CN107384822A - 一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及其应用 - Google Patents

一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及其应用，属于菌剂技术领域。所述的快速腐熟菌剂为包含阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种和皱褶青霉菌的液体菌剂。本发明的菌剂是具有协同作用的微生物，可在含氮量较低的纯秸秆物料堆肥中提高堆体升温效果，提高物料的分解效果，尤其是提高木质纤维素的降解率，以达到在更短的腐熟时间内完成物料的腐熟。快速腐熟菌剂的菌种易获得、复合菌剂易培养，并且所配套的快速腐熟方法操作简单，无需其他非秸秆添加物，避免了恶臭的产生和额外的花费，在较短的时间内即可完成物料的腐熟。

Description

一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及其应用
技术领域
本发明属于农业生物质废弃物快速腐熟菌剂技术领域，具体涉及一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及其应用，尤其适用于以含氮量较低的秸秆为主的堆肥。
背景技术
随着经济、科学技术的发展和人民生活水平的提高，各类农作物秸秆、废弃的瓜果蔬菜等种植业废弃物的数量日益增加，这些废弃物的有机成分含量高、可利用的剩余营养成分多，随意丢弃会造成大量的养分流失、资源浪费，并且可能成为有害菌、蚊虫滋生的温床，造成环境污染。快速腐熟，即堆肥化可以快速处理这类废弃物，将其转化有机肥，不仅含有对植物生长有利的氮磷钾养分，还含有大量可改善土壤肥力的腐殖质。
快速腐熟的关键是微生物对物料的降解。但是常见的几种农业作物秸秆如水稻秸秆、小麦秸秆等具有以下局限性：快速腐熟需要C/N在25-30为最适宜，但是上述秸秆含氮量过低，C/N一般在40-60，微生物难以快速生长、降解物料；多数农作物秸秆木质纤维素含量过高，以水稻秸秆为例，纤维素含量39-42％，半纤维素含量17-19，木质素含量16-17％，而木质纤维素类物质是大分子高聚合化合物，不仅各自降解困难，三者还相互穿插、紧密结合形成复杂的结构，进一步增加了降解难度，研究表明木质纤维素的降解是限制秸秆腐熟的关键因素之一。低氮、高纤维素等原因造成了低氮纯秸秆腐熟效率低、腐熟耗时长、纤维素降解率低等问题。
常规微生物菌剂对C/N的要求较敏感，在C/N过高的条件下腐熟效果变差，造成堆体升温慢、高温低、腐熟慢、纤维素降解率低等。因此目前缺乏一种在含氮量相对较低的条件下仍能高效降解秸秆中木质纤维素的微生物菌剂。
为了解决上述秸秆C/N过高的问题，常见的方法是向其中添加含氮量高的畜禽粪便、生活垃圾甚至尿素等，以利于功能菌剂加速腐熟速度和提高纤维素的降解。但是该方法存在明显缺陷：添加畜禽粪便、生活垃圾等物质会造成物料自身带有恶臭，影响堆体周边空气，因此对地点的选择要求高；添加尿素会增加了成本，使经济效益下降。低氮纯秸秆物料堆肥菌剂的研制以及使用合适的腐熟操作工艺可以解决这类高C/N秸秆快速腐熟的多种问题。
发明内容
本发明针对目前缺乏纯秸秆快速腐熟适用的微生物菌剂的问题，提供了一种针对低氮纯秸秆物料快速腐熟的微生物菌剂及其应用方法，使纯秸秆快速腐熟摆脱非秸秆物料的添加，并且腐熟耗时缩短，木质纤维素降解率更高。
为了实现上述发明目的，本发现的技术方案如下：
适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂为液体菌剂，其主要活性成分为：阴沟肠杆菌阴沟亚种(Enterobacter cloacae subsp.cloacae)、阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)和皱褶青霉菌(Penicillium rugulosum)。
3种菌种均可通过商业途径获得，例如美国菌种保藏中心(ATCC)或中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)等，或者从环境中自行分离。现有技术中基本没有见到对阴沟肠杆菌在纤维素降解上利用的报道。本发明利用了阴沟肠杆菌纤维素降解能力一般但是对氮素需求低，并且可与褶皱青霉菌发生协同效应加强纤维素降解的功能，研制的一种复合快速腐熟菌剂。
快速腐熟菌剂中，阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种、皱褶青霉菌的液体菌剂按照CFU比值(1～2)：(1～2)：(1～2)混合而成。
本发明的另一目的在于提供一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂制备方法，包括以下步骤：
首先，将阴沟肠杆菌阴沟亚种(Enterobacter cloacae subsp.cloacae)、阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)使用细菌CMC-Na培养基进行扩增培养，褶皱青霉菌(Penicillium rugulosum)使用真菌CMC-Na培养基进行扩增培养，培养条件均为恒温摇床中28-33℃，120-200rpm培养24-48h，获得种子菌液；
培养完成后，分别测量3种微生物的种子菌液CFU，以阴沟肠杆菌阴沟亚种：阴沟肠杆菌溶解亚种：皱褶青霉菌＝(1～2)：(1～2)：(1～2)的CFU比值将三种微生物的种子菌液接种于羧甲基纤维素钠低氮液体培养基中，于恒温摇床28-33℃，120-200rpm培养96-120h，即制得复合液体微生物菌剂。
特别的，所述的细菌CMC-Na培养基配方为：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)15.0g、(NH4)2HPO3 1.0g、酵母提取物(Yeast extract)1.0g、MgSO4·7H2O 0.5g、K2HPO4 1.0g和蒸馏水1000ml；
特别的，所述的真菌CMC-Na培养基为羧甲基纤维素钠真菌培养基，配方为：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)15.0g、(NH4)2SO4 4.5g、胰蛋白胨1.2g、MgSO4·7H2O 0.5g、KH2PO4 2.0g和蒸馏水1000ml；
特别的，所述的羧甲基纤维素钠低氮液体培养基配方为：羧甲基纤维素钠9-11g、胰蛋白胨0.4-0.6g、酵母提取物(Yeast extract)0.4-0.6g和蒸馏水1L。
特别的，所述的阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种、皱褶青霉菌的种子菌液接种量各为羧甲基纤维素钠低氮液体培养基体积的0.2％-0.5％。
本发明的另一目的在于提供一种适用于低氮纯秸秆物料的堆肥方法，适用于纯秸秆堆肥，特别的，适用于含氮量偏低的植物秸秆堆肥。该堆肥方法包括以下步骤：
以低氮作物秸秆作为主料，高氮作物秸秆作为辅料，按照主料：辅料的干重比(1～1.5):1进行物料混合，其中主料和辅料均预先粉碎至1-3cm长度；在物料混合过程中均匀添加前述制备方法制得的复合液体微生物菌剂，添加量为混合物料重量的0.5-0.75％；添加清水以调节物料含水率在55％-65％；混匀后的物料堆放于具有保温功能的箱体内，堆体高度约60-70cm，并配备鼓风机从底部和通风柱进行鼓风；腐熟过程中，在高温阶段(50℃以上)进行鼓风，在中温阶段(40-50℃)时少量鼓风；在腐熟阶段(40℃以下)可不进行鼓风，直至堆体温度与环境温度趋于一致时结束。
本发明使用纯秸秆物料作为堆肥原料，以含氮量较低的秸秆为主，含氮量高的秸秆为辅，混合物料的C/N不仅在25-30时可进行，当C/N在30-35时，尽管含氮量较低仍可进行快速腐熟，并大量分解物料中的木质纤维素，转变为更多的腐殖质。
与现有菌剂与快速腐熟技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明的微生物菌剂为针对低氮型木质纤维素类物料的快速腐熟菌剂，可加快物料的腐熟，在接种后在2-3天内可达到50℃以上高温，并且50℃以上高温可保持3-5天，最终结束腐熟仅需要25-30天，在较短的腐熟时间内木质纤维素仍有较高的降解率，物料中的大量木质纤维素转化为稳定的腐殖质。
(2)本发明的微生物菌剂为针对木质纤维素类物料的快速腐熟菌剂，尤其适合低氮型木质纤维素类物料，如水稻秸秆、油菜秸秆等，可在物料含氮量不高的情况下完成腐熟过程，对氮素的要求相较其他现有的快速腐熟菌剂要低，不仅在物料混合C/N为25-30时能高效进行快速腐熟，当C/N在30-35时仍能快速的进行快速腐熟。
(3)本发明的微生物菌剂的应用方法为适合低氮纯秸秆物料快速腐熟的操作方法，使用含氮量较高的其他秸秆物料调节C/N，避免的畜禽粪便、生活垃圾的恶臭以及购买尿素等的额外花费。
附图说明
图1添加菌剂与未添加菌剂的堆体温度变化图；
图2添加菌剂与未添加菌剂的堆体总氮含量变化图；
图3添加菌剂与未添加菌剂的堆体C/N变化图；
图4添加菌剂与未添加菌剂的堆体有机质降解率变化图；
图5添加菌剂与未添加菌剂的堆体纤维素含量变化图。
具体实施方法
为了进一步阐述本发明的技术方案所设计的方法和工艺，给出以下实施例。所述述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。所述实施例不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1、菌剂的制备
1.1实验材料和试剂
(1)培养基
1)羧甲基纤维素钠细菌培养基：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)15.0g；(NH4)2HPO31.0g；酵母提取物(Yeast extract)1.0g；MgSO4·7H2O 0.5g；K2HPO4 1.0g；琼脂18g，蒸馏水1000ml。
2)羧甲基纤维素钠真菌培养基：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)15.0g；(NH4)2SO4 4.5g；胰蛋白胨1.2g；MgSO4·7H2O 0.5g；KH2PO4 2.0g；琼脂18g，蒸馏水1000ml。
3)低氮羧甲基纤维素钠培养基：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10.0g，胰蛋白胨0.5g，酵母提取物(Yeast extract)0.5g，蒸馏水1000mL。
1.2.实验方法和结果
1.2.1各菌株种子液的培养
在无菌条件下，将两种阴沟肠杆菌分别接种在50ml装有羧甲基纤维素钠细菌培养基的锥形瓶中，将褶皱青霉菌接种在装有50ml羧甲基纤维素钠真菌培养基的锥形瓶中，将3个锥形瓶放置于30℃，150rpm的恒温摇床中培养48h即得到各菌株种子液。
1.2.2混合菌剂的制备
测量各种子液的菌浓度，阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种、皱褶青霉菌的CFU分别为5×1010、4×1010、5×109。各自使用无菌的相同培养基将各种子液稀释到相同的菌浓度5×109后，各取1ml稀释后的种子液加入500mL上述3)中制备的无菌低氮羧甲基纤维素钠培养基，于恒温摇床中30℃，150rpm培养4-5天，即得到混合菌剂。
实施例2、各菌种纤维素酶活实验
2.1材料与方法
2.1.1培养基配方：
1)种子培养基：种子培养基：蛋白胨10.0g，牛肉膏3-5g，NaCl 5.0g。
2)液体产酶培养基(C/N＝25)：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10.0g，蛋白脉(Peptone)1.0g,酵母提取物(Yeast extract)1.0g，蒸馏水1000mL。
3)液体产酶培养基(C/N＝35)：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10.0g，蛋白脉(Peptone)0.5g,酵母提取物(Yeast extract)0.5g，蒸馏水1000mL
2.1.2实验方法
1)菌液的制备
在50ml灭菌的塑料管中加入30ml灭菌的种子培养基，将3种菌株分别接种在不同的塑料管中，于30℃，150r/min培养2d。2d后将菌液摇匀，测量其OD600，用空白无菌种子培养基适当稀释使所有菌液OD600达到相同值0.8，记录稀释倍数后，另取未污染菌液按此稀释倍数稀释后制得菌液。
2)粗酶液制备
取2ml由1)中所制得的菌液加入装有50ml液体产酶培养基的150ml锥形瓶，于30℃，150r/min下培养5d。取培养好的培养基于5000r/min，离心分离5分钟，所得上清液即为酶粗酶液。
3)纤维素酶活检测
A.葡萄糖标准曲线绘制
取8支洗净烘干的 20mL具塞刻度试管，编号后分别加入 1mg/mL的葡萄糖标准溶液 0,0.2mL,.0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL,1.2mL,1.4mL,补加蒸馏水至总体积为 2mL，配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入 2mL DNS溶液，摇匀后沸水浴 5min，取出冷至室温后，用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。在 520nm波长下，以1号试管溶液作为空白对照，调零点，测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。以葡萄糖含量(mg)为横坐标，以对应的光密度值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，用于后续纤维素酶活力的计算。
B.酶活测定
取3支带有20mL刻度的试管，1支管作空白对照，2支管作平行样品管。每支样品管中加1mL粗酶液，置于50℃水浴锅中预热2min，然后在3支试管中分别加入4mL已预热至50℃的CMC-Na溶液，准确计时10min取出，每管立即分别加入1mL 2mol/L氢氧化钠溶液和2mLDNS显色液，摇匀后在对照管中再加入1mL粗酶液。将3支试管放入沸水浴中，5min后立即取出，流水冷却，用蒸馏水定容至20mL，于520nm处测OD值。
酶活力计算：从标准曲线中查出葡萄糖μg数；
酶活力U(μg/ml)＝葡萄糖量*1000/t*Ew
其中:
U为每1分钟转化生成1μg葡萄糖所需的酶量；
1000为mg和μg的转化倍数；
t为保温时间(酶与底物作用时间)，min；
Ew为粗酶液的体积(mL)；
2.2实验过程与结果
按照2.1.2的方法分别制作三种菌株的粗酶液(C/N25和35的各制作一组)，分别测量酶活。从表1中可以看出，对于相同C/N时，两种阴沟肠杆菌的混合菌液酶活均大于单菌液酶活，而加入皱褶青霉就后酶活进一步升高，表现出良好的协同效应。而比较不同C/N条件下的酶活发现，在C/N升高到35之后各组的酶活均有上升，表现出阴沟肠杆菌在高C/N，即低氮条件下更有利于提高纤维素降解能力，侧面表现出本发明菌剂组合对于纤维素类物料在低氮条件下具有良好的降解效果，更利于低氮物料的腐熟。
表1不同菌种及菌种组合在两种C/N条件下纤维素酶活
实施例3、复合菌剂快速腐熟实验
3.1材料与方法
3.1.1材料和方法
原料为风干水稻秸秆、风干废菌糠、新鲜蔬菜秸秆，将水稻秸秆粉碎至1-3cm长度，蔬菜秸秆切碎至5cm以下长度，按照水稻秸秆、废菌糠、新鲜蔬菜秸秆重量比1:1:1进行混合建堆。
在物料混合过程中均匀添加500mL制得的实施例1中的混合菌剂和清水，调节水分在55％-65％。混匀后的物料堆放于具有保温功能的箱体内，堆体高度约60-70cm，并在堆体中央插入通风柱，并配备鼓风机从底部和通风柱进行鼓风。同时用相同方法堆置一组不添加菌剂作为对照。每个堆体都用智能温度记录仪进行温度测量和记录，温度探头均位于堆体中央。
腐熟过程中，在高温阶段(50℃以上)时打开鼓风机进行鼓风，使温度下降0.5-1℃停止，每6-8小时鼓风一次；在中温阶段(40-50℃)时每12-24小时鼓风一次，使温度下降0.3-0.5℃停止；在腐熟阶段(40℃以下)可不进行鼓风，直至堆体温度与环境温度趋于一致时结束，总计27天。根据实际情况，分别在0、2、5、10、15、20、27天进行取样，每次取样后进行一次翻堆。
3.2快速腐熟效果检查与结果
3.2.1物料外观变化
快速腐熟是将物料大分子打破、分解、转化为其他物质的过程，因此物料的体积、颜色都会发生较大的变化。经过27天腐熟，物料颜色均从浅黄色的普通秸秆颜色转变为深棕黑色的土壤色，说明富含大量腐殖质；另外，堆体高度下降明显，已露出中央白色通气柱，物料的体积减少约40％，这是大量物质被分解消耗的结果，表明出本发明的菌剂、快速腐熟方法对物料的减量化作用十分明显。
3.2.2温度变化
温度变化是指示腐熟进程的最主要指标，好氧堆肥的高温必须要达到50℃以上5天才能达到杀灭有害菌、杂草种子的功能。温度变化如图1所示，添加菌剂的处理高温更高，可达到68℃，虽然第一次高温期持续时间较短，但是在13天附近出现二次升温，表明在13天时微生物仍能快速反应，进一步加快腐熟进程。而未添加菌剂的堆体高温较低，仅59℃并且50℃以上持续时间总计2天左右，未达到高温持续最低时长。
3.2.3总氮变化
N元素是组成蛋白质的重要元素，微生物生长过程中需要吸收氮用于合成自身组分；同时氮也是物料腐熟后作为肥料可供应给植物吸收的重要营养元素，如果物料中的氮素被微生物大量消耗，或是转化为氨氮后挥发到空气中会造成氮素的损失，影响最终肥料的肥效。从图2中可以看出，添加菌剂组的N含量更高，说明在微生物自身利用之外，更多氮素被保留在肥料中，所得肥料含氮量更高。表2中显示，经过腐熟后，添加菌剂组的总氮含量升高了84.8％，而未添加菌剂组总氮仅升高69.6％，相差15.2％，说明添加了本发明的菌剂后对物料中氮的保留更优，也说明菌剂更利于低氮物料的快速腐熟，降低对氮是消耗。
表2添加菌剂与未添加菌剂在腐熟前后总氮含量(干重百分比)对比
3.2.4 C/N变化
C/N不仅是影响腐熟开始阶段是否能快速启动、顺利进行的因素，同时也是指标腐熟进程的重要指标，起始的C/N最佳范围是25-30，在C/N下降到20以下后数值越低表明腐熟越完全。从图3中可以看到，添加菌剂组虽然在前10天对堆体C/N的下降相对较慢，但是随着时间进行，最终C/N更低，说明添加菌剂对物料的腐熟具有更好的腐熟效果。
3.2.5有机质含量变化
有机质是秸秆量物料中含量很高的一类物质，同时也是微生物生长过程中消耗的物质，有机质消耗越多，表明物料越多地被降解。从图4中可以看出，添加菌剂组的有机质在前期就有一个巨大的降解过程，说明菌剂中微生物十分活跃，能快速消耗有机质。从表3中可以看到，在总体有机质降解率上，添加菌剂后的降解率比未添加菌剂组高2.25％，说明添加菌剂可加速有机质的分解，并且能提高有机质的降解率，即添加菌剂后用更短的时间就可达到未添加菌剂的腐熟效果。
表3添加菌剂与未添加菌剂在腐熟前后有机质含量(干重百分比)对比
3.2.6纤维素含量变化
纤维素是纯秸秆中含量十分大的一类难降解物质，其在腐熟过程中的降解也是本研究的重点。从图5中可以看出，两个实验组在5天左右的纤维素含量不降反升，这是因为纤维素作为一种难降解的物质，在腐熟前期高温期时，微生物更倾向于消耗物料中的易降解有机质，导致纤维素含量的相对升高。随着腐熟进行，可以看到在5-15天时纤维素出现了明显的下降，虽然两个实验组的纤维素降解速率相似，但是在15-27天中，添加菌剂组中纤维素进一步下降。从表4中可以看到，添加菌剂组中纤维素含量相较起始下降了42.4％；而未添加菌剂组的纤维素含量仅下降了22.3％，因此添加了本发明的菌剂可使纤维素降解率大大提高。
表4添加菌剂与未添加菌剂的腐熟前后纤维素含量(干重百分比)对比
3.2.7腐殖酸含量变化
物料的腐熟过程就是有机物腐殖化的过程，其中腐殖酸含量在腐熟过程中逐渐升高，腐殖酸含量的多少也是评价腐熟效果、肥料质量的重要因素。从表5中可以看到，经过27天的腐熟后，添加菌剂组的腐殖酸碳含量升高了44.3％，而未添加菌剂组仅升高33.7％，相差10.6％，说明添加菌剂后对腐殖酸含量的提升作用明显，腐熟后的肥料含有更多的腐殖酸，施用后对土壤的改善作用更好。
表5添加菌剂与未添加菌剂在腐熟前后腐殖酸含量(干重百分比)对比
3.2.8种子发芽指数变化
种子发芽指数是指标物料是否腐熟完成的重要指标。一般认为，当种子发芽指数大于80％时，所得肥料可认为已经腐熟，当大于100％时，说明所得肥料不仅对种子无毒，还能促进种子萌发和幼苗生长。从表5中可以看到，两组实验的种子发芽指数均大于100％，说明物料对种子的毒害作用原本就很小。但是，添加菌剂组的种子发芽指数高于未添加菌剂，尤其是在20天时已经高于未添加菌剂组的27天数据，说明添加菌剂对于提升物料对幼苗的促进作用，并且缩短用时7天左右，表明添加菌剂可缩短物料腐熟用时。
表6添加菌剂与未添加菌剂的物料种子发芽指数
综上所述，使用本发明所提供的一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂及相应的快速腐熟方法，可增加有机质、纤维素的降解率，将有机物更多的转化为腐殖酸，相较不添加菌剂的堆肥，达到相同的降解、腐熟效果用时更短。

Claims (10)

1.一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂，其特征在于，所述快速腐熟菌剂活性成分为：阴沟肠杆菌阴沟亚种(Enterobacter cloacae subsp.cloacae)、阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)和皱褶青霉菌(Penicilliumrugulosum)。
2.如权利要求1所述的适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂，其特征在于阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种、皱褶青霉菌的CFU比值为(1～2)：(1～2)：(1～2)。
3.一种适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将阴沟肠杆菌阴沟亚种(Enterobacter cloacae subsp.cloacae)、阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)使用细菌CMC-Na培养基进行扩增培养，褶皱青霉菌(Penicillium rugulosum)使用真菌CMC-Na培养基进行扩增培养，培养条件均为恒温摇床中28-33℃，120-200rpm培养24-48h，获得种子菌液；
分别测量3种微生物的种子菌液CFU，以阴沟肠杆菌阴沟亚种：阴沟肠杆菌溶解亚种：皱褶青霉菌＝(1～2)：(1～2)：(1～2)的CFU比值将三种微生物的种子菌液接种于羧甲基纤维素钠低氮液体培养基中，于恒温摇床28-33℃，120-200rpm培养96-120h，即制得复合液体微生物菌剂。
4.根据权利要求3所述的适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂制备方法，其特征在于：
所述的细菌CMC-Na培养基配方为：羧甲基纤维素钠15.0g、(NH4)2HPO3 1.0g、酵母提取物1.0g、MgSO4·7H2O 0.5g、K2HPO4 1.0g和蒸馏水1000ml；
所述的真菌CMC-Na培养基为羧甲基纤维素钠真菌培养基，配方为：羧甲基纤维素钠15.0g、(NH4)2SO4 4.5g、胰蛋白胨1.2g、MgSO4·7H2O 0.5g、KH2PO4 2.0g和蒸馏水1000ml；
所述的羧甲基纤维素钠低氮液体培养基配方为：羧甲基纤维素钠9-11g、胰蛋白胨0.4-0.6g、酵母提取物0.4-0.6g和蒸馏水1L。
5.根据权利要求3所述的适用于低氮纯秸秆物料的快速腐熟菌剂制备方法，其特征在于，所述的阴沟肠杆菌阴沟亚种、阴沟肠杆菌溶解亚种、皱褶青霉菌的种子菌液接种量各为羧甲基纤维素钠低氮液体培养基体积的0.2％-0.5％。
6.一种适用于低氮纯秸秆物料的堆肥方法，其特征在于，包括以下步骤：
以低氮作物秸秆作为主料，高氮作物秸秆作为辅料，按照主料：辅料的干重比(1～1.5):1进行物料混合，其中主料和辅料均预先粉碎至1-3cm长度；在物料混合过程中均匀添加由权利要求3所述制备方法制得的复合液体微生物菌剂，添加量为混合物料重量的2.5-5％；添加清水以调节物料含水率在55％-65％；混匀后的物料堆放于具有保温功能的箱体内，堆体高度约60-70cm；腐熟过程中，在50℃以上的高温阶段进行鼓风，在40-50℃的中温阶段时少量鼓风；在40℃以下的腐熟阶段不鼓风，直至堆体温度与环境温度趋于一致时结束堆肥。
7.根据权利要求6所述的堆肥方法，其特征在于，所述的低氮作物秸秆包括水稻秸秆、小麦秸秆。
8.根据权利要求6所述的堆肥方法，其特征在于，所述的高氮作物秸秆包括蔬菜秸秆、废弃瓜果、废菌糠。
9.根据权利要求6所述的堆肥方法，其特征在于，混合物料的C/N为25-30。
10.根据权利要求6所述的堆肥方法，其特征在于，混合物料的C/N为30-35。
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