaaggcctg acaccgattg ttagcgactt ctcagtcaat 540
aacaaggcat ttgatagcag cgagaaatca ttcgaacttg tggatggata tcttacggcc 600
gagagctggt acagaccggc aaaaattctg gagaatggaa agacgtgggt tgattcaaaa 660
gagacggacc ttagaccggt gctgatgtca tggtggccga ataaggatac gcaggttgcc 720
tacctgaact atatgtcaaa agcacttggc ggcaaagagg agtttacaac ggagacatca 780
caaacgacac ttaacacggc tgctgaactt atccagacga agatcgaggc aagaattagc 840
aaagaacaag gaacgaagtg gcttagagaa gctatggccg catttgttgc tacgcagtca 900
agatggtcat atgcgtcaga gcagttcgat aaaaacgatc accttcaagg cggagcactt 960
ctgtacacaa ataataagct gacacaatgg gctgactcaa actatagact gcttaacaga 1020
acgcctacga gacaggatgg aaaacctcat tacagcaaag cagacgagta tggaggctat 1080
gagttcctgc ttgcaaatga cgtcgataac tcaaatccgg tggttcaggc agagatgctt 1140
aatcaaattc actatcttat gaactggggc tcaattgtta tgaatgataa ggacgcgaat 1200
ttcgatggaa ttagagtgga tgcggttgac aatgttaatg cggacacact tcaactgtat 1260
acgaattact ttaactcagt ttacggcgtt aacaaatcag aagctcaggc acttgctcat 1320
atcagcgttc ttgaagcatg gagctacaac gacaatgatt acaatcagga tacaaatggc 1380
gctgcactgg ccatggataa tggacttaga ttcagccttc tttacacact gacaagaccg 1440
cttaacgaga gaacacctgg catgtcaaca cttattaagt cacaatatgg ccttacagac 1500
agaacaaaag acgataagta cggcgacacg caaccgtcat acgtgtttgt tagagctcac 1560
gacagcgaag ttcaaacagt tattgctcag attattaaga agaaaattga tccgacaaca 1620
gacggattca catttacact ggaccaactt aaacaagcct tcgatatcta taacaaagat 1680
atgaatagcg ttgataaaca ttacacgcac tacaatattc ctgcagcata cgctgtcatg 1740
ctgtcaaaca tggaatcagt tacaagagtc tattatggcg acctgtttac agatgacggc 1800
caatatatgg aaacaaaatc accgtactat gacgccatta atacactgct gagagccaga 1860
atcagatatg cagctggcgg acaaacaatg gaacacaaca gctataaggc gtcagctgcg 1920
atgaaggcga aaaaccctga tagcggctca gtccttggca attcagaagt tctggttagc 1980
gttagatttg gacaagatgt gatgagcgct gacgatatga caggaggcaa acttgctaag 2040
acgtcaggaa tgttctcact gatttcaaat aatccggaac tggaacttga cgctaatgaa 2100
gagatcagag tgaatgttgg aaaaatccat gccggccaaa cgtacagacc tcttctgctt 2160
acgacagata agggcctgca aaagtatctt aatgactcag acacgaaact tacgaaggtt 2220
gcagataaag atggctatat tacatttaag ggctcagaga ttaaaggcta taaacaggtt 2280
gaagttaatg gctacctgag cgtctgggtg ccggttggcg ctaaagcaga ccaagacatc 2340
agagtcgcag cttcaacaaa agtcaatgga aaggatgata agacgtacac ggcaagccaa 2400
gcacttgagt cacagcttat ttacgagggc ttctcaaatt tccaagattt cgttaagaaa 2460
gattcacaat atacaaataa gaaaatcgcg gaaaatacag atcttttcaa agcatggggc 2520
gttacatcat ttgaaatggc gcctcagtat gttagcgcaa cagatggcac atttctggat 2580
agcattatcg agaatggata tgcatttacg gatagatatg acctggccat gtcaaaaaac 2640
aacaaatacg gatcaaaaga ggatcttgct aatgcgctta aagctctgca cgcagctggc 2700
attcaagcca ttgcggattg ggttcctgat caaatctacc aacttcctgg caaggaggtt 2760
gttacagcat caagagtcga caattacggc agagtgaaga tcgaccaacc tctggtggaa 2820
aagctgtatc tggctaacac aaagagctca ggcaaagatt ttcaggcgaa atatggcgga 2880
gaatttcttg aagacctgca gaaacagtat cctgaaatgt ttacagcgaa aatgatttca 2940
acaggaaaaa cgattgatcc tagcgttaaa cttaaggagt ggtcagccaa atacctgaat 3000
ggaacaaacg tgctgggaag aggcacagat tatgttcttt cagatgaggg aacgggcaaa 3060
tactttacgg tcaatgagaa aggcgatttc ctgccggctg cacttacagg cgatagagaa 3120
gcaaagacag gattctataa tgacggcaaa ggcatgacgt attacacaac ggccggaaat 3180
aaggcgaaga gcgcgttcgt tacagtggcg ggcaacacat actactttga ttatacggga 3240
tatatggtta caggacctaa tacaattaac agcaagtttt actatttcct tcctaatggc 3300
gttatgctga aggatgcaat taagcaggat gaacttggaa gatcagtcta ctatggcaaa 3360
acgggaacaa tgtataaggc aacggataaa tcacagtggt tcgccatgac agatagcaag 3420
ggacaacaga gattcagaca ttttgataga ttcggaatca tgagcgttgg acttgtcacg 3480
attaatggaa gcgtccagta ttacgacgaa gaaggctttc aagttaaggg agagttcgtg 3540
acggacaaag atggacagac gagatatttt gacgagggaa gcggcaacct ggttaaggac 3600
agattcctga acaaggacgg aaagtggtat taccttgacg ataagggact gcttgtcaag 3660
ggagctcaaa caatcaaggg ccagaaactt tatttcgata caaaaacagg agcgcaagtc 3720
aaaggagact ttgtggctga taaggatgga aacctgacgt tttatagcgg cgattcagga 3780
caaatggtgc agtcagactt ctttagcaca ggcaacaatg catggtttta tgcagatgaa 3840
aacggacatg ttgcaaaagg cgcgaagaca atcagaggcc aaaaactgta cttcgacacg 3900
aagacgggac agcaggccaa gggcagattc attagagatg acaaaggcgt gagatactat 3960
gatgcagaca caggcgcact ggtcacaaat gctttcctgg aaacgaaggc tggctcaaat 4020
cagtggtact acatgggagc cgatggatac gcggtgaagg gcaaccagac gatcaagaat 4080
cagcacatgt actttgacgc ggagacgggc caacaagcta agggcatcat cgtcacagat 4140
gcaaatggca gaaagtactt ctatgacacg ttcacgggca gcagagttgt taaccaattt 4200
gttctggtga acggcaattg gtacttttga 4230

Claims (21)

1.一种包含氧化的右旋糖酐化合物的组合物，其中所述氧化的右旋糖酐化合物通过在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触来产生，
其中所述右旋糖酐包含：
(i)87 wt%-91.5 wt%仅在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii) 0.1 wt%-1.2 wt%仅在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii) 0.1 wt%-0.7 wt%仅在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv) 7.7 wt%-8.6 wt%仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及
(v) 0.4 wt%-1.7 wt%仅在以下位置处连接的葡萄糖：
(a) 位置1、2和6，或
(b) 位置1、4和6；
并且其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为200 nm-280 nm，
其中所述右旋糖酐是葡萄糖基转移酶的产物，所述葡萄糖基转移酶包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述右旋糖酐包含：
(i)89.5 wt%-90.5 wt%仅在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii) 0.4 wt%-0.9 wt%仅在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii) 0.3 wt%-0.5 wt%仅在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv) 8.0 wt%-8.3 wt%仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及
(v) 0.7 wt%-1.4 wt%仅在以下位置处连接的葡萄糖：
(a) 位置1、2和6，或
(b) 位置1、4和6。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述右旋糖酐包含在分支结构内连接在一起的链，其中所述链在长度上相似并且具有至少98.0%的α-1,6-糖苷键，其中“长度上相似”意味着分支结构中所有长链的至少70%的长度是在分支结构的所有长链的平均长度的正/负30%内。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述链的平均长度为10-50个单体单元。
5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中将所述右旋糖酐与所述高碘酸盐化合物接触。
6.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中将所述右旋糖酐首先与所述高碘酸盐化合物接触，且然后与所述N-氧代铵盐接触。
7.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述N-氧代铵盐包括TEMPO氧代铵盐。
8.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物是家用产品、个人护理产品、工业产品、药物产品或食物产品。
9.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物是水性组合物。
10.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物。
11.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物为家用产品。
12.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物是织物护理组合物。
13.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物是餐具护理组合物。
14.如权利要求9所述的组合物，其中所述氧化的右旋糖酐与阳离子络合。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述阳离子是硬水阳离子。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述硬水阳离子是钙或镁阳离子。
17.一种产生氧化的右旋糖酐化合物的方法，所述方法包括：
(a) 在水性条件下使右旋糖酐与至少一种N-氧代铵盐、至少一种高碘酸盐化合物和/或至少一种过氧化物化合物接触，
其中所述右旋糖酐包含：
(i)87 wt%-91.5 wt%仅在位置1和6处连接的葡萄糖；
(ii) 0.1 wt%-1.2 wt%仅在位置1和3处连接的葡萄糖；
(iii) 0.1 wt%-0.7 wt%仅在位置1和4处连接的葡萄糖；
(iv) 7.7 wt%-8.6 wt%仅在位置1、3和6处连接的葡萄糖；以及
(v) 0.4 wt%-1.7 wt%仅在以下位置处连接的葡萄糖：
(a) 位置1、2和6，或
(b) 位置1、4和6；
其中所述右旋糖酐的重均分子量(Mw)为5000万至2亿道尔顿，且所述右旋糖酐的z-平均回转半径为200 nm-280 nm；
其中所述右旋糖酐被所述N-氧代铵盐、高碘酸盐化合物和/或过氧化物化合物氧化，从而产生氧化的右旋糖酐化合物，以及
(b) 任选地分离所述氧化的右旋糖酐化合物，
其中所述右旋糖酐是葡萄糖基转移酶的产物，所述葡萄糖基转移酶包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
18.如权利要求17所述的方法，其中：
(I) 使所述右旋糖酐与所述高碘酸盐化合物接触；或者
(II) 使所述右旋糖酐首先与所述高碘酸盐化合物接触，且然后与所述N-氧代铵盐接触。
19.如权利要求17-18中任一项所述的方法，其中所述N-氧代铵盐包括：
(I) TEMPO氧代铵盐，或
(II) 4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐；
任选地其中通过在所述水性条件下氧化包含TEMPO的试剂来提供所述TEMPO氧代铵盐或所述4-乙酰胺基-TEMPO氧代铵盐。
20.一种提高水性组合物的助洗剂能力的方法，其中所述方法包括：
使根据权利要求17-19中任一项所述的方法生产的氧化的右旋糖酐化合物与水性组合物接触，其中与所述接触步骤之前的水性组合物的助洗剂能力相比，所述氧化的右旋糖酐化合物增加所述水性组合物的助洗剂能力。
21.一种处理材料的方法，所述方法包括：
使材料与包含根据权利要求17-19中任一项所述的方法产生的氧化的右旋糖酐化合物的水性组合物接触。
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