CN107375939B - 用于治疗真菌感染的两性霉素b多肽类水凝胶载药体系 - Google Patents

用于治疗真菌感染的两性霉素b多肽类水凝胶载药体系 Download PDF

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Abstract

本发明属生物技术领域，具体涉及三种用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系。本发明使用极具临床应用潜力的多肽水凝胶，共价结合小分子疏水性抗菌药物两性霉素B，形成两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系。所制备的纳米载药体系具有高载药量、高生物相容性和高稳定性，同时具有缓控释药行为、多肽载体易于降解、临床毒副作用降低和明显的抗真菌作用。两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系可以以冻干粉的方式储存和使用，也可以用注射用水稀释以适于静脉注射，或者掺入其它辅料制成片剂、丸剂、粒剂或胶囊。两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系适用于抗真菌及真菌感染性疾病治疗领域，有着很好的应用前景。

Description

用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶载药体系
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及新型两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系。具体涉及三种用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系。
背景技术
两性霉素B是一类由结节性链丝菌产生的多烯大环内酯类抗生素，是临床上主要用于深部真菌感染的药物。两性霉素B能够特异性的结合真菌细胞膜上的麦角固醇，通过影响细胞膜通透性发挥抑制真菌生长的作用，临床上用于治疗严重的深部真菌引起的内脏或全身感染。虽然两性霉素B药效显著且目前并未发现其有较为明显的耐药性，然而其能引发较强的肾毒性，长久利用将对肾及循环系统造成损伤，临床症状为蛋白尿、低血钾、贫血等，因此导致两性霉素B在临床上的使用备受局限。口服或肌内注射两性霉素B生物利用率低，并且局部刺激性强，所以临床多使用两性霉素B注射剂，主要以脱氧胆酸钠作为增溶剂的注射剂。
长期以来，国内外的科研工作者都在努力探寻一种有效手段，试图减少两性霉素B的各种毒副作用。现今，科研人员主要从以下两个方面开展对两性霉素B的研究：(1)采用药物合成的手段，制备两性霉素B衍生物，研发出活性比较好而毒性较低的化合物；(2)采用剂型改造的手段，研发两性霉素B新剂型，此举能较大程度上改善药物的生物利用度，减小毒副作用。目前国外用于临床的两性霉素B剂型多样，经常使用的有注射剂和脂质剂型，此外滴眼剂、眼用膏剂、口服悬浮液、脂肪乳剂、漱口液等也应运而生，其中多种剂型已被纳入多国药典中，两性霉素B纳米载药体系是目前一大研究热点。
水凝胶是由糖类衍生物、碱基对或氨基酸小分子以非共价键自组装形成的聚集体，因为具有高生物相容性、低生物毒性、易于降解和体内便于清除等优点，可称作医学工程“无痕”骨架。同时，超分子结构的可塑性、长度可调性、纵横比例的可控性、高序列层级的自组装性均可根据生物体内膜环境与生物学表达信号的要求“量身定制”。而且，凝胶因子自组装形成的三维纳米结构与细胞外基质在同一数量级，可为细胞的迁移、生长和分化提供接近人体的环境。多肽自组装智能材料在特别的生理刺激下能够发生形态转变，这种“量身定制”的水凝胶引起组织工程、生物医学成像和药物转运载体材料等领域研究者的极大兴趣。由Celine和Artzner课题组合成的Lanreotide水凝胶，2003年被FDA批准用于肢端肥大症的临床治疗，在英国、美国和其他一些国家广泛使用，这使功能修饰的智能超分子水凝胶成为药物载体材料领域的研究热点，必将成为未来生物医用材料应用发展的重要方向之一。
以氨基酸为基础的多肽水凝胶具有高生物相容性、低生物毒性、易于降解和体内便于清除等优点，多肽智能水凝胶对外界环境中的温度、pH值、光、磁、电、酶等微小变化和刺激有异常敏感的反应。例如可注射温敏水凝胶药物在溶液状态下，药物可以被包埋其中；当将溶液型的水凝胶皮下注射后，在37℃体温作用下，溶液型凝胶转于注射原位转变成半固体的凝胶，通过其自身的降解和药物的扩散作用，达到药物的长效缓控释放。美国西北大学的Stupp课题组在多肽水凝胶的合成与仿生材料工程方面做了大量的开拓性工作。美国Brandeis大学Xu Bing课题组将万古霉素、紫杉醇和奥沙拉秦等药物与多肽衍生物结合构建超分子水凝胶载药体系，在增加药物的抗炎、抗肿瘤疗效方面取得大量的研究成果。这种功能化修饰的超分子多肽水凝胶智能材料已在药物传输、再生医学和组织工程等领域显示出巨大的应用潜力。
发明内容
本发明目的是针对目前临床应用的两性霉素B低生物相容性、生物利用度及临床毒副作用等问题，提供三种用于治疗真菌感染的两性霉素B(简称AmB)多肽类水凝胶纳米载药体系。
具体而言，本发明利用2-萘乙酸(简称Nap)、萘普生(简称Npx)和地塞米松(简称Dex)为N端的头基，采用多肽固相合成法分别合成Nap、Npx和Fmoc基团保护的苯丙氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-酪氨酸(Phe-Phe-Asp-Lys-Tyr，简称FFDKY)的多肽序列Nap-FFDKY、Npx-FFDKY和Fmoc-FFDKY作为AmB的基础载体，以酰胺共价键结合疏水性抗菌药物两性霉素B形成Nap-AmB、Npx-AmB和Fmoc-AmB化合物，其中，Fmoc-AmB化合物用20％的哌啶/N，N-二甲基甲酰胺(简称DMF)溶液脱掉保护基团Fmoc，利用丁二酸酐改造地塞米松的羟基，结合上述Fmoc-AmB化合物形成Dex-AmB化合物，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物在多种水溶液(如水、生理盐水、缓冲溶液、多种培养基等)中自组装成稳定的纳米纤维网状结构，形成具有缓控释药特性、生物相容性好、易于降解且明显抗真菌作用的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB三种多肽类水凝胶纳米载药体系。
本发明中，以多肽水凝胶为载药系统，能够明显提高所载的疏水性药物两性霉素B的生物相容性以及体内转运效率，同时降低药物的临床毒副作用。
本发明中，苯丙氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-酪氨酸多肽序列中的苯丙氨酸-苯丙氨酸二肽具有促进水凝胶自组装的作用，天冬氨酸-赖氨酸二肽作为最小的抗菌短肽辅助发挥抗菌作用。
本发明中，地塞米松可降低两性霉素B产生的细胞毒性，利用丁二酸酐改造地塞米松的羟基，降低空间位阻，便于连接Fmoc-AmB化合物形成Dex-AmB联合载药纳米体系。
本发明中，所述的疏水性药物选自疏水性的抗肿瘤药物、抗真菌药物或抗艾滋病药物，尤其是疏水性模型药物两性霉素B。
本发明通过以下技术方案构建两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其包括步骤：采用多肽固相合成法合成多肽序列Nap-FFDKY、Npx-FFDKY和Fmoc-FFDKY，在N，N-二甲基甲酰胺溶液(简称DMF)中以酰胺共价键结合两性霉素B形成Nap-AmB、Npx-AmB和Fmoc-AmB化合物，加入冰乙醚得淡黄色沉淀，冻干后得黄色或淡黄色粉末，丁二酸酐(简称SA)和地塞米松在吡啶溶液中反应过夜，加入水继续搅拌10分钟后过滤，得白色粉末Dex-SA化合物备用，Fmoc-AmB化合物用20％的哌啶/DMF溶液脱掉Fmoc-AmB化合物的保护基团Fmoc，在DMF溶液中结合上述Dex-SA化合物形成Dex-AmB化合物，加入冰乙醚得淡黄色沉淀，冻干后得黄色或淡黄色粉末，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物在多种水溶液(如水、生理盐水、缓冲溶液、多种培养基等)中可自组装成稳定的纳米纤维网状结构，即Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB三种多肽类水凝胶纳米载药体系。
本发明通过质谱与核磁共振技术对所制备的Nap-FFDKY、Npx-FFDKY、Fmoc-FFDKY、Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB等产物进行结构鉴定，结果表明上述化合物均合成成功。
本发明通过透射电镜和扫描电镜考察了Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系的微观状态，上述水凝胶均自组装为纳米纤维网状结构。
本发明通过圆二色谱考察了Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系的空间构象，上述水凝胶均属于turn-转角构象。
本发明通过X射线衍射考察了两性霉素B、地塞米松和Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系的晶型结构。两性霉素B和地塞米松属于晶型结构，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶均属于非晶型结构，因此，水凝胶纳米载药体系可以有效防止两性霉素B聚集，从而更好的发挥药效。
本发明考察了Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系的体外释放药物情况。两性霉素B水凝胶纳米载药体系按照一定的斜率释放药物，没有出现突释现象。水凝胶纳米载药体系以共价结合的方式高载药物两性霉素B，避免载药体系在血液循环过程中快速释放药物，从而降低了药物的毒副作用，延长了药物作用时间，达到长效抑菌的作用。
本发明通过液基稀释法测定了两性霉素B、地塞米松和Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶载药体系的MIC值与MBC值，考察了体外抗菌活性。其中，地塞米松不具有抗菌活性，两性霉素B的MIC值是0.00406mg/mL，MBC值是0.130mg/mL；Nap-AmB水凝胶的MIC值是0.0107mg/mL，MBC值是0.171mg/mL；Npx-AmB水凝胶的MIC值是0.0437mg/mL，MBC值是0.349mg/mL；Dex-AmB水凝胶的MIC值是0.0401mg/mL，MBC值是0.643mg/mL。两性霉素B的N，N-二甲基甲酰胺溶液在进行稀释时，部分两性霉素B可能形成聚集体，导致其有效浓度降低；而水凝胶纳米载体的水溶性高，耐稀释性较好，药物释放缓慢，不易聚集，因而有效浓度较高。此外，水凝胶纳米自组装体能够防止两性霉素B的多烯烃基团氧化，保持两性霉素B药物的抗菌活性。
附图说明
图1，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物结构示意图。
图2，Nap-AmB水凝胶图片。
图3，Npx-AmB水凝胶图片。
图4，Dex-AmB水凝胶图片。
图5，Nap-AmB水凝胶透射电镜图片。
图6，Npx-AmB水凝胶透射电镜图片。
图7，Dex-AmB水凝胶透射电镜图片。
图8，Nap-AmB水凝胶扫描电镜图片。
图9，Npx-AmB水凝胶扫描电镜图片。
图10，Dex-AmB水凝胶扫描电镜图片。
图11，Nap-AmB水凝胶中AmB药物释放曲线。
图12，Npx-AmB水凝胶中AmB药物释放曲线。
图13，Dex-AmB水凝胶中AmB药物释放曲线。
图14，Dex-AmB水凝胶中Dex药物释放曲线。
具体实施方式
实施例1.
称取约1.2g 2-氯三苯甲基氯树脂(1.0～1.2mmol/g)加入固相合成管中，分别加入15mL二氯甲烷(简称DCM)，溶胀20分钟后过滤，DCM洗涤2min×5次。按照表1用量向上述固相合成管中加入第一个氨基酸、15mL DCM和N，N-二异丙基乙胺(简称DIPEA)，摇摆2小时抽干，DCM洗涤2min×5次。加入DCM/甲醇/DIPEA(80∶15∶5)混合液10mL封闭树脂活化位点，摇摆15min×2次后抽干，N，N-二甲基甲酰胺(简称DMF)洗涤2min×5次。加入20％哌啶/DMF(V/V)溶液10mL摇摆5min抽干，加入该溶液10mL摇摆30min，DMF洗涤2min×5次。
加入第二个氨基酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯(简称HBTU)和1-羟基苯并三唑(简称HOBT)，用15mL DMF后溶解，加至上述固相合成管中，再加入DIPEA，摇摆3小时后脱保护。按照上述步骤依次连接所有氨基酸序列及化合物。分别用DCM和DMF洗涤2min×5次，加入99％三氟乙酸(简称TFA)搅拌2-3小时。过滤留取滤液，再用新鲜的三氟乙酸冲洗树脂2-3次，收集滤液旋蒸浓缩后，加入冰乙醚分散得固体，13000rpm离心10min除去乙醚，沉淀物加入适量重蒸水，冷冻干燥分别得Nap-FFDKY、Npx-FFDKY、Fmoc-FFDKY化合物纯品。
表1.多肽序列固相合成原料及用量。
表1
Figure GSB0000170160630000051
实施例2.
按照实施例1制备的Nap-FFDKY化合物，称取132.9mg Nap-FFDKY化合物和92.41mg两性霉素B完全溶于5ml DMF中，加入41.25μL DIPEA，避光搅拌过夜后，加入冰乙醚分散萃取，离心得固体，加入DMF溶解后HPLC纯化，纯化条件如下：色谱柱采用Phenomenex Luna C18(50×300mm，10μm)，流动相为甲醇∶水(55∶45，V/V)，检测波长280nm，流速为15ml/min。制备后合并组分，旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得Nap-AmB纯品，产率约为69.1％。
实施例3.
按照实施例1制备的Npx-FFDKY化合物，称取139.6mg Npx-FFDKY和92.41mg两性霉素B完全溶于5ml DMF中，加入41.25μL DIPEA，避光搅拌过夜后，加入冰乙醚分散萃取，离心得固体，加入DMF溶解后HPLC纯化，纯化条件如下：色谱柱采用Phenomenex Luna C18(50×300mm，10μm)，流动相为甲醇∶水(45∶55，V/V)，检测波长280nm，流速为15ml/min。制备后合并组分，旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得Npx-AmB纯品，产率约为53.5％。
实施例4.
称取196.1mg地塞米松和117.1mg丁二酸酐完全溶于5ml吡啶中，加入183.3mg 4-甲氨基吡啶，室温避光搅拌过夜后，旋蒸后加入10ml水，搅拌10min，离心，沉淀物再用水洗几次，得白色粉末，即为地塞米松-丁二酸酐偶联物，产率约为83.2％。
实施例5.
按照实施例1制备的Fmoc-FFDKY化合物，称取141.1mg Fmoc-FFDKY和92.41mg两性霉素B完全溶于5ml DMF中，加入41.25μL DIPEA，避光搅拌过夜后，加入冰乙醚分散萃取，离心得固体；加入20％哌啶/DMF(V/V)溶液反应2小时，加入冰乙醚分散萃取，离心得固体；加入上述合成的地塞米松-丁二酸酐偶联物，避光搅拌过夜后，加入冰乙醚分散萃取，离心得固体；加入DMF溶解后HPLC纯化，纯化条件如下：色谱柱采用Phenomenex Luna C18(50×300mm，10μm)，流动相为甲醇∶水(45∶55，V/V)，检测波长280nm，流速为15ml/min。制备后合并组分，旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得Dex-AmB纯品，产率约为40.2％。
实施例6.
按照实施例1-5制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物(图1所示)，称取2.0mgNap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物分别溶于0.15mL PBS溶液中，加入50μL Na2CO3溶液(0.1mol/L)中和多肽化合物中-COOH基团，室温放置10min后分别形成淡黄色透明状水凝胶，即Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系(1.0wt％)，如图2、3和4所示。
实施例7.
按照实施例1-5制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物，称取4.0mg Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物分别溶于0.15mL PBS溶液中，加入50μL Na2CO3溶液(0.1mol/L)中和多肽化合物中-COOH基团，室温放置10min后分别形成2.0wt％的淡黄色透明状Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系。
实施例8.
按照实施例1-5制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物，称取6.0mg Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物分别溶于0.15mL PBS溶液中，加入50μL Na2CO3溶液(0.1mol/L)中和多肽化合物中-COOH基团，室温放置10min后分别形成3.0wt％的淡黄色透明状Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系。
实施例9.
按照实施例1-5制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物，称取8.0mg Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物分别溶于0.15mL PBS溶液中，加入50μL Na2CO3溶液(0.1mol/L)中和多肽化合物中-COOH基团，室温放置10min后分别形成4.0wt％的淡黄色透明状Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系。
实施例10.
按照实施例6制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，分别用水稀释100倍，取10μL滴在铜网上，自然干燥后，采用透射电镜观察上述三种水凝胶的纳米微观形态，如图5、6和7所示。
实施例11.
按照实施例6制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，分别用水稀释100倍，取10μL滴在硅片上，自然干燥后，采用扫描电镜观察上述三种水凝胶的纳米微观形态，如图8、9和10所示。
实施例12.
按照实施例7-9制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，将不同浓度的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶(2.0、3.0和4.0wt％)置于瓶中成胶后放置过夜，缓慢加入0.3mL新鲜PBS缓冲溶液(pH7.4)于胶体表面。在37℃恒温下，每隔半个小时取出0.2mL上清液，同时加入0.2mL新鲜的PBS溶液，以上实验至少重复3次。
实施例13.
按照实施例12释放的药物进行高效液相含量测定，两性霉素B的色谱条件如下：色谱柱采用SepaxGP-C18(250×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈∶水(45∶55，V/V，0.05％三氟乙酸)，检测波长383nm，流速为1ml/min，进样量20μL。地塞米松的色谱条件如下：色谱柱采用SepaxGP-C18(250×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈∶水(55∶45，V/V，0.05％三氟乙酸)，检测波长240nm，流速为1ml/min，进样量20μL。最终获得AmB和Dex的药物释放曲线，如图11、12、13和14所示。
实施例14.
将低温保存的白色念珠菌28℃斜面活化培养48小时，用接种环刮取少量菌接种到沙氏液体培养基(50mL/锥形瓶×2)，28℃摇床培养32h后，用PBS调节菌液浓度，使其为1×104～9×104作为备用菌悬液。
实施例15.
按照实施例6制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，按照实施例14制备的菌悬液，分别取42支试管，每14支试管为一组，每组的第一支试管中加入1ml 2倍量的沙氏液体培养基，其余13支试管各加1ml沙氏液体培养基。然后在每组的第一支试管中加入1ml药液，用涡旋仪混匀后吸取1ml药液与培养基混合物于第二支试管，同样方法将药液梯度稀释完毕。每管药中接种菌悬液，接种量为103CFU/管(0.1ml原菌液)，于28℃培养箱培养48h观察结果，以未见浑浊现象的最低药物浓度即为该药物对细菌的最低抑菌浓度MIC。阳性对照组的药液用培养基代替，其他与试验组相同；阴性对照组的药液用培养基代替，不加菌悬液。
实施例16.
按照实施例6制备的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，按照实施例14制备的菌悬液，按照实施例15测定的MIC值，采用液体二倍稀释法测定出受试药物的MIC值，取肉眼观察无细菌生长管的培养液0.1ml转种于沙氏平板培养基，28℃继续培养48h，以活菌数少于5CFU/皿的药物最低浓度即为最低杀菌浓度MBC。

Claims (8)

1.用于治疗真菌感染的两性霉素B(简称AmB)多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，利用2-萘乙酸(简称Nap)、萘普生(简称Npx)和地塞米松(简称Dex)为N端的头基，采用多肽固相合成法分别合成Nap、Npx和Fmoc基团保护的苯丙氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-酪氨酸(Phe-Phe-Asp-Lys-Tyr，简称FFDKY)的Nap-FFDKY、Npx-FFDKY和Fmoc-FFDKY作为AmB的基础载体，以酰胺共价键结合疏水性抗菌药物AmB形成Nap-AmB、Npx-AmB和Fmoc-AmB化合物，其中，Fmoc-AmB化合物用20％的哌啶/N，N-二甲基甲酰胺(简称DMF)溶液脱掉保护基团Fmoc，利用丁二酸酐(简称SA)改造地塞米松的羟基，结合上述Fmoc-AmB化合物形成Dex-AmB化合物，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物在水或生理盐水或缓冲溶液中自组装成稳定的纳米纤维网状结构，形成具有缓控释药特性、生物相容性好、易于降解且抗真菌作用的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB三种多肽类水凝胶纳米载药体系；两性霉素B和地塞米松两种疏水性药物以1∶1比例共价结合在同一多肽载体FFDKY上，其中，利用丁二酸酐改造地塞米松的羟基后再结合在多肽序列上；
两性霉素B和2-萘乙酸两种疏水性药物以1∶1比例共价结合在同一多肽载体FFDKY上；
两性霉素B和萘普生两种疏水性药物以1∶1比例共价结合在同一多肽载体FFDKY上。
2.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，所述的Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物可在水或生理盐水或缓冲溶液中自组装成稳定的纳米纤维网状结构，即形成三种Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶，完全包合药物分子且药物分子分散性良好，水凝胶成胶的条件为室温至37℃条件下。
3.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，三种Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系均为tum-转角的空间构象。
4.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，三种Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系均为非晶形结构。
5.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系可以以冻干粉的方式储存和使用。
6.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系，其特征在于，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB水凝胶纳米载药体系可以用注射用水稀释以适于静脉注射，或者掺入其它辅料制成片剂、丸剂、粒剂或胶囊。
7.按权利要求1所述的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系在制备治疗抗真菌及真菌感染性疾病药物中的应用。
8.权利要求1的用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶纳米载药体系的制备方法，其特征在于，其包括步骤，采用多肽固相合成法合成多肽序列Nap-FFDKY、Npx-FFDKY和Fmoc-FFDKY，在DMF中以酰胺共价键结合两性霉素B形成Nap-AmB、Npx-AmB和Fmoc-AmB化合物，加入冰乙醚得淡黄色沉淀，冻干后得黄色或淡黄色粉末，丁二酸酐和地塞米松在吡啶溶液中反应过夜，加水搅拌后过滤得白色粉末Dex-SA化合物备用，Fmoc-AmB化合物用20％的哌啶/DMF溶液脱掉Fmoc-AmB化合物的保护基团Fmoc，在DMF溶液中结合上述Dex-SA化合物形成Dex-AmB化合物，加入冰乙醚得淡黄色沉淀，冻干后得黄色或淡黄色粉末，Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB化合物在水或生理盐水或缓冲溶液中可自组装成稳定的纳米纤维网状结构，即Nap-AmB、Npx-AmB和Dex-AmB三种多肽类水凝胶纳米载药体系。
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