CN110118816A - 检测纳米载药系统在生物体内的生物分布的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及检测待测纳米载药系统在生物体内的生物分布的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成。该方法包括：将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述纳米载药系统预先进入所述生物体内；基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰在所述生物体内的出现位置，确定所述纳米载药系统在所述生物体内的生物分布；其中，所述载体为无机纳米载体，所述质谱成像检测的电离源为基质辅助激光解吸电离源。该检测方法无需标记，可以简便高效地获得纳米载药系统在生物体内循环过程中纳米载体和药物的生物分布情况，为生物体内同时追踪纳米载体和药物提供了可能，可信度高，有广阔的应用前景。

Description

检测纳米载药系统在生物体内的生物分布的方法
技术领域
本发明涉及生物医药质谱检测领域，具体地，本发明涉及检测待测纳米载药系统在生 物体内的生物分布的方法，更具体地，本发明涉及检测待测纳米载药系统在生物体内的生 物分布的方法，检测待测纳米载药系统载药量的方法以及检测待测纳米载药系统在生物体 内的原位药物释放量的方法。
背景技术
纳米技术的迅速发展使得纳米材料在生物医药领域得到广泛的应用，其中一个重要的 应用就是将纳米材料作为药物的载体。由于纳米材料作为药物载体时可以保护小分子药物 在血液循环过程中能够不被迅速清除；可以携带药物突破生理屏障；可以特定地在肿瘤组 织区域富集；并且还可以结合光热治疗来杀死更多的肿瘤细胞，因此开发高效、多用途的 有机/无机或杂化纳米颗粒以辅助癌症诊断和治疗成为目前研究的热点。要想开发一种新型 的纳米载体，首先需要研究清楚纳米载体在生物体内的分布和原位药物释放行为。
然而，目前缺乏理想的分析方法来研究纳米载体在生物体内的分布以及原位药物释放 情况。
发明内容
本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
药物释放的定量研究目前还存在很大的挑战，其中一个重要的原因就是，缺乏理想的 分析方法来同时跟踪药物和载体的信号。传统的技术，包括正电子发射断层扫描(PET)、 磁共振成像(MRI)和荧光成像(FI),要么遭受有限的空间分辨率、复杂的贴标过程的限 制，要么难以同时跟踪纳米载体和药物。发明人在实验中发现，无机纳米载体与药物所形 成的复合物在基质辅助激光解吸电离源的作用下，可产生特定的质谱指纹峰，并且药物与 载体的特征质谱指纹峰的强度比与质量比存在特定的线性关系。基于上述发现，发明人利 用无标记的激光解吸电离质谱成像技术(LDI MSI)，通过定量原位监测纳米载体和药物固有 的质谱峰信号强度比，实现了组织中药物原位释放的可视化和定量研究。该方法无需标记， 简便，高效，为生物体内同时追踪纳米载体和药物提供了可能。
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测待测纳米载药系统在生物体内的生物分 布的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成。根据本发明的实施例， 所述方法包括：将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述纳米载药系统预先进入所述 生物体内；基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰在所述生物体内的出现位置， 确定所述纳米载药系统在生物体内的生物分布；其中，所述载体为无机纳米载体，所述质 谱成像检测的电离源为基质辅助激光解吸电离源。发明人发现，一些纳米材料在激光解吸 电离源下可以产生和材料相关的特征质谱指纹峰，这些特征质谱指纹峰可以用来追踪纳米 材料在生物体内的分布，与此同时负载于纳米材料上的药物，在纳米材料辅助的情况下， 也可以产生和药物相关的特征质谱指纹峰，也就是说，纳米载药系统被注射到生物体内后， 纳米载体和药物在紫外激光轰击下会产生分别属于纳米载体和药物的特征质谱指纹峰，根 据这些特征质谱指纹峰，通过激光解吸电离质谱成像的方法，可以在生物体内同时追踪载 体和药物的生物分布情况。根据本发明实施例的方法无需经过喷涂基质，包埋、标记等复 杂的样品前处理过程；可以观察纳米载体在体内的清除时间；可以观察纳米载体在生物体 各个器官以及肿瘤组织中的分布情况，从而考察新设计的纳米载药系统是否可以实现将药 物运输到肿瘤位置。根据本发明实施例的方法，可以简便高效地获得待测纳米载药系统在 生物体内循环过程中纳米载体和药物的生物分布情况，可信度高，有广阔的应用前景。
根据本发明的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述无机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金 纳米载体，黑磷纳米载体的至少之一。需要说明的是，本发明可以适用于其他无机纳米材 料，而不局限于本发明所列举的具体材料。
根据本发明的实施例，所述质谱成像检测的质量分析器为飞行时间分析器，离子阱分 析器，扇形磁分析器，四级杆分析器或傅里叶变换分析器。
根据本发明的实施例，所述基质辅助激光解吸电离源的激光波长为355nm或337nm。 发明人发现，根据本发明实施例的纳米载药系统在355nm或337nm的紫外激光轰击下可以 产生特征的质谱指纹峰，从而可以根据指纹峰的信号来追踪纳米载药系统在生物体内的分 布。根据本发明实施例的方法可信度高，有广阔的应用前景。
根据本发明的实施例，所述质谱成像检测的条件包括：负离子模式，加速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv，透镜电压为7.000kv，频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200次，扫描空间分辨率为100微米，激 光光斑为25微米。发明人发现，根据本发明实施例的方法在该条件下可信度高。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种检测待测纳米载药系统在生物体内的生物分 布的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成。根据本发明的实施例， 所述方法包括：将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述纳米载药系统预先进入所述 生物体内；基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰在所述生物体内的出现位置， 确定所述纳米载药系统在生物体内的生物分布；其中，所述载体为无机纳米载体，所述无 机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金纳米载体，黑磷纳米载体的至少之 一，所述质谱成像检测的电离源为基质辅助激光解吸电离源，所述基质辅助激光解吸电离 源的激光波长为355nm或337nm，所述质谱成像检测的质量分析器为飞行时间分析器，离 子阱分析器，扇形磁分析器，四级杆分析器或傅里叶变换分析器，所述质谱成像检测的条 件包括：负离子模式，加速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv，透镜电压为7.000kv，频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200 次，扫描空间分辨率为100微米，激光光斑为25微米。根据本发明实施例的方法，可以简 便高效地获得待测纳米载药系统在生物体内循环过程中纳米载体和药物的生物分布，可信 度高，有广阔的应用前景。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种检测待测纳米载药系统的载药量的方法，所 述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成。根据本发明的实施例，所述方法包 括：将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述质谱成像检测如上述任一项所限定的； 基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，确定所述纳米载药系统的载药 量；其中，所述载体为无机纳米载体，所述强度比与质量比存在预定线性关系，所述强度 比为所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，所述质量比为所负载的药物与 所述载体的质量比。发明人发现，药物和纳米载体的特征质谱指纹峰的强度比与药物和纳 米载体的质量比有特定的线性关系，在此前提下，根据质谱成像检测结果，统计获得质谱 指纹峰强度比，并依据得到的线性关系，获得药物与载体的质量比，从而定量地得到载体 上剩余药物的量。根据本发明实施例的方法，可以简便高效地获得待测纳米载药系统的实 时载药量。
根据本发明的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，上述方法可以应用于检测待测纳米载药系统在生物体内的载药 量。根据质谱成像检测结果，统计获得生物体各个组织(如肝，脾，肺等)的质谱指纹峰强度比，并依据得到的线性关系，获得药物与载体的质量比，从而定量地得到载体上剩余药物的量。需要说明的是，这种线性关系在不同的组织匀浆中无显著差异。根据本发明实施例的方法，可以简便高效地获得待测纳米载药系统在生物体内的实时载药量，可以考察新设计的纳米载药系统的载体和药物在生物体各组织以及肿瘤位置的积累情况，可信度高， 有广阔的应用前景。
根据本发明的实施例，所述预定线性关系是通过如下方式获得的：将已知质量比的纳 米载药系统进行所述质谱成像检测，以便获得所述已知质量比的纳米载药系统的强度比； 以所述已知质量比的纳米载药系统的质量比为横坐标、强度比为纵坐标，绘制强度比-质量 比标准曲线，以便获得所述预定线性关系。需要说明的是，这种线性关系的建立是通过将 不同载药量的纳米载体稀释到组织匀浆中，各个载药量的匀浆进行冷冻切片，然后进行质 谱成像，所得药物质谱指纹峰的信号与载体质谱指纹峰的信号的比值对药物与载体质量比 做线性拟合，最终得到所述线性关系，这种线性关系不受各个组织生理条件的影响。发明 人发现，这种线性关系并不是显而易见的，首先，其他电离方法根本没办法对生物体内的 载体和药物进行原位质谱成像；其次，目前还无法检测到有机纳米载体的信号。
根据本发明的实施例，所述预定线性关系为y＝5.57x+0.07，其中，y表示所负载的药物 与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，x表示所负载的药物与所述载体的质量比。
根据本发明的实施例，所述无机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金 纳米载体，黑磷纳米载体的至少之一。需要说明的是，本发明可以适用于其他无机纳米材 料，而不局限于本发明所列举的具体材料。
在本发明的第四方面，本发明提出了一种检测待测纳米载药系统在生物体内的原位药 物释放量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：按照上述任一项所述的方法检测 待测所述纳米载药系统在生物体内的载药量；所述载药量与初始载药量之差，为所述纳米 载药系统在生物体内的原位药物释放量。发明人发现，纳米载药系统在生物体内循环过程 中，部分药物从载体上释放，导致实时检测获得的药物与载体的质量比与初始质量比相比， 会有所减少，减少的量即为药物在生物体各个组织中的释放量。需要说明的是，初始注射 到生物体的纳米载药系统中药物与纳米载体的质量比是已知的，也就是说，初始质量比是 一定的。根据本发明实施例的方法，可以简便高效地获得待测纳米载药系统在生物体内的 原位药物释放情况，可以考察新设计的纳米载药系统的抗癌药物在生物体各个组织以及肿 瘤中的释放情况，可信度高，有广阔的应用前景。
附图说明
图1是根据本发明实施的实验过程的基本流程示意图；
图2是根据本发明实施例的硫化钼纳米材料经尾静脉注射到正常小鼠体内，24小时后 取出脾组织，通过LDI MSI质谱成像，得到的硫化钼纳米片在脾组织中的亚器官分布示意 图，
其中，a)是脾组织的光学照片示意图，
b)是硫化钼纳米片在脾组织中的质谱成像亚器官分布示意图，
c)是b)的局部放大示意图，
d)是在脾组织白质上所获得的有代表性的质谱示意图，
e)是在脾组织红质上所获得的有代表性的质谱示意图；
图3是根据本发明实施例的将硫化钼纳米材料经尾静脉注射到H22皮下肿瘤模型小鼠 体内，通过LDIMSI质谱成像，得到在小鼠各个组织包括肺、脾、肝、肾、心、脑以及H22肿瘤中的分布示意图；
图4是根据本发明实施例的将负载药物的硫化钼纳米材料经小鼠尾静脉注射到皮下 H22肿瘤小鼠体内，通过LDIMSI质谱成像，得到在小鼠各个组织包括肺、脾、肝、肾、 心、脑以及H22肿瘤中的分布示意图，
其中，a)是硫化钼纳米载药系统经尾静脉注射到小鼠体内24小时后质谱成像示意图，
b)是质谱成像过程中在脾中的一张代表性的质谱示意图，
c)是由a)及d)的外标曲线得到的药物与载体在各个组织中的质量比值的柱状统计示 意图，
d)是在肝组织匀浆中做出外标定量曲线示意图；以及
图5是根据本发明实施例的硫化钼纳米材料经不同的体内循环时间后，在各个器官中 的定量结果示意图，
其中，a)是硫化钼纳米片稀释到脾组织匀浆中得到的脾组织的外标曲线示意图，
b)是经过不同的时间点后，硫化钼在不同器官中剩余量的统计结果柱状示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图 描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，使用本发明LDI MSI技术，纳米载药系统在体内的药物释放可以被定 量的检测到，这部分技术的关键点在于，负载于纳米载体上的药物与纳米载体的质谱指纹 峰的强度(IDOX/IMoS2)和药物与纳米载体的质量比值(drug/carrier ratio)呈线性关系，也 就是说，药物与载体的指纹峰强度的比值可以定量的反应负载于材料上的药物的量。并且 这种线性关系在不同的组织匀浆基底中无显著差异。这样的结果表明，通过在匀浆中加入 药物与纳米载体梯度比值的载药材料，可以做出一条药物与纳米载体的质谱指纹峰强度比 值对药物与纳米载体的质量比值的外标曲线(参考图4d))，这样通过质谱成像，统计各个 组织中的药物与纳米载体的质谱指纹峰强度比值，就可以得到药物与载体的比值，而这些 比值与原始通过尾静脉注射进去的载药材料进行比较，比值的减小就可以定量地反应药物 释放的量(参考图4c))。
本发明LDI MSI技术通过对组织匀浆做纳米材料不同浓度稀释的组织匀浆切片，可以 定量地测定不同注射时间后小鼠各个组织中纳米材料积累的量。
需要说明的是，根据本发明的一些实施例，所述生物体是动物，如牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等，典型地动物是哺乳动物，根据本发明另外一些 实施例，所述生物体是人类。
实施例1
本发明新型无标记的激光解吸/电离质谱成像技术(LDI MSI)用于研究纳米载体原位药 物释放的实验流程图，参考图1。
本发明的实验流程的具体实施过程如下：
(1)用丁基锂化学剥离的方法合成单层的硫化钼片层，并将其进行PEG修饰，以增加硫化钼纳米片的水溶性和生物兼容性，接下来通过阿霉素和硫化钼纳米材料之间的π–π堆积相互作用，使得阿霉素药物负载于硫化钼片层上。并通过紫外光谱的方法，测得药物与硫化钼的质量比值。
(2)将载药的纳米材料通过尾静脉注射到小鼠体内，根据具体实验组的安排，每组分 配三只小鼠作为平行实验。每只小鼠所注射的载药材料的量以硫化钼纳米材料的量为准， 即每只小鼠5mg/kg硫化钼纳米材料。
(3)根据实验的时间点需要，在指定的时间点后将注射了载药材料的小鼠处死，并快 速取出小鼠的各个组织，包括肺、心、肝、肾、脾、脑，如果是肿瘤模型的小鼠，同时取 出肿瘤组织。
(4)将取出的肿瘤组织进行液氮速冻，然后将各个组织放于-20℃冰箱中，等待进行 下一步实验(这一步的目的是使得组织在-20℃的条件下，慢慢进行回温，以防在下一步进 行组织切片时切片裂开)。
(5)将冰箱中储存的组织取出，进行冷冻切片，每个组织的切片厚度为:10微米。将切片的组织贴至ITO(氧化铟锡)玻璃表面，(即具有氧化铟锡层的玻璃表面，其中，组织 切片贴在氧化铟锡层的表面)并干燥，以便进行下一步的质谱成像实验。
(6)将含有组织切片的ITO玻璃放入质谱仪中，完成质谱成像分析。根据本发明的实 施例，质谱仪为基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪，采用负离子模式，质谱法检测条 件为：负离子模式，加速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv， 透镜电压为7.000kv，频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200次，扫描空 间分辨率为100微米，激光光斑为25微米，成像数据采用Bruker DaltonicsFlexImaging 4.0 软件来处理质谱成像数据。
实施例2
采用本发明LDI MSI技术对硫化钼纳米片在脾组织中的亚器官分布进行成像分析。按 照实施例1中所述的具体过程，24h后取出正常小鼠的脾组织，可以得到硫化钼纳米片在 脾组织中的亚器官分布，参考图2。如图2b)和2c)，对比图2a)的光学图片，可以看出，硫 化钼纳米材料在脾的红质和白质中存在很明显的区别，在红质的分布明显多于白质，而在 两个区域的分界线区域分布最多。图2d)和2e)，分别展示了脾组织的白质和红质中的两张 具有代表性的质谱图。
实施例3
硫化钼纳米材料在H22皮下肿瘤模型小鼠体内各个组织中的分布。
本实例需要构造H22皮下肿瘤模型，具体步骤为：将1×107个H22肿瘤细胞分散于200μL PBS溶液中，然后将其注射在昆明小鼠的腋窝皮下，经过大约7天的生长，皮下会 长出体积大约为250mm3的实体瘤。此时将硫化钼的纳米材料经尾静脉注射到上述肿瘤模 型中。24小时后，取出各个组织，进行LDI质谱成像，参考图3，可以看到在皮下肿瘤模 型中，硫化钼纳米材料主要积累于肺、肝、脾中，在肾、心、脑及H22肿瘤中分布较少。
实施例4
LDI MSI技术用于研究载药硫化钼纳米材料在肿瘤小鼠体内的分布以及定量地研究小 鼠体内抗癌药物的原位释放。
本实例的实施，需要构造一条药物与纳米载体的质谱指纹峰强度比值对药物与纳米载 体的质量比值的外标定量曲线。该外标定量曲线的构建具体步骤为：
1)合成梯度载药量的纳米材料，即梯度药物与纳米材料质量比值的纳米材料，将其加 入到肝组织匀浆中，保证纳米材料的质量浓度在肝匀浆中保持一致。
2)将不同药物与纳米材料质量比值的肝匀浆分别放入开口的注射器中，然后将匀浆速 冻成圆柱状的固体。
3)在冷冻切片机中将圆柱状的匀浆切片，每组质量比值切出三片进行平行实验，然后 将匀浆切片放入质谱进行成像分析。
4)成像结束后，用Bruker Daltonics FlexImaging 4.0软件来统计出，药物与材料的质 谱峰比值，最后将其对药物与材料质量比值作图，方可得到上述的外标定量曲线，参考图 4d)。
由于该定量曲线不受各个组织基底不同的影响，可以用于研究不同组织中的药物与材 料的质量比。通过与原始的药物与材料比值的对比，用药物的减少来定量的反应药物的释 放。
定量曲线建立后，按照实施例2中的步骤，进行质谱成像，得到如图4a)所示的质谱图，然后对数据进行分析。具体分析的步骤为：在成像图中，各个组织中随机选取大小为200个像素点的三个区域，统计药物与材料的质谱峰比值，通过上述外标定量曲线，得到 药物与材料在各个组织中的质量比值，可以得到如图4c)所示的柱状统计图。每个组织都 与原始的药物与材料质量比值进行比较，可以看到药物定量的释放，在肝组织中释放最少，在肿瘤组织释放最多。图4b)为一张在脾中的代表性的质谱图。
实施例5
LDI MSI技术用于研究硫化钼纳米材料经不同的体内循环时间后，在各个器官中的定 量。
该实施例具体实施步骤如下：
1、建立各器官的外标校准曲线。
取正常小鼠脏器称重，制备组织匀浆液。称重的器官被转移到离心管中。为更好的裂 解组织细胞，1％的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液作为裂解液，加入到上述称重的组织中(每 mg组织加入3μL裂解液)。然后放入组织匀浆机中进行匀浆，匀浆后，裂解液在70℃加热2小时后得到澄清的液体。随后在各个器官的组织匀浆中加入以系列不同浓度的MoS2纳米片。在1毫升一次性注射器(末端切开)中加入组织匀浆(约100μl)，并浸入液氮中30分 钟冷冻匀浆成圆柱形固体。接下来将匀浆固体在20℃冷冻室放置至少半小时。在那之后， 将匀浆固体推出注射器，然后将其切为25微米厚的切片。每组浓度切出三片进行平行实验。 将切片贴至到一个ITO玻璃导电面。在真空干燥器中干燥30分钟后，进行质谱分析。在每 个切片用200微米激光分辨率进行质谱成像。成像时，质谱检测条件为：负离子模式，加 速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv，透镜电压为7.000kv， 频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200次，扫描空间分辨率为100微米， 激光光斑为25微米，成像数据采用Bruker Daltonics FlexImaging 4.0软件来处理质谱成像数据。选出材料的质谱指纹峰最强的同位素峰m/z 193.8，计算出每个浓度的平均离子强度， (可以Bruker Daltonics fleximaging 4.0读出)。然后绘制平均离子强度对MoS2纳米片浓度 的校准曲线，图5a)为脾组织的外标曲线。
2、将小鼠分为6组，每组3只，每只小鼠尾静脉注射相同量的MoS2纳米片(5mg/kg)，6组小鼠分别在注射后的1小时，5小时，24小时，48小时，15天，30天后，处死，取出 肺、脾、肝、肾、心、脑组织。制备匀浆，匀浆冷冻切片，具体步骤同1。然后进行质谱 分析，参数需与校准曲线测量完全一致。根据各器官切片和校准曲线的平均离子强度，MoS2纳米片的浓度可以计算。由于对器官大小的个体差异，我们用百分注射剂量(％ID)与其 浓度量化器官的MoS2纳米片。％和匀浆浓度的计算如下方程：
然后统计结果得到5b)的柱状统计图，从图中可以看出，24小时的体内循环时间，材 料在各个组织中的积累达到最大值，然后随着时间，材料在循环过程中被代谢和清除掉。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、 或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包 含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须 针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一 个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合 和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的， 不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例 进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种检测待测纳米载药系统在生物体内的生物分布的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成，其特征在于，包括：
将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述纳米载药系统预先进入所述生物体内；
基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰在所述生物体内的出现位置，确定所述纳米载药系统在所述生物体内的生物分布；
其中，所述载体为无机纳米载体，所述质谱成像检测的电离源为基质辅助激光解吸电离源。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金纳米载体，黑磷纳米载体的至少之一。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱成像检测的质量分析器为飞行时间分析器，离子阱分析器，扇形磁分析器，四级杆分析器或傅里叶变换分析器。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基质辅助激光解吸电离源的激光波长为355nm或337nm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱成像检测的条件包括：
负离子模式，加速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv，透镜电压为7.000kv，频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200次，扫描空间分辨率为100微米，激光光斑为25微米。
6.一种检测待测纳米载药系统在生物体内的生物分布的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成，其特征在于，包括：
将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述纳米载药系统预先进入所述生物体内；
基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰在所述生物体内的出现位置，确定所述纳米载药系统在所述生物体内的生物分布；
其中，所述载体为无机纳米载体，所述无机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金纳米载体，黑磷纳米载体的至少之一，
所述质谱成像检测的电离源为基质辅助激光解吸电离源，所述基质辅助激光解吸电离源的激光波长为355nm或337nm，
所述质谱成像检测的质量分析器为飞行时间分析器，离子阱分析器，扇形磁分析器，四级杆分析器或傅里叶变换分析器，
所述质谱成像检测的条件包括：负离子模式，加速电压为19.000kv，延迟引出电压为14.920kv，反射器电压为20.000kv，透镜电压为7.000kv，频率为1000Hz，激光器能量为60-85％，累加次数为200次，扫描空间分辨率为100微米，激光光斑为25微米。
7.一种检测待测纳米载药系统的载药量的方法，所述纳米载药系统由载体和所述载体所负载的药物组成，其特征在于，包括：
将待测纳米载药系统进行质谱成像检测，所述质谱成像检测如权利要求1～6任一项所限定的；
基于所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，确定待测所述纳米载药系统的载药量；
其中，所述载体为无机纳米载体，
所述强度比与质量比存在预定线性关系，所述强度比为所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，所述质量比为所负载的药物与所述载体的质量比。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述预定线性关系是通过如下方式获得的：
将已知质量比的纳米载药系统进行所述质谱成像检测，以便获得所述已知质量比的纳米载药系统的强度比；
以所述已知质量比的纳米载药系统的质量比为横坐标、强度比为纵坐标，绘制强度比-质量比标准曲线，以便获得所述预定线性关系。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述预定线性关系为y＝5.57x+0.07，
其中，y表示所负载的药物与所述载体的特征质谱指纹峰的强度比，x表示所负载的药物与所述载体的质量比；
任选地，所述无机纳米载体包括选自硫化钼纳米载体，碳纳米载体，金纳米载体，黑磷纳米载体的至少之一。
10.一种检测待测纳米载药系统在生物体内的原位药物释放量的方法，其特征在于，包括：
按照权利要求7～9任一项所述的方法检测待测所述纳米载药系统在生物体内的载药量；
所述载药量与初始载药量之差，为所述纳米载药系统在生物体内的原位药物释放量。
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