CN107353288A

CN107353288A - 4‑乙胺（2‑羧基）‑9H‑嘧啶并[4,5‑b]吲哚及其制备方法

Info

Publication number: CN107353288A
Application number: CN201710487090.5A
Authority: CN
Inventors: 孙波; 任立群; 李相军; 于晓艳; 石艳
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2017-06-23
Filing date: 2017-06-23
Publication date: 2017-11-17
Anticipated expiration: 2037-06-23
Also published as: CN107353288B

Abstract

本发明涉及有机合成技术领域，具体涉及一种4‑乙胺(2‑羧基)‑9H‑嘧啶并[4,5‑b]吲哚及其制备方法，本发明以4,6‑三乙氧羰基‑1,3,5‑三嗪与2‑氨基吲哚为原料，发生反电子环加成反应得到中间产物，再经过酯基水解选择性脱羧、酰胺缩合反应制得目标产物，工艺简单、目标产物收率高，适合工业化生产，本发明所制备的4‑乙胺(2‑羧基)‑9H‑嘧啶并[4,5‑b]吲哚在治疗心血管疾病、肾病及糖尿病具有潜在的应用。

Description

4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚及其制备方法

技术领域

本发明涉及有机合成技术领域，具体涉及一种4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法。

背景技术

吲哚及其衍生物是一种在自然界广泛存在的生物碱。由于该类化合物具有多样的生物活性，所以多年来一直受到化学家及药物学家的广泛关注。在众多的吲哚衍生物中，9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚是许多功能小分子化合物的重要结构单元。另外，以9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚为碱基而合成得到的碱基扩展核苷，还被成功引入到寡聚核苷酸中，并被用作生物探针以研究DNA的空间结构和性能。关于9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚类化合物的合成，现有的方法主要是通过在已有吲哚骨架上进行功能团化而得到，这不仅使反应底物的范围受到限制，而且提高了原料成本，不利于其在实际生产中得到应用。鉴于9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚类化合物的重要性，进一步发展合成该类化合物高效、经济新方法具有重要的意义。

但是，目前报道的9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚类化合物的合成方法比较少，并且合成过程比较复杂，难度高，存在着诸多问题，如：(1)反应原料比较难得，需要通过多步的合成路径才能获得；(2)反应条件过于苛刻，反应温度太高，合成产率低等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单有效的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚及其制备方法。

本发明提供了一种4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚，其分子式如下：

本发明提供了一种4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，制备步骤如下：

(1)2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪与2-氨基吲哚反应得到中间体Ⅰ9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯，纯化中间体Ⅰ；

(2)中间体Ⅰ用碱性溶液溶解并加热至回流，冷却至室温，抽滤得到中间体Ⅱ；

(3)中间体Ⅱ用有机溶剂溶解，加入浓硝酸和浓硫酸的混合溶液，溶解并加热至回流，冷却至室温，然后催化还原得到中间体Ⅲ；

(4)将中间体Ⅲ在碱性溶液中与卤代乙烷进行取代反应，得到中间体Ⅳ；

(5)将中间体Ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

优选的，在步骤(1)中，所述中间体的制备工艺为：取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪溶于DMSO，N₂保护，加热至50℃.搅拌下加入2-氨基吲哚，反应结束得到中间体Ⅰ嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。

优选的，所述中间体Ⅰ的纯化工艺为：首先用H₂O、二氯甲烷萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na₂SO₄干燥，回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得黄色粉末。

优选的，在步骤(2)中，所述碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂的水溶液中的至少一种。

优选的，在步骤(2)中，所述加热回流的温度为80～100℃，回流时间为30～240min。

优选的，在步骤(3)中，所述加热回流温度为68～85℃，时间为20～100min。

优选的，在步骤(3)中，所述催化还原工艺为在催化剂的存在下，进行催化加氢反应，所述催化剂为镍、钯、铂中的至少一种。

优选的，在步骤(4)中，所述取代反应的工艺为在冰水浴中，搅拌15～60min。

优选的，在步骤(4)中，所述氧化工艺为在高锰酸钾和氧气存在的条件下，氧化；所述氧化的温度为100～150℃。

本发明的优点在于：本发明以4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪与2-氨基吲哚为原料，发生反电子环加成反应得到中间产物，再经过酯基水解选择性脱羧、酰胺缩合反应制得目标产物，工艺简单、目标产物收率高，适合工业化生产。

本发明所制备的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚在治疗肾间质纤维化及糖尿病肾病具有潜在的预防和治疗应用。

附图说明

图1：4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对大鼠肾间质成纤维细胞的抑制作用；

图2：不同浓度的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对大鼠肾间质成纤维细胞的作用；

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1：

1、中间体Ⅰ的合成

取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪1.49g溶于10mL DMSO，N2保护，加热至50℃.搅拌下加入2-氨基吲哚。2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪是一个活性较高的双烯体，强给电子基团氨基能够提高2-氨基吲哚作为亲双烯体的反应活性，两者发生加成反应得到的中间体失去氨,最后发生一个Retro-Diels-Alder反应失去NC-COOEt形成了9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。反应结束后首先用100mL H2O、二氯甲烷萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na2SO4干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得黄色粉末，熔点201-202℃。

1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:12.13(s,1H),8.87(d,J＝8.1Hz,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.73-7.68(m,1H),7.49-7.43(m,1H),4.59(d,J＝7.5Hz,4H),1.63-1.56(m,6H)；

13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:165.3,160.3,157.0,154.0，147.1,141.5,130.4,128.6,125.3,118.9,115.5,113.3,63.3,53.8,14.3,14.2；

ES-MS:314[M+H]+。

2.中间体Ⅱ的合成

中间体Ⅰ用50毫升氢氧化钠水溶液溶解并在100℃下加热至回流240min，中间体Ⅰ上的二个酯基发生水解反应，并且4位上的羧基脱去，反应结束后冷却至室温。抽滤得到黄色固体，熔点223-226℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.68(s,1H),9.00(s,1H),8.68(d,J＝8.1Hz,1H),7.63-7.62(m,2H),7.42-7.35(m,1H)；

13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:135.6,128.5,118.6,127.9；

ESI-MS:215[M+H+]。

3.中间体Ⅲ的合成

将中间体Ⅱ用20mL惰性有机溶剂THF溶解，50mL浓硫酸和浓硝酸的混合溶液，在85℃下加热回流100min，反应结束后冷却至室温，，用水洗涤至中性，抽滤得到黄色固体，将黄色固体与铂接触，在25～35℃反应2h，将产物溶解于THF中，过滤除去滤渣，将滤液用乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na2SO4干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体，熔点184-186℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.56(s,1H),7.60-7.57(m,2H),7.37-7.32(m,1H),3.28-3.19(m,2H),1.65-1.56(m,2H),1.43-1.31(m,2H),1.05-1.08(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:128.5,127.4,121.0,121.0,118.4,111.4,58.9,58.3,47.6,38.6,31.2,19.6,13.7；

ESI-MS:m/z 287[M+H]+。

中间体Ⅳ的合成

将中间体Ⅲ在氢氧化钠溶液中溶解，在冰水浴下，向混合体系中通入氯乙烷反应2h，反应结束后，将产物溶解于THF中，将滤液用乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na2SO4干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体749mg，产率82％。熔点176～178℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.25(s,1H),9.41-8.69(m,2H),7.60-7.57(m,2H),7.45-7.38(m,1H),1.43-1.31(m,2H),1.05～1.12(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:128.5,125.4,121.3,59.3,58.2,41.3,38.6,31.2,19.6,13.7；

ESI-MS:m/z 305[M+H]+。

(5)将中间体Ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

中间体Ⅳ的合成

将中间体Ⅳ在酸性高锰酸钾溶液中溶解，升温至150℃，搅拌反应30min，反应结束后，反应结束后首先用100mL H2O，乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na2SO4干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体熔点195～198℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.8(s,1H),9.12-9.00(m,2H),7.37-7.32(m,1H),3.41-3.25(m,2H),1.41-1.35(m,2H),0.93(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:183.2,181.6,176.3,157.4,152.8,139.5,128.5,127.4,121.0,121.0,63.5,58.6,48.3,38.6,31.2,19.6；

ESI-MS:m/z 275[M+H]+。

实施例2：

1、中间体Ⅰ的合成

取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪1.49g溶于10mL DMSO，N₂保护，加热至50℃.搅拌下加入2-氨基吲哚。2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪是一个活性较高的双烯体，强给电子基团氨基能够提高2-氨基吲哚作为亲双烯体的反应活性，两者发生加成反应得到的中间体失去氨,最后发生一个Retro-Diels-Alder反应失去NC-COOEt形成了9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。反应结束后首先用100mL H₂O、二氯甲烷萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na₂SO₄干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得黄色粉末，熔点201-202℃。

1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:12.05(s,1H),8.71(d,J＝8.1Hz,1H),8.01(d,J＝8.1Hz,1H),7.81-7.75(m,1H),7.17-7.08(m,1H),4.32(d,J＝7.5Hz,4H),1.25-1.16(m,6H)；

13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:163.3,161.3,158.0,159.0，145.1,141.5,132.4,128.5,125.1,116.9,115.6,113.4,63.3,53.2,14.9,14.3，；

ES-MS:314[M+H]+。

2.中间体Ⅱ的合成

中间体Ⅰ用50毫升氢氧化钾水溶液溶解并在80℃下加热至回流30min，中间体Ⅰ上的二个酯基发生水解反应，并且4位上的羧基脱去，反应结束后冷却至室温。抽滤得到黄色固体，熔点223-226℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.56(s,1H),9.12(s,1H),8.31(d,J＝8.1Hz,1H),7.55-7.62(m,2H),7.14-7.25(m,1H)；

13C NMR(75MHz,CDCl3)δ:136.6,123.5,119.6,126.9；

ESI-MS:215[M+H+]。

3.中间体Ⅲ的合成

将中间体Ⅱ用20mL惰性有机溶剂THF溶解，50mL浓硫酸和浓硝酸的混合溶液，在68℃下加热回流20min，反应结束后冷却至室温，，用水洗涤至中性，抽滤得到黄色固体，将黄色固体与铂接触，在25～35℃反应2h，将产物溶解于THF中，过滤除去滤渣，将滤液用乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na₂SO₄干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体，熔点184-186℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.56-7.48(m,2H),7.39-7.32(m,1H),3.16-3.05(m,2H),1.67-1.61(m,2H),1.48-1.40(m,2H),1.01-1.08(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:128.8,128.4,123.0,121.0,116.4,111.9,59.9,58.1,47.5,39.6,37.2,18.6,11.7；

ESI-MS:m/z 287[M+H]+。

中间体Ⅳ的合成

将中间体Ⅲ在氢氧化钠溶液中溶解，在冰水浴下，向混合体系中通入氯乙烷反应2h，反应结束后，将产物溶解于THF中，将滤液用乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na₂SO₄干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体，熔点176～178℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.05(s,1H),9.31-8.85(m,2H),7.63-7.59(m,2H),7.45-7.42(m,1H),1.38-1.33(m,2H),1.05～1.12(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:126.5,125.4,123.3,59.1,58.7,41.3,39.6,36.2,15.6,13.7；

ESI-MS:m/z 305[M+H]+。

(5)将中间体Ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

中间体Ⅳ的合成

将中间体Ⅳ在酸性高锰酸钾溶液中溶解，升温至100℃，搅拌反应30min，反应结束后，反应结束后首先用100mL H₂O，乙酸乙酯萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na₂SO₄干燥。回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得固体熔点195～196℃。

1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.6(s,1H),9.15-9.06(m,2H),7.34-7.31(m,1H),3.36-3.25(m,2H),1.43-1.32(m,2H),0.91(t,J＝7.2Hz,3H)；

13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:181.2,180.6,196.3,155.4,153.8,138.5,128.1,127.6,121.5,120.8,61.5,57.6,48.3,38.5,31.1,19.3；

ESI-MS:m/z 275[M+H]+。

药理学实验：

1、4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对NRK49f增殖能力的影响

实验步骤：

将处于对数生长期的大鼠肾间质成纤维细胞细胞(NRK49f)接种于96孔板，3×10³个/孔，待细胞完全贴壁后，将其分为正常组(Ctrl组)及10^-9～8×10^-4mol/L9个不同浓度4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚处理组。正常组细胞换用无血清DMEM培养液；9个不同浓度4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚处理组分别换用含4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L、10^-6mol/L、10^-5mol/L、10^-4mol/L、2×10^- ⁴mol/L、4×10^-4mol/L及8×10^-4mol/L的无血清DMEM培养液。各组细胞在换用相应条件培养液继续培养24h后，每孔加入5mg/ml MTT溶液20μl，于37℃、5％CO₂培养箱中继续孵育，4h后弃去每孔培养上清并加150μl DMSO充分溶解甲臜沉淀。在酶联免疫检测仪上选定490nm波长处测定吸光度(OD)值，参比波长620nm。计算细胞生长抑制率及IC50。每组设6-8个复孔，实验重复3次。

实验结果：

如表1和图1所示，各4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚各浓度处理组与对照组比较，差异无统计学差异，各4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚各浓度处理组间也无统计学差异。

表1 4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对NRK49f增殖能力的影响

从上述结果可以看出，不同浓度(10^-9～8×10^-4mol/L)4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚作用于NRK49f 24h后，可见此化合物在10^-9～2×10^-4mol/L时，对NRK49f的正常增殖有一定刺激作用，但与正常组合比较，无统计学差异，此作用也未显示出明显剂量-效应关系，高于2×10^-4mol/L(4×10^-4～8×10^-4mol/L)时，4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对NRK49f的增殖显示出了一定的抑制作用，与正常对照组比较，亦未显示出明显的统计学差异，这些结果表明，4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚对正常生长的肾脏成纤维细胞无明显刺激作用，亦无明体外显毒性作用，IC50远大于8×10^-4mol/L。

2、4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚抑制NRK49f过度增殖作用

实验步骤：

将处于对数生长期的大鼠肾间质成纤维细胞细胞(NRK49f)接种于96孔板，3×10³个/孔，待细胞完全贴壁后，将其分为正常组(Ctrl组)、UII刺激组及10^-7mol/L 4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚处理组。正常组细胞换用无血清DMEM培养液；尾加压素II(urotensin II，UII)刺激组换用含10^-8mol/L UII的无血清DMEM培养液；10^-7mol/L4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚处理组用含10^-8mol/L UII和10^-7mol/L 4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的的无血清DMEM培养液。各组细胞在换用相应条件培养液继续培养24h后，每孔加入5mg/ml MTT溶液20μl，于37℃、5％CO₂培养箱中继续孵育，4h后弃去每孔培养上清并加150μl DMSO充分溶解甲臜沉淀。在酶联免疫检测仪上选定490nm波长处测定吸光度(OD)值，参比波长620nm。每组设6-8个复孔，实验重复3次。

实验结果：

如表2和图2所示，与对照组比较，UII刺激组细胞增殖能力显著提高，差异有统计学意义；与UII刺激组比较，10^-8mol/L 4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚处理组细胞增殖能力明显下降，二者具有统计学差异。

表2 4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚抑制NRK49f过度增殖作用

^*与对照组比较，P<0.05；^#与对照组比较，P<0.05。

上述实验结果显示，UII可明显刺激NRK49f增殖，4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚则可明显抑制UII的这种作用，肾脏成纤维细胞是肾间质纤维化及糖尿病肾病的主要靶细胞，故可认为，化合物可能具有抑制肾间质纤维化作用，对糖尿病肾病也可能有防治作用。

嘧啶并吲哚(PI)衍生物是一类人工合成的尾加压素II(UII)抑制剂。有研究表明，UII与心血管疾病、肾病及糖尿病的病理过程及发病机制密切相关。根据目前研究结果，PI-1401有明确的拮抗UII作用，判断PI类衍生物有抗心肌纤维化，抗动脉粥样硬化，抗肾间质纤维化，降低血糖，保护糖尿病肾脏的作用。

申请人根据文献查阅结果发现，9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚(PI)对肿瘤细胞存在抑制增殖的作用，根据PI为母环，在2位，4位，9位作不同取代基，研究嘧啶并吲哚类衍生物对细胞增殖作用的影响。

根据目前研究结果，PI-1401、PI-1403、PI-1404对正常生长的人血管平滑肌细胞(VSMC)有抑制作用，PI-1402则对VSMC有促进作用。

①PI-1401、PI的比较：

PI-1401在母环2位酰胺取代，对细胞仍有抑制增殖的作用，判断2-酰胺有抑制细胞增殖的作用；

②PI-1401，PI-1402，PI的比较：

PI-1402与PI-1401在2-取代基完全相同，在9位添加苄基取代，对细胞有促增殖作用，判断9-苄基有促进细胞增殖的作用；

③PI-1403，PI-1404与PI的比较：

PI-1403,PI-1404均为母环4位取代，判断4-氨基有抑制细胞增殖的作用；同时，PI-1403对细胞的抑制作用随着浓度的增大而增大，判断其抑制增殖作用有剂量依赖性；而PI-1404则随着化合物浓度增大，抑制作用先增大后降低，最大抑制浓度为10^-7mol/L，判断低浓度-COOH取代有抑制细胞增殖作用，高浓度-COOH取代存在保护细胞作用。

因此，本发明所制备的到4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚在治疗心血管疾病、肾病及糖尿病具有广大的前景。

上述描述仅是对本发明部分实施例的描述，并非对本发明范围的任何限定，本行业的普通技术人员可根据本发明对上述实施例做出改进或修改，但均属于本发明保护范围。

Claims

1.一种4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚，其特征在于，其分子式如下：

。

2.一种4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：

(5)将中间体Ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

3.根据权利要求2所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述中间体的制备工艺为：取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪溶于DMSO，N2保护，加热至50℃.搅拌下加入2-氨基吲哚，反应结束得到中间体Ⅰ嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。

4.根据权利要求3所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，所述中间体Ⅰ的纯化工艺为：首先用H2O、二氯甲烷萃取三次，再用有机相依次水洗、饱和氯化钠水溶液依次洗涤，Na2SO4干燥，回收溶剂得固体化合物，柱色谱分离，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脱获得黄色粉末。

5.根据权利要求2所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂的水溶液中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述加热回流的温度为80～100℃，回流时间为30～240min。

7.根据权利要求2所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述加热回流温度为68～85℃，时间为20～100min。

8.根据权利要求7所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述催化还原工艺为在催化剂的存在下，进行催化加氢反应，所述催化剂为镍、钯、铂中的至少一种。

9.根据权利要求2所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述取代反应的工艺为在冰水浴中，搅拌15～60min。

10.根据权利要求9所述的4-乙胺(2-羧基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述氧化工艺为在高锰酸钾和氧气存在的条件下，氧化；所述氧化的温度为100～150℃。