CN107383133A - 化合物rl‑5517的新晶型、制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体地说，涉及一种纯度高、收率高、晶型稳定的化合物RL‑5517的新晶型及其制备方法，以及在制备降低人体血糖的药物中的应用。本发明提供的化合物RL‑5517的新晶型，通过充分的药理学实验，证明其具有较低的毒性和降血糖药理作用。

Description

化合物RL-5517的新晶型、制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，涉及化合物RL-5517的新晶型、制备方法和应用。

背景技术

随着大众生活水平的普遍改善与提高、饮食文化的影响、食物结构的改变、生活节奏的加快以及人体应激状态的增加，全世界代谢类疾病的发病率也随之上升，且呈年轻化趋势，尤以高血糖为显著特征的糖尿病的发病率迅速上升。2010年，新英格兰杂志上发表了一篇关于中国最新糖尿病流行病学调查，结果：年龄大于20岁的中国人群中，糖尿病患病率和糖尿病前期人群率分别为9.7％和15.5％，据此推算中国目前约有九千多万成年人患有糖尿病，约有近1.5亿人处于糖尿病前期。国际糖尿病联合会(Intemational DiabetesFederation，IDF)就此发表声明，中国已经成为全球糖尿病患者最多的国家。因此，糖尿病的预防及治疗已经成为当今中国社会面临的一个重大课题。糖尿病是严重威胁人类健康的常见疾病，以高血糖为显著特征，它可以诱发心脏病、视网膜病、肾病及神经系统疾病等多种并发症，严重影响了糖尿病患者的生活质量且引起了病人的致死、致残等。目前，临床上常用的降糖药主要有胰岛素及其类似物、胰淀素类似物、磺酰脲类、格列奈类、双胍类、噻唑烷二酮类、葡萄糖苷酶抑制剂等，这些降糖药大多在控制血糖上取得了良好的治疗效果，但其各自又存在着不同的副作用，如耐受性、疗效低、肝肾毒性、容易发生低血糖反应等。因此疗效好且副作用小的降糖药的研发越来越受到重视。临床迫切需要开发出新的高效低毒的降血糖药物。

在无细菌感染的情况下使用抗菌药物属于抗生素滥用，这有可能导致耐药菌增加等严重后果。本研究将红霉素改造为结构更稳定的红霉素6,9-9,12-螺缩酮衍生物，经抑菌试验证实,改造后的化合物RL-5517几乎无抗菌活性。此项发明可为临床提供无抗菌活性的新结构类型的高效低毒的降血糖药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纯度高、收率高、晶型稳定的化合物RL-5517的新晶型，以及其制备方法和应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：化合物RL-5517的新晶型，所述的化合物RL-5517的化学结构如式I所示：

本发明提供了一种式I化合物的新晶型，所述的新晶型表征如下：

晶系：单斜晶系

空间群：C 2

晶胞尺寸：

α＝90°.

β＝106.132(7)°

γ＝90°

体积：

Z＝4。

图1为式I化合物的新晶型的空间结构示意图。

上述化合物I的制备方法如下：

a)取红霉素悬浮于蒸馏水中，加入盐酸溶解，室温下至完全反应，中和，乙酸乙酯萃取，二氯甲烷-正己烷重结晶得Erythromycin A 6,9-脱水-9,12-螺缩酮精品；

b)取Erythromycin A 6,9-脱水-9,12-螺缩酮加入至二氯甲烷中，加入碳酸钠、丙酰氯至二氯甲烷中，均匀搅拌，室温至完全反应；反应物过滤，用二氯甲烷洗涤，干燥，得粗品；

c)粗品以二氯甲烷-正己烷加热溶解，趁热过滤，放冷，析晶，得无色结晶，即得所述的式I化合物。

本发明提供了所述式I化合物的新晶型的制备方法，包括以下步骤：取式I化合物，加入二氯甲烷-正己烷混合液，回流至溶液澄清，室温下放置析晶，得到目标产物。

优选的，所述式I化合物的新晶型的制备方法包括以下步骤：取式I化合物，加入二氯甲烷-正己烷混合液中，回流1-10小时，澄清，放置1-30小时，慢慢析晶，得目标产物；所述的二氯甲烷-正己烷混合液与式I化合物比例为5～1000ml:1g。

优选的，所述二氯甲烷-正己烷混合液中二氯甲烷与正己烷的体积比为1：1～1：100。

优选的，所述的新晶型在粉末X-射线衍射图谱中的具有以约10.269±0.2°、12.718±0.2°、14.266±0.2°、15.194±0.2°、15.624±0.2°、16.271±0.2°、16.567±0.2°、17.94±0.2°、21.883±0.2°和23.066±0.2°的2θ角表示的相应峰。

本发明提供了所述式I化合物的新晶型的药学上可接受的盐，所述的盐为无机酸盐或有机酸盐，所述的无机酸盐为盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐或硝酸盐；所述的有机酸盐为乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐或草酸盐。

本发明还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有治疗有效量的式I化合物的新晶型或所述的药学上可接受的盐，以及余量的药学上可接受的载体。

本发明提供了式I化合物、式I化合物的新晶型或所述的药学上可接受的盐的制药用途，用于制备降低人体血糖的药物。

式I化合物的单晶的制备方法优选为：加入二氯甲烷-正己烷，回流，澄清，放置，慢慢析晶，得单晶。但是本领域技术人员有动机尝试使用丙酮、甲醇、乙醇、不同比例乙醇与水、不同比例甲醇与水、不同比例乙腈与水、不同比例丙酮与水等溶剂进行析晶。

药物组合物

本发明同时也涉及包含有式I化合物的药物组合物或药物制剂，它们可以被制成例如适于口服或注射的各种形式，以用于降低人体血糖。但不仅限于此。优选的药用制剂剂型可以是片剂、胶囊、微粒剂以及混悬剂。本发明所涉及的药物制剂配方中，除了式I化合物以外还包括药学上可接受的载体、赋型剂和/或稀释剂。代表性的例子包括(但并不限于)：

一种或多种填充剂，如微晶纤维素、乳糖、蔗糖、淀粉、改性淀粉、甘露糖、葡聚糖、碳酸钙、磷酸盐、硫酸盐；

一种或多种粘结剂，如乳糖、淀粉、改性淀粉、葡聚糖、微晶纤维素、蔗糖、聚醚多元醇、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸铝镁；

一种或多种崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基淀粉、淀粉、微晶纤维素等。

此外，如果有需要，药物组合物的配方中还可以包括表面活性剂和色素。

治疗有效量(即：可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量)的本发明的化合物与医学上可以接受的载体(用于治疗给药的载体，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性)可以组成药物制剂，这些药物制剂可以制备成口服制剂、注射剂、片剂、粉制剂、胶囊剂、分散片、缓释制剂等。

治疗有效量的本发明的组合物的用量介于0.001-500mg/kg体重/天之间，任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的有效量。所述的“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗。本领域技术人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象(如哺乳动物-人)的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素的影响，包括所用化合物或其前药的药效活性、给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。

式I化合物或其组合物可以通过口服、静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内等途径给药。固体载体如：淀粉、乳糖、磷酸二醇、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体如：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需要的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，如，调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。

适用于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物如细菌和真菌的污染和影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇、它们的适当混合物和植物油。

本发明的有益效果是，本发明提供的化合物RL-5517的新晶型、其制备方法和用途，通过充分的药理学实验，证明其具有较低的毒性和良好的降血糖药理作用。与此同时，RL-5517与红霉素等大环内酯类抗生素结构相近，作为临床常用的抗生素，红霉素用作治疗某种慢性疾病而长期服用会导致抗生素的滥用，而RL-5517则完全不具备抗菌活性，较大环内酯类抗生素使用更安全。

附图说明

图1为化合物RL-5517的新晶型分子结构图；

图2为化合物RL-5517的X-射线粉末衍射图；

具体实施方式

实施例1：化合物RL-5517的合成及结构确证

1.Erythromycin A 6,9-脱水-9,12-螺缩酮的制备

于三颈瓶中，加入红霉素A 17.5g(23.84mmol)悬浮于350mL蒸馏水中，室温，加入盐酸2.5ml，溶解，搅拌反应1h，碳酸钠溶液调pH为8～9，然后用乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，滤去硫酸镁残渣，蒸去有机层，得无色粗品，约15.36g，二氯甲烷-正己烷重结晶得纯品，11.1g，得率65.0％；

2.本发明式I化合物RL-5517的制备

称取Erythromycin A 6,9-9,12螺缩酮3.3g(4.61mmol)于100ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷30ml，溶解，加入碳酸钠0.49g(4.61mmol)、搅拌，加入丙酰氯0.85g(9.22mmol)室温搅拌反应3-5小时。过滤，固体再以二氯甲烷10ml洗涤，固体丢弃；滤液中加入石油醚适量，慢慢析出固体，过滤，固体再以20ml二氯甲烷-正己烷混合溶剂(二氯甲烷：正己烷的体积比为1：5)重结晶2次，得化合物RL-5517的新晶型2.5g，产率70.22％。

产物结构经质谱和核磁确认。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ5.18(d,J＝5.5Hz,1H),4.83(dd,J＝11.8,2.4Hz,1H),4.75(d,J＝4.6Hz,1H),4.65(dd,J＝10.5,7.7Hz,1H),4.29(d,J＝7.6Hz,1H),4.24(d,J＝9.4Hz,1H),4.04(dq,J＝12.8,6.3Hz,1H),3.83(dd,J＝5.8,1.8Hz,1H),3.53–3.47(m,1H),3.35(dd,J＝11.5,5.4Hz,1H),3.31(s,3H),3.28(d,J＝9.5Hz,1H),3.19(s,3H),2.90(ddd,J＝20.9,16.8,8.3Hz,2H),2.78(td,J＝11.8,4.3Hz,1H),2.66–2.60(m,1H),2.16(s,6H),2.13–2.01(m,2H),1.91–1.84(m,1H),1.74(d,J＝11.5Hz,1H),1.53–1.45(m,2H),1.38(dd,J＝12.9,6.4Hz,1H),1.32(s,3H),1.28–1.18(m,2H),1.16(s,3H),1.14(d,J＝6.1Hz,3H),1.11(d,J＝6.3Hz,6H),1.05(d,J＝7.5Hz,3H),1.03(d,J＝7.4Hz,3H),0.99(d,J＝7.3Hz,6H),0.94(d,J＝7.2Hz,3H),0.69(t,J＝7.4Hz,3H).

HRMS[M⁺H]832.15

¹³C NMR(151MHz,DMSO)δ177.31,172.34,114.83,101.91,96.03,85.46,83.94,81.40,81.01,80.70,77.79,76.41,72.80,70.67,68.31,64.47,62.16,48.68,48.40,47.15,45.09,41.53,40.68,40.24,40.05,34.32,30.23,30.09,27.07,24.98,23.30,20.96,20.65,17.47,15.15,11.96,11.63,11.29,10.86,8.97.

具体的氢谱和碳谱数据如表1所示：

表1

发明人还尝试了多种不同比例的二氯甲烷-正己烷混合溶剂用于RL-5517结晶，例如二氯甲烷：正己烷的体积比为1：1、1：2、1：10、1：100等等，均能得到相同的单晶。

3.RL-5517新晶型的稳定性实验

①实验方法

常温条件将RL-5517单晶放置在30℃条件下15天，分别于第5、10、15天取样测定粉末X-射线衍射光谱图，判断RL-5517单晶的稳定性。

②实验结果

在30℃条件下15天，RL-5517单晶稳定，外观保持不变，粉末X-射线衍射光谱图未发生明显变化。

实施例2化合物RL-5517新晶型X射线晶体衍射分析

化合物RL-5517的X射线晶体衍射分析由复旦大学分析测试中心完成并出具报告。

1.实验方法

293K温度下，在装备有石墨-单色化Mo Kα辐射()的BRUKER SMARTCCD衍射仪上收集制备的RL-5517单晶的晶体数据。使用整个数据集测定最终晶胞参数。

2.实验结果

RL-5517单晶的晶体数据见表2。本领域技术人员应知晓，坐标的轻微变化是可能的，并且被认为在本发明的公开范围之内。

表2RL-5517单晶的晶体数据

实施例3RL-5517单晶的粉末X-射线衍射

化合物RL-5517单晶的粉末X-射线衍射分析由复旦大学分析测试中心完成并出具报告。

1.实验方法

使用Bruker D8Advance X射线粉末衍射仪获得粉末X-射线衍射，辐射为Cu靶。

2.实验结果

图2所示为完整的X-射线粉末衍射图；表3中记载了完整的粉末X-射线衍射数据：

表3

实施例4RL-5517新晶型对Wistar大鼠Ⅱ型糖尿病模型治疗试验

1材料

1.1实验动物

SPF级Wistar大鼠，雌雄各半，体重200-250g左右，购自上海斯莱克动物科技公司。实验期间，保持动物房室温在22℃左右，相对湿度70％左右，早8点至晚8点自动照明。动物自由进食，自由饮水。所有实验动物的使用，符合相关的管理准则。所有的动物都得到了人性化的对待。

1.2主要试剂、受试化合物与仪器

1,1-二甲基双胍盐酸盐(韶远化学科技(上海)有限公司)，生理盐水(北京双鹤药业)，2-脱氧-2-[[(甲基亚硝基氨基)羰基]-氨基]-D-吡喃葡萄糖(STZ)(百灵威科技有限公司)，羧甲基纤维素钠(上海生工生物科技有限公司)，RL-5517自行设计并合成(本实施例中使用的RL-5517均为本发明提供的新晶型)，7600型日立全自动生化分析仪(株式会社日立高新技术)，OneTouchUltra血糖检测仪(强生公司)。

2.实验方法

2.1Wistar大鼠Ⅱ型糖尿病造模

Wistar大鼠70只，预饲养7天后用于试验。随机选取10只作为正常对照组，雌雄各半，喂予基础饲料，自由进食；其余60只大鼠喂以高糖高脂饲料(于基础饲料中加蔗糖10％、猪油10％、胆固醇5％)饲养4周，自由饮水。第4周后，喂高糖高脂饲料的大鼠注射2-脱氧-2-[[(甲基亚硝基氨基)羰基]-氨基]-D-吡喃葡萄糖(STZ)诱导糖尿病，注射前配成1％STZ溶液(现配现用)，按30mg·kg-1给予喂高糖高脂饲料大鼠。72h后，大鼠尾巴取血测定大鼠空腹血糖，血糖值大于或等于11.1mmol/L为造模成功，选取50只。

2.2动物分组情况

未给予高糖高脂饲料10只大鼠为正常对照组。对造模成功的大鼠随机分成5组，分别为模型对照组，阳性对照组，RL-5517低剂量组，RL-5517中剂量组，RL-5517高剂量组，均为造模成功动物，每组10只。

2.3动物给药情况

以上各组动物分别给药，正常对照组和模型对照组大鼠每天给予蒸馏水10ml·kg-1，阳性对照组每天给予盐酸二甲双胍200mg·kg^-1(配成溶液)，RL-5517低剂量组按每天37.5mg·kg^-1给予RL-5517溶液，RL-5517中剂量组按每天75mg·kg^-1给予RL-5517溶液，RL-5517高剂量组按每天150mg·kg^-1给予RL-5517溶液，给药体积10ml·kg^-1，每天上午9点30分给药一次，连续给药7天。

2.4动物给药期间饮食

给药期间正常对照组动物喂以普通饲料，其余各组继续喂以高糖高脂饲料。

3.观察与检测指标

3.1体重和摄食量变化

试验期间观察大鼠活动、毛色、饮食、粪便、死亡等情况。特别记录大鼠体重和摄食量变化情况，自给药开始后第五天上午9:00点左右给药前测定动物的空腹体重。同时测定大鼠的摄食量。

3.2急性降糖作用

给药第1天，于给药前随机测定各组大鼠血糖，给药2h后再次随机测定各组大鼠血糖，考察是否具有急性降血糖情况。

3.3RL-5517对糖尿病模型大鼠的降血糖作用

空白对照组及模型对照组灌胃给予同体积饮用水，阳性对照组，RL-5517低剂量组，RL-5517中剂量组，RL-5517高剂量组大鼠分别灌胃给予相应药液，每天给药1次，连续给药7天，于第7天给药后，大鼠尾尖采血以血糖仪测定大鼠空腹血糖含量。

4.试验结果

4.1试验期间大鼠体重变化情况

自开始给药后，模型对照组、阳性对照组、RL-5517低剂量组、RL-5517中剂量组和RL-5517高剂量组大鼠活动岀现少动，蜷卧等症状，毛色无光泽，尿量增多。上述症状模型对照组尤重，阳性对照组、RL-5517低剂量组、RL-5517中剂量组和RL-5517高剂量组其大鼠症状较模型对照组有明显改善，无死亡动物。

试验期间，第五天上午9:00点左右称量动物体重，给药期间各组动物体重变化无显著性差异。RL-5517中剂量组和RL-5517高剂量组大鼠体重增长缓慢，RL-5517低剂量组大鼠体重增长与模型对照组及阳性对照组相当，给药期间大鼠体重变化情况见表4。

表4试验期间大鼠体重记录(x±s.g)

组別	1周	2周	3周	4周	5周
						正常对照组	347.8±59.5	361.1±49.3	372.3±66.2	383.9±67.3	399.5±61.8
模型对照组	329.8±70.6	338.4±65.2	362.7±73.1	351.0±68.7	368.6±76.4
						阳性对照组	332.9±69.7	347.6±72.8	369.1±69.7	355.4±80.2	382.7±86.7
低剂量组	334.7±71.2	349.7±69.8	365.9±79.4	352.7±76.3	373.9±80.7
						中剂量组	335.1±63.7	348.1±70.1	359.1±67.8	348.5±67.3	362.8±69.9
高剂量组	329.9±64.5	343.9±66.3	344.8±70.2	348.7±61.7	359.1±60.5

4.2试验期间大鼠摄食量变化情况

试验期间，各组动物在不同时期内，摄食量无显著性差异，摄食量变化见表5。

表5试验期间大鼠摄食量记录(x±s，g/周/只)

4.3急性降糖作用试验结果

模型对照组药前随机血糖25.3±2.9mmol/L，药后2h血糖为25.3±3.0mmol/L；二甲双胍组药前随机血糖25.9±2.3mmol/L，药后2h血糖为24.1±2.7mmol/L；低剂量组药前随机血糖26.0±3.9mmol/L，药后2h血糖为24.3±2.8mmol/L；中剂量组药前随机血糖25.8±3.2mmol/L，药后2h血糖为23.9±3.0mmol/L；高剂量组药前随机血糖26.1±3.7mmol/L，药后2h血糖为24.2±3.1mmol/L。

给药前阳性对照组、RL-5517低、中、高各组与模型对照组比较未见显著性差异，药后各组血糖随给药剂量增加有一定的降低趋势，其中：二甲双胍组较药前降低1.8mmol/L、低剂量组较药前降低1.7mmol/L、中剂量组较药前降低1.9mmol/L、高剂量组较药前降低1.9mmol/L。这表明RL-5517有良好的降血糖作用，且与剂量相关。而且RL-5517急性降糖作用不明显，故不存在用药导致一过性血糖过度降低的危险。急性降糖作用血糖值结果见表6。

表6大鼠急性降糖作用血糖值(X±S，mmol/L)

组別	动物数(只)	给药前血糖值	给药后2h血糖值
				正常对照组	10	9.2±1.7*	9.2±1.7*
模型对照组	10	25.3±2.9	25.3±3.0
				阳性对照组	10	25.9±2.3	24.1±2.7
低剂量组	10	26.0±3.9	24.3±2.8
				中剂量组	10	25.8±3.2	23.9±3.0
高剂量组	10	26.1±3.7	24.2±3.1

4.4糖尿病模型大鼠血糖含量的影响

表7糖尿病模型大鼠血糖含量的影响(X±S，mmol/L)

组別	动物数(只)	给药前血糖值	给药后7天血糖值
				正常对照组	10	6.21±1.19	6.13±1.37
模型对照组	10	18.96±2.78	22.11±2.67
				阳性对照组	10	19.24±2.37	7.82±2.64
低剂量组	10	19.15±2.45	9.76±2.43
				中剂量组	10	19.78±2.51	8.44±2.76
高剂量组	10	19.49±2.17	7.56±2.16

糖尿病模型正常对照组大鼠给药前血糖值为(18.96±2.78)mmol/L，血糖水平明显高于正常对照组(6.21±1.19)mmol/L。经7天给药后，阳性对照组、RL-5517低剂量组、RL-5517中剂量组和RL-5517高剂量组的血糖含量明显降低，阳性对照组血糖值为(7.82±2.64)mmol/L，与模型对照组(22.11±2.67)mmol/L相比有显著差异，RL-5517低剂量组血糖值为(9.76±2.43)mmol/L，RL-5517中剂量组血糖值为(8.44±2.76)mmol/L，RL-5517高剂量组血糖值为(7.56±2.16±2.16)mmol/L，与模型对照组相比有显著差异。表明RL-5517新晶型具显著降血糖活性。

实施例5RL-5517新晶型对KM小鼠Ⅱ型糖尿病模型治疗试验

1材料

1.1实验动物

KM小鼠70只，雄性，体重18～22g，购自上海斯莱克动物科技公司。实验期间，保持动物房室温在22℃左右，相对湿度70％左右，早8点至晚8点自动照明。动物自由进食，自由饮水。所有实验动物的使用，符合相关的管理准则。所有的动物都得到了人性化的对待。

1.2主要试剂、受试化合物与仪器

1,1-二甲基双胍盐酸盐(韶远化学科技(上海)有限公司)，生理盐水(北京双鹤药业)，2-脱氧-2-[[(甲基亚硝基氨基)羰基]-氨基]-D-吡喃葡萄糖(STZ)(百灵威科技有限公司)，羧甲基纤维素钠(上海生工生物科技有限公司)，RL-5517自行设计并合成(本实施例中使用的RL-5517均为本发明提供的新晶型)，7600型日立全自动生化分析仪(株式会社日立高新技术)，OneTouchUltra血糖检测仪(强生公司)。

1.3KM小鼠Ⅱ型糖尿病模型制备

取KM小鼠70只，雄性，体重18～22g。随机选取10只小鼠作为正常对照组，喂以基础饲料，自由饮水，其余60只小鼠喂以高糖高脂饲料(含蔗糖10％、猪油10％、胆固醇5％)饲养4周，同时自由饮水。4周后，喂高糖高脂饲料小鼠腹腔注射150mg·kg-1体重的STZ溶液，分5次给予，并继续给予高糖高脂饲料1周后,测定各组小鼠空腹血糖，浓度≥11.1mmol/L者作为2型糖尿病小鼠模型。造模成功后，选取50只模型小鼠。

2.2动物分组情况

未给予高糖高脂饲料10只小鼠为正常对照组。对造模成功的小鼠随机分成5组，分别为模型对照组，阳性对照组，RL-5517低剂量组，RL-5517中剂量组，RL-5517高剂量组，均为造模成功动物，每组10只。

2.3给药

以上各组动物分别给药，正常对照组和模型对照组小鼠每天给予蒸馏水，阳性对照组每天给予盐酸二甲双胍200mg·kg^-1(配成溶液)，RL-5517低剂量组按每天37.5mg·kg^-1给予RL-5517溶液，RL-5517中剂量组按每天75mg·kg^-1给予RL-5517溶液，RL-5517高剂量组按每天150mg·kg^-1给予RL-5517溶液，给药体积10ml·kg^-1，每天上午9点30分给药一次，连续给药5天。

2.4血糖测定

分别在给药3d、5d后，禁食16～18h，小鼠尾静脉取血测血糖。

3实验结果

结果显示，阳性对照组、RL-5517低中高剂量组小鼠灌胃5d后，小鼠状态较好，从动物体重观察，给药5d后，各给药组和模型对照组小鼠的体重均在20.0～21.0g范围内。

给药5d后，小鼠血糖明显下降，RL-5517低剂量11.5±6.24mmol/L，RL-5517中剂量组10.67±4.65mmol/L，RL-5517高剂量组7.6±5.27，与模型对照组比较有显著差异。给药后小鼠血糖含量见表8。

表8糖尿病模型小鼠血糖含量的影响(X±S，mmol/L)

本试验结果表明RL-5517具显著降血糖活性。

实施例6：抑菌试验

本试验选择自行合成的红霉素A-6,9-9,12-螺缩酮衍生物(RL-5517)进行抑菌试验，测定其抑菌圈直径，探讨其抑菌活性。

一、试验材料

RL-5517自行合成；金黄色葡萄球菌(ATCC25923三代)、大肠埃希菌(ATCC25922三代)、肺炎链球菌(ATCC49619三代)；哥伦比亚血琼脂培养基；MH培养基；5％绵羊血MHA培养基；0.45％无菌盐水；无菌棉签；35℃孵育箱、35℃5-10％CO2孵育箱；电子比浊仪(法国生物梅里埃DensiCHEK Plus)。

二、试验分组与样品配制

试验分为阳性对照组(红霉素组，配制成20mg/L)；阴性对照组(2‰DMSO组)；RL-5517组(配制成40mg/L)。

三、试验方法

取实验菌株金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于血平板上，置35±2℃空气环境培养18-24h；肺炎链球菌接种在血平板上，置35±2℃5-10％CO2环境中孵育16-24h。

挑取纯培养的新鲜菌落配制成0.5Mcf浓度的菌液，用无菌棉签蘸取菌液，在试管壁上反复挤压几次，挤去多余的菌液，均匀涂布于MH、MHA(肺炎链球菌)平板上，每次旋转60°，重复涂板2次，最后绕平板边缘涂布两圈，使菌液均匀分布于整个平板上。

打孔，每孔内加入配制好的不同浓度的菌液50μl。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌置于35±2℃空气环境培养18-24h，肺炎链球菌置于35±2℃5-10％CO2环境中孵育16-24h后，用卡尺测量抑菌圈直径。

四、抑菌试验判定标准

参照《微生物和检验技术》判定结果，用抑菌圈的直径表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好，即抑菌圈直径(φ)≥20mm者为高度敏感；抑菌圈直径l6≤(φ)<20m m者为中度敏感；抑菌圈直径10≤(φ)<16mm者为低度敏感；抑菌圈直径(φ)<10mm者为耐药；抑菌圈直径为6mm，表示除药敏纸片6mm外无抑菌圈出现。

五、实验结果

红霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌有一定的抑菌作用(抑菌圈直径23mm)；RL-5517、2‰DMSO对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌及大肠埃希菌均无抑菌作用(抑菌圈直径均为6mm，表示除药敏纸片6mm外无抑菌圈出现)。

六、结论

化合物RL-5517对以上三种菌无抗菌活性。

实施例7RL-5517动物急性毒性试验

根据预实验，药物毒性较小，从3.0g/kg开始，依次递增到4.0g/kg、5.0g/kg，初步确定0％死亡剂量以及100％死亡剂量，确定半数致死量。

结果：给予单次灌胃给药，在3.0g/kg剂量无动物死亡(n＝10)；在4.0g/kg剂量无动物死亡(n＝10)；在5.0g/kg剂量无动物死亡(n＝10)。

结论：RL-5517为低毒性物质。

以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims (6)

1.化合物RL-5517的新晶型，所述的化合物RL-5517的化学结构如式I所示：

其特征在于，所述的新晶型表征如下：

晶系：单斜晶系

空间群：C 2

晶胞尺寸：

α＝90°.

β＝106.132(7)°

γ＝90°

体积：

Z＝4。

2.一种制备如权利要求1所述的化合物RL-5517新晶型的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取式I化合物，加入二氯甲烷-正己烷混合液，回流至溶液澄清，室温下放置析晶，得到目标产物。

3.如权利要求2所述的化合物RL-5517新晶型的制备方法，其特征在于，所述回流时间为1-10小时，放置析晶时间为1-30小时；所述的二氯甲烷-正己烷混合液与式I化合物比例为5-1000ml:1g。

4.如权利要求1所述的化合物RL-5517的新晶型，其特征在于所述化合物RL-5517新晶型的粉末X-射线衍射图谱中的具有以约10.269±0.2°、12.718±0.2°、14.266±0.2°、15.194±0.2°、15.624±0.2°、16.271±0.2°、16.567±0.2°、17.94±0.2°、21.883±0.2°和23.066±0.2°的2θ角表示的相应峰。

5.一种药物组合物，其特征在于包含如权利要求1或4所述的化合物RL-5517的新晶型或其药学上可接受的盐，以及余量的药学上可接受的载体。

6.如权利要求1或4所述的化合物RL-5517新晶型或其药学上可接受的盐的制药用途，用于制备降低人体血糖的药物。