CN107400732A - 一种用于检测胃癌的试剂盒 - Google Patents

一种用于检测胃癌的试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN107400732A
CN107400732A CN201710884407.9A CN201710884407A CN107400732A CN 107400732 A CN107400732 A CN 107400732A CN 201710884407 A CN201710884407 A CN 201710884407A CN 107400732 A CN107400732 A CN 107400732A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stomach
kit
cancer
primer
cell cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710884407.9A
Other languages
English (en)
Inventor
王振
郭伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Li Hao Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Li Hao Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Li Hao Biotechnology Co Ltd filed Critical Suzhou Li Hao Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201710884407.9A priority Critical patent/CN107400732A/zh
Publication of CN107400732A publication Critical patent/CN107400732A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于检测胃癌的试剂盒，其包含特异性检测miRNA‑6738‑5p的试剂。本发明的试剂盒可以有效的检测胃印绒细胞癌，所述试剂盒可快速实现miRNA的定量检测，从而达到快速有效的检测胃印绒细胞癌的目的。

Description

一种用于检测胃癌的试剂盒
技术领域
本发明涉及医学检测领域，更具体的涉及一种用于检测胃癌的试剂盒。
背景技术
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一。在不少地区恶性肿瘤死亡统计报告中，胃癌居第一位或第二位。胃癌的发病年龄以40～60岁之间为最多见，一般男性多于女性，男女之比大约为3：1或2：1。胃癌多发生在胃窦部，特别是沿胃小弯侧。由于胃癌在发病的早期一般没有什么明显症状或体征，常常容易与胃炎、胃溃疡相混淆，没能引起足够的重视，延误了治疗的时机，使胃癌进一步扩展。胃癌分为乳头状腺癌、管状腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌、腺鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌等。其中，印戒细胞癌是一种含有大量黏液的特殊胃癌类型，由于细胞中充满了黏液，把细胞核挤向了细胞的一侧，使其外形酷似一枚戒指，故得其名。胃印戒细胞癌是高度恶性肿瘤之一，约占胃癌的9.9％，具有侵袭力强，病程进展快，恶性程度高的特点。胃印戒细胞癌是胃肠恶性肿瘤中预后最差的，发展很快。如果及时发现，还可以做根治性切除的话，5年生存率可以达到25％。但如果发现时已经侵犯周围器官或已经转移，预期生存时间在半年左右。因此如果能够在发病早期及时的诊断出胃印戒细胞癌将大大提高患者的治疗效果，而现有的常规检测方法均无法有效的在早期检测出胃印戒细胞癌，因此迫切的需要提供一种早期诊断胃印戒细胞癌的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于检测胃癌的试剂盒，具体来说是一种检测胃印戒细胞癌的试剂盒。
本发明的一个技术方案是提供一种用于检测胃癌的试剂盒，其包含特异性检测miRNA-6738-5p的试剂。
优选的，所述试剂包括反转录引物、正向引物、反向引物，所述反转录引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述正向引物的序列如SEQ ID NO：2所示，所述反向引物的序列如SEQID NO：3所示。
本发明的另一个技术方案是提供SEQ ID NO：1-3在用于制备检测胃癌的试剂盒中的用途。
发明人在前期的细胞学试验中，通过差显表达的方法发现miRNA-6738-5p的表达量与胃印绒细胞癌密切相关，miRNA-6738-5p的高表达预示着胃印绒细胞癌的发生，为了进一步证实该结论，发明人又通过临床样本统计学实验进一步证实了该相关性。
本发明的试剂盒可以有效的检测胃印绒细胞癌，所述试剂盒可快速实现miRNA的定量检测，从而达到快速有效的检测胃印绒细胞癌的目的。
附图说明
图1引物的扩增曲线
图2临床标本中胃印绒细胞癌与正常对照组之间外周血miRNA-6738-5p的表达水平比较图
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1样本收集
收集50例胃印绒细胞癌和25例正常人群血液，所有标本均来自苏州大学第一附属医院和苏州大学第二附属医院，标本收集时间为2015年10月至2017年6月。上述标本的收集均通过苏州大学第一附属医院伦理审查委员会和苏州大学第二附属医院伦理审查委员会的批准，所有受试者均签署了知情同意书。
实施例2样品总RNA的提取
1.血清总RNA的提取
1)将临床收集的血液标本0.25ml，加入3倍体积TRIzol(0.75ml)，充分振荡混匀。
2)将匀浆样品在15-30℃放置5min。
3)离心10min(12000rpm，4℃)，取上清。
4)加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
5)离心15min(12000rpm，4℃)。把上层水相(约500μl)转移到新管中。
6)在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置30min。
7)离心10min(12000rpm，4℃)，去上清。离心后RNA在管侧和管底形成胶状沉淀。
8)加入1ml 75％乙醇洗涤沉淀。
9)离心3min(5000rpm，4℃)。倒出液体，剩余的少量液体短暂离心，然后用枪头吸出。
10)室温放置晾干，加入30μl无RNA酶的水，充分溶解。
11)紫外分光光度计检测测量所提取RNA的浓度和纯度。
12)电泳检测：琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，电泳结果显示总RNA均有清晰的28s和18s条带，RNA完好无降解，质量符合进一步反转录实验要求。
2.miRNA逆转录
使用天根公司FastQuant RT Kit快速反转录试剂盒合成第一链cDNA
1)将模板RNA在冰上解冻；5×gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10×Fast RTBuffer、无RNA水在室温解冻，解冻后迅速置于冰上。
2)按下表基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。
基因组DNA的去除体系
组成成分 使用量
5×gDNABuffer 2μl
TotalRNA 1μl
无RNA酶水 7μl
3)按下表反转录反应体系配制混合液。
反转录反应体系:
上表中反转录引物序列为：
CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCCCTGTG(SEQ ID NO:1)。
同时反转录U6，其反转录引物RT-U6序列为:CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT(SEQ IDNO:4)。
4)将反转录反应中的混合液，加到基因组去除步骤的反应液中，充分混匀。
5)42℃，孵育15min。
6)95℃，孵育3min之后放于冰上，得到cDNA。
实施例3荧光定量PCR检测胃印绒细胞癌组和对照组miRNA的表达
1)荧光定量PCR
试剂盒采用天根公司的FastFire qPCR PreMix(SYBR Green)。首先，融解FastFire qPCR PreMix，模板，引物和无RNA酶水，并将所有试剂在室温下溶解并彻底混匀。接下来配置荧光定量PCR体系。
荧光定量PCR体系
miRNA表达检测每个样品设置3个平行反应，以snRNA U6作为内参。
上表中正向引物序列为：ACACTCCAGCTGGGCGAGGGGTAGAAGAGCA(SEQ ID NO:2)。
上表中反向引物序列为：TGGTGTCGTGGAGTCG(SEQ ID NO:3)。
同时以U6作为内参，正向引物：GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT(SEQ ID NO:5)；反向引物：CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT(SEQ ID NO:6)。
荧光定量PCR程序：
引物的扩增曲线见图1。
2)统计学分析
采用GraphPad5.0软件进行分析。统计学分析方法组间采用t检验，p<0.05定为有统计学意义。分析胃印绒细胞癌与正常对照组之间外周血miRNA-6738-5p的表达水平，结果显示胃印绒细胞癌中miRNA-6738-5p的表达明显高于正常组织，具体见图2。
上述临床实验表明，通过检测miRNA-6738-5p的表达水平可以有效的检测胃印绒细胞癌。
序列表
<110> 苏州立豪生物科技有限公司
<120> 一种用于检测胃癌的试剂盒
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
ctcaactggt gtcgtggagt cggcaattca gttgagcccc tgtg 44
<210> 2
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
acactccagc tgggcgaggg gtagaagagc a 31
<210> 3
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 3
tggtgtcgtg gagtcg 16
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 4
cgcttcacga atttgcgtgt cat 23
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 5
gcttcggcag cacatatact aaaat 25
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 6
cgcttcacga atttgcgtgt cat 23

Claims (6)

1.一种用于检测胃癌的试剂盒，其特征在于：包含特异性检测miRNA-6738-5p的试剂。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂包括反转录引物、正向引物、反向引物，所述反转录引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述正向引物的序列如SEQ ID NO：2所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO：3所示。
3.如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述胃癌为胃印戒细胞癌。
4.一种检测胃印戒细胞癌的方法，其特征在于：使用权利要求1-2任一项所述的试剂盒。
5. miRNA-6738-5p在用于制备检测胃印戒细胞癌的试剂中的应用。
6. SEQ ID NO：1-3在用于制备检测胃印戒细胞癌的试剂盒中的用途。
CN201710884407.9A 2017-09-26 2017-09-26 一种用于检测胃癌的试剂盒 Pending CN107400732A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710884407.9A CN107400732A (zh) 2017-09-26 2017-09-26 一种用于检测胃癌的试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710884407.9A CN107400732A (zh) 2017-09-26 2017-09-26 一种用于检测胃癌的试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107400732A true CN107400732A (zh) 2017-11-28

Family

ID=60388466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710884407.9A Pending CN107400732A (zh) 2017-09-26 2017-09-26 一种用于检测胃癌的试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107400732A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2951390A1 (en) * 2014-06-18 2015-12-23 Toray Industries, Inc. Esophageal cancer detection kit or device, and detection method
CN106459963A (zh) * 2014-06-12 2017-02-22 东丽株式会社 前列腺癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CN106460068A (zh) * 2014-06-16 2017-02-22 东丽株式会社 胃癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CN106661619A (zh) * 2014-06-13 2017-05-10 东丽株式会社 大肠癌的检测试剂盒或装置以及检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106459963A (zh) * 2014-06-12 2017-02-22 东丽株式会社 前列腺癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CN106661619A (zh) * 2014-06-13 2017-05-10 东丽株式会社 大肠癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CN106460068A (zh) * 2014-06-16 2017-02-22 东丽株式会社 胃癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
CA2951390A1 (en) * 2014-06-18 2015-12-23 Toray Industries, Inc. Esophageal cancer detection kit or device, and detection method
CN106459964A (zh) * 2014-06-18 2017-02-22 东丽株式会社 食道癌的检测试剂盒或装置以及检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
姜叙诚等: "《消化系统》", 31 August 2010, 上海交通大学出版社 *
连海峰等: "miRNA-486-5p对胃癌细胞SGC7901中NRP2表达的影响", 《中国肿瘤生物治疗杂志》 *
陶银煜等: "胃癌相关microRNA的研究进展", 《实用临床医药杂志》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200131585A1 (en) Methods and materials for detecting colorectal cancer and adenoma
CN113286883A (zh) 使用rna分析以检测疾病的方法
BRPI0709397A2 (pt) propagação de células primárias
CN107847515A (zh) 实体瘤甲基化标志物及其用途
EP3828273A1 (en) Methylation modification-based tumor marker stamp-ep2
CN103866016A (zh) 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用
CN105154542A (zh) 一组用于肺癌分子分型的基因及其应用
CN109563544A (zh) 用于膀胱癌的尿监测的诊断测定
EP2966183A1 (en) Method for obtaining information on lung cancer, and use of marker and determination device for obtaining information on lung cancer
CN106811525A (zh) 一种预测ⅲ期胃癌患者术后早期复发的试剂盒和系统
CN113355415A (zh) 用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒
CN108624691A (zh) 一种用于判断前列腺疾病的标志物及其应用
EP2971178A1 (en) Bladder cancer detection and monitoring
CN106319062B (zh) 一种用于甲状腺癌辅助诊断或疗效预测的微创试剂盒
CN107523646A (zh) 基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法
CN107012232A (zh) 用于检测胃癌易感性相关的snp位点的引物及检测方法
WO2023226939A1 (zh) 用于检测结直肠癌淋巴结转移的甲基化生物标记物及其应用
CN110029165A (zh) 一种用于检测子宫内膜癌易感相关遗传标记的试剂盒
CN107400732A (zh) 一种用于检测胃癌的试剂盒
CN105567797A (zh) 检测DACT2基因启动子区CpG岛甲基化的PCR引物、方法和试剂盒
WO2014057279A1 (en) Micro-rna biomarkers for prostate cancer
CN107326092A (zh) 大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒
CN108998528B (zh) 肺癌诊断分子标记物lncRNA LINC00516和试剂盒及其应用
CN102732516B (zh) 一种多重巢式甲基化特异性pcr扩增引物及其使用方法与应用
CN102732637B (zh) 一种多重巢式甲基化特异性pcr检测试剂盒及其使用方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20171128

RJ01 Rejection of invention patent application after publication