CN107334788A - 一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法，所述灵芝粉由以下重量百分比的组分组成：灵芝超微粉10％～25％、灵芝提取物粉25％～40％和灵芝破壁孢子粉40％～60％。以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分，加上灵芝提取物粉，再配以灵芝超微粉，恰好成熟的灵芝子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素，补充了灵芝破壁孢子粉和灵芝提取物粉中成分的不足，以上三者通过一定的比例混合，使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定量，协同发挥药效，从而增强其抗肝肿瘤活性。

Description

一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中成药工艺技术领域，特别涉及一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用。
背景技术
灵芝又称仙草，是担子菌纲(Basidiomycetes)多孔菌目(Polyporales)多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganodermae)真菌，是传统珍贵药材，最早记载于《神农本草经》中，被列为上品。灵芝作为药用真菌已被《中国药典》(2015版)和《美国草药药典》收录。灵芝性温、味甘，有补中益气、滋外强壮、扶正固本之功效，主治虚劳、咳嗽、气喘、失眠、消化不良。现代药理和临床研究表明，灵芝在抗肝肿瘤，抗病毒，调节血糖，增强免疫力等方面均具有显著的作用。灵芝被誉为“生物活性化合物的细胞工厂”，国内外科学家已经从灵芝中分离得到400多种活性成分，其中三萜和多糖是灵芝的主要活性成分。
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，目前从灵芝中已分离到的灵芝多糖有200多种，其中大部分为β-葡聚糖，少数为α-葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成。灵芝多糖在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖能够通过提高机体免疫力来抑制肿瘤细胞的扩散增殖，具有广谱抑制瘤作用，是临床治疗肿瘤的良好辅助药物。
灵芝三萜是灵芝中另一类有效成分。目前，从灵芝中分离得到的三萜类化合物达170余种。与灵芝多糖不同的是，灵芝三萜能够抑制肿瘤细胞的分裂与增殖、促进肿瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移、调节免疫系统，以及辅助常规治疗等方法发挥抗肝肿瘤作用。灵芝三萜类是灵芝菌丝体的代谢产物。因此，由灵芝菌丝体发酵生产制成的产品，由于没有经过子实体成熟过程，三萜类化合物含量很低。同时，未成熟子实体内三萜类化合物含量也不高。
此外，灵芝子实体含有镁、钙和锗等多种微量元素。灵芝对锗的富集能力较强，有机锗的含量是人参的4-6倍、枸杞的100倍，它能增强人体血液供氧量，能增强人体血液吸氧的能力达1.5倍以上，促进血液新陈代谢，消除体内自由基，防止细胞老化；可以从癌细胞中夺取电，使其电位下降，从而抑制癌细胞恶化和扩散。
灵芝多糖与三萜都具有抗肝肿瘤功效，但其作用机制不同。因此，通过灵芝多糖与灵芝三萜按比例结合，配合手术、放疗或者化疗，在进一步提升治疗效果的同时，有望实现“零毒化疗”。
目前，灵芝食用方式有：
(1)以灵芝子实体片炖汤、煎水或泡酒。灵芝子实体中灵芝三萜含量不高，且没有破壁分所的灵芝子实体，灵芝多糖利用率较低。
(2)以灵芝孢子粉或灵芝孢子油直接服用。灵芝孢子粉或灵芝孢子油是目前市面上的主流产品，该类产品大多宣称含有较高含量的灵芝三萜，而忽略了灵芝多糖，无法发挥灵芝多糖的免疫调节作用。
(3)以灵芝多糖提取物直接服用。
发明内容
鉴以此，本发明提出一种抗肝肿瘤灵芝粉，解决了有效成分含量低、抗肝肿瘤效果差的作用。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量百分比的组分组成：灵芝超微粉10％～25％、灵芝提取物粉25％～40％和灵芝破壁孢子粉40％～60％。
优选地，由以下重量百分比的组分组成：灵芝超微粉17.5％、灵芝提取物粉32.5％和灵芝破壁孢子粉50％。
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎后过筛，粉碎温度为-25℃～-5℃，粉碎时间10min～30min。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮，过滤，在压力为0.1Mpa～0.5Mpa下进行减压浓缩，喷雾干燥至含水量为1％～5％，粉碎过筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过800～1000目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、口服液。
优选地，所述步骤(1)中，粉碎后过600～800目筛。
优选地，所述步骤(2)中，粉碎后过70～100目筛。
优选地，所述步骤(2)中，过滤浓缩至相对密度为1.10～1.15。
优选地，所述步骤(3)中，干燥温度为40℃～60℃。
优选地，所述步骤(3)中，所述灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉的质量比为8～10：4～8：1～3。
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
灵芝多糖与三萜都具有抗肿瘤功效，但其作用机制不同。灵芝多糖的抑瘤的作用途径主要有以下几方面：增强人体免疫功能，提高机体抗肿瘤作用；活化巨噬细胞；活化淋巴细胞；影响肿瘤细胞的信号转导；诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的诱导分化；影响肿瘤细胞的超微结构；抑制肿瘤细胞的核酸和蛋白质合成；影响癌基因；促进细胞因子分泌；活化补体等。灵芝三萜是一种有效的肿瘤细胞凋亡诱导剂，能够通过诱发肿瘤细胞凋亡而达到治疗肿瘤的目的。因此，以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分(含有较高含量的灵芝三萜)加上灵芝提取物粉(含有较高含量的灵芝多糖)，再配以灵芝超微粉(恰好成熟的子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素，补充了灵芝孢子破壁粉和灵芝提取物粉中成分的不足)，以上三者通过一定的比例混合，使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围，其中灵芝三萜主要诱导肿瘤细胞凋亡，灵芝多糖增加机体免疫作用，协同发挥抗肝肿瘤作用，从而增强其抗肝肿瘤活性。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
实施例1
一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量的组分组成：灵芝超微粉20g、灵芝提取物粉30g和灵芝破壁孢子粉50g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-25℃，粉碎时间为10min，再过600目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮1h，过滤后在压力为0.1Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.10，在温度为40℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为1％，再粉碎过70目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过800目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成胶囊剂。
实施例2
一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量的组分组成：灵芝超微粉15g、灵芝提取物粉25g和灵芝破壁孢子粉60g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-5℃，粉碎时间为30min，再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮2h，过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15，在温度为60℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为5％，再粉碎过100目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过1000目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成散剂。
实施例3
一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量的组分组成：灵芝超微粉15g、灵芝提取物粉40g和灵芝破壁孢子粉45g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-20℃，粉碎时间为15min，再过700目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮1h，过滤后在压力为0.2Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.2，在温度为45℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为2％，再粉碎过80目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过800目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成颗粒剂。
实施例4
一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量的组分组成：灵芝超微粉20g、灵芝提取物粉25g和灵芝破壁孢子粉55g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-10℃，粉碎时间为25min，再过700目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮2h，过滤后在压力为0.3Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.13，在温度为55℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为4％，再粉碎过90目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过900目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成片剂。
实施例5
一种抗肝肿瘤灵芝粉，由以下重量的组分组成：灵芝超微粉17.5g、灵芝提取物粉32.5g和灵芝破壁孢子粉50g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-15℃，粉碎时间为20min，再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮2h，过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15，在温度为50℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为3％，再粉碎过80目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过900目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成胶囊剂。
上述灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。所述制剂还可制备成其它的医药学上的剂型。
为了进一步验证本发明的有益效果，做了以下实验：
一、设置对照组
对照组1
该对照组与实施例5的区别在于：所述灵芝粉由以下重量的组分组成：灵芝提取物粉20g和灵芝破壁孢子粉80g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮2h，过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15，在温度为50℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为3％，再粉碎过80目筛。
(2)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过900目筛。
(4)混匀：将制备得的灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(5)制剂：将混合料制备成胶囊剂。
对照组2
该对照组与实施例5的区别在于：所述灵芝粉由以下重量的组分组成：灵芝超微粉30g和灵芝破壁孢子粉70g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎，粉碎温度为-15℃，粉碎时间为20min，再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮2h，过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15，在温度为50℃下进行喷雾干燥，干燥至含水量为3％，再粉碎过80目筛。
(3)混匀：将制备得的灵芝超微粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料。
(4)制剂：将混合料制备成胶囊剂。
检测实施例1～5、对照组1、对照组2的有效成分：
组别 多糖含量(％) 三萜含量(％)
实施例1 13.65 3.62
实施例2 14.08 3.58
实施例3 13.92 3.65
实施例4 14.10 3.62
实施例5 14.17 3.68
对照组1 9.12 3.02
对照组2 10.32 2.86
其中实施例5制备的灵芝粉与孢子粉、提取物粉、超微粉的主要有效成分含量：
灵芝多糖的抑瘤的作用途径主要有以下几方面：增强人体免疫功能，提高机体抗肿瘤作用；活化巨噬细胞；活化淋巴细胞；影响肿瘤细胞的信号转导；诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的诱导分化；影响肿瘤细胞的超微结构；抑制肿瘤细胞的核酸和蛋白质合成；影响癌基因；促进细胞因子分泌；活化补体等。灵芝三萜是一种有效的肿瘤细胞凋亡诱导剂，能够通过诱发肿瘤细胞凋亡而达到治疗肿瘤的目的。虽然本发明制备的超微粉中多糖和三萜的含量比例最高，但是三萜的含量是最少的，因此，发挥不出抑制肿瘤的良好效果；提取物粉的三萜含量虽然最高，相比于产品中的多糖含量却是低的，发挥不出增强免疫力抑制肿瘤的良好效果。产品中灵芝三萜主要诱导肿瘤细胞凋亡，而灵芝多糖增加机体免疫作用，通过灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围，二者最优含量比例3.9:1，使得二者协同发挥最优抗肝肿瘤作用，从而增强其抗肝肿瘤活性。
二、活性测试：本实验检测了灵芝粉对小鼠肝癌细胞H22的细胞毒性。
1、实验方法：
(1)取对数生长的细胞，加入不含有FBS的培养液，培养6小时，调节细胞状态使处于同一水平。
(2)用0.25％的胰酶1ml消化2分钟，1000rmp下离心5分钟。
(3)去除上清，加10％FBS重悬，进行细胞计数。
(4)将H22稀释至5×105cell/ml，96板每孔加入100μl细胞悬液进行铺板。外圈加入PBS，防止边缘效应。并设置对照组(加细胞，含血清培养基，MTT，DMSO)和调零组(只加含血清的培养基，MTT和DMSO)。
(5)铺板后24小时，加药。药物以及提取物事先用DMSO溶解，并用10％FBS的1640稀释到一定浓度(根据不同种细胞的耐受程度决定)。
(6)加药后24小时，加5mg/ml的MTT 10μl，37℃5％CO2孵育4小时后490nm下测量OD值。
(7)数据整理，药物抑制率(％)＝OD(对照)-OD(实验)/OD(对照)-OD(调零)。
2、实验结果
实施例1～5制备灵芝粉的水提取物(浓度0.8mg/mL)对肝癌细胞的抑制率见下表：
组别 抑制率(％)
实施例1 18.49
实施例2 18.76
实施例3 18.63
实施例4 18.89
实施例5 19.33
由上表可知，本发明制备的灵芝粉对肝癌细胞具有一定的抑制效果，三种原料通过一定的配比，使得灵芝三萜和灵芝多糖的比例达到最优，并且具有很好的抑制肝肿瘤细胞的效果。采用上述活性测试方法检测上述对照组1、2的抑制效果，其中对照组1和2的抑制率分别为15.63％和14.14％。
三、本发明用于临床实验的数据
1、尤先生，64岁，肝癌患者，2005年检查结果显示体内肝肿瘤块达7公分大小，手术后仍有残留肿瘤块，服用本品，10年没有复发。
2、林先生，59岁，2016年8月检查发现肝肿瘤块达8公分，2016年年底再次检查肿瘤块已达15公分，之后开始服用本品，6个月后，肿瘤块没有继续扩散，且肿瘤块开始出现萎缩迹象。
3、尤先生，73岁，2016年年底体检时发现体内肝肿瘤块3.5公分，遂开始服用本品，6个月后没有发现肿瘤扩散。
综上所述，采用本发明所提供的以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分(含有较高含量的灵芝三萜)加上灵芝提取物粉(含有较高含量的灵芝多糖)，再配以灵芝超微粉(恰好成熟的子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素，补充了灵芝孢子破壁粉和灵芝提取物粉中成分的不足)，以上三者通过一定的比例混合，使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围，协同发挥抗肿瘤作用，从而增强其抗肝肿瘤活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种抗肝肿瘤灵芝粉，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：
灵芝超微粉10％～25％、灵芝提取物粉25％～40％和灵芝破壁孢子粉40％～60％。
2.根据权利要求1所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：灵芝超微粉17.5％、灵芝提取物粉32.5％和灵芝破壁孢子粉50％。
3.根据权利要求1或2所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备灵芝超微粉：取成熟的灵芝子实体，破壁粉碎后过筛，粉碎温度为-25℃～-5℃，粉碎时间10min～30min；
(2)制备灵芝提取物粉：取灵芝加水煎煮，过滤，在压力为0.1Mpa～0.5Mpa下进行减压浓缩，喷雾干燥至含水量为1％～5％，粉碎过筛；
(3)制备灵芝破壁孢子粉：取灵芝孢子，干燥粉碎，过800～1000目筛；
(4)混匀：将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合，得混合料；
(5)制剂：将混合料制备成胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、口服液。
4.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，粉碎后过600～800目筛。
5.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，粉碎后过70～100目筛。
6.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，过滤浓缩至相对密度为1.10～1.15。
7.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，干燥温度为40℃～60℃。
8.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉的质量比为8～10：4～8：1～3。
9.根据权利要求1或2所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。
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