CN107375242A - 一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法 - Google Patents

一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，加入TEOS和TESPTS到上述混合液中反应形成PMOs，在其表面修饰巯基得到PMOs‑SH；将所得的产物与阿霉素DOX混合得到PMOs‑DOX；制备LA‑PEI，并将其修饰到二硫化钼上得到MoS2‑LA‑PEI，将所得的产物与PMOs‑DOX混合并超声，再将产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA反应，即得产物PMOs‑DOX@MoS2‑PEI‑BSA‑FA。本发明方法简单，产物具有pH及光照双响应输送，具有较好生物相容性，具有应用于肿瘤靶向及协同治疗的前景。

Description

一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复 合物的制备方法
技术领域
本发明属于靶向纳米材料领域，特别涉及一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法。
背景技术
恶性肿瘤严重威胁人类健康和生命，近年来肿瘤的发病率和死亡率不断增加，肿瘤治疗已经成为当前医学研究领域所面临的一个重大挑战。目前，肿瘤的治疗手段主要以手术切除、放射性治疗以及化学药物治疗为主，某些肿瘤也利用基因、生物治疗等方法作为辅助治疗。化疗药物作为一种全身治疗的手段，可以有效的对抗肿瘤细胞的侵袭和转移，因此化疗在肿瘤的综合治疗中占主导地位。但是传统的化疗药物依然存在一定的局限性，例如水溶性差、缓解期短、排泄缓慢、明显的毒副作用和交叉耐药等缺点。因此这类化学药物的治疗效果仍有待改进。
纳米技术的出现为抗肿瘤药物设计提供了新思路。纳米技术融合多学科交叉协作，在肿瘤成像、肿瘤诊断和肿瘤靶向治疗等方面展现出了广阔的应用前景。纳米载药系统由于其易于表面靶向修饰、循环和滞留时间长、易渗透进入细胞、可实现缓释和控制释放等优势，可以克服现有小分子药物制剂所存在的生物选择性差、利用率低、稳定性差、药物作用时间短、不良反应严重等缺陷。
周期性介孔有机硅凭借其独有的特性，如规则的介孔孔道、比表面积和内孔容积大、孔径分布较窄而且可调、表面易修饰等，在催化、吸附、材料和药物载体等领域有着广泛的应用。目前，介孔硅材料的纳米响应载体的制备已经发展到一个新阶段，纳米载体中响应基团的引入使得纳米载体逐步实现智能化，从而实现包封物质的装载和可控释放。目前基于介孔二氧化硅响应的控释体系的研究对药物靶向输送和刺激响应控释相结合的研究中，加强靶向输送和刺激响应控释相结合，更好地将药物输送至靶向部位，实现刺激响应控释，提高治疗效果、减小毒副作用的相关研究逐步引起学者们广泛的关注。
此外，对于构建介孔硅靶向输送和刺激响应控释系统中另一个重要的因素是获得理想的封孔物质及封孔方法。过渡金属硫化物具有强的近红外吸收，其具有较高的光和热灵敏度、良好的生物相容性、大的比表面积和易于修饰等特点被用于构建药物载体及光热治疗。有研究表明二硫化钼纳米片在一定的条件下，可以成为一种很好的封孔剂封闭孔道，达到不占用介孔二氧化硅的孔道内部，从而不影响药物的加载与释放。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，该方法简单，反应条件温和，易于操作，具有产业化实施的前景，本发明得到的纳米颗粒具有较好的水分散性，及生物相容性，具有应用于肿瘤靶向及协同治疗的前景。
本发明的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：
(1)将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，在30-50℃下搅拌至溶解，加入正硅酸乙酯TEOS和双(三乙氧基硅基)-烷基多硫化物TESPTS到上述混合液中，继续搅拌1-4h，离心，取沉淀，提纯后得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs；
(2)将PMOs溶于乙醇中，加入(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50-80℃油浴中回流3-5h，离心收集得到巯基修饰的周期性介孔有机硅PMOs-SH；
(3)将上述所得的PMOs-SH分散在缓冲溶液中，加入含阿霉素DOX的缓冲溶液，混合后透析，冷冻干燥得到载药周期性介孔有机硅纳米载药体系PMOs-DOX，其中PMOs-SH、阿霉素DOX的质量比为1:0.5-3；
(4)将聚乙烯亚胺PEI溶解在水中，调节pH，得聚乙烯亚胺溶液，然后将α-硫辛酸溶解在乙腈中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI；将LA-PEI加入到二硫化钼分散液中，超声得到产物MoS2-LA-PEI；
(5)将步骤(4)所得的产物MoS2-LA-PEI与步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI；随后将所得产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA-FA混合，加入EDC和NHS，搅拌，离心后透析即得叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。
所述步骤(1)中溶剂为水/乙醇/氨水混合溶剂，水/乙醇/氨水的体积比为1:0.2-3：0.02-0.05，十六烷基三甲基溴化铵与溶剂的质量体积比为1g:10-40mL，TEOS和TESPTS的摩尔比为1:0.15-0.4，十六烷基三甲基溴化铵与TEOS质量体积比1g：0.2-0.6mL。
所述步骤(2)中PMOs、乙醇、MPTMS质量体积比为1mg：2-3mL：0.01-0.04mL。
所述步骤(3)中缓冲溶液为PBS溶液，pH为7.4，PMOs-SH分散在缓冲溶液中浓度为0.5-1mg/mL，含阿霉素DOX的缓冲溶液浓度为0.5-1mg/mL。
所述步骤(4)中聚乙烯亚胺PEI分子量为1.8KDa，聚乙烯亚胺PEI溶解在水中浓度为12.5mg/mL，调节pH为7.0-7.5，α-硫辛酸溶解在乙腈中浓度为4mg/mL，聚乙烯亚胺和α-硫辛酸的摩尔比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1：1，α-硫辛酸和EDC的质量比为0.4-2：1，二硫化钼水分散液浓度为0.3mg/mL，LA-PEI与二硫化钼分散液质量体积比为1mg：0.3-0.5mL，超声时间为30min-90min。
所述步骤(5)中MoS2-LA-PEI和PMOs-DOX体积比1：3-1，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和BSA-FA的质量比为3:1-1:3，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和EDC质量比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1:1。
所述步骤(5)中超声时间为2-10min，叶酸修饰的牛血清白蛋白中BSA分子量为66.43KDa。
所制备的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA用于肿瘤治疗的pH/光多重刺激响应型药物载体。
本发明的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合物进行药物释放实验的方法：
(1)配制pH值为7.4的DOX磷酸缓冲溶液及pH值为5.0的DOX醋酸盐缓冲溶液，于紫外分光光度计中检测最大吸收值，并拟合两种pH环境下的DOX标准曲线，DOX浓度为0.0025～0.08mg/mL；
(2)将0.5-5mg PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料溶于PBS缓冲溶液中，置于两个透析袋中，然后分别将透析袋放入10-15mL pH值为7.4的磷酸缓冲溶液、10-15mL pH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中振荡24h-72h，于不同时间点取样，并补充缓冲液，得到pH响应药物释放曲线。
(3)将0.5-5mg PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料分别溶于10-15mL pH值为7.4的磷酸缓冲溶液和10-15mL pH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中，置于透析袋中，然后分别用808nm,照射功率1.0-3.0W/cm2的激光照射1-5min，随后置于摇床中振荡24h-72h，于不同时间点取样，并补充缓冲液，得到光热响应药物释放曲线。
本发明的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物，周期性介孔有机硅的粒径为100-300nm，二硫化钼纳米片的厚度为1.6-3.0nm。
有益效果
(1)本发明的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料药物装载量高，能够长效缓释，且具有pH及光照双响应输送，在较低pH值环境下释放率高，适合肿瘤组织的微环境；且在较低功率的激光照射下产生过高热，具有肿瘤长效缓释的潜力；
(2)本发明的方法简单，反应条件温和，易于操作，具有产业化实施的前景；
(3)本发明得到的纳米颗粒具有较好的水分散性，及生物相容性，具有应用于肿瘤靶向及协同治疗的前景。
附图说明
图1a-f为实施例1中合成的PMOs-SH,PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA的TEM图谱及单层二硫化钼的原子力显微镜表征。
图2为实施例2中PMOs-SH,PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA的紫外(A)及红外图谱(B)。
图3为实施例3中合成各部分产物的Zeta电势变化。
图4为实施例3中合成的PMOs-SH,PMOs-DOX@MoS2及PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA的水动力学直径变化。
图5为阿霉素在pH＝7.4的PBS缓冲溶液和pH＝5.0的醋酸盐缓冲溶液下的标准曲线。
图6为实施例4中PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA在不同条件的体外释放行为图。
图7为实施例5中PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA在有无激光照射条件下的体外释放行为图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(1)将2.0g CTAB分散于20mL去离子水和50mL乙醇的混合溶剂中，加热到35℃，搅拌溶解。然后加入1mL氨水，搅拌1小时。接着加入1mL TEOS，0.25mL TESPTS，继续反应1小时后，于10000rpm离心分离，得到沉淀即为二氧化硅纳米粒子。用该沉淀于盐酸/甲醇的混合溶液中回流6小时，再离心分离，得到沉淀，重复以上回流操作三次，离心并冷冻干燥得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs。
(2)准确称量15mg PMOs分散在40mL乙醇中，加入0.15mL(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50℃油浴中回流5h后离心收集即得PMOs-SH。
(3)将10mg PMOs-SH，分散在10mL pH为7.4的PBS溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入5mL含DOX(5mg)的PBS溶液，在室温状态下搅拌4h。最后将含阿霉素DOX的PMOs溶液放入透析袋(MW＝8,000～14,000)中，用透析法将未连接上的阿霉素除去，用PBS缓冲液透析3次，每次2L。最后将产物冷冻干燥后获得PMOs-DOX。
(4)将0.5g聚乙烯亚胺溶解在40mL水中，调节pH至中性，将115mgα-硫辛酸溶解在30mL乙腈中，加入260mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC及160mg N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI。将30mg的LA-PEI加入到10mL二硫化钼的分散液(0.3mg/mL)中，超声30min得到MoS2-LA-PEI。
(5)10mL步骤(4)所得的产物与5mL步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声3min制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI，透析后分散于水中；随后将所得产物(50mg)与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA(20mg)混合，加入48mg的EDC和32mg的NHS，搅拌过夜，离心后透析即得PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。
图1为本实施例中合成的PMOs-SH(a，b),PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA(c,d)的TEM图及单层二硫化钼(e,f)的原子力显微镜图，从图1中可以看出单层二硫化钼的厚度在1.8-2.5nm之间，且很好地包裹在载药的周期性介孔有机硅(PMOs-DOX)上。
实施例2
(1)将2.0g CTAB分散于40mL去离子水和10mL乙醇的混合溶剂中，加热到45℃，搅拌溶解。然后加入1mL氨水，搅拌1小时。接着加入1mL TEOS，0.4mL TESPTS，继续反应1小时后，于10000rpm离心分离，得到沉淀即为二氧化硅纳米粒子。用该沉淀于盐酸/甲醇的混合溶液中回流6小时，再离心分离，得到沉淀，重复以上回流操作三次，离心并冷冻干燥得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs。
(2)准确称量15mg PMOs分散在40mL乙醇中，加入0.3mL(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50℃油浴中回流5h后离心收集即得PMOs-SH。
(3)将10mg PMOs-SH，分散在20mL pH为7.4的PBS溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入10mL含DOX(5mg)的PBS溶液，在室温状态下搅拌4h。最后将含阿霉素的PMOs溶液放入透析袋(MW＝8,000～14,000)中，用透析法将未连接上的阿霉素除去，用PBS缓冲液透析3次，每次2L。最后将产物冷冻干燥后获得PMOs-DOX。
(4)将0.5g聚乙烯亚胺溶解在40mL水中，调节pH至中性，将345mgα-硫辛酸溶解在乙腈(80mL)中，加入192mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC及115mg N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI。将30mg的LA-PEI加入到10mL二硫化钼的分散液(0.3mg/mL)中，超声60min得到MoS2-LA-PEI。
(5)10mL步骤(4)所得的产物与5mL步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声4min制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI，透析后分散于水中；随后将所得产物(40mg)与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA(20mg)混合，加入32mg的EDC和32mg的NHS，搅拌过夜，离心后透析即得PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。
图2为本实施例中PMOs-SH,PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA的紫外及红外图谱。从图2中可以看出，通过紫外与红外的表征证明BSA-FA已成功地结合到了二硫化钼包裹的PMOs-DOX上。
实施例3
(1)将4.0g CTAB分散于40mL去离子水和10mL乙醇的混合溶剂中，加热到55℃，搅拌溶解。然后加入2mL氨水，搅拌1小时。接着加入1mL TEOS，0.15mL TESPTS，继续反应1小时后，于10000rpm离心分离，得到沉淀即为二氧化硅纳米粒子。用该沉淀于盐酸/甲醇的混合溶液中回流6小时，再离心分离，得到沉淀，重复回流操作三次，离心并冷冻干燥得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs。
(2)准确称量15mg PMOs分散在40mL乙醇中，加入0.4mL(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50℃油浴中回流5h后离心收集即得PMOs-SH。
(3)将10mg PMOs-SH，分散在20mL pH为7.4的PBS溶液中，在搅拌的情况下，逐滴加入10mL含DOX(5mg)的PBS溶液，在室温状态下搅拌4h。最后将含阿霉素的PMOs溶液放入透析袋(MW＝8,000～14,000)中，用透析法将未连接上的阿霉素除去，用PBS缓冲液透析3次，每次2L。最后将产物冷冻干燥后获得PMOs-DOX。
(4)将0.5g聚乙烯亚胺溶解在40mL水中，调节pH至中性，将230mgα-硫辛酸溶解在乙腈(60mL)中，加入192mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC及115mg N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI。将30mg的LA-PEI加入到15mL二硫化钼的分散液(0.3mg/mL)中，超声90min得到MoS2-LA-PEI。
(5)10mL步骤(4)所得的产物与5mL步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声5min制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI，透析后分散于水中；随后将所得产物(15mg)与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA(8mg)混合，加入32mg的EDC和32mg的NHS，搅拌过夜，离心后透析即得PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。
图3为本实施例中合成各部分产物的Zeta电势变化。图4为本实施例中合成的PMOs-SH,PMOs-DOX@MoS2及PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA的水动力学直径变化。通过Zeta电位和DLS的检测可以证明材料已成功合成。
实施例4
PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药体系进行药物释放实验的方法：
(1)配制pH值为7.4的DOX磷酸缓冲溶液(0.0025～0.08mg/mL)及pH值为5.0的DOX醋酸盐缓冲溶液(0.0025～0.08mg/mL)，于紫外分光光度计中检测最大吸收值，并拟合两种pH环境下的DOX标准曲线，如图5所示；
(2)将5mg PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料分别溶于5mL磷酸盐缓冲溶液中，置于两个透析袋中，然后分别将透析袋置于pH值为5.0和pH值为7.4的缓冲溶液中振荡，于不同时间点取样，补充新鲜缓冲液，得到pH响应药物释放曲线。
(3)将5mg PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料分别溶于5mL pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液和5mL pH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中，置于透析袋中，然后分别用808nm,1W/cm2的激光照射5min，随后置于摇床中振荡，与不同的时间点取样检测，并补充缓冲液，得到光热响应药物释放曲线。
图6为本实施例PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA在两种pH环境下及有无激光照射条件下的释放曲线，从图6中可以看出不同pH下释放存在显著差异，且光热可显著提高药物的释放，肿瘤组织较正常组织细胞相比其pH要低，该载药材料的释放正好符合这一特性。表明该载药复合材料是一种可以用于肿瘤治疗的pH/光多重刺激响应型药物载体。
实施例5
PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药体系进行药物释放实验的方法：
将5mg PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料分别溶于5mL pH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中，置于透析袋中，然后其中一组用808nm，1W/cm2的激光照射5min，随后置于摇床中振荡，另一组则无激光照射，分别于不同的时间点取样检测，并补充缓冲液，得到光热响应药物释放曲线。
图7为本实施例中PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA在有无激光照射条件下的体外释曲线。从图7中可见在一定波长的激光照射下，温度升高可以促进药物的释放，表明该载药复合材料是一种光热响应的材料，可以用于肿瘤的光热治疗。

Claims (8)

1.一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：
(1)将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，在30-50℃下搅拌至溶解，加入正硅酸乙酯TEOS和双(三乙氧基硅基)-烷基多硫化物TESPTS到上述混合液中，继续搅拌1-4h，离心，取沉淀，提纯后得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs；
(2)将PMOs溶于乙醇中，加入(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50-80℃油浴中回流3-5h，离心收集得到巯基修饰的周期性介孔有机硅PMOs-SH；
(3)将上述所得的PMOs-SH分散在缓冲溶液中，加入含阿霉素DOX的缓冲溶液，混合后透析，冷冻干燥得到载药周期性介孔有机硅纳米载药体系PMOs-DOX，其中PMOs-SH、阿霉素DOX的质量比为1:0.5-3；
(4)将聚乙烯亚胺PEI溶解在水中，调节pH，得聚乙烯亚胺溶液，然后将α-硫辛酸溶解在乙腈中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI；将LA-PEI加入到二硫化钼分散液中，超声得到产物MoS2-LA-PEI；
(5)将步骤(4)所得的产物MoS2-LA-PEI与步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI；随后将所得产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA-FA混合，加入EDC和NHS，搅拌，离心后透析即得叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。
2.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中溶剂为水/乙醇/氨水混合溶剂，水/乙醇/氨水的体积比为1:0.2-3:0.02-0.05，十六烷基三甲基溴化铵与溶剂的质量体积比为1g:10-40mL，TEOS和TESPTS的摩尔比为1:0.15-0.4，十六烷基三甲基溴化铵与TEOS质量体积比1g:0.2-0.6mL。
3.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中PMOs、乙醇、MPTMS质量体积比为1mg：2-3mL：0.01-0.04mL。
4.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中缓冲溶液为PBS溶液，pH为7.4，PMOs-SH分散在缓冲溶液中浓度为0.5-1mg/mL，含阿霉素DOX的缓冲溶液的浓度为0.5-1mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中聚乙烯亚胺PEI分子量为1.8KDa，聚乙烯亚胺PEI溶解在水中浓度为12.5mg/mL，调节pH为7.0-7.5，α-硫辛酸溶解在乙腈中浓度为4mg/mL，聚乙烯亚胺和α-硫辛酸的摩尔比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1:1，α-硫辛酸和EDC的质量比为0.4-2:1，二硫化钼水分散液浓度为0.3mg/mL，LA-PEI与二硫化钼分散液质量体积比为1mg:0.3-0.5mL，超声时间为30min-90min。
6.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中MoS2-LA-PEI和PMOs-DOX体积比1:3-1，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和BSA-FA的质量比为3:1-1:3，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和EDC质量比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1:1。
7.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中超声时间为2-10min，叶酸修饰的牛血清白蛋白中BSA分子量为66.43KDa。
8.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所制备的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA用于肿瘤治疗的pH/光多重刺激响应型药物载体。
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