CN107348203B - 一种改善仔猪免疫力的饲料添加剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种改善仔猪免疫力的饲料添加剂,其中活性成分阿魏酸与猪苓多糖的重量比为(1:10)~(10:1)。与普通饲料添加剂相比,本发明的仔猪饲料添加剂制备方法简单,配伍合理,疗效显著,能够显著改善仔猪免疫力。由于添加剂中无西药成分,因此饲料添加剂无毒副作用,无耐药性。
Description
技术领域
本发明涉及饲料领域,具体涉及一种仔猪饲料添加剂。
背景技术
长期以来,断奶仔猪疾病高发是严重困扰我国养猪业发展的重要原因。仔猪断奶后,由于母乳被中断,环境、饲料等的突然改变,造成各系统功能紊乱、机体免疫力下降,容易感染各种免疫抑制性疾病(如蓝耳病病毒、猪瘟野毒伪狂犬病毒、圆环病毒等),造成仔猪断奶后发病率和死亡率高等严重后果。
目前,国外主要通过调整饲粮组成(如高营养性、高适应性仔猪断奶料)、温控及其他环境的控制来防制仔猪断奶综合征。国内主要通过在饲料中添加抗生素类药物来控制继发感染,但容易造成耐药性、仔猪免疫机能下降、药物残留及污染环境等弊端。
中药制剂富含多种多糖等活性成分,在提高机体免疫力和抗病力方面有着显著的作用,现已证明数百种中草药有多方面的免疫活性,如促进免疫器官的生长发育,增强机体的细胞免疫和体液免疫,促进干扰素-γ、白细胞介素-2等细胞因子产生等作用,并且绿色、安全、不易产生耐药性。因此,中草药的开发利用已成为众望所归。
阿魏酸(ferulic acid),化学名为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸,分子量194.18。阿魏酸溶于热水,乙醇和乙酸乙酯,稍溶于乙醚,难溶于苯和石油醚。从化学结构上看,阿魏酸有顺式和反式两种立体异构体。阿魏酸的合成有半合成法、生物合成法及化学合成法。其中,半合成法以谷维素为原料,工艺简单,收率可达,适于工业化生产。
现已发现,阿魏酸至少具有以下功能:抗血小板凝集和血栓、清除亚硝酸盐、氧自由基、过氧化亚硝基、抗菌消炎、抗肿瘤、抗突变、增加免疫功能、增强人体精子活力和运动性等。
研究表明,阿魏酸具有很强抗氧化活性,对过氧化氢、超氧自由基、轻自由基、过氧化亚硝基都有强烈清除作用。阿魏酸不仅能清除自由基,且能调节人体生理机能,抑制产生自由基之酶,促进清除自由基的酶产生。阿魏酸能增加谷胱甘肽转硫酶和醌还原酶活性,抑制酪氨酸酶活性。实验研究还发现,阿魏酸能保护体内产生过氧化物,特别是羟自由基、一氧化氮造成的细胞损伤。
阿魏酸钠能明显抑制血小板聚集、抑制经色胺、血栓素(TXA2)样物质释放,选择性抑制TXA2合成酶活性,使前列环素PGI2/TXA2比率升高。其抑制血栓素机制可能为:一是选择性抑制血栓素合成酶;二是拮抗血栓素作用;三是通过抑制磷脂酶A2阻止花生四烯酸游离,从而阻止TXA2生成。另外,阿魏酸用于自发性高血压大鼠短期和长期研究表明,阿魏酸有明显降压作用。当给麻痹自发性高血压大鼠静脉注射阿魏酸,其降低颈动脉压效果与剂量呈依赖关系。另外,用NO合酶抑制剂LNAME3mg/kg预处理自发性高血压大鼠后,静注阿魏酸,阿魏酸降压作用减弱,提示阿魏酸降压效果可能与介导血管舒张有关。
近年来,阿魏酸抗结肠癌研究较多。科研人员采用偶氮甲烷(AOM)诱导F334鼠产生结肠癌,发现饲喂含有500mg/kg阿魏酸,异常病灶隐窝数下降27%。科研人员认为,阿魏酸抗癌活性与其能激活解毒酶如谷胱甘肽转硫酶、醌还原酶活性有关。
阿魏酸对多种视网膜神经细胞均具有促增殖作用,细胞活性强度呈现剂量依赖性,对于小鼠视网膜神经细胞,阿魏酸在15.6-1000mg/L内均具有促细胞增殖作用。对于新生小牛和7个月人胚胎视网膜神经细胞,阿魏酸在125-1000mg/L内具有促细胞增殖作用。对7个月人胚胎视网膜神经细胞,阿魏酸在62.5-1000mg/L内具有促DNA合成作用,最佳效应浓度为500mg/L。脑源性神经营养因子(BDNF)在12.5-50μg/L内具有促细胞增殖作用,最佳效应浓度为50μg/L,阿魏酸对3种视网膜神经细胞促增殖作用明显强于BDNF。阿魏酸能有效提高视网膜神经细胞活性,有望成为一种新的防治退行性视网膜病变有效成分。另外,阿魏酸能有效降低视网膜神经细胞内游离钙水平,对于促进增殖和保护细胞具有重要作用。
猪苓(Polyporus umbellatus)在分类学上属于担子菌纲、无褶菌目、多孔菌科、多孔菌属。它的干燥菌核称为猪苓,是常用药用真菌。猪苓药用价值在我国古代早有应用和记载,至今已有2500多年药用历史,在国内外享有盛名。猪苓味甘、淡,性平,归肾、膀胱经,功效利水渗湿,主治小便不利、水肿、泄泻、淋浊、带下。
猪苓之所以有如此之多的药用价值是因其中含有大量的生物活性物质猪苓多糖。猪苓中提取的多糖是由10种以上单糖分子组成的高分子多糖,无甜味,溶于水而不溶于酒精。它与有甜味的单糖(葡萄糖等)和双塘(蔗糖、乳糖、麦芽糖等)以及无甜味的淀粉、糖元、纤维素等低分子多糖均不同,它不仅是生物的主要能源,更重要的是它具有多方面的生物活性。研究发现,猪苓多糖具有抗衰老、能提高机体的非特异性免疫能力、能显著地加强网状内皮系统吞噬细胞的功能,增强B细胞对抗原刺激的反应,使癌细胞的生长受到抑制,它们的抑瘤作用机理不同于细胞毒类药物的直接杀伤作用,而是通过提高机体免疫功能,间接抑制肿瘤的生长,为抗癌药研究开辟了一条新途径。
猪苓多糖能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数和吞噬率、淋巴细胞转化率、E玫瑰花环率及EAC花环率,表明猪苓多糖可以通过提高巨噬细胞生物活性,淋巴细胞转化能力,T细胞免疫活性等增强或促进小鼠的非特异性和特异性免疫功能。用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清,对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL-2产生,对小鼠脾细胞杀伤活性,以及CTLL-2细胞对IL-2反应性的影响。用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL-2Rα表达的影响,结果表明猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用,下调肿瘤细胞S180合成和/或分泌免疫抑制物质。
猪苓多糖可以增强糖原异生酶活性,加速糖异生使荷癌鼠肝糖原积累增加,改善机体自稳状态,同时使荷癌鼠亢进的皮质功能恢复正常。提示猪苓多糖有适应原作用,可能为其抗肿瘤作用的一个药理基础。猪苓多糖具有抑制肿瘤生长和增强荷瘤动物及肿瘤患者免疫功能的作用。猪苓多糖对小鼠S180瘤体的抑制率达50%-70%,瘤重抑制率达30%以上,约6%-7%荷瘤小鼠肿瘤完全消退,同时可增强荷瘤小鼠的免疫功能,使荷瘤小鼠脾淋巴样细胞对瘤细胞的杀伤作用增强。研究发现猪苓多糖注射液可抵消S180肿瘤细胞培养上清的免疫抑制作用,下调肿瘤细胞S180合成和分泌免疫抑制物质而发挥抗瘤作用。通过猪苓多糖对结直肠癌Colon26细胞肿瘤免疫抑制的研究,表明猪苓多糖确实可以下调肿瘤细胞免疫抑制分子分泌,在一定程度上逆转肿瘤细胞的免疫抑制,可能是其抗瘤效应机制之一。
猪苓多糖能减轻四氯化碳对小鼠肝脏的损伤,使肝组织病理损伤减轻、血清谷丙转氨酶活性下降,防止肝6-磷酸葡萄糖磷酸酶和结合酸性磷酸酶活性降低。猪苓多糖在整体及体外肝匀浆试验中均对四氯化碳引起的脂质过氧化作用增强无抑制作用,提示其保肝作用不在于抑制四氯化碳的激活或四氯化碳代谢的作用,具体机制有待进一步研究。猪苓多糖治疗慢性乙型肝炎的疗效较为肯定,无论猪苓多糖单独应用,或是与其他中药、乙肝疫苗、干扰素、拉米夫定等联合应用,均可有效抑制乙肝病毒复制,提高HBeAg和HBV-DNA阴转率、抗-HBe阳转率,改善肝功能。尤其在与其他药物联合时可以从不同方面发挥治疗作用,提高疗效,并在一定程度上减轻他药的不良反应,为中西医结合治疗慢性乙型肝炎开辟了一条新途径。
猪苓多糖具有明显的防治小鼠急性放射病的效果,有效剂量和时间都比较宽,而且照前照后,腹腔注射和口服都有防护效价,预防比治疗效价高。猪苓多糖对受照小鼠的造血功能无保护作用,但能明显提高受照小鼠肾上腺皮质的应激功能,因此猪苓多糖可能是通过调节垂体-肾上腺系统使机体处于应激状态,从而增强抗辐射损伤的能力。猪苓多糖对环磷酰胺(CTX)产生的微核有一定抑制作用,能降低CTX致突变作用,并抑制突变细胞有丝分裂,减少微核产生,稳定和促进DNA修复,具有抗诱变作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能有效改善仔猪免疫力,且毒副作用低的仔猪饲料添加剂。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是,提供一种改善仔猪免疫力的饲料添加剂,其中活性成分阿魏酸与猪苓多糖的重量比为(1:10)~(10:1)。
优选的,所述饲料添加剂中阿魏酸与猪苓多糖的重量比为(1:1)~(1:9)。
更优选的,阿魏酸与猪苓多糖的重量比为1:3。
优选的,所述猪苓多糖的制备方法如下:取猪苓加水于浸提,多次提取后合并上清液真空浓缩,用无水乙醇沉淀,沉淀物再溶于适量水中,用Sevag法脱蛋白,适量90%-95%乙醇沉淀,真空干燥得猪苓多糖。
更优选的,所述猪苓多糖的制备方法如下:取猪苓加10-20倍重量水于70-80℃浸提1-2小时,共提取1-3次,合并上清液真空浓缩,用5-10倍浓缩液体积的无水乙醇沉淀,沉淀物再溶于适量水中,用Sevag法脱蛋白,适量90%-95%乙醇沉淀,真空干燥得猪苓多糖。
优选的,所述饲料添加剂进一步包括其他活性成分。
更优选的,所述其他活性成分选自氨基酸、维生素等中的一种或多种。
最优选的,所述氨基酸为蛋氨酸、赖氨酸和/或苏氨酸等,所述维生素为维生素A、维生素C和/或维生素E等。
本发明还提供一种上述饲料添加剂在制备改善仔猪免疫力的饲料中的应用。
优选的,所述100重量份的饲料中,含有1-5重量%的饲料添加剂。
本发明具有积极有益的效果:
令人惊奇的是,本发明意外发现将阿魏酸与猪苓多糖组合使用,对于改善仔猪免疫力具有协同增效的效果,配合其他活性成分使用效果更佳。
与普通饲料添加剂相比,本发明的猪饲料添加剂制备方法简单,配伍合理,疗效显著,能够显著提高猪瘟抗体水平,增强B淋巴细胞的增殖反应,实验证明对改善仔猪免疫力有特效;由于添加剂中无西药成分,因此饲料添加剂无毒副作用,无耐药性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明,但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
实施例1、猪苓多糖的提取
取猪苓加20倍重量的水于80℃浸提1小时,共提取3次,合并上清液真空浓缩,用5倍浓缩液体积的无水乙醇沉淀,沉淀物再溶于适量水中,用Sevag法脱蛋白,适量95%乙醇沉淀,真空干燥得猪苓多糖。
实施例2、饲料添加剂的制备
取阿魏酸5重量份,实施例1制备的猪苓多糖5重量份,混合后制成阿魏酸和猪苓多糖重量比为1:1的饲料添加剂A1。
取阿魏酸2.5重量份,实施例1制备的猪苓多糖7.5重量份,混合后制成阿魏酸和猪苓多糖重量比为1:3的饲料添加剂A2。
取阿魏酸1重量份,实施例1制备的猪苓多糖9重量份,混合后制成阿魏酸和猪苓多糖重量比为1:9的饲料添加剂A3。
实施例3、本发明饲料添加剂在改善仔猪免疫力中的应用
1.试验动物及分组处理
选取临床健康、体质量相近的20日龄仔猪,采血检测猪瘟母源抗体水平,挑选出抗体水平相近的仔猪60头,随机分成6组,即本发明中药组合物组1-3(实施例2制备的饲料添加剂A1-A3)、阿魏酸组、猪苓多糖组和对照组。21日龄进行猪瘟兔化弱毒苗(购自上海海利生物技术有限公司)免疫。27-31日龄开始在A1-A3中药组合物组、阿魏酸组、猪苓多糖组日粮中按照饲料总重量的1%添加上述饲料添加剂(每组加入的中药活性成分总量相同),对照组的日粮为不添加上述饲料添加剂的相同重量的猪饲料,各组猪每日投喂3次。在55日龄对每组仔猪前腔静脉采血各5mL,分离血清用于猪瘟抗体测定,全血用于B淋巴细胞增殖的测定。
2.试验检测指标和方法
(1)血清猪瘟抗体水平
采用ELISA法测定猪瘟抗体,参照猪瘟抗体检测试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)说明书进行。
(2)血液B细胞增殖反应
采用MTT法进行。取各组浓度为1×106个/mL的淋巴细胞悬液加入96孔细胞培养板上,每孔加100μL,然后对照组每孔加入100μL RPMI 1640(购自IBCO公司)完全培养液,试验组每孔加入100μL质量浓度为10mg/L LPS(购自sigma公司),每个样品设置3个重复。37℃、5%CO2培养44h,每孔加入5g/L四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液10μL,培养4h后每孔再加入DMSO溶液100μL,继续培养2h,使紫色结晶完全溶解,用酶联免疫检测仪在570nm波长下测定D值,作为淋巴细胞增殖的指标。
3.试验结果
血清猪瘟抗体水平和淋巴细胞增殖指标试验结果见表1。
表1各试验组仔猪血清猪瘟抗体水平及B淋巴细胞增殖情况
由实施例3可以看出,与对照组相比,本发明的饲料添加剂能显著提高仔猪血清中猪瘟抗体水平,改善B淋巴细胞增殖水平,是效果优异的仔猪免疫增强剂。特别是阿魏酸和猪苓多糖的组合使用产生了协同效果,减少了药物的使用量,其中阿魏酸和猪苓多糖重量比为1:3的饲料添加剂效果最为突出,产生了难以预期的优异效果。
Claims (3)
1.一种改善仔猪免疫力的饲料添加剂,其特征在于,其中活性成分由阿魏酸与猪苓多糖组成,阿魏酸与猪苓多糖的重量比为1:3。
2.权利要求1所述的饲料添加剂在制备改善仔猪免疫力的饲料中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述100重量份的饲料中,含有1-5重量%的饲料添加剂。
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