CN107254420A - 一株枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl‑002，已于2017年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.13758。该复合微生物腐熟菌剂可以缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。

Description

一株枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物降解有机垃圾技术领域。
背景技术
在农业生产和某些工业生产中每年产生大量的植物秸秆及有机物废料。对这些有机垃圾没有进行合理处理会产生严重污染和资源浪费。如果将这些有机垃圾进行快速降解和充分腐熟，可以产生大量优良的有机肥产品，从而降低化肥使用量，提高土壤活力，改良土壤。因此现在迫切需求一种能够将各种有机垃圾快速降解、充分腐熟的有效菌剂。
发明内容
本发明的第一目的是提供一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl-002，已于2017年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.13758。
本发明所提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl-002CGMCC No.13758：
(1)菌种获得
1)、将从镇江采集的腐熟猪粪在LB培养基上进行稀释分离培养。
2)、将分离培养基上生长较快的一株细菌纯化到新的LB培养基上。
3)、利用16s rDNA序列进行分子鉴定，鉴定为枯草芽孢杆菌，编号为zzl-002。
(2)菌株功能鉴定
1)、从市面上购买其它公司的枯草芽孢杆菌与分离的枯草芽孢杆菌zzl-002分别与其它菌剂按比例混合。
2)、将制得的混合菌剂进行猪粪腐熟，发现含有分离的枯草芽孢杆菌zzl-002的效率更高。
本发明的第二目的提供一种复合微生物腐熟菌剂，活性成分为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl-002CGMCC No.13758，包括：枯草芽孢杆菌zzl-002、植物乳杆菌、绿色木霉、黑曲霉、酿酒酵母，质量比为：枯草芽孢杆菌zzl-002 4，植物乳杆菌2，绿色木霉1，黑曲霉1，酿酒酵母2。
其中，孢子含量分别是≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥200亿/克的植物乳杆菌；≥100亿/克的绿色木霉；≥100亿/克的黑曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。
本发明的第三个目的是提供一种复合微生物腐熟菌剂的制备方法，包括：
(1)枯草芽孢杆菌zzl-002的发酵方法：
1)菌种活化:枯草芽孢杆菌zzl-002的菌株在LB液体培养基中活化12h，备用；
2)种子液制备:活化后的zzl-002菌株，在37℃下震荡12h，培养后所得zzl-002种子液；
3)发酵培养:在发酵培养基中，并加入水，初始pH值自然，高温灭菌，然后待温度降到30℃以下接入步骤2)的种子液，再在温度为37℃，搅拌速度为210rpm的条件下发酵培养；
发酵培养基为：10％葡萄糖、10％豆粕饼、10％玉米粉，6％碳酸钙，7％氯化钠，其余为水。
4)测定发酵液中菌体数量，待发酵液中孢子含量≥1000亿/克时停止发酵。发酵结束后用喷雾干燥法干燥成粉剂。
(2)复合微生物腐熟菌剂中各微生物的孢子含量为：≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥200亿/克的植物乳杆菌；≥100亿/克的绿色木霉；≥100亿/克的黑曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。
(3)四种菌剂分别是≥200亿/克的植物乳杆菌粉剂；≥100亿/克的绿色木霉粉剂；≥100亿/克的黑曲霉粉剂；≥200亿/克的酿酒酵母粉剂。
(4)将五种粉剂菌剂按质量比枯草芽孢杆菌4：植物乳杆菌2：绿色木霉1：黑曲霉1：酿酒酵母2混合均匀。
本发明的复合微生物腐熟菌剂可以缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。
具体实施方式
现结合具体实施方式和实施例说明本发明，但发明不限于以下内容。
本发明公开的复合微生物腐熟剂由以保藏号为13758的枯草芽孢杆菌zzl-002，配以植物乳杆菌、绿色木霉、黑曲霉、酿酒酵母复配而成。孢子含量分别是≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥200亿/克的植物乳杆菌；≥100亿/克的绿色木霉；≥100亿/克的黑曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。按重量百分比分别是枯草芽孢杆菌40％，植物乳杆菌20％，绿色木霉10％，黑曲霉10％，酿酒酵母20％。
本发明公开的枯草芽孢杆菌为保藏号为CGMCC No.13758的枯草芽孢杆菌zzl-002。
本发明提供的一种复合微生物腐熟菌剂的制备方法，该方法包括：
(1)枯草芽孢杆菌为保藏号为CGMCC No.13758的枯草芽孢杆菌zzl-002，其发酵方法为10％葡萄糖、10％豆粕饼、10％玉米粉，6％碳酸钙，7％氯化钠，其余为水。培养温度37℃，转速210rpm。发酵结束后用喷雾干燥法干燥成粉剂。
(2)复合微生物腐熟菌剂中各微生物的孢子含量为：≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥200亿/克的植物乳杆菌；≥100亿/克的绿色木霉；≥100亿/克的黑曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。
(3)四种菌剂分别是≥200亿/克的植物乳杆菌粉剂；≥100亿/克的绿色木霉粉剂；≥100亿/克的黑曲霉粉剂；≥200亿/克的酿酒酵母粉剂。
(4)将五种粉剂菌剂按重量比枯草芽孢杆菌40％，植物乳杆菌20％，绿色木霉10％，黑曲霉10％，酿酒酵母20％混合均匀。
本发明的复合微生物腐熟菌剂可以缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。
实施例1：
微生物腐熟菌剂的制备
枯草芽孢杆菌为保藏号为13758的枯草芽孢杆菌zzl-002，其发酵方法为10％葡萄糖、10％豆粕饼、10％玉米粉，6％碳酸钙，7％氯化钠，其余为水。培养温度37℃，转速210rpm。
待孢子含量≥1000亿/g时停止发酵。
发酵结束后用喷雾干燥法干燥成粉剂。
得到孢子含量≥1000亿/克的菌粉。
本实施例中的≥200亿/克的植物乳杆菌；≥100亿/克的绿色木霉；≥100亿/克的黑曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母均由慕恩(北京)生物科技有限公司提供。
将五种粉剂菌剂按重量比枯草芽孢杆菌40％，植物乳杆菌20％，绿色木霉10％，黑曲霉10％，酿酒酵母20％混合均匀。
实施例2：
用实施例1中的复合菌剂进行秸秆腐熟。
在山东潍坊昌乐，7月份。
将秸秆与鸡粪按照20:1的比例进行混合，混合料一吨。将一公斤实施例1中的菌剂与上述一吨混合料混合。作为实验1。
将秸秆与鸡粪按照20:1的比例进行混合，混合料一吨。不与菌剂混合。作为对照。
将两种混合好的物料分别堆成锥形，高度1.5米左右，底部直径5米左右。
实验组比对照组升温早而快，发酵腐熟时间缩短34％。
升温时间 降温时间 发酵完成时间
实验组 12h 7d 21d
对照组 21h 15d 32d
实施例3：
用实施例2中生产的两种有机肥作为底肥，在山东潍坊昌乐的同一大棚种植南瓜。
土壤翻耕时将有机肥作为底肥掺入土壤中。半亩地用实验组1产生的有机肥，半亩地用对照组产生的有机肥。
南瓜播种后，测量十天的苗长，根长、收获前的得病率及产量。
结果表明实验组比对照组平均苗长长8％，平均根长长7％，得病率减少10％，产量增加2.6％。

Claims (7)

1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl-002 CGMCC No.13758。
2.一种微生物菌剂，其活性成分为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)zzl-002 CGMCCNo.13758。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂包括：
枯草芽孢杆菌zzl-002：植物乳杆菌：绿色木霉：黑曲霉：酿酒酵母，其质量比为：4:2:1:1:2。
4.根据权利要求2或3所述的菌剂在秸秆腐熟中的应用。
5.根据权利要求2或3所述的菌剂在有机肥中的应用。
6.一种复合微生物腐熟菌剂的制备方法，其特征在于，包括：
(1)枯草芽孢杆菌zzl-002的菌株在LB液体培养基中活化12h；
(2)活化后的zzl-002菌株，在37℃下震荡12h，培养后所得zzl-002种子液；
(3)在发酵培养基中，并加入水，高温灭菌，温度降到30℃以下接入步骤2)的种子液，升温至37℃，搅拌速度为210rpm的条件下发酵培养；
(4)待发酵液中孢子含量≥1000亿/克时停止发酵；
(5)用喷雾干燥法干燥成粉剂；
(6)将五种粉剂菌剂按质量比枯草芽孢杆菌zzl-002 4：植物乳杆菌 2：绿色木霉 1：黑曲霉 1：酿酒酵母 2混合均匀。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基为：10％葡萄糖、10％豆粕饼、10％玉米粉，6％碳酸钙，7％氯化钠，其余为水。
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