CN107354155A - 三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法 - Google Patents

三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法 Download PDF

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吴永红
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    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids

Abstract

本发明涉及一种三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法，试剂盒包括如下组分：活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品和样品稀释液。本发明三基色核酸分子量标准试剂盒中不同分子大小三基色核酸纯品可自由组合，采用样品稀释液稀释混匀后即可直接上样检测，打破传统依赖核酸染料嵌入核酸分子而激发发光的过程，具有操作简便、安全、无毒、高效、成本低等特点。

Description

三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明涉及生物学中核酸标定领域，具体涉及一种三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法。
背景技术
传统基于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳检测核酸的大小分布及表达变化在分子生物学领域已得到了广泛应用，可借助核酸染料直接嵌入核酸双链分子，如溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)、SYBR Green I、Genefinder和Geneview等，在紫外光等的激发下发出荧光，依赖核酸分子量标准显示核酸条带的大小和位置。
然而，该方法虽然在生物学和医学等领域都得到了广泛应用，但依然存在诸多缺陷：1.安全性差：核酸染料均需直接嵌入核酸分子，如果不慎引入人体，可能也会嵌入人体核酸分子而导致潜在的遗传变异，具有潜在的致癌性；2.定量化存在偏差：核酸染料均需直接嵌入核酸分子，将导致核酸的分子量增加而影响其迁移率；3.依赖紫外等激发光：目前市面上商业化核酸染料均需要激发光激发，每种激发光均对人体及眼睛产生危害；4.设备依赖性高：由于如紫外等激发光具有一定的人体危害性，需要依赖一定的保护装置进行保护，必须有专业的设备才能检测，使检测成本大大提高。
如何实现核酸分子的快速标定及可视化展示是目前分子生物学领域核酸分子检测亟待解决的难题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种三基色核酸分子量标准试剂盒及其使用方法，用以解决现有技术中的核酸分子的标定过程安全性差、定量化存在偏差及成本高等问题。
本发明提供了一种三基色核酸分子量标准试剂盒，所述试剂盒包括如下组分：活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品和样品稀释液。
进一步的，所述活性红标记、活性黄标记和活性蓝标记分别通过不同的活性染料的活性基团与核酸中的游离氨基偶联标记。
进一步的，所述活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品和活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品中每个条带的质量均为50μg。
进一步的，所述核酸分子的大小为50-2000bp。
本发明的另一方面提供一种三基色核酸分子量标准试剂盒的使用方法，具体包括如下步骤：
(1)根据研究需求，将活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品自由组合混匀，得到三基色混合液；
(2)吸取10-30μl样品稀释液，与步骤(1)得到的三基色混合液室温下混匀后置于离心机中离心，吸取上清液备用；
(3)吸取2-20μl步骤(2)所得上清液上样并采用0.1-2％琼脂糖凝胶检测。
进一步的，所述离心机的转速为在5000-20000rpm，离心时间为5min-1h。
采用上述本发明技术方案的有益效果是：
本发明三基色核酸分子量标准试剂盒中不同分子大小三基色核酸纯品可自由组合，采用样品稀释液稀释混匀后即可直接上样检测，打破传统依赖核酸染料嵌入核酸分子而激发发光的过程，具有操作简便、安全、无毒、高效、成本低等特点。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
本发明三基色核酸分子量标准试剂盒，包括如下组分：活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品和样品稀释液；具体的，核酸分子的大小为50-2000bp；活性红标记、活性黄标记和活性蓝标记分别通过不同的活性染料的活性基团与核酸中的游离氨基偶联标记；活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品和活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品中每个条带的质量均为50μg。
本发明的主要原理为：核酸是由许多核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键聚合形成的生物大分子，核苷酸是其基本的组成单位。一个核苷酸分子是由一分子含氮碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成，按照五碳糖的不同可将核酸分为：脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid,DNA)和核糖核酸(Ribonucleic acid,RNA)。DNA分子中含氮碱基包括：腺嘌呤(Adenine,A)、鸟嘌呤(Guanine,G)、胞嘧啶(Cytosine,C)和胸腺嘧啶(Thymine,T)，RNA分子中含氮碱基包括：腺嘌呤(Adenine,A)、鸟嘌呤(Guanine,G)、胞嘧啶(Cytosine,C)和尿嘧啶(Uracil,U)。其中，腺嘌呤(Adenine,A)、鸟嘌呤(Guanine,G)和胞嘧啶(Cytosine,C)均含有一个游离的氨基(-NH2)，理论上该游离-NH2可与其他活性基团发生亲核加成或亲核取代，为核酸的活性基团标定提供了重要理论基础。
活性染料是一类带有活性基团的水溶性染料，可借助其活性基团与多种化学物质的基团发生亲核加成或亲核取代反应，进而实现活性染料的有色标定，被广泛地应用于纺织业等领域。活性染料由发色体或母体染料、活性基与发色体的连接基、活性基和水溶性基因组成，染料分子的化学结构与特性紧密相关。活性染料结构中起决定性作用的是染料母体和活性基。其中，染料母体是发光体部分，影响活性染料颜色、溶解度和固色率；活性基是活性染料与纤维发生共价键合的部分，影响活性染料与纤维形成共价键的能力、染料稳定性、直接性、扩散性、转移性和耐酸碱性，活性染料和纤维之间形成的共价键键能较高，故染品具有较高的皂洗牢度和摩擦牢度，较难脱色，特别是蛋白质纤维，如羊毛和蚕丝纤维等。常与活性染料活性基团偶联标记形成共价键的基团主要有：羧基(-COOH)、氨基(-NH2)、巯基(-SH)、亚氨基(-NH-)、羟基(-OH)。理论上，具有上述基团的化学物均可进行活性染料偶联标记而显色，结合上述核酸分子中含氮碱基含有的一个游离氨基(-NH2)，可实现核酸分子的活性染料共价偶联标记而显色。
本发明三基色核酸分子量标准试剂盒的使用方法，具体包括如下步骤：
(1)根据研究需求，将活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品自由组合混匀，得到三基色混合液；
(2)吸取20μl样品稀释液，与步骤(1)得到的三基色混合液室温下混匀后置于离心机中离心，离心机的转速为在10000rpm，离心时间为10min，吸取上清液备用；
(3)吸取10μl步骤(2)所得上清液上样并采用1％琼脂糖凝胶检测。
综上，本发明提供了一种三基色核酸分子量标准试剂盒，该试剂盒中不同分子大小三基色核酸纯品可自由组合，采用样品稀释液稀释混匀后即可直接上样检测，打破传统依赖核酸染料嵌入核酸分子而激发发光的过程，具有操作简便、安全、无毒、高效、成本低等特点。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (6)

1.一种三基色核酸分子量标准试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下组分：活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品和样品稀释液。
2.根据权利要求1所述的三基色核酸分子量标准试剂盒，其特征在于，所述活性红标记、活性黄标记和活性蓝标记分别通过不同的活性染料的活性基团与核酸中的游离氨基偶联标记。
3.根据权利要求1所述的三基色核酸分子量标准试剂盒，其特征在于，所述活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品和活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品中每个条带的质量均为50μg。
4.根据权利要求1所述的三基色核酸分子量标准试剂盒，其特征在于，所述核酸分子的大小为50-2000bp。
5.一种权利要求1-4任一项所述的三基色核酸分子量标准试剂盒的使用方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)根据研究需求，将活性红标记的不同大小核酸分子纯品、活性黄标记的不同大小核酸分子纯品、活性蓝标记的不同大小核酸分子纯品自由组合混匀，得到三基色混合液；
(2)吸取10-30μl样品稀释液，与步骤(1)得到的三基色混合液室温下混匀后置于离心机中离心，吸取上清液备用；
(3)吸取2-20μl步骤(2)所得上清液上样并采用0.1-2％琼脂糖凝胶检测。
6.根据权利要求5所述的三基色核酸分子量标准试剂盒的使用方法，其特征在于，所述离心机的转速为在5000-20000rpm，离心时间为5min-1h。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1379245A (zh) * 2001-04-06 2002-11-13 台湾元生生物科技股份有限公司 利用反应性染料选择性染色水溶性蛋白质的方法
CN1902490A (zh) * 2003-12-24 2007-01-24 礒部信一郎 生物分子检测方法及其所用的标记染料和标记试剂盒
US20090090628A1 (en) * 2007-08-09 2009-04-09 Biodynamics Laboratory, Inc Nucleic acid derivatives and methods of use
CN106482998A (zh) * 2016-06-13 2017-03-08 苏州泽科生物科技有限公司 一种三基色蛋白分子量标准试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1379245A (zh) * 2001-04-06 2002-11-13 台湾元生生物科技股份有限公司 利用反应性染料选择性染色水溶性蛋白质的方法
CN1902490A (zh) * 2003-12-24 2007-01-24 礒部信一郎 生物分子检测方法及其所用的标记染料和标记试剂盒
US20090090628A1 (en) * 2007-08-09 2009-04-09 Biodynamics Laboratory, Inc Nucleic acid derivatives and methods of use
CN106482998A (zh) * 2016-06-13 2017-03-08 苏州泽科生物科技有限公司 一种三基色蛋白分子量标准试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何瑾馨: "《染料化学第2版》", 31 October 2016 *
郭腊梅: "《纺织结构成型学3：纺织品染整》", 31 March 2016 *

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