CN107389625B - 荧光免疫层析测试数据处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种荧光免疫层析测试数据的处理方法，包括提供一免疫层析试纸条、一激发光源和一受激光读取装置，通过所述控制装置，控制光斑从而使得所述光斑沿所述层析试纸条的长度方向进行移动，将对应于有效光斑的各信号强度进行数据处理，从而获得免疫层析试纸的检测结果。本发明方法排除了质控线上引入的批次间样品损失量、批次间加样量差异、抗体标记过程中的部分干扰因素等，使得最终的数据结果具有合理的物理意义和更高的灵敏度。

Description

荧光免疫层析测试数据处理方法
技术领域
本发明属于检测领域，具体地说，本发明涉及一种荧光免疫层析测试数据优化处理方法。
背景技术
在色谱分析、原子吸收、核磁等领域，参照检测仪器的线性范围和灵敏度，选用峰高和峰面积都可以用作精准的定量方法。
现有荧光免疫层析测试数据处理技术中，样本数据的处理方式多采用TY、TA、TAP
Figure BDA0001121840880000011
进行比较计算，其中TY表示光斑与测试线相交的阴影部分面积反馈的最大信号值，即图2(d)中完整信号峰的峰高值，其包含了传统意义上部分峰面积的物理含义，单纯选用TY作为样品间性能比较的参数，难以区分样品间的差异。TA、CA分别表示现有谱图中测试线和质控线上的信号峰的积分面积，其物理意义是将图2中光斑与测试线、质控线相交的阴影部分面积反馈的信号进行积分加和，因此在TA和CA的计算中部分测试线和质控线上的局部荧光信号区会在光斑移动前后被重复计算多次(约20次)，因此将TA、TAP应用于比较样品间的性能差异，物理意义很不明确。
另外，在进行样品荧光层析测试时，由于荧光微球的添加量较少(约为0.3-0.4μL)，在加样时容易因为微球附着于枪头而产生批次间添加量的误差，或是在制备过程中样品批次间损失率不一致，使得最终添加的微球总量存在差异。虽然微球在测试时是过量的，当批次间添加量不同时，微球与测试线上的结合量基本一致，即测试线上的信号峰受该因素干扰相对较小，但与质控线上的结合量却存在较大的差异，即质控线上的信号峰受该因素的干扰相对较大。此时若将质控线上的信号峰数据引入结果中进行计算处理，就会使得批次间样品的差异变大，降低了数据的准确性和可比性。
在侧向流层析测试过程中，当荧光微球分散均一性不佳时，微球容易在层流过程中堆积在测试线或质控线的某一侧(图3b)，使得荧光测试仪输出的信号峰不是理想的高斯分布，对称性不佳(图3c，样本B)，因此单纯用样本A和样本B测试线或质控线上的某处信号值、输出信号峰的峰高值(TY、CY)或峰面积值(TA、CA)进行比较均不合适。同时，将抗体标记于微球上时，会由于抗体添加量少或是微球曲率较小而使得抗体的二级结构发生变化，抗体上的结晶片段(Fragment Crystalline，Fc)容易暴露，表现出对质控线的结合能力变强，CY(质控线上信号峰的峰高值)、CA变大；而当抗体添加量较多时，抗体在微球表面发生饱和偶联，抗体Fc端与质控线上抗体结合时的空间位阻变大，表现出对质控线的结合能力变弱，CY、CA变小。这些影响CY、CA数据的因素都会干扰TAP的结果。
荧光免疫层析测试仪产生荧光信号峰与其他色谱峰中峰高和峰面积的含义有所不同，其对应的峰高值(TY)隐含了少部分峰面积的物理含义，直接采用峰高和峰面积进行数据处理来表示样品的最高信号强度和总信号强度并不合适；另外现有仪器选用质控线进行定量计算，引入了质控线上的干扰因素，容易产生较大的批次间误差。
综上所述，本领域迫切需要研发出一种物理意义明确，并且能够直观反映样品最高信号强度和总信号强度的数据处理方式，同时排除质控线上伴随着的批次间样品损失量、批次间加样量差异、抗体标记过程中的部分干扰因素等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种荧光免疫层析测试数据处理方法及其应用。
本发明的第一方面，提供一种荧光免疫层析测试数据的处理方法，包括步骤：
(1)提供一免疫层析试纸条、一激发光源和一受激光读取装置，其中，
所述激发光源用于产生激发光，所述激发光被照射在所述层析试纸条上，从而形成光斑；
并且所述的激发光源配有控制装置，用于控制所述的免疫层析试纸条和所述激发光源的相对位置，从而使得所述光斑沿所述层析试纸条的长度方向进行移动；
其中，所述的免疫层析试纸条设有测试线，其中，所述试纸条长度为L0，宽度为W0，所述测试线长度为Lt；
(2)使所述激发光源产生激发光，照射在所述层析试纸条的近端上，从而形成光斑，并通过所述受激光读取装置读取光斑区域发出的受激光；
(3)通过所述控制装置控制光斑在试纸条上沿层析试纸条的近端至远端方向，从当前位置移动到下一位置，并读取下一位置处光斑区域发出的受激光，移动步长为St；
(4)重复步骤(3)Z-1次，Z为≥10的正整数，直至所述光斑扫过测试线；
(5)基于读取的受激光信号强度，确定出光斑照射到所述测试线的各个光斑，定义为有效光斑；
并按公式(i)计算对应于各有效光斑的相对信号强度Tt：
公式(i)中，
所述的信号值It为各有效光斑的受激光信号强度；
所述的阴影面积Ashadow为相应的各有效光斑与所述测试线的重叠区域的面积；
并按公式(ii)计算对应于各非有效光斑的相对信号强度Tblank：
Figure BDA0001121840880000032
公式(ii)中，
所述的信号值Iblank为各非有效光斑的受激光信号强度；
所述的光斑面积为相应的各非有效光斑的面积；
并按公式(iii)计算对应于各有效光斑的信号强度Tn：
信号强度Tn＝(Tt-Tblank)×H (iii)
式中，
所述相对信号强度Tt、Tblank如公式(i)、(ii)所定义；
所述移动步长St为步骤(3)中所定义；
所述H为不等于零的常数；
(6)将对应于各有效光斑的信号强度Tn进行数据处理，从而获得选自下组的一个或多个信号测量值：总信号强度Ttotal、平均信号强度Taverage、或其组合；
(7)任选地，将上一步骤获得的信号测量值与标准值或标准曲线进行比对，从而获得免疫层析试纸的检测结果。
在另一优选例中，所述的各次移动的移动步长是相等的或不等的。
在另一优选例中，所述的各次移动的移动步长是相等的。
在另一优选例中，所述受激光为荧光。
在另一优选例中，所述步骤(6)中，对数据进行处理的方法为积分处理。
在另一优选例中，所述H＝移动步长St×测试线宽度W0。
在另一优选例中，所述Z为≥36的正整数。
在另一优选例中，所述光斑形状为正x边形或圆形，其中4≤x≤10。
在另一优选例中，x为选自下组的正整数：4、6、8或10。
在另一优选例中，所述光斑形状为圆形，且所述光斑的半径为R。
在另一优选例中，所述步骤(1)中还包括：(1.1)测定光斑半径R的步骤。
在另一优选例中，所述步骤(1.1)包括：让所述光斑按相等的移动步长St0扫过免疫层析试纸条的整个长度，读取N个数据点的荧光值，并且按公式(iv)确定移动步长：
Figure BDA0001121840880000041
公式(iv)中，所述试纸条长度为L0，
根据N个数据点对信号峰微分，由测试峰拐点确定信号峰宽d0，按公式(v)计算光斑半径R，
2R+Lt＝d0×St0 (v)。
在另一优选例中，所述测试线长度Lt的范围为0.45-1.55mm，较佳地为0.50-1.50mm，更佳地为0.80-1.30mm，最佳地为0.95-1.05mm。
在另一优选例中，所述测试线宽度W0范围为1.5-5.0mm，较佳地为2.0-4.5mm，更佳地为2.5-4.0mm，最佳地为3.0-3.5mm。
在另一优选例中，所述试纸条的长度L0的范围为12.5-14.5mm，较佳地为13.0-14.0mm，更佳地为13.2-13.7mm。
在另一优选例中，所述光斑半径R≥0.5Lt。
在另一优选例中，所述光斑半径R的范围为0.225-0.995mm，较佳地为0.250-0.900mm，更佳地为0.400-0.800mm，最佳地为0.550-0.790mm。
在另一优选例中，所述数据点N的范围为100-500，较佳地为120-450，更佳地为150-400，最佳地为170-300。
在另一优选例中，所述步长St的范围为0.025-0.145mm，较佳地为0.030-0.113，更佳地为0.034-0.09mm，最佳地为0.045-0.079mm。
在另一优选例中，所述步长St与测试线宽度之比的范围为1:2-1:100，较佳地为1:4-1:80，更佳地为1:6-1:70。
在另一优选例中，所述光斑半径R、试纸条长度L0、测试线长度Lt满足以下条件：2R+Lt≥3St。
在另一优选例中，所述的阴影面积Ashadow按照如图7(a)所示公式确定。
在另一优选例中，所述的阴影面积Ashadow按照如图7(b)所示公式确定。
在另一优选例中，所述的阴影面积Ashadow按照如图7(c)所示公式确定。
在另一优选例中，所述的阴影面积Ashadow按照如图7(d)所示公式确定。
在另一优选例中，所述的阴影面积Ashadow按照如图7(e)所示公式确定。
应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了试纸条上测试线的荧光检测原理示意图。
图2显示了荧光测试仪检测原理示意图，(a)、(b)、(c)、(d)分别表示光斑在移动过程中与测试线相交时的信号反馈情况，横坐标表示光斑移动过程中采集的数据点，纵坐标表示各数据点处的信号强度。
图3显示了荧光微球不同结合情况的测试谱图，(a)样本A在测试线或质控线上的荧光微球分布情况；(b)样本B在测试线或质控线上的荧光微球分布情况；(c)样本A和样本B的测试线或质控线上反馈的信号峰强度。
图4显示了抗原添加量为0.5ng/mL时的信号峰。
图5显示了原始信号与阴影面积的关系，其中黑点线表示仪器反馈的信号峰，蓝点线表示阴影面积变化曲线。
图6显示了阴影部分相对信号强度分布情况。
图7显示了光斑与测试线相交时的阴影面积Ashadow计算公式。
图8显示了测试线横向跨度上的相对信号强度变化。
图9显示了分别采用SAA法(信号面积分析法，Signal Area Analysis Method)、TY法、TAP法处理校准品的结果，图9A为测试线上的信号峰呈对称高斯分布时的测试结果图；图9B为测试线上的信号峰呈不对称分布时的测试结果图；图9C为质控线平行实验差异较大时的测试结果图。
图10显示了分别采用SAA法、TY法、TAP法处理临床病人样本数据的结果，参考值和各处理值之间的相关性结果。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，首次意外地发现一种荧光免疫层析测试数据处理方法，不仅能够得到具有明确物理意义的样品信号强度结果，而且明显改善了免疫侧向层析平台中的相关性数值。在此基础上完成了本发明。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
免疫层析
图1、图2为本发明中荧光免疫层析测试仪产生荧光信号峰的原理示意图。由图1可以看出，不同数量的荧光微球与测试线上的抗体结合后，经过激发光源激发，反馈不同的信号强度，信号强度与荧光微球数量成正比，质控线上的测试原理与测试线类似。
图2显示了测试仪读取信号和反馈信号的原理，激光光斑扫到测试线上的荧光信号后，检测器以电压的形式反馈阴影部分的荧光信号，随着阴影面积的变化，形成对称的高斯峰，横坐标表示光斑移动的距离，纵坐标表示电压反馈的荧光信号。
数据处理方法
如本文所用，“本发明的数据处理方法”、“SAA法”、“信号面积分析法Signal AreaAnalysis Method”可以互换使用。
本发明的数据处理方法只选用测试线数据，无需选用质控线数据。
在另一优选例中，采用长度为13.5mm宽度为3.2mm的试纸条进行检测。
本发明的主要优点在于：
(1)本发明的数据处理方法将仪器输出结果转化为能够直观反映样品总信号强度物理意义的峰面积值；
(2)本发明的数据处理方法只需采用测试线数据，无需采用质控线数据，能够排除质控线上引入的批次间样品损失量、批次间加样量差异、抗体标记过程中的部分干扰因素等，使得最终的数据结果具有合理的物理意义，增强数据的可比性；
(3)本发明的数据处理方法尤其适用于侧向流层析测试过程中，荧光微球分散均一性不佳的情况，灵敏度更高。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是质量百分比和质量份数。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实施例1
1.1确定光斑尺寸
由于不同的仪器之间存在组装误差，映射光斑尺寸存在差异，故首先计算光斑尺寸。
荧光测试仪中机电设备控制光斑在长度为13.5mm宽度为3.2mm的试纸条上按相等的步长移动并读取180个数据点，移动步长St0即为0.075mm，数据点的信号数据如表1所示，所获得的两个信号峰如图4所示。
表1抗原添加量为0.5ng/mL时的信号峰数据表
Figure BDA0001121840880000081
Figure BDA0001121840880000091
根据表1中的数据点对信号峰作微分，找出测试峰、质控峰的拐点(即微分值＝0)，然后计算光斑半径。
测试线长度Lt约为1mm，光斑移动方式如图6(a)所示，按照如下公式(v)计算得到光斑半径R为0.775mm，
2R+Lt＝d0×St0 (v)
其中，信号峰宽d0由测试峰拐点位置确定。
如表2所示，CX表示质控峰峰高处对应的数据点；TX表示测试峰峰高处对应的数据点；CY表示质控峰峰高值；TY表示测试峰峰高值。
表2
信号峰峰高对应的X坐标 数据点值 信号峰峰高对应的Y坐标 峰高值
TX 40 TY 154.953
CX 123 CY 1371.842
1.2计算光斑与测试线接触时的阴影相交面积
根据有效光斑在移动过程中与测试线相交的阴影面积的变化规律，得到图7所示公式，计算得到的阴影面积Ashadow如表3所示。
表3光斑与测试线相交的阴影面积
Figure BDA0001121840880000092
Figure BDA0001121840880000101
如上述表1中的测试峰信号数据为例，第23个数据点-第57个数据点为完整测试线信号峰。因此，上述表3中，序号1对应第23个数据点处光斑与测试线相交时的阴影面积，序号18对应第40个数据点处光斑与测试线相交时的阴影面积。
原始信号(表1中的测试峰)与阴影面积的关系如图5所示，图中黑点线表示仪器反馈的信号峰，蓝点线表示阴影面积变化曲线，两条曲线变化规律类似，说明测试仪读取最大值时对应的光斑圆心位置是在测试线的中点处。
1.3计算测试线上相对信号强度变化
图6显示了测试峰相对信号强度变化规律，(a)表示光斑接触测试线时的移动状态，(b)横坐标表示光斑采集的数据点，纵坐标表示相对信号强度(即公式(i))，从图中可以看出在光斑刚开始接触和离开测试线时(即图(6b)中第一条和最后一条柱)，仪器反馈的相对信号强度Tt主要来自于空白试纸条的背景值。
Figure BDA0001121840880000102
图8显示了圆心在测试线区域内移动过程中的相对信号强度变化，以表示测试线横向跨度上的信号变化情况。可以看出，将测试线分为13等分时(测试线长度Lt＝1mm)的信号强度变化趋势。测试线横向跨度时的信号强度变化呈现对称性，最大信号强度发生在光斑圆心在测试线中点处，此时峰高表示样品的最高信号强度，峰面积表示样品的总信号强度。
1.4SAA法处理数据
设置测试线背景值(Iblank)为第TX-17数据点对应的信号值，测试线实验组对应的起始数据点为第TX-6数据点，结束点为第TX+6数据点，其中，测试峰峰宽起始点是第TX-17数据点，结束点是第TX+17数据点，该35个数据点根据正态分布定义已经包括了99％的有效信号。
选取第TX-6至TX+6数据点的信号值进行SAA法计算处理后得到的曲线积分面积即为总信号强度。
1.4.1校准品实验
(1)将校准品母液稀释成以下浓度待用：0、5、12.5、25、50、100pg/mL；
(2)在0.5mL离心管中加入0.4μL荧光微球(5mg/mL)后，加入90μL配好浓度的校准品；
(3)用移液枪反复吹打30s，取60μL混合液加入到试纸条上，反应900s后，将试纸条放置在荧光测试仪上读取结果；
(4)每个浓度平行测定三次，最终选用三次结果的平均值评估性能。
1.4.2临床实例样本实验
(1)取20μL医院临床血浆样本于0.5mL离心管中，加入60μL含0.4μL荧光微球(5mg/mL)的稀释液；
(2)用移液枪反复吹打30s，取60μL混合液加入到试纸条上，反应900s后，将试纸条放置在荧光测试仪上读取结果；
(3)最终考察测定结果与参考结果的相关性。
1.4.3SAA法计算
将试纸条放置于荧光测试仪上读取结果，得到一组原始信号值(n,I)，n为数据点，n∈[TX-6，TX+6]，I为每个数据点对应的原始信号值。
Ashadow表示有效光斑在第n数据点时与测试线重叠区域的阴影面积，TX-6处对应的阴影面积为表3中序号12的数据，即1.0209mm2，TX+6处对应的阴影面积为表3中序号24的数据，即1.0209mm2。
由数据点n处的原始信号值根据公式(iii)计算得到信号强度(Tn)：
Figure BDA0001121840880000111
测试线上的总信号强度(Ttotal)由各数据点处的信号强度Tn进行积分得到(公式vi)：
Figure BDA0001121840880000112
1.4.4SAA法处理校准品结果
图9显示了本实施例中的SAA法和TY法、TAP法在处理三组校准品时的结果：
如图9A所示，(a)显示了校准品浓度分别为12.5、25、50、100pg/mL时的测试线上的信号峰图；(b)显示了采用TY法对该系列校准品进行处理的结果；(c)显示了采用TAP法对该系列校准品进行处理的结果；(d)显示了采用SAA法对该系列校准品进行处理的结果。可以看出，当测试线上的信号峰呈对称高斯分布时，SAA法的处理效果(相关性R2＝0.994)优于TY法(R2＝0.941)和TAP(R2＝0.973)法。
如图9B所示，(a)显示了校准品浓度为5pg/mL时的测试线上的信号峰图；(b)显示了采用TY法对该系列校准品进行处理的结果；(c)显示了采用TAP法对该系列校准品进行处理的结果；(d)显示了采用SAA法对该系列校准品进行处理的结果。可以看出，当测试线上的信号峰呈不对称分布时，对TAP、TY法产生的干扰较大，而SAA法的处理效果(R2＝0.967)明显优于TY法的处理效果(R2＝0.955)和TAP(R2＝0.948)法的处理效果。
如图9C所示，(a)显示了校准品浓度为12.5pg/mL时质控线上的信号峰图；(b)显示了采用TY法对该系列校准品进行处理的结果；(c)显示了采用TAP法对该系列校准品进行处理的结果；(d)显示了采用SAA法对该系列校准品进行处理的结果。可以看出，当质控线平行实验结果差异较大时，SAA法的处理效果(R2＝0.988)明显优于TY法的处理效果(R2＝0.972)和TAP(R2＝0.958)法的处理效果。
1.4.5采用SAA法处理临床样本
采用SAA法处理临床样本数据的结果如表4所示(其中，参考值为医院提供的靶值，处理值为采用不同方法的处理结果)。
分别采用SAA法与TY法、TAP法处理临床样本数据，参考值和处理值之间的相关性结果如图10所示，可以看出，SAA法的相关性(R2＝0.984)明显优于TY法的相关性(R2＝0.923)和TAP法的相关性(R2＝0.952)，与医院提供的参考值更为接近。
表4不同方法处理临床样本数据
Figure BDA0001121840880000121
Figure BDA0001121840880000131
从上述结果可以看出，无论在校准品实验还是临床样本实验中，采用SAA法处理的数据结果相关性都优于TY法和TAP法，并且，SAA法只选用测试线数据而无需选用质控线数据进行计算，使得仪器输出的结果转化为能够直观反映样品总信号强度物理意义的峰面积，同时排除质控线上引入的批次间样品损失量、批次间加样量差异、抗体标记过程中的部分干扰因素，使得最终的数据结果具有合理的物理意义，增强数据间的可比性，更为灵敏准确。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种荧光免疫层析测试数据的处理方法，包括步骤：
(1)提供一免疫层析试纸条、一激发光源和一受激光读取装置，其中，
所述激发光源用于产生激发光，所述激发光被照射在所述层析试纸条上，从而形成光斑；
并且所述的激发光源配有控制装置，用于控制所述的免疫层析试纸条和所述激发光源的相对位置，从而使得所述光斑沿所述层析试纸条的长度方向进行移动；
其中，所述的免疫层析试纸条设有测试线，其中，所述试纸条长度为L0，宽度为W0，所述测试线长度为Lt；
(2)使所述激发光源产生激发光，照射在所述层析试纸条的近端上，从而形成光斑，并通过所述受激光读取装置读取光斑区域发出的受激光；
(3)通过所述控制装置控制光斑在试纸条上沿层析试纸条的近端至远端方向，从当前位置移动到下一位置，并读取下一位置处光斑区域发出的受激光，移动步长为St；
(4)重复步骤(3)Z-1次，Z为≥10的正整数，直至所述光斑扫过测试线；
(5)基于读取的受激光信号强度，确定出激发光照射到所述测试线的各个光斑，定义为有效光斑；
并按公式(i)计算对应于各有效光斑的相对信号强度Tt：
Figure FDA0002299578210000011
公式(i)中，
所述的信号值It为各有效光斑的受激光信号强度；
所述的阴影面积Ashadow为相应的各有效光斑与所述测试线的重叠区域的面积；
并按公式(ii)计算对应于各非有效光斑的相对信号强度Tblank：
Figure FDA0002299578210000012
公式(ii)中，
所述的信号值Iblank为各非有效光斑的受激光信号强度；
所述的光斑面积为相应的各非有效光斑的面积；
并按公式(iii)计算对应于各有效光斑的信号强度Tn：
信号强度Tn＝(Tt-Tblank)×H (iii)
式中，
所述相对信号强度Tt、Tblank如公式(i)、(ii)所定义；
所述移动步长St为步骤(3)中所定义；
所述H为不等于零的常数；
(6)将对应于各有效光斑的信号强度Tn进行数据处理，从而获得选自下组的一个或多个信号测量值：总信号强度Ttotal、平均信号强度Taverage；
(7)任选地，将上一步骤获得的信号测量值与标准值或标准曲线进行比对，从而获得免疫层析试纸的检测结果。
2.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，各次移动的移动步长是相等的或不等的。
3.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述受激光为荧光。
4.如权利要求1-3任一项所述的处理方法，其特征在于，所述光斑形状为正x边形或圆形，其中4≤x≤10。
5.如权利要求1-3任一项所述的处理方法，其特征在于，所述光斑形状为圆形，且所述光斑的半径为R。
6.如权利要求5所述的处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中还包括：(1.1)测定光斑半径R的步骤。
7.如权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述步骤(1.1)包括：让所述光斑按相等的移动步长St0扫过免疫层析试纸条的整个长度，读取N个数据点的荧光值，并且按公式(iv)确定移动步长：
Figure FDA0002299578210000021
公式(iv)中，所述试纸条长度为L0，
根据N个数据点对信号峰微分，由测试峰拐点确定信号峰宽d0，按公式(v)计算光斑半径R，
2R+Lt＝d0×St0 (v)。
8.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述试纸条具有选自下组的一个或多个特征：
(1)所述测试线长度Lt的范围为0.45-1.55mm；
(2)所述测试线宽度W0范围为1.5-5.0mm；和/或
(3)所述试纸条的长度L0的范围为12.5-14.5mm。
9.如权利要求5所述的处理方法，其特征在于，所述光斑半径R具有选自下组的一个或多个特征：
(1)R≥0.5Lt；
(2)所述光斑半径R的范围为0.225-0.995mm；和/或
(3)所述光斑半径R、试纸条长度L0、测试线长度Lt满足以下条件：2R+Lt≥3St。
10.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述步长St具有选自下组的一个或多个特征：
(1)所述步长St范围为0.025-0.145mm；和/或
(2)所述步长St与测试线宽度之比的范围为1:2-1:100。
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